JPH03198794A - 抗ヒト心筋ｃプロテインモノクローナル抗体及び該抗体を産生するハイブリドーマ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体
、該モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマ、該
モノクローナル抗体の製造法及び該モノクローナル抗体
を利用した心疾患診断剤に関する。

［従来の技術及び発明が解決しようとする課題］心筋梗
塞に代表される虚血性心疾患の非侵襲的画像診断は、心
筋の壊死巣の範囲や程度を知る上できわめて重要であり
、その一つとしてヒト心筋ミオシンに対するモノクロー
ナル抗体を用いたシンチスキャニングの試みがなされて
いる。

また、心筋細胞組織の壊死により、心筋細胞膜外へ漏出
して血流中に出現するミオシンを測定することによる虚
血性心疾患の診断の試みもなされている。

ヒト心筋ミオシンの重鎮に関連した蛋白であるヒト心筋
Ｃプロティンは、分子量１３万５千〜１５万で、分子量
４５万〜４８万のヒト心筋ミオシン重鎖と分子量７〜８
万のヒト心筋ミオシン軽鎖の中間に位置するヒト心筋細
胞構成蛋白である。心筋障害の診断において、このヒト
心筋Ｃプロティンについてヒト心筋ミオシンと同様の測
定を行うと、その立体構造や代謝速度の相違により、ヒ
ト心筋ミオシンとは異なる臨床的情報が提供される。

しかしながら、」１記診断に適した抗ヒト心筋Ｃプロテ
ィンモノクローナル抗体は未だ確立されていない。

従って、本発明は、抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクロー
ナル抗体、該モノクローナル抗体を産生ずるハイブリド
ーマ、該モノクローナル抗体の製造法及び該モノクロー
ナル抗体を含有するヒト心疾患の診断薬を提供すること
を目的とする。

［課題を解決するための手段］ かかる実情において、本発明者らは鋭意研究を行った結
果、本発明に到達するに至った。

すなわち本発明は、ヒト心筋Ｃプロティンを特異的に認
識するモノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を産
生ずるハイブリドーマ、該モノクローナル抗体の製造法
及び該モノクローナル抗体の標識体を含有するヒト心疾
患の診断剤を提供するものである。

本発明のモノクローナル抗体は、例えばヒト心筋Ｃプロ
ティンを免疫した動物から採取した抗体産生細胞と骨髄
腫細胞との細胞融合によって作製したハイブリドーマを
動物腹腔内または培養液中にて増殖せしめ、該腹水また
は培養液から採取することにより製造される。

本発明において抗原として用いるヒト心筋Ｃプロティン
は、ヒト心筋を材料とし、例えばｒＫ、　ＭＰｒｉｎｃ
ｅ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　１９１．５７１−５
８０（１９８０）Ｊ記載の方法に準じ、粗ミオシンを精
製し、更に５ＤＳ−ＰＡＧＥ法により目的とするＣプロ
ティンのバンドを切り出し、ゲルより抽出することによ
り製造することができる。

　３− また、本発明のモノクローナル抗体を産生ずるハイブリ
ドーマは、いわゆる細胞融合によって製造される。すな
わち、上記ヒト心筋Ｃプロティンを抗原として用いて免
疫した動物から抗体産生細胞を調製し、これを骨髄腫細
胞と融合させ、得られたハイブリドーマを選択的に増殖
させ、該ハイブリドーマから抗体産生ハイブリドーマを
検索し、クローニングにより目的とするモノクローナル
抗体産生ハイブリドーマを得る。

抗体産生細胞としては、例えばヒト心筋Ｃプロティンま
たはこれから得られる抗原を免疫させた動物から得られ
る肺臓細胞、リンパ節細胞、Ｂ−リンパ球等が挙げられ
る。免疫させる動物としては、マウス、ラット、ウサギ
、ヤギ、ウマ等が挙げられる。免疫は、例えばヒト心筋
Ｃプロティンをそのまま、または完全フロインドアジュ
バント等量混合液として、動物の皮下、筋肉内または腹
腔内に、約５０１Ｊｇ／２００成／回を月１〜２回、２
〜４力月間投与することにより行われる。抗体産生細胞
の分離は、最終免疫から２〜４日後に免疫動物から採取
することにより行われる。

骨髄腫細胞としては、マウス、ラット、ヒト等由来のも
のが使用できる。ここで、抗体産生細胞と骨髄腫細胞と
は同種動物由来であるのが好ましい。

細胞融合は、例えばケーラーとミルスタインの方法［Ｋ
Ｏｈｌｅｒ、　Ｇ、　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、　Ｃ
，、Ｎａｔｕｒｅ２５６、４９５（１９７５））または
これに準する方法によって行われる。すなわち、ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地等の培地中で抗体産生細胞と骨髄腫細胞
とを混合することにより行われる。このとき、ポリエチ
レングリコール等の融合促進剤を添加するのが好ましい
。

細胞融合終了後、ＲＰＭ１１６４０培地等で適当に希釈
し、遠心分離し、沈渣をＨＡＴ培地等の選択培地に懸濁
し、これを培養することによりハイブリドーマを選択す
る。次いで、培養上清を用いて酵素抗体法により抗体産
生ハイブリドーマを検索し、限界希釈法等によりクロー
ニングを行い、本発明モノクローナル抗体を産生ずるハ
イブリドーマを得る。

＝　５　＝ 　− 本発明者らは、上記のようにしてヒト心筋Ｃプロティン
を特異的に認識するモノクローナル抗体を産生ずるハイ
ブリドーマを製造し、工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託した（　ＡＯＣ−１、微工研条寄第２４７３号（
ＦＥＲＭ　ＢＰ−２４７３））。本発明においては、例
えばこのハイブリドーマを使用して本発明モノクローナ
ル抗体を製造することが出来る。

かくして得られた抗体産生ハイブリドーマを利用して本
発明モノクローナル抗体を製造するには、該ハイブリド
ーマが本発明モノクローナル抗体産生能を有しているの
で、これを適当な培養液中または生体内で培養し、該培
養物から採取することによって行われる。生体内で培養
するには、該ハイブリドーマを骨髄腫細胞と同種の動物
の腹腔内に投与し、その腹水中に本発明モノクローナル
抗体を蓄積せしめ、該腹水から採取する。ここで、抗体
産生ハイブリドーマの投与に先立って、ブリスタン等の
鉱物油を投与するのが好ましい。

培養液または腹水からの本発明モノクローナル抗体の採
取は、ＩｇＧ精製に通常使用される硫安分画法、陰イオ
ン交換体またはプロティンＡカラムによるクロマトグラ
フィーによって実施される。

かくして得られる本発明モノクローナル抗体は、その免
疫グロブリンクラスがＩｇＧ、、にであり、ヒト心筋Ｃ
プロティンに特異的に反応するものである。

本発明モノクローナル抗体はヒト心筋Ｃプロティンに特
異的に反応するため、これを酵素、放射性同位元素、蛍
光物質等で標識すれば、心筋組織中のヒト心筋Ｃプロテ
ィンの状態や、循環血流中に逸脱してくるヒト心筋Ｃプ
ロティンの量を観察することができ、心疾患診断薬とし
て利用できる。

標識に用いられる酵素としては、ペルオキシダーゼ、ア
ルカリフォスファターゼ、β−ガ・ラクトシダーゼ等が
挙げられ、放射性同位元素としては、＋１１１ｎ、　　
９９ｍＴｃ　、　６？Ｇａ、　１８１１．１２５Ｉ、１
２８■等が挙げられ、蛍光物質としては、フルオレッセ
ンスイソチオシアネート等が挙げられる。これらの標識
物質による本発明モノクローナル抗体の標識は、常法に
従って行われる。

　− 本発明心疾患診断剤を用いて心疾患を診断するには、イ
ンビトロの方法として、本発明モノクローナル抗体標識
体を利用した種々の免疫測定法、例えば競合法やサンド
イツチ法によるエンザイムイムノアッセイ、ラジオイム
ノアッセイ、凝集反応、凝集阻止反応等により抗原を定
量または定性する方法が挙げられる。ここで、免疫測定
法の実施に際しては、ポリスチレンビーズ等の担体に抗
体を固定化した固相化抗体を利用し、免疫反応を該固相
化抗体上で行わせることもできる。また、インビボの方
法として、本発明モノクローナル抗体に前記放射性同位
元素を標識して、患者の外部よりシンチカメラ等で放射
線を測定することにより、心筋障害の範囲や程度を判定
することができる。

［作用及び発明の効果］ 細胞膜は、生体において物質の輸送に重要な役割を果た
しており、例えば抗体は細胞外へ分泌されることはあっ
ても、生細胞中へ単純輸送されることはない。もし細胞
膜が物質輸送の障壁とじて　− の役割を失った場合（例えば心筋障害部位における心筋
細胞膜の破綻等）、抗体のような高分子量の蛋白が心筋
細胞膜を自由に通過し、心筋細胞内への侵入が可能な状
態となる。従って、心筋障害患者に本発明の心疾患診断
剤を投与した場合、本発明のモノクローナル抗体が心筋
細胞膜を自由に通過して、心筋細胞内の構成蛋白である
ヒト心筋Ｃプロティンと結合することができる。ここで
、本発明モノクローナル抗体を放射性同位元素で標識し
ておくことにより、シンチスキャニングが可能となる。

すなわち、例えば＋１１１ｎで標識した抗ヒト心筋Ｃプ
ロティンモノクローナル抗体を人体に静脈より投与し、
時間の経過と共に外部からシンチカメラ等で放射線を計
測することにより、１１１１ｎ標識抗ヒト心筋Ｃプロテ
ィンモノクローナル抗体の体内分布を非侵襲的に観察す
ることができる。もし心筋に障害部位が存在する場合に
は、その障害の部位及び程度に応じた放射能の集積が見
られるので、これにより心筋障害の範囲や程度を判定す
ることができ、心筋障害を伴う心疾患の０ 診断に有用である。

また、心筋障害を伴う心疾患により心筋細胞組織が破壊
されると、心筋細胞膜に破綻が生じ、心筋細胞組織中の
構成蛋白である心筋Ｃプロティンが、循環血流中に逸脱
してくる。そこで、本発明の抗ヒト心筋Ｃプロティンモ
ノクローナル抗体を用いてイムノアッセイを行うことに
より、末梢血流中のヒト心筋Ｃプロティン量を測定し、
心筋障害を伴う心疾患の程度や予後を判定することが可
能であり、臨床上有用な診断的意義を与える。従って、
本発明の抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体は
、イムノアッセイ法等のインビトロ検査における診断薬
としても有用である。

［実施例］ 以下、実施例を挙げて更に詳細に説明するが、本発明は
これらに限定されるものではない。

実施例１ ハイブリドーマの　ｔｈＩ： ヒト心筋を材料とし、ｒＫ、　Ｍ、　Ｐｒ１ｎｃｅ、　
ＢｉｏｃｈｅｍＪ、、　１９１．５７１−５８０（１９
８０）Ｊ記載の方法に準じて粗ミオシンを精製し、更に
５ＤＳ−ＰＡＧＥにより目的とする心筋Ｃプロティンの
バンドを切り出し、ゲルより抽出して免疫原とした。

雌性ＢＡＬＢ／Ｃマウスを用い、完全フロインドアジュ
バント等量混合液２ＱＯｄ　（５０ｇ　）を、２週問お
きに皮下に４回免疫した。最終免疫３日後、肺臓を摘出
し、この牌細胞とミエローマ細胞（Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ
８）とをポリエチレングリコールを用いて融合した。

これをＨＡＴ培地に懸濁し、培養した。抗体産生株を、
ヒト心筋の凍結標本上で間接蛍光抗体法によりスクリー
ニングした。ヒト心筋Ｃプロティンに特異的な抗体産生
株を限界希釈法によりクローニングし、目的のハイブリ
ドーマ（ＡＯＣ−１，微工研条寄第２４７３号、　ＦＥ
ＲＭＢＰ−２４７３）を得た。

実施例２ モノクローナル几　のｒｌ： 実施例１で得られたハイブリドーマを、ブリスタン前処
置マウスの腹腔内に投与し、腹水から抗体を精製（７た
。最終的にヒト心筋Ｃプロティンに特異的なモノクロー
ナル抗体（ｒｇＧ、　、に）を取得１ した。ウェスタンブロッティングにより解析し、本抗体
はヒト心筋Ｃプロティンに特異的に反応することを確認
した。

実施例３ ヘマトキシリン・エオシン染色によりわずかに健常心筋
細胞の残存が確認されたヒト陳旧性心筋梗塞組織の切片
を、実施例２で得られた抗ヒト心筋Ｃプロティンモノク
ローナル抗体を用いた間接蛍光抗体法により蛍光顕微鏡
で観察した。その結果、ヒト心筋細胞にのみ陽性反応が
認められた。

実施例４ 健康な家兎（日本内色種、約２　、５ｋｇ）にベンドパ
ルビタール酸ナトリウムを３５ｍｇ／ｋｇ投与し、麻酔
した。左第三第四脇間より開胸し、左冠状動脈回旋枝を
血管縫合用針付き縫合糸にて結紮し、虚血性心筋障害部
位を有する家兎を人工的に作製し＝　１２− た。開胸２４時間後、実施例２で得た抗ヒト心筋Ｃプロ
ティンモノクローナル抗体］、Ｏｍｇを００２Ｍ燐酸緩
衝溶液（０，１５ＭのＮａＣＵを含む）　１ｍ１ｌに溶
解し、耳静脈より投与した。投与２時間後、ベンドパル
ビタール酸ナトリウムを大量に耳静脈より投与して死亡
せしめ、解剖して心臓を摘出した。虚血性心筋障害部分
を安全剃刀で切り出し、組織包埋剤（マイルズサイエン
ス社製、　Ｔｌ５ＳＵＥ−ＴＥＫ　Ｏ，Ｃ，Ｔ４５８３
）にて包埋し、ドライアイスを加えたアセトンに入れて
凍結させた。凍結切片作製装置（ライッ社製、クリオス
タット　１７２０ＤＩＧＩＴＡＬ）にて厚さ５ｔｆｍの
組織切片を作製し、冷アセトン（４℃）にて３０秒間固
定した。蛍光色素（フルオレラセンインチオシアネート
、　ＦＩＴＣ）標識抗マウスＩｇＧヤギ抗体を、０．０
１Ｍ燐酸緩衝溶液（０，１５ＭのＮａＣｆｆを含む）に
て希釈し、−切片当たり２００通で１５分間染色した。

大量の００１Ｍ燐酸緩衝溶液（０，１５ＭのＮａＣｆ１
を含む）で切片を洗浄後、５０％グリセリン−燐酸緩衝
溶液〔グリセリン：　０．０１Ｍ燐酸緩衝溶液（０，１
５ＭのＮａＣｌ２を含む）−１：１）で封入し、蛍光顕
微鏡に３ ＝　１４− て観察した。この結果から、ヘマトキシリン・エオシン
染色により確認される虚血性心筋障害部に一致して、蛍
光抗体染色により強い蛍光色が認められ、抗ヒト心筋Ｃ
プロティンモノクローナル抗体は、虚血性心筋障害部位
に特異的に集積することが確認された。

実施例５ た。濃縮液を透析チューブに移し、５ｐのＯ，０１Ｍ燐
酸緩衝溶液（０，１５ＭのＮａＣ１１を含む）で透析し
た。

３．６ｍｇ／ｍｌｌの抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクロ
ーナル抗体−ＤＴＰＡ溶液を２ｍ１ｌ得た。このカップ
リング反応における収率は、約９０％であった。

実施例６ １２ｍｍＸ　７５ｍｍのシリコンコーティング試験管に
、３ｍｍφＸ６ｍｍのテフロン製撹拌子を入れ、０．０
２Ｍ燐酸緩衝溶液（０，１５ＭのＮａＣ１１を含む）に
溶解した抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体（
８，０４ｍｇ／ｎｉｌ）１ｍ１１と０　、１Ｍ　ＮａＨ
ＣＯａ　２　、５ｍＭを混合した。

これに、サイクリックＤＴＰＡアンハイドライド（Ｃ＋
　４Ｈ１９Ｎａｍｓ）をジメチルスルホキシドにて溶解
したものを加えた。室温で１時間撹拌した後、溶液を吸
引濃縮装置（ザルトリウス社製、コロジオンバッグ５Ｍ
１３２０）に移し、バッグの外液を００１Ｍ燐酸緩衝溶
液（０，１５ＭのＮａＣ１１を含む）とし、濃縮しポリ
スチレンマイクロタイタープレート（コースタ−社製、
　＃３５９０）に、ヒト心筋Ｃプロティンを０．１Ｍグ
リシン緩衝溶液（５ｍＭ　ＥＤＴＡ、　ｐＨ８，５）に
溶解した溶液（１ｇ／１００ＩＪＩｌ）を１ウエル当た
り１００通添加し、４℃にて一晩静置した。ヒト心筋Ｃ
プロティン溶液を吸引除去後、０．０１Ｍ燐酸緩衝溶液
（０，０５％Ｔｗｅｅｎ８０と０．１５ＭのＮａＣ（ｌ
を含む）で洗浄した。各ウェルに免疫測定用ブロッキン
グ試薬（ブロックＡ）を２００成ずつ添加し、室温にて
１時間静置した。上記と同じ燐酸緩衝溶液で洗浄後、抗
ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体溶液（１００
，１０，１，０，１，０，０１及び０．００１７ｚｇ／
Ｔｆｆｌ）または５ 抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体−ＤＴＰＡ
溶液（１００，１０，１，０，１，０，０１及び０．Ｏ
Ｏ１７ｚｇ／ｍ１１）を１ウエル当たり１００成ずつ添
加し、室温にて１時間静置し、ヒト心筋Ｃプロティンと
、抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体または抗
ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体−ＤＴＰＡと
を反応させた。上記と同じ燐酸緩衝溶液で洗浄後、第二
抗体（ペルオキシダーゼ結合抗マウスＩｇＧヤギ抗体）
を１ウエル当たり１００ｄずつ添加し、室温にて１時間
静置した。再度同じ燐酸緩衝溶液で洗浄後、０．０５Ｍ
燐酸ナトリウム、０．０２５Ｍクエン酸ナトリウム及び
０．０３％過酸化水素を含む溶液で３■／ｍｉｌとなる
ようにオルトフェニレンジアミンジハイドロクロライド
を溶解した発色液を、１ウエル当たり２００成ずつ添加
し、室温で３０分間反応させた。４Ｎ硫酸を１ウエル当
たり５０通ずつ添加し、反応を停止させた。各ウェルの
４９２ｎｍにおける吸光度を測定し、抗ヒト心筋Ｃプロ
ティンモノクローナル抗体と抗ヒト心筋Ｃプロティンモ
ノクローナル抗体−ＤＴＰＡの抗体活性を比較し、表１
に示した。

１６ 表　　１ この結果から、各ヒト心筋Ｃプロティン濃度における両
者の吸光度にはほとんど差がなく、ＤＴＰ八カへプリン
グによる活性への影響は認められなかった。

実施例７ １１１１ｎによる　ヒト　Ｃプロティンモノクローナル
几　−ＤＴＰＡの、ｉｌ： １０ｍ０ガラスバイアルに、実施例５で調製した抗ヒト
心筋Ｃプロティンモノクロ−カル抗体−ＤＴＰＡ溶液（
３，６ｍｇ／ｍｌ）　１３６ｕｆｌ、　０．０１Ｍ燐酸
緩衝液（１０％マルトースと０１５ＭのＮａＣｌ２を含
む）　８６１ｄ、０．２Ｍクエン酸緩衝液１０００ＪＪ
ｆｌ及び放射性塩化インジウム１１１ｒ”ＩｎＣ（Ｊａ
）２０ｍ　（５２ＭＢｑ）を加え、よく攪拌して２時間
静置した。得られた＋１１１０−抗ヒト心筋Ｃプロティ
ンモノクローナル抗体−ＤＴＰＡの純度試験を薄層クロ
マトグラフィーで試験した結果、その標識率は１００％
であった。

実施例８ ツクローナル抗体−ＤＴＰＡは、虚血性心筋障害部へ集
積することを確認した。撮像後、虚血性心筋障害家兎を
解剖し、諸臓器（血液、心筋障害部、心筋正常部、肝臓
、肺臓、腎臓）を摘出し、各々の放射能をガンマ−カウ
ンター（パラカード社製。

卓上型ミナキシーガンマーカウンター　オートガンマ−
５５３０）にて測定した。各臓器の放射能分布を表２に
示す。なお、［％１）ｏｓｅ／ｇＪは、各臓器１ｇ当た
りの全投与放射能量に対する分布率である。

表　　２ Ｕ： 実施例４と同様の開胸手術にて作製した虚血性心筋障害
家兎１羽当たりｌ　ｌ　ｌ　Ｉｎ−抗ヒト心筋Ｃプロテ
ィンモノクローナル抗体−ＤＴＰＡ　Ｏ，５ｍＯ，（１
３ＭＢｑ。

０．１２５ｍｇ）を耳静脈より投与し、４８時間後にガ
ンマ−カメラ（アロカ社製、オメガ５００）にて前面像
を撮像した。＋１１１０−抗ヒト心筋Ｃプロテインモこ
の結果から　１１１１０−抗ヒト心筋Ｃプロティンモノ
クローナル抗体−ＤＴＰＡは、心筋正常部に比較　１９
− して虚血性心筋障害部への集積性が大きいことを確認し
た。

実施例９ １０Ｔｒｆｌガラスバイアルに、実施例５で調製した抗
ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体−ＤＴＰＡ溶
液（３，１ｍｇ／Ｔｎｆｌ）　２００７ｚＱ、０．１Ｍ
燐酸緩衝液（０，１５ＭのＮａ（４を含む）　８００Ｊ
Ｊｆｌ、塩化第一錫溶液（２ｍｇ　／ｍＱ。

０、ＩＮ塩酸溶液）　５０７ｚｌ）及び放射性テクネチ
ウム９９ｍ（９９″′Ｔｃ　）５００ｍ　（３７０ＭＢ
ｑ）を加え、よく攪拌して１時間静置後、２０％Ｃａ−
ＥＤＴＡ溶液５０通を加えた。

００１Ｍ燐酸緩衝液にて平衡化したセファデックスＧ−
２５Ｍカラムを用いて精製を行ない、ファーストピーク
を０．２２７ｍのフィルターでろ過した。得られた９　
９ｍＴｃ−抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体
−ＤＴＰＡの純度試験を薄層クロマトグラフィーで試験
した結果、その標識率は９０％であった。

実施例１０ 虚血性心　　　家　における９９ｍＴｃ−ヒト心　Ｃ０ プロティンモノクローナル　　−ＤＴＰＡの　内部： 実施例４と同様の開胸手術にて作製した虚血性心筋障害
家兎１羽当たり９９ｍ７ｃ−抗ヒト心筋Ｃプロティンモ
ノクローナル抗体−ＤＴＰＡ　１誦（３７ＭＢｑ）を耳
静脈より投与し、２時間３０分後にガンマ−カメラ（ア
ロカ社製、オメガ５００）にて前面像を撮像した。９９
ｍＴｃ−抗ヒト心筋Ｃプロティンモノクローナル抗体−
ＤＴＰＡは、虚血性心筋障害部へ集積することを確認し
た。撮像後、実施例８と同様にして各臓器の放射能分布
を測定した結果を表３に示す。

（以下余白） １− ２２− 表 ３ この結果から、９“Ｔｃ−抗ヒト心筋Ｃプロティンモノ
クローナル抗体−ＤＴＰＡは、心筋正常部に比較して虚
血性心筋障害部への集積性が大きいことが確認された。

以上 ３

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト心筋Ｃプロテインを特異的に認識する抗ヒト
   心筋Ｃプロテインモノクローナル抗体。
2. （２）免疫グロブリンクラスが、ＩｇＧ＿１，ｋである
   請求項１記載の抗ヒト心筋Ｃプロテインモノクローナル
   抗体。
3. （３）請求項１記載の抗ヒト心筋Ｃプロテインモノクロ
   ーナル抗体を産生するハイブリドーマ。
4. （４）請求項２記載のハイブリドーマを動物腹腔内また
   は培養液中にて増殖せしめ、該腹水または培養液より抗
   ヒト心筋Ｃプロテインモノクローナル抗体を採取するこ
   とを特徴とする請求項１記載の抗ヒト心筋Ｃプロテイン
   モノクローナル抗体の製造方法。
5. （５）酵素、放射性同位元素または蛍光物質で標識され
   た抗ヒト心筋Ｃプロテインモノクローナル抗体を含有す
   る心疾患診断剤。
6. （６）放射性同位元素が、＾１＾１＾１Ｉｎ、＾９＾９
   ＾ｍＴｃ、＾６＾７Ｇａ、＾１＾３＾１Ｉ、＾１＾２＾
   ５Ｉまたは＾１＾２＾３Ｉである請求項５記載の心疾患
   診断剤。