JPS61185183A - 膣トリコモナスに対して細胞溶解性のモノクロ−ナル抗体を産生するハイブリツド細胞系統 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓマａ
ｇ１ｎａ１１ｓ）Ｋ対して特異的なモノクローナル抗体
に関する。より具体的には、本発明は膣トリコモナス抗
原決定因子に対して特異的であり、この病原性微生物に
対して細胞溶解性であるモノクローナル抗体を産生ずる
ハイブリドーマ（関する。

本発明はトリコモナス症の治療のためのモノクローナル
抗体の用途に関する。

トリコモナス症は、腔トリコモナスにより引きおこされ
る尿生殖器の慢性病である。それは、あらゆる性的に伝
染される病気の中で最も普通のものであり、米国及び世
界中における感染した個人の間において相当に経済的及
び感情的負担を与えるものである。女性において、トリ
コモナス膣炎は膣上皮の炎症、悪臭を有する分泌物及び
組繊細胞病理により特徴付けられる。殆んどの男性は無
症候である。しかしながら尿道炎、前立腺炎、亀頭包皮
炎その他の病気の症状の発現が感染した男性において記
録されている。

現在の寄生虫の顕微鏡検出に基づくトリコモナス症の臨
床的診断はたい（つであり、時間がかかり、極めて不適
切であり、且つ高価である。これらの診断における制限
は、米国及び世界の地方における健康クリニックの既に
制限された医学事情を更に悪化させるものである。この
様に、症候性及び無症候性患者のスクリーニング及びお
そらくは病気の進行を監視するための感度の良い正確な
アッセイの発展などの関連した問題に近付くための基礎
研究が必要である。又、潜在的な痘苗原及び抗菌候補者
の開発も同様に重要であり、必要である。

更に、主たる性的に伝染される病気としてのトリコモナ
ス症の現出は、膣トリコモナスの表面と関連性のある菌
力因子の同定を必要としている。

通常の免疫学的方法の使用は、特異的菌力決定因子或い
は抗原を同定することに失敗している。

従って、膣トリコモナス抗原に対するモノクローナル抗
体を提供することは極めて望ましいことである。その様
な抗体は、ヒトにおけるトリコモナス症病の鑑別的診断
、引ぎ続くワクチンとしての使用のための特異的免疫原
の精製並びに薗力な有する膣トリコモナスの免疫原成分
の構造及び機能の研究に重要であろう。

膣トリコモナスに感染した殆んどの女性のメトロニダゾ
ール（Ｆｌａｇｙｌ　）或いはその他のイミダゾール薬
品による治療は極めて効果的であるが、妊産婦に対する
治療は与えられていない。これらの薬品は実験室動物に
おいて癌を発生させることが知られ【おり、成長胚及び
胎児に対して催奇性である。この理由により、治療の代
替的手段が重要であり必要とされ【いる。従って、健全
な生きた生物体に対して細胞溶解性であるモノクローナ
ル抗体は未治療ヒト部分集団における現存する病気を廃
棄するのにおいて重要であろう。同様に、薬品耐性株を
出現させるためのその様な試薬の効用も重要であろう。

本発明に従えば、膣トリコモナスの抗原に対して高度に
特異的且つ均質なモノクローナル抗体を作り出し、且つ
分泌する連続ハイブリドーマ細胞系統が確立される。具
体的には、膣トリコモナス膜糖蛋白質抗原に対して特異
性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドー
マ細胞系統が製造される。

膣トリコモナスに対して特異的及び細胞溶解性であるモ
ノクローナル抗体を示したスクリーニングされた三つの
ハイブリッドクローンのうち、一つのハイブリッド系統
はＡＴＣＣ（メリーランド州、ロックビルにあるＡｍｅ
ｒｉｃａｎ　Ｔｙｐ＠Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏｌｌ＠ｅｔｉ
ｏｎ　：　ＣＸＪム３）に寄託された（ＨＢざ３７９）
。

更に、本発明によるモノクローナル抗体は、トリコモナ
ス感染症の免疫学的検出及び治療に有用な診断及び治療
試薬を提供する。

以下の説明は本発明の好ましい実施態様に従うものであ
り、本出願の時点において発明者に知られた最良の態様
を表わすものである。

抗体は、通常骨髄のＢりンバ球に由来するリンパ球様細
胞により合成される。抗体特異性の大きな多様性は多（
の共通の構造的特徴を有するイムノグロブリン分子によ
り達成される。異質の結合特異性の個々の抗体分子はそ
れらの詳細なアミノ酸配列において異り、同一の特異性
の抗体でさえも、通常は実質的には類似の配列ではある
が異ったアミノ酸配列を有するイムノブはプリンの混合
物である。本発明において「抗体」及び「イムノグロブ
リン」という用語は互換性を有するものとして使用され
る。

個々のリンパ球は単一アミノ酸配列のイムノグロブリン
を産生ずる。リンパ球を直接的に培養してそれらの特異
的抗体を産生ずることは不可能である。しかしながら、
コーラ−（Ｋｏｈｌｓｒ　）等はＮａｔｕｒｅ　２！ｒ
Ａ　：　ｕ灯（／？？ｊ）　において、体細胞融合、特
にリンパ球とミエローマ細胞間の融合方法が培養液内で
生育し、特異的抗体を産生ずるハイブリッド細胞をもた
らすことを示した。ミエローマ細胞はリンパ球の腫瘍細
胞であり、それは細胞株の種類に応じてしばしば抗体を
自ら産生ずるものであり、更に、幾つかの「非−産生」
株も知られている。

幾つかのミエローマ細胞系統例えばＰ３／Ｘｔ３−　Ａ
ｇ　ｔ　、　　Ｐ　ｊ／ＮＳＩ／／　−Ａｇ　ジー／、
　　Ｓｐコ／１０−Ａｇ／４’及びＳ　ｔｖｑ／ｓ、　
ＸＸＯ，ＢＵ、　ｔ　などを融合細胞ノ・イブリッドの
製造に使用することができる。Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇｒ及
びＰｊ／ＮＳＩ／／−Ａｇ　ＩＩ−／　　細胞系統はコ
ーラ−及びミルスタイン（Ｍｉｌｓｔｏｉｎ）によりヨ
ーロピアンＯジャーナル・オブ・イムノロジー　（Ｅｕ
ｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）Ａ　　：　！ｒ／／　−！
ｒ／デ（／デク６）に説明されている。シェルマン（Ｓ
ｈｕｌｍａｎ　）　等はネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）
　２７４　：　２１，９−コクｏ　（ｔｒｑｔ）でＳｐ
　Ｊ　１０−　Ａｇ／ｌＩミエローマ系統を開発した。

Ｓｌデダ／！、ＸＸＯ，ＢＵ、／　　ミエローマ系統は
トラウプリッジ（Ｔｒｏｖｂｒｉｄｇ・）、ジャーナル
・オブ・エクスベリメンタル拳メディシン（Ｊ、ｌｉｐ
、　Ｍ＠ｄ、　）／ｌｉｔ　：　３／３　（／９７デ）
の記事に報告された。

リンパ球及びミエローマ細胞の体細胞融合から生ずるハ
イブリッドは、本発明及び一般的に当該技術において「
ハイブリドーマ」細胞と称されている。典型的な融合操
作において、選ばれた抗原に対して免疫化された動物か
らの牌臓リンパ球がミエローマ細胞と融合される。得ら
れたノ・イブリドーマを次いで一連の別々の培養チェー
ブ或いはマイクロタイタープレートウェル中に分散させ
、目的抗体を産生する培養物のスクリーニングを行う。

陽性の培養物を更に稀釈して単一細胞から生スルコロニ
ー（クローン）を得る。これらのクローンは再び目的抗
体を産生するためにスクリーニングを行う。クローン化
されたハイブリドーマにより産生される抗体を本発明及
び当該技術においては「モノクローナル」と称する。

モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一抗原決
定因子のみに向けられたものである。更に、同−抗原上
の異った組の決定因子に向けられた異った抗体を典型的
に含む通常の抗体標本とは対照的に、モノクローナル抗
体は抗原上の単一決定因子に対してのみ向けられたもの
である。モノクローナル抗体社、抗原−抗体結合を使用
する診断及び分析アッセイ法の選択性及び特異性を改良
するために有用なものである。モノクローナル抗体の第
一の利点は、それらがその他のイムノグロブリンにより
汚染されることなくハイブリドーマ培養により純粋な形
態で合成されるという事実により与えられるものである
。モノクローナル抗体は、培養されたハイブリドーマ細
胞の上置液或いはハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔的
接種により誘発された腹水から調製することができる。

本発明のハイブリッド細胞系統及び七ツクローナル抗体
を発生させる方法に従えば、異った免疫化方法及び以下
に素描するヒトに対して病原性の腔トリコモナスの異っ
た抗原標本な用いて、抗体生成のために試験動物を刺戟
させる。例えば、試験動物の免疫化は、ＢＡＬＢ　／ｅ
マウスの後半身に生きた生物体を皮下接種して行う。本
発明者は、好ましい実施態様をマウスの寄生物質の不均
質な組成物による免疫化に向け、それにより抗原決定因
子の複合配列を提供した。本発明の抗体源としてマウス
系が使用されたが、ウサギ、ラット、クマ及びヒトなど
のその他の抗体源も利用可能である。

勿論、抗体源動物はここに掲げられたものに限定される
ものではない。抗原に感作された後に、抗体産生を顕在
化する任意の動物が融合プロセスの抗体源として考えら
れる。

宿主動物の免疫化のルート及びスヶジェールは下記の通
りである。マウスに初期注射後約２日後に皮下にブース
ター接種を与えた。この操作は最近刊行されたものであ
る〔アルデレーテ（人１ｄ＠ｒ＊ｔ・）、プリティッシ
ェ・ジャーナル拳オプ・ペネラリーΦディシーズ（Ｂｒ
ｉ　ｔ、　Ｊ、　Ｗ＠ｎ＠ｒ、　ＤＩ　＠、）　＆０　
：　／Ｍｌ　。

ｔｙｒ４Ｉ］。ＩｇＧ抗体応答の動力学は全細胞酵素結
合免疫吸着剤アッセイにより追跡された。ブースター注
射後はぼｌ参日後に最大ＩｇＧ水準が記録された時点で
マウスに再び接種した。この最後の接種後３〜ＩＩ日後
にマウス牌臓を下記の如くハイブリドーマの発生のため
に使用した。その他は、操作方法は抗体刺戟及び産生の
ための確立された通常の技術に従う。

免疫化後、免疫リンパ球様細胞をミエローマ、プラス１
細胞腫或いはバイブリド−！細胞（以下、集合的にミエ
ローマ細胞と称する）と融合させ、培養及び無限に継代
培養することのできるハイブリッド細胞系統を発生させ
、多量のモノクローナル抗体を製造することができる。

本発明の目的のために、融合に選択される免疫リンパ球
様細胞は、免疫化動物からのリンパ節組織或いは牌臓組
織のいずれかから採取されたリンパ球及びそれらの正常
な分化子孫である。本発明において、免疫牌臓細脂は、
マウス系統に関して一層濃縮された便利な抗体産生細胞
の源を提供するので、これらを使用することが好ましい
。

ミエローマ細胞は融合ハイブリッドの連続的増殖の基礎
を与える。ミエローマ細胞は、骨髄に対して選択性を示
すプラス１細胞腫来の腫瘍細胞である。プラス１細胞腫
はプラスマ細砲由来の新生物細胞である。特に、イムノ
グロブリンを分泌しないリンパ球バイブリド−！細胞を
使用することが好ましい。リンパ球ハイブリドーマ細胞
はミエローマ或いはプラス１細胞腫と正常の分化リンパ
球様細施との融合により発生する細胞である。ミエロー
マ、プラス１細胞腫及びハイブリドーマはイムノグロブ
リン合成が無いように選択することができる。

ミエローマ及び免疫化抗体産生細胞が得られる特別の動
物の種類は、一つの種類の細胞を他の種類のものと融合
することが可能であるので特に重要ではない。しかしな
がら、免疫化抗体産生細胞及びミエローマの源は同一種
のものから得られたものであることが好ましい。

一般的に、使用される融合技術は、コーラ−（Ｋｏｈｌ
・ｒ）等ヨーロピアン・ジャーナル会オブｅイムノロジ
ー（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　＆　：　／
／　−／デ（ｌデク６）及びケネット（Ｋ＠ｎｎ＠ｔｔ
　）等〔「リンパ球ハイブリドーマ−微生物学及び免疫
学における最近のトピックス（Ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅ　
Ｈｙｂｒｌｄｏｍａ−Ｃｕｒｒｖｎｔ　Ｔｏｐｉｃｓ　
　ｉｎ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄＩｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ　）Ｊ　　ｔ／　　：　　り７−　？／　（
／９りｔ）８ｐｒｉｎｇ＠ｒ−Ｖ・ｒｌｍｇ、　Ｎ拳ｖ
　Ｙｏｒｋ　］　　に示された方法に従う。

融合は一般的にミエローマ細胞を抗体産生細胞と生育培
地の懸濁液と共に遠心分離してベレットを形成させるこ
とによって達成する。

融合ハイブリッドは次いで膣トリコモナス表面抗原に特
異的な抗体産生についてスクリーニングが行われる。好
ましい実施例に従って得られた膜−特異性モノクローナ
ル抗体は、脂質、糖蛋白質及び蛋白質抗原決定因子など
を含む該層の各種抗原成分に対して個々の特異性を有す
る抗体を含む。

膣トリコモナス膜抗原に対して特異的な抗体を分泌する
ハイブリドーマを培養して安定な遺伝暗号を有する連続
細胞系統を確立する。これらの細胞系統は、液体窒素下
での凍結及び貯蔵を含む多くの従来の方法の任意のもの
によって貯蔵及び保存することができる。凍結された細
胞系統は再生され、膣トリコモナス抗原九対して特異的
なモノクローナル抗体の合成及び分泌を再開して無限に
培養することかできる。分泌された抗体は組織培養上澄
液から通常の沈澱、イオン交換、アフィニティクロマト
グラフイなど゛により回収される。回収された抗体は凍
結乾燥され、余り活性を損失することなく少なくとも数
週間は冷凍下に貯蔵することができる。

以下の具体例は本発明の特別な実施態様を例示するため
に提供されるものであるが、これは本発明を限定する趣
旨のものではない。

Ａ、　抗原の調製 モノクローナル抗体の調製及びアッセイに使用された株
には、ミクロス・ミエラー博士（Ｄｒ。

Ｍｉｋｌｏｓ　Ｍｕｌｌ＠ｒ、　　ｏ　ｙり７エラー大
学、ニエーヨーク）から得られた長期生育培養物、株Ｒ
Ｕ　ｊ？ｔｔ及ヒＮＹＨコｔＡ、及’Ｃｊマイケル・ス
ペンス氏（Ｍｌ　ｃｈａ＠Ｉ　Ｓｐ＠ｎｃ＊　、ジ曹ン
ホプキンス大学、メリーランド州、ボルチモア）から得
られた新鮮な単離物ＪＨＨが含まれる。

膣トリコモナスは、ｔｏｇ熱不熱性活性化ウマ血清ａｎ
ｓａｓ　Ｃ１ｔｙ　Ｂｉｏｌｏｇｌｃａｌｓ、　Ｉｎｃ
、　　カンサス州、レネクサ）を補給したＤｉａｍａｎ
ｄ　　）リプチカーゼ（ＢＢＬ　Ｍｌａｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ　８ｙｓｔ＠ｍｓ、　　メＩＪ−９ンド州、コツキ
ースピル）−酵母エキスーマルトース（ＴＴＭ）−培地
（ｐＨ４，コ）中において生育された。生物体は常法に
従って、抜食されたＮ＠ｕｂａｕ＠ｒ計数室を用いて決
定されたコ、ｊ　Ｘ　１０’〜！Ｘ１０’／Ｍ密度まで
生育された。

対数増殖期の自動寄生生物のみを利用した。

全ての膣トリコモナス株の保存培養物はｔｏ％ジメチル
スルホキシド（ＤＭ８０）を含有するＴＹＭ−血清培地
中において液体窒素中に保存した。全ての株はこれらの
研究を通して、マウスにおける？−／−日後一皮下接種
後の病相進展により証拠付ゆられたように伝染性を保有
した。

免疫化に使用された抗原 ａ、生きた生物体で対抗された動物からの牌臓リンパ球
が所望された研究に対しては、トリコモナス株ＮＹＨ２
ｔｌｓ及びＲＵ　３７ｇ　ハ／　Ｘ　１０’の生物体／
耐を表わす対数増殖期まで生育された。この寄生生物は
次いで無菌リン酸緩衝塩水（ＰＢＳ　）中で二度洗浄さ
れ、最終的に０．０５ｔｓ寒天を有するＴＹＭ−血清中
ｏ、ｒｗＬｌ容積当りＪ　Ｘ　１０’の密度に再懸濁さ
れた。二回目の注射は（次の段階において示される如く
）ＴＹＭ−血清培地中の生物体を用いて行われ、その後
ＰＢＳ中に懸濁された腫トリコモナスを用いた三回目の
注射が行われた。

ｂ、１！）ＩＪコモナス株ＮＹ）Ｉコｇ乙の粗製プラス
マ膜をコ×ＩＯ個の細胞から生成した。これらの生物体
をＰＢＳ中で三回洗浄後、生物体をｉ。

ｍＭＭｇＣ１２及び０　、　ｔ　ＩＲ９／Ｉｌｌ　：１
ン力ナバリン人を含有するＰＢＳ中に再懸濁した。生物
体を凝集し、更にＰＢＳ　−１０ｍＭ　Ｍｇ　Ｃ１２で
二回洗浄した。ペレツト化したトリコモナートを１０１
の／Ｍグリセロール中に再懸濁し、−ｍＭフェニルメチ
ルースルホニルフルオライ）’（ＰＭＳＦ）及び／　ｍ
Ｍ　Ｍｇ　Ｃｌ□を含有する１０ｍＭ　）リス−塩酸塩
緩衝液（トリス−ＭＣＩ）（ｐＨり、ｊ）ｌ−１中に注
入した。１０分間インキ−ページ璽ン後、細胞を更にテ
フロン乳棒Ｄｏｕｎａ・ホモジナイザー（２７ストは−
ク）を用いて均質化し、細胞溶解を、Ｚｅｉｓｓ　ＩＭ
ＪＯ５［微鏡上で暗視野及び位相光学を用いた細胞標本
の検査により確認した。このホモジネートを次いで！−
）０．１１　Ｍスクロース上の１１１１の０．５Ｍマン
ニトールよりなる二段階勾配上に重層した。この勾配を
３０分間コｚｏｘｇで遠心分離してペレットを調製した
。得られたペレットが免疫化処方に使用された粗製膜で
あった。

粗製膜物質の電気泳動分析は、膣トリコモナス膜上に存
在するものとして従来同定されていた免疫原性蛋白質及
び糖蛋白質の存在を確認した（Ａ１ｄ＠ｒ＠ｔｅ　Ｉｎ
ｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　ＩＩＯ：コｇｏ、／デｇＪ
）。　蛋白質の値は、Ｂｒａｄｆｏｒｄの方法により決
定した（　Ｂｒａｄｆｏｒｄ、　Ａｎａｌ　。

Ｂ１ｏｃｈ＠ｍ、　　りＪ：Ｊ４ｔｆｆ、　／デク６　
）。

Ｂ、バイブ１ドーマ生　に・　る　　　スケジ島−ヲ＝
免疫牌臓細胞を発生するために用いられた抗原罠応じて
異った免疫化処方が使用された。この実施態様において
例示されるモノクローナル抗体は三つの別々めノ・イブ
リッド化実験からのものであり、各々上記抗原を表わす
ものである。

各ハイブリッド化には二匹のマウスからの牌臓細胞が用
いられた。これらの研究のためには、６〜を週令のＢＡ
ＬＢ／ＣＪ　マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏ
ｒｌ＊ｓ、メイン州、バー）ｓ７＜−）が用いられた。

ｌ　生ぎた生物体 マウスの後半身に注射箇所当りよ×ＩＯ以上の生物体を
含有する０、５−の皮下注射によりマウスの感染を行っ
た。第二回目のブースター接種は３８目に行い、最終対
抗は３デ日目に与えられた。牌臓細胞は、生きた生物体
による最後の接種後３日月に免疫化マウスからハイブリ
ドーマ産生に使用するために無菌的に取り出された。こ
の規制方式では、比色分析（ＥＬＩＳＡ）及び放射線免
疫沈降−電気泳動（ＲＩＰ）分析法により検定された高
力価の血清抗体水準の産生が可能となった。

ユ　粗製膜抗原 二匹のマウスの各々は粗製膜（−〜蛋白質／−）及びフ
ロイントの完全アジュバントのｌ：ｌ混合物の／１１１
の腹腔内注射を与えられた。又、最初の注射後／４１日
目日目−５８目に７０インドの不完全アジュバント中の
同一の蛋白質割合の二回のブースター接種が腹腔内的に
与えられた。各マウスからの牌臓は、抗原の最終注射後
３８目に免疫化されたマウスからハイブリドーマ産生に
使用するために取り出された。

Ｃ，ハイブリドーマの構成 ハイブリドーマは、免疫化されたマウスからの牌臓細抱
とネズミのＳＰλ１０−ｈｇｔ４Ｉノ１イブリドーマ細
胞（以下５Ｐ２１０と称する）とをオーイ及びヘルゼン
バーグｌ：ｏｉ　ａｎｄ　Ｈｅｒｚｅｎｂｓｒｇ。

Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−Ｐｒｏｄｕｃｌｎｇ　
Ｈｙｂｒｉｄ　Ｃ＠１ｌＬｉｎｅｓ、”Ｓ＊ｌ＠ｅｔｅ
ｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｌｎ　Ｃ＠ｌｌｕｌａｒＩｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ　’収録（Ｂ、ＢｌＭｉｓｈｅｌｌ及び８
．Ｍ。

Ｓｈｉｉｇｉ編、３！Ｉ〜３７頁、Ｗ、Ｈ，Ｆｒｓｅｍ
ａｎ　ａｎｄＣｏ、、　１９１０年、Ｓａｎ　Ｆｒａｎ
ｃｉｍｃｏ　）　］　　の修正方法を用いて融合するこ
とにより産生された。適当な細胞系統は、　Ｄｕｋｅ大
学のニド・ヘイズ氏（Ｋｄ　Ｈａｙｅｓ　）より得られ
、それらは元々シェールマン等ＣＳｃｈｕｌｍａｎ　＠
ｔ　ａｌ、　Ｎａｔｕｒｅ、λ７６：コ６？−コク０（
１９７ｇ）〕　により示されたようなものである。

このＳＰコ１０ハイブリドーマ細胞系統は、ＢＡＬＢ／
ｃ牌臓細胞とミエローマ細胞系統ＸＩ−Ａｇｆとのハイ
ブリッドとして形成されたＳＰＡ／ＨＧＬＫ由来のハイ
ブリッド細胞系統である。

この細胞系統は、イムノグロブリン鎖を合成せス、酵素
ヒボキサンチングアニンホスホリボシル−トランスフェ
ラーゼ（ＨＧＰＲＴ）を欠き、ｇ−アザグアニンに対し
て耐性を有し、リトルフィールド（Ｌｉｔｔｌ＠ｆｉ・
ｌｄ）のヒボキサンチン−アミノプテリン−チミジン（
ＨＡＴ）選択培地の存在下において死滅する。ＳＰコ１
０細胞は、１５％（容量／容量）の熱不活性化ウシ胎児
血清（Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌｏｇｌｅａｌ　Ａ８ｓｏｃｉ
ａｔｓｇ　）、コｍＭＬ−グルタミン及び！Ｏ単位／ｄ
のペニシリン及び！ｒＯｕｇ／ｄ　　ストレプトマイシ
ンを補給されたダルベツコ（Ｄｕｌｂａｃａｏ　）の修
正イーグル（Ｅａｇｌｅ　）培地（ＤＭＥＭ　）（Ｍｌ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅａｌＡａｓｏａｌｔｔａｓ、　
　メリーランド州、ウォーカースピル）中で生育された
。ＨＧＰＲＴ−陽性の復帰突然変異体が細胞培養液中に
存在しないことを確認するために、５Ｐ２１０細胞はハ
イブリッド化実験に使用する直前にｔ−アザグアニン（
〃μｇ／Ｒ１）を含有するこの培地中で生育された。

牌臓な、免疫化マウスから無菌的に取り出し、鉗子を用
いてゆっくりほぐしてＤＭＥＭ−／ｍＭヒービーズ（Ｈ
＠ｐ＠＠）緩衝液（ＭｌｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅａｌＡ
ａｓｏａｌｔｔａｓ　）中の単一細胞懸濁液を調製した
。

ｓｐコ１０細胞は、対数増殖期において収穫し、両方の
細胞タイプはｔＣにおいてコクＱｘｇにて１０分間遠心
分離して採取し、ＤＭＥＭで三回洗浄した。全細胞数は
ノイバウエル（Ｎ＠ｕｂａｕｅｒ　）血球計数器を用い
て決定され、生存率はトリバンプルー排除試験により測
定した。

はぼ７０８個の牌臓細砲な、生きたｓｐコ１０細胞当り
７個の生きた牌臓細胞の割合で５ｏｙｄの円錐管中で混
ぜ合せ、得られた細胞懸濁液をコクＯｘｇＫて１０分間
遠心分離することによりペレット中に集めた。上澄培地
を除去し、細胞ペレットを含有する管を３７℃の水浴中
に７分装置いた。

この細胞ペレットに、７〜コＸ　１０８個の牌臓細胞当
り／　、ｏｙｓｌずつのＤＭＥＭ中のポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ　１０００　；　ＡＴＣＣ）の温かい（
３７’ｃ）、ｔＯ％（重量／容量）溶液を７分間に亘り
てゆっくり攪拌しながら添加した。この懸濁液を更に７
分間攪拌した。次いで、／　Ｒ／　（／−２×１０８個
の牌臓細胞当り）のＤＭｇＭを更に７分間に亘って添加
し、この工程をもう一度繰り返した。

最後に、〃チのウシ胎児血清（）１イブリドーマ生育の
試検を行われたもの、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ａｓｓｏｅｉａｔｅａ　）　　と共にｑｄ（／　〜５ｘ
ｉｏ　　個の牌臓細胞当り）のＤＭＥＭを２〜３分間に
亘つて添加した。これらの細胞を次いで１４００　Ｘ　
Ｉで１９分間遠心分離し、細胞なＨＹ培地（Ｋ・ｎｎ＠
ｔｔａｔ　ａｌ、、　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔ＠Ｈｙｂｒｌ
ｄｏｍａｓ　−Ｃｕｒｒ＠ｎｔＴｏｐｌｃｓ　ｌｎ　Ｍ
ｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ。

Ｖｏｌ、Ｅｌ、ｐｐ、　７７〜９／（／デフ１）、Ｓｐ
ｒｉｎｇ＠ｒｖｓｒ１ｍｇ。

Ｎ＠ｖＹ＠ｒｋ）中にｄ当りλ〜ダ×７０６個に再懸濁
し、？６−ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ　Ｐｌａｓｔ
ｉｃｍ。

ニュージャージ州パインランド）の各ウェル内に−〜＜
ｃ　ｘ　ｉｏ個の細胞を含有する３０μノずつに分配し
、これらを次いで７　％　Ｃｏ□雰囲気を含有する湿潤
化されたインキエベーター内で３７℃においてインキユ
ベートした。

１日月に、二倍濃度のリトルフィールド（Ｌｉｔｔｌ＠
ｆｉ・ｌｄ）のシＪ遺択培地を！θμノずつ各ウェル罠
添加した。弘日月に更に５０μノずつのＨＡＴを各ウェ
ルに添加した。

未融合５Ｐ２１０細胞はＨＡＴ中において評〜ｌＩざ時
間以内に死滅した。ＨＡＴ培地中における細胞生育はハ
イブリッド化の成功を示すものである。

ＨＡＴ中に選択されたハイブリッドクローンは通常６日
月までに観察された。６日月後、全てのウェルに／ｊ　
Ｘ　１０−’　Ｍ　ヒボキサンチン及び３Ｘ　１０−６
Ｍグリシンを含有するＨＹ培地よりなる（ＨＴ）−グリ
シン培地を供給した。成長クローンな含有するウェルを
分析して膣トリコモナス表面抗原に向けられたモノクロ
ーナル抗体を検出し、上澄液が寄生生物に対する抗体に
ついて陽性である細胞をこれらの個々のウェルから評−
ウェルの組織培養プレー）　（Ｃｏ５ｔ＠ｒＰｌａｓｔ
１ｃｍ　）のそれぞれのウェルに移した。ハイブリッド
クローンはＨＹ培地中において供給細胞層なしに維持し
、逐次拡大してＴ７！ｒ（７！ｒＯｗ”　　フラスコ；
　Ｃｏ５ｔｓｒ　）中で生育させ、細胞系統を９０％ウ
シ胎児血清（ＭｌｅｒｏｂｌｏｌｏｇｉｅａｌＡｓｓｏ
ｃｉａｔｅａ　）　−１０％　ＤＭＳＯ（ＡＴＣＣ）内
で液体窒素中において凍結させた。

膣トリコモナス膜抗原に対するモノクローナル抗体の存
在についてのハイブリッドクローン培養上澄液のスクリ
ーニングはＥＬ、ＩＳＡ技術（Ａｌｄｓｒ＠ｔｅ、　Ｂ
ｒ１ｔ、　Ｊ、Ｖｅｎ＠ｒ、　Ｄｉｇ。

ｇｏ　：　ｔｔ、ＩＩ、　／ｅｔａ　）　　を用いて行
われた。対数増殖期における生きたトリコモナスをＰＢ
Ｓ中においてよく洗浄し、　／、２！　Ｘ　１０５個の
生物体を有する３０μ！を個々のＩｒｎｍｕｌｏｎ　Ｉ
［ストリップウェル（Ｄｙｎａｔａｅｈ、　　グアージ
ニア州、アレキサンドリア）に植え付けた。これらの細
胞は３７℃で乾燥し、その後１００　％エタノールで固
定した。抗原−被覆ウェルは６ｔ月間に亘り安定であり
、使用されるまで参℃で貯蔵された。

抗原−被覆ウェルをｐＨ？、−のリン酸緩衝塩水（ＰＢ
Ｓ）で三回洗浄した。／％（重量／容量）ウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ　（３００Ａｔ　”
）を室温において各マイクロタイターウェル中において
１時間インキュベートし、プラスチックウェル内に非特
異的蛋白質結合部位を飽和させた。この溶液な次いで吸
引により除去し、ウェルをＰＢＳでミロ洗浄し、１００
１１１のハイブリッドクローン培養上澄液をウェルに添
加し、マイクロタイター７’Ｌ／　−トな３７℃ヤｌコ
０分間インキエベートした。陽性の対照ウェルは、その
ミーが７１イブリツド化に用いられた同一のマウスから
得られたマウスの血清を含有していた。

次いで上澄液を吸引により除去し、マイクロタイターウ
ェルをミロＰＢ８で洗浄し、ボラ−等の方法（Ｗｅｌｌ
ｅｒ　＠ｔ　ａｌ、、　Ｂｕｌｌ、　ＷＨＯｊｊ　：　
Ｊ’！　−４！、　／ｌり６）に従イＰＢＳ中において
３００分のｌに稀釈されたアルカリ性ホス７アターゼー
結合ヤギ抗マウスイムノグロブリン（Ｃａｐｐ＠ｌ　Ｌ
ｏｂｏｒ＊ｔｏｒｉ＠ｓ、ペンシルバニア州、コツクラ
ンビル）を各マイクロタイターウェル中にコＯＯμノの
最終容量まで添加した。

これらのマイクロタイタープレートを３７℃で１時間イ
ンキュベートし、その後結合抗血清を吸引により除去し
、ウェルをミロＰＢＳで洗浄し、各ウェルに３００μｌ
の酵素基質〔ｐ−二トロフェニルホスフエー）　（Ｓ１
ｇｍｍ　）　；　／ｍＭのＭｇＣｌ２を含有する１０％
（容量／容量）ジェタノールアミン緩衝液（ｐＨデ、ｔ
）中ｌり／―〕を添加した。３０分後に各ウェル中の溶
液の吸光度をグイナテック・マイクロタイター（Ｄｙｎ
ａｔ＠ｅｈ　Ｍｉｃｒｏ−ＩＣＬＩＢ人）読み取り器（
Ｄｙｎａｔ＠ｅｈ　、　　メリーランド州、アレキサン
ドリア）を用いて４ｔＯよｎｍにおいて分光光度法によ
り決定した。抗原のない対照ウェルにおいて得られた背
景水準の吸光度よりも少なくとも二倍大きい吸光度を有
するマイクロタイターウェルを膣トリコそナス膜抗原に
対する抗体の存在について陽性と評価した。

約２００個のスクリーニングされたハイブリッドクロー
ンの内３個のハイブリッドが膣トリコモナス糖蛋白質抗
原決定因子に対して反応性のある細胞溶解性抗体を示し
た。これらのモノクローナルをＣＸ）ｋＪ、３り３−７
．及びＤＭ−／ｊ＆と命名する。クロー７０３人３はＡ
ＴＣＣ（メリーランド州、ロックビル）Ｋ寄託され、寄
託番号ＨＢ　１３７１を与えられた。

ユ　アイソタイプ分析 膣トリコモナスに対する抗体九ついて陽性の培養物につ
いて次にウサギ抗−マクスサブクラス抗体試薬及び標準
ＫＬＩＳＡ用ペルオキシダーゼ−結合アフィニティ精製
ヤギ抗−ウサギＩｇＧハ（Ｈ＆Ｌ）を用いる標準的免疫
学的アッセイ（マウスイムノグロブリンサブタイプ同定
キット、Ｂｏ＠ｈｒｉｎｇ＠ｎ　Ｍａｎｎｈ＠ｉｍＢｉ
ｏｅｈ＠ｍ１ｃａｌｓ、インディアナ州、インディアナ
ポリス）を使用してマウスの抗体アイソタイプを同定す
るための試験を行った。全てのモノクローナル抗体はＩ
ｇＧサブクラスのものでありた。

ＩＬＩＳ人試験において陽性と評価されたノ）イブリッ
ドクローンからの培養上澄液、を放射線免疫沈澱法（Ａ
１ｄｓｒ＠ｔｅ、　Ｉｎｆ＠ｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ。

３ｔ：１０４４／、　／９１３及びＡ１ｄ＠ｒ＠ｔｅ、
　Ｉｎｆｅｃｔ。

Ｉｍｍｕｎ、　Ｑ４　：コｚｐ、ｌデｔ３）によりトリ
コモナスの膜蛋白質に対するモノクローナル抗体の存在
について分析を行った。

膣トリコモナスの膜蛋白質は最近刊行された方法（Ａｌ
ｄ＊ｒｓｔｓ、　Ｉｎｆ＠ｃｔ、　Ｉｍｔａｕｎ、　’
４０　：２ｔ’１．　／デｔ３）　　により放射性ヨウ
素標識を行った。放射性ヨウ素標識化された細胞をＰＢ
８で十分に洗浄し、ペレット化された生物体を／　ｍＭ
　ＰＭＳＦ　（８１１ｍｍ　）を含有する２ｏｏ　μｉ
のＮＥＴ　（／！ｒＯｒｎＭ　ＮａＣ１、ＥＤＴＡ、１
０ｍＭ）リス−塩酸塩、Ｐｌ”−コ）緩衝液で再懸濁し
、３７℃の水浴中にｌθ分間装いた。次いで、８マイク
ロタイターの７０％両性イオンＪ−ｌコ（Ｚ３−／コ）
洗剤（Ｃａｌｂｉｏｃｈ＠ｍ−Ｂｓｈｒｉｎｇ　Ｃｏｒ
ｐ、カリフォルニア州、うφジ璽う）を添加し、混合物
をトリコモナートが可溶化するまでゆっくり均質化させ
た。更にＪμノのＮＥＴ緩衝液を追加し、洗剤抽出物を
ペックマン（Ｂｓ　ｃｋｍａｎ　）ＳＷ！０．／　　ロ
ーターヲ用いて！チスクロースベッド上で１００，００
０％Ｉにおいて３０分間遠心分離を行った。最初の放射
能のざ０チを越える放射能が上澄液中に通常通りに回収
された。

抗体と混合する前に、２．７−／コ抽出物な１００　Ａ
ｔのｔｏ％ｃ容量／容量）ホルマリン（Ｆｏｒｍａｌｉ
ｎ）−固定された蛋白質入−保有Ｓ。

アウレウス（Ｓ、　ａｕｒ＠ｕｓ　）で予備吸着させ、
非特異的結合蛋白質を除去した。次いで１００μノの吸
着可溶化トリコモナス蛋白質を５０μｊのハイブリドー
マ上澄液と混合し、ｐｃで一晩インキユベートさせた。

最後Ｋ　１００μｌの７０％（容量／容量）固定蛋臼質
人−保有Ｓ。

アウレウスを添加し、インキュベージ１ンを室温で更に
コ時間継続した。この蛋白質入−保有Ｓ、アウレウスー
吸着免疫複合体を次いで１０，０００　Ｘ　Ｉ　でダ分
間沈降させ、冨Ｔ−〇、Ｓ％Ｚ　３−７２緩衝液中でミ
ロ洗浄した。放射線標識化抗原−抗体複合体を次いで緩
衝液を溶解する電気泳動内で可溶化させた。試料を懸濁
させ、３分間・沸騰させ、蛋白質入−保有Ｓ、アウレウ
ス細胞を遠心分離により除去した。寄生生物蛋白質抗原
を含有する上澄液を最終的にＳＤＳポリアクリルアミド
平板ゲル上に負荷させた。電気泳動は文献に記載されて
いる通りに行い（Ａ１ｄ＊ｒｅｔｓ、　Ｉｎｆ＠ｃｔ。

Ｉｍｍｕｎｏ、７デ：　１０１７１Ｓ／ｆｔ、３　）、
　ゲルを固定し、フルオログラフィー用に加工した。蛋
白質Ａ−保有Ｓ、アウレウス細胞を使用直前に逐次ＮＥ
Ｔ緩衝液中の０．！％Ｚ３−／２及びＯ，ＯＳ＠Ｚ、？
−／コ中で洗浄した。これらの研究において使用された
ホルムアルデヒド−固定蛋白質入−保有Ｓ、アウレウス
生物体は随所に記載されている方法に従って生育され、
調製された（Ａｌｄ＠ｒ＠ｔｓ及びＢａｓ＠ｍａｎ、　
Ｉｎｆｅｃｔ。

Ｉｍｍｕｎ、　２４　：　１０４４１．　／９７デ）。

同様に重要なのは、放射性ヨウ素標識化された生物体を
用いて得られたものと同一の分子量を有する（５５ｓ）
−メチオニンで生合成され、放射線標識化されたトリコ
モナス蛋白質の免疫沈澱であった。

異った抗原を用いた四つのハイブリッド化実験からの合
計三つのモノクローナル抗体は生きた寄生生物に感染し
たマウス及びトリコモナスを有する患者において免疫原
性の高い膣トリコモナス糖蛋白質に向けられるものであ
ることが示された。この膜糖蛋白質は異ったモノクロー
ナルが共通に用いられた株Ｍ１．２５６に対して試験さ
れた場合に約２３０，０００ダルトン（コＪｏ　ｋａ）
の分子量を有する。ある株に対してはその他の分子量が
認められた。

病　細胞表面露出蛋白質によるモノクローナル抗体の分
析 全細胞ＥＬＩＳＡ及び放射線免疫沈澱法による寄生生物
抗原の表面位置の分析に加えて、ハイブリッド細胞系統
の上澄液を生ぎた株ＮＹＨ２ｔ＆を試験層トリコモナス
生物体として用いた間接免疫蛍光法により試験した。全
てのモノクローナルは生物体の強い蛍光を生じた。この
様に、この抗原のエピトープは容易に寄生生物表面に露
出される。

対するモノクローナル抗体の反応性 抗体の糖蛋白質分子の蛋白質成分に対する反応を前記Ｅ
ＬＩＳＡ法（Ａｌｄｅｒ＊ｔｅ、　Ｂｒ１ｔ。

Ｊ、　Ｍ＠ｎ＠ｒ、Ｄｉｍ、　ｌａＯ：　／Ａｌｌ、　
／９１１Ｉ）の修正法及び今述べた間接免疫蛍光法を用
いて確立した。手短かに説明すると、マイクロタイター
プレートの個々のウェル上に固定された膣トリコモナス
をθ、００／　ｍＭ　＝　１００　ｍＭの次第（増大す
る濃度の過ヨウ素酸で３７℃において１５分間及び３０
分間処理した。過ヨウ素酸塩は炭水化物構造におけるビ
シニルヒドロキシル基を破壊することが知られており、
用いられた条件は全ての表面上の糖を破壊することが知
られている〔オフｚツク等（Ｏｆｅｋ　ａｔ　ａｌ、）
、Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ　）　２４！　：　＆
Ｊｊ、ｔｑｑｔ　）。過ヨウ素酸塩での処理に引き続き
各々のモノクローナルを処理及び未処理対照寄生生物と
反応させ、前記と同様にしてＥＬＩＳＡを行った。

全ての場合において、ＥＬＩＳＡの反応性は陽性であり
、蛋白質部分に結合する抗体に対するエピトープを示し
た。過ヨウ素酸塩処理トリコモナートについては強い蛍
光が認められた。

鍵モノクローナル抗体の一つにより認識される抗原決定
因子が免疫性膣トリコモナス株に独特なものであるか、
或いはこの抗原決定因子がその他の全ての病原性ヒトト
リコモナス株にも見出されるものであるかを決定するこ
とは興味深いことであった。従って、二年間ＫＩＩ）Ｉ
Ｊコモナスの九つの異った臨床単離物（株１’ｆｆＨｕ
ｆＡ、ＮＹ１１２７１、ＡＴＣＣ３０００／。

ＡＴＣＣ３０２３＆、　ＪＨ，７／Ａ、　　ＪＨＨ２Ｈ
，ＪＨＩＨＲ。

ＪＨＨＥＬ、及びＪＨＨＷ）をモノクローナル抗体によ
り認識された抗原決定因子の存在について検査した。

Ｃ，２１７Ａ　、７モノクローナルのｌμＩ腹水をマイ
クロタイタープレートウェルに添加し〔ホラ−（Ｖｏｌ
ｌａｒ　）等、Ｍａｎｕａｌ　ＣＩｉｎｉａＣｌｌｎｉ
ａａｌＩ、　／？？６　）　、及び個々のウェルにはｌ
ｄの最終容積から得られたＳＯμｌの膣トリコモナス洗
剤抽出物が添加された。６０分のインキュベーション後
、ウェルをＰＢＳで洗浄し、引き続き逐次ウェルに膣ト
リコモナス（株ＮＹＨ２ｔＡ　）　Ｋ対するウサギ抗血
清及びヤギ抗−ウサギＩｇ　（アルカリ−ホスファター
ゼ結合）を添加した。

全てのモノクローナル抗体は免疫感作剤株λ１６として
用いられた同種の株と同程度に全ての株を検出した。重
要なことは、株２１＆及びＪＨＪ／　Ａはｌｎ　ｖｉｔ
ｒｏで数年間培養され−従って、長期生育培養物を表わ
すものであるのに対し、他の株は本発明者の実験室にお
いて試験前に僅か３〜ＩＩ日間生育された新たな単離物
である。

ク　モノクローナル抗体による細胞溶解活性モノクロー
ナル抗体は全てＩｇＧサブクラスのものであり、蛋白質
入−セファロースアフィニティクロマトグラフィにより
精製された。

イムノグロブリンはＰＢＳ中１Ｍ人ａＯＨで人出ＯＨ、
二度変えられた蒸留水に対して透析され、Ａｍ　ｉ　ｃ
　ｏ　ｎ限外−過により濃縮され、ＰＢＳ九対して透析
された。生理食塩水中のこれらのモノクローナルを、次
いで下記の研究に使用した。

ＰＢＳで二回洗浄したｕ　Ｘ　１０’個の生物体の０．
１ｒｓｌ試料を等容量の精製モノクローナルＩｇＧ或い
は同一サブクラスであるが、膣トリコモナスとは反応し
ない対照ＩｇＧ（即ち、抗マイコプラズマＩｇＧ抗体）
と混合した。静かに振盪しながら３７℃において〃分間
後寄生生物な二回ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中１ｔｎｌの
最終容量に再懸濁した。数を決定し、溶解の定量的評価
をこれらの条件下に決定した。株Ｍ１２１＆を用いてモ
ノクローナルＣＸ）　Ａ　ｊによりｇｓ％までの溶解が
達成された。溶解は同一条件下にＤＭ−／！！及び３７
！　−／モノクローナルを用いても又明らかであった。

各々のモノクローナルの細胞溶解潜在能力も又膣トリコ
モナス生物体に各種条件下に抗体をインキュベーション
後生きたトリコモナートの（Ｈ）−チミジン−標識ＤＮ
Ａの放出を示すこと罠より評価された。これらの種類の
実験から得られたデータは死んだ生物体の顕微鏡による
数え上げ及び定量を含む上記データと相関関係を有した
。

Ｅ、用途 本発明において説明されるハイブリドーマ細胞系統及び
それから製造されるモノクローナル抗体は膣トリコモナ
ス生物体により示される特異的抗原性及び免疫原性成分
の精製及び特性化に有用である。更に、所定のハイブリ
ドーマ系統から製造されるモノクローナル抗体は抗原認
識において均質であり、それによりトリコモナス膜抗原
の引き続くアフィニティクロマトグラフィに基づく精製
に有用である。

更に、膣トリコモナスの同一の外部膜抗原の７以上の抗
原決定因子に対して向けられた異ったモノクローナル抗
体の利用可能性は膜成分の構造及び機能の研究において
有用である。同様に、これらの同一モノクローナル抗体
は病原性微生物の細胞表面楢造九対する抗体応答のイデ
ィオタイプ分析において貴重である。

究極的に選ばれた膣トリコモナス膜抗原、特に細胞表面
−露出膜蛋白質に対して向けられたモノクローナル抗体
の利用可能性は、これらの蛋白質の痘苗原潜在能力につ
いての研究を容易にするであろう。

膣トリコモナスに対して特異的及び細胸毒性であるモノ
クローナル抗体は臨床的にト’）コモナス症の予防或い
は治療に使用することができる。例えば、膣トリコモナ
スの表面抗原に対して特異的なモノクローナル抗体は臨
床的にヒトの大人を含む動物におけるトリコモナス病の
予防及び／又は治療に使用することがでとる。これらの
モノクローナル抗体の投与形態は好ましくは経口投与で
ある。これらのモノクローナル抗体は幾つかの適当な液
体ビヒクルの任意のものに懸濁或いは溶解させ、−回或
いは数回の経口手段により宿主に投与することができる
。動物の腹水或いは抗体産生クローンが伝播された１ｎ
マ１ｔｒｏの培養培地は動物に対する薬学的に許容可能
な液体担体であり、精製或いは濃縮なしに直接使用する
ことができるが、清澄化工程を行うことが望ましい。あ
る場合において、特にヒトの治療が含まれる場合には、
精製が望ましいか或いは政府規制に従って必要とされる
。

ヒトにおいて、これらのモノクローナル抗体組成物はカ
プセル形態において投与するのが好ましいが、如何なる
適合性の担体も使用することかできる。

これらの膣トリコモナス特異性モノクローナル抗体は又
医学及び研究目的のために有用である。例えば、これら
のモノクローナル抗体を診断的に使用して一般的な多数
の細菌の中から膣トリコモナス株の存在を大きな精度を
もって検出することができる。

前記本発明の説明は、説明及び例示の目的のためＩｃ％
別、の実施態様に向けられたものであった。しかしなが
ら、当業者には本発明の本質から離れることなく、説明
された実施態様の製造方法及び実施方法において多くの
修正及び変更がなされ得ることが明らかであろう。

例えば、ヒトミエローマ細胞と膣トリコモナスの膜抗原
に対して感作されたヒトリンパ球を融合してハイブリド
ーマ細胞系統を開発することが考えられる。

もう一つの例において、これらのハイブリッド化実験に
おいて用いられた株２ｇ＆以外の個々の瞭トリコモナス
株に対して特異的であるモノクローナル抗体を開発する
こともできる。又、別のルート及び方法により免疫化さ
れたマウスの分化したリンパ球様細胞からノ・イブリド
ーマ細胞を構成することもできる。同様に、その他のマ
ウス株を使用して、ここに説明した目的に適した同様の
組のモノクローナル抗体を作り出すハイブリドーマ細胞
系統を製造することもできる。示された実施態様並びに
本発明のその他の実施態様のこれら及びその他の修正及
び用途は当業者には明らかであろう。全ての等価の修正
及び変化は冒頭に掲げられた本発明の特許請求の範囲に
含まれるものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ　ｖａｇ
   ｉｎａｌｉｓ）の膜糖蛋白質抗原に対するモノクローナ
   ル抗体を産生し、且つ該抗体が膣トリコモナス生物体に
   対して細胞溶解性である連続細胞系統であって、膣トリ
   コモナス抗原に対する抗体を産生する能力を有する細胞
   とミエローマ細胞とを融合して形成されたハイブリドー
   マであり、且つ膣トリコモナス生物体に対して特異的で
   あり及び細胞溶解性であるモノクローナル抗体を産生す
   るハイブリドーマから選択されるハイブリドーマよりな
   ることを特徴とする細胞系統。 ２、膜糖蛋白質抗原が２３０，０００ダルトンの見掛け
   分子量を有する、特許請求の範囲第１項記載の細胞系統
   。 ３、ＡＴＣＣ寄託ＨＢ８３７９のクローンである、特許
   請求の範囲第１項記載の細胞系統。 ４、膣トリコモナスに対して特異的であり、及び細胞溶
   解性であるモノクローナル抗体から本質的になる組成物
   。 ５、モノクローナル抗体が膣トリコモナスの膜糖蛋白質
   抗原に対して特異的である、特許請求の範囲第４項記載
   の組成物。 ６、モノクローナル抗体が膣トリコモナスの２３０，０
   ００ダルトンの膜糖蛋白質抗原に対して特異的である、
   特許請求の範囲第４項記載の組成物。 ７、モノクローナル抗体がハイブリドーマクローンＡＴ
   ＣＣ寄託ＨＢ８３７９からの生成物である、特許請求の
   範囲第４項記載の組成物。 ８、生物学的試料中の多数の微生物内において膣トリコ
   モナスを検出する方法において、生物学的試料に存在す
   る微生物を培養し、培養微生物を膣トリコモナスに対し
   て特異的及び細胞溶解性であるモノクローナル抗体と接
   触させ、及び膣トリコモナスの存在を示す細胞溶解活性
   を観察することを特徴とする方法。 ９、細胞溶解性モノクローナル抗体がハイブリドーマク
   ローンＡＴＣＣ寄託ＨＢ８３７９からの生成物である、
   特許請求の範囲第８項記載の方法。