JPS60243551A - 電気泳動用媒体材料の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の分野〕 本発明は、電気泳動用媒体材料およびその製造法に関す
るものであり、さらに詳しくは、特にＤＮＡの塩基配列
決定操作に用いるのに適した電気泳動用媒体材料および
その製造法に関するものである。

［発明の背景］ ポストラベル法に基づ＜ＤＮＡやＲＮＡの塩基配列決定
法においては、ポリアクリルアミドゲル膜を用いたスラ
ブ電気泳動操作が必須の操作となっている。特に近年に
おいて遺伝子関連の研究が進むにつれて、ＤＮＡ塩基配
列決定の操作の迅速化が急務となっている。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
中量体を触媒の存在下にてＮ、Ｎ’−メチレンビスアク
リルアミドのような二官能性の架橋剤を用い架橋重合さ
せることにより得られる。

なお、′このポリアクリルアミドゲル膜の形成に際して
通常は、尿素あるいはホルムアミドのような変性剤を含
有させる。

上記の重合反応はラジカル架橋重合であり、酸素の影響
により反応が阻害されるため、ポリアクリルアミドゲル
膜は酸素を遮断した状態で作成する必要がある。この理
由から、現在では一般に、ポリアクリルアミドゲル膜は
２枚のガラス板で形成されたセル（一定の空間、たとえ
ば約０．３〜１ｍｍを有する）の中にゲル形成液を注入
させ。

酸素を遮断した状態で架橋重合させてゲル膜を形成させ
ている。

この方法は二枚のガラス板の間でゲル膜を形成するため
に、取り扱い性が悪く、かつゲル膜の量産化が困難であ
るといった大きな欠点を増してｕ＼る。

以上のようにして形成したポリアクリルアミドゲル膜を
用いる電気泳動操作は、たとえば、次のようにして実施
される。

ポリアクリルアミドゲル膜はカラス板に挟んだままの状
態で垂直に立てられ、前電気泳動を行なったのち、ゲル
膜上端部に設けられたサンプルスロットに試料（たとえ
ば、マキサム伊キルノ飄−ト分解した３２Ｐラベル化Ｄ
ＮＡ）を一定量注入し、次いで電気泳動を行なう。そし
て一定時間（例、め６曲間〜１２蒔間）の電気泳動を行
なった後、片面のガラス板を注意深く除去し、その露出
面をポリ塩化ビニリデンフィルムなどの合成樹脂製フィ
ルムでゲル膜を覆い、これを用いてオートラジオグラフ
ィー処理を行なう。

すなわち、ポリアクリルアミドゲル膜を被覆しているフ
ィルムの上にＸ線フィルム、増感スクリーンを順次のせ
て、低温（たとえば、−８０°Ｃ）で一定時間（たとえ
ば、約１０〜２０時間）露光を行なう。そして露光終了
後、Ｘ線フィルムを現像し、ＤＮＡの分離泳動パターン
を読みとることからなるオートラジオグラフィー処理に
より、ＤＮＡの塩基配列を決定することができる。

オートラジオグラフィー処理は以上のように長時間を必
要とするため、その迅速化が望まれ、更に読みとりの高
分解能化も望まれている。

従来のアクリルアミドゲル膜を用いた電気泳動媒体材Ｐ
Ｉは上記のようにガラス板を用いるために取り扱い性に
問題があり、しばしばガラスを割ったりして実験を失敗
することがある。更に、オートラジオグラフィーに際し
、に記のように片面のガラスを除く必要があり、この時
にゲル膜を破損したりする事もあり、この操作は非常に
熟練を必要とする。したがって、この様な欠点を改良し
た取り扱い性の良好なポリアクリルアミドゲル膜の開発
が熱望されている。

［発明の要旨］ 本発明の目的は、ガラス板の代りにプラスチックフィル
ム（あるいはシート）を支持体として用い、かつ支持体
と電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲルＭ）との
間の接着性が向上した電気泳動媒体材料およびその製造
法を提供することにある。

本発明は、下記の各層が順次積層されてなる三層構造を
含む電気泳動用媒体材料からなるものである： ［Ｉ］　プラスチック支持体層； ［■］メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体から
形成された接着層； および、 ［１１アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下で
架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで、変
性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化合
物を含む電気泳動用媒体層。

上記の電気泳動用媒体材料は、プラスチック支持体の上
にメチルメタクリレートマクロモノマー誘導体を含む中
間層を設けたのち、該中間層の上にてアクリルアミド系
化合物と架橋剤とを変性剤として少なくとも１個のカル
バモイル基をもつ化合物と水との存在下で架橋重合して
ポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳動用媒体層を形成
する方法により製造することができる。

本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のように支持体層
と電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜）とを
メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体から形成さ
れた接着層により接合してなる三層構造を含むものであ
り、前述の電気泳動後の電気泳動用媒体層の乾燥工程に
おける各種の操作によってもその三層構造が分離しにく
いため、電気泳動用媒体層の破損が発生することば殆ど
なく、従って濾紙などの補助支持具を使用する必要がな
いとの利点がある。

さらに、本発明の電気泳動用媒体材料は、水平に置いた
支持体の上にをメチルメタクリレートマクロモノマー誘
導体を含む層を形成し、次いで電気泳動用媒体層をその
上に形成する方法によっても製造することが可能である
ため、電気泳動用媒体材料の量産化にも大きく寄与する
ものである。

［発明の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラスチック
シート（あるいはフィルム）を用いることが好ましい。

このプラスチック製シートとしては、任意のプラスチッ
クから形成したものを用いることができる。好ましいプ
ラスチックシートの例としては、親木性ポリマーまたは
公知の表面処理により表面を親水化したポリマー（例、
ポリエチレンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリ
カルボネート、ポリ塩化ビニル、塩化ビニリデン・塩化
ビニルコポリマー、ポリメチルメタアクリレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、セルロースアセテート類、
セルロースアセテートプロピオネート等）のフィルム、
板またはシート等の成形物をあげることができる。特に
ポリエチレンテレフタフタレートから形成されたシート
を用いることが好ましい。

これらのポリマー成形物の表面を親水化するための処理
のためには、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電
処理、火焔処理、電子線照射、ケミカルエンチング、電
解エツチング等の公知の方法を適用することができる。

支持体は一般に厚さが、約５０Ｂｍ〜約５００ｇｍ、好
ましくは約７０ｐｍ〜約３００ｐｍのものか用いられる
。

本発明において、上記支持体の上に接着層が形成される
。

接着層は、メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体
から形成される層である。マクロモノマーとは、一定の
繰返し単位を有する比較的高分子量の置換基を持った重
合可能なモノマーと一般に定義されるものであり、メチ
ルメタクリレートマクロモノマー誘導体は、重合可能な
メチルメタクリレート基誘導体を分子内に含有するマク
ロモノマーである。なお、該マクロモノマー中にてメチ
ルメタクリレート基誘導体はメチルメタクリレート基末
端型のような形で存在している。

本発明に用いられる代表的なメチルメタクリレートマク
ロモノマー誘導体の合成例を以下にのべる。なお、各合
成例において「部」および「％」はそれぞれ「重量部」
およびｒ重量％Ａを意味する。

［合成例１］ 末端メタクリレート型メチルメタクリレートマクロモノ
マーの合成 攪拌機、還流冷却器、滴下ロート、温度計およびＮ２ガ
ス吹込口を備えたガラスフラスコに７セトンエ７．５部
とトルエン８２．５１との混合溶媒を仕込み、Ｎ２を導
入しながら還流下にメチルメタクリレート（以後ＭＭＡ
と略記）１００部、連鎖移動剤としてチオグリコール酸
（以後ＴＧＡと略記）３．２部および重合開始剤として
アゾビスイソブチロニトリル（以後ＡＩＢＮと略記）３
部の混合溶液を３時間かかって連続的に滴下して重合を
行った。さらにその後２時間加熱して重合を終了し、下
記構造式［Ｉ］のポリマーの溶液を得た。反応液の一部
にｎ−ヘキサンを加えて沈澱物を生成させ、この沈澱物
を減圧下で乾燥して酸価を測定したところ０．３４０ｍ
ｇ当量／ｇであった。

上記反応液からアセトンの一部を留去した後、これにト
リエチルアミン（触媒）０．５％、ヒドロキノンモノメ
チルエーテル（重合禁止剤）２００ｐｐｍおよび酸に対
して１．３倍モルのグリシジルメタクリレートを加え、
反応温度１１０℃にて４時間反応させた。酸価の減少か
らめた反応率は９６％であった。

」−記反応液を１０体積倍量のｎ−ヘキサン中に投入し
て沈澱を生成させ、この沈澱をを８０°Ｃで減圧乾燥し
て下記構造式［ＩＩ］のマクロモノマー９５部を得た。

このマクロモノマーのゲルパーミェーションクロマトグ
ラフ（ＧＰＣ）によるポリスチレン換算分子量は２８４
０　（数平均）および６　、４７０−（重量平均）であ
った。また、水酸基価は０．３５０ｍｇ当量／ｇであっ
た。

［合成例２〜６］ 合成例１と同様の方法に従い、ＴＧＡ　（連鎖移動剤）
の量とモノマーの組成を変えて、数平均分子量の異なる
末端メタクリレート型メタクリレートマクロモノマーヲ
合成シタ。

各合成例におけるＴＧＡの量と千ツマ−の組成、そして
生成した末端メタクリレート型メタクリレートマクロモ
ノマーの数平均分子量を第１表に示す。

第１表 合成例　七ツマ−連鎖移動剤　マクロモノマー（部）　
（部）　数平均分子量 ｌ　ＭＭＡ　１００　ＴＧＡ　３．２　２，８４０２　
ＭＭＡ　１００　ＴＧＡ　９．２　約１．０００３　Ｍ
ＭＡ　１００　ＴＧＡ　１．８　約５，０００４　ＨＡ
　１００　ＴＧＡ　Ｏ，９２約１０，０００５　ＭＭＡ
　９８　ＴＧＡ３．２　約３　、０００８ＥＭ　２ ６　ＭＭＡ　９０　ＴＧＡ３．２　約３，０００ＨＥＭ
　１０ ｄ主）ＭＭＡ：メチルメタクリレート ＨＥＭ　：ヒドロキシエチルメタクリレートＴＡＧ　：
チオクリコール酸 これらのメチルメタクリレートマクロモノマー誘導体は
単独で使用しても、併用してもよい。また、層形成成分
の５０重量％以内である限り他の高分子物質や添加剤を
含むことができる。このような高分子物質および添加剤
の例としては、ジアセチルセルロース、ニトロセルロー
ス、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリ
メタクリル酸メチル、ポリ塩化ビニリデン等のポリマー
、グリセリン等のポリオール化合物を挙げることができ
る。

メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体から形成さ
れる接着層は、公知の塗布方法などを利用して支持体の
表面に設けることができる。すなわち、該マクロモノマ
ー誘導体が水溶性または親木性である場合には、それの
水溶液または、水を主成分とする水拳有機溶媒混合溶媒
溶液を公知の方法により支持体の上に塗布、乾燥して接
着層を形成する方法を利用することができる。該マクロ
モノマー誘導体が疎水性で水不溶性である場合には、そ
れの有機溶媒溶液または、有機溶媒を主成分とする有機
溶媒・水混合溶媒溶液を、公知の方法により支持体の上
に塗布、乾燥して接着層を形成する方法を利用すること
ができる。

用いることができる有機溶媒の例としては、アセトン、
メチルエチルケトンなどのケトン類；メタノール、エト
ノールなどのアルコール類；Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド；ジメチルスルホキシド；ジ
、メチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類などを
挙げることができる。

メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体から形成さ
れた接着層はメチルメタクリレートマクロモノマー誘導
体単独あるいは該誘導体を８０重量％以上含む組成物か
ら形成させることが望ましく、特に実質的にメチルメタ
クリレートマクロモノマー誘導体のみから形成された層
であることが望ましい。

乾帰後の接着層の厚さは、約０　、１　ｇｍから約３＃
Ｌｍ、好ましくは約０．２鉢ｍから約２川ｍの範囲とす
る。

次に電気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒体層、ポ
リアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲル膜ともいう）
について説明する。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中で両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。

ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることができる
アクリルアミド系化合物としては、アクリルアミド、Ｎ
−メチルアクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルア
ミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド、ジア
セトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物やメ
タクリルアミドの様なメタクリルアミド系化合物が挙げ
られ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上を併
用して用いることができる。これらのアクリルアミド系
化合物のうちではアクリルアミドが最も好ましく、また
アクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物、メタク
リルアミド系化合物の一種以」二の併用も好ましい。

架橋剤としてはｒ　ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＪ
　ＩＨＩ、　２゜２２０−２２８等に記載の公知の化合
物（一種または二種以上の組合せ）を用いることができ
る。架橋剤の具体例としては、Ｎ、Ｎ’−メチレンビス
アクリルアミド（Ｂ　Ｉ　Ｓ）　、　Ｎ　、　Ｎ“−プ
ロピレンビスアクリルアミド（ＰＢＡ）、ジ（アクリル
アミドジメチル）エーテル（ＤＡＥ）、１．２−ジアク
リルアミドエチレングリコール（ＤＥＣ）、エチレンウ
レアビスアクリルアミド（ＥＵＢ）、エチレンジアクリ
レート（ＥＤＡ）；　Ｎ　、Ｎ”−ジアリルタータルジ
アミド（Ｎ、Ｎ’−ｄｉａｌｌｙｌｔａｒｔａｒｄｉａ
ｍｉｄｅ　：　Ｄ　ＡＴＤ）　；およびＮ、Ｎ’−ビス
アクリリルシスタミン（Ｎ、Ｎ’−ｂｉｓａｃｒｙｌｙ
ｌｃｙｓｔａｍｉｎｅ。

ＢＡＣ）等の二官能性化合物が挙げられる。

架橋剤の量は、単量体と架橋剤の総重量に対して約２ｗ
ｔ％から約３０ｗｔ％、好ましくは約３ｗｔ％から約１
０ｗｔ％の範囲で用いることができる。

ゲル濃度としては、Ｓ、　）Ｉｊｅｒｔｅｎ：　ｒ　Ａ
ｒｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｊ　１　（５ｕｐｐ
１．）、１４７（１９６２）に記載の定義に従って表示
して、単量体、架橋剤および水からなるゲル膜の容積に
対して、単量体と架橋剤の量が約３　ｗ　／　ｖ％から
約３０　ｗ　／　ｖ％の範囲で好ましく用いられる。

ポリアクリルアミドゲル膜に含有させる変性剤としては
、少なくとも１個のカルバモイル基を持つ化合物を挙げ
ることができ、その具体例としては、尿素、ホルムアミ
ド等が挙げられる。これらのうちで尿素が特に好ましく
用いられる。変性剤の量は単量体と架橋剤とを含む水性
ゲルの容積に対し、約４０　ｗ　ｔ　／　ｖ％から約６
０　ｗ　ｔ　／　ｖ％の範囲で用いられる。尿素を用い
る場合には、単量体と架橋剤とを含む水性ゲルＩＪＩに
対し約６モル（約３６ｏ　ｇ）から飽和溶解量まで、好
ましくは約７モル（約４２０ｇ）から飽和溶解量までの
範囲で用いることができる。

ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。

水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮重合型の
水溶性ポリマーを用いることができる。

付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド等
の非イオン性水溶性ポリマーが挙げられる。縮重合型ボ
リア−の具体例としてポリエチレングリコール、ポリプ
ロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポリアルキレ
ングリコールが挙げられる。水溶性ポリマーの分子量は
、約１万から約１００万の範囲のものが好ましい。これ
らの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレングリコー
ル、ポリアクリルアミドが特に好ましい。

水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計重量に対して
約２ｗｔ％から約１００ｗｔ％の範囲、好ましくは約５
ｗｔ％から約５０ｗｔ％の範囲で用いられる。水溶性ポ
リマーを添加することにより、ポリアクリルアミドゲル
膜は可塑性を有するようになるため、裁断加工時に壊れ
ることがなくなり、またゲル膜は乾燥時にも可塑性を有
するようになり、もろさが改良され壊れにくくなるとの
利点がある。また、水溶性ポリマーの分子量および添加
量を選択することにより、ゲル膜の粘度をコントロール
することもできる。

ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロースを含有させる
ことができる。アガロースは公知のアガロースであれば
特に制限はなく、低電気浸透性。

中電気浸透性、高電気浸透性アガロースのいずれをも用
いることができる。用いることのできるアカロースの例
としては特開昭５５−５７３０号、特開昭５５−１１０
９４６号、特表昭５７−５０２０９８号等の公報に開示
されているアガロース等がある。

アカロースの添加量は、単量体と架橋剤とを含むゲル組
成液の容積に対して約Ｑ　、　２　Ｗ　／　Ｖ％から約
２　ｗ　／　ｖ％、好ましくは約０．３ｗ／ｖ％から約
１．２ｗ／ｖ％の割合で用いられる。ゲル膜にアガロー
スを添加することにより、ゲル形成用溶液温度を変化さ
せることにより、適当な溶液粘度にコントロールするこ
とが可能となり、その流動性を止めることができ、また
ゲル膜を成形する時には成形しやすくなるとの利点があ
る。

ポリアクリルアミドゲル膜にはｐＨｌｌ１衝剤を含有さ
せることができる。緩衝剤としては、ｐＨ８，０から１
０．０、好ましくはｐＨ８，０から９．０（７）範囲内
のｐＨ値に緩衝できる緩衝剤であれば、いずれをも用い
ることができる。用いうる緩衝剤としては、■本化学余
線「化学便覧　基礎編」　（東京、丸首■１９６６年発
行）　＋３１２−１３２０頁：１’Ｄａｔａ　ｆｏｒ　
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ｊ　（Ｒ
，Ｍ、Ｃ。

Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａ１編　第２版、　０ｘｆｏｒｄ
　ａｔ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、１
９８９年発行）　４７８−５０８ページ：（Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ　ｊ　、　５，４６７（１９Ｅｉ６）　
；１’Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　ｊ　＋０４３００−３１０（＋９８０）等の刊行物
に記載の緩衝剤があげられる。そして、その具体例とし
てはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉ
ｓ）　［ＣＡＳ　Ｒｅｇｉｓｔｒｙ　Ｎ。

７７−Ｈ−１］　、Ｎ　、　Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ
エチル）グリシ７　（Ｂｉｃｉｎｅ）　、　Ｎ　−２−
ヒドロキシエチルピペラジン＝Ｎ゛−２−ヒドロキシブ
ロパノー３−スルホン酸のＮａ塩またはに塩等、Ｎ〜２
−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ゛−３−プロパンス
ルホン酸のＮａ塩またはに塩等、Ｎ−［トリス（ヒドロ
キシメチル）メチル］−３−アミーノプロパンスルホン
酸のＮａ塩またはに塩および、これらのいずれかと必要
により組合せられる酸、アルカリまたは塩等をあげるこ
とができる。

特に好ましい緩衝剤の例としてはＴｒｉｓ、ホウ酸およ
びＥＤＴＡ・２Ｎａ塩の組合せ（ｐＨ８，３）がある。

本発明においてポリアクリルアミドゲル膜はアクリルア
ミドに代表される単量体、二官能性のアリル（ａｌｌｙ
ｌ　）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水溶性
ポリマー、およびアガロースを実質的に均一に溶解させ
た水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合させ
て得られるものであり、単量体と架橋剤から形成された
三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガロースが実質
的に分散されて、後二者のポリマー鎖が三次元架橋重合
体とからみあっている構造を有すると推定され、この構
造が特徴をなすゲル媒体である。

」二足のラジカル架橋重合反応は、分子状酸素の不存在
下で過酸化物の存在および／または紫外線照射等の公知
の方法により発生させることができる。この反応を加熱
および紫外線照射により加速することもできる。

ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ　Ｅｉｅｃｔｒ。

ｐｈｏｒｅｓｉｓ　Ｊ　１９８１．２Ｌ２１３−２１９
．同１９８１．　？。

２２０−２２８　；青米、永井編「最新電気泳動法」（
１９７３年発行）等に記載の公知の低温ラジカル重合開
始剤のうちから適宜選択して用いることができる。好ま
しいラジカル重合開始剤の具体例としては、β−ジメチ
ルアミ／プロピオニトリル（Ｄ　ＭＡ　Ｐ　Ｎ）−ペル
オクソニ硫酸アンモニウム混合物、Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ
’−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）−ペ
ルオクソニ硫酸アンモニウム混合物、ＴＥＭＥＤ−リボ
フラビン混合物、ＴＥＭＥＤ−リボフラビン−過酸化水
素混合物と紫外線照射の組合せ等が挙げられる。ラジカ
ル重合開始剤の含有量は、単量体と架橋剤の合計重量に
対して約０．３重量％から約５重量％、そして好ましく
は約０．５重量％から約３重量％の範囲である。

ゲル媒体層は、平滑表面を有する支持体の上に設けられ
た前述のメタクリレートマクロモノマー誘導体を含む層
の上にゲル形成液を公知の方法により塗布して設けた後
、ゲル形成液を架橋重合ｙせることにより、層状に成形
することができる。

ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
ゲル形成液の上をさらにカバーフィルム、シートまたは
板などの被覆材料でおおうことができる。この目的に使
用されるカバーフィルム、シート、または板としては前
記支持体と同様な素材からなるものを用いることができ
る。この被覆材料の厚さは３００　ｐｍ以下であり、実
用的に好ましい範囲としては約４ｐｍ〜約２００ｇｍ、
特に好ましい範囲としては約４Ｂｍ〜約１１００ｐであ
る。

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうることか知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、２−メルカプトエタツールを
挙げることができる。

その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもできる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約５　ｗ　／
　ｖ％から約４０　ｗ　／　ｖ％の範囲から選ばれる。

ポリオール化合物のうちではグリセリンが特に好ましい
。湿潤剤を配合することによりゲル膜の保存時の極端な
水分の蒸発による乾燥を防ぐことが可能となり、また極
端な乾燥に起因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等の
ゲルＨＱの物性が改善されるとの利点がある。

本発明の電気泳動用ゲル媒体材料は、前述の諸文献等に
記載の公知の方法に従って、水平型および垂直型平板電
気泳動法、ディスク電気泳動泳動法等のいずれにも用い
ることができる。

次に本発明の実施例を示す。

［実施例１］ 紫外線照射処理により表面を親水性にしたポリエチレン
テレフタレート（ＰＥＴ）シート（支持体）上に約０．
５ｇｍの厚み（固形分）になるように、前記の合成例で
得たメタクリレートマクロモノマー誘導体をアセトンに
溶解して得た塗布液（第２表）を塗布し、約１１０℃で
乾燥してマクロモノマー層を形成した。

第２表　接着層形成用塗布液の組成 試料　マクロ千ツマ−塗布液濃度 番号　誘導体　（ｇ／１００ｍ１溶剤）ｔ　ｐ−ｔ（合
成例１生成物）５ｇ ２　Ｆ−２（合成例３生成物）５ｇ ３　Ｆ−３（合成例４生成物）５ｇ ４　Ｆ−４（合成例５生成物）５ｇ まず、ＰＥＴシート（支持体）とマクロモノマー層との
間の接着性をクロスカット法により評価した。その結果
試料１〜４（本発明に従う試料）は接着性が良好であっ
た。

支持体上に設けられた各マクロモノマー層の上に、アク
リルアミド１１・、８７ｇ、ＢＩ３６３０ｍｇ、尿素４
２ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミンメタン［ＣＡ
　Ｓ　Ｒｅｇｉｓｔｒｙ　Ｎｏ　７７−８６−１　］１
．０８ｇ、ホウ＃０．５５ｇ、オヨびＥＤＴＡ・２Ｎａ
塩９３ｍｇを含有する１００ｍ文の溶液ニｉ　合間始剤
としてベルオクソニ硫酸アンモニウム（５重量％）１．
３ｍＪ１、ＴＥＭＥＤ３３ｐＪ１を加えたものを０．５
ｍｍの厚みで成形し、ポリアクリルアミドゲル膜を形成
させた。

なお、別にマクロモノマー層を設けなかった以外は同様
にしてＰＥＴシート上にポリアクリルアミドゲル膜を形
成させて比較試料を調製した。

得られたゲル膜を指でおさえ、ゲル膜と支持体間の接着
性を評価した。その結果、試料１〜４（本発明に従う試
料）を接着層としたものは接着性が優れていたが、比較
試料は接着性が劣っていた。

［実施例２］ 実施例１の第２表と同じマクロモノマー層が形成された
ＰＥＴシートを作成し、この接着層の上にアクリルアミ
ドｌ　ｌ　、８７ｇ、ＢＩ３６３０ｍｇ、アガロース１
６００　（和光紬薬■製）０．３ｇ、ポリアクリルアミ
ド２．５ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
１．０８ｇ、ホウ酸０．５５ｇおよびＥＤＴＡ−２Ｎａ
塩９３ｍｇからなる１００ｍＪ１の溶液に重合開始剤と
してベルオクソニ硫酸アンモニウム（５重量％）１．３
ｍｌ、ＴＥＭＥＤ　３３．１を加えたものを０．５ｍｍ
の厚みで成形し、ポリアクリルアミドゲル膜を形成させ
て四種類の試料（試料１〜４）を得た。

また、ＰＥＴシートの上に直接上記のポリアクリルアミ
ドゲル膜を形成させることにより比較試料も調製した。

このゲル膜を使用して、３２Ｐ−ＤＮＡをマキサム・ギ
ルベート分解した試料について電気泳動にかけ、ＤＮＡ
塩基配列決定の実験を行なった。電気泳動後にゲル膜を
、脱尿素とＤＮＡ固定のために、１０％酢酸水溶液中に
１時間浸漬した。このゲル膜を乾燥し、次いでオートラ
ジオグラフィー処理を常法にしたがって行なった。

１０％酢酸水溶液中にゲル膜を浸漬した時の支持体とゲ
ル膜の接着状態を観察した。

比較試料のゲル膜は支持体から完全に剥離した。

一方、試料１〜４（本発明に従う試料）のマクロモノマ
ー層の上に形成されたゲル膜は、いずれも支持体上に完
全に接着していた。更にゲル膜を乾燥させた後、それと
支持体との間の接着状態を観察したところ、これらの試
料のゲル膜はいずれも支持体によく接着していた。また
オートラジオグラフィー処理した後も、接着性に問題は
なく良好な結果を示した。

［実施例３］ 実施例１の第２表と同じマクロモノマー層が形成された
ＰＥＴシートを作成し、このマクロモノマー層の上に実
施例２と同様にしてポリアクリルアミドゲル膜を形成さ
せて４種類の試料（試料１〜４）を得た。

またＰＥＴシートの上に直接上記のポリアクリルアミド
ゲル膜を形成させることにより比較試料も調製した。

このゲル膜を支持体ごと裁断加工したのち、ゲル膜の切
口を観察したところ、比較試料の接着層の上に形成され
たゲル膜についてはゲル膜の剥離が一部観察されたのに
対して、試料１〜４（本発明に従う試料）についてはい
ずれも裁断口の接着性は良好で、支持体ごと裁断加工で
きることがわかった。

特許出願人　富士写真フィルム株式会社代理人　弁理士
　柳川泰男

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １゜下記の各層が順次積層されてなる三層構造を含む電
   気泳動用媒体材料： ［Ｉ］　プラスチック支持体層； ［■コ　メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体か
   ら形成された接着層； および、 ［１１１］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在
   下で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで
   、変性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をもつ
   化合物を含む電気泳動用媒体層。 ２゜上記媒体層がさらに水溶性ポリマーおよびアガロー
   スを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   電気泳動用媒体材料。 ３゜」二記変性剤が尿素またはホルムアミドである特許
   請求の範囲第１項または第２項記載の電気泳動用媒体材
   料。 ４゜支持体層がプラスチックシートからなることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項もしくは第２項記載の電気
   泳動用媒体材料。 ５゜プラスチックシートがポリエチレンテレフタレート
   からなることを特徴とする特許請求の範囲第４項記載の
   電気泳動用媒体材料。 ６゜メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体から形
   成された接着層が、実質的にメチルメタクリレートマク
   ロモノマー誘導体のみから形成された層であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒体材
   料。 ７゜メチルツタクリレートマクロモノマー９４体が、メ
   チルメタクリレート基末端メチルメタクリレートマクロ
   モノマーであることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   もしくは第６項記載の電気泳動用媒体材料。 ８゜プラスチック支持体の上にメチルメタクリレートマ
   クロモノマー誘導体を含む中間層を設けたのち、該中間
   層の上にてアクリルアミド系化合物と架橋剤とを変性剤
   として少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化合物と
   水との存在下で架橋重合してポリアクリルアミド系水性
   ゲル電気泳動用媒体層を形成することを特徴とする電気
   泳動用媒体材料の製造法。 ９゜上記媒体層がさ−らに水溶性ポリマーおよびアガロ
   ースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第８項記載
   の電気泳動用媒体材料の製造法。 １０、上記変性剤が尿素またはホルムアミドであること
   を特徴とする第８項記載の電気泳動用媒体材料の製造法
   。 １１、、メチルメタクリレートマクロモノマー誘導体が
   、メチルメタクリレート基末端メチルメタクリレートマ
   クロモノマーであることを特徴とする特許請求の範囲第
   ８項もしくは第９項記載の電気泳動用媒体材料の製造法
   。