JPS63102693A - Ｌ−アスパラギン酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 造法および該酵素を生産する能力を有する微生物ならび
に該酵素を利用するＬ−アスパラギン酸の製造法に関す
る。

Ｌ−アスパラギン酸は疲労回復剤、アンモニア解毒剤、
アミノ酸輸液等、医薬品、食品添加物または臨床診断薬
として用いられる重要表物質である。現在Ｌーアスパラ
ギン酸の製造法としては、北原等によるエシャリキア・
コリを用いる方法（＃公詔３１−Ａよｉｔ号公報）があ
シ、これを中心に固定化法による生産についても２Ｊの
報告かたされている。

（鮫島，木村：　Ｅｎｚｙｚｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ　２ｅ　／Ｊろ（／タ７４’）Ｐ’ｌｅｎｕｍ　Ｐｒ
ｅａａ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　　ａｎａ　Ｌｏｎａｏｎ。

土佐，干畑：人ｐｐ１１０ｒｏ’ｌ）ｉｏｌ．２”７，
　ｒｔ＆　（／タ７リ）。

公知の事例はすべて常温菌を利用したものである。

明て田’′：１．’ｌ’ｌ・１・ｌ’　”　””１　’
ｌ　ｌ゛に−′；゛更なし）本発明者等は熱安定なアス
パルターゼを得る目的で種々の好熱性細菌についてアス
パルターゼ活性を調べた結果、バチルス属に属する好熱
性細菌が好熱性のアスパルターゼ活性を有することを見
い出し、本発明を完成するに到った。発酵操作、酵素反
応などを高温条件下で行なえることは、雑菌汚染防止、
酵素反応の迅速性、冷却エネルギーの節約などの点から
極めて有利である。

本発明に係る好熱性アスパルターゼは、該酵素を生産す
る能力を有する微生物を栄養培地中に培養し、培養物中
に該酵素を蓄積せしめ、該培養物から該酵素を採取する
ことにより製造することができる。

本発明で使用する微生物は好熱性アスパルターゼ生産能
力を有するものならいかなる菌株を用いてもよいが、具
体的にはバチルス属に属する菌株、例えばバチルス・リ
ケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　Ｉｉｃｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）　Ｔ−５１４（微工研菌寄第５２４１号、
ＮＲＲＬ　　Ｂ−１２０６２）。

明細書の庁Ｓ（内容に変更なし） バチルス・プレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｒｅｖｉｓ
）Ｔ　−６１６（微工研菌寄第５２４２号、ＮＲＲＬＢ
−１２０６３）、バチルス・アミノゲネス・ノブ０エス
ピ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｉｎｏｇｅｎｅｓ　ｎｏｗ
　ｓｐ　）Ｔ−５９６（微工研菌寄第５２４０号、ＮＲ
ＲＬＢ−１２０６１）、バチルス・サーモアミノフィラ
ス・ノブ・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｅｒｍｏａ
ｍｉｎｏｐｈｉｌｕｓ　ｎｏｗ　５ｐ）Ｔ　−５８５（
微工研菌寄第５２３９号、ＮＲＲＬ　　Ｂ−１２０６０
）などがあげられる。

本発明者らが分離同定したアスパルターゼ生産菌株４株
の菌学的性質（第１表）および同定の準拠について以下
に示す。

上記の菌学的性質をもとにして、バーシーズ・マニュア
ル・オプ・デイターミナテイブ・バクテリオロジー、第
を版（／Ｆ７４ｔ）およびＲＥ、　Ｇｏｒａｏｎら著。

Ｔｈｅ　Ｇｅｎｕｓ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　（Ａｇｒｉｃ
ｕｌｔｕｒａｌＨｅｓｅａｒｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ＋　
Ｔｌ−Ｓ−ＤＳｌｐａｒｉｍ９ｎ１１；　ｏｆ　Ａｇｒ
ｉｃｕｌｔｕｒａ。

（ｌり７３））を参考にして公知の菌株とその異同を検
討した。

上記グ菌株はグラム陽性、有胞子の好気性あ・るいは通
性嫌気性の桿状菌である故、いずれもＢａｃｉｌｌｕｓ
属である。Ｔ−４／４ｔ’ｌおよびＴ−４／　７菌は、
同定実験に際して対黒菌として使用したバチルス・リケ
ニホルミスおよびバチルス・プレビスの標孕株について
の実験結果およびマニアル中の記載とほぼ完全に一致す
るので、バチルス・リケニホルミスおよびバチルス・プ
レビスと同定した。

Ｔ−ｊｚｔ菌は、生育最高温度、スボランジア膨潤、嫌
気的に生育せず、ｖｐテスト陰性、でん粉加水分解陰性
、７チ食塩耐性陰性などの点からバチルス・プレビスに
類似しているが、上記マニュアルの記載およびバチルス
−プレビスＡＴＣＣＩＩＩ！についての比較実験結果で
の相違点が第２表の如くであること、さらにＴ−ｊり６
菌は強力なアスパルターゼ活性を有する特徴があること
等の根拠から本面を新種と見做し、バチルス・アミノゲ
ネス・ノブ・ニス°ピー（Ｂａｃｉｌｉｓ　ａｍｉｎｏ
ｇｅｎｓｓ　ｎｏｖ　ｓｐ）と命名した。

ｄ：菌株によシ結果が異なる。

※：ノζシーズ・マ：にｑルレ・オプ・プイターミテプ
イブ・バクテリオひジー第を版Ｔ−３？！菌は生育温度
範囲、スボランジアの膨潤、嫌気的に生育せずｐ　ＶＰ
テスト陰性、７％食塩酎耐陰性外どの点からバチルス・
ステアロサーそフィラスに類似しているが、上記マニュ
アルの記載およびバチルス・ステアロサーモフィラス人
ＴＣＣ／２９！ｒＯについての比較実験結果での相違点
が第３表の如くであること、さらにＴ−４１！菌は強力
なアスパルターゼ活性を有する特徴があること等の根拠
から本面を新種と見做し、バチルス・サーモアミノフィ
ラス・ノブ・エスピー（Ｂａｃｉｌ’ｌｕｓ　ｔｈｓｒ
ｍｏａｍｉｎｏｐｈｉｌｕａ　ｎｏｖ　ｓｐ）とこれら
の菌株の培養法について以下に述べる。

これらの菌株の培養においては、通常の好熱性細菌の培
養法が一般に用いられる。炭素源としてハ、グルコース
、フラクトース、マルトース。

シュークロース、マニトール、　澱粉、　ｍ蜜、り’Ｊ
セリン等の糖質および糖・アルコールが単独または組合
せて用いられる。また菌の資化性によっては、炭化水素
、アルコール類、有機酸等も用いうる。窒素源としては
、硫酸アンモニウム。

塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム
、尿素等の無機窒素源、あるいはポリヘフトン、ペプト
ン、イーストエキス、コーン・スチープ・リカー、アミ
ノ酸等の有機窒素源を単独または組合せて用いることが
できる。またフマール酸、リンゴ酸、ピルビン酸等有機
酸を各種のビタミンおよびＭｎ弐Ｃｏ弐Ｍｇ北ｎｏ廿を
含む各種塩の添加によ）菌の生育や酵素の生産が促進さ
れる。培養法としては、液体培養法が適している。培養
温度は菌株によ）異なるが３０〜６０℃、好ましくは生
育適温以上の温度が望ましい。培養の′ｐＨはよ〜ｔ、
好ましくは６〜７Ｊの中性付近で行なうことが望ましい
。

培養終了後、培養液よシ好熱性アスパルターゼを採取す
るには一般の酵素採取法、例えば次のよう゛な方法で単
離することができる。まず、得られた菌体を充分洗浄し
、！０９Ａ程度の濃度で超音波処理し、無細胞抽出液を
得る。この液に硫酸ストレプトマイシンまたは硫酸プロ
タミンを！　−Ｊ　□　ｘｇ／−加え脱核した後、０．
７Ｍ酢酸を加えてｐＨよθ程度に下げて酸処理し、遠沈
後、水酸化カリウムでｐＨ７０に調豊する。

次Ｋ（ｉ酸アンモニウムでＯ〜３０チ、ＪＯ〜！！引よ
ｊ〜７！チの塩析を行ない、ＤＥＡＥセルロース処理、
セファデックスＧ−ｉｏｏクロマトグラフィーなどを行
った後最終的に硫酸アンモニウム抽出を行なって、凍結
乾燥し精製標品を得る。

本酵素の活性の測定は次のようにおこなう。

０、／Ｍフマール酸アンモニウムと本酵素、菌体マたは
菌体処理物とを菌体濃度ＩＯ’Ｊ□ｄｒｙ　＋　Ｑ９１
１／７１で接触させ、ｐＨｒ、０＊温度３！−６Ｏ℃で
３０分間反応を行なう。反応液をフマール酸としてｌ〜
１０ｆｉ／Ｉｔ程度になるように稀釈し硫酸酸性下送マ
ンガン酸カリウムで滴定する。残存フマール酸よ）アス
パルターゼ活性を測定する。その他５ｈｏｄｓｘ　ＯＨ
Ｐａｋカラムによる高速液体クロマトグラフィー法、Ｌ
−アスパラギン酸−≠−説炭酸酵素によるワールプルグ
法等が使用可能である。いずれの場合も酵素活性は国際
単位（ｕｎｉシ耀ｍ１ｎ）で表示する。

次に得られた酵素の性質について述べる。

（１）作用および基質特異性 フマール酸およびＬ−アスパラギン酸にのみ作用し、フ
マール酸とアンモニアからＬ−アスパラギン酸を生成す
る反応を特異的に触媒する。

（２）至適ｐＨ Ｏ，／　Ｍリン酸緩衝液（Ｉ）Ｈ７，０−ｒ、　０　）
　、　０．　／　Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐａ、ｒ、Ｏ
−９，１）中でフマール酸アンモニウム／１９／ｉｔを
基質とし活性をよ！”Ｃ１ｔ　０分間の反応にて測定し
た。結果は第１図に示す通シであｐ、ｐＨｒ、ｒ〜ｙｏ
付近に至適ア■がある一般的な常温菌である。

明細書の汀Ｉ４：１ζ内容に変更なし）プロピオン酸菌
、大腸菌などのアスパルターゼの至適ｐＨが７．２付近
であるので好熱性アスパルターゼは若干アルカリ側にシ
フトしている。

（３）安定ｐＨ範囲 ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐ１１６．０〜８．０）、０．
２Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐ）１７．５〜９．５）中、
５０℃で１７時間各々のｐＨに処理した後５０℃。

ｐ　Ｈ８，５で３０分間反応して活性を測定した。

結果は第２図に示す通りである。

図のように７．０〜８．５までは相対的に安定と思われ
る。

（４）至適温度 ４５℃〜８０℃の範囲でｐ　Ｈ８，０で３０分間反応し
た。結果は第３図に示す通りであり、５５℃に至適温度
がある。

（５）温度安定性 本酵素を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｔ１７．０　）に３
０〜８０℃で６０分間処理した後１００ｇ／４７のフマ
ール酸アンモニウムヲ加エテｚｏ：ｃ、３゜分間反応し
て活性を測定した。結果を第弘図に示す。ｊ　Ｏ’Ｃま
では安定である。

（６）活性化・安定化作用 本酵素は基質フマール酸アンモニウム、生成物Ｌ−アス
パラギン酸の存在下安定化され非常に安定である。２価
の金属イオンＭｇ北ＭＯ弐Ｇｏ北Ｚｎ廿　により若干の
活性化と安定性の向上が認められた。

（７）分子量 内部標準蛋白としてチトクローム・Ｃ，オバルブミン、
γ−グロブリンを使用してセファデックスＧ−２００に
よるゲルＦ：Ａを行なった結果分子量は約／７６万であ
った。

（８）アミノ酸組成（％） リ　　　　ジ　　　　ン　　　：　　　　　７．７８ア
ルギニン　：　　５．４８ ヒスチジン　：　　２．１５ アスパラギン酸　：　　１１．３７ ア　　ラ　　ニ　　ン　　：　　　　　７．１６スレオ
ニン　：　　５．３９ セ　　　　リ　　　　ン　　：　　　　　３．８３グル
タミン酸　：１３．１３ ブ　　ロ　　　リ　　　ン　　　：　　　　　　５．６
４グ　　リ　　シ　　ン　　：　　　　　５．００バ　
　　　リ　　　　ン　　：　　　　　６．７７メチオニ
ン　：　　３．００ インロイシン　＋　　　５．２８ ０　　　イ　　　シ　　　ン　　　：　　　　　　８．
９０チ　　ロ　　シ　　ン　　　：　　　　　３．４２
フェニルアラニン：４．５６ トリプトファン　：　　　１．１８ シ　　ス　　チ　　ン　　二　　　　〇（９）蛋白変性
温度（Ｔ＋ｎ値）：　　７０℃本酵素１本酵素を含有す
る菌体または該菌体の処理物をフマール酸アンモニウム
またはフマール酸とアンモニアとの混合物に作用させる
ことによシ、Ｌ−アスパラギン酸を製造することができ
る。反応は通常３５〜ｔｏ℃、　ｐＨ７Ｏ−１１で行な
う。反応に際してのフマール酸アンモニウム。

７？−ル酸、アンモニアの濃度ハ０．２〜二〇モル程度
が適当である。また酵素凄度は／−１０ｕｎ１ｔ／Ｌｔ
程度が適当である。反応に際しては、酵素、菌体、菌体
処理物を固定化して用いるとよシ実用的にＬ−アスパラ
ギン酸を製造することができる。これらの固定化は、酵
素、菌体等の固定化に用いられる一般的方法により行な
うことができる。たとえビ、酵素液はアスパルターゼを
吸着しうる一般的な陰イオン交換樹脂と接触させればよ
く、菌体の固定化には、エチルセルロース、酢酸・酪酸
セルロース等によるマイクロカブ七ル化、アクリルアミ
ド系単量体によるゲル包括法、ポリビニールアルコール
による包括、コラーゲンによる膜状包括等が用いられる
。また、単に菌体を充填混合剤と混合し架橋剤等で処理
する方法、たとえばゼラチン・ゲルタールアルデヒド法
、キトサン・ゲルタールアルデヒド法、カラゲーニン・
ゲルタールアルデヒド法、アルブミン・ジアルデヒドデ
ンジ／法などが利用できる。

反応鞭からのＬ−アスパラギン酸の採取は、固定化酵素
の場合、単に反応液を等電点ｐＨ２７７程度に硫酸酸性
とし冷却熟成して結晶Ｌ−アスパラギン酸を得る。純度
を良好にするためには（加温下）３００９７１程度の濃
度にリスクＩＪ　−して冷却熟成して標品を得る。

実施例Ａ Ｖ濃度のブイヨン培地にて活性化スラントとシタバチル
ス・アミノ酸組成Ｔ−！り６．バチルス・プレビスＴ−
７１／６．バチルス・サーモアミノフィラスＴ−４ｒＪ
−，バチルス・リケニホルミスＴ−４／４４．をポリペ
プトンσ／／。

イースト・エキス≠９，７．．食塩−９７ノの組成ノｐ
Ｈ７，０に調整した培地３Ｑ―を含むＪＯＯｔｔｌ容量
フラスコに接種し、第参表に示す温度で７を時間種培養
する。次にこの程培養液全量をグルコース３０１１／１
．ペプトン２よ１ｌｉｌ／ｌ！、肉エキス参朽、炭酸カ
ルシウム１９７．、大豆油／’／ｌの組成を有し、ｐＨ
７：コに調整した培地３００１を含むλノ容１にバッフ
ル付フラスコに檀替えて第弘表に示した温度で、２≠時
間培巷した結果、第μ表に示す量の面体が得られた。得
られた菌体をｒ、　０００　Ｇで遠心分離を行ない、０
．０　／　Ｍ　リン敢緩衝液（ｐＨ７ｘ）で洗浄した。

この湿潤細胞を１０ｉ、＊ｏＮ体す度で１モルのフマー
ル酸アンモニウムと接触させ、各々の至適温度で３Ｑ分
間反応し、生成するＬ−アスパラギン酸よシアスパルタ
ーゼ活性を測定した結果をまとめて第弘表に示す。

第μ表 菌　　　　名　　　　　　温度　菌体量　アスパルター
七舌性［１”Ｃ）　（ＯＤ、！；　ＡＯ×２０〕（ｕｎ
ｉ　ｔ／、９　・ｃ　ｓ　：ｕ　：］バチルス・アミノ
ゲネスＴ−ｊりｔ　　　！０　０．０７２　　　　２０
００バチルス°サーモアミノフイラス　　　乙。　　。

、２゜ｏ　　　　　　４Ｌｏ。

Ｔ−よｔ！ バチにスーブｖヒス’ｒ−ａｌｘ　　　ｔｉ−ｏ　　ｏ
、ｏｒｏ　　　　　　ｔ。

バチルス・リケニホルミス Ｔ　　ｒ、　４ｔ　　ｊ（７０，０り２　　　　　　／
１０実旅実施 バチルス・アミノゲネスＴ−ｊＦｊ菌を実施例／、と同
様の培地で種培養し、さらに３０１容量ジャーファーメ
ンタ−にて大量培養した。ジャーファーメンタ−培養の
培地は、グルコース２Ｑｇ力、フマール酸アンモニウム
／　０９／／ｌ　、　ヘア’トンｘｒＥ７１．　　肉エ
キス≠ｂｔ、硫酸マグネシウムｏ、　ｒ　ｚ　９７１　
、モリブデン酸ナトリウム０．．２　ｚ　９ｙｌ　＋塩
化カルシウム／、　１．ｔ９／ｌ　、大豆油Ａ、２ゴ／
！　の組成のものを用い、培養は回転数２００　ｒ、　
ｐ、二連気量０．　Ｊ　ｖ、　ｖ、　ｍ、で弘Ａ’Ｃ，
／７．ｊ時間の条件で行った。菌体量はＺ　０９／ｌで
アスパルターゼ活性Ｑ　０００　ｕｎｉｔ／ｇ、ｄｒｙ
−ｃｅｌｌの活性のものが得られた。培養液を／ユｏｏ
ｏＧでシャープレスにかけ菌体分離し、ｐＨｒ、　０の
０，０／Ｍ　リン酸緩ｇＥ液で一度洗浄して凍結乾燥を
行ない、菌体標品とした。

実施例３゜ 実施例二で得られた凍結乾燥菌体よｏｏｇをＱ、Ｏｊ　
Ｍリン酸緩衝液ＣｐＨｒ、ｚ）ｌｏｔに懸濁シ、菌体破
砕機であるダイノーミル（シンマルエンタープライス社
製）にかけ、ａ’、　ｏ　ｏ　ｏ　Ｇで遠心分離を行な
い無細胞抽出液を得た。抽出液ａＺを弱塩基性陰イオン
交換樹脂デュオライ）−Ａ７（米国ダイヤモンドジャム
ロックケミカル社＊）／、２１を充填し九カラムに流速
ｌよ’／ｈｒ室温でチャージした。蛋白負荷量は約２０
５９・Ｒで行った。次に２０９／ｌのフマール酸アンモ
ニウムを含む０．　／　Ｌｉリン酸緩衝液（−ｐＨ，ｒ
、ｊ）３１とｏ、ｔ、ｔチダルタールアルデヒド３１を
含む溶液で３゜分間架橋し、ゲルタールアルデヒドを十
分洗浄して固定化酵素を作成した。この固定化酵素をｊ
Ｑｄ容量のカラムに充填し、１モル・フマール酸アンモ
ニウム（ｐＨ，ｙよ）を基質とし、５ｖ＝ＺＯ〜／、／
で連続運転を実施したところ、ｚｏ℃で約２０日間転換
率りｒｅａｐ以上で安定したＬ−アスパラギン酸の生産
が可能であった。反応液は完全清澄液であり、酵素の洩
れもなく、また高温操作の為雑菌汚染もなく非常に効率
のよいＬ−アスパラギン酸の生産が可能であった。

実施例弘 実施例ｔと同様の培地組成でバチルス・サーモアミノフ
ィラスＴ−よｔよを６０℃で２４１時間培養し、得られ
た菌体を遠心分離後洗浄を十分行々つでから凍結乾燥菌
体とした。アメパルター９活性≠００　””／ｆｌ−ａ
ｒア、。８□、の菌体〃よ得られた。これを用いて次の
ごとくして固定化微生物を作成した。

分散媒として水ｔｏｍｔに分散剤としてエマルゲンータ
ｒｊ（花王アトラス社製）を０．７２１．セロゲンーＰ
Ｒ（第一工業製薬社製）ｏ、３ｇを溶解し、強攪拌下ｊ
−１０℃に冷却しておく。一方、凍結乾燥菌体Ａよｉを
Ｏ，タチ生理食塩水よｌと菌体凝集剤である／チキトサ
ン／、！ｎｔＶＣ均一に懸濁しておき、酢酸・酪酸セル
ロース３１１−２０（イーストマンケミカルインターナ
ショナル社製）ｔよＩと分散剤としてアルラセルーＩＪ
Ｃ花王アトラス社Ｈ）０．３９をＩｊ、ｊ９の酢酸イソ
ブチルに溶かしたものを十分に攪拌し、均一な一６エマ
ルジヨンとする。この菌体懸濁液と酢酸・醋酸セルロー
スによる〃エマルジョンを冷却攪拌下先の分散媒中に滴
下し、滴下後ｎ−ヘキサンｌコＯｒｌを徐々に定量ポン
プで添加する。その結果、酢酸・酪酸セルロース内に菌
体が包括された。強固で均一な粒径の固定化微生物が液
中に析出する。これを戸布等でヂ別し、十分に洗浄して
反応に使用する。得られた固定化微生物を用いて／Ｍフ
マール酸アンモニウムからＬ−アスパラギン酸への転換
をｔ　ｏ”ｃ、　ｓｖ　＝／、ｏで連続カラム運転した
ところり！係以上の転換率で約／週間、Ｌ−アスパラギ
ン酸の生産が可能であった。得られた反応液を硫酸でｐ
Ｈ２７７にシ尤 調整し、等電点ｅ（殿させたところ、Ｌ−アスパラギン
酸の結晶が得られた。

実施例よ バチルス・アミノゲネスＴ−ｊり６を実施例ユと同様に
培養する。得られた菌体をよｏＩ力の濃度で超音波破砕
する。この破砕液上澄を３０慇会の硫酸プロタミンで処
理し、沈殿を遠心分離する。さらに、０．１Ｍ酢酸を加
えてｐｍ（弐〇に調整し生じた沈殿を遠心分離してから
上澄を得、このｐＨを水酸化カリウムで７ｏにする。次
に硫酸アンモニウムでＯ〜Ｊｌ：）、Ｊ□〜よｊ、！！
〜７５チの３段階で云度勾配で塩析する。得られた溶液
ｉ　ＤＥＡＥ　・セルロースカラムで処理し、活性区分
を集めて硫酸アンモニウムによυ沈殿させ、酵素標品と
した。得られたアスパルターゼの彊白轟シの比活性は無
細胞抽出液の約１００倍であった。ここで得られたアス
パルターゼを蛋白換算／　萬ｆｉ、／ｉｔの濃度で／Ｍ
フマール酸アンモニウムと！Ｏ″Ｃ，ｐＨｆ、ｊで／を
時間接触させたところ約り！チの転換率でＬ−アスパラ
ギン酸が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本酵素の至適ｐＨを示す。 第２図は、本酵素の安定ｐＨ範囲を示す。 第３図は、本酵素の至適温度を示す。 第≠図は、本酵素の温度安定性を示す。 特許出願人　＜ＩＯ，２）協和醗酵工業株式会社第　１
　目 Ｐｌ″１ 尾　２　山 ら°１５フ１０ 晃　３　口 第牛口 泣痕〔＠Ｃ） 手　続　補　正　書（方式）６．補正（（１）　　Ｉ！ 昭和６２年１１月　６日 （２）ν 昭和６２年特許願第１３０２６６号 ２、発明の名称 Ｌ−アスパラギン酸の！！造法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　１００ 住所　　東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称　（
１０２）　協和醗酵工業株式会社昭和６２年ｌＯ月７日
（発送日：同６２年１０月２７日）５、補正の対象 願書の発明者の欄および明細書の発明の詳細なり内容 頃書を別紙のとおり訂正する。 頃書に最初に添付した明細書の第３頁、４頁良び１４頁
の浄書

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. バチルス属に属し、アスパルターゼ生産能を有する微生
   物の菌体およびその処理物をフマール酸とアンモニアの
   混合物またはフマール酸アンモニウムに作用させること
   により反応物中にＬ−アスパラギン酸を生成させ、該反
   応物からＬ−アスパラギン酸を採取することを特徴とす
   るＬ−アスパラギン酸の製造法。