JPS60190721A - 抗腫瘍特異的単クロ−ン性抗体の製造法 - Google Patents
抗腫瘍特異的単クロ−ン性抗体の製造法Info
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- JPS60190721A JPS60190721A JP59046683A JP4668384A JPS60190721A JP S60190721 A JPS60190721 A JP S60190721A JP 59046683 A JP59046683 A JP 59046683A JP 4668384 A JP4668384 A JP 4668384A JP S60190721 A JPS60190721 A JP S60190721A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、動物とくにヒトの腫瘍に対する抗体の製造法
に関する。
に関する。
ヒト腫瘍細胞または組織にのみ存在し、ヒト正常細胞ま
たは組織に存在しない抗原（腫瘍特異抗原）に反応する
抗体があれば、腫瘍の診断、治療、腫瘍抗原の解析、腫
瘍ワクチンの製造などに利用価値が高いものと期待され
る。種々の動物をヒト腫瘍細胞またはその膜成分で免疫
して、腫瘍細胞またはその膜成分とに反応する抗血清を
得ることは公知である。被免疫動物にとってヒト細胞あ
るいはその膜成分自体が異物で坐り、免疫源となるため
、ヒト腫瘍細胞およびその膜成分で免疫した場合、抗血
清はヒト腫瘍細胞のみならずヒト正常細胞とも反応して
しまい抗ヒト腫瘍特異抗体をうろことはできなかった。
たは組織に存在しない抗原（腫瘍特異抗原）に反応する
抗体があれば、腫瘍の診断、治療、腫瘍抗原の解析、腫
瘍ワクチンの製造などに利用価値が高いものと期待され
る。種々の動物をヒト腫瘍細胞またはその膜成分で免疫
して、腫瘍細胞またはその膜成分とに反応する抗血清を
得ることは公知である。被免疫動物にとってヒト細胞あ
るいはその膜成分自体が異物で坐り、免疫源となるため
、ヒト腫瘍細胞およびその膜成分で免疫した場合、抗血
清はヒト腫瘍細胞のみならずヒト正常細胞とも反応して
しまい抗ヒト腫瘍特異抗体をうろことはできなかった。
１９７５年、ケーラーとミ／Ｌｚシニタイ７ ［Ｎａｔ
ｕｒｅ ２５６ 、 ４９５〜４９７（１９７５）］に
よって、ハイブリドーマ法が報告された後、多くの研究
者によって、ヒト腫瘍細胞やその膜成分で免疫した動物
の抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合させてハイブリドー
マを作製し、免疫した腫瘍細胞とのみ特異的に反応する
単ローン性抗体を産生ずるクローンを選択する試みが行
われているが、はとんどのクローンが、ヒト正常細胞と
も反応する抗体を産生ずるので、腫瘍細胞とのみ反応す
る抗体を選択することは、非常に困難であった。しかも
、そのようなりローンを選び出すことができたとしても
極めて低率であるため、実用に供し得る抗体を産生ずる
°クローンを選び出すこともまた困難であった。従って
、ヒト腫瘍細胞にのみ反応し、実用に供せるような単ク
ローン性抗体はほとんどないのが現状である。
ｕｒｅ ２５６ 、 ４９５〜４９７（１９７５）］に
よって、ハイブリドーマ法が報告された後、多くの研究
者によって、ヒト腫瘍細胞やその膜成分で免疫した動物
の抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合させてハイブリドー
マを作製し、免疫した腫瘍細胞とのみ特異的に反応する
単ローン性抗体を産生ずるクローンを選択する試みが行
われているが、はとんどのクローンが、ヒト正常細胞と
も反応する抗体を産生ずるので、腫瘍細胞とのみ反応す
る抗体を選択することは、非常に困難であった。しかも
、そのようなりローンを選び出すことができたとしても
極めて低率であるため、実用に供し得る抗体を産生ずる
°クローンを選び出すこともまた困難であった。従って
、ヒト腫瘍細胞にのみ反応し、実用に供せるような単ク
ローン性抗体はほとんどないのが現状である。
本発明者らは、悪性腫瘍に対して特異的に反応する単ク
ローン性抗体を得るべく鋭意研究を行った結果、ハイブ
リドーマ作製に際しての抗体産生細胞の供給源としての
第１動物たとえばヒトの腫瘍細胞、組織あるいはその膜
成分による被免疫動物として、第１動物の正常細胞、組
織あるいは、その膜成分に免疫学的寛容（免疫的不応答
性）になった第２動物を用いることが、第１動物の腫瘍
とのみ特異的に反応する単クローン性抗体を産生ずるハ
イブリドーマクローンを高率に得る上で、ひいては、実
用的な第１ ｉ！ｌ＋物の腫瘍細胞にのみ特異的に反応
する単クローン性抗体を得る上で、極めて有効な方法で
あることを見い出し、本発明を完成するに至った。
ローン性抗体を得るべく鋭意研究を行った結果、ハイブ
リドーマ作製に際しての抗体産生細胞の供給源としての
第１動物たとえばヒトの腫瘍細胞、組織あるいはその膜
成分による被免疫動物として、第１動物の正常細胞、組
織あるいは、その膜成分に免疫学的寛容（免疫的不応答
性）になった第２動物を用いることが、第１動物の腫瘍
とのみ特異的に反応する単クローン性抗体を産生ずるハ
イブリドーマクローンを高率に得る上で、ひいては、実
用的な第１ ｉ！ｌ＋物の腫瘍細胞にのみ特異的に反応
する単クローン性抗体を得る上で、極めて有効な方法で
あることを見い出し、本発明を完成するに至った。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明は、動物の各種腫瘍細胞または腫瘍組織もしくは
それらの膜成分に存在する腫瘍特異抗原に対する単クロ
ーン性抗体を製造する方法を提供する。
それらの膜成分に存在する腫瘍特異抗原に対する単クロ
ーン性抗体を製造する方法を提供する。
本発明によれば、ヒトの正常細胞または正常組織もしく
はそれらの膜成分に免疫的寛容になった動物（以下トン
ラント動物ともいう）を、ヒトの腫瘍細胞または腫瘍組
織もしくはそれらの膜成分（以下まとめて腫瘍抗原とい
う）で免疫し、該免疫した動物の抗体産生細胞と骨髄腫
細胞とを融合させてハイブリドーマを作製し、該ヒトの
腫瘍抗原にのみ特異的に反応する単クローン性抗体を産
生ずるハイブリドーマを選択し、該ハイブリドーマを培
地で培養するか動物で腹水化することにより、ヒトの腫
瘍抗原に特異的に反応する単クローン性抗体を製造する
ことができる。
はそれらの膜成分に免疫的寛容になった動物（以下トン
ラント動物ともいう）を、ヒトの腫瘍細胞または腫瘍組
織もしくはそれらの膜成分（以下まとめて腫瘍抗原とい
う）で免疫し、該免疫した動物の抗体産生細胞と骨髄腫
細胞とを融合させてハイブリドーマを作製し、該ヒトの
腫瘍抗原にのみ特異的に反応する単クローン性抗体を産
生ずるハイブリドーマを選択し、該ハイブリドーマを培
地で培養するか動物で腹水化することにより、ヒトの腫
瘍抗原に特異的に反応する単クローン性抗体を製造する
ことができる。
以下に本発明の単クローン性抗体の製造法を詳述する。
（１） ヒト正常細胞またはヒト正常組織もしくはそれ
らの膜成分に対して免疫的寛容（免疫的不応答性）を獲
得した動物の誘導： ヒトの正常細胞または正常組織もしくはそれらの膜成分
に対して免疫的寛容になったトンラント動物を誘導する
には、通常、抗原（この場合はトンロジェン）を成熟動
物に高用量、あるいは低用量投与するかあるいは、胎児
期あるいは新生任期（生後２４時間以内）に高用量のト
ンロジェンを投与することによって、投与したトンロジ
エンに対するトンラント動物を誘導できる。
らの膜成分に対して免疫的寛容（免疫的不応答性）を獲
得した動物の誘導： ヒトの正常細胞または正常組織もしくはそれらの膜成分
に対して免疫的寛容になったトンラント動物を誘導する
には、通常、抗原（この場合はトンロジェン）を成熟動
物に高用量、あるいは低用量投与するかあるいは、胎児
期あるいは新生任期（生後２４時間以内）に高用量のト
ンロジェンを投与することによって、投与したトンロジ
エンに対するトンラント動物を誘導できる。
トンラント動物としては、マウス、ラットが最適である
。トンロジェンとしては、後に免疫に用いる腫瘍と同一
臓器由来の正常細胞、組織あるいはその膜成分、あるい
は、種々の臓器由来の正常細胞、組織あるいはその膜成
分を混ぜて使うのが最適であるが、免疫する腫瘍細胞、
組織あるいはその膜成分と異なる１臓器に由来する正常
細胞、組織あるいはその膜成分をトンロシエンとして用
いても、そのトンロジェンがヒトに由来するものであれ
ば、充分に目的は達成できる。また、トンロジェンは、
異なる個体由来のものを混ぜて使用することも可能であ
る。
。トンロジェンとしては、後に免疫に用いる腫瘍と同一
臓器由来の正常細胞、組織あるいはその膜成分、あるい
は、種々の臓器由来の正常細胞、組織あるいはその膜成
分を混ぜて使うのが最適であるが、免疫する腫瘍細胞、
組織あるいはその膜成分と異なる１臓器に由来する正常
細胞、組織あるいはその膜成分をトンロシエンとして用
いても、そのトンロジェンがヒトに由来するものであれ
ば、充分に目的は達成できる。また、トンロジェンは、
異なる個体由来のものを混ぜて使用することも可能であ
る。
トンロジェンの投与量は、そのトンロジェンの性質、ト
ンラント処理を受ける動物の個体差により、−概には規
定しえないが、成熟動物における商用量トンラントには
、通常の免疫量の１０倍から１００倍（細胞数では５Ｘ
１０５〜１０７細胞／匹、膜成分などでは、１ｍｇ〜２
０ｍｇ／匹）、低用量トンラントには、通常の免疫量の
１０分の１から１００分の１（細胞数では１０”〜５Ｘ
１０３細胞／匹、膜成分などでは、０．１μｇ〜１０μ
ｇ／匹）、新生仔トンラントでは、細胞数では１０５細
胞／匹以上、膜成分などでは、１００μｇ／四以上の投
与が望ましい。
ンラント処理を受ける動物の個体差により、−概には規
定しえないが、成熟動物における商用量トンラントには
、通常の免疫量の１０倍から１００倍（細胞数では５Ｘ
１０５〜１０７細胞／匹、膜成分などでは、１ｍｇ〜２
０ｍｇ／匹）、低用量トンラントには、通常の免疫量の
１０分の１から１００分の１（細胞数では１０”〜５Ｘ
１０３細胞／匹、膜成分などでは、０．１μｇ〜１０μ
ｇ／匹）、新生仔トンラントでは、細胞数では１０５細
胞／匹以上、膜成分などでは、１００μｇ／四以上の投
与が望ましい。
トンラント動物としては、成熟トンラント、新生仔トン
ラントのいずれも使用可能であるが、トンラントの強さ
、破れにくさから、新生仔トンラントの方が望ましい。
ラントのいずれも使用可能であるが、トンラントの強さ
、破れにくさから、新生仔トンラントの方が望ましい。
（２）トンラント動物の免疫と抗体産生細胞の調製；前
項のトンラント動物（新生仔トンラントでは、３〜１０
週令、望ましくは８週令にしてから）を、ヒト腫瘍細胞
、組織あるいはその膜成分で免疫して、その動物の牌、
リンパ節、末梢血などから、抗体産生細胞を調製する。
項のトンラント動物（新生仔トンラントでは、３〜１０
週令、望ましくは８週令にしてから）を、ヒト腫瘍細胞
、組織あるいはその膜成分で免疫して、その動物の牌、
リンパ節、末梢血などから、抗体産生細胞を調製する。
免疫の方法は、トンラント動物の皮下あるいは静脈内あ
るいは腹腔内に、適当なアジュバント（例えば、［：ｏ
ｍｐｌｅｔｅ Ｐｒｅｕｎｄ−八ｄｊｕｖａｎＬまたは
水酸化アルミニウムゲルと百日咳菌死菌ワクチンなど）
とともに、腫瘍抗原としてのヒトの腫瘍細胞（１０６〜
１０７細胞／匹）、ヒトの腫瘍組織またはそれらの膜成
分（１０〜５００μｇ／匹）を投与する。以後、１〜２
週問おきに腫瘍抗原を２〜５回投与する。各投与後３〜
７日目に、眼底静脈叢より採血し、その血清がヒトの正
常細胞、組織あるいはその膜成分には反応せず、ヒトの
腫瘍細胞、組織あるいはその膜成分とのみ反応すること
を以下に示す酵素免疫測定法（酵素免疫測定法：医学書
院列、１９７６年）などで調べる。
るいは腹腔内に、適当なアジュバント（例えば、［：ｏ
ｍｐｌｅｔｅ Ｐｒｅｕｎｄ−八ｄｊｕｖａｎＬまたは
水酸化アルミニウムゲルと百日咳菌死菌ワクチンなど）
とともに、腫瘍抗原としてのヒトの腫瘍細胞（１０６〜
１０７細胞／匹）、ヒトの腫瘍組織またはそれらの膜成
分（１０〜５００μｇ／匹）を投与する。以後、１〜２
週問おきに腫瘍抗原を２〜５回投与する。各投与後３〜
７日目に、眼底静脈叢より採血し、その血清がヒトの正
常細胞、組織あるいはその膜成分には反応せず、ヒトの
腫瘍細胞、組織あるいはその膜成分とのみ反応すること
を以下に示す酵素免疫測定法（酵素免疫測定法：医学書
院列、１９７６年）などで調べる。
酵素免疫測定法：
９６穴のＥＩＡ用プレー） （Ｆｌｏｗ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉ’ｅｓ社製）に、正常あるいは腫瘍細胞、組織
の膜成分（蛋白量として１０〜１．０００Ｍｇ／ｍｌ含
有）を１００〜２００μｌ／穴ずつ分注し、４℃で１〜
２晩放置して、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）をプレート
穴底面にコートし、上清を抜き去った後、レジン水ある
いは、ＰＢＳ （リン酸二ナトリウム１．８３ｇ、リン
酸−カリウム０．２１ｇ。
ｔｏｒｉ’ｅｓ社製）に、正常あるいは腫瘍細胞、組織
の膜成分（蛋白量として１０〜１．０００Ｍｇ／ｍｌ含
有）を１００〜２００μｌ／穴ずつ分注し、４℃で１〜
２晩放置して、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）をプレート
穴底面にコートし、上清を抜き去った後、レジン水ある
いは、ＰＢＳ （リン酸二ナトリウム１．８３ｇ、リン
酸−カリウム０．２１ｇ。
食塩７．６５ｇ、レジン水ＩＩｌ、ｐＨ７，２）でよく
洗浄後、１％Ｂ Ｓ Ａ −’Ｐ Ｂ Ｓを１００〜２
００μβ／穴分注し、４℃で１〜２晩放置して、プレー
ト上に残った蛋白質との結合残基をプロ、ツクした。そ
の後、ＢＳＡ−ＰＢＳを捨て、レジン水あるいはＰＢＳ
てよく洗浄した後、第１抗体として、ＢＳＡ＝ＰＢＳで
希釈した試料（マウス血清、ハイプリドーマ培養上清、
粗精製単りローン性抗体）を１００μｌ／穴分注し、４
℃で１晩放置する。レジン水で１回、２ＭＮａ（ｌ溶液
で６回洗浄した後、第２抗体としてウサギの抗マウスイ
ムノグロブリンＩｇＧあるいはＰ（ａ’ｂ’）２−ウレ
ア−ゼ結合物（［：ｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕ
ｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（以下Ｃ３Ｌ社という
）製〕の１００倍希釈液を１００μβ／穴分注し、室温
で２時間放置する。レジン水で３回洗浄後、ウレアーゼ
基質液（Ｃ３Ｌ社製）１００μｊ２／穴を分注し、室温
で１０〜３０分放置後、１％メルチオレート２０μ矛を
加え反応を停止する。６００ｎｍで比色定量し、抗体価
を算出する。この時、腫瘍細胞、組織の膜成分に対して
は強く反応し、正常細胞、組織の膜成分とは全く反応し
ないか、あるいは、無処理動物から得た血清（トンラン
ト処理をしていない動物に正常または腫瘍細胞、組織あ
るいはその膜成分で免疫した動物より得られる抗血清）
に比べ明らかに反応性の弱い動物を、ヒト正常細胞およ
び／または、組織トンラントで、かつヒト腫瘍細胞およ
び／または組織で免疫された動物としてハイブリドーマ
作製のだめの抗体産生細胞の供給源として用いる。
洗浄後、１％Ｂ Ｓ Ａ −’Ｐ Ｂ Ｓを１００〜２
００μβ／穴分注し、４℃で１〜２晩放置して、プレー
ト上に残った蛋白質との結合残基をプロ、ツクした。そ
の後、ＢＳＡ−ＰＢＳを捨て、レジン水あるいはＰＢＳ
てよく洗浄した後、第１抗体として、ＢＳＡ＝ＰＢＳで
希釈した試料（マウス血清、ハイプリドーマ培養上清、
粗精製単りローン性抗体）を１００μｌ／穴分注し、４
℃で１晩放置する。レジン水で１回、２ＭＮａ（ｌ溶液
で６回洗浄した後、第２抗体としてウサギの抗マウスイ
ムノグロブリンＩｇＧあるいはＰ（ａ’ｂ’）２−ウレ
ア−ゼ結合物（［：ｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕ
ｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（以下Ｃ３Ｌ社という
）製〕の１００倍希釈液を１００μβ／穴分注し、室温
で２時間放置する。レジン水で３回洗浄後、ウレアーゼ
基質液（Ｃ３Ｌ社製）１００μｊ２／穴を分注し、室温
で１０〜３０分放置後、１％メルチオレート２０μ矛を
加え反応を停止する。６００ｎｍで比色定量し、抗体価
を算出する。この時、腫瘍細胞、組織の膜成分に対して
は強く反応し、正常細胞、組織の膜成分とは全く反応し
ないか、あるいは、無処理動物から得た血清（トンラン
ト処理をしていない動物に正常または腫瘍細胞、組織あ
るいはその膜成分で免疫した動物より得られる抗血清）
に比べ明らかに反応性の弱い動物を、ヒト正常細胞およ
び／または、組織トンラントで、かつヒト腫瘍細胞およ
び／または組織で免疫された動物としてハイブリドーマ
作製のだめの抗体産生細胞の供給源として用いる。
酵素免疫測定法を行うにあたって抗原として細胞そのも
のを用いる場合は、Ｆａｌｃｏｎ ３０７２プレート中
で、標的細胞を培養し、０，２５％ゲルタールアルデヒ
ド−ＰＢＳを加え、室温に１〜２時間放置し、ＰＢＳで
よく洗浄後、１％ＢＳ’Ａ−ＰＢ５ １００〜２００μ
ｌを加え、２時間放置し、レジン水またはＰＢＳでよく
洗浄し、そのプレートを用いて、一般の抗原コートプレ
ートを用いると同様の方法にて抗体価の測定を行った。
のを用いる場合は、Ｆａｌｃｏｎ ３０７２プレート中
で、標的細胞を培養し、０，２５％ゲルタールアルデヒ
ド−ＰＢＳを加え、室温に１〜２時間放置し、ＰＢＳで
よく洗浄後、１％ＢＳ’Ａ−ＰＢ５ １００〜２００μ
ｌを加え、２時間放置し、レジン水またはＰＢＳでよく
洗浄し、そのプレートを用いて、一般の抗原コートプレ
ートを用いると同様の方法にて抗体価の測定を行った。
細胞融合に供するにあたって、免疫化マウスに融合処理
の３〜４日前に、ヒト腫瘍細胞組織あるいはその膜成分
を２〜５ＸＩＯ６細胞／匹あるいは２０〜４００Ｍｇ／
匹腹腔内に投与し、膵臓細胞を摘出し、牌細胞を調製す
る。ｌｌｌ１！臓をＭＥＭ （田水製薬社製）中で細断
し、ピンセットでほぐし、１．２０Ｏｒｐｍ、５分間遠
心分離にかけ、上清を捨て、トリス−塩化アンモニウム
緩衝液（ｐＨ７，６５）で１〜２分間処理し赤血球を除
去し、ＭＥＭで３回洗浄して融合用肺細胞として提供す
る。尚、免疫に用いるヒト腫瘍の種類としては、肺癌、
胃癌、大腸癌、膵癌、肝癌、子宮体癌、子宮頚癌、腎癌
、膀胱癌、脳腫瘍なとがあけられる。
の３〜４日前に、ヒト腫瘍細胞組織あるいはその膜成分
を２〜５ＸＩＯ６細胞／匹あるいは２０〜４００Ｍｇ／
匹腹腔内に投与し、膵臓細胞を摘出し、牌細胞を調製す
る。ｌｌｌ１！臓をＭＥＭ （田水製薬社製）中で細断
し、ピンセットでほぐし、１．２０Ｏｒｐｍ、５分間遠
心分離にかけ、上清を捨て、トリス−塩化アンモニウム
緩衝液（ｐＨ７，６５）で１〜２分間処理し赤血球を除
去し、ＭＥＭで３回洗浄して融合用肺細胞として提供す
る。尚、免疫に用いるヒト腫瘍の種類としては、肺癌、
胃癌、大腸癌、膵癌、肝癌、子宮体癌、子宮頚癌、腎癌
、膀胱癌、脳腫瘍なとがあけられる。
（３）骨髄腫細胞の調製：
骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を使
用するのが好適である。例えば、８−アザグアニン耐性
マウス（ＢＡＬ口／口出Ｃ由来目髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６
３−Ａｇ８−１１ （Ｐ３−１１１） （［：ｕｒｒｅ
ｎｔＴｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−１）［Ｂｕｒｏｐｅａ
ｎ Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６°５１１−５１９（
１９７６） ）ＳＰ２１０−Ａｇ１４（ＳＰ−２） （
Ｎａｔｕｒｅ ２７６．２６９−２７０（１９７８）
）、Ｐ３−Ｘ６３−八ｇ ８．６５３（６５３） ［Ｊ
、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−↓２３ ．１５４８−１５５
０（１９７９） ） 、 Ｐ３−Ｘ６３−八ｇ８（Ｘ６
３） （Ｎａｔｕｒｅ庫６ 、．４９５−４９７（１９
７５） ）などが用いられる。これらの細胞株は、８−
アザグアニン培地（ＲＰＭＩ−１６４０培地にグルタミ
７（１，５ｍＭ） 、２−メルカプトエタノール（５，
Ｘ１０−５Ｍ）、ジエンクマイシン（１０Ｍｇ ／ｍｌ
）および牛胎児血清（Ｆｅ２）（Ｃ３Ｌ社製）（１０
％）を加えた正常培地に、さらに８−アザグアニン（１
５Ｍｇ ／ｍｌ ）を加えた培地〕で継代するが、細胞
融合の３〜４日前に正常培地に継代し、融合当日２Ｘ１
０７以上の細胞数を確保する。
用するのが好適である。例えば、８−アザグアニン耐性
マウス（ＢＡＬ口／口出Ｃ由来目髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６
３−Ａｇ８−１１ （Ｐ３−１１１） （［：ｕｒｒｅ
ｎｔＴｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−１）［Ｂｕｒｏｐｅａ
ｎ Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６°５１１−５１９（
１９７６） ）ＳＰ２１０−Ａｇ１４（ＳＰ−２） （
Ｎａｔｕｒｅ ２７６．２６９−２７０（１９７８）
）、Ｐ３−Ｘ６３−八ｇ ８．６５３（６５３） ［Ｊ
、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−↓２３ ．１５４８−１５５
０（１９７９） ） 、 Ｐ３−Ｘ６３−八ｇ８（Ｘ６
３） （Ｎａｔｕｒｅ庫６ 、．４９５−４９７（１９
７５） ）などが用いられる。これらの細胞株は、８−
アザグアニン培地（ＲＰＭＩ−１６４０培地にグルタミ
７（１，５ｍＭ） 、２−メルカプトエタノール（５，
Ｘ１０−５Ｍ）、ジエンクマイシン（１０Ｍｇ ／ｍｌ
）および牛胎児血清（Ｆｅ２）（Ｃ３Ｌ社製）（１０
％）を加えた正常培地に、さらに８−アザグアニン（１
５Ｍｇ ／ｍｌ ）を加えた培地〕で継代するが、細胞
融合の３〜４日前に正常培地に継代し、融合当日２Ｘ１
０７以上の細胞数を確保する。
（４）細胞融合
（２）で調製した抗体産生細胞と（３）で得られた骨髄
腫細胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳでよく洗浄し、細胞数
が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞−５〜１０：１になるよ
う混合し、遠心分離（１，２０Ｏｒｐｍ ５分）した後
、上清を捨て、沈殿した細胞群をよくほぐした後、攪拌
しながら、３７℃で、ポリエチレングライコールｌ、
０００ （ＩＩＢＧ−，１，０００）ｊｇ、ＭＥＭ、２
ｍｌ、ジメチルスルホキント−０，７ｍｌの混液０．２
〜１ｍｌ／１０”抗体産生細胞を加え、１〜２分毎にＭ
ＥＭ１〜２ｍｌを数回加えた後、ＭＥＭを加えて全量が
５０ｍ１になるようにする。遠心後（９００ｒｐｌＴｌ
、 ５分）、上清を捨て、ゆるやかに細胞をほぐした後
、正常培地１０ Ｑｍｌを加え、メスピペットによる吸
込み、吹出しでゆるやかに細胞を懸濁する。
腫細胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳでよく洗浄し、細胞数
が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞−５〜１０：１になるよ
う混合し、遠心分離（１，２０Ｏｒｐｍ ５分）した後
、上清を捨て、沈殿した細胞群をよくほぐした後、攪拌
しながら、３７℃で、ポリエチレングライコールｌ、
０００ （ＩＩＢＧ−，１，０００）ｊｇ、ＭＥＭ、２
ｍｌ、ジメチルスルホキント−０，７ｍｌの混液０．２
〜１ｍｌ／１０”抗体産生細胞を加え、１〜２分毎にＭ
ＥＭ１〜２ｍｌを数回加えた後、ＭＥＭを加えて全量が
５０ｍ１になるようにする。遠心後（９００ｒｐｌＴｌ
、 ５分）、上清を捨て、ゆるやかに細胞をほぐした後
、正常培地１０ Ｑｍｌを加え、メスピペットによる吸
込み、吹出しでゆるやかに細胞を懸濁する。
この懸濁液を２４穴培養用プレートに１ｍ１／穴ずつ分
注し、５％ＣＯ２インキュベーク−中、３７℃で２４時
間培養する。培養プレートに１ｍｌ／穴のＨＡＴ培地〔
正常培地にヒポキサンチン（１０−’Ｍ）、チミジン（
１，５Ｘ １０−５Ｍ）およびアミノプテリン（４Ｘ１
０−’Ｍ）を加えた培地〕を加え、さらに２４時間培養
する。以後２日間、２４時間目毎に、培養上清１ｍｌを
捨て、新たに同量のＨＡＴ培地を加え、ＣＯ。インキュ
ベーク−中、３７℃で１０〜１４日間培養する。
注し、５％ＣＯ２インキュベーク−中、３７℃で２４時
間培養する。培養プレートに１ｍｌ／穴のＨＡＴ培地〔
正常培地にヒポキサンチン（１０−’Ｍ）、チミジン（
１，５Ｘ １０−５Ｍ）およびアミノプテリン（４Ｘ１
０−’Ｍ）を加えた培地〕を加え、さらに２４時間培養
する。以後２日間、２４時間目毎に、培養上清１ｍｌを
捨て、新たに同量のＨＡＴ培地を加え、ＣＯ。インキュ
ベーク−中、３７℃で１０〜１４日間培養する。
コロニー状に生育してきた融合細胞の認められる穴につ
いて、上清１ｍｌを捨て、）ＩＴ培地（ＨＡＴ培地から
アミノプテリンを除いた培地）を同量加え、以後２４時
間目毎に２日間ＨＴ培地への変換を行う。
いて、上清１ｍｌを捨て、）ＩＴ培地（ＨＡＴ培地から
アミノプテリンを除いた培地）を同量加え、以後２４時
間目毎に２日間ＨＴ培地への変換を行う。
ＨＴ培地で３〜４日間培養後、培養上清の一部をとり上
記の酵素免疫測定法により、抗ヒト腫瘍抗体価を測定す
る。このとき、同様の方法で、ヒト正常細胞、組織ある
いはその膜成分な３どとの反応性も測定し、ヒト腫瘍抗
原に特異的に反応するものを選択する。腫瘍抗原に強く
反応し、ヒト正常細胞、組織あるいはその膜成分などに
反応しない穴について、限界希釈法によりり７０−ニン
グを２回繰り返し、安定して腫瘍抗原に強い抗体価の認
められたものを抗ヒト腫瘍単りローン性抗体産生ハイブ
リドーマ株として選択する。
記の酵素免疫測定法により、抗ヒト腫瘍抗体価を測定す
る。このとき、同様の方法で、ヒト正常細胞、組織ある
いはその膜成分な３どとの反応性も測定し、ヒト腫瘍抗
原に特異的に反応するものを選択する。腫瘍抗原に強く
反応し、ヒト正常細胞、組織あるいはその膜成分などに
反応しない穴について、限界希釈法によりり７０−ニン
グを２回繰り返し、安定して腫瘍抗原に強い抗体価の認
められたものを抗ヒト腫瘍単りローン性抗体産生ハイブ
リドーマ株として選択する。
（５）単クローン性抗体の調製
ブリスタン処理（２，６，１０，１４−テトラメチルベ
ンクデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ） ０．５ｍｌを腹腔内
投与し、２週間飼育する〕した８〜１０週令のＢへＬｌ
］／ｃ雌マウスに、（４）で得られた抗ヒト腫瘍単りロ
ーン性抗体ハイブリドーマ細胞２〜４ Ｘ １０６細胞
／匹をＩｌ！腔内注射する。１０〜２１日でハイブリド
ーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠
心（３，００Ｏｒｐｍ、５分）して固形分を除去後、５
０％硫安、つづいて４０％硫安で塩析をし、ＰＢＳ（ｐ
Ｈ７，２）で１〜２日間透析する。この透析画分を、Ｄ
ＢＡＢ−セファロースカラム、プロティンＡセファロー
スカラムなどに通塔し、ＩｇＧ画分を集め、精製単クロ
ーン性抗体とする。
ンクデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ） ０．５ｍｌを腹腔内
投与し、２週間飼育する〕した８〜１０週令のＢへＬｌ
］／ｃ雌マウスに、（４）で得られた抗ヒト腫瘍単りロ
ーン性抗体ハイブリドーマ細胞２〜４ Ｘ １０６細胞
／匹をＩｌ！腔内注射する。１０〜２１日でハイブリド
ーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠
心（３，００Ｏｒｐｍ、５分）して固形分を除去後、５
０％硫安、つづいて４０％硫安で塩析をし、ＰＢＳ（ｐ
Ｈ７，２）で１〜２日間透析する。この透析画分を、Ｄ
ＢＡＢ−セファロースカラム、プロティンＡセファロー
スカラムなどに通塔し、ＩｇＧ画分を集め、精製単クロ
ーン性抗体とする。
モノクローナル抗体が１ｇＭクラスの場合は得られた腹
水から固形分を除いた後、レジン水、あるいは０．０１
Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６，０）で２〜４時間透析し
、出−Ｃきた沈殿を遠心分離によゲＣ集め、３〜５％食
塩水に溶解し、［１，８５％食塩水で１〜２日間透析す
る。この透析画分ヲ、口ＢＡＢ−セファロースカラム、
プロティンへ−セファロース力ラムなどに通塔し、Ｉｇ
Ｍ画分を集め精製単クローン性抗体とする。
水から固形分を除いた後、レジン水、あるいは０．０１
Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６，０）で２〜４時間透析し
、出−Ｃきた沈殿を遠心分離によゲＣ集め、３〜５％食
塩水に溶解し、［１，８５％食塩水で１〜２日間透析す
る。この透析画分ヲ、口ＢＡＢ−セファロースカラム、
プロティンへ−セファロース力ラムなどに通塔し、Ｉｇ
Ｍ画分を集め精製単クローン性抗体とする。
抗体のインタイブの決定は、０ｕｃｌ＋ｔｅｒｌｏｎｙ
法（二重免疫拡散法）（免疫学実験入門、生物化学実験
法１５、学会出版センター刊、Ｐ、 ７４１９８１年）
によって行う。
法（二重免疫拡散法）（免疫学実験入門、生物化学実験
法１５、学会出版センター刊、Ｐ、 ７４１９８１年）
によって行う。
蛋白量の定量は、フォーリン法および２８０ｎｍでの吸
光度［１，４（ＯＤ、、。）−イムノグロブリンｌＩＩ
Ｉｇ／ｍｌ）より算出する。
光度［１，４（ＯＤ、、。）−イムノグロブリンｌＩＩ
Ｉｇ／ｍｌ）より算出する。
得られた単クローン性抗体の特異性の決定は複数の検体
から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは腫瘍
組織あるいはその膜成分との反応性、各種のヒト正常あ
るいは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株もしく
はそれらの膜成分との反応性、従来から知られている癌
胎児抗原（例えばＣＥＡ）との反応性、正常、患者ヒト
血清との反応性などを、酵素免疫測定法、螢光抗体法、
免疫組織学的判定法（ＰＡＰ法）などにより行う。
から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは腫瘍
組織あるいはその膜成分との反応性、各種のヒト正常あ
るいは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株もしく
はそれらの膜成分との反応性、従来から知られている癌
胎児抗原（例えばＣＥＡ）との反応性、正常、患者ヒト
血清との反応性などを、酵素免疫測定法、螢光抗体法、
免疫組織学的判定法（ＰＡＰ法）などにより行う。
また、このようにして得られた、ヒト腫瘍細胞に特異的
に反応する単クローン性抗体は、血／１１検査、組織診
断、イメジーングなどによる腫瘍の診断、さらには、抗
体そのものを、あるいは抗体に制癌剤や毒素を結合させ
た、いわゆるイムノトキシンを癌患者に投与することに
より腫瘍の治療を行うことができるものと期待される。
に反応する単クローン性抗体は、血／１１検査、組織診
断、イメジーングなどによる腫瘍の診断、さらには、抗
体そのものを、あるいは抗体に制癌剤や毒素を結合させ
た、いわゆるイムノトキシンを癌患者に投与することに
より腫瘍の治療を行うことができるものと期待される。
さらに、この腫瘍特異抗原クローン性抗体を用いるアフ
ィニティーカラムにより、腫瘍特異抗原を精製し、その
抗原の解析ひいては、癌ワクチンの開発にも使用できる
ものと期待される。
ィニティーカラムにより、腫瘍特異抗原を精製し、その
抗原の解析ひいては、癌ワクチンの開発にも使用できる
ものと期待される。
以下本発明の実施例を示す。
実施例１゜
（１） ヒト正常肺細胞あるいは組織トンラントマウス
の誘導とヒト肺癌細胞、組織による免疫ならびに抗体産
生細胞の調製 ヒト正常肺細胞Ｃ［：Ｄ−８Ｌｕ （ＡＴＣＣＣＣＬ−
２０１）８Ｘ１０５細胞またはヒト正常肺腺成分２ｍｇ
〜８ｍｇ（蛋白として）を、生後２４時間以内の新生径
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、静脈、腹腔内右よび／または皮
下に投与した。８週間経過後、ヒト肺腺癌細胞Ａ−５４
９（ＡＴＣＣＣＣＬ−１８５） ２〜５Ｘ１０６細胞あ
るいは、ヒト肺扁平上皮癌あるいはヒト肺腺癌膜成分１
００μｇ（蛋白として）を水酸化アルミニウムゲル（２
ｍｇ）、百日咳菌死菌ワクチン（ＩＸＩＯ９細胞）とと
もに腹腔内に投与し、以後、１〜２週問おきに、ヒト肺
腺癌細胞Ａ−５４９２〜５Ｘ１０６細胞あるいは、ヒト
肺扁平上皮癌あるいは腺癌膜成分１００ｍｇ（蛋白とし
て）を腹腔内に投与した。各投与後、３〜４日目に、眼
底静脈叢より採血し、抗血清を採取した。対照として、
トンラント処理をしていない８週令のＢＡＬＤ／ｃマウ
スに同様の免疫をした。
の誘導とヒト肺癌細胞、組織による免疫ならびに抗体産
生細胞の調製 ヒト正常肺細胞Ｃ［：Ｄ−８Ｌｕ （ＡＴＣＣＣＣＬ−
２０１）８Ｘ１０５細胞またはヒト正常肺腺成分２ｍｇ
〜８ｍｇ（蛋白として）を、生後２４時間以内の新生径
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、静脈、腹腔内右よび／または皮
下に投与した。８週間経過後、ヒト肺腺癌細胞Ａ−５４
９（ＡＴＣＣＣＣＬ−１８５） ２〜５Ｘ１０６細胞あ
るいは、ヒト肺扁平上皮癌あるいはヒト肺腺癌膜成分１
００μｇ（蛋白として）を水酸化アルミニウムゲル（２
ｍｇ）、百日咳菌死菌ワクチン（ＩＸＩＯ９細胞）とと
もに腹腔内に投与し、以後、１〜２週問おきに、ヒト肺
腺癌細胞Ａ−５４９２〜５Ｘ１０６細胞あるいは、ヒト
肺扁平上皮癌あるいは腺癌膜成分１００ｍｇ（蛋白とし
て）を腹腔内に投与した。各投与後、３〜４日目に、眼
底静脈叢より採血し、抗血清を採取した。対照として、
トンラント処理をしていない８週令のＢＡＬＤ／ｃマウ
スに同様の免疫をした。
それらの抗血清の正常および腫瘍細胞、組織あるいはそ
の膜成分との酵素免疫測定法による反応性の１例を第１
表、第２表、第３表に示した。
の膜成分との酵素免疫測定法による反応性の１例を第１
表、第２表、第３表に示した。
第１表 ヒト正常肺培養株（ＣＯＤ−８Ｌｕ）に対する
トンラントマウスにおける血清の正常肺培養株および肺
腺癌培養株（Ａ−５４９）に対する反応性 第２表 ヒト正常線膜成分に対するトンラントマウスに
おける血清の正常肺および肺扁平上皮癌膜成分に対する
反応性 第３表 ヒト正常線膜成分に対するトンラントマウスに
おける血清のヒト正常各種１藏器組織由来膜成分との反
応性 膜成分由来臓器 ０Ｄｓｏ。
トンラントマウスにおける血清の正常肺培養株および肺
腺癌培養株（Ａ−５４９）に対する反応性 第２表 ヒト正常線膜成分に対するトンラントマウスに
おける血清の正常肺および肺扁平上皮癌膜成分に対する
反応性 第３表 ヒト正常線膜成分に対するトンラントマウスに
おける血清のヒト正常各種１藏器組織由来膜成分との反
応性 膜成分由来臓器 ０Ｄｓｏ。
同様に、ヒト胃組織膜成分でトンラント処理をしたマウ
スあるいはヒト肺組織膜成分でトンラント処理をしたマ
ウスに、ヒト胃癌培養株あるいはヒト胃癌組織膜成分で
免疫をかけたマウスからの抗血清は、ヒト正常胃細胞、
組織あるいはその膜成分とは反応しないか、あるいは無
処理群と比べ反応性が低く、ヒト胃癌細胞、組織あるい
はその膜成分とは強く反応した。
スあるいはヒト肺組織膜成分でトンラント処理をしたマ
ウスに、ヒト胃癌培養株あるいはヒト胃癌組織膜成分で
免疫をかけたマウスからの抗血清は、ヒト正常胃細胞、
組織あるいはその膜成分とは反応しないか、あるいは無
処理群と比べ反応性が低く、ヒト胃癌細胞、組織あるい
はその膜成分とは強く反応した。
これと同様に、トンロジェンおよび免疫源を種々変える
ことにより、ヒト正常細胞、組織あるいはその膜成分に
反応しないか、あるいは反応性が著しく低下し、かつ、
各種のヒ） ＩＩ！Ｉｔ瘍細胞、組織あるいは、その膜
成分と強く反応する各種のヒト腫瘍に特異的に反応する
抗体産生能を持ったマウスを誘導することができた。
ことにより、ヒト正常細胞、組織あるいはその膜成分に
反応しないか、あるいは反応性が著しく低下し、かつ、
各種のヒ） ＩＩ！Ｉｔ瘍細胞、組織あるいは、その膜
成分と強く反応する各種のヒト腫瘍に特異的に反応する
抗体産生能を持ったマウスを誘導することができた。
これらヒト腫瘍特異的抗体価の認められたマウスより、
最終免疫後３〜４日目に、膵臓を摘出し、牌細胞を調製
して、細胞融合に供した。
最終免疫後３〜４日目に、膵臓を摘出し、牌細胞を調製
して、細胞融合に供した。
（２）マウス骨髄腫細胞の調製
８−アザグアニン耐性マウス骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｌｌｌ
を正常培地で培養し、細胞融合時に２ ＸｌＯ７以上の
細胞を得、細胞融合に親株として供した。
を正常培地で培養し、細胞融合時に２ ＸｌＯ７以上の
細胞を得、細胞融合に親株として供した。
（３）ハイブリドーマの作製
（１）と（２）で得られた牌細胞と骨髄腫細胞を５；１
の割合で用い、前述した方法で融合させ、ＨΔＴ培地で
３７℃、１４日間Ｃ０２５％下で培養して、融合細胞を
選択し、ＨＴ培地に代えてさらに培養し、抗ヒト腫瘍抗
体価の測定をして、活性な穴を選び、さらに正常培地に
代え、２回クローニングを繰り返して、ヒト肺腫瘍に特
異的な単クローン性抗体を産生ずるハイプリドーマ株、
５ＬＣＩ 〜６およびＡＬＣ−１〜４を選択した。
の割合で用い、前述した方法で融合させ、ＨΔＴ培地で
３７℃、１４日間Ｃ０２５％下で培養して、融合細胞を
選択し、ＨＴ培地に代えてさらに培養し、抗ヒト腫瘍抗
体価の測定をして、活性な穴を選び、さらに正常培地に
代え、２回クローニングを繰り返して、ヒト肺腫瘍に特
異的な単クローン性抗体を産生ずるハイプリドーマ株、
５ＬＣＩ 〜６およびＡＬＣ−１〜４を選択した。
（４）単クローン性抗体の精製
プリスタン処理した８週令晶ＬＢ／ｃ雌マウスに（３）
で得られたハイプリドーマ株を４Ｘ１０６細胞／匹腹腔
内注射した。１０〜２１日後に、ハイブリドーマは腹水
癌化した。腹水のたまったマウスから、腹水を採取（５
〜１０ｍ１／匹〉し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ、
５分）して固形分を除去した。
で得られたハイプリドーマ株を４Ｘ１０６細胞／匹腹腔
内注射した。１０〜２１日後に、ハイブリドーマは腹水
癌化した。腹水のたまったマウスから、腹水を採取（５
〜１０ｍ１／匹〉し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ、
５分）して固形分を除去した。
ＩｇＭクラスの抗体は、レジン水あるいは、０．ＯＩＭ
ＰＢＳ（ｐＨ６，５）で２時間透Ｍ’ｒ（、、生じた
沈殿を１０，０［１０ｒｐｍ １５分遠心分１雄し、上
／１１１を除去した後、３％食塩水に溶解した後、＋１
．８５％食塩水で２Ｅ月１１１透４Ｕｊ したものを粗
精製抗体として用いた。
ＰＢＳ（ｐＨ６，５）で２時間透Ｍ’ｒ（、、生じた
沈殿を１０，０［１０ｒｐｍ １５分遠心分１雄し、上
／１１１を除去した後、３％食塩水に溶解した後、＋１
．８５％食塩水で２Ｅ月１１１透４Ｕｊ したものを粗
精製抗体として用いた。
（５〕 抗ヒト肺癌単りローン性抗体の特異性ヒト肺扁
平上皮癌組織膜成分およびヒト肺腺癌組織膜成分で免疫
したトンラントマウスより、（１）〜（３）の方法に従
って選択したハイブリドーマを用い（４）の方法に従っ
て得た単クローン性抗体について、種々の方法でその性
質を明らかにした。第４表にその結果を示す。
平上皮癌組織膜成分およびヒト肺腺癌組織膜成分で免疫
したトンラントマウスより、（１）〜（３）の方法に従
って選択したハイブリドーマを用い（４）の方法に従っ
て得た単クローン性抗体について、種々の方法でその性
質を明らかにした。第４表にその結果を示す。
第４表より明らかなように、これらの単クローン性抗体
は、ヒト正常細胞や組織とは全く反応せず腫瘍細胞、組
織とのみ特異的に反応するので、１１・１１瘍の診断、
治療にイ１用−Ｃあり、５ＬＣ−２、ΔＬＣ−２は特に
肺癌の、Ｓ Ｌ Ｉ −１は肺扁平上皮癌の、ΔＬＣＩ
は肺腺癌の診断・治療に極めて有用である。
は、ヒト正常細胞や組織とは全く反応せず腫瘍細胞、組
織とのみ特異的に反応するので、１１・１１瘍の診断、
治療にイ１用−Ｃあり、５ＬＣ−２、ΔＬＣ−２は特に
肺癌の、Ｓ Ｌ Ｉ −１は肺扁平上皮癌の、ΔＬＣＩ
は肺腺癌の診断・治療に極めて有用である。
実施例２゜
ヒト胃癌について、実施例１に−おけるヒト正常肺細胞
ＣＣＤ−３Ｌｕに替えてヒト胃癌組織を用い、ヒト肺腺
癌細胞Ａ−５４９に替えてヒト胃扁平上皮癌またはヒト
腺癌の膜成分を用いる以外は実施例１と同様に実施した
結果、ＡＭＣ１〜３゜ＳＭＣ−１〜４の単クローン性抗
体を得た。その性質を第５表に示した。
ＣＣＤ−３Ｌｕに替えてヒト胃癌組織を用い、ヒト肺腺
癌細胞Ａ−５４９に替えてヒト胃扁平上皮癌またはヒト
腺癌の膜成分を用いる以外は実施例１と同様に実施した
結果、ＡＭＣ１〜３゜ＳＭＣ−１〜４の単クローン性抗
体を得た。その性質を第５表に示した。
Claims (1)
- ヒト正常細胞または正常組織もしくはそれらの膜成分に
免疫的寛容になった動物を、ヒト腫瘍細胞または腫瘍組
織もしくはそれらの膜成分で免疫し、咳免疫した動物の
抗体産生細胞と骨髄腫網ｎ包とを融合させてハイブリド
ーマを作成し、該癌細胞または腫瘍組織もしくはそれら
の膜成分にのみ特異的に反応する単クローン性抗体を産
生ずるハイブリドーマを選択し、該ハイブリドーマを培
地中で培養するか動物で腹水化することにより、該ヒト
の腫瘍細胞または腫瘍組織もしくはそれらの膜成分に特
異的に反応する単クローン性抗体を製造することを特徴
とする抗腫瘍特異的単クローン性抗体の製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59046683A JPS60190721A (ja) | 1984-03-12 | 1984-03-12 | 抗腫瘍特異的単クロ−ン性抗体の製造法 |
| CA000476216A CA1312024C (en) | 1984-03-12 | 1985-03-11 | Process for preparing hybridoma cells which produce tumour-specific monoclonal antibodies |
| DE198585301678T DE156578T1 (de) | 1984-03-12 | 1985-03-11 | Verfahren zur herstellung von tumorspezifische monoklonale antikoerper produzierenden hybridomazellen. |
| EP85301678A EP0156578B1 (en) | 1984-03-12 | 1985-03-11 | A process for preparing hybridoma cells which produce tumour specific monoclonal antibodies |
| DE8585301678T DE3576359D1 (de) | 1984-03-12 | 1985-03-11 | Verfahren zur herstellung von tumorspezifische monoklonale antikoerper produzierenden hybridomazellen. |
| US07/244,601 US4892934A (en) | 1984-03-12 | 1988-09-14 | Process for preparing hybridoma cells which produce tumor-specific monoclonal antibodies |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59046683A JPS60190721A (ja) | 1984-03-12 | 1984-03-12 | 抗腫瘍特異的単クロ−ン性抗体の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60190721A true JPS60190721A (ja) | 1985-09-28 |
Family
ID=12754172
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59046683A Pending JPS60190721A (ja) | 1984-03-12 | 1984-03-12 | 抗腫瘍特異的単クロ−ン性抗体の製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4892934A (ja) |
| EP (1) | EP0156578B1 (ja) |
| JP (1) | JPS60190721A (ja) |
| CA (1) | CA1312024C (ja) |
| DE (2) | DE3576359D1 (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6283898A (ja) * | 1985-10-09 | 1987-04-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺腺癌特異的単クロ−ン性抗体 |
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