JPH0570434B2

JPH0570434B2 -

Info

Publication number: JPH0570434B2
Application number: JP60225327A
Authority: JP
Inventors: Hajime Koda; Nobuo Hanai; Kyonari Shidara
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1985-10-09
Filing date: 1985-10-09
Publication date: 1993-10-05
Also published as: CA1306707C; DE3684857D1; JPS6283898A; EP0218257A2; EP0218257A3; EP0218257B1

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野本発明は、ヒト肺癌、特にヒト肺腺癌に特異性
を有し、その認識する抗原（エピトープ）がシア
ル酸化された糖タンパクあるいは糖脂質であるこ
とを特徴とする単クローン性抗体およびその肺腺
癌の病理診断ならびに血清診断・モニタリングへ
の利用に関するものである。従来技術最近、免疫動物からの抗体産生細胞と骨髄腫細
胞とを融合させて得られるハイブリドーマを培養
して特異的に腫瘍と反応する単クローン性抗体を
得る方法が報告されている。ヒト肺癌に対する単
クローン性抗体をこのような手法で得ることもす
でに報告されている〔キヤンサー・リサーチ
（Cancer Res.）42，150（1982）、キヤンサー・リ
サーチ（Cancer Res.）42，3187（1982）、ジヤー
ナル・オブ・サージカル・リサーチ（J.Surgical
Res.），30，403（1981）、トランスプランテーシヨ
ン・プロシイーデイング（Transplantation
Proceed.），(4)，1942（1981）、ジヤーナル・
オブ・イムノロジイ（J.lmmunol.），131(1)497
（1983）、免疫学会要旨P.212（演題番号107番）
（1983）京泉誠之〕。しかし、それらの単クローン
性抗体の多くは、肺癌以外の癌や、ヒト正常細胞
とも反応するものがほとんど肺癌特異的といえる
ものは少ない。また、比較的肺癌に特異的といえ
るもの〔ジヤーナル・オブ・イムノロジイ（J.
Immunol.）131(1) 497（1983）〕でも、小細胞癌
と非小細胞癌を識別することができるのみで扁平
上皮癌、腫癌などの組織型を判別することはでき
ない。また、肺癌の血清診断へ応用できる単クロ
ーン性抗体についての報告はない。最近、抗ヒト消化器癌（胃癌、膵癌、大腸癌）
単クローン性抗体を用いる消化器癌の血清診断が
報告されている。これらの単クローン性抗体はい
ずれも、血清中抗原としてシアル酸化された糖タ
ンパクを認識しているものである〔ジヤーナル・
オブ・クリニカル・イムノロジイ（J.Clin.
Immunol.），２，135（1982），フエデレーシヨ
ン・プロシイーデイングス（Federation
Proc.），41，898（1982），キヤンサー・リサーチ
（Cancer Res.），42，601（1982），ハイブリドー
マ（Hybridoma），２，110（1983）〕。一方、肺癌
に対する単クローン性抗体で、シアル酸化された
糖蛋白質あるいは糖脂質を認識するものはこれま
で全く報告がない。発明が解決すべき問題点および解決方法肺癌に特異的に反応する単クローン性抗体が得
られれば、肺癌の診断に有用である。肺癌の単ク
ローン性抗体は知られているけれども、さらに優
れた抗体の開発が望まれている。本発明者はヒト
肺腺癌組織膜成分で免疫した抗体産生マウスの脾
細胞とマウス骨髄腫細胞とが融合したハイブリド
ーマが生産するモノクローナル抗体が、肺腫癌に
対して特に優れた反応性を有し、肺癌の血清診断
に応用できることを見出し本発明を完成した。以下本発明について詳細に説明する。本発明は、ヒト肺腺癌組織膜成分で免疫したマ
ウスの脾細胞とマウス骨髄腫細胞とを融合させて
ハイブリドーマを作製し、ヒト肺腺癌に特異性を
有する単クローン性抗体を選択し、該ハイブリド
ーマを培地中に培養するかマウスに投与して該マ
ウスで腹水化し、該培養物または腹水より採取す
ることにより得られ、かつシアル酸化された糖蛋
白質または糖脂質を抗原として認識する抗ヒト肺
腺癌特異的単クローン性抗体を提供する。本発明の単クローン性抗体は、IgMクラスに属
し、肺腫癌細胞に対して特異的に反応し、シアル
酸化された糖蛋白質または糖脂質を抗原として認
識する。本発明単クローン性抗体の具体例としては、ハ
イブリドーマ細胞株ALC−186（NCACC
85082903）が生産するALC−186があげられる。以下に本発明単クローン性抗体の製造法を詳細
に説明する。 (1) 動物の免疫と抗体産生細胞の調製３〜10週令、望ましくは８週令のマウスに、ヒ
ト肺腺癌の細胞、組織あるいはそれらの膜成分を
免疫して、その動物の脾、リンパ節、末梢血中の
抗体産生細胞を調製する。免疫するマウスはヒト
正常肺細胞で前処理して免疫寛容にしたマウスを
用いるのが好ましい。免疫の方法は、動物の皮下
あるいは静脈内あるいは腹腔内に、適当なアジユ
バント〔例えば、フロインドの完全アジユバント
（Complete Freund′s Adjuvant）または、水酸
化アルミニウムゲルと百日咳菌ワクチンなど〕と
ともにヒト肺腺癌細胞（10⁶〜10⁷細胞／匹）、ヒ
ト肺腺癌組織もしくはそれらの膜成分（膜断片）
（10〜500μg／匹）を投与する。以後、１〜２週
間おきに、抗原を２〜５回投与する。各免疫後３
〜７日目に眼底静脈叢より採血し、その血清がヒ
ト肺腺癌と反応することを以下に示す酵素免疫測
定法〔酵素免疫測定法（ELISA）：医学書院刊
1976年〕などで調べる。酵素免疫測定法： 96穴のEIA用プレート〔フロー・ラボラトリー
ズ（Flow Laboratories）社製〕に、正常あるい
は腫瘍細胞、組織の膜成分（蛋白量として10〜
1000μg／ml含有する膜断片）を100〜200μ／穴
ずつ分注し、４℃で１〜２晩放置して、上清を抜
き去つた後、レジン水あるいは、PBS（リン酸二
ナトリウム1.83ｇ、リン酸一カリウム0.21ｇ、食
塩7.65ｇ、蒸溜水１、PH7.2）でよく洗浄後、
１％BSA（牛血清アルブミン）−PBSを100〜200μ
／穴分注し、４℃で１〜２晩放置して、プレー
ト上に残つた蛋白質との結合残基をブロツク（ブ
ロツキング）した。その後、BSA−PBSを捨て、
レジン水あるいはPBSでよく洗浄し後、第１抗
体として、BSA−PBSで希釈した試料（マウス
血清、ハイブリドーマ培養Ａ上清、粗精製モノク
ローナル抗体）を100μ／穴分注し、４℃で１
晩放置する。レジン水で１回、2M NaCl溶液で
６回洗浄した後、第２抗体としてウサギの抗マウ
スイムノグロブリンIgG−ペルオキシダーゼ結合
物〔ダコ（DAKO）社製、販売元協和メデツク
ス〕の100倍希釈液を100μ／穴分注し、室温で
２時間放置する。 PBSでよく洗浄後、ABTS基質液〔２，2′−ア
ジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−ス
ルホン酸）二アンモニウム550mgを0.1Mクエン酸
緩衝液（PH4.2）１に溶かした溶液に、使用直
前に過酸化水素1μ／mlを加えた溶液〕を用い、
発色をOD_415onの吸光度で測定する。このとき、
肺腫癌細胞、組織あるいはそれらの膜成分に対し
て強く反応するマウスをヒト肺腺癌免疫マウスと
してハイブリドーマ作製のための抗体産生細胞の
供給源として用いる。酵素免疫測定法を行うにあたつて、抗原とし
て、細胞そのものを用いる場合は、フアルコン
（Falcon）3072プレート中で、標的細胞を培養
し、0.25％グルタールアルデヒド−PBSを加え、
室温に１〜２時間放置し、PBSでよく洗浄後、
１％BSA−PBS100〜200μを加え、２時間放置
し、レジン水またはPBSでよく洗浄し、そのプ
レートを用いて、一般の抗原コートプレートを用
いるのと同様の方法にて、抗体価の測定を行つ
た。細胞融合に供するにあたつて、免疫化マウスに
融合処理の３〜４日前に、ヒト肺腺癌細胞、組織
あるいはその膜成分を２〜５×10⁶細胞／匹ある
いは20〜400μ／匹腔内に投与し、脾臓細胞を
摘出し、脾細胞を調製する。脾臓をMEM（日水
製薬社製）中で細断し、ピンセツトでほぐし、
1200rpm、５分間遠心分離にかけ、上清を捨て、
トリス−塩化アンモニウム緩衝液（PH7.65）で１
〜２分間処理し赤血球を除去し、BMEMで３回
洗浄して融合用脾細胞として提供する。 (2) 骨髄腫細胞の調製骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化
細胞を使用する。たとえば、８−アザグアニン耐
性マウス（BALB／ｃ由来）骨髄腫細胞株P3−
X63Ag8−U1（P3−U1）〔カレント・トピツク
ス・イン・ミクロバイオロジイ・アンド・イムノ
ロジイ−１（Curent Topics in Microbiollogy
and Immunology−１）〕〔ヨーロピアン・ジヤー
ナル・オブ・イムノロジイ（European J.
Immunology）６ 511−519（1976）〕、SP2／０
−Ag 14（SP−２）〔ネイチヤー（Nature）276，
269−270（1978）〕、P3−X63−Ag8653（653）〔ジ
ヤーナル・オブ・イムノロジイ（J.
Immunology）123，1548−1550（1979）〕、P3−
X63−Ag8（X63）〔ネイチヤー（Naature）256，
一495−497（1975）〕などが用いられる。これらの
細胞株は、８−アザグアニン培地〔RPMl−1640
培地にグルタミン（1.5mM）、２メルカプトエタ
ノール（５×10^-5M）、ジエンタマイシン
（10μg／ml）および牛胎児血清（FCS）（CSL社
製）（10％）を加えた正常培地に、さらに８−ア
ザグアニン（15μ／ml）を加えた培地〕で継代
するが、細胞融合の３〜４日前に正常培地に継代
し、融合当日２×10⁷以上の細胞数を確保する。 (3) 細胞融合 (1)で免疫した抗体産生細胞と(2)で得られた骨髄
腫細胞をMEM培地またはPBSでよく洗浄し、細
胞数が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞＝５〜10：１
になるよう混合し、遠心分離（1200rpm5分）し
た後、上清を捨て、沈殿した細胞群をよくほぐし
た後、撹拌しながら、37℃で、ポリエチレングラ
イコール1000（PEG−1000）2g、MEM2mlおよび
ジメチルスルホキシド0.7mlの混液0.2〜１ml／10³
抗体産生細胞を加え、１〜２分間毎にMEM1〜
２mlを数回加えた後、MEMを加えて全量が50ml
になるようにする。遠心分離（900rp5分）後、上
清を捨て、ゆるやかに細胞をほぐした後、正常培
地（RPMI1640、FCS10％100mlを加え、メスピ
ペツトによる吸込み、吹出しでゆるやかに細胞を
懸濁する。この顕濁液を24穴培養用プレートに１ml／穴ず
つ分注し、５％CO₂インキユベーター中、37℃で
24時間培養する。培養プレートに１ml／穴の
HAT培地〔正常培地にヒポキサンチン
（10^-4M）、チミジン（1.5×10^-5M）およびアミ
ノプテリン（４×10^-7M）を加えた培地〕を加
え、さらに24時間培養する。以後２日間、24時間
毎に、培養上清１mlを捨て、新たに同量のHAT
培地を加え、CO₂インキユベーター中、37℃で10
〜14日間培養する。コロニー状に生育してきた融合細胞の認められ
る穴について、上清１mlを捨て、HT培地
（HAT培地からアミノプテリンを除いた培地）
を同量加え、以後２日間24時間毎にHT培地への
変換を行う。 HT培地で３〜４日間培養後、培養上清の一部
をとり上記の酵素免疫測定法により、ヒト肺腺癌
に対する抗体価を測定する。このとき、同様の方
法で、ヒト正常細胞、組織あるいはその膜成分な
どとの反応性も測定し、ヒト肺腺癌細胞組織ある
いはその膜成分に特異的に反応するものを選択す
る。ヒト肺腺癌細胞、組織あるいはその膜成分に
強く反応し、ヒト正常細胞、組織あるいはその膜
成分などに反応しない穴について、限界希釈法に
よりクローニングを２回繰り返し、安定してヒト
肺腺癌細胞、組織あるいはその膜成分に強い抗体
価の認められたものを抗ヒト肺腺癌単クローン性
抗体産生ハイブリドーマ株として選択する。 (4) 単クローン性抗体の調製プリスタン処理〔２，６，10，14−テトラメチ
ルペンタデカン（Pristane）0.5mlを腹腔内投与
し、２週間飼育する〕した８〜10週令の
BALB／ｃ雌マウスに、(3)で得られた抗ヒト肺
腺癌単クローン性抗体産生ハイブリドーマ細胞２
〜４×10⁶細胞／匹を腹腔内注射する。10〜21日
でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスか
ら腹水を採取し、遠心分離（3000rpm ５分）し
て固形分を除去後、50％硫酸アンモニウムにて塩
析し、PBSにNaCl0.5Mを加えた液で透析し、セ
フアクリルS300（フアルマシア・フアイン・ケミ
カル社製）（ベツトボリユーム750ml）のカラムに
流速15ml／hrで通塔し、IgM画分を集め、精製単
クローン性抗体とする。抗体のイソタイプの決定は、オクタロニイ
（Ouchterlony）法（二重免疫拡散法）（免疫学実
験入門、生物化学実験法15、学会出版センター
刊、P.741981年）によつて行う。蛋白量の定量は、フオーリン法および280nmで
の吸光度〔1.4（OD₂₈₀）≒イムノグロブリン１
mg／ml〕より算出する。得られた単クローン性抗体の特異性の決定は複
数の検体から得られたヒトの各種の臓器由来の正
常あるいは腫瘍組織あるいはその膜成分との反応
性、各種ヒト正常あるいは腫瘍細胞培養株または
ヒト胎児細胞培養株もしくはそれらの膜成分との
反応性、従来から知られている癌胎児性抗原（例
えばCEA）との反応性、正常、患者ヒト血清と
の反応性などを、酵素免疫測定法、螢光抗体法、
免疫組織学的判定法、（ABC法）などにより行
い、いずれの測定法においてもヒト肺腺癌以外と
は、反応しないものを選択する。また、このようにして得られた、ヒト肺腺癌に
特異的に反応する単クローン性抗体は、血清検
査、組織診断、イメージ−ングなどによる肺癌の
診断、さらには、抗体そのものを、あるいは、抗
体に制癌剤や毒素を結合させた、いわゆるイムノ
トキシンを癌患者に投与することにより肺癌の治
療を行うことができるものと期待される。さら
に、この腫瘍特異的単クローン性抗体を用いるア
フイニテイーカラムにより、腫瘍特異抗原を精製
し、その抗原の解析ひいては、肺癌ワクチンの開
発にも使用できるものと期待される。５肺癌血清診断法血清診断は次の通り行う 96穴EIA用プレートに、第一抗体10〜100μg／
mlを50〜200μ／穴ずつ分注し、４℃で１〜２
晩あるいは、室温で２〜４時間放置する。PBS
で洗浄後、BSA−PBS200μ／穴を加え、さら
に４℃で１晩あるいは室温で２時間放置する。こ
のプレートをPBSでよく洗浄後、各穴に血清検
体を１〜100倍希釈で、50〜100μを加える。４
℃で１晩あるいは室温で２時間放置後、PBSで
よく洗浄する。次に、ビオチン化した第二抗体あ
るいは、ペルオキシダーゼ標識した第二抗体（10
〜100μg／μ）を50〜100μ／穴加え、さらに
４℃で１晩あるいは室温で２〜４時間放置する。
第二抗体として、ビオチン化抗体を使用した場合
には、プレートをPBSでよく洗浄後、アビジン
−ビオチン−ペルオキシダーゼ（10μg／ml）を
50〜100μ／穴加え、室温で30分間放置後PBS
でよく洗浄する。次に基質液として、ABTS基
質液を50〜100μ／穴加え、室温で10〜30分間
放置し、５％SDS溶液50〜100μ／穴を加え反
応を停止する。各穴のOD₄₁₅値を測定し、その発
色度より、血清検体中の抗原量を算出する。この
ようにして得られた健常人血清中の抗原量と肺癌
患者血清中の抗原量を比較することにより、正常
値を決定し、その正常値を超えるものを肺癌陽性
とした。 (6) 抗原解析前述の酵素免疫抗体法、免疫組織化学的染色法
あるいは血清診断法の実施に際して、抗原（肺腺
癌膜成分、肺癌培養細胞株、肺癌組織）をノイラ
ミニダーゼ（neuraminidase）、プロテアーゼ
（protease）などの酵素や過ヨウ素酸などの試薬
で前処理した後、単クローン性抗体と反応させ、
それらの処理をしていない元の抗原と単クローン
性抗体の反応性との差より、抗原の化学的性状
（単クローン性抗体の認識する抗原部位の化学的
性状）を明らかにした。すなわち、ノイラミニダ
ーゼ処理により抗原性が消失すれば、シアル酸
が、プロテアーゼ処理により消失すれば蛋白質
が、また過ヨウ素酸処理により消失すれば糖鎖
が、抗原決定基に関与していると推定される。以下本発明の実施例を示す。実施例１ (1) 抗体産生細胞の調製ヒト正常肺組織膜成分（１mg蛋白質／匹）を、
生後24時間以内の新生仔BALB／ｃマウスに静
脈内投与した。８週間経過後のマウスにヒト肺腺
癌膜断片100μ（蛋白質換算）／匹を水酸化ア
ルミニウムゲル２mg／匹、百日咳菌死菌ワクチン
１×10⁹／匹とともに腹腔内投与した。以後１〜
２週おきに、同一抗原100μg（蛋白質換算）／匹
で３〜５回免疫した。これら免疫処理したマウス
のうち、その抗血清が、ヒト肺腺癌細胞または組
織あるいはそれらの膜断片と強く反応したマウス
を免疫マウスとして、そのマウスより、脾細胞を
調製して、細胞融合に供した。 (2) マウス骨髄腫細胞の調製８−アザグアニン耐性マウス骨髄腫細胞株P3
−U1を正常培地で培養し、細胞融合時に２×10⁷
以上の細胞を得、細胞融合に親株として供した。 (3) ハイブリドーマの作製 (1)と(2)で得られた脾細胞と骨髄腫細胞とを５：
１の割合で用い、前述した方式で融合させ、
HAT培地で37℃、14日間CO₂5％以下で培養し
た、融合細胞を選択し、HT培地に変えてさらに
培養し、抗ヒト肺腺癌に対する抗体価の測定をし
て、活性な穴を選び、さらに正常培地に変え、２
回クローニングを繰り返して、種々の測定法によ
り、ヒト正常細胞や組織あるいは他の癌に全く反
応せず、ヒト肺腺癌に特異的に反応する単クロー
ン性抗体を産生するハイブリドーマ株ALC−186
を選択した。４単クローン性抗体の精製プリスタン処理した８週令BALB／ｃ雌マウ
スに(3)で得られたハイブリドーマ株ALC−186を
４×10⁶細胞／匹腹腔内注射した。10〜21日後に、
ハイブリドーマは腹水癌化する。腹水のたまつた
マウスから、腹水を採取（５〜10ml／匹）し、遠
心分離（3000rpm，５分）して固形分を除去し
た。50％硫酸アンモニウムにて塩析し、PBSに
NaCl 0.5Mを加えた液で透析し、セフアクリル
S300（フアルマシア・フアイン・ケミカル社製）
（ベツト・ボリユーム750ml）のカラムに流速15
ml／hrで通塔しIgM画分を集め精製抗体として用
いた。 (5) ALC−186の特異性このようにして得られた抗肺腺癌特異的単クロ
ーン性抗体ALC−186の反応特異性を第１表に示
した。

【表】＊＊大腸癌培養細胞株と弱く反応
実施例２実施例１で得られた単クローン性抗体ALC−
186を用いて、肺腺癌組織の免疫組織化学的染色
を行つた。10例の肺腺癌患者摘出肺腺癌パラフイ
ン包埋ブロツク切片について検討した結果、８例
で癌細胞が強く染まつた。以上の結果より、
ALC−186を用いる免疫組織化学染色により、肺
腺癌の病理診断が可能であつた。実施例３ 96穴EIA用プレート〔フロー・ラボラトリーズ
（Flow Laboratories）社製〕に、ALC−186
（10μ／ml）を50μ／穴加え、４℃で１晩放置
後、PBSで洗浄し、１％BSA−PBS200μ／穴
加え１晩放置し、PBSでよく洗浄したプレート
に、健康人血清（77検体）および肺癌患者血清
（92検体）を４倍希釈して40μ／穴加え、４℃
で１晩放置後、PBSでよく洗浄した。次に、第
二抗体として、ビオチン化抗肺癌モノクローナル
抗体ALC−186（10μ／ml）を100μ／穴加え、
４℃で１晩放置し、PBSでよく洗浄した後、ア
ビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ〔ベクトー
ル（VECTOR）社製〕（10μg／ml）100μ／穴
加え、室温で１時間放置した後、PBSで洗浄し
た。次にABTS基質液を100μ／穴加え、室温
で30分間反応させ、５％SDS溶液100μ／穴を
加え反応を停止した。各穴の発色を吸光光度計
（OD₄₁₅）で測定した。その結果、第１図に示し
た様に、健康人血清では、OD₄₁₅が0.35をこえる
陽性例は77例中１例しかなかつたが、肺腺癌患者
血清では、OD₄₁₅が0.35をこえる陽性例が33例中
16例あつた。このことより、本抗体を用いる血清
診断法により、48％の確率で肺腺癌患者を見出す
ことが可能があることがわかる。肺扁平上皮癌患
者血清では、OD₄₁₅が0.35をこえる陽性例が、33
例中１例（３％）、肺小細胞癌患者血清では、22
例中０例（０％）、肺大細胞癌患者血清では、４
例中０例（０％）であつたが、肺良性疾患患者血
清では16例中０例（０％））と全く陽性例はなか
つた。また、肺腺癌患者血清をプロツトすると、第２
図に示すごとく、ステージでは65％（20例中13
例）で陽性となつた。この結果は、本抗体による
血清診断、肺腺癌のモニタリングに有効であるこ
とを示している。実施例４単クローン性抗体ALC−186が認識する抗原を
解析するために、肺腺癌組織の膜成分を下記各種
酵素および試薬で処理した後ALC−186との反応
性を調べた。酵素および試薬トリプシン（GIBCO社製 2.5％溶液）
PBS中 0.25％ノイラミニダーゼ（ベーリンガー・マンハイム
社製）
0.1M酢酸バツフアー（PH4.5）−3mMCaCl₂中
0.1U／ml α−Ｌ−フコシダーゼ（ベーリンガー・マイハ
イム社製）
0.1Mリン酸バツフア（PH6.3）中0.1U／ml プロテアーゼ（シグマ社製）
0.1Mリン酸バツフアー（PH7.2）中10U／ml NaIO₄（和光純薬社製） PBS中50mM 肺腺癌組織の膜成分（蛋白量100μg／ml）を
50μ／穴ずつ、EIA用プレート〔リンブロ
（Linbro）社製〕に分注し、４℃で１晩放置後、
PBSで３回洗浄し、１％BSA−PBSを200μ／
穴分注し、30分間〜２時間室温で放置し、PBS
で３回洗浄後、上記酵素液または試薬液を50μ
／穴分注し、37℃で１時間反応させた。ついで
PBSで５回洗浄し、単クローン性抗体ALC−186
（10μg／ml）を50μ／穴分注し、４℃で１晩放
置した。 Tween−20−PBS（Tween 20は和光純薬工業
社製）で５回洗浄後、パーオキシダーゼ標識抗−
マウスIgG（400倍希釈液）を50μ／穴加え、室
温で２時間反応後、Tween−20−PBSで５回洗
浄し、ABTS基質100μを加え、30分間反応後、
415nmにおける吸光度を測定した。抗原性は、第３図に示したとおり、過ヨウ素酸
（NaIO₄）、ノイラミニダーゼ、プロテアノーゼ処
理により完全に消失した。この結果より、単クロ
ーン性抗体ALC−186はシアル酸化された糖蛋白
質を認識しているものと推定された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、単クローン性抗体ALC−186による
肺腺癌の血清診断の結果を示す。第２図は、単ク
ローン性抗体ALC−186による肺腺癌の血清診断
におけるステージの影響を示す。第３図は、肺腺
癌組織の膜成分の各種酵素、試薬処理による単ク
ローン性抗体ALC−186との反応性の消長を示
す。 ●はノイラミニダーゼ0.1U／ml、△はα−Ｌ
−フコシダーゼ0.1U／ml、□はトリプシン0.25、
■はプロテアーゼ10U／ml、〇はNaIO₄50mMの
処理を示す。×は無処理を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１ヒト肺腺癌の細胞および組織と反応し、ヒト
肺腺癌以外の肺癌およびヒト正常肺の細胞および
組織とは反応せず、シアル酸化された糖蛋白質ま
たは糖脂質を抗原として認識する単クローン性抗
体。２該単クローン性抗体がハイブリドーマ細胞株
ALC−186（NCACC 85082903）から生産される
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の単
クローン性抗体。３該単クローン性抗体がIgMクラスに属するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の単ク
ローン性抗体。４ヒト肺腺癌の細胞および組織と反応し、ヒト
肺腺癌以外の肺癌およびヒト正常肺の細胞および
組織とは反応せず、シアル酸化された糖蛋白質ま
たは糖脂質を抗原として認識する単クローン性抗
体を用いる免疫組織化学的染色法。５ヒト肺腺癌の細胞および組織と反応し、ヒト
肺腺癌以外の肺癌およびヒト正常肺の細胞および
組織とは反応せず、シアル酸化された糖蛋白質ま
たは糖脂質を抗原として認識する単クローン性抗
体を用いるサンドイツチ方式による酵素免疫測定
法またはラジオイムノアツセイによりヒト血清中
の肺腺癌抗原を検出する方法。