JPS63243097A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は胆管癌由来株（ＨＥＫ）を免疫原として作製さ
れたハイブリドーマの産生ずる特定の性質を有するモノ
クローナル抗体に関する。

〔従来技術〕

癌研究の究極の目標は、抗癌、制癌作用を示す物質の探
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでな（
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、いかに有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。

免疫反応（抗原−抗体反応）は、非常に特異性が高いも
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉ　ｌ５ｔｅｊｎ）　らによって開発されたモノクロ
ーナル抗体〔ケーラー、ジー、およびミルスティン、シ
ー、：ネーチー１−−　（Ｋｉ；ｈｌｅｒ、　Ｇ、　ａ
ｎｄ旧１ｓｔｅｉｎ、　Ｃ，：　Ｎａｔｕｒｅ　）３５
６、　４９５　（１９７５））は、この壁を打ち破るも
のであり、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原
をｖｆ異的に認識するモノクローナル抗体を得ることに
より、正常細胞へのダメージを与えずに癌細胞のみを特
異的に排除できるものと期待される。

また、モノクローナル抗体を用いた診断薬あるいは検査
試薬は、正常血清成分に対する交叉反応がなく、感度良
く、癌関連抗原、癌特異抗原を検出できるものと思われ
る。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、特定の癌抗原に対して特異的る反応す
るモノクローナル抗体を提供することにある。さらには
、上記特定癌に対する抗原検出用試薬を提供することに
ある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は食道癌、肺癌、胃癌、結腸癌、ＨＵ管癌、子宮
内膜癌に対して特異的に反応するモノクローナル抗体よ
りなるものである。

即ち、本発明のモノクローナル抗体は胆管癌由来株（Ｈ
Ｅ　Ｋ　）を免疫原として作製されたハイブリドーマの
産生ずる以下の性質を有するモノクローナル抗体である
： （１）Ｉｇクラス（サブクラス）：ＩｇＭ（に）■認識
抗原タイプ：分泌型抗原 ■癌細胞との反応性：少なくとも食道癌（ＴＥ−１）、
食道癌（ＴＥ−２）、食道癌（ＴＥ−７）、食道癌（Ｔ
Ｅ−９）、食道癌（ＴＥ−１０＞　、肺癌（ＰＣ−３）
　、胃癌（ＭＫＮ−４５）　、胃癌（ＫＡＴＯ−１’ｌ
ｌ）　、胆管癌（ＨＥＫ）　、子宮内膜癌（Ｉ　ＳＨＩ
　ＫＡＷＡ）　、結腸癌（ＣＯＬＯ−２０１）に対して
陽性を示す。

本発明のモノクローナル抗体は、■に示したごとき癌細
胞との反応性を有するほか、食道癌（ＴＥ−３）、食道
癌（ＴＥ−６）、胃癌（ＭＫＮ−２８）、結腸癌（ＣＯ
ＬＯ−３２０ＤＭ）に対して陽性を示すモノクローナル
抗体、食道癌（ＴＥ−５）に対して陽性を示すモノクロ
ーナル抗体お、　　　よび食道癌（ＴＥ−３）、肺癌（
ＰＣ−９）、胃癌（ＮＲＣ−１２）　、卵巣奇形腫（Ｐ
Ａ−１）に対して陽性を示すモノクローナル抗体の三種
に分類される。

本発明のモノクローナル抗体は、いわゆる細胞融合によ
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記のものを使用する以外は、従来既知
の方法に準ずればよい。

抗体産生細胞は免疫原、例えば株化癌細胞より得られる
抗原によって免疫された動物からの肺細胞、リンパ節細
胞、Ｂ−リンパ球である。株化癌細胞としては、胆管癌
由来の株化癌細胞（ＨＥ　Ｋ）が例示される。

この細胞の特徴は、癌胎児性抗原（以下、ＣＥＡと呼称
）、特開昭６１−４４．９００号で開示されているモノ
クローナル抗体（以下、ＫＭＯＩと呼称）と反応する抗
原物質（以下、ＫＭＯＩ抗原と呼称）、特開昭６１〜６
３７００号で開示されている抗原物質（シアル化ルイス
Ｘともいう。以下、Ｃ３ＬＥＸ−１抗原と呼称）などの
腫瘍マーカーを産生ずることである。

当該免疫原の調製方法としては、株化癌細胞の培養株を
用いる方法、切除細胞またはその抽出液を用いる方法、
手術時の切除細胞から新たに樹立した株細胞を用いる方
法等が挙げられる。

胆管癌由来株（ＨＢ　Ｋ）としては、胆管癌由来組織よ
り樹立されたものが好適に使用される。

免疫される動物としては、例えばマウス、ラット、馬、
ヤギ、ウサギなどが例示される。

本発明の免疫原は、例えば、完全フロインドアジュバン
ト（Ｆｒｅｕｎｄ　Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ａｄｊｕｖａｎ
ｔｌｌ　と混和後、動物の免疫用として使用する。免疫
は動物の皮下、筋肉内あるいは腹腔内に約１０’〜１０
８ｃｅｌｌ相当分／回を注射することにより行われ、初
回免疫より約１〜４週間毎に２〜５度免疫を行い、さら
に約１〜４ケ月後に最終免疫を行う。最終免疫より約３
〜５日後、免疫動物から抗体産生細胞を分取する。

骨髄腫細胞としては、たとえばマウス、ラット、ヒト等
由来のものが使用される。たとえば、マウスミエローマ
Ｐ３Ｕ１、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５．３などが挙げられ
る。抗体産生細胞と骨髄腫細胞とは同種動物由来のもの
であることが好ましい。

細胞融合は、たとえば、ジー、ガルファ　（Ｇ。

Ｇａ１ｆｒｅ）　Ｃネーチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　２
６６、５５０　（１９７７））に記載の方法又はこれに
準する方法によって行われる。この際、３０〜５０％ポ
リエチレングリコール（平均分子量１　、０００〜４　
、０００）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜４週
間毎度反応させることによって行われる。

細胞融合によって得られた細胞は目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中で培
養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を、
例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を産
生じているウェルを得る。このようなウェルから更に例
えば限界希釈法によってクローニングを行ってクローン
を得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタン
を投与したＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　Ｃマウスの腹腔内へ移
植し、１０〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に
含む腹水を採取し、検定する。または、ウシ血清アルブ
ミン（０，１〜１％）含有無血清培地中でも増殖させる
ことができる。即ち、０．５％ウシ血清アルブミン含無
血清培地（たとえば、ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖
させ、培養上清を集める。選ばれたクローンの産生ずる
モノクローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法
として従来既知の硫安分画法、ポリエチレングリコール
分画法、エタノール分画法、陰イオン変換体を応用する
ことで、容易に達成される。

〔発明の効果〕

本発明によって得られたモノクローナル抗体は、分泌型
抗原を認識し、かつ正常細胞由来培養細胞、赤血球、白
血球および正常組織とは反応せず、癌特異的な抗原を認
識するものと推測される。すなわち、本発明からなるモ
ノクローナル抗体は癌の早期発見、予後の追跡調査に有
用な診断薬として、および腫瘍のイメージングあるいは
制癌剤とコンジュゲートさせ、ターゲツティング療法等
への臨床応用が期待される。

〔実施例・実験例〕

実施例１ （１１免疫原の調製： （１−４）胆管癌細胞の樹立 神戸大学より供与された手術材料（表１参照）から５Ｘ
１０Ｘ２ｍｍ程度のブロック４〜５個を細切した。リン
酸緩衝液で遠心洗浄後、０．０５％のコラゲナーゼ（和
光純薬社）、１００　Ｕ　／−のトラジロール（バイエ
ル社）を含むリン酸緩衝液３Ｑｍｊに懸濁し、３７℃で
１時間振盪した。遠心（１０００ｒｐｍＸ５分）後上清
を捨て、沈渣をＭＥＭで一度遠心洗浄し１０００　Ｕ／
ｍｌのディスパーゼ（三光純薬社）を含む１０％のウシ
胎児血清を含むＭＥＭ培地３０ｍ１に懸濁し、３７℃で
１時間振盪した。

３分間静置することにより上清と沈渣を分け、どちらも
遠心洗浄した後、２０％のウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ
−１６４０培地に懸濁し、培養フラスコへ入れ３７℃、
５％ＣＯｚインキュベーク−中に静置した。１週間〜１
０日に１度培地交換し、上皮性様細胞のコロニーが確認
された後は、１週間に２度培地交換した。８代目からは
ウシ胎児血清を１０％に下げて継代した。以後の継代は
１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で行
った。この細胞株（ＨＥ　Ｋと命名）の培養上清中には
、ＣＥＡ感作血球を用いる赤血球擬集抑制試験法（以下
、ＨＡＩ法と呼称）で２５６〜５１２ｎｇ／ｍ／のＣＥ
Ａ、、ＫＭＯ１，−ＲＰＨＡ試薬で、１：２５６のＫＭ
ＯＩ抗原が分泌されていた。特開昭６１−６３７００号
で開示されているモノクローナル抗体（前記シアル化ル
イスＸを免疫原として得られる。以下、Ｃ３ＬＥｘ−１
と呼称）−ＲＰＨＡ試薬では１：３２の値を示した。ア
ルファフェトプロティン（以下、ＡＦＰと呼称１−ＲＰ
ＨＡ試薬ではＡＦＰは検出されなかった。

表１　手術材料の所見 患者　　二６４才、男性 血液型　：Ａ型　ＲｈＤ（＋） 腫瘍　　：　７　Ｘ　６　Ｘ　７　ｃｍ　　Ｓｔａｇｅ
　ｍ病理所見：　Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃｅｌｌｕｌａｒ
　ｃａｒｃｉｎｏｍａＣｈｏｌａｎｇｉｏｍａ／ｂｉｌ
ｅ　ｄｕｃｔ　ｃａｎｃｅｒ腫瘍マーカー　ＡＦＰ　　
　　：　　　陰性ＣＥＡ　　　　’　　　１０．２ｎｇ
／　ｍｌβ２　マクログロブリン　°　　　　　　　１
．　８　ｍｇ／　　ｍｌフェリチン　：　　１６７．５
ｎｇ／　ｍ１ＣＡ１９　　・　９：６２００　　　　Ｕ
／ｍｌ（１−ｉｉ　）免疫 培養面積１５０ｄのフラスコはぼ全面に増殖したＨＥＫ
細胞（１，５〜２．０Ｘ１０７個）を抗ヒト白血球マウ
ス抗体と室温で１時間インキュベートした後、Ｂ　Ａ　
Ｌ　Ｂ／Ｃ系マウスの腹腔内へ免疫した。１０日〜１ケ
月間隔で４回免疫した後、２週目に採血し、血中抗体価
を測定した。さらに３ケ月後、２．０ＸＩ０７個のＨＥ
Ｋ細胞を腹腔内へ免疫した。

最終免疫より４日後にマウス肺臓を摘出し、以下の細胞
融合に用いた。

（２）細胞融合およびクローニング： 上記のマウス肺細胞９．０Ｘ１０７個と、マウスミエロ
ーマＰ３Ｕ１　　（カレント　トビツク　インマイクロ
バイオロジー　アンド　イムノロジー（Ｃｕｒｒ、　Ｔ
ｏｐ、　Ｍｉｃｒｏｂ＋ｏ１．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、
　８１　Ｈ１９７８））３．９Ｘ１（１７個とを混合し
、ケーラー（＋（３ｈｌｅｒ）らの方法〔イムノロジカ
ル　メソッド（アカデミツク　プレス）、ニューヨーク
（ＬｎｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄ　（Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）＋　Ｎｅ１ｖ　Ｙｏｒｋ　＋
　＋３９１＋（１９７９）　）を一部改変して、４５％
ポリエチレングリコール（平均分子ｉ、１，０００）を
用いて１分間反応させることにより細胞融合を行った。

処理された細胞を９６ウエルマイクロプレートに植え込
み、ＨＡＴ培地（表２）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培
地（表２）に移行し、更にフラスコ（２５ｃｎ＋）に培
養できるようになってからＤ−ＭＢＭ培地（表２）で培
養した。増殖の見られたカエルの培養上滑中の抗体価を
酵素抗体法により測定し、適切なウェルから限界希釈法
により、求めるハイブリドーマのクローニングを行った
。

すなわち、マイクロタイタープレートにウェル当たり２
５，０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ
−ＭＥＭ培地で、１０．５．２．５．１個／　０．１　
ｍ７となるようにハイブリドーマを希釈し、これをマイ
クロタイクープレートにＱ、　ｌ　ｍｌずつ植え込み培
養した。４日後にＤ−ＭＥＭ培地を０．１献加え、以後
４〜７日に１度、培地の半量交換を行った。培養開始後
１０〜２０日で肉眼で認められるコロニーが形成され、
クローン株を得た。

〔余白〕

表２ （３）　　スクリーニング法 得られたハイブリドーマについて目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。

（イ）方法の説明 以下のようにして酵素抗体法を行った。

抗原（各種株化癌細胞、部分精製癌関連抗原または正常
細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え、３
７°Ｃで１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標識
抗マウス免疫グロブリン（ＩｇＧ＋ＩｇＡ＋ＩｇＭ）ウ
サギ抗体を加え、さらに３７°Ｃで１時間反応させた。

未反応の標識抗体を洗浄除去後、０−フェニレンジアミ
ン液を加え、室温にて３０分間反応させた後、２Ｍ硫酸
を加えて反応を停止させ、４９０ｒ＋ｍの吸光度を測定
した。

この方法で各種細胞との反応性を調べた。ＣＥＡとの交
叉反応性は、ＣＥＡ感作血球を用いＰ　ＨＡ法で行った
。

ＫＭＯＩ抗原、Ｃ３ＬＥＸ−１抗原に対する抗体は、各
々ＫＭＯＩ抗原、Ｃ３ＬＥＸ−１抗原の存在が確認され
ている癌細胞の培養上清と、ＫＭｏｌ−ＲＰＨＡ試薬、
ＣＳ　Ｌ　Ｅ　Ｘ　−１−ＲＰ　ＨＡ試薬を用いるＨＡ
Ｉ法で測定した。すなわち、ハイブリドーマ上清と、適
当に希釈した癌細胞（ＨＥＫ）培養上清を３７℃で１時
間反応させた後、残存する抗原量を各ＲＰＨＡ試薬で測
定した。（表４） モノクローナル抗体がＨＥＫの分泌型抗原かあるいは細
胞膜表作型抗原のどちらを認識しているかの検討のため
に、ＨＥＫの培養上清でモノクローナル抗体とＨＥＫ細
胞そのものとの反応性が阻害されるかどうかを調べた。

酵素抗体法を用いたインヒビジョン　テストの具体的な
方法は、以下の通りである。即ち、ハイブリドーマの培
養上清を酵素抗体法でタイトレージョンを行い、それよ
り判断して適当な希釈倍率を決める。次にＨＥＫ培養上
清を５〜２５倍濃縮したものを原液として、１：５．１
５”　　・・・１：５ｎ希釈したものを適当に希釈した
ハイブリドーマ培養上清にそれぞれ等量加え、１時間、
３７℃でインキュベーションする。そして、通常の酵素
抗体法（ｔａｒｇｅｔ　：　ＨＥ　Ｋ　）の系でアッセ
イを行った。

（ロ）スクリーニングの流れ １次スクリーニング：ターゲットセル（ＨＥＫ）および
胎児肺由来線維芽細胞（Ｆｌｏｕ−２０００）を用いた
酵素抗体法で、ＨＥ　Ｋに対して陽性でＦｌｏｗ−２０
００に対して陰性なウェルを選抜。

２次スクリーニング：　１次スクリーニングで選抜され
た細胞株を２〜３回クローニングし、その培養上清を多
くの癌由来の株化細胞や他の正常組織由来細胞との反応
性を検討するとともに、分泌型或いは細胞膜表作型抗原
のどちらを認識するかを、酵素抗体法を用いたインヒビ
ジョン　テストで同定する。

その結果、細胞融合時の９６０ウエル（ｌウェル当たり
の肺細胞９Ｘ１０’個）のうち、１次スクリーニングで
６２ウエルを選抜した。

さらに、２次スクリーニングの結果、５３ウエルでＨＥ
Ｋに対する抗体価が保持されており、ＫＭｏ１様の抗体
を産生じているものが１０ウエル、ＣＥＡに対する抗体
を産生じていると思われるものが１１ウエルあり、Ｃ３
ＬＥＸ−１様の抗体を産生じていると思われるウェルは
見出されなかった。

（４）　　モノクローナル抗体の回収、精製上記のスク
リーニングによって得られたクローン株３種を予め０．
５ｍｌ／匹プリヌタンを投与した４週令以後のＢＡＬＢ
／Ｃマウス（ｔ＆）の腹腔内へ２．０〜３．　ＯＸ　１
０’　ｃｅｌｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノクロ
ーナル抗体を高濃度に含む腹水を採取した。

この腹水に０．９％Ｎａ　Ｃｆｆ液を加え５〜１０倍希
釈した後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように
加え、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少
量の０．９％ＮａＣｌ１液で溶解さセた後、０．９％Ｎ
ａ　Ｃｆ液を外液として透析した。

透析終了後、高速液体クロマトグラフィー（ＴＳＫ−Ｇ
ｅｌｌ　Ｇ−３０００ＳＷ）を行い、免疫グロブリン画
分を得、精製モノクローナル抗体とした。

（５）　　モノクローナル抗体の特性 かくしてスクリーニングされたクローンの産生ずるモノ
クローナル抗体の性状は、表３及び表５のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフクロニー法で検定した
。

なお、スクリーニングに供した細胞株は以下のように入
手した。

胆管癌細胞株ＨＥ　Ｋは前述済みである。ＰＡ−１゜Ｈ
ｔ！ｐ−２，’ＩＢ、　　ＰＡＮＣ−１，ＭＴＡＰａＣ
ａ−２，Ｃ０ＬＯ−２０１，ＣＯＬＯ−３２０ＤＭ、　
ＺＲ７５−１の各細胞は大日本製薬−から、ＮＰＣ−１
２，ＮＢＴ−２，ＰＣ−１，ＰＣ−３，ＰＣ−９，ＰＣ
−１０，ＭＫＮ−２８゜ＭＫＮ−４５，ＫＡＴＯ〜■の
各細胞は日本免疫生物研究所から、ＴＥ−１，ＴＥ−２
，Ｔ［！−３，ＴＥ−４，ＴＲ−５，ＴＥ−６，ＴＥ−
７，ＴＥ−８，ＴＥ−飢ＴＥ−１０，ＴＥ−１１は東北
大学から、ｌ５ＨＩＫ静八株は大阪大学から、Ｇ−４１
５は筑波大学から、ＰＡは近畿大学から入手した。

以上の癌細胞株はいずれも１０％ウシ胎児血清（Ｆｉｌ
ｔｒｏｎ）　、２　ｍ　Ｍのし一グルタミン、１ｍＭの
ピルビン酸ナトリウム、１００１ＬＩ／　ｍｌのペニシ
リン、１１００ｐ／ｍｉのストレプトマイシンを含むＲ
ＰＭＩ−１６４０培地で継代培養した。

Ｐｌｏｌｌ−２０００，Ｆｌｏｗ−１１０００，ＣＣＤ
＋ｅ−ＣＯｌ　　ｃｃ口、、−３Ｋ。

ＷＩＳＨ，ＰＬの各細胞は大日本製薬−から入手した。

ＨＫＧ、　ＮＫ−３は■ミトリ十字のものである。

以上の細胞はいずれも１０％ウシ胎児血清（Ｐｉｌｔｒ
ｏｎ）、１００　ｒｕ／　ｍｌのペニシリン、１１００
ｐ／　ｍｌのストレプトマイシンを含むＭＥＭ培地で継
代培養した。

マウスミエローマＰ３Ｕ１株は大日本製薬−から入手し
た。１０％馬血清（Ｐｌｏｗ）　、２ｍＭのし−グルタ
ミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１００１　Ｕ／
ｍｌのペニシリン、１００ｐｉｒ／ｎ＋７のストレプト
マイシンを含むＤ−ＭＥＭ培地で継代培養した。

なお、本発明で用いた酵素抗体法は、ケネソト（Ｋｅｎ
ｎｅｔｔ）　らの方法〔モノクローナル　アンチボディ
ー（ブレニウム　プレス）ニューヨーク　ロンドン、　
３７６、　（１９８０））に準じて細胞をそのまま利用
するエリザ（ＥＬＩＳＡ）法〔エンザイム　リンクド　
イムノソルベント　アッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ　Ｌｉｎｋ
ｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　Ａｓ５ａｙ））　（
以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。

表３＝抗体の性状 表４：腫瘍マーカーとの反応性 ＋は陽性、−は陰性を表わす

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）胆管癌由来株（ＨＥＫ）を免疫原として作製され
   たハイブリドーマの産生する以下の性質を有するモノク
   ローナル抗体 （１）Ｉｇクラス（サブクラス）：ＩｇＭ（κ）（２）
   認識抗原タイプ：分泌型抗原 （３）癌細胞との反応性：少なくとも食道癌（ＴＥ−１
   ）、食道癌（ＴＥ−２）、食道癌（ＴＥ−７）、食道癌
   （ＴＥ−９）、食道癌（ＴＥ−１０）、肺癌（ＰＣ−３
   ）、胃癌（ＭＫＮ−４５）、胃癌（ＫＡＴＯ−III）、
   胆管癌（ＨＥＫ）、子宮内膜癌（ＩＳＨＩＫＡＷＡ）、
   結腸癌（ＣＯＬＯ−２０１）に対して陽性を示す。 （２）癌細胞との反応性が、さらに食道癌（ＴＥ−３）
   、食道癌（ＴＥ−６）、胃癌（ＭＫＮ−２８）、結腸癌
   （ＣＯＬＯ−３２０ＤＭ）に対して陽性を示す特許請求
   の範囲第（１）項記載のモノクローナル抗体。 （３）癌細胞との反応性が、さらに食道癌（ＴＥ−５）
   に対して陽性を示す特許請求の範囲第（１）項記載のモ
   ノクローナル抗体。 （４）癌細胞との反応性が、さらに食道癌（ＴＥ−３）
   、肺癌（ＰＣ−９）、胃癌（ＮＲＣ−１２）、卵巣奇形
   腫（ＰＡ−１）に対して陽性を示す特許請求の範囲第（
   １）項記載のモノクローナル抗体。