JPS63102674A - 新菌種バチルス・アミノゲネス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 造法および該酵素を生産する能力を有する微生物ならび
に該酵素を利用するＬ−アスパラギン酸の製造法に関す
る。

Ｌ−アスパラギン酸は疲労回復剤、アンモニア解毒剤、
アミノ酸輸液等、医薬品、食品添加物または臨床診断薬
として用いられる重要外物質である。現在Ｌーアスパラ
ギン酸の製造法としては、北原等によるエシャリキア・
コリを用いる方法（特公昭３ｔ−ｔ，ｔｒｙ号公報）が
あシ、これを中心に固定化法による生産についても２３
の報告がなされている。

（鮫島，木村：　Ｅｎｓτｅ　Ｅｎｇ：Ｌｎｅｅｒｉｎ
ｇ　、２ｅ　／Ｊろ（ｌタ７Ｑ　　Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎｅｖｒ　Ｙｏｒｋ　ａｎａ　Ｌｏｎａｏｎ＋
土佐，干畑：　Ａｐｐｌ　ＭｉＯｒｏｂｉｏｌ　、２７
，　ｒｔ＆　（／タ７リ）。

公知の事例はすべて常温舊を利用したものである。

町４７Ｉ占−′・Ｉ’：”：“：”　Ｉ”ｌ　’１゛：
に叢ぎなし）本発明者等は熱安定なアスパルターゼを得
る目的で種々の好熱性細菌についてアスパルターゼ活性
を調べた結果、バチルス属に属する好熱性細菌が好熱性
のアスパルターゼ活性を有することを見い出し、本発明
を完成するに到った。発酵操作、酵素反応などを高温条
件下で行なえることは、雑菌汚染防止、酵素反応の迅速
性、冷却エネルギーの節約などの点から極めて有利であ
る。

本発明に係る好熱性アスパルターゼは、該酵素を生産す
る能力を有する微生物を栄養培地中に培養し、培養物中
に該酵素を蓄積せしめ、該培養物から該酵素を採取する
ことにより製造することができる。□ 本発明で使用する微生物は好熱性アスパルターゼ生産能
力を有するものならいかなる菌株を用いてもよいが、具
体的にはバチルス１嘱に属する菌株、例えばバチルス・
リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｌｉｃｈｅｎｉ
ｆｏｒｍｉｓ）　Ｔ−５１４（微工研菌寄第５２４１号
、ＮＲＲＬ　　Ｂ−１２０６２）６１６’（＠工研閑寄
第５２４２号、ＮＲＲＬＢ−１２０６３）、　バチルス
・アミノゲネス・ノブ０エスピ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａ
ｍｉｎｏｇｅｎｅｓ　ｎｏｗ　ｓｐ　）Ｔ−５９６（微
工研菌寄第５２４０号、ＮＲＲＬＢ−１２０６１）、バ
チルス・サーモアミノフィラス・ノブ・エスピー（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓｔｈｅｒｍｏａｍｉｎｏｐｈｉｌｕｓ　ｎ
ｏｖ　５ｐ）Ｔ　−５８５（微工研菌寄第５２３９号、
ＮＲＲＬ　　Ｂ−１２０６０）などがあげられる。

本発明者らが分離同定したアスパルターゼ生産菌株４株
の菌学的性質（第１表）および同定の準拠について以下
に示す。

上記の菌学的性質をもとにして、バーシーズ・マニュア
ル・オン・デイターミナテイブ・バクテリオロジー、第
を版（ｌり７４Ｌ′）およびＲＥ、ＧＯ已０］ら著。Ｔ
ｈｅ　Ｇｓｎｕｓ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　（Ａｇｒｉｃｕ
ｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　５ｅｒｖｉｃｅ＋　Ｕ
、　Ｓ、Ｄｓｐａｒｔｍ９ｎｔ　ｏ：　Ａｇｒｉｃｕｌ
ｔｕｒｅ。

（ｌり７３））を参考にして公知の菌株とその異同を検
討した。

上記グ菌株はグラム陽性、有胞子の好気性ある・いは通
性嫌気性の桿状菌である故、いずれもＢａｃｌｌｕｓ　
Ｊｇである。Ｔ−Ｊ’／４を菌およびＴ−Ｊ／Ｊ菌は、
同定実験に際して対照菌として使用したバチルスφリケ
ニホルミスおよびバチルス・プレビスの標準法について
の実験結果およびマニアル中の記載とほぼ完全に一致す
るので、バチルス・リケニホルミスおよびバチルス・プ
レビスと同定した。

Ｔ−より２菌は、生育最高温度、スボランジア膨潤ｊ嫌
気的に生育せず、ｖｐテスト陰性、でん粉加水分解陰性
、７チ食壇耐性陰性などの点からバチルス・プレビスに
類似しているが、上記マニュアルの記載およびバチルス
・プレビスＡＴＣＣ，５’＃よについての比較実験結果
での相違点が第−表の如くであること、さらにＴ−よ２
６Ｍ？ｉ強力なアスパルターゼ活性を有する特徴がある
こと等の根拠から本面を新種と見做し、バチルス・アミ
ノゲネス・ノブ・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｉ
ｎｏｇｅｎａａ　ｐｏｖ　ｓｐ）と命名した。

ｄ：菌株によシ結果が異なる。

※：ノ谷シース・マニ≦アシ・オン・プイターミプザイ
ブ・ノ党べｔリオか第を版Ｔ−！ｒ！菌は生育温度範囲
、スボランジアの膨潤、嫌気的に生育せず、　ｖｐテス
ト陰性、７チ食塩耐性陰性などの点からバチルス・ステ
アロサーモフィラスに類似しているが、上記マニュアル
の記載およびバチルス・ステアロサーモフィラスＡＴＣ
Ｃ／二り？Ｏについての比較実験結果での相違点が第３
表の如くであること、さらにＴ−よざｊ菌は強力なアス
パルターゼ活性を有する特徴があること等の根拠から本
面を新種と見做し、バチルス・サーモアミノフィラス・
ノブ・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｅｒｍｏａｘ
ｉｎｏｐｈｉｌｕｓ　ｎｏｖ　ｓｐ）とこれらの菌株の
培養法について以下に述べる。

これらの菌株の培養においては、通常の好熱性細菌の培
養法が一般に用いられる。炭素源としテハ、グルコース
、フラクトース、マルトース。

シュークロース、マニトールｅ　９を粉ｒ　糖’ｌＲｒ
グリセリン等の粘質および糖・アルコールが単独または
組合せて用いられる。また面の資化性によっては、炭化
水素、アルコール類、有機酸等も用すうる。窒素源とし
ては、硫酸アンモニウム。

塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム
、尿素等の無機窒素源、あるいはポリペプトン、ペプト
ン、イーストエキス、コーン・スチーブ・リカー、アミ
ノ酸等の有機窒素源を単独または組合せて用いることが
できる。またフマール酸、リンゴ酸、ピルビン酸等有機
酸。

各種のビタミンおよびＭｎ”；　Ｃｏ＋＋、Ｍｇ＋２１
　Ｍｏ丑を含む各賞塩の添加によシ菌の生育や酵素の生
産が促進される。培養法としては、液体培養法が適して
いる。培養温度は菌株によシ異なるが３０〜６０℃、好
ましくは生育適温以上の温度が望ましい。培養の′ｐ′
Ｈはよ〜ｔ、好ましくは６〜７ｊの中性付近で行なうこ
とが望ましい。

培養終了後、培会液よシ好熱性アスパルターゼを採取す
るには一般の酵素採取法、例えば次のような方法で単離
することができる。まず、得られた菌体を充分洗浄し、
！０みｌ程度の０度で超音波処理し、無細胞抽出液を得
る。この液に硫酸ストレプトマイシンまたは硫酸プロタ
ミンをよ〜ＪＯｘｇ〜加え脱核した後、０゜／１、工酢
酸を加えてｐＨ弐〇程度に下げて酸処理し、遠沈後、水
酸化カリウムでｐＨ７０に調差する。

次′ＶＣ硫酸アンモニウムで０〜３０％、　３０−３３
％。

！よ〜７！チの塩析を行ない、ＤＥ憇セルロース処理、
セファデックスＧ−１０’０クロマトグラフイーなどを
行った後最終的に硫酸アンモニウム抽出を行なって、凍
結乾燥し精製標品を得る。

本酵素の活性の測定は次のようＫおこなう。

０．１Ｍフマール酸アンそニウムと本酵素、菌体または
面体処理物とを画体濃度７．７　ｇ−ｄｒｙ−ｃｓｌ’
１７ｚで接触させ、ｐＨ１Ｏ，温度３３〜６０℃で３０
分間反応を行なう。反応液をフマール酸として／〜１０
９／ｌ程度になるように稀釈し硫酸酸性下送マンガン酸
カリウムで滴定する。残存フマール酸よシアスパルター
ゼ活性を測定する。その他５ｈｏｄｅｚ　ＯＨＰａｋカ
ラムによる高速液体クロマトグラフィー法、Ｌ−アスパ
ラギン酸−ター脱炭酸酵素によるワールブルグ法等が使
用可能である。いずれの場合も酵素活性は国際単位（ｕ
ｎｉＡｏｍｉｎ　）で表示する。

次に得られた酵素の性質について述べる。

（１）作用および基質特異性 フマール酸およびＬ−アスパラギン酸にのみ作用し、フ
マール酸とアンモニアからＬ−アスパラギン酸を生成す
る反応を特異的に触媒する。

（２）至適ｐＨ Ｏ，／　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７：　０〜Ｆ、　０　）
　、　５．　／　Ｍトリス・塩酸緩衝液ＣＩ）Ｈよ０−
ｇｊ）中で７７−Ａ／酸アンモニウム／ｊ９／ｌを基質
とし活性をｊＪ”ｃ、４０分間の反応にて測定した。結
果は第１図に示す通シであシ、ｐＨＩ！−９，０付近に
至適ｐＨがある一般的な常温菌である。

明Ｆ！ｉＩＱの、’ｒｌ−；俸（内容に変更なし）プロ
ピオン酸菌、大腸菌などのアスパルターゼの至適ｐＨが
７．２付近であるので好熱性アスパルターゼは若干アル
カリ側にシフトしている。

（３〕　　安定ｐＨ範囲 ０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１６．０〜８．０）、０．
２Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐ）１７．５〜９．５）中、
５０℃で１７時間各々のｐＨに処理した後５０℃。

ｐ　Ｈ８，５で３０分間反応して活性を測定した。

結果は第２図に示す通りである。

図のように７．０〜８．５までは相対的に安定と思われ
る。

（４）至適温度 ４５℃〜８０℃の範囲でｐＨ８，０で３０分間反応した
。結果は第３図に示す通りであり、５５℃に至適温度が
ある。

（５）温度安定性 本酵素を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ）１７．０　）に３
０〜８０・℃で６０分間処理した後１００ｇ／ｉ’のフ
マール酸アンモニウムを加えてよθ℃、３０分間反応し
て活性を測定した。結果を第弘図に示す。！Ｏ″Ｃまで
は安定である。

（６）活性化・安定化作用 本酵素は基質フマール酸アンモニウム、生成物Ｌ−アス
パラギン酸の存在下安定化され非常に安定である。２価
の金属イオンＭｇ＋”；　Ｍｏ弐Ｃｏ町Ｚり＋　によシ
若干の活性化と安定性の向上が認められた。

（７）分子量 内部標準蛋白としてチトクローム・Ｃ，オバルブミン、
γ−グロブリンを使用してセファデックスＣ）−２００
によるゲル濾過を行なった結果分子量は約ｌＺ！万であ
った。

（８）アミノ酸組成（％） リ　　　　ジ　　　　ン　　　：　　　　　７．７８ア
ルギニン　：　　５．４８ ヒスチジン　：　　２．１５ アスパラギン酸　：　　１１．３７ ア　　ラ　　ニ　　ン　　：　　　　　７．１６スレオ
ニン　：　　５．３９ セ　　　　リ　　　　ン　　　：　　　　３８３グルタ
ミン酸　：１３．１３ フ゛　　ロ　　　リ　　　ン　　　：　　　　　　５．
６４グ　　リ　　　シ　　ン　　　：　　　　　　５．
００ハ　　　　リ　　　　ン　　：　　　　６７７メチ
オニン　：　　３．００ イソロイシン　：　　　５．２８ ０　　　イ　　　シ　　　ン　　　：　　　　　　８．
９０チ　　ロ　　シ　　ン　　　：　　　　　３．４２
フェニルアラニン：　　　４．５６ トリプトフアン　：　　　１．１８ シ　　ス　　チ　　ン　　　　　　　　０（９）蛋白変
性温度（Ｔｍ値）＝　　７０℃本酵素１本酵素を含有す
る菌体または該菌体の処理物をフマール酸アンモニウム
またはフマール酸とアンモニアとの混合物に作用させる
ことＫよシ、Ｌ−アスパラギン酸を製造することができ
る。反応は通常３よ〜Ａ０℃、ｐＨ７，０−ｆｆ！で行
なう。反応に際してのフマール酸アンモニウム。

フマール酸、アンモニアの濃度は０．２〜二〇モル程度
が適当である。また酵素役度は／−ＩＯｕｎ　ｉｔ、全
程度が適当である。反応に際しては、酵素２Ｍ体、菌体
処理物を固定化して用いるとよシ実用的にＬ−アスパラ
ギン酸を製造することができる。これらの固定化は、酵
素、菌体等の固定化に用いられる一般的方法により行な
うことができる。たとえば、酵素液はアスパルターゼを
吸着しうる一般的な陰イオン交換樹脂と接触させればよ
く、菌体の固定化には、エチルセルロース、酢酸・酪酸
セルロース等ニよるマイクロカプセル化、アクリルアミ
ド系Ｊ＃量体によるゲル包括法、ポリビニールアルコー
ルＩｃよる包括、コラーゲンによる膜状包括等が用いら
れる。また、単に菌体を充填混合剤と混合し架橋剤等で
処理する方法、たとえばゼラチン・ゲルタールアルデヒ
ド法、キトサン・ゲルタールアルデヒド法、カラゲーニ
ン・ゲルタールアルデヒド法シアルブミン・ジアルデヒ
ドデンプン法々どが利用できる。

反応畝からのし一アスパラギン酸の採取は、固定化酵素
の場合、単に反応液を等電点ｐＨ２７７程度に硫酸酸性
とし冷却熟成して結晶Ｌ−アスパラギン酸を得る。純度
を良好にするためには（加温下）３００１’７１程度の
濃度にリスラリ−して冷却熟成して標品を得る。

実施例ｔ ｈａ度のブイヨン培地にて活性化スラントとしたバチル
ス・アミノ酸組成Ｔ−ｊり６．バチルス・プレビスＴ−
Ｇ／Ａ、バチルス・サーモアミノフィラスτ−！ｌ！、
バチルス・リケニホルミスＴ−７／　４Ｌ、をポリペプ
トンＩｇ／ｌ＊イースト・エキス４ＬＪｉ’　７Ｌ９食
塩λ９７．の組成のｐＨ７，０に調整した培地ＪＯｎｔ
を含む３００′ＬＡ容量フラスコに接種し、第μ表に示
す温度で７１時間種培養する。次にこの種培養液全量を
グルコース３０９／１．ペプトン、２！１１／ｌ、肉エ
キス弘〜、炭酸カルシウム１９７．、大豆油／′／ｌの
組成を有し、ｐＨ７：λに調整した培地ｊ　００Ｉ！７
を含む２ノ容量バツフル付フラスコに植替えて第弘表に
示した温度で２弘時間Ｊ：＠巷した結果、第弘表に示す
量の菌体が得られた。得られた菌体をｒ、　０００　Ｇ
で遠心分にまを行ない、０．０／Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７２）で洗浄した。この湿潤細胞を／Ｑ９／ｌの菌体濃
度で１モルのフマール酸アンモニウムと接触させ、各々
の至適温度で３０分間反応し、生成するＬ−アスパラギ
ン酸よシアスパルターゼ活性を測定した結果をまとめて
第弘表に示す。

第１表 菌　　　　名　　　　　　色度　菌体量　アスパルター
七舌注ＣＣ）　（ＯＩＭ＆Ｏｘ、Ｘｌ）（ｕｎｉｔ力・
ｃｓｌｌ）バチルス・アミノゲネスＴ−ｊりｔ　　　ｊ
ｏ　　０．０７２　　　　　シ０００バチルア゛す４ア
ミノフイラ′’ｔｏｏ、コ０゜　　　　　ｔ、ｔｏ。

Ｔ−！Ｉ！ バチＡ／スーブレビ、ｃ　　Ｔ−ＧｌＡ　　　１ｆｉＯ
ｏ、ＯｒＯ，ｔ。

バチルス・リケニホルミス Ｔ−ｊ／４Ａ　　　”　　　”りｓ　　　　　　ｉｉ。

実施例ユ バチルス・アミノゲネスＴ−より６菌を実施例Ｚと同様
の培地で種培養し、さらに３ｏｚ容量ジャーファーメン
タ−にて大量培養した。ジャー７アーメンター培養の培
地は、グルコース２０Ｅｌ／ｉ　、フマール酸アンモニ
ウム１０９／７１．ベブト：／−２！ｊ；’／１．肉ニ
キス４’　Ｖｉ　、　ｕｔ酸マグネシウム０、２　ｊ　
ＩＩ、モリブデン酸ナトリウムＯ１λ１９／ｉｔ。

塩化カルシウムハＩη、犬豆油／、　２　”／ｌ　　の
組成のものを用い、培養は回転数２００　ｒ、　ｐ、二
通気量０．ｒｖ、ｖ、ｍ、でｌ／Ｌ６℃、１７６時間の
条件で行った。菌体量は９．Ｏｙ力でアスパルターゼ活
性２”　’　ｕｎ”／、９−ｄｒｙ、ｃｅｌｈ　（Ｄ活
性のものが得られた。培養液をｌユｏｏｏＧでシャープ
レスにかけ菌体分離し、ｐＨこＱの０．０／Ｍ　リン酸
緩衝液で一度洗浄して凍結乾燥を行ない、菌体標品とし
た。

実施例３゜ 実旅例ユで得られた凍結乾燥菌体ｚｏｏｇをＯ０θＪ−
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨＪす）ｉｏｉに懸濁し、菌体破砕
機であるダイノーミル（シンミルエンタープライス社製
）にかけ、ｒ、ｏｏｏａで遠心分崩を行ない無細胞抽出
液を得た。抽出液６！を弱塩基性陰イオン交換樹脂デュ
オライ）−Ａ７（米国ダイヤモンドジャムロックケミカ
ル社製）ｔ、２／を充填したカラムに流速ｌｊ′／ｈｒ
室温でチャージした。蛋白負荷量は約２０”□・Ｒで行
ツタ。次ｉｃ　２０９／ｌのフマール酸アンモニウムを
含む０．１Ｍリン酸緩衝液（′ｐＨ乙よ）３！とＯ１≠
俤ゲルタールアルデヒド３１を含む溶液で３０分間架橋
し、ゲルタールアルデヒドを十分洗浄して固定化酵素を
作成した。この固定化酵素をＪＯＮ！容量のカラムに充
填し、１モル・フマール酸アンモニウム（１））Ｉ　ｒ
、りを基質とし、Ｓｖ＝／、　０−　／、　／で連続運
転を実施したところ、ｊＯ℃で約、２０日間転換不Ｐ？
チ以上で安定したＬ−アスパラギン酸の生産が可能であ
った。反応液は完全清澄液であ）、酵素の洩れもなく、
また高温操作の為雑菌汚染もなく非常に効率のよいＬ−
アスパラギン酸の生産が可能であった。

実施例久 実施例ｔと同様の培地組成でバチルス・サーモアミノフ
ィラスＴ−よｔｊを６Ｑ℃でλ≠時間培養し、得られた
菌体を遠心分離後洗浄を十分性なってから凍結乾燥菌体
とした。アスパルターゼ活性ぴ０ｏｕｎｉｔ／Ｆ、ユ、
ア、。ｅｌｌの菌体が得られた。これを用いて次のごと
くして固定化微生物を作成した。

分散媒として水ＡＯＫＩに分散剤としてエマルジンータ
１６（花王アトラス社製）を０．７．２ｇ、セロゲンー
ＰＲ（第−工莱製薬社製）０３９を溶解し、強攪拌下！
〜ｉｏ℃に冷却しておく。一方、凍結乾燥菌体／、　ｊ
ｇをＯ，タチ生理食塩水よｌと菌体凝集剤である／％キ
トサンｔよゴに均一に懸濁しておき、酢酸・酪酸セルロ
ース３１’／−２０（イーストマンケミカルインターナ
ショナル社製）／、　ｊ　、９と分散剤としてアルラセ
ル−１３（７１１，王アトラス社製）ｏ、３１をｉ３．
ｒｐの酢酸イソブチルに溶かしたものを十分に攪拌し、
均一な巧うエマルジョンとする。この菌体懸濁液と酢酸
・酪酸セルロースによるＷ７．エマルジョンを冷却攪拌
下先の分散媒中に滴下し、滴下後ｎ−ヘキサンｉａｏｍ
を徐々に定量ポンプで添加する。その結果、酢酸・酪酸
セルロース内に菌体が包括された。強固で均一な粒径の
固定化微生物が液中に析出する。これをデ布等で炉別し
、十分に洗浄して反応に使用する。得られた固定化微性
物を用いて／Ｍフマール酸アンモニウムからＬ−アスパ
ラギン酸への転換を７　（７”Ｃ，ＳＶ　＝＝７．０　
テ連続カラム運転したところりｊ係以上の転換率で約／
週間、Ｌ−アスパラギン酸の生産が可能であった。得ら
れた反応液を硫酸でｐＨ２７７にう尤 調整し、＃電点ｍ′ｊ３させたところ、Ｌ−アスパラギ
ン酸の結晶が得られた。

実加例よ バチルス・アミノゲネスＴ−ｊり６を実施例ユと同様に
培養する。得られた菌体を３Ｑ９力の３度で超音波破砕
する。この破砕液上澄を３ｏ賜勺の硫酸プロタミンで処
理し、沈殿を遠心分離する。さらに、０．１Ｍ酢酸を加
えてｐＨ弐〇に調整し生じた沈殿を遠心分離してから上
澄を得、このｐ）（を水酸化カリウムで７ｏにする。次
に硫酸アンモニウムでθ〜３０．．３０〜３！、！！〜
７よチの３段階でα度勾配で塩析する。得られた溶敢ヲ
ＤＥＡＥ　・セルロースカラムで処理し、活性区分を集
めて硫酸アンモニウムにより沈殿さぜ、酵素標品とした
。得られたアスパルターゼの蛋白当シの比活性は無細胞
抽出液の約１００倍であった。ここで得られたアスパル
ターゼを蛋白換算ｌ慇４の濃度で／Ｍフマール酸アンモ
ニウムとＪｒＯ″Ｃ，ｐＨ７Ｊで／を時間接触させたと
ころ約り！チの転換率でＬ−アスパラギン酸が得られた
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本酵素の至適ｐＨを示す。 第一図は、本酵素の安定ｐＨ範囲を示す。 第３図は、本酵素の至適温度を示す。 第μ図は、本酵素の温度安定性を示す。 第　１１呂 ｐＨ 拓　２　二 ｊ１０コＩｇ 晃　３　口 第千山 江厘（”Ｃ） 手　続　補　正　書（方式） 昭和６２年１１月　６日 昭和６２年特許聞′Ｍ１３０２６５号 ２、発明の名称 新菌種バチルス・アミノゲネス ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　１００ 住所　　東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称　（
１０２）協和醗酵工業株式会社（置　：０３−２８２−
００３６） 昭和６２年ｌＯ月７日（発送日：同６２年１０月２７日
）５、補正の対象 願書の発明者の欄および明細書の発明の詳細な６、補正
の内容 （１）　　願書を別紙のとおり訂正する。 （２）願書に最初に添付した明細書の第３頁、４頁およ
び１４頁の浄書

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 新菌種バチルス・アミノゲネス。