JPS61289897A - 新規な腫瘍関連抗原 - Google Patents
新規な腫瘍関連抗原Info
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- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
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- A61K51/1063—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from stomach or intestines
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（発明の分野）
本発明は抗原特に腫瘍関連抗原の特徴づＩ」に係る。別
の観点では、このような抗原に対して特異的反応性を有
する抗体に係る。更には、このような抗体を産生ずる方
法、該抗体の診断及び治療的用途にも係る。
の観点では、このような抗原に対して特異的反応性を有
する抗体に係る。更には、このような抗体を産生ずる方
法、該抗体の診断及び治療的用途にも係る。
（発明の背頽）
ヒトの癌の診断及び治療にお番フるモノクローナル抗体
の潜在的役割は、最近の研究考察の集約である。特に間
味がもたれるのはイムノアッセイにおけるモノクローナ
ル抗体の使用であり、例えば治療の間、病気の過程をモ
ニターすることができる。更に、１１ツク１−１−ナル
抗体がインビボで腫瘍関連抗原に結合し得ることを利用
する、腫瘍のイメージング及び治療のためのモノクロー
ナル抗体の潜在的使用にも閥味がｂたれる。
の潜在的役割は、最近の研究考察の集約である。特に間
味がもたれるのはイムノアッセイにおけるモノクローナ
ル抗体の使用であり、例えば治療の間、病気の過程をモ
ニターすることができる。更に、１１ツク１−１−ナル
抗体がインビボで腫瘍関連抗原に結合し得ることを利用
する、腫瘍のイメージング及び治療のためのモノクロー
ナル抗体の潜在的使用にも閥味がｂたれる。
モノク［１−ナル抗体技術の発展により、ヒト腫瘍の抗
原の複雑性を研究し得るようになった。特に、モノクロ
ーナル抗体の正確な免疫反応性により、ヒト腫瘍によっ
て発現された独特の細胞表面抗原の同定と区別ができる
ようになった。そのため、このような独特の腫瘍関連抗
原を特徴づければ、癌の診断及び治療のためにモノクロ
ーナル抗体の使用を更に有効に開発する手段が得られ、
モノクローナル抗体技術の利点を最大限に活用し得る手
段が得られる。
原の複雑性を研究し得るようになった。特に、モノクロ
ーナル抗体の正確な免疫反応性により、ヒト腫瘍によっ
て発現された独特の細胞表面抗原の同定と区別ができる
ようになった。そのため、このような独特の腫瘍関連抗
原を特徴づければ、癌の診断及び治療のためにモノクロ
ーナル抗体の使用を更に有効に開発する手段が得られ、
モノクローナル抗体技術の利点を最大限に活用し得る手
段が得られる。
今日、極く少数の腫瘍関連抗原が特徴づけられているだ
けである。更に１診断用又は吊掛用マーカーどして有用
な成る種の腫瘍関連抗原は、全ての患者に病気のあらゆ
る段階及び病気の発現中存在するとは限らない。従って
、独特の腫瘍関連抗原を更に同定し且つ特徴づける必要
性がある。
けである。更に１診断用又は吊掛用マーカーどして有用
な成る種の腫瘍関連抗原は、全ての患者に病気のあらゆ
る段階及び病気の発現中存在するとは限らない。従って
、独特の腫瘍関連抗原を更に同定し且つ特徴づける必要
性がある。
（発明の要約）
本発明は、ヒト組織及び癌ヒトセルライン、特にヒト結
腸癌及び結腸癌セルラインに存在する新規な抗原の発見
及び特徴づけに基づくものである。
腸癌及び結腸癌セルラインに存在する新規な抗原の発見
及び特徴づけに基づくものである。
本発明は独特の腫瘍関連抗原に係り、これはモノクロー
ナル抗体ＣＣＫＯ６１ど反応性であることを特徴とする
。
ナル抗体ＣＣＫＯ６１ど反応性であることを特徴とする
。
本発明に於いては、本明細書中で定義する抗原に対し特
異性をもつ抗体、及びこのような抗体を産生ずる方法が
提供される。更に、本発明は、免疫組織化学的方法及び
イムノアッセイ的方法により癌をインビトロで検出及び
診断するための」−記抗体の使用にも係る。本発明は、
また、ヒ］への癌のインビボでの診断及び治療のための
上記抗体の使用に１９係っている。
異性をもつ抗体、及びこのような抗体を産生ずる方法が
提供される。更に、本発明は、免疫組織化学的方法及び
イムノアッセイ的方法により癌をインビトロで検出及び
診断するための」−記抗体の使用にも係る。本発明は、
また、ヒ］への癌のインビボでの診断及び治療のための
上記抗体の使用に１９係っている。
（発明の詳細説明）
十に述べたように、本発明ＩＪ新規ｆ、Ｉ ＵｉＦ瘍＋
１１１連１ノ′ｔ１１丁電を提供Ｊる。本発明では、こ
の従来から特徴が明らか１４：され−（いイｉい抗原の
ｆ）１質を解明りるために、ＡＴＣＣ寄託番号＃ ＩＩ
Ｂ ８７８６のハイブリッドセルラインによって発生ず
ることのできるｆツク１−１−ナル抗体ＣＣＫ ０６１
を利用する。
１１１連１ノ′ｔ１１丁電を提供Ｊる。本発明では、こ
の従来から特徴が明らか１４：され−（いイｉい抗原の
ｆ）１質を解明りるために、ＡＴＣＣ寄託番号＃ ＩＩ
Ｂ ８７８６のハイブリッドセルラインによって発生ず
ることのできるｆツク１−１−ナル抗体ＣＣＫ ０６１
を利用する。
本発明抗原の物理化学的及び免疫学的ｖ１質及び特にモ
ノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１に対するその反応性から
、その特徴並びに癌ヒ１〜１′！ルライン及びヒ１〜組
織例えばヒト結腸組織に存在する仙の抗原との相辺が明
らかとなった。本発明が提供する抗原の同定可能な特徴
及び性質は次のとおりである。
ノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１に対するその反応性から
、その特徴並びに癌ヒ１〜１′！ルライン及びヒ１〜組
織例えばヒト結腸組織に存在する仙の抗原との相辺が明
らかとなった。本発明が提供する抗原の同定可能な特徴
及び性質は次のとおりである。
ａ）抗原はヒト結腸癌セルラインに存在する。モノクロ
ーナル抗体ＣＣＫＯ６１を使用する標準的Ｆ １．、
Ｉ ＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ
ａｂｓｏｒｂｅｎｌ ｂｉｎｄｉｎｇａＳ！ｉａｌ／）
法から、この抗原は結腸癌セルラインに存在するが、乳
癌、前立腺癌、膀胱癌、肺の腺癌のような他のゼルライ
ン及び黒腫１′！ルラインに（，１存在しないことが判
った。
ーナル抗体ＣＣＫＯ６１を使用する標準的Ｆ １．、
Ｉ ＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ
ａｂｓｏｒｂｅｎｌ ｂｉｎｄｉｎｇａＳ！ｉａｌ／）
法から、この抗原は結腸癌セルラインに存在するが、乳
癌、前立腺癌、膀胱癌、肺の腺癌のような他のゼルライ
ン及び黒腫１′！ルラインに（，１存在しないことが判
った。
ｂ）抗原は正常結賜Ｉｌｌ織及び結腸癌の細胞ｖ１ゾル
で産生される。通常の［１，ＩＳＡ技術にＪ、す、ヒト
結腸組織及びヒ］〜結腸癌からｖｉ製された形質膜に対
するＣＣＫＯ６１の反応性が示された。因みにＣＣＫＯ
６１は、伯の■常及び腫瘍組織例えば乳癌、前立腺癌、
肺の腺癌及び黒肝のようなものから精製した膜とは何の
反応性も示さない。
で産生される。通常の［１，ＩＳＡ技術にＪ、す、ヒト
結腸組織及びヒ］〜結腸癌からｖｉ製された形質膜に対
するＣＣＫＯ６１の反応性が示された。因みにＣＣＫＯ
６１は、伯の■常及び腫瘍組織例えば乳癌、前立腺癌、
肺の腺癌及び黒肝のようなものから精製した膜とは何の
反応性も示さない。
Ｃ）標準的な免疫組織化学的方法により正常結腸、結腸
癌、食道癌及び胃癌に抗原が存在していることが示され
た。どいつのは、ＣＣＫＯ６１どの強い反応性がそのＪ
：うな組織の免疫パーオキシダーゼ染色によって明らか
にされたからである。乳癌、肺の腺癌、前立腺癌及び黒
肝には弱い反応性又は全く反応性は認められない。
癌、食道癌及び胃癌に抗原が存在していることが示され
た。どいつのは、ＣＣＫＯ６１どの強い反応性がそのＪ
：うな組織の免疫パーオキシダーゼ染色によって明らか
にされたからである。乳癌、肺の腺癌、前立腺癌及び黒
肝には弱い反応性又は全く反応性は認められない。
（１） ＳＯ３−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法
（ＳＯ３−ＰＡＧＥ）及びつＴスターンイムノブロツ］
・分析から、この抗原は約８２０．０００〜約９６０．
０００の範囲内の分子量を有していることが判った。５
Ｏ８−ＰＡＧＥ及びつ■スターンイムツブ［］７１１〜
分の前に抗原をプロテイナーゼＫによる処理で変性する
と、ＣＣＫＯ６１に対する抗原の反応性は破壊される。
（ＳＯ３−ＰＡＧＥ）及びつＴスターンイムノブロツ］
・分析から、この抗原は約８２０．０００〜約９６０．
０００の範囲内の分子量を有していることが判った。５
Ｏ８−ＰＡＧＥ及びつ■スターンイムツブ［］７１１〜
分の前に抗原をプロテイナーゼＫによる処理で変性する
と、ＣＣＫＯ６１に対する抗原の反応性は破壊される。
このことは該抗原が蛋白質であることを示している。
ｅ）抗原は本来糖蛋白質である。ｃ１４−グルコサミン
を用いる結腸癌の代謝ラベル及び標準方法によるＣＣＫ
Ｏ６１を用いる抗原の免疫沈澱から、抗原が疾水化物成
分を含んでいることが明らかにされた。
を用いる結腸癌の代謝ラベル及び標準方法によるＣＣＫ
Ｏ６１を用いる抗原の免疫沈澱から、抗原が疾水化物成
分を含んでいることが明らかにされた。
ｆ）溶液中における抗原の等電点電気泳動によるど、等
電点は約４．５〜約５．０及び約５．１へ・約５．９の
範囲内にあり、そのピークは約４．９と約５．４である
。
電点は約４．５〜約５．０及び約５．１へ・約５．９の
範囲内にあり、そのピークは約４．９と約５．４である
。
上記を要約すると、ヒ１〜組織又は癌ヒトセルラインか
ら選択される源に由来し得る本発明の抗原は、約８２０
．０００〜約９６０．０００の分子量を有しかつ約４．
５〜約５．０及び約５．１〜約５．９の範囲の等電点を
有する糖蛋白質であると特徴づけられる。特に、この抗
原は、約４．９と約５．４に等電点を有していることを
特徴とする。さらに、本発明の腫瘍関連糖蛋白質は正常
結腸及び結腸癌によって発現され、ヒト結腸癌セルライ
ンに存在する。
ら選択される源に由来し得る本発明の抗原は、約８２０
．０００〜約９６０．０００の分子量を有しかつ約４．
５〜約５．０及び約５．１〜約５．９の範囲の等電点を
有する糖蛋白質であると特徴づけられる。特に、この抗
原は、約４．９と約５．４に等電点を有していることを
特徴とする。さらに、本発明の腫瘍関連糖蛋白質は正常
結腸及び結腸癌によって発現され、ヒト結腸癌セルライ
ンに存在する。
他の腫瘍関連抗原を含む他の抗原から本発明の抗原を区
別する上で特に重要なことは、モノクローナル抗体ＣＣ
ＫＯ６１に対する特賃竹であり、本発明抗原の少なくと
も１つの決定基がここに特徴づけられる。更に、本発明
によって定義される抗原に対するＣＣＫＯ６１の特異的
反応性を利用（ノで、ヒ１−山来の仙の祠ｒ１から抗原
を甲Ｎｔシかつ精製する手段及び究極的には抗原決定基
を特徴づ（Ｊる手段が得られる。このような精製抗原及
びぞの決定４ルは、当践技術分野でよく知られいる技術
を用いる診断及び治療用のモノクロ−ノル及びボリク］
１−ノール抗体の製造に有用である。例λば、七ツクロ
ーナル抗体を産生り−るネズミハイブリドーマを得るこ
とができる。その仙、抗原はつ１ノ−ギ、）７ギ、その
他の動物の免疫反応を刺激するために利用され、これら
の動物から血清ポリクローナル抗体が得られる。加えて
、この抗原は、問題どなる抗体例λばモノクローナル抗
体、ヒト組織、白液もしくはその伯の体液中に存在する
抗体の特徴づ（−Ｊに））利用され得る。
別する上で特に重要なことは、モノクローナル抗体ＣＣ
ＫＯ６１に対する特賃竹であり、本発明抗原の少なくと
も１つの決定基がここに特徴づけられる。更に、本発明
によって定義される抗原に対するＣＣＫＯ６１の特異的
反応性を利用（ノで、ヒ１−山来の仙の祠ｒ１から抗原
を甲Ｎｔシかつ精製する手段及び究極的には抗原決定基
を特徴づ（Ｊる手段が得られる。このような精製抗原及
びぞの決定４ルは、当践技術分野でよく知られいる技術
を用いる診断及び治療用のモノクロ−ノル及びボリク］
１−ノール抗体の製造に有用である。例λば、七ツクロ
ーナル抗体を産生り−るネズミハイブリドーマを得るこ
とができる。その仙、抗原はつ１ノ−ギ、）７ギ、その
他の動物の免疫反応を刺激するために利用され、これら
の動物から血清ポリクローナル抗体が得られる。加えて
、この抗原は、問題どなる抗体例λばモノクローナル抗
体、ヒト組織、白液もしくはその伯の体液中に存在する
抗体の特徴づ（−Ｊに））利用され得る。
本発明によれば、本明細書中に記載の抗原に対して特異
性をもつ−Ｃいるモノクローナル抗体、及び該抗体の製
造方法が提供される。好ましくはこのようなモノクロー
ナル抗体はＩｏＧクラスのものであり、本発明の腫瘍関
連糖蛋白質に対する免疫反応活性を有している。この免
疫反応活性はモノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１のそれと
実質的に同じである。このようなモノクローナル抗体は
、ヒ１−の癌特に結腸直腸癌の検出、診断及び治療に有
用である。更に、この抗体は、本発明によっ−Ｃ提供さ
れる抗原の単離及び精製、更には正確な抗原決定基の特
徴づけにも応用され（ｑる。
性をもつ−Ｃいるモノクローナル抗体、及び該抗体の製
造方法が提供される。好ましくはこのようなモノクロー
ナル抗体はＩｏＧクラスのものであり、本発明の腫瘍関
連糖蛋白質に対する免疫反応活性を有している。この免
疫反応活性はモノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１のそれと
実質的に同じである。このようなモノクローナル抗体は
、ヒ１−の癌特に結腸直腸癌の検出、診断及び治療に有
用である。更に、この抗体は、本発明によっ−Ｃ提供さ
れる抗原の単離及び精製、更には正確な抗原決定基の特
徴づけにも応用され（ｑる。
上に記載のモノクローナル抗体は一般にＫｏｈｌｅｒと
旧１ｓｔｅｉｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５６．４９５
−４９７（１９７５））に従って産生され得る。本発明
に於いてはマウスもしくは他の適当な宿主を本発明の精
製抗原又は結腸癌に由来するヒ］へ腫瘍組織の可溶性フ
ラクションで免疫化する。この免疫化に続いて、免疫マ
ウスの脾細胞と適当なマウス骨髄腫ラインからの細胞と
を融合し、ハイブリッドセルラインの混合物を得る。ハ
イブリッドセルラインを適当な培地中で培養し、その後
、ここに特徴づｉ−ｔだ抗原に対して特異的な反応ｆ１
をもつ抗体を産生するハイブリッドセルラインを選択し
クローンする。そして産生された抗体を回収する。
旧１ｓｔｅｉｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５６．４９５
−４９７（１９７５））に従って産生され得る。本発明
に於いてはマウスもしくは他の適当な宿主を本発明の精
製抗原又は結腸癌に由来するヒ］へ腫瘍組織の可溶性フ
ラクションで免疫化する。この免疫化に続いて、免疫マ
ウスの脾細胞と適当なマウス骨髄腫ラインからの細胞と
を融合し、ハイブリッドセルラインの混合物を得る。ハ
イブリッドセルラインを適当な培地中で培養し、その後
、ここに特徴づｉ−ｔだ抗原に対して特異的な反応ｆ１
をもつ抗体を産生するハイブリッドセルラインを選択し
クローンする。そして産生された抗体を回収する。
本発明は、ヒトの癌特に結腸直腸癌のインヒト【］での
検出及び診断方法を提供する。本明細書中に明らかにし
た本発明の独特な腫瘍関連糖蛋白質の特徴から、免疫Ｉ
Ｆ織生化学的方法よる患者の組織サンプルでのその検出
が可能であり、及び／又はインビトロのイムノアッセイ
的方法による患者の流体サンプルでのその検出が可能で
ある。免疫組織化学的及び／又はイムノアッセイ的方法
により、患者の試料中の本発明腫瘍関連抗原の存在及び
／又は開を求めることは、診断利用に有用であり、病状
の進展度の指標となり得るか又はこれと関連させること
ができる。
検出及び診断方法を提供する。本明細書中に明らかにし
た本発明の独特な腫瘍関連糖蛋白質の特徴から、免疫Ｉ
Ｆ織生化学的方法よる患者の組織サンプルでのその検出
が可能であり、及び／又はインビトロのイムノアッセイ
的方法による患者の流体サンプルでのその検出が可能で
ある。免疫組織化学的及び／又はイムノアッセイ的方法
により、患者の試料中の本発明腫瘍関連抗原の存在及び
／又は開を求めることは、診断利用に有用であり、病状
の進展度の指標となり得るか又はこれと関連させること
ができる。
患者の組織試料中の抗原を検出するための免疫組織化学
的方法は当業界においてよく知られているので、詳細に
説明することを省く。筒中に言えば、本発明に於いては
、擬似癌患者から採取した組織試料を、ここに特徴づけ
した腫瘍関連糖蛋白質に対して特異性を有している抗体
好ましくはモノクローナル抗体と接触させる。特に使用
が好ましいものはモノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１であ
る。抗体が結合した部位は、その後、標準的免疫組織化
学的方法による組織試料の選択的染色で明らかにするこ
とができる。
的方法は当業界においてよく知られているので、詳細に
説明することを省く。筒中に言えば、本発明に於いては
、擬似癌患者から採取した組織試料を、ここに特徴づけ
した腫瘍関連糖蛋白質に対して特異性を有している抗体
好ましくはモノクローナル抗体と接触させる。特に使用
が好ましいものはモノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１であ
る。抗体が結合した部位は、その後、標準的免疫組織化
学的方法による組織試料の選択的染色で明らかにするこ
とができる。
同様に、イムノアッセイ的方法による患者の流体サンプ
ル中の抗原性物質のインビトロでの検出方法もまた当業
界によく知られているので、これについても繰り返さな
い。本発明の目的のために、患者流体＋ｆンプルを本発
明の腫瘍関連糖蛋白質に対して特異的に反応性である少
なくとも１つの抗体、好ましくはモノクローナル抗体ど
接触さ【！る。
ル中の抗原性物質のインビトロでの検出方法もまた当業
界によく知られているので、これについても繰り返さな
い。本発明の目的のために、患者流体＋ｆンプルを本発
明の腫瘍関連糖蛋白質に対して特異的に反応性である少
なくとも１つの抗体、好ましくはモノクローナル抗体ど
接触さ【！る。
サンプル成分に結合した抗体は後に測定される。
本発明抗原の存在に関する定ｉｌ＋及び／又は定損測定
は、競合的又は非競合的イムノアッセイ法によって成し
得る。モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体は、
本発明によって提供される抗原に対して必要な特異性を
有している限り適当に利用され得る。好ましくはモノク
ローナル抗体ＣＣＫＯ６１を用いる。加えて、使用する
のに好ましいイムノアラ４２イは二部位イムノメトリッ
クアッセイである。これは、ここに特徴づけした抗原の
非干渉決定Ｍ（ｎｏｎ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｄｅ
ｔｅｒｍｉｎａｎｔ）に結合するにうに選択されたモノ
クローナル抗体を利用する。
は、競合的又は非競合的イムノアッセイ法によって成し
得る。モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体は、
本発明によって提供される抗原に対して必要な特異性を
有している限り適当に利用され得る。好ましくはモノク
ローナル抗体ＣＣＫＯ６１を用いる。加えて、使用する
のに好ましいイムノアラ４２イは二部位イムノメトリッ
クアッセイである。これは、ここに特徴づけした抗原の
非干渉決定Ｍ（ｎｏｎ−ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｄｅ
ｔｅｒｍｉｎａｎｔ）に結合するにうに選択されたモノ
クローナル抗体を利用する。
本発明は更に、ヒトの癌特に結腸直犯癌のインビボでの
診断及び治療方法を提供する。本発明に於ける腫瘍の位
置決め及び検出方法は、本発明の腫瘍関連糖蛋白質に対
する特質的反応性をもつ抗体の所定の有効量を擬似癌患
者に投与し、標準的イメージング技術ににり抗体の移動
部位を検知することによって達成することができる。抗
体好ましくはＣＣＫ０６１は、検知が可能となるように
、患者に薬学的に許容可能なキャリヤーと供に投与し、
好ましくはガンマ線を放出する放用竹核種でラベルする
。
診断及び治療方法を提供する。本発明に於ける腫瘍の位
置決め及び検出方法は、本発明の腫瘍関連糖蛋白質に対
する特質的反応性をもつ抗体の所定の有効量を擬似癌患
者に投与し、標準的イメージング技術ににり抗体の移動
部位を検知することによって達成することができる。抗
体好ましくはＣＣＫ０６１は、検知が可能となるように
、患者に薬学的に許容可能なキャリヤーと供に投与し、
好ましくはガンマ線を放出する放用竹核種でラベルする
。
癌治療のための本発明方法は、本発明の腫瘍関連抗原に
対し特異性を持っている抗体好ましくはモノクローナル
抗体の所定の有効量を癌患者に投与する。抗体好ましく
はＣＣＫＯ６１を癌患者に薬学的に許容されるキャリヤ
ーと供に投与し、この抗体と適当な治療剤例えば腫瘍部
位に到達するように選択された放射性同位元素好ましく
はベーター粒子を放出するもの、医薬、毒素又は生物学
的蛋白質と結合させる。
対し特異性を持っている抗体好ましくはモノクローナル
抗体の所定の有効量を癌患者に投与する。抗体好ましく
はＣＣＫＯ６１を癌患者に薬学的に許容されるキャリヤ
ーと供に投与し、この抗体と適当な治療剤例えば腫瘍部
位に到達するように選択された放射性同位元素好ましく
はベーター粒子を放出するもの、医薬、毒素又は生物学
的蛋白質と結合させる。
更に、インビボでの癌の診断及び治療において、本発明
の腫瘍関連抗原に対し特異的である抗体又はそのフラグ
メントの混合物からなる抗体調合物がある場合には腫瘍
の検出、位置決め及び治療効果を高めるために用いられ
得るということ（ｉ当業者に明らかである。
の腫瘍関連抗原に対し特異的である抗体又はそのフラグ
メントの混合物からなる抗体調合物がある場合には腫瘍
の検出、位置決め及び治療効果を高めるために用いられ
得るということ（ｉ当業者に明らかである。
更に、本発明に於いては、予想外にも、本発明抗原の少
なくとも１つの決定基が、嚢胞性線維症の遺伝病に関連
するムチン抗原によって弁環されることが判った。訂し
くいうと、モノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１は嚢胞性線
維症の証しであるム≠ン抗原の高血清レベルを検出する
のに利用できることが知見された。ＣＣＫＯ６１は、こ
の病気に関連する唾液分泌された１−８８抗原の検出可
能な量をも遺伝学的に産生し得ない患者に於いて、嚢胞
性線維症の検出に特に有用である。というのは、ＣＣＫ
０６１は、ルーイス式血液群に関連のないムチン抗原に
反応性だからである。従って、本発明は、血清勺ンプル
とモノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１とを接触させ、イム
ノアッセイによってＣＣＫＯ６１のサンプル成分に対す
る結合を決定することからなる、嚢胞性線維症の検出方
法を提供するのである。この場合、前記イムノアッセイ
においては、嚢胞性線維症に関連するムチン抗原に結合
し得る第二抗体を用いる。好ましくは、このイムノアッ
セイは二部位イムノメトリックアッセイであり、第二抗
体は、ＣＣＫＯ６１と該第二抗体が嚢胞性線維症に関連
する血清ムチン抗原の非干渉決定基に結合するように選
択されたモノクローナル抗体である。
なくとも１つの決定基が、嚢胞性線維症の遺伝病に関連
するムチン抗原によって弁環されることが判った。訂し
くいうと、モノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１は嚢胞性線
維症の証しであるム≠ン抗原の高血清レベルを検出する
のに利用できることが知見された。ＣＣＫＯ６１は、こ
の病気に関連する唾液分泌された１−８８抗原の検出可
能な量をも遺伝学的に産生し得ない患者に於いて、嚢胞
性線維症の検出に特に有用である。というのは、ＣＣＫ
０６１は、ルーイス式血液群に関連のないムチン抗原に
反応性だからである。従って、本発明は、血清勺ンプル
とモノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１とを接触させ、イム
ノアッセイによってＣＣＫＯ６１のサンプル成分に対す
る結合を決定することからなる、嚢胞性線維症の検出方
法を提供するのである。この場合、前記イムノアッセイ
においては、嚢胞性線維症に関連するムチン抗原に結合
し得る第二抗体を用いる。好ましくは、このイムノアッ
セイは二部位イムノメトリックアッセイであり、第二抗
体は、ＣＣＫＯ６１と該第二抗体が嚢胞性線維症に関連
する血清ムチン抗原の非干渉決定基に結合するように選
択されたモノクローナル抗体である。
本発明が更により良く理解されるように、次に非制限的
実施例を記載する。
実施例を記載する。
１乳璽−１
モノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１の産生モノクローナル
抗体ＣＣＫＯ６１を産生ずるハイブリッドセルライン（
へＴＣＣ寄託＄１１８８７８６）を伯成Ｊる目的で′、
ｌのＢａ１ｂ／ｃマウス（−７ヤールズ・リバー・ブリ
〜ディンク ラボラトリーズＲｉｖｅｒ Ｂｒｅｅ（！
ｉｎｇ １ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ） 、 ？＋１ヂ７
−セツツ州ウィルミン１〜ン市）の股腔内に結腸愚老の
死体解剖検水から１！７に腫瘍細胞質ゾル２００μ３を
１４日間隔で５回免疫した。５回目の免疫の３［１後に
マウスから牌臓を摘出して単一細胞懸濁物を調製した。
抗体ＣＣＫＯ６１を産生ずるハイブリッドセルライン（
へＴＣＣ寄託＄１１８８７８６）を伯成Ｊる目的で′、
ｌのＢａ１ｂ／ｃマウス（−７ヤールズ・リバー・ブリ
〜ディンク ラボラトリーズＲｉｖｅｒ Ｂｒｅｅ（！
ｉｎｇ １ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ） 、 ？＋１ヂ７
−セツツ州ウィルミン１〜ン市）の股腔内に結腸愚老の
死体解剖検水から１！７に腫瘍細胞質ゾル２００μ３を
１４日間隔で５回免疫した。５回目の免疫の３［１後に
マウスから牌臓を摘出して単一細胞懸濁物を調製した。
細胞融合は］−ラー及びミルシコタイン（にｏｈｌｅｒ
ａｎｄ Ｈｉｌｓｔｅｉｎ） 、 Ｎａ１ｌｊｊｅ、
２５６．４９５−４９７（１９７５）の方法に従って
実ｔ＊ ｔノた。３５％ポリエチレングリ］−ル（ＰＥ
Ｇ１５００）含有ＡＰ−ＨＥＭ培地（フローラボラトリ
ーズ、インブレウッド市、カリフォルニア州）から成る
融合培地１．Ｏｄ中で、１×１０８個の牌臓細胞を２．
５Ｘ １（１７個のＪ’３．６５３ミＪ目−マ細胞と融
合させた。融合後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２下の加湿
インキコベーター内のｌ−Ｉ Ａ Ｔ培地（ヒボキ１Ｊ
ンヂン、アミノプテリン、デミジン）中で培養した。
ａｎｄ Ｈｉｌｓｔｅｉｎ） 、 Ｎａ１ｌｊｊｅ、
２５６．４９５−４９７（１９７５）の方法に従って
実ｔ＊ ｔノた。３５％ポリエチレングリ］−ル（ＰＥ
Ｇ１５００）含有ＡＰ−ＨＥＭ培地（フローラボラトリ
ーズ、インブレウッド市、カリフォルニア州）から成る
融合培地１．Ｏｄ中で、１×１０８個の牌臓細胞を２．
５Ｘ １（１７個のＪ’３．６５３ミＪ目−マ細胞と融
合させた。融合後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２下の加湿
インキコベーター内のｌ−Ｉ Ａ Ｔ培地（ヒボキ１Ｊ
ンヂン、アミノプテリン、デミジン）中で培養した。
ハイブリドーマが産生する抗体を免疫【ご用いた結腸癌
対正常帥の細胞質ゾル調製物に対する酵素結合免疫吸収
結合アッセイ（ＦＬＩＳＡ）でスクリーニングにかけた
。腫瘍細胞質ゾルに対して５倍以上らかにし、以下の抗
原の特徴づけに使用する目的で選択した。
対正常帥の細胞質ゾル調製物に対する酵素結合免疫吸収
結合アッセイ（ＦＬＩＳＡ）でスクリーニングにかけた
。腫瘍細胞質ゾルに対して５倍以上らかにし、以下の抗
原の特徴づけに使用する目的で選択した。
実施例 ■
抗原の１
本発明の抗原を特徴づＩＪるためにモノクローナル抗体
ＣＣＫＯ６１を下記のようにして用い！、：。
ＣＣＫＯ６１を下記のようにして用い！、：。
抗原の特徴づけ及びモノクローナル抗体ＣＣＫ０６１の
反応性をスクリーニングする為に用いたセルラインは以
下の通りである。
反応性をスクリーニングする為に用いたセルラインは以
下の通りである。
セルライン 供−１−Ｊ
ＳＷ４０３及び舖６２０ アメリカ田、メリーラン
ド結腸癌 州、「ｌツクヴイル市のアメ
リカンタイプカルチ１ｚ−コ レクシ」ン（ＡＴＣＣ） Ｔ８４結胆癌 アメリカ田、カリフォルニア州
、サンディ］、ゴ市のカ リフオルニア大学４フンデイ Ｊゴ癌ゼンターのｌマスイ 博士 ５ＫＨｅｌメラノーマ アメリカ田、メリーランド州
、ロツクヴイル市のアメ リカンタイプカルチャー＝ル クシジン（ＡＴＣＣＩ Ｃａｌｕ−３肺アデノカル アメリカ国、メリーランド
シ／−Ｖ 州、ロツクヴイル市のアメリカ
ンタイプカルチヂｐ −−ｌ レクション（ＡＴＣＣ） Ｔ４７Ｄ 乳癌 アメリカ国、カリフォルニ
ア州、ラジョラ（１，ａ Ｊｏｌｌａ）市のソーク研究
所（Ｓａｌｋ ｔｎｓｔｔｔｕｔｅ）のレナト・ドゥ ルヴエッ］博士（Ｄｒ、 Ｒｅｎａｔ。
ド結腸癌 州、「ｌツクヴイル市のアメ
リカンタイプカルチ１ｚ−コ レクシ」ン（ＡＴＣＣ） Ｔ８４結胆癌 アメリカ田、カリフォルニア州
、サンディ］、ゴ市のカ リフオルニア大学４フンデイ Ｊゴ癌ゼンターのｌマスイ 博士 ５ＫＨｅｌメラノーマ アメリカ田、メリーランド州
、ロツクヴイル市のアメ リカンタイプカルチャー＝ル クシジン（ＡＴＣＣＩ Ｃａｌｕ−３肺アデノカル アメリカ国、メリーランド
シ／−Ｖ 州、ロツクヴイル市のアメリカ
ンタイプカルチヂｐ −−ｌ レクション（ＡＴＣＣ） Ｔ４７Ｄ 乳癌 アメリカ国、カリフォルニ
ア州、ラジョラ（１，ａ Ｊｏｌｌａ）市のソーク研究
所（Ｓａｌｋ ｔｎｓｔｔｔｕｔｅ）のレナト・ドゥ ルヴエッ］博士（Ｄｒ、 Ｒｅｎａｔ。
ＤＯｕｌｂＧＣＣＯ）
８１４メラノーマ アメリカ国、カリフォルニア州
のラジョラ市のスクリ ラプス臨床及び研究フ７・ン デーシ−１ン（ＳＣｒｉｐｐ！ｉ Ｃｌ１ｎｉｃ ａ
ｎｄ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉ。
のラジョラ市のスクリ ラプス臨床及び研究フ７・ン デーシ−１ン（ＳＣｒｉｐｐ！ｉ Ｃｌ１ｎｉｃ ａ
ｎｄ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉ。
ｎ）のウルツ・ライスノＪル
ドｌｔ９ ＋（Ｄｒ、Ｒａ１ｐｈ Ｒｅ１ｓｆｅｌｄ）
Ｎ ９０７膀胱癌 アメリカ１月、リシン１−ン
州、シアｌ〜ル市のフレッドハラ チンソン癌研究センター （Ｆｒｅｄ ＩＩＩｃｈｉｎｓｏｎ ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓｃａｒｃｂ Ｃｅ旧旧゛）のＫ［ヘルストｒ、１１）
！（すｌ （［ｌｒ、 Ｋ［、ｌｌｅｌｌｓｔｌＯｍ） Ｐ Ｃ，−３前立腺癌 アメリカ国、カリフィル
ニア州、ラジョラ市のカリフ Ａルニ）１人学与ンデイＴ了 校のマーク・グラッシー博 ［（Ｏｒ、 Ｍａｒｋ Ｇｌａｓｓｅｙ）細胞は、加湿
００２インキ］ベーター（３７℃）内におい−Ｕ、８％
馬血清及び２％牛脂兇而面を含むＡ−一（〜パー（へ旧
ｏｐａｗ）培地で増殖させ！、：５セルラインＮ ＩＳ
Ａ ヒ１〜癌細胞系に於いて［ツクＩＴＩ−Ｊ−ル抗体ＣＣ
ＫＯ６１と反応することのできる抗原を酵素結合免疫吸
収結合アッセイｆｒｌ ｌ５Ａ）により４９０ ｎｍの
吸収を測って決定しｊこ。１−記のセルラインから得た
細胞を組織培養ノラスー１内−Ｃ約９０％の集密磨にイ
にろまＣ培養した。この細胞及びＩｔ’（地を含むフラ
ス１を一２０℃で凍結しＩｃ ８次いて・この）−ノス
Ｉを室温にまで戻し、細胞を取り出１ノで数λだ。細胞
数を４Ｘ１０６個に調節して、ツノリーブランド・ガラ
スファイバーφフィルター・・：フイク［］タイターブ
レード（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ ｇｌａｓｓｆｉｌ＋ｅｒ
ｆｉｌｔｅｒ ｍ１ｃｒｏ＋目ｅｒｐｌａｔｅ）、）
に １つ■ル当り ２Ｘ １０！１個になるように播い
た。この細胞を０３％！！う１ン、１％！１血清ノ′ル
ブミン含有リン酸塩緩衝住埋食塩水′ｃ３回洗浄した。
Ｎ ９０７膀胱癌 アメリカ１月、リシン１−ン
州、シアｌ〜ル市のフレッドハラ チンソン癌研究センター （Ｆｒｅｄ ＩＩＩｃｈｉｎｓｏｎ ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓｃａｒｃｂ Ｃｅ旧旧゛）のＫ［ヘルストｒ、１１）
！（すｌ （［ｌｒ、 Ｋ［、ｌｌｅｌｌｓｔｌＯｍ） Ｐ Ｃ，−３前立腺癌 アメリカ国、カリフィル
ニア州、ラジョラ市のカリフ Ａルニ）１人学与ンデイＴ了 校のマーク・グラッシー博 ［（Ｏｒ、 Ｍａｒｋ Ｇｌａｓｓｅｙ）細胞は、加湿
００２インキ］ベーター（３７℃）内におい−Ｕ、８％
馬血清及び２％牛脂兇而面を含むＡ−一（〜パー（へ旧
ｏｐａｗ）培地で増殖させ！、：５セルラインＮ ＩＳ
Ａ ヒ１〜癌細胞系に於いて［ツクＩＴＩ−Ｊ−ル抗体ＣＣ
ＫＯ６１と反応することのできる抗原を酵素結合免疫吸
収結合アッセイｆｒｌ ｌ５Ａ）により４９０ ｎｍの
吸収を測って決定しｊこ。１−記のセルラインから得た
細胞を組織培養ノラスー１内−Ｃ約９０％の集密磨にイ
にろまＣ培養した。この細胞及びＩｔ’（地を含むフラ
ス１を一２０℃で凍結しＩｃ ８次いて・この）−ノス
Ｉを室温にまで戻し、細胞を取り出１ノで数λだ。細胞
数を４Ｘ１０６個に調節して、ツノリーブランド・ガラ
スファイバーφフィルター・・：フイク［］タイターブ
レード（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ ｇｌａｓｓｆｉｌ＋ｅｒ
ｆｉｌｔｅｒ ｍ１ｃｒｏ＋目ｅｒｐｌａｔｅ）、）
に １つ■ル当り ２Ｘ １０！１個になるように播い
た。この細胞を０３％！！う１ン、１％！１血清ノ′ル
ブミン含有リン酸塩緩衝住埋食塩水′ｃ３回洗浄した。
１つＴル当り５０μｅのｔツタＩＩ−Ｊル抗体ＣＣＫＯ
６１を加え、室温で１時間インキ１べ−１〜した。０３
％ｌ！ラチン含有リン酸塩緩衝生理食塩水で５回洗浄し
た後、Ａ７ギ抗マウスＩＱＧ及び］（］］］Ｍ−ペルオ
↑シげ複合体（４０００倍希釈）５０μｅを添加し、１
時間イン１″コベー１〜した。６同洗浄した後、２００
μｐの１■／ ｔｔｒｅの０−７Ｉニレンジアミン、０
．０３％Ｌ１２０２含有０．１Ｈり］−ン酸塩−リン酸
塩バッファーを加え、３０分間暗所で振盪インキ］−べ
−１へした。反応を４Ｎ ＋＋２ＳＯ４で停止し４９０
ｎｍの吸光石を測定した。
６１を加え、室温で１時間インキ１べ−１〜した。０３
％ｌ！ラチン含有リン酸塩緩衝生理食塩水で５回洗浄し
た後、Ａ７ギ抗マウスＩＱＧ及び］（］］］Ｍ−ペルオ
↑シげ複合体（４０００倍希釈）５０μｅを添加し、１
時間イン１″コベー１〜した。６同洗浄した後、２００
μｐの１■／ ｔｔｒｅの０−７Ｉニレンジアミン、０
．０３％Ｌ１２０２含有０．１Ｈり］−ン酸塩−リン酸
塩バッファーを加え、３０分間暗所で振盪インキ］−べ
−１へした。反応を４Ｎ ＋＋２ＳＯ４で停止し４９０
ｎｍの吸光石を測定した。
以下の第１表から明らかなＪ：うに、ＣＣＫＯ６１は結
腸癌セルラインＳＷ／１０３及びＴａ２と反応し、本発
明の抗原がヒｌ−結腸癌（？ルラインに存在することが
示された。−・方、ＣＣＫ０６１は乳癌、前立腺癌、膀
胱癌、肺アデノカルシノーマ及びメラノーマのセルライ
ンとはっぎりとした反応性は示さ４Ｔかった。
腸癌セルラインＳＷ／１０３及びＴａ２と反応し、本発
明の抗原がヒｌ−結腸癌（？ルラインに存在することが
示された。−・方、ＣＣＫ０６１は乳癌、前立腺癌、膀
胱癌、肺アデノカルシノーマ及びメラノーマのセルライ
ンとはっぎりとした反応性は示さ４Ｔかった。
膜／ｌ１ｌｌ胞質ゾルＥＩ Ｉｓ＾
正常正常ヒト織組織ヒト腫瘍組織の精製膜にお（〕るモ
ノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１に反応性の抗原の有無を
、酵素結合免疫吸収結合アッセイ（Ｆ１４ＳＡ）により
４９０ｎ…の吸収を測って決定した。
ノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１に反応性の抗原の有無を
、酵素結合免疫吸収結合アッセイ（Ｆ１４ＳＡ）により
４９０ｎ…の吸収を測って決定した。
死亡後１０時間を経過していないヒ１〜組織の外利的及
び解剖的試料から膜細胞質ゾルフラクシ１ンを調製し、
−８０℃に貯蔵した。ダウンスホｔゲノイザー（Ｄｏｕ
ｎｃｅ ｈｏｍｏｇｅｎｉｌＯｒ）中４℃ｒ、４容Ａの
１０ｍＨｌ−リス−＋−＋ ｃ ｐ ｐｕ ７． ｓ、
２ｍＨの塩化カルシウム、２ ｍＨのフェニルメチルス
ルフォネイ１〜（均一化バッファ−）を用いて組織を均
一化した。１メ後のステップは全て４℃で行った。ホモ
ゲネーｉ〜を５分間１１０００Ｘで遠心分−１し、核と
もどの状態の細胞を除去した。上澄液をとり出し、１時
間１３０、０ＯＯＸ ｇで遠心分断した。この高速遠心
分離からの上澄液をとり、細胞質ゾルフラクションとし
た。ペレットを１容量の均一化バッファーに再懸濁し、
１０ｍＨの１〜リス−１−Ｉ ＣＩ ｐＨ７，２中の４
０％７２０％不連続ザッカロース勾配にのせた。この勾
配を１７時間１３０．ＯＯＯｘｇで遠心分離した。４０
％７２０％中間層にある物質をピペットでとり出し、均
一化バッフ７−で５倍量に希釈し６０分間２５．０００
ｘ ｇで遠心分離した。ぺ１ノッ１−を均一化バッファ
ー中に丙懸濁１ノ、ｊ′リ−１ツ（−シ、 １１０°０
で貯蔵しＩＪ０膜２細胞覧ゾルｒｌｌｓＡを成１７；：
めに、膜及び細胞質ゾルソ・クシＥＩンを、イれそ゛れ
各つＪル当り１μｇ及び１０μ３の蛋白質員で、９６−
ウ■ルの平坦底部のボ°リビニルｌイク【１タイタープ
レー１−（バージニア州アレ４−リンドリア山のグイリ
ｊツイノン１）−１で乾燥しＩＪ、、このプレー１−を
蒸溜水で４回洗′）７；：ｏ２０％馬血清を含むリン酸
塩緩衝リリーンで室温にて３０分間イン４−１べ−ｈ
Ｉ、／Ｃ。バラ−ノア−を除去し、第一次抗体を加え１
時間インキ〕べ−１〜した。飲料水に」、る６回の洗浄
後、１：１０００に希釈しＩごヤギ抗−マウス■ＯＧ及
び［＜ｈＭ−パーオー１＝シダーｔｐ複合体を加え、プ
レー１−を１時間インキ７ベートシた。その後蒸溜水で
５回洗浄した。
び解剖的試料から膜細胞質ゾルフラクシ１ンを調製し、
−８０℃に貯蔵した。ダウンスホｔゲノイザー（Ｄｏｕ
ｎｃｅ ｈｏｍｏｇｅｎｉｌＯｒ）中４℃ｒ、４容Ａの
１０ｍＨｌ−リス−＋−＋ ｃ ｐ ｐｕ ７． ｓ、
２ｍＨの塩化カルシウム、２ ｍＨのフェニルメチルス
ルフォネイ１〜（均一化バッファ−）を用いて組織を均
一化した。１メ後のステップは全て４℃で行った。ホモ
ゲネーｉ〜を５分間１１０００Ｘで遠心分−１し、核と
もどの状態の細胞を除去した。上澄液をとり出し、１時
間１３０、０ＯＯＸ ｇで遠心分断した。この高速遠心
分離からの上澄液をとり、細胞質ゾルフラクションとし
た。ペレットを１容量の均一化バッファーに再懸濁し、
１０ｍＨの１〜リス−１−Ｉ ＣＩ ｐＨ７，２中の４
０％７２０％不連続ザッカロース勾配にのせた。この勾
配を１７時間１３０．ＯＯＯｘｇで遠心分離した。４０
％７２０％中間層にある物質をピペットでとり出し、均
一化バッフ７−で５倍量に希釈し６０分間２５．０００
ｘ ｇで遠心分離した。ぺ１ノッ１−を均一化バッファ
ー中に丙懸濁１ノ、ｊ′リ−１ツ（−シ、 １１０°０
で貯蔵しＩＪ０膜２細胞覧ゾルｒｌｌｓＡを成１７；：
めに、膜及び細胞質ゾルソ・クシＥＩンを、イれそ゛れ
各つＪル当り１μｇ及び１０μ３の蛋白質員で、９６−
ウ■ルの平坦底部のボ°リビニルｌイク【１タイタープ
レー１−（バージニア州アレ４−リンドリア山のグイリ
ｊツイノン１）−１で乾燥しＩＪ、、このプレー１−を
蒸溜水で４回洗′）７；：ｏ２０％馬血清を含むリン酸
塩緩衝リリーンで室温にて３０分間イン４−１べ−ｈ
Ｉ、／Ｃ。バラ−ノア−を除去し、第一次抗体を加え１
時間インキ〕べ−１〜した。飲料水に」、る６回の洗浄
後、１：１０００に希釈しＩごヤギ抗−マウス■ＯＧ及
び［＜ｈＭ−パーオー１＝シダーｔｐ複合体を加え、プ
レー１−を１時間インキ７ベートシた。その後蒸溜水で
５回洗浄した。
１ｍＦＩ ／ ｍｆｆ （１） ｏ−７１ニレンジアミ
ン及び０．０３％１−１２（’）２含右０．１８クエン
酸塩−リン酸塩バッファ−ｐｉ ５．０１００／ｉｆ！
を加え明所で３０分間振盪培養しで♀色さＵた。各ウー
ルに５０μｅのＮｌｌ ＳＯ２を加えることによりウ
ール内の反応を停止ざｌＪ ４９０ ｆｉｌｌｌの吸収
を読み取った。
ン及び０．０３％１−１２（’）２含右０．１８クエン
酸塩−リン酸塩バッファ−ｐｉ ５．０１００／ｉｆ！
を加え明所で３０分間振盪培養しで♀色さＵた。各ウー
ルに５０μｅのＮｌｌ ＳＯ２を加えることによりウ
ール内の反応を停止ざｌＪ ４９０ ｆｉｌｌｌの吸収
を読み取った。
後記する第■表に示４ように、ＣＣＫ Ｏ６１ｉ；ｉ結
腸癌及び１常結腸の膜フラクションに反応性であった。
腸癌及び１常結腸の膜フラクションに反応性であった。
ＣＣＫ０６１は乳癌、肺アデノカルシノーマ、メラノー
マ及び前立腺癌を含むその他の１［密組織及び癌の膜に
は非反応性であった。
マ及び前立腺癌を含むその他の１［密組織及び癌の膜に
は非反応性であった。
従って、ＣＣＫＯ６１で特徴づけられる抗原は結腸癌及
び正常結腸の膜にのみ存在することが示された。
び正常結腸の膜にのみ存在することが示された。
免疫１１ｍ化学１Ｈ１ｌｆｆｉ
正常ヒ１〜組織及びヒ］−腫瘍組織にお１ノるＣＣＫ０
６１に反応性の抗原の有無をヒト組織の免疫パ
Ｉ−オキシダーゼ染色（ｉｌｍｌｌｎＯｐｏｒＯＸｉｄ
ａｓｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ）で確認した。
６１に反応性の抗原の有無をヒト組織の免疫パ
Ｉ−オキシダーゼ染色（ｉｌｍｌｌｎＯｐｏｒＯＸｉｄ
ａｓｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ）で確認した。
＝ ３２−
死亡後１０時間以内の一８０℃で貯蔵された外斜的及び
解剖学的試料から１ｑた凍結組織ブ［１ツクの１７クシ
ヨンをミクロ１−−ム／クリオスタツト上で４〜６ｆｌ
ｔクシ」ンに切断した。ガラススライド−１ｍにのせた
このセクションを軒く空気乾燥した後アセ１〜ン中に浸
漬した。Ｔａｙｌｏｒ、 ｉｒ工１１２艙リー圃−罰口
皿ユ１０２．１１３（１９７８）に記載されているのと
同様にして、これらのスライドを染色１べく間接的免疫
パーオキシダーゼアッセイを用いた。リン酸塩緩衝リリ
ーン（ＰＢＳ）中５分間インキュベートすることにより
セクションを再水和した。ＣＣＫＯ６１抗体をこのセク
ション上にのせ、湿気の多い室内で１時間インキコベー
Ｉ〜した。抗体をＰＢＳでセクションから洗浄除去し、
次いでセクションをＰ １１ Ｓ中に５分間浸漬した。
解剖学的試料から１ｑた凍結組織ブ［１ツクの１７クシ
ヨンをミクロ１−−ム／クリオスタツト上で４〜６ｆｌ
ｔクシ」ンに切断した。ガラススライド−１ｍにのせた
このセクションを軒く空気乾燥した後アセ１〜ン中に浸
漬した。Ｔａｙｌｏｒ、 ｉｒ工１１２艙リー圃−罰口
皿ユ１０２．１１３（１９７８）に記載されているのと
同様にして、これらのスライドを染色１べく間接的免疫
パーオキシダーゼアッセイを用いた。リン酸塩緩衝リリ
ーン（ＰＢＳ）中５分間インキュベートすることにより
セクションを再水和した。ＣＣＫＯ６１抗体をこのセク
ション上にのせ、湿気の多い室内で１時間インキコベー
Ｉ〜した。抗体をＰＢＳでセクションから洗浄除去し、
次いでセクションをＰ １１ Ｓ中に５分間浸漬した。
１；５０に希釈したパーオキシダーゼ−複合ヤギ抗−マ
ウスＩｑＧ及びＩｑＭ抗体（ツノリフスルニア州バーリ
ンガーメ市のタゴケミカルズ着）をセクション」−に積
層し、湿気のある室内で３０分間インキコベートした。
ウスＩｑＧ及びＩｑＭ抗体（ツノリフスルニア州バーリ
ンガーメ市のタゴケミカルズ着）をセクション」−に積
層し、湿気のある室内で３０分間インキコベートした。
ＰＢＳで抗体を洗浄除去した。１ｍｌ／ｍｌ！のジアミ
ノベンジシンと０．０３％Ｈ，２０２を用いて発色反応
を行った。スライドをヘマトキシリンエオシンで染色し
た。
ノベンジシンと０．０３％Ｈ，２０２を用いて発色反応
を行った。スライドをヘマトキシリンエオシンで染色し
た。
後述する第■表に、ＣＣＫＯ６１が、組織染色の強度測
定かられかる３Ｊ：うに、正常結腸粘膜に強い陽性の反
応性を有しているが、他の正常組織に対しては弱いもし
くは全く反応性を示さないことが明らかにされている。
定かられかる３Ｊ：うに、正常結腸粘膜に強い陽性の反
応性を有しているが、他の正常組織に対しては弱いもし
くは全く反応性を示さないことが明らかにされている。
ＣＧ Ｋ ０６１１．を正常な乳、肺及び前立腺とは弱
い反応を示１ノ１．−０後述する第■表に示され一〇い
るように、ＣＣＫ０６１は結腸癌、食道癌及び胃癌と強
く反しもし、他の癌とは弱くしか反応しないか又は全く
反応しなかった。乳癌及び肺アデノカルシノーマとは弱
い反応を示した。
い反応を示１ノ１．−０後述する第■表に示され一〇い
るように、ＣＣＫ０６１は結腸癌、食道癌及び胃癌と強
く反しもし、他の癌とは弱くしか反応しないか又は全く
反応しなかった。乳癌及び肺アデノカルシノーマとは弱
い反応を示した。
抗−原（７＞ Ｌ（ＬデカＪ７哲
ＣＣＫ０６１によって特徴づＩ−ｊられる抗原の蛋白質
トの性質及び分子量を、Ｓ Ｆ） Ｓポリアクリルアミ
ドゲル電気泳ｆＪＪ （Ｓ Ｄ Ｓ −Ｐ Ａ Ｇ Ｆ
）及びつ１スターンイムツブ［１ット分析から求めた
。上記したように調製した２０ｇの細胞質ゾルをゲル１
Ｊンブルバッフ；’ −（６２，５ｍＨ１−リス−１１
Ｃｊ） Ｉ）Ｉ＋ ６．８．３Ｘ ＳＯ８，１０χグリ
セロール、０．００１％ブロムフェノールブルー、５χ
メルカプトエタノール）中に溶解し、不連続５ＤＳ−Ｐ
ＡＧＦ （Ｉｅａｍｍｌ ｉ等、Ｈａｔ−ｕｒｅ ２２
７．６８０（１９７０） ）法により３％積み重ねゲル
をもつ３〜１５％直線勾配ゲルで分−１した。Ｔｏｗｂ
ｉｎ ｅｔ ａｌの方法ｊ５１ｊｆｉｓ ７６．４３５
０（１９７９） ）に従ってこの分離蛋白質を電気泳動
的に一晩、２５０ｍ八でニド［Ｔｌ ｔルロース（０，
１ｐ＋、 ５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ ５ｃｈｕｅｌｌ
）に移動させた。こ１７） 二ｌ−口ｔルロースのレプ
リカをＰＢＳ中の３％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）ど共
に３０分間インキ１べ一トシ、続いて３％ＢＳＡ−ＰＢ
Ｓ及び１／１０００に希釈したバイブリド−マド溶液と
共に一晩インキコベーＩ〜した。ニトロセルロースのス
トリップを、バッファーを５回変えながらＰＢＳ中の０
．１″％ Ｔｗｅｅ口を用い３０分間洗浄り、、１１Ｉ
ｄ！当り１００，０００ ｃｐｎ＋ （Ｄ １２５Ｔ
−標識ｔ＝ッシ抗−マウスイムノグロブリンど共に３時
間インキフベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した
後、ニトロセルロースのストリップを空気乾燥１）、Ｘ
線フィルム（コダックＸＡＲ−５＞上に補強スクリーン
を用いて４〜７２時間−７０℃で露光した。
トの性質及び分子量を、Ｓ Ｆ） Ｓポリアクリルアミ
ドゲル電気泳ｆＪＪ （Ｓ Ｄ Ｓ −Ｐ Ａ Ｇ Ｆ
）及びつ１スターンイムツブ［１ット分析から求めた
。上記したように調製した２０ｇの細胞質ゾルをゲル１
Ｊンブルバッフ；’ −（６２，５ｍＨ１−リス−１１
Ｃｊ） Ｉ）Ｉ＋ ６．８．３Ｘ ＳＯ８，１０χグリ
セロール、０．００１％ブロムフェノールブルー、５χ
メルカプトエタノール）中に溶解し、不連続５ＤＳ−Ｐ
ＡＧＦ （Ｉｅａｍｍｌ ｉ等、Ｈａｔ−ｕｒｅ ２２
７．６８０（１９７０） ）法により３％積み重ねゲル
をもつ３〜１５％直線勾配ゲルで分−１した。Ｔｏｗｂ
ｉｎ ｅｔ ａｌの方法ｊ５１ｊｆｉｓ ７６．４３５
０（１９７９） ）に従ってこの分離蛋白質を電気泳動
的に一晩、２５０ｍ八でニド［Ｔｌ ｔルロース（０，
１ｐ＋、 ５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ ５ｃｈｕｅｌｌ
）に移動させた。こ１７） 二ｌ−口ｔルロースのレプ
リカをＰＢＳ中の３％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）ど共
に３０分間インキ１べ一トシ、続いて３％ＢＳＡ−ＰＢ
Ｓ及び１／１０００に希釈したバイブリド−マド溶液と
共に一晩インキコベーＩ〜した。ニトロセルロースのス
トリップを、バッファーを５回変えながらＰＢＳ中の０
．１″％ Ｔｗｅｅ口を用い３０分間洗浄り、、１１Ｉ
ｄ！当り１００，０００ ｃｐｎ＋ （Ｄ １２５Ｔ
−標識ｔ＝ッシ抗−マウスイムノグロブリンど共に３時
間インキフベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した
後、ニトロセルロースのストリップを空気乾燥１）、Ｘ
線フィルム（コダックＸＡＲ−５＞上に補強スクリーン
を用いて４〜７２時間−７０℃で露光した。
抗原の性質を更に明らかにＭるため、上記のようにして
調整した膜を、５Ｏ３−ＰＡＧＥ及びつＴヌターンイム
ノプロット分析にかける前に以下の処理に付した。
調整した膜を、５Ｏ３−ＰＡＧＥ及びつＴヌターンイム
ノプロット分析にかける前に以下の処理に付した。
ａ）過沃素酸すｉ−リウム：２０暗の細胞質ゾルタンパ
ク質をｓｏｍｏの過沃素酸ナトリウム中４°Ｃで１時間
インキュベートした。
ク質をｓｏｍｏの過沃素酸ナトリウム中４°Ｃで１時間
インキュベートした。
ｈ）ノイラミニダーゼ（Ｎｅｕｒａｌｎｉｄａｓｅ）
： ２ｉ’、ＩＩ９の細胞質ゾルを酢酸でｐ１１５〜
６に調整し、１０ｍ１ｌのり［１ストリジウムパーフリ
ンゲン（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｎ＋ ｐｅｒｒｒｔｎｇ
ｅｎｓ）ノイラミニダーゼと共に３７℃で１時間イン４
二コベー１〜しＩこ。
： ２ｉ’、ＩＩ９の細胞質ゾルを酢酸でｐ１１５〜
６に調整し、１０ｍ１ｌのり［１ストリジウムパーフリ
ンゲン（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｎ＋ ｐｅｒｒｒｔｎｇ
ｅｎｓ）ノイラミニダーゼと共に３７℃で１時間イン４
二コベー１〜しＩこ。
Ｃ）プロプイナーぜに：２０１１ｇの細胞質ゾルを２．
０Ｉｌ１ｇ／ ＃Ｉｌ！のプロテイナーゼＫを用いて３
７℃で１時間インキュベー１−シた。
０Ｉｌ１ｇ／ ＃Ｉｌ！のプロテイナーゼＫを用いて３
７℃で１時間インキュベー１−シた。
ｄ） ！徐なアルカリ処理 ：２０埒の細胞質ゾルを
０、ＩＮ Ｎａ０ｔｌと共に一晩インキコベートし、そ
の後０．１Ｎ ｌＩｃ１で中和した。
０、ＩＮ Ｎａ０ｔｌと共に一晩インキコベートし、そ
の後０．１Ｎ ｌＩｃ１で中和した。
全ての反応をゲルサンプルバッファーを添加して停止１
−ざゼた。
−ざゼた。
８１１３−ＰＡＧＥ及びウェスターンイムノプロット分
析から抗原の分子量は約８２０．０（１（１〜９６０．
０００の範囲内にあることが決定された。抗原を化学及
び酵素変性し、続いて５ｔ）Ｓ−ＰＡＧＥ及びウェスタ
ーンイムノプロット分析を行ったところ、抗原の蛋白性
が明らかとなった。特に、ＣＣＫ０６１に対する抗原の
反応性は、上記したようにプロティナーゼＫで抗原を処
理した場合に破壊されることが示された。
析から抗原の分子量は約８２０．０（１（１〜９６０．
０００の範囲内にあることが決定された。抗原を化学及
び酵素変性し、続いて５ｔ）Ｓ−ＰＡＧＥ及びウェスタ
ーンイムノプロット分析を行ったところ、抗原の蛋白性
が明らかとなった。特に、ＣＣＫ０６１に対する抗原の
反応性は、上記したようにプロティナーゼＫで抗原を処
理した場合に破壊されることが示された。
ＣＣＫＯ６１に対する抗原の反応性喪失はその他の変性
には認められなかった。
には認められなかった。
蛋−質の性質の）Ｕ
Ｃ１４−グルコザミン標識５Ｗ４０３結腸癌細胞の免疫
沈降により、ここに特徴づけられる抗原は、糖蛋白質の
性質を有することが判明した。
沈降により、ここに特徴づけられる抗原は、糖蛋白質の
性質を有することが判明した。
５１４４０３ ＠胞を、８％馬血清、２％牛脂児血清の
オートボウ（Ａｕｔｏｐｏｗ） ７５ｃｉを入れた組織
培養フラスコ中で培養した。次に培地に５００１の１４
Ｃ−グルコサミン（Ｎｅｗ ［ｎｏｌａｎｄ Ｎｕｃｌ
ｅａｒ、 Ｂｏｓｔｏｎ、 ＨＡ）に加え、空気中に５
％Ｃ０２を供給される湿潤イン士コベーター中３７℃で
１８時間インキコベートした。細胞をリン酸塩緩衝ザリ
ーン（ＰＢＳ）で３回洗浄し、フラス］から１０ｄ Ｐ
ＢＳ中に集めた。細胞ペレツ１へをＰＢＳで更に３回洗
浄し、１．Ｏｄ溶解バッファー（０，０２１−リス−Ｌ
Ｉ Ｃ，１、ｐＨａ、ｏ、 １ｍＨ［ＤＴＡ、 ０５％
ＮＰ−１１０，０，４１％デＡキシ］レー１−． ０．
５ｍＨフ■ニルメヂルスルホネート）中に再懸濁した。
オートボウ（Ａｕｔｏｐｏｗ） ７５ｃｉを入れた組織
培養フラスコ中で培養した。次に培地に５００１の１４
Ｃ−グルコサミン（Ｎｅｗ ［ｎｏｌａｎｄ Ｎｕｃｌ
ｅａｒ、 Ｂｏｓｔｏｎ、 ＨＡ）に加え、空気中に５
％Ｃ０２を供給される湿潤イン士コベーター中３７℃で
１８時間インキコベートした。細胞をリン酸塩緩衝ザリ
ーン（ＰＢＳ）で３回洗浄し、フラス］から１０ｄ Ｐ
ＢＳ中に集めた。細胞ペレツ１へをＰＢＳで更に３回洗
浄し、１．Ｏｄ溶解バッファー（０，０２１−リス−Ｌ
Ｉ Ｃ，１、ｐＨａ、ｏ、 １ｍＨ［ＤＴＡ、 ０５％
ＮＰ−１１０，０，４１％デＡキシ］レー１−． ０．
５ｍＨフ■ニルメヂルスルホネート）中に再懸濁した。
回転機上４℃で１〜１，５時間イン４−Ｊべ−１〜した
後、溶解物をマイクロフ］−ジ（１Ｇ、 ０ＯＯｘ ｇ
）で１分間遠心分鮒し、ト−澄み液をＴ Ｉ”３ Ｓ
（０，０２ＨＩ−リス−１−Ｉ Ｏｆ！ｐＨ８，０，１
５ＨＮ ａ Ｃ１、０，１％アジ化す１〜リウム）に対
して透析した。１４Ｃ−標識溶解物を回転機上で４℃で
ＣＣＫＯ６１抗体とｔｔに一晩インキュベー１〜した。
後、溶解物をマイクロフ］−ジ（１Ｇ、 ０ＯＯｘ ｇ
）で１分間遠心分鮒し、ト−澄み液をＴ Ｉ”３ Ｓ
（０，０２ＨＩ−リス−１−Ｉ Ｏｆ！ｐＨ８，０，１
５ＨＮ ａ Ｃ１、０，１％アジ化す１〜リウム）に対
して透析した。１４Ｃ−標識溶解物を回転機上で４℃で
ＣＣＫＯ６１抗体とｔｔに一晩インキュベー１〜した。
セファロース結合ヒツジ抗マウスイムノグロブリンを況
合物に加え、室温で３時間インキコベー１−シた。この
セファロース結合物質を０．０５ＨＩ−リス、 ０．１
５８ Ｎ ａ ＣＮ 、 ０．５％ＮＰ−４０゜０．０
５％デオキシ］レート、０．１％ＮａＮ 、 １ｍ
９／ｍｅＢＳＡ ｐＨ８，１で４回洗浄し、前記からＢ
ＳＡを除いたもので更に４回洗浄した。１ｊンプルを前
記したようにＳｔ’）Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動により分析した。
合物に加え、室温で３時間インキコベー１−シた。この
セファロース結合物質を０．０５ＨＩ−リス、 ０．１
５８ Ｎ ａ ＣＮ 、 ０．５％ＮＰ−４０゜０．０
５％デオキシ］レート、０．１％ＮａＮ 、 １ｍ
９／ｍｅＢＳＡ ｐＨ８，１で４回洗浄し、前記からＢ
ＳＡを除いたもので更に４回洗浄した。１ｊンプルを前
記したようにＳｔ’）Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動により分析した。
等電点電気泳動王国９−ｅ Ｉ ｅ ｃ−口つμ±咳時
却１ＪＣＣＫＯ６１で特徴づ（」られる抗原の電気泳動
を、前述の等電点電気泳動カラムを用いて行った。
却１ＪＣＣＫＯ６１で特徴づ（」られる抗原の電気泳動
を、前述の等電点電気泳動カラムを用いて行った。
上記のようにして調製した結腸癌細胞質ゾルの２０■を
、水ジャケラｉ〜１１０ｍの等電点電気泳動カラムで、
ｐｌ＋範囲３．５〜１０の両性電解質を含む０〜４７％
シュクロース勾配中で電気泳動にか１−＞た。カラムは
４℃、 ６００Ｖで１２時間予備電気泳動にかｌ」た。
、水ジャケラｉ〜１１０ｍの等電点電気泳動カラムで、
ｐｌ＋範囲３．５〜１０の両性電解質を含む０〜４７％
シュクロース勾配中で電気泳動にか１−＞た。カラムは
４℃、 ６００Ｖで１２時間予備電気泳動にかｌ」た。
サンプルは勾配の中間で注入し、さらに３０時間４℃で
電気泳動にか【）た。カラムから １ａ＋Ｑのフラクシ
ョンを収集し、直ちにｐＨを測定した。フラクションを
ｐＨ７，０の１０ｍＨリン酸ブー １−リウムに対して
一晩透析した。試料のＥｌ、ＩＳＡ測定により、結腸癌
細胞質ゾルのＣＣＫ−６１抗体との反応性を調べた。
電気泳動にか【）た。カラムから １ａ＋Ｑのフラクシ
ョンを収集し、直ちにｐＨを測定した。フラクションを
ｐＨ７，０の１０ｍＨリン酸ブー １−リウムに対して
一晩透析した。試料のＥｌ、ＩＳＡ測定により、結腸癌
細胞質ゾルのＣＣＫ−６１抗体との反応性を調べた。
このようにして行った抗原の等電点電気泳動から、その
等電点が約４５・〜５．０及び約５．１〜５．９の範囲
内にあり、約４９及び約５４にピークを右することが判
った。
等電点が約４５・〜５．０及び約５．１〜５．９の範囲
内にあり、約４９及び約５４にピークを右することが判
った。
第１表
ヒトセルラインに対するモノクローナル抗体ＧＫＯ６１
セルライン ０１１４９０
ＳＷ４０３結腸癌 ０．４９
Ｔ４７１３ 乳癌 ００３ＰＣ−３前立腺
癌 ００８ ＋＋ ９０７ 膀胱膜 ０．０１Ｃａｌｕ−
３肺腺癌 ０．０３ ＳｋＨｅｌメラノー？ ０．０３８１４メラノー
マ ０．０５ Ｓ騨６２０結腸癌 ０，０１ １８４結腸癌 ０・４０ 第 ■ 表 抗体ＣＣＫＯ６１の反応性 腫瘍膜 ０−Ｉ］ 、す沈−正常膜 〇−肘痕−結
腸癌 ２．０５ 結腸 ２．８１結腸癌
０．７８ 肝１ ０．０１乳癌
０．００ 肺 ０．００乳癌 ０
．０３ 膵臓 ０，００肺腺癌 ０．０
３ 膵臓 ０．００肺腺癌 ０，０１
乳房 ０，００肺扁平癌 ０．０１
膀胱 ０．００肺癌小細胞 ０．００ 脳
０．００肺癌小細胞 ０．００ メラノーマ ０．０１ 前立腺癌 ０．０１ 前立腺癌 ０．００ 抵−」し−ｋ ＣＣＫＯ６１の正常組織に対する免疫Ｉ′ｌ織学的反応
反応 Ｒ陽」しカー数／被験体りの遇し数？Ａｙ１
１１ 結膜（粘膜のみ）４／４ 弱」＼図」「性 乳房 １／４ 肺 ３／５頚部
（変賃性）２／２ 食道（変異＋４） ２／２ 前立腺 １／４ 卵巣（疫異性）１／２ 甲状腺 １／２ 膵臓 １／２ Ｆｉ ＦｉＬＬｌ 肝臓 ０／２ 冑 ０／２腎
臓 ０／２ 膀胱 ０／１ 子宮 ０／１ 小腸 ０／２ 精ｌ！ ０／２ 瓜−］１−ス ＣＣに０６１のｌ！ｉ瘍絹織組織する免疫Ｉ′ｌ織学的
陵応竹組 織 陽ＢａとｖｌＬ
被」１俸仰ｊし数強い反応性 結腸癌 １５／１８ 食道癌 ２／２ 胃癌 ２／２ 臨尤」口か牲 乳癌（内腔管）３／７ 肺腺癌 １／４ 扁平病 ２／４ 膵臓癌 ２／４ 反応性無し
癌 ００８ ＋＋ ９０７ 膀胱膜 ０．０１Ｃａｌｕ−
３肺腺癌 ０．０３ ＳｋＨｅｌメラノー？ ０．０３８１４メラノー
マ ０．０５ Ｓ騨６２０結腸癌 ０，０１ １８４結腸癌 ０・４０ 第 ■ 表 抗体ＣＣＫＯ６１の反応性 腫瘍膜 ０−Ｉ］ 、す沈−正常膜 〇−肘痕−結
腸癌 ２．０５ 結腸 ２．８１結腸癌
０．７８ 肝１ ０．０１乳癌
０．００ 肺 ０．００乳癌 ０
．０３ 膵臓 ０，００肺腺癌 ０．０
３ 膵臓 ０．００肺腺癌 ０，０１
乳房 ０，００肺扁平癌 ０．０１
膀胱 ０．００肺癌小細胞 ０．００ 脳
０．００肺癌小細胞 ０．００ メラノーマ ０．０１ 前立腺癌 ０．０１ 前立腺癌 ０．００ 抵−」し−ｋ ＣＣＫＯ６１の正常組織に対する免疫Ｉ′ｌ織学的反応
反応 Ｒ陽」しカー数／被験体りの遇し数？Ａｙ１
１１ 結膜（粘膜のみ）４／４ 弱」＼図」「性 乳房 １／４ 肺 ３／５頚部
（変賃性）２／２ 食道（変異＋４） ２／２ 前立腺 １／４ 卵巣（疫異性）１／２ 甲状腺 １／２ 膵臓 １／２ Ｆｉ ＦｉＬＬｌ 肝臓 ０／２ 冑 ０／２腎
臓 ０／２ 膀胱 ０／１ 子宮 ０／１ 小腸 ０／２ 精ｌ！ ０／２ 瓜−］１−ス ＣＣに０６１のｌ！ｉ瘍絹織組織する免疫Ｉ′ｌ織学的
陵応竹組 織 陽ＢａとｖｌＬ
被」１俸仰ｊし数強い反応性 結腸癌 １５／１８ 食道癌 ２／２ 胃癌 ２／２ 臨尤」口か牲 乳癌（内腔管）３／７ 肺腺癌 １／４ 扁平病 ２／４ 膵臓癌 ２／４ 反応性無し
Claims (30)
- （１）約８２０，０００〜約９６０，０００の範囲内の
分子量及び約４．５〜約５．０と約５．１〜約５．９の
範囲内の等電点を有する糖蛋白質であることを特徴とす
る、ヒト組織又は癌ヒトセルラインから選択された源に
由来する抗原。 - （２）前記等電点が約４．９及び約５．４である特許請
求の範囲第１項に記載の抗原。 - （３）モノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１に反応付の少な
くとも１つの抗原決定基を有することを更に特徴とする
特許請求の範囲第１項に記載の抗原。 - （４）前記モノクローナル抗体ＣＣＫＯ６１に対する抗
原の反応性が、前記抗原をプロティナーゼＫで処理する
ことにより破壊され得ることを特徴とする特許請求の範
囲第３項に記載の抗原。 - （５）前記抗原が結腸直腸癌で発現される腫瘍関連抗原
である特許請求の範囲第４項に記載の抗原。 - （６）ヒトの癌の検出、診断及び治療に使用するための
モノクローナル抗体の製造方法であって、マウス又は他
の適当な宿主を、特許請求の範囲第１項〜第５項のいず
れかに記載された精製抗原又はヒト結腸癌に由来するヒ
ト腫瘍組織の可溶性フラクションで免疫化し、この免疫
化したマウス又は他の適当な宿主の脾細胞を適当なマウ
ス骨髄腫細胞と融合してハイブリッドセルラインの混合
物を得、適当な培地中でこのハイブリッドセルラインを
培養し、特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記
載の抗原に対して特異的反応性を有する抗体を産生する
ハイブリッドセルラインを選択してクローンし、このよ
うにして産生されるモノクローナル抗体を回収すること
を特徴とする前記モノクローナル抗体の製造方法。 - （７）特許請求の範囲第６項に記載の方法で製造された
モノクローナル抗体。 - （８）前記抗体がＩｇＧ抗体である特許請求の範囲第７
項に記載のモノクローナル抗体。 - （９）前記抗体がＡＴＣＣ寄託Ｎｏ．ＨＢ８７８６のハ
イブリッドセルラインによって発生されるＣＣＫＯ６１
である特許請求の範囲第７項に記載のモノクローナル抗
体。 - （１０）腫瘍関連糖蛋白質に対して特異的反応性を有す
るＩｇＭクラスのモノクローナル抗体であって、前記糖
蛋白質が約８２０，０００〜約９６０，０００の範囲内
の分子間及び約４．５〜約５．０と約５．１〜約５．９
の範囲内の等電点とを有し且つ前記モノクローナル抗体
と反応性であってこの反応性は前記糖蛋白質をプロティ
ナーゼＫで処理することにより破壊され得ることを特徴
とする、前記ＩｇＭクラスのモノクローナル抗体。 - （１１）前記腫瘍関連糖蛋白質が結腸直腸癌によって発
現されることを特徴とする特許請求の範囲第１０項に記
載のモノクローナル抗体。 - （１２）前記抗体がＣＣＫＯ６１である特許請求の範囲
第１１項に記載のモノクローナル抗体。 - （１３）疑似癌患者から採取した組織試料を、特許請求
の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の抗原に対して
特異的反応性を有する抗体と接触させ、前記抗体が結合
している前記試料上の部位を免疫組織化学的手段によっ
て決定することからなる、擬似癌患者の癌を検出及び診
断する方法。 - （１４）前記抗体がモノクローナル抗体である特許請求
の範囲第１３項に記載の方法。 - （１５）前記抗体がＣＣＫＯ６１である特許請求の範囲
第１４項に記載の方法。 - （１６）擬似癌患者から採取した流体サンプルを、特許
請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の抗原に対
して特異的反応性を有する少なくとも１つの抗体と接触
させ、前記抗体の前記流体サンプルの成分への結合をイ
ムノアッセイにより決定することからなる、擬似癌患者
の癌をインビトロで検出及び診断する方法。 - （１７）前記抗体がモノクローナル抗体である特許請求
の範囲第１６項に記載の方法。 - （１８）前記抗体がＣＣＫＯ６１である特許請求の範囲
第１７項に記載の方法。 - （１９）前記イムノアッセイが二部位イムノメトリック
アッセイであり、前記抗体が前記抗原の非干渉決定基に
結合するように選択されたモノクローナル抗体であるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１６項に記載方法。 - （２０）特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記
載の抗原に対し特異的反応性を有する抗体の所定の有効
量を投与し、前記抗体を薬学的に許容され得るキャリヤ
ーと供に投与し且つ検出が可能となるようにラベルし、
前記抗体の移動位置を検知することからなる、擬似癌患
者の癌をインビボで検出及び診断する方法。 - （２１）前記抗体がモノクローナル抗体である特許請求
の範囲第２０項に記載の方法。 - （２２）前記抗体がＣＣＫＯ６１である特許請求の範囲
第２１項に記載の方法。 - （２３）特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記
載の抗原に対して特異的反応性を有する抗体の所定の有
効量を投与し、前記抗体を薬学的に許容され得るキャリ
ヤーと供に投与し且つ適当な治療剤と結合しておくこと
を特徴とする、癌患者の癌を治療する方法。 - （２４）前記抗体がモノクローナル抗体である特許請求
の範囲第２３項に記載の方法。 - （２５）前記抗体がＣＣＫＯ６１である特許請求の範囲
第２４項に記載の方法。 - （２６）特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記
載の抗原に対するモノクローナル抗体。 - （２７）前記抗体がネズミ抗体である特許請求の範囲第
２６項に記載のモノクローナル抗体。 - （２８）特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記
載の抗原に対するポリクローナル抗体。 - （２９）患者の血清サンプルとモノクローナル抗体ＣＣ
ＫＯ６１とを接触させ、イムノアッセイによって前記抗
体の前記サンプルの成分に対する結合を決定することか
らなり、前記イムノアッセイが、嚢胞性線維症に関連す
る少なくとも１つの血清ムチン抗原に結合し得る第二抗
体を用いることを特徴とする嚢胞性線維症のインビトロ
での検出方法。 - （３０）前記イムノアッセイが二部位イムノメトリック
アッセイであり、前記第二抗体が、前記抗体ＣＣＫＯ６
１と前記第二抗体が前記ムチン抗原の非干渉決定基に結
合するように選択されたモノクローナル抗体であること
を特徴とする特許請求の範囲第２９項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US72620285A | 1985-04-22 | 1985-04-22 | |
| US726202 | 1985-04-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61289897A true JPS61289897A (ja) | 1986-12-19 |
Family
ID=24917624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61093183A Pending JPS61289897A (ja) | 1985-04-22 | 1986-04-22 | 新規な腫瘍関連抗原 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0200464B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61289897A (ja) |
| AT (1) | ATE79632T1 (ja) |
| AU (2) | AU599589B2 (ja) |
| DE (1) | DE3686438T2 (ja) |
| DK (1) | DK185086A (ja) |
| ES (2) | ES8800604A1 (ja) |
| FI (1) | FI87141C (ja) |
| NO (1) | NO170810C (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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