JPS61250000A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
- Publication number
- JPS61250000A JPS61250000A JP9164985A JP9164985A JPS61250000A JP S61250000 A JPS61250000 A JP S61250000A JP 9164985 A JP9164985 A JP 9164985A JP 9164985 A JP9164985 A JP 9164985A JP S61250000 A JPS61250000 A JP S61250000A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cancer
- antibody
- cell
- cells
- mkn
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は、胃低分化型腺癌由来細胞株（ＭＫＮ−４５）
を免疫原として作製されたハイブリドーマの産生ずる特
定の特性を持つモノクローナル抗体に関する。
を免疫原として作製されたハイブリドーマの産生ずる特
定の特性を持つモノクローナル抗体に関する。
癌研究の究極の目標は、抗癌、制癌作用を示す物質の探
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
免疫反応（抗原−抗体反応）は、非常に特異性が高いも
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセントの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ）らによって開発されたモノクロー
ナル抗体〔ケーラー、ジーおよびミルスティン、シー：
ネーチャー（Ｋｉ５ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍｉｌ
ｓｔｅｉｎ＋ Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ） ２５６＋４９
５、 （１９７５） ）は、この壁を打ち破るものであ
り、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特異
的に認識するモノクローナル抗体を得ることに。
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセントの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ）らによって開発されたモノクロー
ナル抗体〔ケーラー、ジーおよびミルスティン、シー：
ネーチャー（Ｋｉ５ｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍｉｌ
ｓｔｅｉｎ＋ Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ） ２５６＋４９
５、 （１９７５） ）は、この壁を打ち破るものであ
り、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特異
的に認識するモノクローナル抗体を得ることに。
より、正常組織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特
異的に排除できるものと期待される。また、モノクロー
ナル抗体を用いた診断薬あるいは検査試薬は、正常血清
成分に対する交叉反応がなく、感度良く、癌関連抗原、
癌特異抗原を検出できるものと思われる。
異的に排除できるものと期待される。また、モノクロー
ナル抗体を用いた診断薬あるいは検査試薬は、正常血清
成分に対する交叉反応がなく、感度良く、癌関連抗原、
癌特異抗原を検出できるものと思われる。
本発明は、特定の癌抗原に対して特異的に反応するモノ
クローナル抗体を提供するものである。
クローナル抗体を提供するものである。
さらに本発明は、上記特定癌に対する抗原検出用試薬を
提供するものである。
提供するものである。
本発明は、胃癌、特に胃癌の分泌物抗原に対して特異的
に反応するモノクローナル抗体よりなるものである。
に反応するモノクローナル抗体よりなるものである。
本発明のモノクローナル抗体は、いわゆる細胞融合によ
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
抗体産生細胞は、例えば株化癌細胞より得られる抗原に
よって免疫させた動物からの肺細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である０株化癌細胞としては、背低分化型腺
癌由来の株化癌細胞（ＭＫＮ−４５＞が例示される。
よって免疫させた動物からの肺細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である０株化癌細胞としては、背低分化型腺
癌由来の株化癌細胞（ＭＫＮ−４５＞が例示される。
免疫させる動物としてはマウス、ラット、馬、ヤギ、ウ
サギなどが例示される。
サギなどが例示される。
抗体産生細胞は、たとえば次のようにして製造される。
すなわち、胃癌由来細胞株ＭＫＮ−４５（低分化型腺癌
）を超音波処理等で破壊し、遠心分Ｈ（例、１０．００
０〜２０．０００Ｇ、 １０〜６０分）を行って細胞抽
出液を得、この上清を分子量１０万〜２００万の物質の
分離が可能なゲル濾過担体（例、セファデックス、セフ
ァクリル、セファロース、バイオゲル等）を使用して分
子篩し、高分子画分と低分子画分とに分離する。か（し
て得られた分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分は
、たとえば、完全フロインドアジユバント（Ｆｒｅｕｎ
ｄＣｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動
物の免疫用として使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内
あるいは腹腔内に約１．５ Ｘ Ｉ Ｏ’ 〜１０＠ｃ
ｅｌｌ相当分／回を週１〜２回、３〜７週間投与するこ
とによって行われる。最終免疫より約３〜５日後、免疫
動物から抗体産生細胞を分取する。
）を超音波処理等で破壊し、遠心分Ｈ（例、１０．００
０〜２０．０００Ｇ、 １０〜６０分）を行って細胞抽
出液を得、この上清を分子量１０万〜２００万の物質の
分離が可能なゲル濾過担体（例、セファデックス、セフ
ァクリル、セファロース、バイオゲル等）を使用して分
子篩し、高分子画分と低分子画分とに分離する。か（し
て得られた分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分は
、たとえば、完全フロインドアジユバント（Ｆｒｅｕｎ
ｄＣｏｍｐｌｅｔｅ ａｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動
物の免疫用として使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内
あるいは腹腔内に約１．５ Ｘ Ｉ Ｏ’ 〜１０＠ｃ
ｅｌｌ相当分／回を週１〜２回、３〜７週間投与するこ
とによって行われる。最終免疫より約３〜５日後、免疫
動物から抗体産生細胞を分取する。
骨髄腫細胞としては、マウス、ラット、ヒト等由来のも
のが使用される。抗体産生細胞と骨髄細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。
のが使用される。抗体産生細胞と骨髄細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。
細胞融合は、例えばジー、ケーラー（Ｇ、にδｂｉｅｒ
）（ネーチ＋ −（Ｎａｔｕｒｅ） −２５６，４９５
，（１９７５））に記載の方法またはこれに準する方法
によって行われる。この際、３０〜５０％ポリエチレン
グリコール（平均分子量１ 、０００〜４．０００ ＞
を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分間程度反応
させることによって行われる。
）（ネーチ＋ −（Ｎａｔｕｒｅ） −２５６，４９５
，（１９７５））に記載の方法またはこれに準する方法
によって行われる。この際、３０〜５０％ポリエチレン
グリコール（平均分子量１ 、０００〜４．０００ ＞
を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分間程度反応
させることによって行われる。
細胞融合によって得られた細胞はクローニングに付され
る。すなわち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中
で培養し、増殖の見られたウェルの培養上滑中の抗体価
を、例えば酵素抗体法などによって測定し、さらに例え
ば限界希釈法によってクローニングを行ってクローンを
得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタンを
投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１０〜
３０日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水を採
取し、検定する。得られたクローンは、次いで、目的と
するモノクローナル抗体を産生ずるクローンのスクリー
ニングに付される。スクリーニングは、酵素抗体法など
によって追跡される。
る。すなわち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中
で培養し、増殖の見られたウェルの培養上滑中の抗体価
を、例えば酵素抗体法などによって測定し、さらに例え
ば限界希釈法によってクローニングを行ってクローンを
得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタンを
投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１０〜
３０日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水を採
取し、検定する。得られたクローンは、次いで、目的と
するモノクローナル抗体を産生ずるクローンのスクリー
ニングに付される。スクリーニングは、酵素抗体法など
によって追跡される。
選ばれたクローンの産生ずるモノクローナル抗体の回収
は、ＩｇＧの精製法として従来既知の硫安。
は、ＩｇＧの精製法として従来既知の硫安。
分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画法、陰イオン変
換体を応用することで、容易に達成される。
換体を応用することで、容易に達成される。
本発明によって得られたモノクローナル抗体は、腺癌系
に特異的と考えられ、細胞膜表布型抗原を認識し、かつ
正常組織由来培養細胞、赤血球、白血球及び正常組織と
は反応せず、癌特異的な抗原を認識するものと推測され
る。すなわち、本発明からなるモノクローナル抗体は腫
瘍のイメージングおよび制癌剤とコンジユゲートさせｔ
ａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅｒａｐｙ （ターゲティングセ
ラピイ）等への臨床応用が期待される。
に特異的と考えられ、細胞膜表布型抗原を認識し、かつ
正常組織由来培養細胞、赤血球、白血球及び正常組織と
は反応せず、癌特異的な抗原を認識するものと推測され
る。すなわち、本発明からなるモノクローナル抗体は腫
瘍のイメージングおよび制癌剤とコンジユゲートさせｔ
ａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅｒａｐｙ （ターゲティングセ
ラピイ）等への臨床応用が期待される。
実施例
（１） 免疫用癌関連抗原の調製：
株化胃癌細胞（ＭＫＮ−４５株）を超音波処理法で破壊
し、遠心分離（１５，０００Ｇ、３０分）を行い細胞抽
出液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラムを用
い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した
。
し、遠心分離（１５，０００Ｇ、３０分）を行い細胞抽
出液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラムを用
い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した
。
分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分を、完全フロ
インドアジュバントと混和後、マウスへ週１回、５週間
免疫した。
インドアジュバントと混和後、マウスへ週１回、５週間
免疫した。
最終免疫より４日後にマウス肺臓を取り出し、以下の細
胞融合に用いた。
胞融合に用いた。
（２） 細胞融合およびクローニング：上記のマウス
牌細胞と、マウスミエローマＰ３Ｕ１（カレント トビ
カル マイクロバイオロジカルイムノロジー（Ｃｕｒｒ
、 Ｔｏｐ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ｌ５ｎｕｎｏ１
．）８１、１． （１９７８） ）とを４７１の割合で
混合し、ケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ）らの方法〔イムノロ
ジカル メソッド（アカデミツク プレス）、 ニュー
ヨーク（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ
（＾ｃａｄｅｎｉｃ Ｐｒｅｓｓ）＋ Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、、 ３９１．１９７９））を一部改変して、
４２．６％ポリエチレングリコール（平均分子量１，０
００）を用いて２分間反応させることにより細胞融合を
行った。
牌細胞と、マウスミエローマＰ３Ｕ１（カレント トビ
カル マイクロバイオロジカルイムノロジー（Ｃｕｒｒ
、 Ｔｏｐ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ｌ５ｎｕｎｏ１
．）８１、１． （１９７８） ）とを４７１の割合で
混合し、ケーラー（Ｋｏｈｌｅｒ）らの方法〔イムノロ
ジカル メソッド（アカデミツク プレス）、 ニュー
ヨーク（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄ
（＾ｃａｄｅｎｉｃ Ｐｒｅｓｓ）＋ Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、、 ３９１．１９７９））を一部改変して、
４２．６％ポリエチレングリコール（平均分子量１，０
００）を用いて２分間反応させることにより細胞融合を
行った。
本細胞を９６ウエルマイクロプレートに植え込み、ＨＡ
Ｔ壇地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表１
）に移行し、更にフラスコ（２５ｃｄ）に培養できるよ
うになってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増
殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素抗体法
により測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求
めるハイブリドーマのクローニングを行った。
Ｔ壇地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表１
）に移行し、更にフラスコ（２５ｃｄ）に培養できるよ
うになってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増
殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素抗体法
により測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求
めるハイブリドーマのクローニングを行った。
すなわち、マイクロタイタープレートにウェル当たり２
５．０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ
−ＭＥＭ培地で、ｌ０１５．２．５．１個／ ０．１
ｄとなるようにハイブリドーマを希釈し、これをマイク
ロタイタープレートに０．１−ずつ植え込み培養した。
５．０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ
−ＭＥＭ培地で、ｌ０１５．２．５．１個／ ０．１
ｄとなるようにハイブリドーマを希釈し、これをマイク
ロタイタープレートに０．１−ずつ植え込み培養した。
４日後にＤ−ＭＥＭ培地を０．１−加え、以後４〜７日
に１度培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０
日で肉眼で認められるコロニーが形成され、クローン株
を得た。
に１度培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０
日で肉眼で認められるコロニーが形成され、クローン株
を得た。
（以下余白）
表１
（３） スクリーニング法
得られたハイブリドーマについて目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
（イ）方法の説明
以下のようにして酵素抗体法を行った。
抗原（各種株化癌細胞または部分精製癌関連抗原または
正常細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え
、３７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン（ｒｇＧ＋ｒｇＡ＋ＩｇＭ）
ウサギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反応させた。
正常細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え
、３７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン（ｒｇＧ＋ｒｇＡ＋ＩｇＭ）
ウサギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反応させた。
未反応の標識抗体を洗浄後、０−フェニレンジアミン液
を加え、室温にて３０分間反応させた後、２Ｍ硫酸を加
えて反応を停止させ、４９０ｎ−の吸光度を測定した。
を加え、室温にて３０分間反応させた後、２Ｍ硫酸を加
えて反応を停止させ、４９０ｎ−の吸光度を測定した。
この方法で各種細胞との反応性を調べた。なお白血球と
の交叉反応性はＢ−ガラクトシダーゼ（＋１−Ｇａ１ａ
ｃｔｏｓｉｄａｓｅ ）標識抗体を用いた。その他、ヒ
ト赤血球との交叉反応性は、ヒトＡ、Ｂ、０型赤血球を
混合し、ＰＨＡ法で検討した。癌胎児性抗原（Ｃａｒｃ
ｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ） （Ｃ
Ｅ Ａ）との交叉反応性は、ＣＥＡ感作血球を用いＰＨ
Ａ法で行った。
の交叉反応性はＢ−ガラクトシダーゼ（＋１−Ｇａ１ａ
ｃｔｏｓｉｄａｓｅ ）標識抗体を用いた。その他、ヒ
ト赤血球との交叉反応性は、ヒトＡ、Ｂ、０型赤血球を
混合し、ＰＨＡ法で検討した。癌胎児性抗原（Ｃａｒｃ
ｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ） （Ｃ
Ｅ Ａ）との交叉反応性は、ＣＥＡ感作血球を用いＰＨ
Ａ法で行った。
モノクローナル抗体がＭＫＮ−４５の分泌物抗原か或い
は細胞膜抗原のどちらを認識しているがの検討のために
、ＭＫＮ−４５の培養上清でモノクローナル抗体とＭＫ
Ｎ−４５ＩＩ胞そのものとの反応性が阻害されるかどう
かを調べた。
は細胞膜抗原のどちらを認識しているがの検討のために
、ＭＫＮ−４５の培養上清でモノクローナル抗体とＭＫ
Ｎ−４５ＩＩ胞そのものとの反応性が阻害されるかどう
かを調べた。
酵素抗体法を用いたインヒビジョン テスト （Ｉｎｈ
ｉｂｔｔｉｏｎ Ｔｅ５ｔ ）の具体的な方法は、以下
の通りである。即ち、ハイブリドーマの上清を酵素抗体
法でタイトレージョン（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ） ヲ行イ
、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次に、Ｍ
ＫＮ−４５培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液と
して、ｔ’ｓ、１：５” ・、、ｌ：５１）希釈した
ものを適当に希釈したハイブリドーマ上清にそれぞれ等
量加え、１時間、３７℃でインキエベーションする。そ
して、通常の酵素抗体法（ターゲット：ＭＫＮ−４５）
の系でアッセイ（ａｓｓａｙ）を行った。
ｉｂｔｔｉｏｎ Ｔｅ５ｔ ）の具体的な方法は、以下
の通りである。即ち、ハイブリドーマの上清を酵素抗体
法でタイトレージョン（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ） ヲ行イ
、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次に、Ｍ
ＫＮ−４５培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液と
して、ｔ’ｓ、１：５” ・、、ｌ：５１）希釈した
ものを適当に希釈したハイブリドーマ上清にそれぞれ等
量加え、１時間、３７℃でインキエベーションする。そ
して、通常の酵素抗体法（ターゲット：ＭＫＮ−４５）
の系でアッセイ（ａｓｓａｙ）を行った。
（ロ）スクリーニングの流れ
１次スクリーニング：ターゲットセル（ＭＫＮ−４５）
および正常由来細胞（Ｆｌｏｗ ２０００ ）を用いた
酵素抗体法で、ＭＫＮ−４５に対して陽性でＦｌｏｗ
２０００に対して陰性な−ａｌｌを選抜。
および正常由来細胞（Ｆｌｏｗ ２０００ ）を用いた
酵素抗体法で、ＭＫＮ−４５に対して陽性でＦｌｏｗ
２０００に対して陰性な−ａｌｌを選抜。
２次スクリーニング：さらに他の正常由来細胞株及び赤
血球、白血球を用いたアッセイ系ですべてに陰性の−ａ
ｌｌを選抜。
血球、白血球を用いたアッセイ系ですべてに陰性の−ａ
ｌｌを選抜。
３次スクリーニング；以上で選抜された細胞株を２〜３
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来のｃｅ
ｌｌ １ｉｎｅとの反応性を検討するとともに、分泌型
或いは細胞膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体
法を用いたインヒビジョンテストで同定する。
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来のｃｅ
ｌｌ １ｉｎｅとの反応性を検討するとともに、分泌型
或いは細胞膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体
法を用いたインヒビジョンテストで同定する。
（４）モノクローナル抗体の回収、精製（イ）上記のス
クリーニングによって得られたクローン株を予め０．５
−／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ／Ｃ
マウス（雄）の腹腔内へ２．０〜３． ＯＸ １０’
ｃｅｌｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノクローナル
抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
クリーニングによって得られたクローン株を予め０．５
−／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ／Ｃ
マウス（雄）の腹腔内へ２．０〜３． ＯＸ １０’
ｃｅｌｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノクローナル
抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
この腹水を０．９％ＮａＣ１液を加え５〜１０倍希釈し
た後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加え
、沈ｖＩｉ画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少
量の０．９％Ｎａ Ｃｊ！液で溶解させた後、０．９％
Ｎａ Ｃｊｌ液を外液として透析した。
た後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加え
、沈ｖＩｉ画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少
量の０．９％Ｎａ Ｃｊ！液で溶解させた後、０．９％
Ｎａ Ｃｊｌ液を外液として透析した。
透析終了後、高速液体クロマトグラフィー（ＴＳに−Ｇ
ｅｌｌ Ｇ−３０００ＳＷ ）を行い、ＩｇＭ画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。
ｅｌｌ Ｇ−３０００ＳＷ ）を行い、ＩｇＭ画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。
（ロ）本りローン株は、ＢＳＡ含無血清培地中でも増殖
させることができる。すなわち、０．５％ＢＳＡ含無血
清培地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上
清を集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度
となるように加え、沈澱画分を分取し、これに０，９％
ＮａＣ１液を加え、溶解させた後、さらに硫酸アンモニ
ウムを４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した
。この沈澱画分をなるべく少量の０．９％ＮａＣｆｆ１
液で溶解させた後、０．０２ Ｍ生理的リン酸緩衝液を
外液として透析した。透析終了後、この溶液を再び抗牛
胎児血清抗体（ウサギ）を結合したセファロース４Ｂカ
ラムに通した後ＤＥＡＥ−セルロファインカラムに加え
、カラムクロマトグラフィーを行った。
させることができる。すなわち、０．５％ＢＳＡ含無血
清培地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上
清を集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度
となるように加え、沈澱画分を分取し、これに０，９％
ＮａＣ１液を加え、溶解させた後、さらに硫酸アンモニ
ウムを４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した
。この沈澱画分をなるべく少量の０．９％ＮａＣｆｆ１
液で溶解させた後、０．０２ Ｍ生理的リン酸緩衝液を
外液として透析した。透析終了後、この溶液を再び抗牛
胎児血清抗体（ウサギ）を結合したセファロース４Ｂカ
ラムに通した後ＤＥＡＥ−セルロファインカラムに加え
、カラムクロマトグラフィーを行った。
ＤＥＡＥ−セルロファインクロマトグラフィーの最初の
ピーク部分を精製モノクローナル抗体とした。
ピーク部分を精製モノクローナル抗体とした。
（５） モノクローナル抗体の特性
かくしてスクリーニングされたクローンの産生ずるモノ
クローナル抗体の性状は、表２及び表３のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。
クローナル抗体の性状は、表２及び表３のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。
なお、本発明で用いた酵素抗体法は、ケネント（にｅｎ
ｎｅｔｔ） らの方法〔モノクロナル アンチボディー
（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、 ３
７６、 （１９８０） ）に準じて細胞をそのまま利用
するエリザ（ＥＬＩＺ＾）法〔エンザイム リンクトウ
イムノソルベント アッセイＣ［ｉｎｚｙｍｅ Ｌｉ
ｎｋｅｄｆｎｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ））
（以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。
ｎｅｔｔ） らの方法〔モノクロナル アンチボディー
（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、 ３
７６、 （１９８０） ）に準じて細胞をそのまま利用
するエリザ（ＥＬＩＺ＾）法〔エンザイム リンクトウ
イムノソルベント アッセイＣ［ｉｎｚｙｍｅ Ｌｉ
ｎｋｅｄｆｎｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ））
（以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。
（以下余白）
手 続 争甫 正 書帽発）
昭和６０年６月１４日
Claims (3)
- （１）胃低分化型腺癌由来細胞株（ＭＫＮ−４５）を免
疫原として作製されたハイブリドーマの産生する以下の
特性を持つモノクローナル抗体：［１］Ｉｇクラス（Ｌ
ｉｇｈｔ鎖）：ＩｇＧ＿１（Ｋ）［２］認識抗原タイプ
：細胞表面抗原 ［３］癌細胞との反応性：少なべとも胃癌（ＭＫＮ−４
５）、胃癌（ＫＡＴＯ−III）、食道 癌（ＴＥ−３）細胞に対して陽性を示す。 - （２）癌細胞との反応性において、更に肺癌（ＰＣ−１
０：偏平上皮）及び結腸（Ｃｏｌｏ２０１）に対して陽
性を示す特許請求の範囲第（１）項記載のモノクローナ
ル抗体。 - （３）癌細胞との反応性において、さらに肺癌（ＰＣ−
３）および肝癌（ＨＥＫ）に対して陽性を示す特許請求
の範囲第（１）項記載のモノクローナル抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9164985A JPS61250000A (ja) | 1985-04-27 | 1985-04-27 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9164985A JPS61250000A (ja) | 1985-04-27 | 1985-04-27 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61250000A true JPS61250000A (ja) | 1986-11-07 |
Family
ID=14032361
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9164985A Pending JPS61250000A (ja) | 1985-04-27 | 1985-04-27 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61250000A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6236398A (ja) * | 1985-08-12 | 1987-02-17 | Green Cross Corp:The | モノクロ−ナル抗体 |
| JPS6321562A (ja) * | 1986-07-15 | 1988-01-29 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト胃癌単クロ−ン性抗体ａｍｃ−４６２ |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61167699A (ja) * | 1985-01-19 | 1986-07-29 | Green Cross Corp:The | モノクロ−ナル抗体 |
-
1985
- 1985-04-27 JP JP9164985A patent/JPS61250000A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61167699A (ja) * | 1985-01-19 | 1986-07-29 | Green Cross Corp:The | モノクロ−ナル抗体 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6236398A (ja) * | 1985-08-12 | 1987-02-17 | Green Cross Corp:The | モノクロ−ナル抗体 |
| JPS6321562A (ja) * | 1986-07-15 | 1988-01-29 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト胃癌単クロ−ン性抗体ａｍｃ−４６２ |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0268279A2 (en) | Hybridomas producing monoclonal antibodies to new mucin epitopes | |
| JPH0751062B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| EP0171083B1 (en) | Monoclonal antibody, process for preparing same, reagent for detecting cancer antigen containing the monoclonal antibody and process for preparing same | |
| CA1320460C (en) | Anti-human gastric cancer monoclonal antibody | |
| JPS61250000A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPH0570434B2 (ja) | ||
| JPS60190722A (ja) | 抗ヒト肺癌単クロ−ン性抗体 | |
| JPS61183300A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS61249999A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS61167699A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS60208925A (ja) | ガン診断と治療のためのモノクロ−ナル抗体の生産法 | |
| JPH042239B2 (ja) | ||
| JPS6236397A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6253930A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS63157995A (ja) | 抗ヒト大腸癌単クロ−ン性抗体ａｃｃ−５７４ | |
| JPS6236398A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6279793A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6245599A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS63179895A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS63243097A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JP2743015B2 (ja) | Ｏ―アセチル化されたガングリオシドｇｍ▲下３▼に特異的なモノクローナル抗体、該抗体を産生するハイブリドーマ及びその作製方法 | |
| JPS62123200A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS63254992A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPH0379994B2 (ja) | ||
| JPS6312295A (ja) | 甲状腺癌特異抗原に対するモノクロ−ナル抗体 |