JPS6253930A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
- Publication number
- JPS6253930A JPS6253930A JP19560385A JP19560385A JPS6253930A JP S6253930 A JPS6253930 A JP S6253930A JP 19560385 A JP19560385 A JP 19560385A JP 19560385 A JP19560385 A JP 19560385A JP S6253930 A JPS6253930 A JP S6253930A
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- JP
- Japan
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- cancer
- esophageal
- antigen
- esophageal cancer
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、高分化型食道癌由来細胞株（ＴＥ−１）を免
疫原として作製されたハイブリドーマの産生ずる特定の
特性を持つモノクローナル抗体に関する。
疫原として作製されたハイブリドーマの産生ずる特定の
特性を持つモノクローナル抗体に関する。
癌研究の文種の目標は、抗癌、制癌作用を示す物質の探
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
免疫反応（抗原−抗体反応）は、非常に特異性が高いも
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ）らによって開発されたモノクロー
ナル抗体〔ケーラー、ジーおよびミルスティン、シー：
ネーチャー（に；ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍｉｌｓ
ｔｅｉｎ、 Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ） ２５６＋４９５
、 （１９７５） ）は、この壁を打ち破るものであり
、癌゛細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特異
的に認識するモノクローナル抗体を得ることにより、正
常組織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特異的に排
除できるものと期待される。また、モノクローナル抗体
を用いた診断薬あるいは検査試薬は、正常血清成分に対
する交叉反応がなく、感度良く、癌関連抗原、癌特異抗
原を検出できるものと思われる。
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ）らによって開発されたモノクロー
ナル抗体〔ケーラー、ジーおよびミルスティン、シー：
ネーチャー（に；ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍｉｌｓ
ｔｅｉｎ、 Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ） ２５６＋４９５
、 （１９７５） ）は、この壁を打ち破るものであり
、癌゛細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特異
的に認識するモノクローナル抗体を得ることにより、正
常組織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特異的に排
除できるものと期待される。また、モノクローナル抗体
を用いた診断薬あるいは検査試薬は、正常血清成分に対
する交叉反応がなく、感度良く、癌関連抗原、癌特異抗
原を検出できるものと思われる。
本発明は、特定の癌抗原に対して特異的に反応するモノ
クローナル抗体を提供するものである。
クローナル抗体を提供するものである。
さらに本グ４明は、上記特定癌に対する抗原検出用試薬
を提供するものである。
を提供するものである。
本発明は、食道癌、特に食道癌の分泌物抗原に対して特
異的に反応するモノクローナル抗体よりなるものである
。
異的に反応するモノクローナル抗体よりなるものである
。
本発明のモノクローナル抗体は、いわゆる細胞融合によ
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
抗体産生細胞は、例えば株化癌細胞より得られる抗原に
よって免疫された動物からの肺細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である０株化癌細胞としては、高分化型食道
癌由来の株化癌細胞（ＴＥ−１）が例示される。
よって免疫された動物からの肺細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である０株化癌細胞としては、高分化型食道
癌由来の株化癌細胞（ＴＥ−１）が例示される。
免疫させる動物としてはマウス、ラット、馬、ヤギ、ウ
サギなどが例示される。
サギなどが例示される。
抗体産生細胞は、例えば、次のようにして製造される。
即ち、食道癌由来細胞株ＴＥ−１（高分化型癌）を超音
波処理等で破壊し、遠心分離（例、１０．０００〜２０
．０００Ｇ、 １０〜６０分）を行って細胞抽出液を得
、この上清を分子量１０万〜２００万の物質の分離が可
能なゲル濾過担体（例、セファデックス、セファクリル
、セファロース、バイオゲル等）を使用して分子篩し、
高分子画分と低分子画分とに分離する。かくして得られ
た分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分は、たとえ
ば、完全ソロインドアジェバント （Ｆｒｅｕｎｄ Ｃ
ｏｍｐｌｅｔｅＡｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動物の免
疫用として使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内あるい
は腹腔内に約１．５ Ｘ １０’ ＝１０’ ｃｅｌｌ
相当分／回を注射することにより行われ、初回免疫より
約３〜５週間毎に３度免疫を行い、更に約３ケ月後に最
終免疫を行う、最終免疫より約３〜５日後、免疫動物か
ら抗体産生細胞を分取する。
波処理等で破壊し、遠心分離（例、１０．０００〜２０
．０００Ｇ、 １０〜６０分）を行って細胞抽出液を得
、この上清を分子量１０万〜２００万の物質の分離が可
能なゲル濾過担体（例、セファデックス、セファクリル
、セファロース、バイオゲル等）を使用して分子篩し、
高分子画分と低分子画分とに分離する。かくして得られ
た分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分は、たとえ
ば、完全ソロインドアジェバント （Ｆｒｅｕｎｄ Ｃ
ｏｍｐｌｅｔｅＡｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動物の免
疫用として使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内あるい
は腹腔内に約１．５ Ｘ １０’ ＝１０’ ｃｅｌｌ
相当分／回を注射することにより行われ、初回免疫より
約３〜５週間毎に３度免疫を行い、更に約３ケ月後に最
終免疫を行う、最終免疫より約３〜５日後、免疫動物か
ら抗体産生細胞を分取する。
骨髄腫細胞としてはマウス、ラット、ヒト等由来のもの
が使用される。抗体産生細胞と骨髄腫細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。
が使用される。抗体産生細胞と骨髄腫細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。
細胞融合は、たとえば、ジー ガルファー（Ｇ。
Ｇａ１４ｒｅ） （ネーチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ） ２６
６、５５０． （１９７７））に記載の方法又はこれに
準する方法によって行われる。この際、３０〜５０％ポ
リエチレングリコール（平均分子量１ 、０００〜４，
０００ ）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分
間程度反応させることによって行われる。
６、５５０． （１９７７））に記載の方法又はこれに
準する方法によって行われる。この際、３０〜５０％ポ
リエチレングリコール（平均分子量１ 、０００〜４，
０００ ）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分
間程度反応させることによって行われる。
細胞融合によって得られた細胞は目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中で培
養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を、
例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を産
生しているウェルを得る。このようなウェルから更に例
えば限界希釈法によってクローニングを行ってクローン
を得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタン
を投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１０
〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水を
採取し、検定する６選ばれたクローンの産生ずるモノク
ローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法として
従来既知の硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画
法、陰イオン変換体を応用することで、容易に達成され
る。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中で培
養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を、
例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を産
生しているウェルを得る。このようなウェルから更に例
えば限界希釈法によってクローニングを行ってクローン
を得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタン
を投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１０
〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水を
採取し、検定する６選ばれたクローンの産生ずるモノク
ローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法として
従来既知の硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画
法、陰イオン変換体を応用することで、容易に達成され
る。
本発明によって得られたモノクローナル抗体は、食道癌
分泌物抗原を認識し、かつ正常組織培養細胞、正常組織
とは反応せず、癌特異的な抗原を認識するものと推測さ
れる。即ち、本発明からなるモノクローナル抗体は腫瘍
のイメージングあるいは制癌剤とコンジェゲートさせ、
ターゲティングセラビイ（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ
ｒａｐｙ ）等への臨床応用、あるいは癌の早期発見、
予後の追跡調査に有用な診断薬としての応用が期待され
る。
分泌物抗原を認識し、かつ正常組織培養細胞、正常組織
とは反応せず、癌特異的な抗原を認識するものと推測さ
れる。即ち、本発明からなるモノクローナル抗体は腫瘍
のイメージングあるいは制癌剤とコンジェゲートさせ、
ターゲティングセラビイ（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ
ｒａｐｙ ）等への臨床応用、あるいは癌の早期発見、
予後の追跡調査に有用な診断薬としての応用が期待され
る。
実施例
＋１１ 免疫用癌関連抗原の調製：
株化食道癌細胞（ＴＥ−１株）を超音波処理法で破壊し
、遠心分離（１５，０００Ｇ、 ３０分）を行い細胞抽
出液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラムを用
い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した
。
、遠心分離（１５，０００Ｇ、 ３０分）を行い細胞抽
出液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラムを用
い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した
。
分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分を、完全ソロ
インドアジュバントと混和後、マウスへ約１ケ月毎に３
度免疫を行い、更に３ケ月後に最終免疫を行った。
インドアジュバントと混和後、マウスへ約１ケ月毎に３
度免疫を行い、更に３ケ月後に最終免疫を行った。
最終免疫より４日後にマウス肺臓を取り出し、以下の細
胞融合に用いた。
胞融合に用いた。
（２）細胞融合およびクローニング：
上記のマウス牌細胞と、マウスミエローマＰ３Ｕ１〔カ
レント トピックス イン マイクロバイオロジー゛ア
ンド イムノロジー（Ｃｕｒｒ、 Ｔｏｐ、 Ｍｉｃ−
ｒｏｂｉｏｌ、 ｌ５ｎｕｎｏ１．） ８１．１． （
１９７８） ）とを約３：１の割合で混合し、ケーラー
（Ｋ；ｈｌｅｒ ） らの方法〔イムノロジカル メソ
ッド（アカデミツクプレス）、 ニューヨーク （Ｉｍ
＋ｓｕｎｉｌ）ｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ（Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
）、 ３９１＋ １９７９） ） を一部改変
して・、４５％ポリエチレングリコール（平均分子量４
，０００）を用いて２分間反応させることにより細胞融
合を行った。
レント トピックス イン マイクロバイオロジー゛ア
ンド イムノロジー（Ｃｕｒｒ、 Ｔｏｐ、 Ｍｉｃ−
ｒｏｂｉｏｌ、 ｌ５ｎｕｎｏ１．） ８１．１． （
１９７８） ）とを約３：１の割合で混合し、ケーラー
（Ｋ；ｈｌｅｒ ） らの方法〔イムノロジカル メソ
ッド（アカデミツクプレス）、 ニューヨーク （Ｉｍ
＋ｓｕｎｉｌ）ｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ（Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
）、 ３９１＋ １９７９） ） を一部改変
して・、４５％ポリエチレングリコール（平均分子量４
，０００）を用いて２分間反応させることにより細胞融
合を行った。
本細胞を９６ウエルマイクロプレートに植え込み、ＨＡ
Ｔ培地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表１
）に移行し、更にフラスコ（２５−）に培養できるよう
になってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増殖
の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素抗体法に
より測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求め
るハイブリドーマのクローニングを行った。
Ｔ培地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表１
）に移行し、更にフラスコ（２５−）に培養できるよう
になってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増殖
の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素抗体法に
より測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求め
るハイブリドーマのクローニングを行った。
即ち、マイクロタイクープレートにウェル当たり２５，
０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ−Ｍ
ＥＭ培地で、１０．５．２．５．１個１０．１−となる
ようにハイプリドーマを希釈し、これをマイクロタイタ
ープレートに０．１−ずつ植え込み培養した。４日後に
Ｄ−ＭＥＭ培地を０．１−加え、以後４〜７日に１度、
培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０日で肉
眼で認められるコロニーが形成され、クローン株を得た
。
０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ−Ｍ
ＥＭ培地で、１０．５．２．５．１個１０．１−となる
ようにハイプリドーマを希釈し、これをマイクロタイタ
ープレートに０．１−ずつ植え込み培養した。４日後に
Ｄ−ＭＥＭ培地を０．１−加え、以後４〜７日に１度、
培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０日で肉
眼で認められるコロニーが形成され、クローン株を得た
。
（以下余白）
表１
（３） スクリーニング法：
得られたハイブリドーマについて目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
（イ）方法の説明
以下のようにして酵素抗体法を行った。
抗原（各種株化癌細胞または部分精製癌関連抗腫または
正常細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え
、３７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ＋ Ｉ ｇＡ＋
Ｉ ｇＭ）ウサギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反
応させた。未反応の標識抗体を洗浄除去後、Ｏ−フェニ
レンジアミン液を加え、室温にて３０分間反応させた後
、２Ｍ硫酸を加えて反応を停止させ、４９０ｎｓの吸光
度を測定した。この方法で各種細胞との反応性を調べた
。
正常細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え
、３７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ＋ Ｉ ｇＡ＋
Ｉ ｇＭ）ウサギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反
応させた。未反応の標識抗体を洗浄除去後、Ｏ−フェニ
レンジアミン液を加え、室温にて３０分間反応させた後
、２Ｍ硫酸を加えて反応を停止させ、４９０ｎｓの吸光
度を測定した。この方法で各種細胞との反応性を調べた
。
癌胎児性抗原（ＣＥ Ａ）との交叉反応性は、ＣＥＡ感
作血球を用いＰＨＡ法で行った。
作血球を用いＰＨＡ法で行った。
モノクローナル抗体がＴＥ−１の分泌物抗原か或いは細
胞膜抗原のどちらを認識しているかの検討のために、Ｔ
Ｅ−１の培養上清でモノクローナル抗体とＴＥ−１細胞
そのものとの反応性が阻害されるかどうかを調べた。
胞膜抗原のどちらを認識しているかの検討のために、Ｔ
Ｅ−１の培養上清でモノクローナル抗体とＴＥ−１細胞
そのものとの反応性が阻害されるかどうかを調べた。
酵素抗体法を用いたインヒビジョン テスト （Ｉｎｈ
ｉｂｉｔｉｏｎ Ｔｅ５ｔ ）の具体的な方法は、以下
の通りである。即ち、ハイプリドーマの培養上清を酵素
抗体法でタイトレージョン（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）を行
い、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次に、
ＴＥ−１培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液とし
て、１：５，１：５ｚ ・・・・ｌ：５１１希釈したも
のを適当に希釈したハイプリドーマ培養上清にそれぞれ
等量加え、１時間、３７℃でインキエベーシッンする。
ｉｂｉｔｉｏｎ Ｔｅ５ｔ ）の具体的な方法は、以下
の通りである。即ち、ハイプリドーマの培養上清を酵素
抗体法でタイトレージョン（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）を行
い、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次に、
ＴＥ−１培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液とし
て、１：５，１：５ｚ ・・・・ｌ：５１１希釈したも
のを適当に希釈したハイプリドーマ培養上清にそれぞれ
等量加え、１時間、３７℃でインキエベーシッンする。
そして、通常の酵素抗体法（ターゲット量’ｒＥ−ｔ）
の系でアッセイ（ａｓｓａｙ）を行った。
の系でアッセイ（ａｓｓａｙ）を行った。
（ロ）スクリーニングの流れ
１次スクリーニング：ターゲットセル（Ｔ Ｅ −１）
および正常由来細胞（ＣＣ０ａｓ−５Ｋ ）を用いた酵
素抗体法で、ＴＥ−１に対して陽性でＣＣ［１，Ｓ−！
Ｖに対して陰性なウェルを選抜。
および正常由来細胞（ＣＣ０ａｓ−５Ｋ ）を用いた酵
素抗体法で、ＴＥ−１に対して陽性でＣＣ［１，Ｓ−！
Ｖに対して陰性なウェルを選抜。
２次スクリーニング：さらに他の正常由来細胞株を用い
たアッセイ（ａｓｓａｙ）系ですべてに陰性のウェルを
選抜。
たアッセイ（ａｓｓａｙ）系ですべてに陰性のウェルを
選抜。
３次スクリーニング：以上で選抜された細胞株を２〜３
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来の株化
細胞との反応性を検討するとともに、分泌型或いは細胞
膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体法を用いた
インヒビジョン テストで同定する。
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来の株化
細胞との反応性を検討するとともに、分泌型或いは細胞
膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体法を用いた
インヒビジョン テストで同定する。
（４）モノクローナル抗体の回収、精製：（イ）上記の
スクリーニングによって得られたクローン株を予め０．
５ｍ／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ／
Ｃマウス（雄）の腹腔内へ２．０〜３． ＯＸＩＯ’
ｃｅｌｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノクローナル
抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
スクリーニングによって得られたクローン株を予め０．
５ｍ／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ／
Ｃマウス（雄）の腹腔内へ２．０〜３． ＯＸＩＯ’
ｃｅｌｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノクローナル
抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
この腹水を０．９％ＮａＣＪ液を加え５〜１０倍希釈し
た後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加え
、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるぺ（少量の
０．９％ＮａＣ１液で溶解させた後、０．９％ＮａＣｊ
！液を外液として透析した。
た後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加え
、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるぺ（少量の
０．９％ＮａＣ１液で溶解させた後、０．９％ＮａＣｊ
！液を外液として透析した。
透析終了後、高速液体クロマトグラフィー（ＴＳＫ−Ｇ
ｅｌｌ Ｇ−３０００５Ｗ ）を行い、ＩｇＭ画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。
ｅｌｌ Ｇ−３０００５Ｗ ）を行い、ＩｇＭ画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。
（ロ）本りローン株は、ＢＳＡ含無血清培地中でも増殖
させることができる。即ち、０．５％ＢＳＡ含無血清培
地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上清を
集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度とな
るように加え、沈澱画分を分取し、これに０．９％Ｎａ
（１！液を加え、溶解させた後、更に硫酸アンモニウム
を４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した。こ
の沈澱画分をなるべく少量の０．９・％ＮａＣ１液で溶
解させた後、０．０２ Ｍ生理的リン、酸緩衝液を外液
として透析した。透析終了後、ＤＥＡＥ−セルロファイ
ンカラムに加え、カラムクロマトグラフィーを行った。
させることができる。即ち、０．５％ＢＳＡ含無血清培
地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上清を
集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度とな
るように加え、沈澱画分を分取し、これに０．９％Ｎａ
（１！液を加え、溶解させた後、更に硫酸アンモニウム
を４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した。こ
の沈澱画分をなるべく少量の０．９・％ＮａＣ１液で溶
解させた後、０．０２ Ｍ生理的リン、酸緩衝液を外液
として透析した。透析終了後、ＤＥＡＥ−セルロファイ
ンカラムに加え、カラムクロマトグラフィーを行った。
ＤＩ！ＡＨ−セルロファインクロマトグラフィーの最初
のピーク部分を精製モノクローナル抗体とした。
のピーク部分を精製モノクローナル抗体とした。
（５）モノクローナル抗体の特性：
かくしてスクリーニングされたクローンの産生するモノ
クローナル抗体の性状は、表２及び表３のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。
クローナル抗体の性状は、表２及び表３のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。
なお、本発明で用いた酵素抗体法は、ケネ７ト（Ｋｅｎ
ｎｅｔｔ）らの方法〔モノクローナル アンチボディー
（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、 ３
７６、 （１９８０） ）に準じて細胞をそのまま利用
するエンザイム リンクド イムノソルベント アッセ
イ （Ｅｎｚｙ＋ｗｅ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｓ＋ｕｎｏ
ｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ） （エリザ（ＥＬＩＳＡ）
）法（以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。
ｎｅｔｔ）らの方法〔モノクローナル アンチボディー
（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、 ３
７６、 （１９８０） ）に準じて細胞をそのまま利用
するエンザイム リンクド イムノソルベント アッセ
イ （Ｅｎｚｙ＋ｗｅ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｓ＋ｕｎｏ
ｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ） （エリザ（ＥＬＩＳＡ）
）法（以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。
表２
表３：抗ＴＥ−１モノクロ一ナル抗体の反応特異性ＣＥ
Ｌ Ｉ ＳＡ反応性は、＋は反応陽性と判定される測定
検体の程度で示した。−は陰性を示した。
Ｌ Ｉ ＳＡ反応性は、＋は反応陽性と判定される測定
検体の程度で示した。−は陰性を示した。
ＣＥＬ Ｉ ＳＡ法におけるＯＤ４．。値−： ０ 〜
０．０４９ ± ： ｏ、ｏｓｏ〜０．０９９＋ ：
０．１００〜０．３９９＋＋ ： ０．４００
〜０．６９９＋＋＋ ７ ０．７００〜 手 続 争甫 正 書１発） 昭和６０年１０月１７日
０．０４９ ± ： ｏ、ｏｓｏ〜０．０９９＋ ：
０．１００〜０．３９９＋＋ ： ０．４００
〜０．６９９＋＋＋ ７ ０．７００〜 手 続 争甫 正 書１発） 昭和６０年１０月１７日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 高分化型食道癌由来細胞株（ＴＥ−１）を免疫原として
作製されたハイブリドーマの産生する以下の特性を持つ
モノクローナル抗体。 ［１］Ｉｇクラス：ＩｇＭ ［２］認識抗原タイプ：分泌物抗原 ［３］癌細胞との反応性：次の癌細胞に対して陽性を示
す。 膀胱癌（ＮＢＴ−２）、喉頭癌（ＨＥｐ−２）、食道癌
（ＴＥ−５）、食道癌（ＴＥ−２）、食道癌（ＴＥ−１
）、食道癌（ＴＥ−７）、食道癌（ＴＥ−８）、食道癌
（ＴＥ−９）、食道癌（ＴＥ−１０）、肺癌（ＰＣ−１
）、肺癌（ＰＣ−３）、肺癌（ＰＣ−９）、肺癌（ＰＣ
−１０）、乳癌（ＺＲ７５−１）、胃癌（ＭＫＮ−２８
）、胃癌（ＫＡＴＯ−III）、結腸癌（ＣＯＬＯ−２０
１）、胆のう癌（Ｇ−４１５）、腎細胞癌（ＮＲＣ−１
２）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19560385A JPS6253930A (ja) | 1985-09-03 | 1985-09-03 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19560385A JPS6253930A (ja) | 1985-09-03 | 1985-09-03 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6253930A true JPS6253930A (ja) | 1987-03-09 |
Family
ID=16343901
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19560385A Pending JPS6253930A (ja) | 1985-09-03 | 1985-09-03 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6253930A (ja) |
-
1985
- 1985-09-03 JP JP19560385A patent/JPS6253930A/ja active Pending
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