JPS6279793A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
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- JPS6279793A JPS6279793A JP60220817A JP22081785A JPS6279793A JP S6279793 A JPS6279793 A JP S6279793A JP 60220817 A JP60220817 A JP 60220817A JP 22081785 A JP22081785 A JP 22081785A JP S6279793 A JPS6279793 A JP S6279793A
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- cancer
- cell
- antigen
- monoclonal antibody
- cells
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は、印環型胃癌由来株（ＫＡＴＯ−ＩＩＩ［）を
免疫原として作製されたハイブリドーマの産生する特定
の特性を持つモノクローナル抗体に関する。
免疫原として作製されたハイブリドーマの産生する特定
の特性を持つモノクローナル抗体に関する。
癌研究の究極の目標は、抗癌、制癌作用を示す物質の探
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
免疫反応（抗原−抗体反応）は、非常に特異性が高いも
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）らによって開発されたモノクローナ
ル抗体〔ケーラー、ジー、およびミルスティン、シー、
：ネーチ＋ （Ｋｉ；ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍ
ｉｌｓｔｅｉｎ、 Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ、）２５６、
４９５ （１９７５） ）は、この壁を打ち破るもので
あり、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特
異的に認識するモノクローナル抗体を得ることにより、
正常組織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特異的に
排除できるものと期待される。
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）らによって開発されたモノクローナ
ル抗体〔ケーラー、ジー、およびミルスティン、シー、
：ネーチ＋ （Ｋｉ；ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍ
ｉｌｓｔｅｉｎ、 Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ、）２５６、
４９５ （１９７５） ）は、この壁を打ち破るもので
あり、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特
異的に認識するモノクローナル抗体を得ることにより、
正常組織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特異的に
排除できるものと期待される。
また、モノクローナル抗体を用いた診断薬あるいは検査
試薬は、正常血清成分に対する交叉反応がなく、感度良
く、癌関連抗原、癌特異抗原を検出できるものと思われ
る。
試薬は、正常血清成分に対する交叉反応がなく、感度良
く、癌関連抗原、癌特異抗原を検出できるものと思われ
る。
本発明の目的は、特定の癌抗原に対して特異的に反応す
るモノクローナル抗体を提供することにある。さらには
、上記特定癌に対する抗原検出用試薬を提供することに
ある。
るモノクローナル抗体を提供することにある。さらには
、上記特定癌に対する抗原検出用試薬を提供することに
ある。
〔問題点を解決するための手段〕
本発明は、胃癌、特に胃癌の細胞膜表布型抗原に対して
特異的に反応するモノクローナル抗体よりなるものであ
る。
特異的に反応するモノクローナル抗体よりなるものであ
る。
本発明のモノクローナル抗体は、
０１ｇクラス（サブクラス）：ＩｇＧ２ａ［２］認識抗
原タイプ：細胞膜表在型 抗原［３］癌細胞との反応性：少なくとも胃癌（ＫＡＴ
Ｏ−ＩＩＩ）に対して陽性を示す。
原タイプ：細胞膜表在型 抗原［３］癌細胞との反応性：少なくとも胃癌（ＫＡＴ
Ｏ−ＩＩＩ）に対して陽性を示す。
等の特性を有する。さらに好適には、癌細胞との反応性
が、さらに肺癌（ＰＣ−１）、肺癌（ＰＣ−３）、肺癌
（ＰＣ−９）、肺癌（ＰＣ−１０）、膀胱癌（ＮＢＴ−
２） 、喉頭癌（ＨＥｐ−２）に対して陽性を示す等の
特性を有する。
が、さらに肺癌（ＰＣ−１）、肺癌（ＰＣ−３）、肺癌
（ＰＣ−９）、肺癌（ＰＣ−１０）、膀胱癌（ＮＢＴ−
２） 、喉頭癌（ＨＥｐ−２）に対して陽性を示す等の
特性を有する。
本発明のモノクローナル抗体は、いわゆる細胞融合によ
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
抗体産生細胞は、例えば株化癌細胞より得られる抗原に
よって免疫された動物からの肺細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である０株化癌細胞としては、印環型胃癌由
来の株化癌細胞（ＫＡＴＯ−Ｉｆｆ）が例示される。
よって免疫された動物からの肺細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である０株化癌細胞としては、印環型胃癌由
来の株化癌細胞（ＫＡＴＯ−Ｉｆｆ）が例示される。
免疫される動物としては、例えばマウス、ラット、馬、
ヤギ、ウサギなどが例示される。
ヤギ、ウサギなどが例示される。
抗体産生細胞は、例えば次のようにして製造される。即
ち、印環型胃癌由来細胞株ＫＡＴＯ−１）［を超音波処
理等で破壊し、遠心分離（例、１０，０００〜２０．０
ＯＯＧ、 １０〜６０分）を行って細胞抽出液を得、こ
の上清を分子量１０万〜２００万の物質の分離が可能な
ゲル濾過担体（例、セファデックス、セファクリル、セ
ファロース、バイオゲル等）を使用して分子篩し、高分
子画分と低分子画分とに分離する。かくして得られた分
子量が約７０万〜１５０万の高分子画分は、例えば、完
全ソロインドアジュバント（Ｐｒｅｕｎｄ Ｃｏｓ＋ｐ
ｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動物の免疫用
として使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内或いは腹腔
内に約ｔ、５ｘｔｏ’〜１０”ｃｅｌ！相当分／回を注
射することにより行われ、初回免疫より約３〜５週間ご
とに２度免疫を行い、さらに１〜３ケ月後に最終免疫を
行う。
ち、印環型胃癌由来細胞株ＫＡＴＯ−１）［を超音波処
理等で破壊し、遠心分離（例、１０，０００〜２０．０
ＯＯＧ、 １０〜６０分）を行って細胞抽出液を得、こ
の上清を分子量１０万〜２００万の物質の分離が可能な
ゲル濾過担体（例、セファデックス、セファクリル、セ
ファロース、バイオゲル等）を使用して分子篩し、高分
子画分と低分子画分とに分離する。かくして得られた分
子量が約７０万〜１５０万の高分子画分は、例えば、完
全ソロインドアジュバント（Ｐｒｅｕｎｄ Ｃｏｓ＋ｐ
ｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動物の免疫用
として使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内或いは腹腔
内に約ｔ、５ｘｔｏ’〜１０”ｃｅｌ！相当分／回を注
射することにより行われ、初回免疫より約３〜５週間ご
とに２度免疫を行い、さらに１〜３ケ月後に最終免疫を
行う。
最終免疫より約３〜５日後、免疫動物から抗体産生細胞
を分取する。
を分取する。
骨髄腫細胞としては、たとえばマウス、ラット、ヒト等
由来のものが使用される。抗体産生細胞と骨髄腫細胞と
ｉよ同種動物由来のものであることが好ましい。
由来のものが使用される。抗体産生細胞と骨髄腫細胞と
ｉよ同種動物由来のものであることが好ましい。
細胞融合は、例えばジー、ガルファ（Ｇ、 Ｇａ１ｆｒ
ｅ）〔ネーチ＋ −（Ｎａｔｕｒｅ） ２６６、５５０
（１９７７） ）に記載の方法又はこれに準する方法
によって行われる。この際、３０〜５０％ポリエチレン
グリコール（平均分子量ｔ 、 ｏｏｏ〜４．０００
’）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分間程度
反応させることによって行われる。
ｅ）〔ネーチ＋ −（Ｎａｔｕｒｅ） ２６６、５５０
（１９７７） ）に記載の方法又はこれに準する方法
によって行われる。この際、３０〜５０％ポリエチレン
グリコール（平均分子量ｔ 、 ｏｏｏ〜４．０００
’）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分間程度
反応させることによって行われる。
細胞融合によって得られた細胞は目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中で培
養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を、
例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を産
生じているウェルを得る。このようなウェルから更に例
えば限界希釈法によってクローニングを行ってクローン
を得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタン
を投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１０
〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水を
採取し、検定する０選ばれたクローンの産生ずるモノク
ローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法として
従来既知の硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画
法、陰イオン変換体を応用することで、容易に達成され
る。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中で培
養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を、
例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を産
生じているウェルを得る。このようなウェルから更に例
えば限界希釈法によってクローニングを行ってクローン
を得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタン
を投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１０
〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水を
採取し、検定する０選ばれたクローンの産生ずるモノク
ローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法として
従来既知の硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画
法、陰イオン変換体を応用することで、容易に達成され
る。
本発明によって得られたモノクローナル抗体は、細胞膜
表覆型抗原を認識し、かつ正常組織由来培養細胞、赤血
球、白血球及び正常＆１）織とは反応せず、癌特異的な
抗原を認識するものと推測される。
表覆型抗原を認識し、かつ正常組織由来培養細胞、赤血
球、白血球及び正常＆１）織とは反応せず、癌特異的な
抗原を認識するものと推測される。
すなわち、本発明からなるモノクローナル抗体は癌の早
期発見、予後の追跡調査に有用な診断薬として、および
腫瘍のイメージングあるいは制癌剤とコンジュゲートさ
せ、ターゲティング療法等への臨床応用が期待される。
期発見、予後の追跡調査に有用な診断薬として、および
腫瘍のイメージングあるいは制癌剤とコンジュゲートさ
せ、ターゲティング療法等への臨床応用が期待される。
実施例
（１）免疫用癌関連抗原の調製：
株化胃癌細胞（ＫＡＴＯ−１）１株）を超音波処理法で
破壊し、遠心分離（１５，０ＯＯＧ、３０分）を行い細
胞抽出液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラム
を用い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離
した。
破壊し、遠心分離（１５，０ＯＯＧ、３０分）を行い細
胞抽出液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラム
を用い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離
した。
分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分を、完全ソロ
インドアジェバントと混和後、マウスへ１ケ月毎に３回
免疫した。
インドアジェバントと混和後、マウスへ１ケ月毎に３回
免疫した。
最終免疫より４日後にマウス肺臓を取り出し、以下の細
胞融合に用いた。
胞融合に用いた。
伐）細胞融合およびクローニング：
上記のマウス牌細胞と、マウスミエローマＰ３Ｕｌ（カ
レント トビツク イン マイクロバイオロジー アン
ド イムノロジー（Ｃｕｒｒ、↑ｏｐ。
レント トビツク イン マイクロバイオロジー アン
ド イムノロジー（Ｃｕｒｒ、↑ｏｐ。
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ） 、 ８
１．１ （１９７Ｂ））とを３：１の割合で混合し、ケ
ーラー（Ｋ５ｈ １ｅｒ） らの方法〔イムノロジカル
メソッド（アカデミツクプレス）−ニューヨーク （
Ｉｍｓｕｎｏｌｏｇｌｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）＋ ３
９Ｌ （１９７９））を一部改変して、４５％ポリエチ
レングリコール（平均分子量４，０００ ’）を用いて
２分間反応させることにより細胞融合を行った。
１．１ （１９７Ｂ））とを３：１の割合で混合し、ケ
ーラー（Ｋ５ｈ １ｅｒ） らの方法〔イムノロジカル
メソッド（アカデミツクプレス）−ニューヨーク （
Ｉｍｓｕｎｏｌｏｇｌｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）＋ ３
９Ｌ （１９７９））を一部改変して、４５％ポリエチ
レングリコール（平均分子量４，０００ ’）を用いて
２分間反応させることにより細胞融合を行った。
本細胞を９６ウエルマイクロプレートに植え込み、ＨＡ
Ｔ培地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表１
）に移行し、更にフラスコ（２５ｃｄ）に培養できるよ
うになってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増
殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素抗体法
により測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求
めるバイプリドーマのクローニングを行った。
Ｔ培地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表１
）に移行し、更にフラスコ（２５ｃｄ）に培養できるよ
うになってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増
殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素抗体法
により測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求
めるバイプリドーマのクローニングを行った。
すなわち、マイクロタイタープレートにウェル当たり２
５．０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ
−ＭＥＭ培地で、１０，５．２．５．１個１０．１ｍｌ
となるようにハイブリドーマを希釈し、これをマイクロ
タイタープレートに０．１ｄずつ植え込み培養した。４
日後にＤ−ＭＥＭ培地を０．１−加え、以後４〜７日に
１度、培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０
日で肉眼で認められるコロニーが形成され、クローン株
を得た。
５．０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ
−ＭＥＭ培地で、１０，５．２．５．１個１０．１ｍｌ
となるようにハイブリドーマを希釈し、これをマイクロ
タイタープレートに０．１ｄずつ植え込み培養した。４
日後にＤ−ＭＥＭ培地を０．１−加え、以後４〜７日に
１度、培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０
日で肉眼で認められるコロニーが形成され、クローン株
を得た。
表１
（３） スクリーニング法
得られたハイブリドーマについて目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
（イ）方法の説明
以下のようにして酵素抗体法を行った。
抗原（各種株化癌細胞、部分精製癌関連抗原または正常
細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え、３
７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標識抗
マウス免疫グロブリン（■ｇＧ４１ｇＡ−１）ｇＭ）ウ
サギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反応させた。未
反応の標識抗体を洗浄除去後、０−フェニレンジアミン
液を加え、室温にて３０分間反応させた後、２Ｍ硫酸を
加えて反応を停止させ、４９０ｎ−の吸光度を測定した
。
細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え、３
７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標識抗
マウス免疫グロブリン（■ｇＧ４１ｇＡ−１）ｇＭ）ウ
サギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反応させた。未
反応の標識抗体を洗浄除去後、０−フェニレンジアミン
液を加え、室温にて３０分間反応させた後、２Ｍ硫酸を
加えて反応を停止させ、４９０ｎ−の吸光度を測定した
。
この方法で各種細胞との反応性を調べた。癌胎児性抗原
（ＣＥＡ）との交叉反応性は、ＣＥＡ感作血球を用いＰ
ＨＡ法で行った。
（ＣＥＡ）との交叉反応性は、ＣＥＡ感作血球を用いＰ
ＨＡ法で行った。
モノクローナル抗体がＫＡＴＯ−ＤＩの分泌物抗原か或
いは細胞膜表覆型抗原のどちらを認識しているかの検討
のために、ＫＡＴＯ−Ｉｌｌの培養上滑でモノクローナ
ル抗体とＫＡＴＯ−ｍ細胞そのものとの反応性が阻害さ
れるかどうかを調べた。
いは細胞膜表覆型抗原のどちらを認識しているかの検討
のために、ＫＡＴＯ−Ｉｌｌの培養上滑でモノクローナ
ル抗体とＫＡＴＯ−ｍ細胞そのものとの反応性が阻害さ
れるかどうかを調べた。
酵素抗体法を用いたインヒビシロン テストの具体的な
方法は、以下の通りである。即ち、ハイブリドーマの培
養上清を酵素抗体法でタイトレージョンを行い、それよ
り判断して適当な希釈倍率を決める０次にＫＡＴＯ−１
）１培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液として、
１：５，１：５”・・・１：５１）希釈したものを適当
に希釈したハイブリドーマ培養上清にそれぞれ等量論え
、１時間、３７℃でインキエベーションする。そして、
通常の酵素抗体法（ｔａｒｇｅｔ： ＫＡＴＯ−ＩＩＩ
［）の系でアッセイを行った。
方法は、以下の通りである。即ち、ハイブリドーマの培
養上清を酵素抗体法でタイトレージョンを行い、それよ
り判断して適当な希釈倍率を決める０次にＫＡＴＯ−１
）１培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液として、
１：５，１：５”・・・１：５１）希釈したものを適当
に希釈したハイブリドーマ培養上清にそれぞれ等量論え
、１時間、３７℃でインキエベーションする。そして、
通常の酵素抗体法（ｔａｒｇｅｔ： ＫＡＴＯ−ＩＩＩ
［）の系でアッセイを行った。
（ロ）スクリーニングの流れ
１次スクリーニング：ターゲットセル（ＫＡＴＯ−ＩＩ
Ｉ）および正常皮膚繊維芽細胞（ＣＯＤ４Ｓ−３Ｋ）を
用いた酵素抗体法で、ＫＡＴＯ−１）１に対して陽性で
Ｃ０Ｄ４Ｓ−３Ｋに対して陰性なウェルを選抜。
Ｉ）および正常皮膚繊維芽細胞（ＣＯＤ４Ｓ−３Ｋ）を
用いた酵素抗体法で、ＫＡＴＯ−１）１に対して陽性で
Ｃ０Ｄ４Ｓ−３Ｋに対して陰性なウェルを選抜。
２次スクリーニング＝ １次スクリーニングで選抜され
た細胞株を２〜３回クローニングし、その培養上清を多
くの癌由来の株化細胞（ｃｅｌｌ １ｉｎｅ）や他の正
常組織由来細胞との反応性を検討するとともに、分泌型
或いは細胞膜表覆型抗原のどちらを認識するかを、酵素
抗体法を用いたインヒビシロン テストで同定する。
た細胞株を２〜３回クローニングし、その培養上清を多
くの癌由来の株化細胞（ｃｅｌｌ １ｉｎｅ）や他の正
常組織由来細胞との反応性を検討するとともに、分泌型
或いは細胞膜表覆型抗原のどちらを認識するかを、酵素
抗体法を用いたインヒビシロン テストで同定する。
（４）モノクローナル抗体の回収、精製（イ）上記のス
クリーニングによって得られたクローン株を予め０．５
ｍｌ／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ／
Ｃマウス（雄）の腹腔内へ２．０〜３．ＯＸ １０’
ｃｅ１）／匹移植し、１０〜１４日後にモノクローナル
抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
クリーニングによって得られたクローン株を予め０．５
ｍｌ／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ／
Ｃマウス（雄）の腹腔内へ２．０〜３．ＯＸ １０’
ｃｅ１）／匹移植し、１０〜１４日後にモノクローナル
抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
この腹水を０．９％ＮａＣｊ！液を加え５〜１０倍希釈
した後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加
え、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少量
の０．９％Ｎａ Ｃ１液で溶解させた後、０．９％Ｎａ
Ｃ１液を外液として透析した。
した後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加
え、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少量
の０．９％Ｎａ Ｃ１液で溶解させた後、０．９％Ｎａ
Ｃ１液を外液として透析した。
透析終了後、高速液体クロマトグラフィー（ＴＳＫ−Ｇ
ｅｌｌ Ｇ−３０００８１））を行い、免疫グロブリン
画分を得、精製モノクローナル抗体とした。
ｅｌｌ Ｇ−３０００８１））を行い、免疫グロブリン
画分を得、精製モノクローナル抗体とした。
（ロ）本りローン株は、ＢＳＡ含無血清培地中でも増殖
させることができる。すなわち、０．５％ＢＳＡ含無血
清培地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上
清を集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度
となるように加え、沈澱画分を分取し、これに０．９％
ＮａＣ１液を加え、溶解させた後、さらに硫酸アンモニ
ウムを４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した
。この沈澱画分をなるべく少量の０．９％ＮａＣｎ液で
溶解させた後、０．０２Ｍ生理的リン酸緩衝液を外液と
して透析した。透析終了後、この溶液をＤＥＡＥ−セル
ロファイン力ラムに加え、カラムクロマトグラフィーを
行った。
させることができる。すなわち、０．５％ＢＳＡ含無血
清培地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上
清を集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度
となるように加え、沈澱画分を分取し、これに０．９％
ＮａＣ１液を加え、溶解させた後、さらに硫酸アンモニ
ウムを４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した
。この沈澱画分をなるべく少量の０．９％ＮａＣｎ液で
溶解させた後、０．０２Ｍ生理的リン酸緩衝液を外液と
して透析した。透析終了後、この溶液をＤＥＡＥ−セル
ロファイン力ラムに加え、カラムクロマトグラフィーを
行った。
（５） モノクローナル抗体の特性
かくしてスクリーニングされたクローンの産生ずるモノ
クローナル抗体の性状は、表２及び表３のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。
クローナル抗体の性状は、表２及び表３のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。
なお、本発明で用いた酵素抗体法は、ケネット（Ｋｅｎ
ｎｅｔｔ ） らの方法〔モノクロナル アンチボディ
ー（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、
３７６、 （１９８０） ）に準じて細胞をそのまま利
用するエリザ（ＥＬＩＳＡ）法〔エンザイム リンクド
イムノソルベント アッセイ （Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉ
ｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ））
（以下、ＣＥＬＩＳ＾と略す）である。
ｎｅｔｔ ） らの方法〔モノクロナル アンチボディ
ー（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、
３７６、 （１９８０） ）に準じて細胞をそのまま利
用するエリザ（ＥＬＩＳＡ）法〔エンザイム リンクド
イムノソルベント アッセイ （Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉ
ｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ））
（以下、ＣＥＬＩＳ＾と略す）である。
表２
（以下余白）
表３：抗ＫＡＴＯ−ＩＩＩ１モノクロ一ナル抗体の反応
特異性ＣＥＬ Ｔ ＳＡ反応性は、＋は反応陽性と判定
される測定検体の程度で示した。−は陰性を示した。
特異性ＣＥＬ Ｔ ＳＡ反応性は、＋は反応陽性と判定
される測定検体の程度で示した。−は陰性を示した。
ＣＥＬ ＩＳＡ法におけるＯ Ｄ ４１゜値は、−：
０．０５未満 ＋ ： ０．１以上０．４未満 である。
０．０５未満 ＋ ： ０．１以上０．４未満 である。
暑
手 続 主甫 正 書印発）
昭和６０年１）月２５日
１、事件の表示
昭和６０年特許願第２２０８１７号
２、発明の名称
モノクローナル抗体
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
氏名（名称） 株式会社 ミドリ十字
４、代理人 ■５４１
住所 大阪市東区平野町４丁目５３番地３ニューライフ
平野町４０６号 狙（０６） ２２７−１）５６ 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ６、補正の内容
平野町４０６号 狙（０６） ２２７−１）５６ 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ６、補正の内容
Claims (2)
- （１）印環型胃癌由来株（ＫＡＴＯ−III）を免疫原と
して作製されたハイブリドーマの産生する以下の特性を
持つモノクローナル抗体。 ［１］１ｇクラス（サブクラス）：ＩｇＧ＿２＿ａ ［２］認識抗原タイプ：細胞膜表在型抗原 ［３］癌細胞との反応性：少なくとも胃癌（ＫＡＴＯ−
III）に対して陽性を示す。 - （２）癌細胞との反応性が、さらに肺癌（ＰＣ−１）、
肺癌（ＰＣ−３）、肺癌（ＰＣ−９）、肺癌（ＰＣ−１
０）、膀胱癌（ＮＢＴ−２）、喉頭癌（ＨＥｐ−２）に
対して陽性を示す特許請求の範囲第（１）項記載のモノ
クローナル抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60220817A JPS6279793A (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60220817A JPS6279793A (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6279793A true JPS6279793A (ja) | 1987-04-13 |
Family
ID=16757020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60220817A Pending JPS6279793A (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6279793A (ja) |
-
1985
- 1985-10-02 JP JP60220817A patent/JPS6279793A/ja active Pending
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