JPS62272148A - 電気泳動用媒体材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 ［発明の分野］ 本発明は、電気泳動用媒体材料に関するものであり、さ
らに詳しくは特に蛋白質等、の生体高分子成分の電気泳
動分析に使用するのに適した電気泳動用媒体材料に関す
るものである。

［発明の背景］ 電気泳動分析の代表的な態様としては、ガラス板支持体
に寒天、セルロース、セルロースアセテート、デンプン
、シリカゲル、ポリアクリルアミド等の膜形成材料を塗
布または流延して製造した電気泳動膜に緩衝液をしみこ
ませ、このＬに分析対象の物質を付着させ、電気泳動膜
の両端に電圧をかけ、電気泳動膜１または内部で展開（
移動）させたのち、染色し、この染色した試料の光学濃
度を測定して物質の各成分の定量分析を行なう態様を挙
げることができる。

このような電気泳動分析および電気泳動膜の詳細につい
ては、電気泳動実験法「電気泳動実験法（改訂第５版）
」（文光堂、１９７５年発行）。

／７本、永井編箸「最新電気泳動法」　（広用占店。

１９７３年発行）等に記載されている。

近年において、電気泳動法は生体成分の分析に多用され
ており、特に蛋白分析は病気診断のための生化学検査に
おいて頻繁に用いられている。

電気泳動用膜またはシートとしてはＨ〈から濾紙が用い
られていたが、上述のように性１Ｆ、上の面から最近は
アガロース膜やポリアクリルアミドゲル膜が用いられる
ようになり、特に分子ふるい効果を有するポリアクリル
アミドゲル膜は現在最も多く利用されている。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
巾ｌ翳体を、重合触媒の存在下、Ｎ、Ｎ’−メチレンビ
スアクリルアミドのような二官能性の架橋剤で酸素不存
在条件下で重合架橋させることによって得られる。

上記のようにポリアクリルアミド形成の重合反応はラジ
カル架橋重合であるため、酸素の影！により架橋重合が
阻害される。従って、ポリアクリルアミドゲル膜は酸素
を遮断した状態で作成する必要がある。このため、一般
にポリアクリルアミドゲル膜は、二枚のガラス板から構
成されたセル（一定の空間、たとえば０．３ｍｍ〜１ｍ
ｍ）の中にゲル形成液を注入したのち酸素を遮断し架橋
重合させてゲル化させることにより形成されている。し
かしながら、二枚のガラス板の間でゲル膜を形成する作
業は、ガラスが割れやすく、かつ重い茅の欠点があり、
またガラスに挟まれたゲル膜は持ち運びに不便で取扱い
性が悪いため、ゲル膜を量産するには多大の困難を伴う
。

更に従来では、ガラス板に挟まれたポリアクリルアミド
ゲル膜を用いて、所定条件で一定時間水モあるいは垂直
スラブ電気泳動を行なったのち。

ガラス板の一方を除去し、ゲル膜をもう一方のガラス板
に載せた状７ｇで染色（例えば、デンソ３Ｒ染色、クマ
シーブリリアントブルーＧ−２５０ｉ色、銀染色等）処
理し、生体成分の分析を行なうような操作が行なわれて
いるが、ガラス板と湿潤状態のゲル膜との接着性が悪い
ためこの染色工程においてゲル膜がガラス板より剥離し
やすく、その作業には高度の熟練した技術が必要となる
。

Ｌ記のような電気泳動媒体材料におけるガラス板支持体
に起因する問題を解決するために、既にポリエチレンテ
レフタレートなどのプラスチックからなるシートをガラ
ス板の代りに用いるとの提案がなされている。しかしな
がら、１−記の聞題点のうち、染色工程におけるゲル膜
と支持体との間の分離との問題は依然として解決してい
ない。

［発明の要旨］ 本発明は、プラスチック製支持体上に形成されたポリア
クリルアミドゲル膜と、そのゲル股表面を被覆するプラ
スチック製支持体からなる電気泳動用媒体材料で、実用
上の取り扱い性、および湿潤状態での電気泳動用媒体層
と支持体との間の接着性が優れた電気泳動用媒体材料を
提供することを目的とするものである。

本発明はまた、電気泳動後の染色工程ないし染色処理後
の乾燥Ｆ程などにおいても電気泳動用媒体層（ポリアク
リルアミドゲルｖりが支持体から剥離することのない１
し気抜動用媒体材料を提供することもその目的とするも
のである。

本発明は、 ［Ｉ］プラスチック製支持体層： ［ＩＩ］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下
で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル電気
泳動用媒体層 ：［ｍ］ゼラチンを含む接着層；およ び［ＩＶ］プラスチック製支持体層。

が順次積層されてなる積層体を含む電気泳動用媒体材料
にある。

本発明の電気泳動用媒体材料では、電気泳動用媒体層（
ポリアクリルアミドゲル膜）と一方のプラスチック製支
持体層とがゼラチンを含む接着層により接合されており
、　’ｉｌｔ気泳動後にその支持体と電気泳動用媒体層
との積層体の状態にて施される各種の操作によってもゲ
ル膜と支持体とが分離しにくいため、電気泳動用媒体層
の破損が発生することは殆どなく、取り扱い性が優れて
いる。

さらに、本発明の電気泳動用媒体材料は、ゼラチンを含
む接着層を予め支持体上に形成し、その支持体をｔａ着
層の上にして水￥に置き、その接着層ヒにポリアクリル
アミドゲル膜を形成し、次いでゲル膜上に他のプラスチ
ック製支持体を載せることからなる方法によって製造す
ることが可能であるため、電気泳動用媒体材料の量産化
にも大きく寄り−するものである。

［発明の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料は、プラスチ−７クシート
（あるいはフィルム）を支持体として用いる。このプラ
スチック製シートとしては、任、ａのプラスチック材料
から形成したものを用いることができる。好ましいプラ
スチックシートの例としては、親木性ポリマーまたは公
知の表面処理により表面を親木化したポリマー（例、ポ
リエチレンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカ
ルボネート、ポリ塩化ビニル、塩化ビニリデン・塩化ビ
ニルコポリマー、ポリメチルメタクリレート、ポリエチ
レン、ポリプロピレン、セルロースアセテート類、セル
ロースアセテートプロピオネート等）のフィルム、板ま
たはシート等の成形物をあげることができる。特にポリ
エチレンテレフタフ゛タレートから形成されたシートを
用いることが好ましい。

これらのポリマー成形物の表面を親水化するための処理
のためには、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電
処理、火焔処理、電子線照射、ケミカルエツチング、電
解エツチング笠の公知の方法を適用することができる。

支持体は一般に厚さが、約４ｐｍ〜約５００４ｍ、好ま
しくは約３００１Ｌｍ以下のものが用いられる。なお電
気泳動媒体材料としての自己支持性が必要な場合には、
少なくとも一方の支持体の厚さを約５０ｐｍ以ととする
ことが望ましい。

次に電気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒体層、ポ
リアクリルアミドゲル膜あるいは午にゲル膜ともいう）
について説明する。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中で両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる０本川ｍ書においては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて巾に水溶液という、また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。

ポリアクリルアミドゲル１膜の形成に用いることができ
るアクリルアミド系化合物としては、アクリルアミド、
Ｎ−メチルアクリルアミド、　Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリ
ルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド、
ジアセトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物
やメタクリルアミドの様なメタクリルアミド系化合物が
挙げられ、これらの化合物は弔独で、あるいは二種以上
を併用して用いることができる。これらのアクリルアミ
ド系化合物のうちではアクリルアミドが最も好ましく、
またアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物ある
いはメタクリルアミド系化合物の、一種以上の併用も好
ましい。

架橋剤としてはｒ　ＥｌｅｃｔｒｏｐｈａｒｅｓｉｓＪ
　１９８１．２゜２２０−２２８等に記載の公知の化合
物（一種または二種以上の組合せ）を用いることができ
る。架橋剤の例としては、二官能性化合物および三官能
性化合物を開けることができる。三官能性化合物の例と
しては、Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド（ＢＩ
Ｓ）：Ｎ、Ｎ’−プロピレンビスアクリルアミド（ＰＢ
Ａ）、ジ（アクリルアミドジメチル）エーテル（ＤＡＥ
）、ｌ　、２−ジアクリルアミドエチレングリコール（
ＤＥＣ）、エチレンウレアビスアクリルアミド（ＥＵＢ
）、エチレンジアクリレート（ＥＤＡ）；Ｎ、Ｎ’−ジ
アリルタータルシア　ミ　ド　（Ｎ、Ｎ’−ｄｉａｌｌ
ｙｌｔａｒｔａｒｄｉａｍｉｄｅ　　：ＤＡＴＤ）；お
よびＮ、Ｎ’−ビスアクリリルシスタミン（Ｎ、Ｎ’−
ｂｉｓａｃｒｙｌｙｌｃｙｓｔａｍｉｎｅ、　Ｂ　Ａ　
Ｃ）等を挙げることができる。三官能性化合物の例とし
ては、１，３．５−）リアクリロイルへキサヒドロ−５
−）リアジン、トリアリルシアヌレート、トリアリルイ
ソシアヌレート等を４；げることができる。

架橋剤の驕は、単量体と架橋剤の総重量に対して約０．
１〜３０ｗｔ％、好ましくは約０．５〜１０ｗｔ％の範
囲で用いることができる。

ゲル濃度としては、Ｓ、　Ｈｊｅｒｔｅｎ：　　ｒ　Ａ
ｒｃｈ。

Ｂｉａｃｈｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　　Ｊ　　１　
　（５ｕｐｐ１．　　）、　　１４７（１９６２）に記
載の定義に従って表示して、中量体、架橋剤および水か
らなるゲル膜の容積に対して、単量体と架橋剤の！−二
が約３ｗ／ｖ％から約３０ｗ／ｖ％の範囲で好ましく用
いられる。

本発明の電気泳動用媒体材料は、主として蛋白質または
複合蛋白質（たとえば、リボプロティン、糖プロティン
など）の分析に有利に用いられるものであり、電気泳動
用媒体層には、変性剤として陰イオン性界面活性剤を含
有させることができる０分析試料が蛋白質または複合蛋
白質（例えばリボ蛋白質、糖蛋白質など）の場合には陰
イオン界面活性剤を含ませることは好ましいか、または
必須であることが多い、陰イオン界面活性剤をゲル媒体
層に含有させないことがあることは勿論である。たとえ
ば陰イオン界面活性剤を含有しないゲル媒体層は、ＤＮ
Ａフラグメント分析に基づく遺伝病診断あるいは制限酵
素分解を利用したＤＮＡ構造解析などの目的に用いるこ
とができる。

陰イオン界面活性剤を電気泳動用媒体層に含有させるこ
とにより、蛋白質または複合蛋白質の効率的な分離、そ
れらの分子量測定が可能となる。

陰イオン性界面活性剤の例としてはアルキル硫酸塩が挙
げることができ、特に炭素Ｈ′Ｘ′Ｆ−数ｌＯ以上の長
鎖アルキル基を有するアルキル硫酸塩が好ましく用いら
れる。塩を形成する陽イオンとしては、ナトリウムイオ
ン、カリウムイオン、リチウムイオン等のアルカリ金属
イオンが一般的であり、これらのうちではナトリウムイ
オンが用いやすい、アルキル硫酸塩のうちではドデシル
硫酸塩（ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム１ｔ！等
）が好ましく、なかでもドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤ
Ｓ）が最も好ましい。ＳＤＳを本発明のゲル媒体層に含
有させることにより蛋白質または複合蛋白質の効率的な
分離およびそれらの分子・量測定が１−１ｊ濠となる。

変性剤としての陰イオン界面活性剤の含有量はゲル形成
液に対して約０．０５ｗ／ｖ％から約２　、　Ｏｗ／　
ｖ％、好ましくは約０．１ｗ／ｖ％から約１．５ｗ／ｖ
％の範囲である。

ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。

水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮重合型の
水溶性ポリマーを用いることができる。

付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド等
の非イオン性水溶性ポリマーが挙げられる。縮重合型ポ
リマーの具体例としてポリエチレングリコール、ポリプ
ロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポリアルキレ
ングリコールが挙げられる。水溶性ポリマーの分子−量
は、約１万から約ｌＯＯ万の範囲のものが好ましい、こ
れらの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレングリコ
ール、ポリアクリルアミドが特に好ましい。

水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計重量に対して
約２ｗｔ％から約１００ｗｔ％の範囲。

好ましくは約５ｗｔ％から約５０ｗｔ％の範囲で用いら
れる。水溶性ポリマーを添加することにより、ポリアク
リルアミドゲル膜は可塑性を有するようになるため、裁
断加工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥時
にも可塑性を有するようになり、もろさが改良され壊れ
にくくなるとの利点がある。また、水溶性ポリマーの分
子量および添加量を選択することにより、ゲル膜の粘度
をコントロールすることもできる。

ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロースを含有させる
ことができる。アガロースは公知の７ガロースであれば
特に制限はなく、低電気浸透性。

中電気浸透性、高電気浸透性アガロースのいずれをも用
いることができる。用いることのできるアガロースの例
としては特開昭５５−５７３０号、特開昭５５−１１０
９４６号、特大１４５７−５０２０９８号等の公報に開
示されているアガロース等がある。

７ガロースの添加量は、単量体と架橋剤とを含むゲル組
成液の容積に対して約０　、１　ｗ／　ｖ％から約２　
ｗ　／　ｖ％、好ましくは約０．３ｗ／ｖ％から約１　
、２　ｗ／　ｖ％の割合で用いられる。ゲル膜に７ガロ
ースを添加することにより、ゲル形成用溶液温度を変化
させることにより、適当な溶液粘度にコントロールする
ことが可能となり、その流動性を止めることができ、ま
たゲル膜を成形する時には成形しやすくなるとの利点が
ある。

ゲル媒体層にはｐＨＷ街剤を含有させることもできる。

緩衝剤としては、電気泳動分析される試料に応じて、Ｐ
Ｈ２，５から１０．０の範囲内のＰＨ値に緩衝できる公
知の緩衝剤から適宜選択して用いることができる。

用いうる緩衝剤としては、日本化学会編「化学便覧　ノ
！礎編」（東京、丸み一１９６６年発行）１３１２−１
３２０ページ：青水、永井編「最新電気泳動法」　（東
京、入用書店、１９７３年発行３２０−３２２ページ　
；　　「　Ｄａｔａ　　ｆｏｒ　　Ｂｉｏｃｈｅ＋５ｉ
ｃａｌ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ　　（Ｒ，Ｍ。

Ｃ，Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、編、第２版、　０ｘｆ
ｏｒｄ　ａｔ　ｔｈｅＣｌａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ
、　１９６９年発行）　　４７６−５０８ページ；　　
ｒ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｊ　　’５．４６７　
（１９６６）、ｒ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｊｓｔｒｙＪ　１０４．３００−３１０（１９８０
）等に記載の緩衝剤が挙げられる。

緩衝剤の例としては、バルビタールを含む緩衝剤、トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）を含
む緩衝剤、燐酸塩を含む緩衝剤、ホウ酸塩を含む緩衝剤
、酢酸または酢酸塩を含む緩衝剤、クエン酸またはクエ
ン酸塩を含む緩衝剤、乳酸または乳酸塩を含む緩衝剤、
グリシンを含む緩衝剤、Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ
エチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、Ｎ−２−ヒドロキ
シエチルピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパン−
３−スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）またはその塩、Ｎ−２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパンス
ルホン酸（ＥＰＰＳ）またはその塩、Ｎ−［トリス（ヒ
ドロキシメチル）］−］３−７ミノプロパンスルホン酸
ＴＡＰＳ）またはその塩等をおよび、これらのいずれか
と必要により組合せられる酸、アルカリ、または塩等を
挙げることができる。好ましいＷ開削の具体例としては
、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム、Ｔｒｉ
ｓ−ホウ酸ナトリウム。

Ｔｒｉｓｓホウ酸ナトリウム−ＥＤＴＡ２Ｎａ塩、Ｔｒ
ｉｓ・クエン酸、パルビタールナトリウム・酢酸ナトリ
ウム、パルビタールナトリウム［株］塩酸、バルビター
ル・パルビタールナトリウム、酢酸・酢酸ナトリウム、
乳酸−乳酸ナトリウム、クエン酸−燐酸水素二ナトリウ
ム、ビシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、ＨＥＰＰＳＯ，ＨＥＰＦ
ＳＯナトリウム塩、ＥＰＰＳ、ＥＰＰＳナトリウム塩、
ＴＡＰＳ、ＴＡＰＳナトリウム塩等を挙げることができ
る。

本発明の代表的なアクリルアミドゲル膜は、アクリルア
ミドに代表される単量体、二宮ＩＦ性のアリル（ａｌｌ
ｙｌ　）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水溶
性ポリマー、および７ガロースを実質的に均一に溶解さ
せた水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合さ
せて得られるものであり、弔ｉＫ１体と架橋剤から形成
された三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガロース
が実質的に分散されて、ｔ＆二者のポリマー鎖が三次元
架橋重合体とからみあっている構造を有すると推定され
、この構造が特徴をなすゲル媒体であるということがで
きる。

上記のラジカル架橋重合反応は、分子状酸素の不存在下
で過酸化物の存在および／または紫外線照射等の公知の
方法により発生させることができる。この反応を加熱お
よび紫外線照射により加速することもできる。

ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ　Ｅｌｅｃｔｒ。

ｐｈｏｒｅｓｉｓ　Ｊ　１９８１．２．２１３−２１９
．同１９Ｂ１．２．２２０−２２８　；青水、永井編「
最新電気泳動法Ｊ　　（１９７３年発行）等に記載の公
知の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜選択して用
いることができる。

好ましいラジカル重合開始剤の例としては、β−ジメチ
ルアミノプロピオニトリル（Ｄ　ＭＡ　Ｐ　Ｎ）−ペル
オクソニ硫酸アンモニウム混合物、Ｎ。

Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥ
ＭＥＤ）−ペルオクソニｆＥＩ’ｌアンモニウム混合物
、ＴＥＭＥＤ−リボフラビン（リボフラビンリン酸エス
テルナトリウムａり混合物、ＴＥＭＥＤ−リボフラビン
−過酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ等が挙げられ
る。ラジカル重合開始剤の使用量は、通常中量体と架橋
剤の合計重量に対して約０．３重量％から約５重量％で
あり、好ましくは約０．５重量％から約３重量％の範囲
である。

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうることが知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、２−メルカプトエタノールを
挙げることができる。

その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもできる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約５　ｗ　／
　ｖ％から約４０　ｗ　／　ｖ％の範囲から選ばれる。

ポリオール化合物のうちではグリセリンが特に好ましい
、湿潤剤を配合することによりゲル膜の保存時の極端な
水分の蒸発による乾燥を防ぐことが可能となり、また極
端な乾燥に起因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等の
ゲル膜の物性が改善されるとの利点がある。

ゲル媒体層は、平滑表面を有する支持体の上にゲル形成
液を公知の方法により塗布して設けたのち、ゲル形成液
を架橋重合させることにより、層状に成形することがで
きる。

ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
酸素を除去した不活性ガス（窒素ガスなど）の雰囲気下
で、あるいはゲル形成液の上をカバーフィルム、シート
または板などの被覆材料で覆った状態にて架橋重合を実
施する。

なお、ゲル形成液の架橋重合を被覆材料で覆った状態で
行なう場合には、その被覆材料として、本発明の電気泳
動用媒体材料の構成要よである後述のゼラチンを含む接
着剤層が表面に形成されたプラスチック製支持体を用い
ることが望ましい。

ただし、接着剤層が表面に形成されたプラスチック製支
持体はゲル形成液の架橋重合の後に、その上に付設して
もよいことは勿論である。

本発明の電気泳動用媒体材料の構成要素である後述のゼ
ラチンを含む接着剤層が表面に形成されたプラスチック
製支持体は、前記のプラスチック製支持体の記述におい
て説明した各種の材料から製造することができる。上記
の支持体と前記の支持体とは同一の材料からなっていて
もよく、あるいは互いに異なった材料からなっていても
よい。

プラスチ−２り型支持体表面に形成されるゼラチンを含
む接着剤層はゼラチン単独、あるいはゼラチンと他の成
分、たとえば膜形成性成分、微粒子状フィラーなどとの
混合物からなる層である。いずれにしても接着剤層中に
はゼラチンが５重量％以七含まれていることが望ましく
、特に１０１量％以上含まれていることが望ましい、ま
た、ゼラチンは支持体表面上に、該フィルムの下方メー
トル当り約３〜７００ｍｇの量にて存在することが望ま
しく、特に約５〜５００　ｍ　ｇの量にて存在すること
が望ましい、このような接着層は、支持体表面に接着層
成分溶液を塗布するなどの公知の方法により形成するこ
とができる。

ゼラチンとしては各種のゼラチンを用いることができる
。すなわち、石灰処理ゼラチン、酸処理ゼラチン、脱イ
オン化ゼラチンなどの公知のゼラチンはいずれも単独、
もしくは組合せて用いることができる。

ゼラチンを他の成分と組合わせて使用する場合の他の成
分としては、膜形成性成分と微粒子状フィラーとが好ま
しい、これらの成分は単独で、あるいは組合せてゼラチ
ンとの混合物とされる。

上記の膜形成性材料の例としては、セルロースＲＡａ体
Ｃ例、ニトロセルロース、二酢酸セルロース、三酢酸セ
ルロース）、デキストラン、アガロース、ポリアクリル
アミド、ポリビニルアルコールエステル（例、ポリ酢酸
ビニル）、ポリアクリル酸エステル（例、ポリ（ヒドロ
キシエチルアクリレート））、プルラン、プルラン誘導
体、ポリ塩化ビニリデン、塩化ビニリデン系ラテックス
および水ガラスを挙げることができる。

上記の微粒子状フィラーの例としては、コロイダルシリ
カおよびメタノールシリカなどの微粒子状シリカ、微粒
子状二酸化チタン、微粒子状アルミナ、およびポリマー
ビーズなどを挙げることができる。

なお、と記では接着層のない支持体上々ゲル膜を形成し
、その上に接着層付き支持体を付設する方法を例にして
本発明の電気泳動用媒体材料の製造法を説明したが、前
述のように、接着層付き支持体の接着層上にゲル膜を形
成し、その上に接着層のない支持体を付設するような方
法を利用して本発明の電気泳動用媒体材料を製造するこ
とができることは勿論である。

本発明の電気泳動用媒体材料は、前述の諸文献等に記載
の公知の方法に従って、水平型および垂直型平板電気泳
動法、ディスク電気泳動法等のいずれにも用いることが
できる。

以下に本発明の実施例を記載するが、これらは本発明の
範囲を限定するものではない。

［実施例１〜６］ 厚さ１７５＃Ｌｍのポリエチレンテレフタレートシート
（支持体）上に、アクリルアミド７．８ｇ、ＢＩＳｏ、
２ｇ、リン酸水素二ナトリウム参十二木塩３．５８ｇ、
リン酸二水素ナトリウム・十二木塩０．３３ｇ、　　ド
デシル硫酸ナトリウム０、Ｌｏｇ、トリス（ヒドロキシ
メチル）アミノメタン１．０８ｇを含有する１００ｍ１
の溶液に重合開始剤としてベルオクソニ硫酸アンモニウ
ム（５ｗｔ％）１．３ｍ１．ＴＥＭＥＤ３３１Ｌｌ、お
よびリボフラビンリン酸エステルナトリウム塩１０　ｍ
　ｇを加えたものを０．２ｍｍの厚みで成形し、窒素雰
囲気下で紫外線照射して架橋重合させ、ポリアクリルア
ミドゲル膜を得た。

上記のゲル膜上に、第１表記載の組成からなる接着層が
付設された厚さ６３ｐｍのポリエチレンテレフタレート
フィルム（接着層付き支持体）をかぶせて電気泳動用媒
体材料を得た。

第１表 実施例 １　石灰処理ゼラチン（０，０１ｇ／１ｒｆ）Ｑｉ独２
　石灰処理ゼラチン（０、ｌ　ｇ／ｌｎ’）　Ｑｉ独３
　石灰処理ゼラチン（０，０３ｇ／ゴ）十ニトロセルロ
ース（０、１７ｇ／ｒｒｆ）４　石灰処理ゼラチｙ　（
０、０３ｇ／ｒｒｆ）　　＋アセチルセルロース（０＋
　１７　ｇ／ｒｎ’）５　石灰処理ゼラチｙ　（０、０
３ｇ／ｍ’）　＋塩化ビニリデンラテックス （０、１７ｇ／ｒｒｔ） ６　石灰処理ゼラチン（０，ｏ３ｇ／ｌｒｙ’）＋メタ
ノールシリカ（０、１７ｇ／ｒｒｆ）［比較例１］ 接着層のない支持体を用いた以外は実施例１〜６と同様
にして電気泳動用媒体材料を得た。

［接着性の評価］ 実施例１〜６および比較例１で得られた電気泳動用媒体
材料を一口放置したのち、＠後に付設した支持体を下側
にして、上側の支持体を除いたところ、実施例１〜６で
得られた電気泳動用媒体材料では、いずれもゲル膜が下
側の支持体側に接着されたままであったが、比較例１で
得られた電気泳動用媒体材料ではゲル膜は上側の支持体
に付いた状態で除かれた。

また、実施例１〜６で得られた電気泳動用媒体材料から
上側の支持体（１ｍ着層のない支持体）を除去したのち
、それぞれを０．１％コーマシーブル−（Ｃｏｏｍａｓ
ｓｉｅ　　Ｂｌｕｅ　）　Ｒ−２５０（ＧｏｌｏｕｒＩ
ｎｄｅｘ　Ｃｏｎ５ｔｉｔｕｔｉｏｎ　Ｎｕｍｂｅｒ　
４２６６０）水溶液に浸漬したがゲル膜の脱離は発生し
なかつ象。

［実施例７〜１２］ 厚さ１７５ＪＬｍのポリエチレンテレフタレートシート
（支持体）上に、アクリルアミド７．８５ｇ、ＢＩＳＯ
，２ｇ、１，３．５−トリアクリロイル−へキサヒドロ
−５−トリアジン０．１５ｇ、アガロース（低電気浸透
性、ゲル化温度３６”Ｃ）０．３ｇ、ポリアクリルアミ
ド１．Ｏｇ、　　リン酸水素二ナトリウム・七二木塩３
−５８ｇ、’Ｊン酸二水素ナトリウム・−工水塩０．３
３ｇおよびドデシル硫酸ナトリウム０．１０ｇを含有す
る１００ｍ文の溶液に重合開始剤としてベルオクソ二硫
酸アンモニウム（５ｗｔ％）１．３ｍｕ、ＴＥＭＥＤ３
３ｊＬＭおよびリボフラビンリン酸エステルナトリウム
塩１０　ｍ　ｇを加えたものを０．２ｍｍの厚みで成形
し、窒素雰囲気下で紫外線照射して架橋重合させ、ポリ
アクリルアミドゲル膜を得た。

Ｌ記のゲル膜に常法によりサンプルスロットを設けたの
ち、第１表記載の組成からなる接着層が付設されたＪ’
Ｊさ６３ＪＬｍのポリエチレンテレフタレートフィルム
（支持体）をゲル膜表面にかぶせて電気泳動用媒体材料
を得た。

この電気泳動用媒体材料を使用して、標準蛋白質を電気
泳動にかけた０次いで接着層のない支持体を除去したの
ち、それぞれを０．１％コーマシーブルーＲ−２５０水
溶液に浸漬したがゲル膜の脱離は発生しなかった。また
、ゲル膜上に現われた泳動パターンは正常であった。

［実施例１３〜１８］ 厚さ６３ｐｍのポリエチレンテレフタレートシート上に
第１表記載の組成からなる接着層を付設し、その接着層
上に、アクリルアミド５．８ｇ。

ＢＩＳｏ、２０ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン１．０８ｇ、ホウ酸０．５５ｇ、ＥＤＴＡ−２Ｎ
ａ塩９３　ｍ　ｇおよびグリセリン２０ｇを含有する１
００ｍＪＬの溶液に１重合開始剤としてベルオクソニ硫
酸アンモニウム（５ｗｔ％）１．３ｍ文とＴＥＭＥＤ３
３ｐ又を加えたものを１ｍｍの厚みで成形し、窒素雰囲
気下で紫外線照射して架橋重合させ、ポリアクリルアミ
ドゲル膜を得た。

上記のゲル膜に常法によりサンプルスロットを設けたの
ち、接着層のない厚さ１７５ｇｍのポリエチレンテレフ
タレートフィルムをゲル膜表面にかぶせて電気泳動用媒
体材料を得た。

ｐＢＲ−３２２を制限酵素Ａ３ｕＩで処理した試料を上
記のゲル膜上にて電気泳動し、次いで接着層のない支持
体を除去したのち、エチジウムプロミド染色液に浸漬し
た。この浸漬工程においていずれのゲル膜が支持体から
脱離することはなかった。また、ゲル膜上に現われたＤ
ＮＡ分離パターンは正常であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の各層が順次積層されてなる積層体を含む電気
   泳動用媒体材料： ［ I ］プラスチック製支持体層： ［II］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下で
   架橋重合してなるポリアクリルア ミド系水性ゲル電気泳動用媒体層； ［III］ゼラチンを含む接着層；および ［IV］プラスチック製支持体層。 ２、ゼラチンを含む接着層が、ゼラチンと膜形成性材料
   とを含む層であることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載の電気泳動用媒体材料。 ３、膜形成性材料が、セルロース誘導体、デキストラン
   、アガロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコ
   ールエステル、ポリアクリル酸エステル、プルラン、プ
   ルラン誘導体、ポリ塩化ビニリデン、塩化ビニリデン系
   ラテックスおよび水ガラスからなる群より選ばれるもの
   であることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の電
   気泳動用媒体材料。 ４、ゼラチンを含む接着層がゼラチンと微粒子状フィラ
   ーとを含む層であることを特徴とする特許請求の範囲第
   １項記載の電気泳動用媒体材料。 ５、微粒子状フィラーがコロイダルシリカもしくはメタ
   ノールシリカであることを特徴とする特許請求の範囲第
   ４項記載の電気泳動用媒体材料。 ６、電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーおよびア
   ガロースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の電気泳動用媒体材料。 ７、上記媒体層がさらに陰イオン界面活性剤からなる変
   性剤を含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
   の電気泳動用媒体材料。 ８、上記陰イオン界面活性剤がアルキル硫酸塩であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第７項記載の電気泳動用
   媒体材料。 ９、カバーフィルムがポリエチレンテレフタレートフィ
   ルムからなることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
   載の電気泳動用媒体材料。