JPS6233199A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
- Publication number
- JPS6233199A JPS6233199A JP60173929A JP17392985A JPS6233199A JP S6233199 A JPS6233199 A JP S6233199A JP 60173929 A JP60173929 A JP 60173929A JP 17392985 A JP17392985 A JP 17392985A JP S6233199 A JPS6233199 A JP S6233199A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carcinoma
- cell
- cancer
- cells
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、高分化型食道癌由来細胞株（ＴＥ−１）を免
疫原として作製されたハイブリドーマの産生ずる特定の
特性を持つモノクローナル抗体に関する。
疫原として作製されたハイブリドーマの産生ずる特定の
特性を持つモノクローナル抗体に関する。
癌研究の究極の目標は、抗癌、制癌作用を示す物質の探
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何にを効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何にを効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。
免疫反応（抗原−抗体反応）は、非常に特異性が高いも
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ）らによって開発されたモノクロー
ナル抗体〔ケーラー、ジーおよびミルスティン、シー：
ネーチャー（Ｋｏｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍｊｌｓ
ｔｅｉｎ、 Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ） ２５６＋４９５
、 （１９７５） ）は、この壁を打ち破るものであり
、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特異的
に認識するモノクローナル抗体を得ることにより、正常
Ｍｉ織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特異的に排
除できるものと朋待される。また、モノクローナル抗体
を用いた診断薬あるいは検査試薬は、正常血清成分に対
する交叉反応がなく、感度良く、癌関連抗原、癌特異抗
原を検出できるものと思われる。
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を繰り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。ミルスティン（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ）らによって開発されたモノクロー
ナル抗体〔ケーラー、ジーおよびミルスティン、シー：
ネーチャー（Ｋｏｈｌｅｒ、 Ｇ、 ａｎｄ Ｍｊｌｓ
ｔｅｉｎ、 Ｃ，： Ｎａｔｕｒｅ） ２５６＋４９５
、 （１９７５） ）は、この壁を打ち破るものであり
、癌細胞上の癌特異抗原、あるいは癌関連抗原を特異的
に認識するモノクローナル抗体を得ることにより、正常
Ｍｉ織へのダメージを与えずに癌細胞のみを特異的に排
除できるものと朋待される。また、モノクローナル抗体
を用いた診断薬あるいは検査試薬は、正常血清成分に対
する交叉反応がなく、感度良く、癌関連抗原、癌特異抗
原を検出できるものと思われる。
本発明は、特定の癌抗原に対して特異的に反応するモノ
クローナル抗体を提供するものである。
クローナル抗体を提供するものである。
さらに本発明は、上記特定癌に対する抗原検出用試薬を
提供するものである。
提供するものである。
本発明は、食道癌、特に食道癌の細胞膜抗原に対して特
異的に反応するモノクローナル抗体よりなるものである
。
異的に反応するモノクローナル抗体よりなるものである
。
本発明のモノクローナル抗体は、いわゆる細胞融合によ
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞（即ち、上記特性を有す
る特定抗原）に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。
抗体産生細胞は、例えば株化癌細胞より得られる抗原に
よって免疫された動物からの牌細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である。株化癌細胞としては、高分化型食道
癌由来の株化癌細胞（ＴＥ−１）が例示される。
よって免疫された動物からの牌細胞、リンパ節細胞、Ｂ
−リンパ球である。株化癌細胞としては、高分化型食道
癌由来の株化癌細胞（ＴＥ−１）が例示される。
免疫させる動物としてはマウス、ラット、馬、ヤギ、ウ
サギなどが例示される。
サギなどが例示される。
抗体産生細胞は、例えば、次のようにして製造される。
即ち、高分化型食道癌由来細胞ＴＥ−１を超音波処理等
で破壊し、遠心分離（例、１０，０００〜２０．０００
Ｇ、１０〜６０分）を行って細胞抽出液を得、この上
清を分子量】０万〜２００万の物質の分離が可能なゲル
濾過担体（例、セファデックス、セファクリル、セファ
ロース、バイオゲル等）を使用して分子篩し、高分子画
分と低分子画分とに分離する。かくして得られた分子量
が約７０万〜１５０万の高分子画分は、例えば、完全フ
ロインドアジュバント （Ｆｒｅｕｎｄ Ｃｏｍｐｌｅ
ｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動物の免疫用とし
て使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内或いは腹腔内に
約１．５ｘ１０ｓ〜１０＠ｃａｌｌ相当分／回を注射す
ることにより行われ、初回免疫より約３〜５週間毎に３
度免疫を行い、更に約３ケ月後に最終免疫を行う。最終
免疫より約３〜５日後、免疫動物から抗体産生細胞を分
取する。
で破壊し、遠心分離（例、１０，０００〜２０．０００
Ｇ、１０〜６０分）を行って細胞抽出液を得、この上
清を分子量】０万〜２００万の物質の分離が可能なゲル
濾過担体（例、セファデックス、セファクリル、セファ
ロース、バイオゲル等）を使用して分子篩し、高分子画
分と低分子画分とに分離する。かくして得られた分子量
が約７０万〜１５０万の高分子画分は、例えば、完全フ
ロインドアジュバント （Ｆｒｅｕｎｄ Ｃｏｍｐｌｅ
ｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ）と混和後、動物の免疫用とし
て使用する。免疫は動物の皮下、筋肉内或いは腹腔内に
約１．５ｘ１０ｓ〜１０＠ｃａｌｌ相当分／回を注射す
ることにより行われ、初回免疫より約３〜５週間毎に３
度免疫を行い、更に約３ケ月後に最終免疫を行う。最終
免疫より約３〜５日後、免疫動物から抗体産生細胞を分
取する。
骨髄腫細胞としてはマウス、ラット、ヒト等由来のもの
が使用される。抗体産生細胞と骨髄腫細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。
が使用される。抗体産生細胞と骨髄腫細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。
細胞融合は、たとえば、ジー ガルファーら（Ｇ。
Ｇａ１ｆｒｅ） （ネーチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ） ２６
６、５５０． （１９７７））に記載の方法又はこれに
準する方法によって行われる。この際、３０〜５０％ポ
リエチレングリコール（平均分子量１．．０００〜４，
０００ ）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分
間程度反応させることによって行われる。
６、５５０． （１９７７））に記載の方法又はこれに
準する方法によって行われる。この際、３０〜５０％ポ
リエチレングリコール（平均分子量１．．０００〜４，
０００ ）を用いて３０〜４０℃の温度下、約１〜３分
間程度反応させることによって行われる。
細胞融合によって得られた細胞は目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち一１当該細胞を、例えばマイクロプレート中で
培養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を
、例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を
産生じているウェルを得る。このようなウェルから更に
例えば限界希釈法によってクローニングを行ってクロー
ンを得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタ
ンを投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１
０〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水
を採取し、検定する。選ばれたクローンの産生ずるモノ
クローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法とし
て従来既知の硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分
画法、陰イオン変換体を応用することで、容易に達成さ
れる。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングに付され
る。即ち一１当該細胞を、例えばマイクロプレート中で
培養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を
、例えば酵素抗体法などによって測定し、適切な抗体を
産生じているウェルを得る。このようなウェルから更に
例えば限界希釈法によってクローニングを行ってクロー
ンを得る。このクローンは、例えばあらかじめプリスタ
ンを投与したＢＡＬＢ／Ｃマウスの腹腔内へ移植し、１
０〜１４日後にモノクローナル抗体を高濃度に含む腹水
を採取し、検定する。選ばれたクローンの産生ずるモノ
クローナル抗体の回収は、免疫グロブリンの精製法とし
て従来既知の硫安分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分
画法、陰イオン変換体を応用することで、容易に達成さ
れる。
本発明によって得られたモノクローナル抗体は、食道癌
細胞に特異的に反応し、細胞膜表面抗原を認識し、かつ
正常組織由来培養細胞、正常組機とは反応せず、癌特異
的な抗原を認識するものとｉｌｋ測される。即ち、本発
明からなるモノクローナル抗体は腫瘍のイメージング及
び制癌剤とコンジュゲートさせ、ターゲティング セラ
ビイ （Ｌａｒｇｅ ｔ−ｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｙ ）
等への臨床応用が期待される。
細胞に特異的に反応し、細胞膜表面抗原を認識し、かつ
正常組織由来培養細胞、正常組機とは反応せず、癌特異
的な抗原を認識するものとｉｌｋ測される。即ち、本発
明からなるモノクローナル抗体は腫瘍のイメージング及
び制癌剤とコンジュゲートさせ、ターゲティング セラ
ビイ （Ｌａｒｇｅ ｔ−ｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｙ ）
等への臨床応用が期待される。
実施例
ｆｉ＋ 免疫用癌関連抗原の調製：
株化食道癌細胞（ＴＥ−１株）を超音波処理法で破壊し
、遠心分離（１５，０ＯＯＧ、３０分）を行い細胞抽出
液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラムを用い
、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した。
、遠心分離（１５，０ＯＯＧ、３０分）を行い細胞抽出
液を得た。この上清をセファロース４Ｂのカラムを用い
、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した。
分子量が約７０万〜１５０万の高分子画分を、完全フロ
インドアジュバントと混和後、マウスへ約１ケ月毎に３
度免疫を行い、更に３ケ月後に最終免疫を行った。
インドアジュバントと混和後、マウスへ約１ケ月毎に３
度免疫を行い、更に３ケ月後に最終免疫を行った。
最終免疫より４日後にマウス牌臓を取り出し、以下の細
胞融合に用いた。
胞融合に用いた。
（２）細胞融合およびクローニング：
上記のマウス牌細胞と、マウスミエローマＰ３１１１〔
カレント トビンクス イン マイクロハイオロノー
アンド イムノロジー（Ｃｕｒｒ、 Ｔｏｐ、 Ｍｉｃ
−ｒｏｂｉｏｌ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、） ８１．１．
（１９７８） ）とを約３：ｌの割合で混合し、ケーラ
ー（Ｋｏｈｌｅｒ ） らの方法〔イムノロジカル
メソッド（アカデミツクプレス）１ ニューヨーク （
［ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ門ｅｔｌ＋ｏｄ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 ３９
１．１９７９））を一部改変して、４５％ポリエチレン
グリコール（平均分子ｉ ４．０００）を用いて２分間
反応させることにより細胞融合を行った。
カレント トビンクス イン マイクロハイオロノー
アンド イムノロジー（Ｃｕｒｒ、 Ｔｏｐ、 Ｍｉｃ
−ｒｏｂｉｏｌ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、） ８１．１．
（１９７８） ）とを約３：ｌの割合で混合し、ケーラ
ー（Ｋｏｈｌｅｒ ） らの方法〔イムノロジカル
メソッド（アカデミツクプレス）１ ニューヨーク （
［ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ門ｅｔｌ＋ｏｄ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、 ３９
１．１９７９））を一部改変して、４５％ポリエチレン
グリコール（平均分子ｉ ４．０００）を用いて２分間
反応させることにより細胞融合を行った。
本細胞を９６ウエルマイクロプレートに植え込み、ＨＡ
Ｔ培地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表
１）に移行し、更にフラスコ（２５ｄ）に培養できるよ
うになってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増
殖の見られたウェルの培養土項中の抗体価を酵素抗体法
により測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求
めるハイブリドーマのクローニングを行った。
Ｔ培地（表１）で９〜１４日間培養後、ＨＴ培地（表
１）に移行し、更にフラスコ（２５ｄ）に培養できるよ
うになってからＤ−ＭＥＭ培地（表１）で培養した。増
殖の見られたウェルの培養土項中の抗体価を酵素抗体法
により測定し、適切なウェルから限界希釈法により、求
めるハイブリドーマのクローニングを行った。
即ち、マイクロタイタープレートにウヱル当たり２５，
０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ−Ｍ
ＥＭ培地で、１０．５．２．５．１個１０．１−となる
ようにハイブリドーマを希釈し、これをマイクロクイタ
ープレートに０．１−ずつ植え込み培養した。４日後に
Ｄ−ＭＥＭ培地を０．１０１７加え、以後４〜７日に１
度、培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０日
で肉眼で認められるコロニーが形成され、クローン株を
得た。
０００個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にＤ−Ｍ
ＥＭ培地で、１０．５．２．５．１個１０．１−となる
ようにハイブリドーマを希釈し、これをマイクロクイタ
ープレートに０．１−ずつ植え込み培養した。４日後に
Ｄ−ＭＥＭ培地を０．１０１７加え、以後４〜７日に１
度、培地の半量交換を行った。培養開始後１０〜２０日
で肉眼で認められるコロニーが形成され、クローン株を
得た。
（以下余白）
表１
（３） スクリーニング法：
得られたハイブリドーマについて目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。
（イ）方法の説明
以下のようにして酵素抗体法を行った。
抗原（各種株化癌細胞または部分精製癌関連抗原または
正常細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え
、３７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ＋ Ｉ ｇＡ＋
Ｔ ｇＭ）ウサギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反
応させた。未反応の標識抗体を洗浄除去後、Ｏ−フェニ
レンジアミン液を加え、室温にて３０分間反応させた後
、２Ｍ硫酸を加えて反応を停止させ、４９０ｎｍの吸光
度を測定した。この方法で各種細胞との反応性を調べた
。
正常細胞）をコートしたマイクロプレートに検体を加え
、３７℃で１時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標
識抗マウス免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ＋ Ｉ ｇＡ＋
Ｔ ｇＭ）ウサギ抗体を加え、さらに３７℃で１時間反
応させた。未反応の標識抗体を洗浄除去後、Ｏ−フェニ
レンジアミン液を加え、室温にて３０分間反応させた後
、２Ｍ硫酸を加えて反応を停止させ、４９０ｎｍの吸光
度を測定した。この方法で各種細胞との反応性を調べた
。
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）との交叉反応性は、ＣＥＡ感作
血球を用いＰＨＡ法で行った。
血球を用いＰＨＡ法で行った。
モノクローナル抗体がＴＥ−１の分泌物抗原か或いは細
胞膜抗原のどちらを認識しているかの検討のために、Ｔ
Ｅ−１の培養上清でモノクローナル抗体とＴＥ−１細胞
そのものとの反応性が阻害されるかどうかを調べた。
胞膜抗原のどちらを認識しているかの検討のために、Ｔ
Ｅ−１の培養上清でモノクローナル抗体とＴＥ−１細胞
そのものとの反応性が阻害されるかどうかを調べた。
酵素抗体法を用いたインヒビジョン テスト （Ｉｎｈ
ｉｂｉｔｉｏｎ Ｔｅ５ｔ ）の具体的な方法は、以下
の通りである。即ち、ハイブリドーマの培養上清を酵素
抗体法でタイトレージョン（ｔｉ ｔｒａｔｉｏｎ）を
行い、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次に
、ＴＥ−１培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液と
して、１：５．１：５” ・・・・１ ： ５’希釈
したものを適当に希釈したハイプリドーマ培養上清にそ
れぞれ等量加え、１時間、３７℃でインキエベーション
する。そして、通常の酵素抗体法（ターゲット： ＴＥ
−１）の系でアッセイ（ａｓｓａｙ）を行った。
ｉｂｉｔｉｏｎ Ｔｅ５ｔ ）の具体的な方法は、以下
の通りである。即ち、ハイブリドーマの培養上清を酵素
抗体法でタイトレージョン（ｔｉ ｔｒａｔｉｏｎ）を
行い、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次に
、ＴＥ−１培養上清を５〜２５倍濃縮したものを原液と
して、１：５．１：５” ・・・・１ ： ５’希釈
したものを適当に希釈したハイプリドーマ培養上清にそ
れぞれ等量加え、１時間、３７℃でインキエベーション
する。そして、通常の酵素抗体法（ターゲット： ＴＥ
−１）の系でアッセイ（ａｓｓａｙ）を行った。
（ロ）スクリーニングの流れ
１次スクリーニング：ターゲットセル（ＴＥ−１）およ
び正常由来細胞（ＣＣＤ、、−Ｓに）を用いた酵素抗体
法で、ＴＥ−１に対して陽性でＣＣＩ］、、−ＳＫに対
して陰性なウェルを選抜。
び正常由来細胞（ＣＣＤ、、−Ｓに）を用いた酵素抗体
法で、ＴＥ−１に対して陽性でＣＣＩ］、、−ＳＫに対
して陰性なウェルを選抜。
２次スクリーニング：さらに他の正常由来細胞株を用い
たアッセイ（ａｓｓａｙ）系ですべてに陰性のウェルを
選抜。
たアッセイ（ａｓｓａｙ）系ですべてに陰性のウェルを
選抜。
３次スクリーニング：以上で選抜された細胞株を２〜３
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来の株化
細胞との反応性を検討するとともに、分泌型或いは細胞
膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体法を用いた
インヒビジョン テストで同定する。
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来の株化
細胞との反応性を検討するとともに、分泌型或いは細胞
膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体法を用いた
インヒビジョン テストで同定する。
（４） モノクローナル抗体の回収、精製：（イ）上
記のスクリーニングによって得られたクローン株を予め
０．５＠Ｚ／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡ
ＬＢ／Ｃマウス（誰）の腹腔内へ２．０〜３． Ｏｘ
１０’ ｅｅｌ ｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノ
クローナル抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
記のスクリーニングによって得られたクローン株を予め
０．５＠Ｚ／匹プリスタンを投与した４週令以後のＢＡ
ＬＢ／Ｃマウス（誰）の腹腔内へ２．０〜３． Ｏｘ
１０’ ｅｅｌ ｌ／匹移植し、１０〜１４日後にモノ
クローナル抗体を高濃度に含む腹水を採取した。
この腹水を０．９％ＮａＣ７！液を加え５〜１０倍希釈
した後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加
え、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少量
の０．９％Ｎ、３Ｃｅ液で溶解させた後、０．９％Ｎａ
Ｃｆ液を外液として透析した。
した後、硫酸アンモニウムを４０％濃度となるように加
え、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少量
の０．９％Ｎ、３Ｃｅ液で溶解させた後、０．９％Ｎａ
Ｃｆ液を外液として透析した。
透析終了後、高速液体クロマトグラフィー（ＴＳＫ−Ｇ
ｅｌｌ Ｇ−３０００５Ｗ ）を行い、ＩｇＭ画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。
ｅｌｌ Ｇ−３０００５Ｗ ）を行い、ＩｇＭ画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。
（ロ）本りローン株は、ＢＳＡ含無血清培地中でも増殖
させることができる。即ち、０．５％ＢＳＡ含無血清培
地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上清を
集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度とな
るように加え、沈澱画分を分取し、これに０．９％Ｎａ
Ｃ／！液を加え、溶解させた後、更に硫酸アンモニウム
を４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した。こ
の沈澱画分をなるべく少量の０．９％Ｎａ Ｃｊ！液で
溶解させた後、０．０２Ｍ生理的リン酸緩衝液を外液と
して透析した。透析終了後、ＤＥＡＥ−セルロファイン
力ラムに加え１．カラムクロマトグラフィーを行った。
させることができる。即ち、０．５％ＢＳＡ含無血清培
地（ＲＩＴＣ５５−９培地）中で増殖させ、培養上清を
集めた。この上清に硫酸アンモニウムを４０％濃度とな
るように加え、沈澱画分を分取し、これに０．９％Ｎａ
Ｃ／！液を加え、溶解させた後、更に硫酸アンモニウム
を４０％濃度となるように加え沈澱画分を分取した。こ
の沈澱画分をなるべく少量の０．９％Ｎａ Ｃｊ！液で
溶解させた後、０．０２Ｍ生理的リン酸緩衝液を外液と
して透析した。透析終了後、ＤＥＡＥ−セルロファイン
力ラムに加え１．カラムクロマトグラフィーを行った。
ＤＥＡＥ−セルロファインクロマトグラフィーの最初の
ピーク部分を精製モノクローナル抗体とした。
ピーク部分を精製モノクローナル抗体とした。
（５） モノクローナル抗体の特性：か（してスクリ
ーニングされたクローンの産生するモノクローナル抗体
の性状は、表２及び表３のとおりである。免疫グロブリ
ンのクラスはオフタロニー法で検定した。
ーニングされたクローンの産生するモノクローナル抗体
の性状は、表２及び表３のとおりである。免疫グロブリ
ンのクラスはオフタロニー法で検定した。
なお、本発明で用いた酵素抗体法は、ケネ７）（Ｋｅｎ
ｎｅｔｔ） らの方法〔モノクローナル アンチボデ
ィー（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、
３７６、 （１９８０） ）に準して細胞をそのまま
利用するエンザイム リンクトウ イムノソルベント
アッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ １．１ｎｋｅｄ Ｉｍｍ
ｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ） Ｃエリザ（ＥＬＩ
ＳＡ） ）法（以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。
ｎｅｔｔ） らの方法〔モノクローナル アンチボデ
ィー（ブレニウム プレス）ニューヨーク ロンドン、
３７６、 （１９８０） ）に準して細胞をそのまま
利用するエンザイム リンクトウ イムノソルベント
アッセイ（Ｅｎｚｙｍｅ １．１ｎｋｅｄ Ｉｍｍ
ｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ） Ｃエリザ（ＥＬＩ
ＳＡ） ）法（以下、ＣＥＬＩＳＡと略す）である。
表２
表３：抗ＴＥ−１モノクローナル抗体の反応特異性ＣＥ
ＬＩＳＡ反応性は、＋は反応陽性と判定される測定検体
の程度で示した。−は陰性を示した。
ＬＩＳＡ反応性は、＋は反応陽性と判定される測定検体
の程度で示した。−は陰性を示した。
ＣＥＬ Ｔ ＳＡ法におけるＯＤ４．。値−：Ｑ −
０，０４９ ± ： ０．０５０〜０．０９９＋ ：
０．１００〜０．３９９＋十： ０．４００〜０．
６９９ ＋十＋ ： ０．７００〜 特許出願人 株式会社 ミドリ十字 代理人弁理士高島 −：：１ｒ−Ｓ□゛□ｉ゛、′−：
− 手 続 主甫 正 書印発） 昭和６０年１０月１７日
０，０４９ ± ： ０．０５０〜０．０９９＋ ：
０．１００〜０．３９９＋十： ０．４００〜０．
６９９ ＋十＋ ： ０．７００〜 特許出願人 株式会社 ミドリ十字 代理人弁理士高島 −：：１ｒ−Ｓ□゛□ｉ゛、′−：
− 手 続 主甫 正 書印発） 昭和６０年１０月１７日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 高分化型食道癌由来細胞株（ＴＥ−１）を免疫原として
作製されたハイブリドーマの産生する以下の特性を持つ
モノクローナル抗体： （１）Ｉｇクラス：ＩｇＭ （２）認識抗原タイプ：細胞表面抗原 （３）癌細胞との反応性：次の癌細胞に対して陽性を示
す。 食道癌（ＴＥ−１）、食道癌（ＴＥ−２）、食道癌（Ｔ
Ｅ−３）、食道癌（ＴＥ−５）、食道癌（ＴＥ−７）、
食道癌（ＴＥ−１０）、肺癌（ＰＣ−３）、子宮内膜癌
（ＩＳＨＩＫＡＷＡ）、胃癌（ＭＫＮ−２８）、胃癌（
ＫＡＴＯ−III）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60173929A JPS6233199A (ja) | 1985-08-06 | 1985-08-06 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60173929A JPS6233199A (ja) | 1985-08-06 | 1985-08-06 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6233199A true JPS6233199A (ja) | 1987-02-13 |
| JPH042239B2 JPH042239B2 (ja) | 1992-01-16 |
Family
ID=15969687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60173929A Granted JPS6233199A (ja) | 1985-08-06 | 1985-08-06 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6233199A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6236397A (ja) * | 1985-08-12 | 1987-02-17 | Green Cross Corp:The | モノクロ−ナル抗体 |
| JPS6242999A (ja) * | 1985-08-16 | 1987-02-24 | Shichisaburo Abo | モノクロ−ナル抗体 |
-
1985
- 1985-08-06 JP JP60173929A patent/JPS6233199A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6236397A (ja) * | 1985-08-12 | 1987-02-17 | Green Cross Corp:The | モノクロ−ナル抗体 |
| JPS6242999A (ja) * | 1985-08-16 | 1987-02-24 | Shichisaburo Abo | モノクロ−ナル抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH042239B2 (ja) | 1992-01-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR900003923B1 (ko) | 인체 암종양과 관련된 항원에 대한 단일클론성 항체 | |
| US4446122A (en) | Purified human prostate antigen | |
| JPH09294584A (ja) | ヒト腫瘍壊死因子に対するモノクロナール抗体 | |
| JPS63290965A (ja) | Ｃａ１２５卵巣癌抗原用腫瘍特異性アッセイ | |
| JPS6122028A (ja) | 腎ガンの初期診断と治療のためのモノクロ−ナル抗体群 | |
| JPH0751062B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| EP0171083B1 (en) | Monoclonal antibody, process for preparing same, reagent for detecting cancer antigen containing the monoclonal antibody and process for preparing same | |
| US4752582A (en) | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof | |
| EP0203967B1 (en) | Onco-fetal specific monoclonal antibodies, methods of preparation and use | |
| US5051355A (en) | Anti-human gastric cancer monoclonal antibody | |
| JPS6233199A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS60190722A (ja) | 抗ヒト肺癌単クロ−ン性抗体 | |
| JPH0572207A (ja) | 非交差反応性ｃｅａ遺伝子系統群員抗体を用いる免疫検定方法 | |
| JPH046358B2 (ja) | ||
| JPS6236397A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPH06153979A (ja) | 魚類イリドウイルスに対するモノクローナル抗体並びに該抗体を製造するためのハイブリドーマ及び方法 | |
| JPS61249999A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS61250000A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS61183300A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6279793A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS63179895A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS63157995A (ja) | 抗ヒト大腸癌単クロ−ン性抗体ａｃｃ−５７４ | |
| JPS6236398A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6253930A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPH0475597A (ja) | ヒト免疫不全ウイルスの逆転写酵素に対するモノクローナル抗体、その製法及びその抗体産生株 |