JP2001095584A - 癌細胞特異的ｈｌａ−ｆ抗原、およびそれを用いた癌の診断方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】癌細胞が特異的かつ共通的に産生する新規抗原
物質を特定し、またこの新規抗原物質に対して産生され
る抗体を体液中に検出することによって、臓器や発癌の
原因の違いに関わらず癌細胞の存在を調べる方法を提供
する。 【解決手段】ＨＬＡ−Ｆ遺伝子がコードするタンパク質
の少なくとも一部を含有する癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗
原に対する体液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を検出することに
より癌細胞の存在を検出する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は癌細胞特異的ＨＬＡ
−Ｆ抗原、及びそれを用いた癌の診断方法に関し、詳し
くは癌細胞が特異的かつ共通的に産生する新規なＨＬＡ
−Ｆ抗原または遺伝子組み換えによって得られる新規な
ＨＬＡ−Ｆ抗原。及びこれら癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗
原を用いて免疫反応の結果産生された抗ＨＬＡ−Ｆ抗体
の検出を行うことにより、癌細胞の存在を調べる癌の診
断方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】血清等の生体試料を用いたヒトの癌の診
断方法として、腫瘍マーカーを測定する方法が開発され
ている。腫瘍マーカーとしては、例えば肝癌のマーカー
であるアルファーフェトプロテイン（ＡＦＰ）、大腸癌
のマーカーである癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺癌の
マーカーである前立腺特異抗原（ＰＳＡ）等がある。腫
瘍マーカーに対する高感度の測定方法としては、腫瘍マ
ーカーである物質に対する異種モノクローナル抗体を用
いた放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩ
Ａ）、蛍光抗体法（ＦＩＡ）等が開発されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来の腫瘍マーカー
は、ひとつの臓器の癌の診断を主眼とするものである
が、適当なマーカーの存在しない臓器の癌も存在するた
め、ひろく癌一般の診断に役立つものではない。また従
来の腫瘍マーカーは厳密に癌に特異的な物質ではなく、
正常生体でもある程度産生されている物質であるため、
腫瘍マーカーの産生が微量な初期癌の判定が困難であ
る。さらにこれらの物質は、癌の宿主の免疫反応を惹起
しないので、宿主生体の免疫反応による癌の診断に利用
することはできない。

【０００４】一方、近年の癌免疫学においては黒色腫細
胞から同定されたＭＡＧＥペプチドが端緒となり、癌抗
原ペプチドの同定がさかんに行われている。癌抗原ペプ
チドは、細胞の癌化に伴って生じた異常タンパク質が抗
原提示機構の流れに乗って細胞表面に出現したものであ
るが、癌化の原因は個々の癌によって異なることから、
その抗原性も個々の癌に特異的である。癌一般に共通す
る癌抗原は見つかっていない。

【０００５】生体において、厳密に癌に特異的であり、
かつ臓器特異的ではなく産生される物質が存在するなら
ば、その物質は癌一般に共通なマーカーとして使用する
ことができ、癌細胞の存在を調べるための第一次的なス
クリーニングに極めて有用であるといえる。

【０００６】従って、本発明の目的は、癌細胞が特異的
かつ一般的に産生する新規抗原物質を特定し、またこの
新規抗原物質に対して産生される抗体を検出することに
よって、臓器や発癌の原因の違いに関わらず癌細胞の存
在を調べる方法を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者は、マウスの実
験癌を用いて生体が本来的に持っている抗癌反応性につ
いて研究を行った結果、癌の種類によらず癌一般的な共
通抗原性があり、宿主マウスがこの共通抗原性に対して
抗体生産を含む免疫反応を惹起していることを明らかに
した（T.Tanino, N. Seo, T. Okazaki, C. Nakanishi-I
to, M. Sekimata and K. Egawa, Cancer Immunol. Immu
nother, Vol. 35, pp. 230 (1992) ）。

【０００８】また、その共通抗原性をもたらす癌抗原が
実在し、その一つがマウスの非古典的組織適合クラスＩ
抗原遺伝子群の一つであるＱ５遺伝子の産物であること
を発見した。非古典的組織適合クラスＩ抗原遺伝子群
は、通常の組織適合クラスＩ抗原遺伝子に隣接して存在
し、これらと極めて相同性が高い遺伝子群であるが、そ
の機能は不明である。マウス実験癌細胞は、由来するマ
ウスの系統、臓器、及び癌化の原因によらず、すべての
実験癌においてＱ５遺伝子の産物であるＱ５抗原が発現
していることを確認した。（N. Seo, T. Okazaki, C. N
akanishi-Ito, T.Tanino, Y. Matsudaira, T. Takahash
i and K. Egawa, J. Exp. Med., Vol.17,No.5, pp. 647
(1992)）。

【０００９】さらに、Ｑ５抗原によって、癌一般に対す
る免疫抵抗性を誘導できることを明らかにした（K.Egaw
a and N.Seo, Cancer Immunol. Immunother, Vol.41, p
p.384(1995) ）。

【００１０】上記の研究は学術的に貴重なものである
が、マウスに特異的なものであり、ヒトに対してそのま
ま利用することはできないので、本発明者はヒトの共通
的癌抗原の可能性についてさらに研究を続けた。一方、
ヒトの非古典的組織適合クラスＩ抗原遺伝子としてはＨ
ＬＡ−Ｅ遺伝子、ＨＬＡ−Ｆ遺伝子、ＨＬＡ−Ｇ遺伝
子、及びＨＬＡ−Ｈ遺伝子等が存在し、それぞれが非常
に相同性が高く、また古典的組織適合クラスＩ抗原遺伝
子とも極めて相同性が高いことが知られている。しかし
その発現についての知見は少なく、その機能もほとんど
解明されていない。このため、ヒトの非古典的組織適合
クラスＩ抗原群から特定の現象に共通的な特定の抗原を
推定するのは非常に困難であった。

【００１１】ところが、本発明者が、数種類のヒト癌培
養細胞に対して非古典的組織適合クラスＩ抗原遺伝子が
転写されているかを調べたところ、驚くべきことに、Ｈ
ＬＡ−Ｆ遺伝子の mＲＮＡがいろいろな癌細胞で共通的
に検出されることを知見した。

【００１２】次いで癌細胞でＨＬＡ−Ｆ遺伝子が発現
し、その産物が抗原性を有するのではないかとの仮説を
立て、癌患者の血清を検索したところ、抗ＨＬＡ−Ｆ抗
体が検出された。

【００１３】これらのことから、本発明者はヒトにおい
てはＨＬＡ−Ｆ遺伝子の産物であるＨＬＡ−Ｆ抗原が、
癌細胞が特異的、かつ共通的に産生する癌抗原物質であ
り、その癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原に対する免疫反応
の結果生じた抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を検出すれば、癌細胞の
存在を調べる根拠となることを知見し、本発明を完成し
た。

【００１４】従って、本発明は、少なくとも配列表の配
列番号６または５のアミノ酸配列を含有する癌細胞特異
的ＨＬＡ−Ｆ抗原を提供する。なお、本発明の抗原また
はそれをコードするＤＮＡは、特定のアミノ酸配列また
は塩基配列を有することにより癌に共通に発現する抗Ｈ
ＬＡ−Ｆ抗体を検出することが可能なものであり、 この
ような特定の配列を有するものはその名称や由来が如何
なるものであっても本発明に含まれる。

【００１５】また本発明は、体液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体
を検出することを特徴とする癌の診断方法を提供する。

【００１６】また本発明は被検者の体液を導入する体液
導入部と、癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の一部または全
部を有する免疫反応部とを、少なくとも有することを特
徴とする癌の検出体を提供する。

【００１７】本発明は、ヒトの共通的癌抗原の存在を初
めて見出したものであり、真に癌特異的かつ共通的な抗
原性など存在しないという従来の癌免疫研究者の常識を
覆すものである。

【００１８】

【発明の実施の形態】（１）癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗
原 本発明の第一の態様の癌特異的抗原は、体液中に存在す
る抗ＨＬＡ−Ｆ抗体に対して抗原性を有するものであれ
ば、いかなるものでもよいが、具体的には、配列表の配
列番号４のアミノ酸配列の一部である。 より具体的に
は、少なくとも配列表の配列番号５のアミノ酸配列を有
し、 さらには少なくとも配列表の配列番号６のアミノ酸
配列を有するものが好ましい。 また、抗ＨＬＡ−Ｆ抗体
に対して抗原性を有するものであれば、配列番号５のア
ミノ酸配列の一部であってもよいし、 配列番号６のアミ
ノ酸配列の一部であっても良い。アミノ酸配列は、種の
相同性や突然変異によってその特性に変化を与えない
で、 その一部が、置換、欠失、付加されることがあり、
そのような配列も本発明の特性に本質的な影響を与えな
い限り本発明の範囲である。 本発明者は癌細胞特異的Ｈ
ＬＡ−Ｆ抗原の抗原性に関与するのは、ＨＬＡ−Ｆ抗原
α鎖の細胞外ドメイン、 α₁ 、 α₂ 、 α₃ であることを
特定し、 さらにその一部である配列番号６のアミノ酸配
列であることを特定した。癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原
はヒトのＨＬＡ−Ｆ遺伝子の産物、またはヒトの細胞か
ら分画したm ＲＮＡより合成したＨＬＡ−ＦｃＤＮＡを
用いた遺伝子組み換え体の産物である。ＨＬＡ−Ｆ遺伝
子の塩基配列を配列表の配列番号１の塩基配列に示す。
したがって本発明の第二の態様は、癌細胞特異的ＨＬＡ
−Ｆ抗原をコードするＤＮＡであり、具体的には、少な
くとも配列番号３のＤＮＡを含むＤＮＡであり、少なく
とも配列番号２のＤＮＡを含むＤＮＡであり、配列番号
３のＤＮＡの一部であっても、配列番号２のＤＮＡの一
部であってもよい。また、癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原
をコードするＤＮＡであれば、配列番号１，２，３のＤ
ＮＡの縮重の範囲のＤＮＡであってもよい。癌細胞特異
的ＨＬＡ−Ｆ抗原のアミノ酸配列が、種の相同性や突然
変異によってその特性に変化を与えないで、 その一部
が、置換、欠失、 付加されることがあり、そのようなア
ミノ酸配列をコードするＤＮＡも本発明の特性に本質的
な影響を与えない限り本発明の範囲である。

【００１９】ＨＬＡ−Ｆ遺伝子の発現は、例えばJ. M.
Houlihanらが開示した方法（J. Immunology, Vol. 149,
pp. 668 (1992) ）によりＨＬＡ−Ｆのm ＲＮＡの存在
を検出することにより確認することができる。本発明は
この遺伝子の産物であるＨＬＡ−Ｆ抗原に対する免疫反
応の結果生じたＨＬＡ−Ｆ抗体を検出すれば癌細胞の存
在が検出できることを発明したものである。

【００２０】癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の調製は、大
量培養された癌細胞から抗ＨＬＡ−Ｆ抗体に対して抗原
性を有するペプチドを分画し、既知の方法で直接精製す
る方法、ＨＬＡ−Ｆ遺伝子又はＨＬＡ−ＦｃＤＮＡを用
いた遺伝子組み換え体を発現させて精製する方法等があ
る。ＨＬＡ−Ｆ遺伝子又はＨＬＡ−ＦｃＤＮＡは、これ
らの遺伝子を単独で含む形質転換体を作製しても良い
が、 発現ベクター由来のアミノ酸配列との融合蛋白質と
して発現させる方が有利な場合がある。 そのような場合
は、 特定のタンパク質分解酵素を用いてその酵素の認識
部位を分解して、発現ベクター由来のアミノ酸を除去す
るように設計する。以下ＨＬＡ−ＦｃＤＮＡを用いた遺
伝子組み換え体を発現させてＨＬＡ−Ｆ抗原を調製する
方法について説明する。

【００２１】（ａ）ｃＤＮＡの合成 ヒトの癌細胞、例えばヒト骨髄性白血病細胞ＨＬ−６０
（詳細は、Cancer, Vol.28, pp.1300-1310 (1968) ）、
Ｕ９３７（J. Exp. Med., Vol. 143, pp 1528-1533 (19
76) に記載される。本発明はこれらの文献を引用し、 本
明細書の内容とする。）等を培養したものから mＲＮＡ
を抽出し、逆転写酵素を用いてこれに対するｃＤＮＡを
合成する。

【００２２】（ｂ）ＨＬＡ−ＦｃＤＮＡの調製 得られたｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡとし、プライマーにＨＬ
Ａ−Ｆ遺伝子特異的なデオキシオリゴヌクレオチドを用
いてＰＣＲ（polymerase chain reaction ）法によって
ＨＬＡ−ＦｃＤＮＡを増幅する（詳細は、J. Immunolog
y, Vol. 149, pp. 668-676 (1992) に記載される。本発
明はこれらの文献を引用し、 本明細書の内容とす
る。）。

【００２３】本発明者は癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の
抗原性に関与するのは、ＨＬＡ−Ｆ抗原α鎖の細胞外ド
メインの一部であることを特定している。したがって、
ＨＬＡ−ＦｃＤＮＡとしてはＨＬＡ−Ｆ抗原α鎖の細胞
外ドメインをコードしている部位を増幅することが好ま
しい。具体的には少なくともＨＬＡ−Ｆ遺伝子No.64〜N
o.885（配列番号２）を含むＨＬＡ−ＦｃＤＮＡ、より
好ましくはＨＬＡ−Ｆ遺伝子No.130〜No.774（配列番号
３）を含むＨＬＡ−ＦｃＤＮＡ断片が得られるようにデ
ザインしたプライマーを用い、増幅を行う。得られたｃ
ＤＮＡの塩基配列を解析し、ＨＬＡ−Ｆ遺伝子の塩基配
列と比較して、ＨＬＡ−ＦｃＤＮＡが得られたかどうか
確認する。

【００２４】（ｃ）ＨＬＡ−Ｆタンパク質の発現 次に、増幅されたＨＬＡ−ＦｃＤＮＡを発現ベクター、
例えばｐＱＥ３１等にクローニングする。そしてこれを
用いて大腸菌等を形質転換し、培養してＨＬＡ−Ｆタン
パク質を過剰発現させる。

【００２５】（ｄ）癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の調製
／精製 得られたＨＬＡ−Ｆタンパク質産生大腸菌を可溶化し、
アフィニテイー精製法等で抗原を精製する。このように
して得られる癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原は、ＨＬＡ−
Ｆ遺伝子がコードするＨＬＡ−Ｆタンパク質の断片であ
る。

【００２６】発現ベクターを用いて大腸菌等で発現させ
たＨＬＡ−Ｆタンパク質には発現ベクター由来のアミノ
酸が余分に付加される場合がある。このような場合に
は、発現ベクターとＨＬＡ−ＦｃＤＮＡの結合部位にア
ミノ酸配列特異的タンパク質分解酵素の認識配列をコー
ドする塩基配列を挿入し、精製後に発現したタンパク質
の該認識部位をそのアミノ酸配列特異的タンパク質分解
酵素で分解することにより、ベクター由来のアミノ酸を
除去することができる。

【００２７】アミノ酸配列特異的タンパク質分解酵素と
してエンテロキナーゼ（Ekase ）を用いる場合には、発
現ベクターとＨＬＡ−ＦｃＤＮＡの結合部位に、エンテ
ロキナーゼ認識配列であるAsp −Asp −Asp −Asp −Ly
s をコードする塩基配列として例えば５' −GACGACGACG
ACAAA −３' を挿入する。

【００２８】アミノ酸配列特異的タンパク質分解酵素と
してファクターＸａ（ Factor Ｘａ）を用いる場合、発
現ベクターとＨＬＡ−ＦｃＤＮＡの結合部位にＸａ認識
配列であるIle −Glu −Gly −Arg をコードする塩基配
列として例えば５' −ATCGAGGGCAGA−３' を挿入する。

【００２９】癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原は、抗原性を
有するペプチドを含有するものを分画することによって
精製する。分画する方法は特に限定されない。例えば、
ＨＬＰＣやＦＬＰＣ等を用いた液体クロマトグラフィー
による方法、電気泳動による方法等が挙げられる。

【００３０】（２）抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の検出方法 抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の検出方法は、癌細胞特異的ＨＬＡ−
Ｆ抗原に対する免疫反応を利用した方法であれば特に限
定されない。具体的には、癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原
の一部または全部を用いて、被験者の体液中の抗ＨＬＡ
−Ｆ抗体を検出する。検出する方法は、サンドイッチ法
や競合法が例示でき、 競合法の場合は、癌細胞特異的Ｈ
ＬＡ−Ｆ抗原の一部または全部に特異的に反応する免疫
対を用いて、被験者の体液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体と競合
反応させて被験者の体液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を検出す
る。免疫対とは、 ＨＬＡ−Ｆ抗原の一部または全部に対
する免疫反応対を形成するもので、 抗ＨＬＡ−Ｆ抗体が
例示できる。

【００３１】用いる検出体としては、被検者の体液を導
入する体液導入部と、癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の一
部または全部を有する免疫反応部とを、備えるものを用
いれば良い。例えば、癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原を担
体に固相化させ免疫反応部としてもよく、免疫反応部で
は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、ウエスタンブロット
法、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、 蛍光抗体法（ＦＩＡ）
等で抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を検出する。癌細胞特異的ＨＬＡ
−Ｆ抗原を固相化する担体としてはニトロセルロース、
ＰＶＤＦ（ポリビニリデンジフルオライド）又は樹脂製
のシート、プレート、ラテックスビーズ、鉄ビーズ等公
知のもので良く、特に限定されない。癌細胞特異的ＨＬ
Ａ−Ｆ抗原の固相化は例えば次の方法で行うことができ
る。（ａ）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を行った癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ
抗原をＰＶＤＦ膜にブロッテイングして吸着させる方
法；（ｂ）樹脂プレートの表面に癌細胞特異的ＨＬＡ−
Ｆ抗原を非共有結合によって吸着させる方法；（ｃ）反
応基を結合させた鉄ビーズ、例えばDynabeads M450 Tos
ylactivated （Ｄｙｎａｌ社製）に癌細胞特異的ＨＬＡ
−Ｆ抗原を共有結合により結合させる方法が例示でき
る。また上記の本発明の癌の検出体とこれに用いる検出
試薬の少なくとも１つを備える癌の検出キットを用いて
検出しても良い。

【００３２】以下にウエスタンブロット法による抗ＨＬ
Ａ−Ｆ抗体の検出方法を説明する。癌細胞特異的ＨＬＡ
−Ｆ抗原をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分画後、ＰＶＤＦ膜、例え
ばクリアブロットＰ膜（ＡＴＴＯ社製）等にブロッテイ
ングする。これを１％ウシ胎児血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）、５％スキムミルクを含むＰＢＳでブロッキング
し、抗ＨＬＡ−Ｆ抗体検出用フィルターを作製する。こ
れを一次抗体として被験者の体液を０．１％Tween ２０
を含むＰＢＳ（以下、Ｔ−ＰＢＳと略記する）で５〜１
０倍希釈したものと３７℃で９０分間、又は4 ℃で８〜
４８時間反応させる。Ｔ−ＰＢＳでよく洗浄した後、二
次抗体としてビオチン、酵素、化学発光物質、放射線化
合物等の標識物質で標識したヒトイムノグロブリン・ヤ
ギ抗体、抗ヒトイムノグロブリン・マウス抗体、抗ヒト
イムノグロブリン・ウサギ抗体等を含むＴ−ＰＢＳと３
７℃で９０分間、又は４℃で８〜４８時間反応させる。
Ｔ−ＰＢＳでよく洗浄した後、二次抗体の標識物質に応
じた反応を行い、被験者の体液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の
存在を確認する。

【００３３】（３）癌の診断方法 被験者の体液中に抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の存在が確認された
とき、被験者に癌細胞が存在すると診断する。その場
合、公知の方法でさらに詳しい検査を行い、癌細胞の発
生部位を特定することが好ましい。検査に用いる体液と
しては、血液、血漿、血清、だ液、腹水、胸水等が好ま
しく、特に血清が好ましい。

【００３４】

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。

【００３５】実施例１ （１）培養癌細胞からのＨＬＡ−ＦｃＤＮＡの調製 J. M. Houlihanらが考案した方法（J. Immunology, Vo
l. 149, pp. 668-676(1992)）に従って、ヒト白血病由
来細胞Ｕ９３７（J. Exp. Med., Vol. 143, pp 1528-15
33 (1976) ）の培養癌細胞から mＲＮＡを抽出し、poly
dTカラム（Oligotex-dT30 、ＪＳＲ（株））を用いて、
polydA構造をもつ mＲＮＡ画分を得た。これを鋳型とし
て、逆転写酵素によってｃＤＮＡを合成した。このｃＤ
ＮＡを鋳型としてＨＬＡ−Ｆα鎖特異的プライマー（5'
-ACATCGCCGTGGAGTACGTAGACG-3'、及び3'-GAACACCTCTGGT
CCGGACGTCCC-5'）を用いて増幅した。得られたｃＤＮＡ
の塩基配列を決定し、ＨＬＡ−Ｆ遺伝子の塩基配列と比
較した結果、exon２からexon４に至る６４７bpのＨＬＡ
−ＦｃＤＮＡ断片であることを確認した。なお、この配
列は配列番号３のＤＮＡ配列の５' 末端にａｃの付加し
たＤＮＡ配列であった。

【００３６】（２）癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の精製 （１）で得られたＨＬＡ−ＦｃＤＮＡ断片を発現ベクタ
ーｐＱＥ３１のヒスチジンタグ遺伝子（His x6）の下流
に繋ぎ、さらにヒスチジンタグ遺伝子とＨＬＡ−ＦｃＤ
ＮＡ断片との間にエンテロキナーゼ認識配列( Ｅｋ)Asp
−Asp −Asp −Asp −Lys をコードする塩基配列として
５' −GACGACGACGACAAA −３' を挿入し、クローニング
して組み換えプラスミドを得た。この組み換えプラスミ
ドで大腸菌（E. coli JM109 株）を形質転換し、ＩＰＴ
Ｇ（Isopropyl thiogalactopyranoside ）によって発現
を誘導し、His x6とＥｋとＨＬＡ−Ｆ断片との融合タン
パクを生産させた。

【００３７】前記融合タンパク産生大腸菌をＰＢＳに懸
濁して超音波で破砕し、遠心分離によって不溶性画分を
回収した。この不溶性画分を尿素で可溶化し、Ｎｉ−キ
レートアフィニティークロマトグラフィーにより融合タ
ンパクを精製した。これをＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析した
ところ、分子量は３１ＫＤ、精製度は９５% であった。
また、Ｎ端アミノ酸配列を決定し、デザイン通りに翻訳
されていることを確認した。

【００３８】精製融合タンパクをエンテロキナーゼで処
理し、癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原を得た。これをＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥで解析したところ、エンテロキナーゼで分
解されなかった分子量３１ＫＤのバンドの他に、２９Ｋ
Ｄ、１８ＫＤ、１３ＫＤのバンドを確認した。これらの
アミノ酸配列を解析した結果、いずれもＨＬＡ−Ｆ遺伝
子産物であることが確認された。

【００３９】（３）ウエスタンブロット法による抗ＨＬ
Ａ−Ｆ抗体の検出 ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画した癌細胞特異的ＨＬＡ−
Ｆ抗原を、クリアブロットＰ膜（ＡＴＴＯ社製）にブロ
ッティングし、１％ウシ胎児血清アルブミン（ＢＳＡ）
と５％スキムミルクとを含むＰＢＳでブロッキングし、
癌検出体である抗ＨＬＡ−Ｆ抗体検出用フィルターを得
た。

【００４０】一次抗体として被験者５２例（癌患者３２
例および健常者２０例）の１００μｌの血清をＴ−ＰＢ
Ｓで１０倍希釈したものに上記の方法で作製した抗ＨＬ
Ａ−Ｆ抗体検出用フィルターを浸して３７℃で９０分間
反応させた。これをＴ−ＰＢＳでよく洗浄した後、二次
抗体としてアルカリフォスファターゼ標識した抗ヒトＩ
ｇＧウサギ抗体（プロメガ社製）0.2 μｇを含む１ｍｌ
のＴ−ＰＢＳに浸して３７℃で９０分間反応させた。こ
れをＴ−ＰＢＳでよく洗浄した後、アルカリフォスファ
ターゼ発色試薬ProtoBlot Western Blot AP System（Pr
omega 社製）と反応させた。

【００４１】（４）癌の診断 抗ＨＬＡ−Ｆ抗体検出用フィルターの発色を観察し、分
子量３１ＫＤ、２９ＫＤ、１８ＫＤ、１３ＫＤのバンド
いずれか１つ以上に発色が認められた被験者の血清中に
は抗ＨＬＡ−Ｆ抗体が存在し、その被験者には癌細胞が
存在すると診断した。

【００４２】（３）の方法で処理した抗ＨＬＡ−Ｆ抗体
検出用フィルターの発色を観察した結果を表１に示す。
分子量３１ＫＤ、２９ＫＤ、１８ＫＤ、および１３ＫＤ
のいずれか１つのバンドに発色が認められた場合を○、
２つ以上のバンドに発色が認められた場合を◎、いずれ
のバンドにも発色が認められなかった場合を×と判定し
た。

【００４３】実施例２ 実施例１（２）において、ヒスチジンタグ遺伝子とＨＬ
Ａ−ＦｃＤＮＡ断片との間にエンテロキナーゼ認識配列
をコードする塩基配列を挿入する代わりに、ファクター
Ｘａ認識配列Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇをコード
する塩基配列５' −ATCGAGGGCAGA−３' を挿入し、発現
した融合タンパクをRestriction Protease Factor Ｘａ
（Protein Engineering Technology ApS社）で処理した
以外は実施例１と同様にして癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗
原の精製を行った。得られた癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗
原をＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析したところ、明確なバンド
として分子量３１ＫＤ、２９ＫＤのバンドを確認した。

【００４４】被験者５２例（癌患者３２例、健常者２０
例）について実施例１と同様に抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の検
出、および癌の診断を行った。抗ＨＬＡ−Ｆ抗体検出用
フィルターの発色を観察した結果を表１に示す。分子量
２９ＫＤのバンドに発色が認められた場合を○、２９Ｋ
Ｄのバンドに発色が認められなかった場合を×と判定し
た。

【００４５】実施例３ 実施例１（１）と同様に培養癌細胞からのＨＬＡ−Ｆｃ
ＤＮＡの調製を行い、得られたＨＬＡ−ＦｃＤＮＡをグ
ルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）発現ベ
クターに挿入した組み換えプラスミドで大腸菌（E. col
i JM109 株）を形質転換してＧＳＴとＨＬＡ−Ｆ断片と
の融合タンパクを得た。これをＳＤＳ存在下に可溶化
し、スロンビンでＧＳＴとＨＬＡ−Ｆ断片とを切断して
癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原を得た。得られた癌細胞特
異的ＨＬＡ−Ｆ抗原をＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析したとこ
ろ、ＧＳＴの２７．５ＫＤのバンド、ＨＬＡ−Ｆ断片の
２５ＫＤのバンドを確認した。

【００４６】被験者２０例（癌患者１３例、健常者７
例）について実施例１と同様に抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の検
出、および癌の診断を行った。被験者の血清中に混在す
る大量の抗大腸菌抗体のために、結果はやや不鮮明であ
ったが、抗ＨＬＡ−Ｆ抗体検出用フィルターの発色を観
察した結果を表１に示す。分子量２５ＫＤのバンドに明
確な発色が認められた場合を○、２５ＫＤのバンドに発
色が認められなかった場合を×と判定した。結果を表１
に示す。

【００４７】 表１ 抗ＨＬＡ−Ｆ抗体の検出 被験者（癌患者の病名） 性別 年齢 判定 実施例１ 実施例2 実施例３ 癌患者１ （肝細胞癌） 男 ５３ ○ ○ ○ 癌患者２ （胃癌） 男 ５９ ○ ○ ○ 癌患者３ （肝細胞癌） 女 ６２ ○ ○ × 癌患者４ （乳癌） 女 ６５ ◎ ○ ○ 癌患者５ （肺癌） 男 ４６ × × × 癌患者６ （卵巣癌） 女 ６３ × × × 癌患者７ （子宮癌） 女 ４４ ○ ○ ○ 癌患者８ （肝細胞癌） 男 ６４ ○ ○ ○ 癌患者９ （卵巣癌） 女 ５２ × × − 癌患者１０（肝臓癌、胃癌）男 ７０ ○ ○ − 癌患者１１（乳癌） 女 ６１ × × × 癌患者１２（肝臓癌） 男 ７７ × × − 癌患者１３（膵臓癌） 女 ６４ ◎ ○ − 癌患者１４（悪性組織球腫）男 ５８ × × × 癌患者１５（Ｓ状結腸癌） 男 ５６ × × − 癌患者１６（胃癌） 男 ４８ ○ ○ − 癌患者１７（腎臓癌） 男 ６３ × × − 癌患者１８（乳癌） 女 ３６ × × − 癌患者１９（卵巣癌） 女 ６１ ○ ○ − 癌患者２０（肺癌） 男 ６２ × × − 癌患者２１（卵巣癌） 女 ５２ × × − 癌患者２２（乳癌） 女 ５７ × × − 癌患者２３（卵巣癌） 女 ３８ × × − 癌患者２４（肺癌） 男 ５８ × × − 癌患者２５（膵臓癌） 男 ５８ ○ ○ − 癌患者２６（膵臓癌） 女 ５８ × × − 癌患者２７（直腸癌） 男 ５６ ◎ ○ − 癌患者２８（直腸癌） 女 ６５ ○ ○ − 癌患者２９（膵臓癌） 男 ７６ × × − 癌患者３０（肺癌） 男 ５０ ◎ ○ − 癌患者３１（膵臓癌） 女 ３３ × × − 癌患者３２（舌癌） 男 ６２ ○ ○ − 癌患者３３（Ｓ状結腸癌） 男 ５８ − − × 癌患者３４（乳癌） 女 ５２ − − ○ 癌患者３５（腎臓癌） 男 ６４ − − × 健常者１ 男 ６２ × × − 健常者２ 男 ４１ × × − 健常者３ 女 ６０ × × − 健常者４ 女 ３３ × × − 健常者５ 男 ３６ × × − 健常者６ 男 ３７ × × − 健常者７ 男 ４２ × × − 健常者８ 女 ４０ × × − 健常者９ 男 ３９ × × − 健常者１０ 男 ３９ × × − 健常者１１ 男 ２６ × × − 健常者１２ 男 ３０ × × − 健常者１３ 男 ３１ × × − 健常者１４ 男 ５９ × × − 健常者１５ 女 ２３ × × − 健常者１６ 女 ３９ × × − 健常者１７ 女 ３４ × × − 健常者１８ 女 ２７ × × − 健常者１９ 女 ２３ × × − 健常者２０ 女 ４５ × × − 健常者２１ 男 ４０ − − ○ 健常者２２ 男 ６０ − − × 健常者２３ 男 ２８ − − × 健常者２４ 男 ３８ − − × 健常者２５ 女 ２５ − − × 健常者２６ 男 ３８ − − × 健常者２７ 女 ３４ − − × 注）癌患者：検査以前に癌の診断が確定している被験者。 健常者：検査以前に癌と診断されたことがない被験者。 −：未検査。

【００４８】表１に示したように、癌患者３５例中１６
例の血清中に抗ＨＬＡ−Ｆ抗体が検出され、検出率は４
５．７％であった。抗ＨＬＡ−Ｆ抗体が検出されなかっ
た癌患者は、血清中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体のほぼ全量が自
分の癌細胞が産生する癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原で中
和されているために、検出されなかったものと考えられ
る。抗ＨＬＡ−Ｆ抗体が検出された癌患者１６例の診断
名から明らかなように、様々な臓器の癌について抗ＨＬ
Ａ−Ｆ抗体を検出できたことから、本発明の癌細胞特異
的ＨＬＡ−Ｆ抗原は癌に共通的な抗原性を有することが
わかる。

【００４９】一方、正常対象者は一例（健常者２１）で
抗ＨＬＡ−Ｆ抗体が検出されたが、この被験者は本検査
後に内視鏡等による精密検査を受診した結果、Ｓ状結腸
癌であることが判明した。しかしこの被験者の血清を用
いて大腸癌のマーカーであるＣＥＡ及びＣＡ１９−９で
検査を行ったところ、いずれも陰性であった。

【００５０】

【発明の効果】本発明の癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原は
癌細胞が特異的かつ一般的に産生する新規抗原物質であ
り、またこの癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原に対して産生
される抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を被験者の体液中より検出する
ことによって、臓器や発癌の原因の違いに関わらず癌細
胞の存在を調べることができる。さらに、既存の腫瘍マ
ーカーを用いた検査では見落とされるような早期の癌も
発見できる可能性が高い。

【００５１】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> K. EGAWA et. al. <120> Cancer cell specific HLA-F antigen and diagnostic method of cancer by using thereof <130> MEDI001 <160> 6 <210> SEQ ID No:1 <211> 1089 <212> DNA <213> human <400> 1 atggcgcccc gaagcctcct cctgctgctc tcaggggccc tggccctgac cgatacttgg 60 gcgggctccc actccttgag gtatttcagc accgctgtgt cgcggcccgg ccgcggggag 120 ccccgctaca tcgccgtgga gtacgtagac gacacgcaat tcctgcggtt cgacagcgac 180 gccgcgattc cgaggatgga gccgcgggag ccgtgggtgg agcaagaggg gccgcagtat 240 tgggagtgga ccacagggta cgccaaggcc aacgcacaga ctgaccgagt ggccctgagg 300 aacctgctcc gccgctacaa ccagagcgag gctgggtctc acaccctcca gggaatgaat 360 ggctgcgaca tggggcccga cggacgcctc ctccgcgggt atcaccagca cgcgtacgac 420 ggcaaggatt acatctccct gaacgaggac ctgcgctcct ggaccgcggc ggacaccgtg 480 gctcagatca cccagcgctt ctatgaggca gaggaatatg cagaggagtt caggacctac 540 ctggagggcg agtgcctgga gttgctccgc agatacttgg agaatgggaa ggagacgcta 600 cagcgcgcag atcctccaaa ggcacacgtt gcccaccacc ccatctctga ccatgaggcc 660 accctgaggt gctgggccct gggcttctac cctgcggaga tcacgctgac ctggcagcgg 720 gatggggagg aacagaccca ggacacagag cttgtggaga ccaggcctgc aggggatgga 780 accttccaga agtgggccgc tgtggtggtg ccttctggag aggaacagag atacacatgc 840 catgtgcagc acgaggggct gccccagccc ctcatcctga gatgggagca gtctccccag 900 cccaccatcc ccatcgtggg catcgttgct ggccttgttg tccttggagc tgtggtcact 960 ggagctgtgg tcgctgctgt gatgtggagg aagaagagct cagatagaaa cagagggagc 1020 tactctcagg ctgcagtcac tgacagtgcc cagggctctg gggtgtctct cacagctaat 1080 aaagtgtga 1089

【００５２】 <210> SEQ ID No:2 <211> 822 <212> DNA <213> human <400> 2 ggctcccact ccttgaggta tttcagcacc gctgtgtcgc ggcccggccg cggggagccc 60 cgctacatcg ccgtggagta cgtagacgac acgcaattcc tgcggttcga cagcgacgcc 120 gcgattccga ggatggagcc gcgggagccg tgggtggagc aagaggggcc gcagtattgg 180 gagtggacca cagggtacgc caaggccaac gcacagactg accgagtggc cctgaggaac 240 ctgctccgcc gctacaacca gagcgaggct gggtctcaca ccctccaggg aatgaatggc 300 tgcgacatgg ggcccgacgg acgcctcctc cgcgggtatc accagcacgc gtacgacggc 360 aaggattaca tctccctgaa cgaggacctg cgctcctgga ccgcggcgga caccgtggct 420 cagatcaccc agcgcttcta tgaggcagag gaatatgcag aggagttcag gacctacctg 480 gagggcgagt gcctggagtt gctccgcaga tacttggaga atgggaagga gacgctacag 540 cgcgcagatc ctccaaaggc acacgttgcc caccacccca tctctgacca tgaggccacc 600 ctgaggtgct gggccctggg cttctaccct gcggagatca cgctgacctg gcagcgggat 660 ggggaggaac agacccagga cacagagctt gtggagacca ggcctgcagg ggatggaacc 720 ttccagaagt gggccgctgt ggtggtgcct tctggagagg aacagagata cacatgccat 780 gtgcagcacg aggggctgcc ccagcccctc atcctgagat gg 822

【００５３】 <210> SEQ ID No:3 <211> 645 <212> DNA <213> human <400> 3 atcgccgtgg agtacgtaga cgacacgcaa ttcctgcggt tcgacagcga cgccgcgatt 60 ccgaggatgg agccgcggga gccgtgggtg gagcaagagg ggccgcagta ttgggagtgg 120 accacagggt acgccaaggc caacgcacag actgaccgag tggccctgag gaacctgctc 180 cgccgctaca accagagcga ggctgggtct cacaccctcc agggaatgaa tggctgcgac 240 atggggcccg acggacgcct cctccgcggg tatcaccagc acgcgtacga cggcaaggat 300 tacatctccc tgaacgagga cctgcgctcc tggaccgcgg cggacaccgt ggctcagatc 360 acccagcgct tctatgaggc agaggaatat gcagaggagt tcaggaccta cctggagggc 420 gagtgcctgg agttgctccg cagatacttg gagaatggga aggagacgct acagcgcgca 480 gatcctccaa aggcacacgt tgcccaccac cccatctctg accatgaggc caccctgagg 540 tgctgggccc tgggcttcta ccctgcggag atcacgctga cctggcagcg ggatggggag 600 gaacagaccc aggacacaga gcttgtggag accaggcctg caggg 645

【００５４】 <210> SEQ ID No:4 <211> 362 <212> PRT <213> human <400> 4 Met Ala Pro Arg Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ala Leu 1 5 10 15 Thr Asp Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Leu Arg Tyr Phe Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Tyr Ile Ala Val Glu Tyr 35 40 45 Val Asp Asp Thr Gln Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ile Pro 50 55 60 Arg Met Glu Pro Arg Glu Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro Gln Tyr 65 70 75 80 Trp Glu Trp Thr Thr Gly Tyr Ala Lys Ala Asn Ala Gln Thr Asp Arg 85 90 95 Val Ala Leu Arg Asn Leu Leu Arg Arg Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly 100 105 110 Ser His Thr Leu Gln Gly Met Asn Gly Cys Asp Met Gly Pro Asp Gly 115 120 125 Arg Leu Leu Arg Gly Tyr His Gln His Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr 130 135 140 Ile Ser Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Thr Val 145 150 155 160 Ala Gln Ile Thr Gln Arg Phe Tyr Glu Ala Glu Glu Tyr Ala Glu Glu 165 170 175 Phe Arg Thr Tyr Leu Glu Gly Glu Cys Leu Glu Leu Leu Arg Arg Tyr 180 185 190 Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Ala Asp Pro Pro Lys Ala 195 200 205 His Val Ala His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys 210 215 220 Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg 225 230 235 240 Asp Gly Glu Glu Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro 245 250 255 Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser 260 265 270 Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro 275 280 285 Gln Pro Leu Ile Leu Arg Trp Glu Gln Ser Pro Gln Pro Thr Ile Pro 290 295 300 Ile Val Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val Leu Gly Ala Val Val Thr 305 310 315 320 Gly Ala Val Val Ala Ala Val Met Trp Arg Lys Lys Ser Ser Asp Arg 325 330 335 Asn Arg Gly Ser Tyr Ser Gln Ala Ala Val Thr Asp Ser Ala Gln Gly 340 345 350 Ser Gly Val Ser Leu Thr Ala Asn Lys Val 355 360

【００５５】 <210> SEQ ID No:5 <211> 274 <212> PRT <213> human <400> 5 Gly Ser His Ser Leu Arg Tyr Phe Ser Thr Ala Val Ser Arg Pro Gly 1 5 10 15 Arg Gly Glu Pro Arg Tyr Ile Ala Val Glu Tyr Val Asp Asp Thr Gln 20 25 30 Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ile Pro Arg Met Glu Pro Arg 35 40 45 Glu Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro Gln Tyr Trp Glu Trp Thr Thr 50 55 60 Gly Tyr Ala Lys Ala Asn Ala Gln Thr Asp Arg Val Ala Leu Arg Asn 65 70 75 80 Leu Leu Arg Arg Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Leu Gln 85 90 95 Gly Met Asn Gly Cys Asp Met Gly Pro Asp Gly Arg Leu Leu Arg Gly 100 105 110 Tyr His Gln His Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ser Leu Asn Glu 115 120 125 Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Thr Val Ala Gln Ile Thr Gln 130 135 140 Arg Phe Tyr Glu Ala Glu Glu Tyr Ala Glu Glu Phe Arg Thr Tyr Leu 145 150 155 160 Glu Gly Glu Cys Leu Glu Leu Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys 165 170 175 Glu Thr Leu Gln Arg Ala Asp Pro Pro Lys Ala His Val Ala His His 180 185 190 Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe 195 200 205 Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Glu Gln 210 215 220 Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr 225 230 235 240 Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg 245 250 255 Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Gln Pro Leu Ile Leu 260 265 270 Arg Trp

【００５６】 <210> SEQ ID No:6 <211> 215 <212> PRT <213> human <400> 6 Ile Ala Val Glu Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Leu Arg Phe Asp Ser 1 5 10 15 Asp Ala Ala Ile Pro Arg Met Glu Pro Arg Glu Pro Trp Val Glu Gln 20 25 30 Glu Gly Pro Gln Tyr Trp Glu Trp Thr Thr Gly Tyr Ala Lys Ala Asn 35 40 45 Ala Gln Thr Asp Arg Val Ala Leu Arg Asn Leu Leu Arg Arg Tyr Asn 50 55 60 Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Leu Gln Gly Met Asn Gly Cys Asp 65 70 75 80 Met Gly Pro Asp Gly Arg Leu Leu Arg Gly Tyr His Gln His Ala Tyr 85 90 95 Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ser Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr 100 105 110 Ala Ala Asp Thr Val Ala Gln Ile Thr Gln Arg Phe Tyr Glu Ala Glu 115 120 125 Glu Tyr Ala Glu Glu Phe Arg Thr Tyr Leu Glu Gly Glu Cys Leu Glu 130 135 140 Leu Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Ala 145 150 155 160 Asp Pro Pro Lys Ala His Val Ala His His Pro Ile Ser Asp His Glu 165 170 175 Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr 180 185 190 Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Glu Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu 195 200 205 Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly 210 215

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/574 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/68 33/574 (Ｃ１２Ｎ 1/21 33/68 Ｃ１２Ｒ 1:19） //(Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:19） 5/00 Ａ Ｆターム(参考） 2G045 AA25 BA13 BB60 CA26 DA78 FA18 GC12 4B024 AA01 AA11 BA36 CA04 CA12 DA06 EA04 GA11 HA01 4B064 AG31 CA02 CA19 CC24 DA14 4B065 AA26X AA94Y AB01 BA02 CA24 CA44 CA46 4H045 AA11 AA30 BA10 CA42 DA86 EA51 FA74

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】少なくとも配列表の配列番号６のアミノ酸
   配列を含有する癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原。
2. 【請求項２】少なくとも配列表の配列番号５のアミノ酸
   配列を含有する癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原。
3. 【請求項３】配列表の配列番号１〜３のいずれかに記載
   のＤＮＡ配列の一部または全部を発現させて得られるこ
   とを特徴とする請求項１または２に記載の癌細胞特異的
   ＨＬＡ−Ｆ抗原。
4. 【請求項４】請求項１〜３のいずれかに記載の癌細胞特
   異的ＨＬＡ−Ｆ抗原をコードするＤＮＡ。
5. 【請求項５】配列表の配列番号１〜３のいずれかに記載
   のＤＮＡ配列を有する形質転換体から融合蛋白質を発現
   させ、タンパク質分解酵素で処理して請求項１〜３のい
   ずれかに記載のＨＬＡ−Ｆ抗原を得ることを特徴とする
   請求項１〜３に記載の癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の調
   製方法。
6. 【請求項６】前記タンパク質分解酵素がエンテロキナー
   ゼであることを特徴とする請求項５に記載の癌細胞特異
   的ＨＬＡ−Ｆ抗原の調製方法。
7. 【請求項７】前記タンパク質分解酵素がファクターＸａ
   （FactorＸａ）であることを特徴とする請求項５に記載
   の癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の調製方法。
8. 【請求項８】抗原性を有するペプチドを含有するものを
   分画する工程を含むことを特徴とする請求項１〜３のい
   ずれかに記載の癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の調製方
   法。
9. 【請求項９】癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の一部または
   全部を用いて、被験者の体液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を検
   出することを特徴とする癌の診断方法。
10. 【請求項１０】癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の一部また
    は全部に特異的に反応する免疫対を用いて、被験者の体
    液中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体と競合反応させて被験者の体液
    中の抗ＨＬＡ−Ｆ抗体を検出することを特徴とする癌の
    診断方法。
11. 【請求項１１】前記体液が血液であることを特徴とする
    請求項９または１０に記載の癌の診断方法。
12. 【請求項１２】被検者の体液を導入する体液導入部と、
    癌細胞特異的ＨＬＡ−Ｆ抗原の一部または全部を有する
    免疫反応部とを、少なくとも有することを特徴とする癌
    の検出体。
13. 【請求項１３】請求項１２に記載の癌の検出体とこれに
    用いる検出試薬の少なくとも１つを備えることを特徴と
    する癌の検出キット。