JPH0249162A - がんの血清測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｌ１上二旦ユ１１ 本発明は、ヒト型モノクローナル抗体が認識する抗原、
特にヒト以外の動物由来の抗原を用いることを特徴とす
る血清診断法に関するものである。

従来の技術及び発明が解決しようとする課題近年、がん
患者由来の抗体産生細胞と骨髄腫細胞等の融合パートナ
−とを融合させて得られるヒト−ヒトハイブリドーマを
培養し、がん細胞と反応するヒト型モノクロ−プル抗体
を得る方法が報告されている［プロシーディング・オン
・ナショナル・アカデミ−・オン・ナイエンシズ・オン
・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オン・アメリカ（Ｐｒ
ｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、　）、
　７７、６８４Ｈ１９８（３）Ｓブリティッシュ・ジャ
ーナル・オン・キャンサー（Ｂｒｉｔ、　Ｊ、　Ｃａｎ
ｃｅｒ）、　４３．１０５及び６９６（１９８１）　；
ザ・ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）、　ｉ　１１（１９Ｂ
２）　；　Ｔｌウロビアン・ジャー犬ル・オン・キャン
ザー（ＥＩＪｒ、　ＪＣａｎｃｅｒ）、す、　３４７（
１９８３）　：　’ｆ−ジャーナル・オン・エクスベリ
メンタル・メデイスン（Ｊ、　Ｅｘｐ。

ｌｅｄ、）、　１５９．５３７（１９８４）　；キャン
ナー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）、　４５．
２６３及び３９５Ｈ１９８５）　：ザ・ジャーナ／Ｌ、
−オン争イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）１
３７□１０ｇ３（１９８６）Ｊ　。

しかしながら、これらモノクローナル抗体は、がん細胞
に特異的でなく正常細胞とも反応するものがほとんどで
ある。また、これら抗体の認識する抗原については、ハ
イブリドーマ法により得られたヒト型モノクローナル抗
体の認識するガングリオシドＧＭ３またはＧＤ３［ブＯ
シーディング・オン・ナショナル・アカデミ−・オン・
サイエンシズ・オン・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オ
ン拳アメリカ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、
Ｕ、Ｓ、Ａ、）、　　８４゜２４１６（１９８７）］以
外には、はとんど明らかにされていないのが現状である
。従って、ヒト型Ｅツクロー犬ル抗体が認識する抗原を
用いた血清診断法に関する報告はないと言っても過言で
はない。更に、ヒト型モノクローナル抗体が認識する抗
原であって、ヒト以外の動物由来の抗原を用いた血清診
断法についての報告はない。

従来、がんの血清診断法等の検査に用いられてきた腫瘍
マーカー（抗原）としては、α−フェトプロティン、カ
ルジノエンブリオニック・アンティジエン等の胎児性タ
ンパク質、血液型物質、ホルモン、アイソエンザイム等
のヒト由来物質が挙げられる。これらの腫瘍マーカーに
よる検査法は、がんのスクリーニングのみならず、がん
の治療効果又は術侵のモニタリングのためにも、重要な
ものとなりつつある。この方法はまＩＣ，ｆｔ２便であ
ること、数多くのサンプルを処理できること等の利点が
ある。

発明が解決しようとする課題 しかしながら、以りの従来公知の腫瘍マーカーのみでは
、がんの検出に未だ十分とは言えず、また、これらの抗
原はヒト由来の物質であるため大量に入手することが困
難であり、更に、健常人にも存在する等の不利な点があ
った。更に、血液中の腫瘍マーカー（抗原）量を測定す
る従来の方法では、がんの早期には抗原ωが少ないため
に診断が国難であった。

本発明は、このような従来技術における課題を解決しよ
うと１ノで行われたものである。

課題を解決するための手段 本発明者らは、がんの血清診断法に有効な、ヒト以外の
動物由来の抗原物質の検索を行った結果、がん患者由来
のヒト−ヒトハイブリドーマ、特にＨＢ４Ｃ５が産生す
るヒト型モノクローナル抗体の認識する動物由来抗原が
この目的に適合することを見いだし、これに基づいて本
発明を完成するに至った。

がんと関連する上記抗原を用いた本発明の血清診断法の
一つの特徴は、従来の血液中の抗原量を測定するのでは
なく、その抗原に対する抗体量を測定することである。

即ち、血液中に測定不可能な微量抗原しか存在しない場
合であっても、その抗体量は生体中で増幅されているた
めに、その抗体量を測定することは可能で、これによっ
て、がんの早期診断ができるわけである。

以下に本発明について詳細に説明する。

（１）ヒトコリモノクローナル抗体産生細胞の作製肺が
ん患者のリンパ節、末梢血等から得たリンパ球２Ｘ　１
０７個と、ヒト−ヒトハイブリドーマ作製用親細胞株Ｎ
　Ａ　Ｔ　−３０［イン・ビトロ・セルラー・アンド・
ディベロップメンタル・バイオロジー（Ｉｎ　Ｖｉｔｒ
ｏ　Ｃｅ１１．Ｄｅｖｅｌｏｐ、Ｂｉｏｌ、）、　２１
．　５９３（１９８５）　］　］又ハＩ−ｔｏ−３２３
［セ／Ｌ、−バイオロジー・インターナショナル・レポ
ーツ（Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ、Ｉｎｔｅｒｎ。

Ｒｃｐｏｒｔｓ）、　１０．γγ（１９８６）　］とを
通常用いられているポリエチレングリコール（分子ｍ　
４０００又は１５０（３）法で融合し、ヒト−ヒトバイ
ブリドーマを作製した。これらハイブリドーマの中から
、肺がん細胞株ＰＣ−８と反応し、正常細胞株と反応し
ないヒト型モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドー
マを選択した。

このようなヒト型モノクローナル抗体産生ハイブリドー
マの一例として、Ｈ８４Ｃ５［イン・ビトロ争セルラー
・アンド・ディベロップメンタルφバイ第１］ジー（Ｉ
ｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅ１１．Ｄｅｖｅｌｏｐ、Ｂｉｏｌ
、）、　２１゜５９３（１９８５）　Ｊがあげられる。

このヒト−ヒトハイブリドーマＨＢ４Ｃ５は、」業技術
院微生物工業技術研究所に昭和６３年５月１２日付で国
ＷＡ寄託１ノである（微工研条寄第１８７９号）。

（２）抗原物質の検索 ヒト−ヒトバイブリドーマｌｌＢ４Ｃ３が産生するヒト
４′！モノクローナル抗体１１ｇＭ＜免疫グｒコブリン
Ｍ）クラス」が認識し得る抗原物質をブタ、ウシ、マウ
ス等の動物について検索した結果、これらの動物の膵臓
中に多量に存在することを見いだ（）た。な１１１３、
抗原物質検索の際のヒト型モノクローナル抗体との反応
性については、以下の方法を用いて検出した。

測定法： 膵臓抽出液、各精製ステップのナンプルをまず５ＤＳ（
ドデシル硫酸ナトリウム）ポリアクリルアミドゲル電気
泳動にかける（［ネイブーヤー（Ｎａｔｕｒｅ）、　２
２７．６８０（１９７（３）　］参照）。ゲル濃度が４
−２０％の°グラジェントゲルを用いる。電気泳動侵、
ウェスタン・プロット法により泳動で分かれたタンパク
質をニトロレルロース膜土に移ず。

次に、移されたタンパク質とモノクローナル抗体との反
応性を以下に示ｙ免疫染色法により調べる。

なＪ３、以下の処理はすべて室温で行う。まず、非特異
的吸着を抑えるためＰＢＳ　（リン酸緩衝化生理食塩水
）１０．０５％トウイーン２０（Ｔｗｅｅｎ　２（３）
で１時開上記ニトロヒル臼−ス膜を１０ツキング処理す
る。これにモノクローナル抗体を添加し、１時間反応さ
せる。−ヒ記ＰＢＳ／トウイーン２０で３０分間洗浄後
、ベルオギシダーゼ標識の抗ヒト［ＱＭを添加し、１時
間反応させる。ｌ）　Ｂ　Ｓ　／　ｔ−ウィーン２０で
同様に洗浄後、基質溶液ｒ）ＡＩ−３（３，３−ジアミ
ノベンジジン、同温酸塩）で１５分間反応ざぜ、抗原物
質の検出を行う。七ツク［１−ナル抗体が結合した抗原
物質の部位は茶色に染色される。

この検出法を用い抗原物質の検索を行った。

この結果、本発明のヒト型モノクロ−犬ル抗体によって
認識される抗原物質の一例として、各種カルボキシペプ
チダーゼが確認された。

これらカルボキシペプチダーゼはブタ、ｆクシ、マウス
等の膵臓から従来の方法［メソッズ・インーエンザイモ
ロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、）、　１９
，４６０（１９７（３）　］で、あるいは膵液からも得
ることがぐきる［アナリチカル・バイオケミストリー（
＾ｎａｌ。

Ｂｉｏｃｈｃｍ、　）、士、　２９４　（１９８８）、
ｌ。また、以Ｆの実施例１に示ず方法によっても精製す
ることが可能である。

（３）血清診断法 ヒ記の方法で精製した抗原及びその池水発明のヒト型ｔ
ツクローナル抗体により認識される抗原を炭酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ９，５）で１０埒／ｄの濃度に調整する
。これを９６穴イムノプレートの４８ウエルに１００ρ
ずつ分注し、３７℃で１時間処理し、該抗原をプレート
にコートする。残りのウェルは、コントロールとして該
抗原非添加緩衝液を用いて同様の処理を行う。ＰＢＳで
プレートを２回洗浄した後、非特異的吸着を抑えるため
、１０％ＦＣ３（牛胎児血清）／ＰＢＳでブロッキング
を１時間、３７℃で行う。その後、洗浄することなく、
２００倍に希釈した血清サンプルを抗原をコートしたウ
ェルとコントロール「シェルとに５０成ずつ添加し、３
７℃で１時間反応を行う。該抗原と反応する抗体が血清
中に存在する場合には、抗体が該抗原と結合しウェルに
固定される。ＰＢＳ／トウイーン２０でプレートを３回
洗浄した後、固定された抗体量を通常用いられている酵
素抗体法により測定する。

すなわち、ペルオキシダーゼ標識の抗ヒ１〜ＩＱＧ（免
疫グロブリンＧ）又はＩＱＭを１００μずつ添加し、３
７℃で３０分間反応を行う。ＰＢＳ／トウイーン２０で
３回洗浄後、基質溶液ＡＢＴＳ［２，２’アジノービス
（３−エチルベンシブアゾリン−６−スルホン酸）ニア
ンモニウム塩］を１００μずつ添加し、室温で１５分間
発色反応を行う。固定された抗体量が多い場合、すなわ
ち血清中に該抗原と反応する抗体が多量に含まれている
場合には、強く発色する。１．５％シュウ酸溶液１００
ｄを添、加し、反応を停止した後４１５　ｒ＋＋ｎでの
吸光度を測定する。それぞれの血清サンプルについての
吸光度は、各血清サンプルの抗原をコートしたウェルの
吸光度から、コントロールウェルの吸光度を差し引いて
求める。

このような方法を用いて、健常人あるいは良性疾患患者
由来の血清サンプルを用いた場合に得られる吸光度と、
がん患者由来の血清サンプルを用いた場合に得られる吸
光度とを比較することにより、がんの診断の可能性を検
討した。その結果、肺がん患者血清の場合には、健常人
あるいは肺の良性疾患患者の血清の場合に比べ有意に高
い値が１ｑられ、明らかな差異が認められた。肺がん患
者以外にも、卵巣がん、喉頭がん、子宮がん及び肝臓が
ん患者等の血清が高い吸光度を示し、健常人等との間に
有意な差異が認められた。

以下本発明の実施例を示す。

実施例　１ まず、ブタの膵臓のアセトン・パウダーを従来の方法［
ザ・ジャーナル・オン・バイオロジカル・ケミストリー
（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｃｍ、）、　２２３，４５７（１
９５６）］により得る。このパウダーの代わりにトリプ
シンｉ：２５０（デイフコ社）を出発物質として用いる
こともできる。これを八−緩・衝液［１０ｍＨＴｒ＋ｓ
塩酸緩衝液（１）１１７．４＞　］に懸濁し、４℃にお
いて１００００ｘｇで２０分間遠心することにより上清
−・■を得る。沈澱部分は再び八−緩衝液に懸濁し、４
℃で１０分間攪拌した後、遠心により上清−■を得る。

再度、同様に懸濁・遠心を繰り返し一ト清−■を得る。

以上の上清−■、−■及び−■を混合し、タンパク質濃
度を八−緩衝液で１０Ｒ９／　ｄに調整する。

これを、すでにＡ−緩衝液で平衡化したＨｏｎｏＱカラ
ム（ファルマシア社）に１ｄ樹脂当り５■タンパク質の
割合で供し、カラム和の５倍の八−緩衝液で洗浄する。

更に、１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む八−緩衝液で洗
浄後、１５０−３５０ｍＭ塩化ナトリウムの直線的グラ
ジェントにより溶出する。その結果、本発明のモノクロ
ーナル抗体Ｉ　Ｂ　４　Ｃ５と反応する抗原−■及び■
が、それぞれ２６０ｍＨ，及び３００ｍＭ塩化ナトリウ
ムの濃度で溶出された。

これら抗原−■及び−■を前記の５ＤＳ−電気泳動した
ところ、それぞれの抗原は単一のバンドを示し、その分
子量は約４２０００と約４００００であった。すなわち
、以上の方法で精製された抗原は、高純度に精製された
と考えられる。この抗原は分子量的にブタのトリプシン
（分子ｆｉ　２３００（３）とは異なることから、膵臓
中に多聞に含まれているトリプシンではない。

なお、ブタ膵臓由来抗原−１及び−■の分子量は、レム
リ（Ｌａｅｍｍｌ　ｉ　）の方法［ネイチャー（Ｎａｔ
ｕｒｅ）、　２２７．６８０（１９７（３）　］の方、
法に従い、以下の５ＤＳｆｆｆ気泳動用マーカー（Ｂｉ
ｏ−Ｒａ１社）を用いて測定した。結果を以下に示す。

リゾチ ム トリプシン インヒビター カルボニツク 分子量　泳動距離　　Ｒｒ １４．４Ｋ　５０．５＋ｕ１５１．０　０．９９４ｇ、
　５　　　　０．９５ ２１．５ ３１．０ ４３．５ アンヒドラ−ぜ 卵白アルブミン 牛面清アルブミン ホスホリラーゼＢ 抗原−丁 抗原−■ ４５．０ ９２．５ ４２に ４０に ３７．５ ３３、Ｏ ２５，５ ３９，３ ４０，０ ０，８５ ０，６５ ０，５０ ０，７７１ ０，７８４ また、これらの抗原はトリプシン処理することにより前
記モノクローナル抗体との反応性が著しく低ドすること
からタンパク質から成る物質であると考えられる。

実施例　２ 上記実施例１で得られたブタ膵臓由来の抗原物質を同定
する目的で、ウシのカルボキシペプチダーゼ△（ＣＰａ
ｓｅＡ、シグマ社Ｎｏ、　Ｃ−０２６１ＴｙＤｅＩ　。

ウシ膵臓由来）を用いて以下のような比較試験を実施し
た。

■、活性による比較 活性測定：アナリブカル・バイオケミストリー（Ａｎａ
ｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、）　１７１．２９４（１９８８）
記載の方法に従い、ヒブリルーし一フェニルアラニンを
用い、その加水分解活性を、２５４　ｎｍの吸収を測定
することにより行った。光路長は１　ｃｔｒｒ、反応時
間は１分で測定した。

ＣＰａ５ｅ　Ａ活性の比較 この活性測定によって、ブタ由来抗原は市販のウシＣＰ
ａＳｅ　Ａと同様のＣＰａ５ｅ　Ａの活性を有すること
が明らかになった。

■、免疫学的比較 ブタ由来抗原−丁及び−■に対するウサギの抗血清を作
製し、それらのブタ由来抗原及びＣＰａ５ｅＡ及びカル
ボキシペプチダーゼＢ　（ＣＰａ５ｅ　Ｂ　）に対する
反応性を前記血清診断法で説明した酵素抗体法により測
定した。

ウサギ抗血清の反応性 ウシＣＰａ５ｅ ブタＣＰａ５ｃ ０．３７８ ０．０２７ ０．４８４ ０．０１５ シＣＰａ５ｅΔ ０．０５（１，（３） 上記の表から明らかなように、ブタ由来抗原■に対する
ウサギ抗血清は、抗原−■はもちろんのこと抗原−■及
びウシＣＰａ５ｅ△と反応することから、これらの物質
は互いに非常に類似したものと考えられる。抗原−■に
対する抗血清についても同様のことがいえる。また、ブ
タｃｐａｓｅ　Ｂとは反応しないことから、この抗血清
の特異性は高いと考えられる。なお、ブタＣＰａ５ｅ　
Ｂは、市販品（シグマ社Ｎ０１Ｃ−７０１１Ｔｙｐｅ　
ｒ、ブタ膵臓）を使用した。

■、アミノ酸配列による比較 ブタ由来抗原−■のＮ−末端付近のアミノ酸配列を決定
したところ、第３残基目のアラニン以下、スレオニン、
チロシン、ヒスチジン、スレオニン、ロイシン、グルタ
ミン酸、グルタミン酸、イソロイシン、チロシンの順で
あった。これは、前記ウシ由来のＣＰａ５ｅ　Ａにおけ
る第９残基目の位置のアスパラギン酸がグルタミン酸に
置き換わっているだけで、両者のアミノ酸配列はほとん
ど差異がないことを示唆していた。

更に、実施例４の第３表に示したように、ブタ由来抗原
−■、ウシＣＰａ５ｅ△及びマウスｃｐａｓｅ　Ａをそ
れぞれ抗原物質として用いた血清診断法に１１１３いて
、各種血清サンプルに対する反応パターンが互いに極め
て類似していることが分かった。

以上の事実より、実施例１で得られたブタ由来抗原−■
及び−■はカルボキシペプチダーゼ八であると同定した
。

実施例　３ 上記ブタ由来抗原＝ＩＩ（カルボキシペプチダーゼＡ）
を用いて、これと反応する肺がん患晋血清中のＩａＧ又
はＩｏＭタイプの抗体量を、上述の血清診断法に従って
、４１５　ｎｍにおける吸光度の測定により求めたく第
１表及び第２表）。

その結果、第１表に示すとおり、健常人についての吸光
度ＯＤ　　　は、零付近にあった。そこで、吸光度ＯＤ
　　　が０．１を超えるものを陽性と判定すると、第２
表に示した６人の肺がん患者のうち、ＩｇＭでは、６例
中２例が陽性であり、ＩｑＧにおいては、６例中４例が
陽性であった。すなわち、肺がん患者の総合的な陽性率
は、６例中５例と高い値を示した。

なお、以上の結果から、以侵の実施例については陽性率
の高いＩｇＧについてのみ測定結果を示すが、これはＩ
ｇＭが不要という意味ではない。

第１表　ブタ由来力ルポキシペブヂダーゼＡを用いた健
常人の血清診断 血　　清 １０Ｍ −０，０８４ −０，０６５ 一〇、０８８ ０．１６９ −０．０６１ ０．０７２ −ｏ、ｏｏｉ −０，０１０ ０，１２８ ｇＧ Ｏ，０７３ ０，０４６ ０，１５６ −０，０１０ ０，０２２ ０，０３０ ０，０３５ ０，０３０ ０，０２６ 第２表　ブタ由来カルボキシペプチダーゼへを用いた肺
がん患者の血清診断 血　　清　　　　　　　１ｑＭ　　　　　　　Ｉ　　ｇ
Ｇａ　　　　　　　　　　Ｏ，７７００，１８４ｂ　　
　　　　　　　　Ｏ，１２２０，０８３ｃ　　　　　　
　　　−０，０１８０，５３９ｄ　　　　　　　　−０
，００４０，２２５ｅ　　　　　　　　　−０，０３７
０，４２Ｏｒ　　　　　　　　　　Ｏ，０１００，０３
３にＩＩ　Ｂ　４　Ｃ５の産生するヒト型モノクローナ
ル抗体（ＨｏＡｂ）との反応量を、血清診断法に従って
吸光度（ＯＤ　　　）により求めた。第３表に示した結
果から明らかなように、動物の種類により多少の差異は
認められたが、本発明のヒト型モノクローナル抗体が認
識する抗原、特に、カルボキシペプチダーゼへ及びＢ等
のカルボキシペプチダーゼを用いる血清診断法により、
がんの検出を十分行い得ることが明らかとなった。

実施例　４ 前記ブタ由来ＣＰａ５ｅ　Ａ　（抗原−■）　ウシｃｐ
ａｓｅ　Ａ及びブタ由来抗原と同様の方法で精製したマ
ウスＣＰａ５ｅ　Ａ並びに前記ブタＣＰａ５ｅ　３を用
いて、これらと反応する健常人、肺がん患者及び卵巣が
ん患者の血清中のＩＱＧタイプの抗体量並び第３表　ブ
タ、ウシ及びマウス由来のカルボキシペプチダーゼＡ並
びにブタ力ルボキシ ベＩブーダーぜＢを用いた血清診断 面 清 ブ　タ　ブ　タ　ウシ　マウス （ＣＰａｓｅＡ）（ＣＰａｓｃＢ）（ＣＰａｓｃＡ）（
ＣＰａｓａＡ）１０％　　ＦＣ３／ＰＢＳ　　　　Ｏ，
０４１０，０１７０，０５５０，０１７１０埒／ｄ　　
　ＨＢ４Ｃ５　１．１９６　０．８５４　１．４２８　
０．８７６山来ＨｏＡｂ 健　　常　　人、　１ ０．１１６　　０．０１７　０．１１３　０．００７０
．０５１　　０．０００　０．１２０　０．００３０．
０９１　　０．００５　　０゜１２５　０．００８肺が
ん患者、　１　　０．３９３　０．１１１　０．４２８
　０．２１１２　　０．８６６　０．３５６　０．８０
２　０．５６５卵巣がん患者、　１　０．８２９　０．
０２９　０．６６３　０．７２９２　０．４９３　０．
２２０　０．５６４　０．４０２３　０．４０４　０．
１９９　０．！１５３　０．３０３実施例　５ 前記ウシ由来のＣＰａ５ｃ　Ａを用いて、肺がんを含め
た種々のかん患者、良性疾患患者及び健常人の血清診断
を行った結果（第１図）、健常人及び良性疾患患者につ
いては低い反応性を示した。一方、がん患者については
、肺がん、卵巣がん、喉頭がん、子宮がん及び肝臓がん
等で高い反応性を示す症例が多々認められ、本発明の血
清診断法がこれらのがんの検出に大いに有効であること
が示された。

第１図に示した種々のがん患者についての血清診断法に
よる結果から陽性率を求めたものを第４表に示す。

なお、ここでは、常法に従って、健常人の反応性（ＯＤ
　　　）の平均値に、標準偏差の２倍を加算した値０．
２８を超えるものを陽性と判定し、これから陽性率を算
出した。

この結果、肺がん、卵巣がん、喉頭がん、子宮がん及び
肝臓がんが５０％以上の陽性率を示した。

一方、膵臓がん、健常人及び良性疾患については低い陽
性率しか示さなかった。

従って、ＨＢ４Ｃ５が産生するヒト型モノクローナル抗
体が認識する、ヒト以外の動物由来の抗原、特にカルボ
キシペプチダーゼＡを用いた血清診断法は、肺がん、卵
巣がん、喉頭がん、子宮がん及び肝臓がん等の検出に有
効な手段であるといえる。

第 血 表 清 が が 嚢が 臓が 種々の疾患についての陽性率 症　例　陽性例　陽性率（％） 肺良竹疾患 卵巣良性疾患 肝臓良性疾患 胆嚢良性疾患 膵臓良性疾患 血管良性疾患

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のウシ由来力ルポキシベブチダーぜＡ
を用いたかん患者、健常人及び良性疾患患者の血清診断
の結果を示、ずグラフであり、横軸は反応性（ＯＤ　　
　＞を示し、縦軸は病名を表ねす番号を示ず。 第１図 娠九崖　（ＯＤＡ１５）

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト型モノクローナル抗体により認識される抗原
   であって、ヒト以外の動物由来の抗原を用いた血清診断
   法。
2. （２）該ヒト型モノクローナル抗体が、ヒト−ヒトハイ
   ブリドーマＨＢ４Ｃ５により産生される抗体である請求
   項１記載の血清診断法。
3. （３）該抗原がカルボキシペプチダーゼである請求項１
   又は２記載の血清診断法。
4. （４）該カルボキシペプチダーゼがカルボキシペプチダ
   ーゼＡである請求項３記載の血清診断法。
5. （５）該カルボキシペプチダーゼがカルボキシペプチダ
   ーゼＢである請求項３記載の血清診断法。
6. （６）該動物がブタ、ウシ、マウスである請求項１ない
   し５のいずれかに記載の血清診断法。
7. （７）該抗原と結合する血液中の抗体量を測定すること
   を特徴とする請求項１ないし６のいずれかに記載の血清
   診断法。
8. （８）酵素標識抗体を使用することを特徴とする請求項
   １ないし７のいずれかに記載の血清診断法。