JPS631964A - 電気泳動用媒体材料 - Google Patents
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Landscapes
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[発明の分野]
本発明は、電気泳動用媒体材ネ1に関するものてあり、
さらに詳しくは特に蛋白質等の生体高分子成分の電気泳
動分析に使用するのに適した電気泳動用媒体材ネ1に関
するものである。
さらに詳しくは特に蛋白質等の生体高分子成分の電気泳
動分析に使用するのに適した電気泳動用媒体材ネ1に関
するものである。
[発明の前足]
電気泳動分析の代表的な態様としては、ガラス板支持体
に寒天、セルロース、セルロースアセテート、デンプン
、シリカゲル、ポリアクリルアミド等の膜形成材料を塗
布またはtk延して製造した電気泳動膜に緩衝液をしみ
こませ、この−Lに分析対象の物質を付着させ、電気泳
動膜の両端に電圧をかけ、電気泳動膜にまたは内部で展
開(移動)させたのち、染色し、この染色した試料の光
学濃度を測定して物質の各成分の定量分析を行なう態様
を挙げることができる。
に寒天、セルロース、セルロースアセテート、デンプン
、シリカゲル、ポリアクリルアミド等の膜形成材料を塗
布またはtk延して製造した電気泳動膜に緩衝液をしみ
こませ、この−Lに分析対象の物質を付着させ、電気泳
動膜の両端に電圧をかけ、電気泳動膜にまたは内部で展
開(移動)させたのち、染色し、この染色した試料の光
学濃度を測定して物質の各成分の定量分析を行なう態様
を挙げることができる。
このような電気泳動分析および電気泳動膜の詳細につい
ては、電気泳動実験法「電気泳動実験法(改訂第51置
)」(文光堂、1975年発行)、古木、水弁編著「最
新電気泳動性」(広角書店、1973年発行)等に記載
されている。
ては、電気泳動実験法「電気泳動実験法(改訂第51置
)」(文光堂、1975年発行)、古木、水弁編著「最
新電気泳動性」(広角書店、1973年発行)等に記載
されている。
近年において、電気泳動法は生体成分の分析に多用され
ており、特に蛋白分析は病気診断のための生化学検査に
おいて頻繁に用いられている。
ており、特に蛋白分析は病気診断のための生化学検査に
おいて頻繁に用いられている。
電気泳動用膜またはシートとしては古くから濾紙か用い
られていたか、上述のように性能」−の面から最近はア
ガロース膜やポリアクリルアミドゲル膜か用いられるよ
うになり、特に分子ふるい効果を有するポリアクリルア
ミドゲル膜は現在酸も多く利用されている。
られていたか、上述のように性能」−の面から最近はア
ガロース膜やポリアクリルアミドゲル膜か用いられるよ
うになり、特に分子ふるい効果を有するポリアクリルア
ミドゲル膜は現在酸も多く利用されている。
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
単量体を、重合触媒の存在下、N、N’−メチレンビス
アクリルアミドのような二官能性の架橋剤で酸素不存在
条件下で重合架橋させることによって得られる。
単量体を、重合触媒の存在下、N、N’−メチレンビス
アクリルアミドのような二官能性の架橋剤で酸素不存在
条件下で重合架橋させることによって得られる。
上記のようにポリアクリルアミド形成の重合反応はラジ
カル架橋重合であるため、酸素の影響により架橋重合が
阻害される。従って、ポリアクリルアミドゲル膜は酸素
を遮断した状態で作成する必要がある。このため、−般
にポリアクリルアミドゲル膜は、二枚のガラス板から構
成されたセル(−定の空間、たとえば0 、3 m m
−1m m )の中にゲル形成液を注入したのち酸素
を遮断し架橋重合させてゲル化させることにより形成さ
れている。しかしながら、二枚のガラス板の間でゲル膜
を形成する作業は、ガラスが割れやすく、かつ重い等の
欠点かあり、またガラスに挟まれたゲル膜は持ち運びに
不便で取扱い性か悪いため、ゲル膜を量産するには多大
の困難を伴う。
カル架橋重合であるため、酸素の影響により架橋重合が
阻害される。従って、ポリアクリルアミドゲル膜は酸素
を遮断した状態で作成する必要がある。このため、−般
にポリアクリルアミドゲル膜は、二枚のガラス板から構
成されたセル(−定の空間、たとえば0 、3 m m
−1m m )の中にゲル形成液を注入したのち酸素
を遮断し架橋重合させてゲル化させることにより形成さ
れている。しかしながら、二枚のガラス板の間でゲル膜
を形成する作業は、ガラスが割れやすく、かつ重い等の
欠点かあり、またガラスに挟まれたゲル膜は持ち運びに
不便で取扱い性か悪いため、ゲル膜を量産するには多大
の困難を伴う。
更に従来では、ガラス板に挟まれたポリアクリルアミド
ゲル膜を用いて、所定条件で一定時間水平あるいは垂直
スラブ電気泳動を行なったのち。
ゲル膜を用いて、所定条件で一定時間水平あるいは垂直
スラブ電気泳動を行なったのち。
ガラス板の一方を除去し、ゲル膜をもう一方のガラス板
に載せた状態で染色(例えば、ボンソ3R染色、クマシ
ーブリリアントフルー〇−250染色、銀染色等)処理
し、生体成分の分析を行なうような操作が行なわれてい
るか、ガラス板と湿潤状態のゲル膜との接着性が悪いた
めこの染色工程においてゲル膜かガラス板より剥離しや
すく、その作業には高度の熟練した技術が必要となる。
に載せた状態で染色(例えば、ボンソ3R染色、クマシ
ーブリリアントフルー〇−250染色、銀染色等)処理
し、生体成分の分析を行なうような操作が行なわれてい
るか、ガラス板と湿潤状態のゲル膜との接着性が悪いた
めこの染色工程においてゲル膜かガラス板より剥離しや
すく、その作業には高度の熟練した技術が必要となる。
上記のような電気泳動媒体材料におけるガラス板支持体
に起因する問題を解決するために、既にポリエチレンテ
レフタレートなどのプラスチックからなるシートをガラ
ス板の代りに用いるとの提案がなされている。
に起因する問題を解決するために、既にポリエチレンテ
レフタレートなどのプラスチックからなるシートをガラ
ス板の代りに用いるとの提案がなされている。
しかしながら本発明者の検討によると、これまでに提案
されているプラスチック製支持体、ポリアクリルアミド
ゲル膜そしてプラスチック製カバーフィルム層からなる
電気泳動用媒体材料では、ポリアクリルアミドゲル膜の
支持体への親和性が余り高くないため、支持体の表面状
態にむらなどかある場合には、ポリアクリルアミドゲル
膜か支持体表面に均質に密着せず、このため、ゲル膜と
支持体との分離の発生、あるいはゲル膜の解像力か低下
するなどの問題があった。
されているプラスチック製支持体、ポリアクリルアミド
ゲル膜そしてプラスチック製カバーフィルム層からなる
電気泳動用媒体材料では、ポリアクリルアミドゲル膜の
支持体への親和性が余り高くないため、支持体の表面状
態にむらなどかある場合には、ポリアクリルアミドゲル
膜か支持体表面に均質に密着せず、このため、ゲル膜と
支持体との分離の発生、あるいはゲル膜の解像力か低下
するなどの問題があった。
[発明の要旨]
本発明は、支持体上に形成されたポリアクリルアミドゲ
ル膜と、そのゲル膜表面を被覆するカバーシート層から
なる電気泳動用媒体材料で、解像力および実用■;の取
り扱い性か改良されたものな提供することを目的とする
。
ル膜と、そのゲル膜表面を被覆するカバーシート層から
なる電気泳動用媒体材料で、解像力および実用■;の取
り扱い性か改良されたものな提供することを目的とする
。
本発明は、
[I]支持体層:
[II ]アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在
下で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで
、アルキル硫酸塩および他の界面活性剤を含む電気泳動
用媒体層;および [mlカバーシート層 の各層が順次積層されてなる積層体を含む電気泳動用媒
体材料にある。
下で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで
、アルキル硫酸塩および他の界面活性剤を含む電気泳動
用媒体層;および [mlカバーシート層 の各層が順次積層されてなる積層体を含む電気泳動用媒
体材料にある。
本発明の電気泳動用媒体材料では、ポリアクリルアミド
ゲル膜と支持体との間の密着、およびポリアクリルアミ
ドゲル膜とカバーシートとの間の密着が、それぞれ高度
に均一になるため、ゲル膜の表面が高度に均質になり、
高い解像力および優れた実用上の取り扱い性を示す。
ゲル膜と支持体との間の密着、およびポリアクリルアミ
ドゲル膜とカバーシートとの間の密着が、それぞれ高度
に均一になるため、ゲル膜の表面が高度に均質になり、
高い解像力および優れた実用上の取り扱い性を示す。
[発明の詳細な記述]
本発明の電気泳動用媒体材料は、−般にプラスチックシ
ート(あるいはフィルム)を支持体として用いる。この
プラスチック製シートとしては、任意のプラスチック材
料から形成したものを用いることかてきる。k了ましい
プラスチ・ンクシートの例としては1親水性ポリマーま
たは公知の表面処理により表面を親木化したポリマー(
例、ポリエチレンテレフタレート、ビスフェノールAの
ポリカルボネート、ポリ塩化ビニル、塩化ビニリデン・
塩化ビニルコポリマー、ポリメチルメタクリレート、ポ
リエチレン、ボリプL1ピレン、セルロースアセテート
類、セル【1−スアセデートブロピオネート等)のフィ
ルム5板またはシート等の成形物をあげることかてきる
。特にポリエチレンテレフタフタレートから形成された
シートを用いることか好ましい。あるいは、ガラス製支
持体でもよい。
ート(あるいはフィルム)を支持体として用いる。この
プラスチック製シートとしては、任意のプラスチック材
料から形成したものを用いることかてきる。k了ましい
プラスチ・ンクシートの例としては1親水性ポリマーま
たは公知の表面処理により表面を親木化したポリマー(
例、ポリエチレンテレフタレート、ビスフェノールAの
ポリカルボネート、ポリ塩化ビニル、塩化ビニリデン・
塩化ビニルコポリマー、ポリメチルメタクリレート、ポ
リエチレン、ボリプL1ピレン、セルロースアセテート
類、セル【1−スアセデートブロピオネート等)のフィ
ルム5板またはシート等の成形物をあげることかてきる
。特にポリエチレンテレフタフタレートから形成された
シートを用いることか好ましい。あるいは、ガラス製支
持体でもよい。
ポリマー成形物の表面を親水化するだめの処理のために
は、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電処理、火
焔処理、電f線照射、ケミカルエツチング、電解エツチ
ング等の公知の方法を適用するととかてきる。
は、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電処理、火
焔処理、電f線照射、ケミカルエツチング、電解エツチ
ング等の公知の方法を適用するととかてきる。
支持体は一般に厚さか、約50gm〜約500pm、好
ましくは約70pm〜約300pLmのものか用いられ
る。
ましくは約70pm〜約300pLmのものか用いられ
る。
次に電気泳動用媒体層(以下において、ゲル媒体層、ポ
リアクリルアミドゲル膜あるいは巾にゲル膜ともいう)
について説明する。
リアクリルアミドゲル膜あるいは巾にゲル膜ともいう)
について説明する。
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中て両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、(水中に)溶解とく水中に)
分散の両者を含めて単に(水中に)溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中て両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、(水中に)溶解とく水中に)
分散の両者を含めて単に(水中に)溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。
ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることかてきる
アクリルアミド系化合物としては、アクリルアミ1〜、
N−メチルアクリルアミド、N、N−シメチルアクリル
アミト、N−(ヒドロキシメチル)アクリルアミド、ジ
アセトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物や
メタクリルアミドの様なメタクリルアミド系化合物か挙
げられ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上を
併用して用いることかできる。これらのアクリルアミド
系化合物のうちではアクリルアミl〜か最も好ましく、
またアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物ある
いはメタクリルアミド系化合物の一種以−トの併用も好
ましい。
アクリルアミド系化合物としては、アクリルアミ1〜、
N−メチルアクリルアミド、N、N−シメチルアクリル
アミト、N−(ヒドロキシメチル)アクリルアミド、ジ
アセトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物や
メタクリルアミドの様なメタクリルアミド系化合物か挙
げられ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上を
併用して用いることかできる。これらのアクリルアミド
系化合物のうちではアクリルアミl〜か最も好ましく、
またアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物ある
いはメタクリルアミド系化合物の一種以−トの併用も好
ましい。
架橋剤としてはr ElectrophoresisJ
198]、 2゜220−228等に記載の公知の化
合物(−種または二種以上の組合せ)を用いることかで
きる。架橋剤の例としては、二官能性化合物および二官
能性化合物を開けることかできる。二官能性化合物の例
としては、N、N’ −メチレンビスアクリルアミド(
BIS);N、N’ −プロピレンビスアクリルアミド
(PBA);シ(アクリルアミドジメチル)エーテル(
DAE): l、2−ジアクリルアミドエチレングリコ
ール(DEG);エチレンウレアビスアクリルアミド(
EUB);エチレンジアクリレート(EDA);N、N
”−シアリルタータルジアミド(N、N’−diall
yltartardiamide :DATD);お
よびN、N’ −ヒスアクリリルシスタミン(N、N’
−bisacrylylcyst、aIline、 B
A C)等を挙げることかできる。二官能性化合物の
例としては、1,3.5−1−リアクリLフィルへキサ
ヒトローs−トリアジン、1〜リアリルシアヌレート、
トリアリルイソシアヌレ−I−等を挙げることかできる
。
198]、 2゜220−228等に記載の公知の化
合物(−種または二種以上の組合せ)を用いることかで
きる。架橋剤の例としては、二官能性化合物および二官
能性化合物を開けることかできる。二官能性化合物の例
としては、N、N’ −メチレンビスアクリルアミド(
BIS);N、N’ −プロピレンビスアクリルアミド
(PBA);シ(アクリルアミドジメチル)エーテル(
DAE): l、2−ジアクリルアミドエチレングリコ
ール(DEG);エチレンウレアビスアクリルアミド(
EUB);エチレンジアクリレート(EDA);N、N
”−シアリルタータルジアミド(N、N’−diall
yltartardiamide :DATD);お
よびN、N’ −ヒスアクリリルシスタミン(N、N’
−bisacrylylcyst、aIline、 B
A C)等を挙げることかできる。二官能性化合物の
例としては、1,3.5−1−リアクリLフィルへキサ
ヒトローs−トリアジン、1〜リアリルシアヌレート、
トリアリルイソシアヌレ−I−等を挙げることかできる
。
架橋剤の量は、単量体と架橋剤の組型ωに対して約0.
1〜30 w t%、好ましくは約0.5〜10 w
t%の範囲で用いることかできる。
1〜30 w t%、好ましくは約0.5〜10 w
t%の範囲で用いることかできる。
ゲル濃度としては、S、 l−1jerten: r
Arch。
Arch。
口iochem、 uiophys、 J 1
(5upp1. )、 147(1962)に記
載の定義に従って表示して、単量体、架橋剤および水か
らなるゲル膜の容積に対して、中量体と架橋剤の量か約
3 w / v%から約30 w / v%の範囲で好
ましく用いられる。
(5upp1. )、 147(1962)に記
載の定義に従って表示して、単量体、架橋剤および水か
らなるゲル膜の容積に対して、中量体と架橋剤の量か約
3 w / v%から約30 w / v%の範囲で好
ましく用いられる。
本発明の電気泳動媒体材料では、その電気泳動用媒体層
(ポリアクリルアミドゲル膜)にアルキル硫酸塩および
他の界面活性剤が含まれていることを特徴とする。他の
界面活性剤としては、特に限定はないが、たとえば下記
のような界面活性剤を挙げることができる。
(ポリアクリルアミドゲル膜)にアルキル硫酸塩および
他の界面活性剤が含まれていることを特徴とする。他の
界面活性剤としては、特に限定はないが、たとえば下記
のような界面活性剤を挙げることができる。
非イオン界面活性剤
A0アルキレンオキサイド誘導体
(1)C8F □フ S 02 N fCH2CH2
0う−−11HEt (4) C8F□7 S O2N −f−CH2CH2
0□HEt B0クリシドール誘導体 アニオン界面活性剤 C,スルホン酸塩誘導体 (9) Ca F1?SOs K D、カルボン酸塩系 (10) Ca F tフ S O2N
CH2COOKPr 両性界面活性剤 Me Me なお、Meはメチル基を、Etはエチル基を、Prはプ
ロピル基を、Buはブチル基を、Peはペンチル基を表
す。
0う−−11HEt (4) C8F□7 S O2N −f−CH2CH2
0□HEt B0クリシドール誘導体 アニオン界面活性剤 C,スルホン酸塩誘導体 (9) Ca F1?SOs K D、カルボン酸塩系 (10) Ca F tフ S O2N
CH2COOKPr 両性界面活性剤 Me Me なお、Meはメチル基を、Etはエチル基を、Prはプ
ロピル基を、Buはブチル基を、Peはペンチル基を表
す。
他の界面活性剤の量は電気泳動媒体層の体積当りの量で
lXl0−’〜5XIO−”W/V%、好ましくはlX
l0−’〜5X10−2w/v%である。
lXl0−’〜5XIO−”W/V%、好ましくはlX
l0−’〜5X10−2w/v%である。
本発明の電気泳動用媒体材料は、主として蛋白質または
複合蛋白質(たとえば、リボプロティン、糖プロティン
など)の分析に有利に用いられるものであり、電気泳動
用媒体層には、変性剤としてアルキル硫酸塩陰イオン性
界面活性剤を含有させることができる。分析試料が蛋白
質または複合蛋白質(例えばリボ蛋白質、糖蛋白質など
)の場合にはこの界面活性剤を含ませることは好ましい
か、または必須であることが多い。
複合蛋白質(たとえば、リボプロティン、糖プロティン
など)の分析に有利に用いられるものであり、電気泳動
用媒体層には、変性剤としてアルキル硫酸塩陰イオン性
界面活性剤を含有させることができる。分析試料が蛋白
質または複合蛋白質(例えばリボ蛋白質、糖蛋白質など
)の場合にはこの界面活性剤を含ませることは好ましい
か、または必須であることが多い。
アルキル硫酸塩陰イオン界面活性剤を電気泳動用媒体層
に含有させることにより、蛋白質または複合蛋白質の効
率的な分離、それらの分子量測定が可能となる。
に含有させることにより、蛋白質または複合蛋白質の効
率的な分離、それらの分子量測定が可能となる。
アルキル硫酸塩としては、特に炭素原子数10以t=の
長鎖アルキル基を有するアルキル硫酸塩が好ましく用い
られる。塩を形成する陽イオンとしては、ナトリウムイ
オン、カリウムイオン、リチウムイオン等のアルカリ金
属イオンが一般的であり、これらのうちではナトリウム
イオンが用いやすい。アルキル硫酸塩のうちてはドデシ
ル硫酸塩(ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等)
が好ましく、なかでもドデシル硫酸ナトリウム(SDS
)が最も好ましい。SDSを本発明のゲル媒体層に含有
させることにより蛋白質または複合蛋白質の効率的な分
離およびそれらの分子量測定か可能となる。
長鎖アルキル基を有するアルキル硫酸塩が好ましく用い
られる。塩を形成する陽イオンとしては、ナトリウムイ
オン、カリウムイオン、リチウムイオン等のアルカリ金
属イオンが一般的であり、これらのうちではナトリウム
イオンが用いやすい。アルキル硫酸塩のうちてはドデシ
ル硫酸塩(ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等)
が好ましく、なかでもドデシル硫酸ナトリウム(SDS
)が最も好ましい。SDSを本発明のゲル媒体層に含有
させることにより蛋白質または複合蛋白質の効率的な分
離およびそれらの分子量測定か可能となる。
変性剤としてのアルキル硫酸塩陰イオン界面活性剤の含
有量はゲル形成液に対して約0.05w/V%から約2
.0w/v%、好ましくは約0゜1 w / v%から
約1.5w/v%の範囲である。
有量はゲル形成液に対して約0.05w/V%から約2
.0w/v%、好ましくは約0゜1 w / v%から
約1.5w/v%の範囲である。
ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。
せることができる。
水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮重合型の
水溶性ポリマーを用いることができる。
水溶性ポリマーを用いることができる。
付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニルアル
コール、ポリビニルビ[1リドン、ポリアクリルアミド
等の非イオン性水溶性ポリマーか挙げられる。縮重合型
ポリマーの具体例としてポリエチレンクリコール、ポリ
プロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポリアルキ
レングリコールか挙げられる。水溶性ポリマーの分子量
は、約1万から約100万の範囲のものが好ましい。こ
れらの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレンクリコ
ール、ポリアクリルアミドが特に好ましい。
コール、ポリビニルビ[1リドン、ポリアクリルアミド
等の非イオン性水溶性ポリマーか挙げられる。縮重合型
ポリマーの具体例としてポリエチレンクリコール、ポリ
プロピレングリコール等の非イオン性水溶性ポリアルキ
レングリコールか挙げられる。水溶性ポリマーの分子量
は、約1万から約100万の範囲のものが好ましい。こ
れらの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレンクリコ
ール、ポリアクリルアミドが特に好ましい。
水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合31重量に対し
“C約2 w t%から約100wt%の範囲、好まし
くは約5 w t%から約50wt%の範囲で用いられ
る。水溶性ポリマーを添加することにより、ポリアクリ
ルアミドゲル膜は可塑性を有するようになるため、裁断
加工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥時に
もl■塑性を有するようになり、もろさか改良され壊れ
にくくなるとの利点かある。また、水溶性ポリマーの分
子量および添加量を選択することにより、ゲル膜の粘度
をコントロールすることもできる。
“C約2 w t%から約100wt%の範囲、好まし
くは約5 w t%から約50wt%の範囲で用いられ
る。水溶性ポリマーを添加することにより、ポリアクリ
ルアミドゲル膜は可塑性を有するようになるため、裁断
加工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥時に
もl■塑性を有するようになり、もろさか改良され壊れ
にくくなるとの利点かある。また、水溶性ポリマーの分
子量および添加量を選択することにより、ゲル膜の粘度
をコントロールすることもできる。
ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロースを含有さヒる
ことかてきる。アガロースは公知のアガロースであれば
特に制限はなく、低電気侵透性、中電気浸透性、高電気
浸透性アガロースのいずれをも用いることができる。用
いることのてきるアガロースの例としては特開昭55−
5730号、特開昭55−110946号、特表昭57
−502098号等の公報に開示されているアガロース
等がある。
ことかてきる。アガロースは公知のアガロースであれば
特に制限はなく、低電気侵透性、中電気浸透性、高電気
浸透性アガロースのいずれをも用いることができる。用
いることのてきるアガロースの例としては特開昭55−
5730号、特開昭55−110946号、特表昭57
−502098号等の公報に開示されているアガロース
等がある。
アガロースの添加量は、単量体と架橋剤とを含むゲル組
成液の容積に対して約0.1w/v%から約2 w /
v%、好ましくは約0 、3 w / v%から約1
.2w/v%の割合で用いられる。ゲル膜にアガロース
を添加することにより、ゲル形成用溶液温度を変化させ
ることにより、適当な溶液粘度にコントロールすること
か可能となり、その流動性を止めることかでき、またゲ
ル膜を成形する時には成形しやすくなるとの利点がある
。
成液の容積に対して約0.1w/v%から約2 w /
v%、好ましくは約0 、3 w / v%から約1
.2w/v%の割合で用いられる。ゲル膜にアガロース
を添加することにより、ゲル形成用溶液温度を変化させ
ることにより、適当な溶液粘度にコントロールすること
か可能となり、その流動性を止めることかでき、またゲ
ル膜を成形する時には成形しやすくなるとの利点がある
。
ゲル媒体層にはpH緩衝剤を含有させることもできる。
緩衝剤としては、電気泳動分析される試ネ′1に応して
、pH2,5から10.0の範囲内のpH値に緩衝でき
る公知の緩衝剤から適宜選択して用いることかできる。
、pH2,5から10.0の範囲内のpH値に緩衝でき
る公知の緩衝剤から適宜選択して用いることかできる。
用いうる緩衝剤としては、l(本化学会編「化学便覧
基礎編」(東京、丸善■1966’「発行)+312−
1320ベージ:青米、水弁編「最新電気泳動状」 (
東京、広角書店、1973年発行320−322ベージ
; r Data for Riochemical
Re5earclIJ (R,14゜C,Dawson
et al、編、第2版、0xford at th
eClarendon Press、 1959年発行
) 476−508ベージ; r Bioches+
1stry J 5.467 (1966)、r A
nalytical BiochemistryJ 1
04.300−3]D(1980)等に記載の緩衝剤か
挙げられる。
基礎編」(東京、丸善■1966’「発行)+312−
1320ベージ:青米、水弁編「最新電気泳動状」 (
東京、広角書店、1973年発行320−322ベージ
; r Data for Riochemical
Re5earclIJ (R,14゜C,Dawson
et al、編、第2版、0xford at th
eClarendon Press、 1959年発行
) 476−508ベージ; r Bioches+
1stry J 5.467 (1966)、r A
nalytical BiochemistryJ 1
04.300−3]D(1980)等に記載の緩衝剤か
挙げられる。
緩衝剤の例としては、バルビツールを含む緩衝剤、トリ
ス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris)を含
む緩衝剤、燐酸用を含む緩衝剤、ホウ酸塩を含む緩衝剤
、酢酸または酢酸塩を含む緩衝剤、クエン酸またはクエ
ン酸塩を含む緩衝剤、乳酸または乳酸塩を含む緩衝剤、
クリシンを含むM衝剤、N、N−ビス(2−ヒトロキシ
エチル)クリシン(Bicine)、N−2−ヒトロキ
シエチルピベラシン−N′−2−ヒドロキシプロパン−
3−スルホン酸(HEPPSO)またはその塩、N−2
−ヒトロキシエチルビベラシン−N’−3−プロパンス
ルホン酸(EPPS)またはその塩、N−[トリス(ヒ
ドロキシメチル)]−]3−アミノプロパンスルホン酸
TAPS)またはそのIM等をおよび、これらのいずれ
かと必要により組合せられる酸、アルカリ、または塩等
を挙げることができる。好ましい緩衝剤の具体例として
は、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム、Tr
is・ホウ醜ナトリウム、Tris−ホウ酸ナトリウム
・EDTA2Na塩、Tris・クエン酸、ハルビター
ルナトリウム・酢酸ナトリウム、ハルビタールナ1ヘリ
ウム・塩酸、バルビツール・ハルビタールナ1−リウム
、酢触・酢酸ナトリウム、乳酸・乳酸ナトリウム、クエ
ン酸−燐酸水素二ナトリウム、ビシン(Bicine)
、 HE P P S O、HE P P S Oナ
トリウム塩、EPPS、EPPSナトIJ ’7 ムI
、TAPS、TAPSナトリウム塩等を挙げることかて
きる。
ス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris)を含
む緩衝剤、燐酸用を含む緩衝剤、ホウ酸塩を含む緩衝剤
、酢酸または酢酸塩を含む緩衝剤、クエン酸またはクエ
ン酸塩を含む緩衝剤、乳酸または乳酸塩を含む緩衝剤、
クリシンを含むM衝剤、N、N−ビス(2−ヒトロキシ
エチル)クリシン(Bicine)、N−2−ヒトロキ
シエチルピベラシン−N′−2−ヒドロキシプロパン−
3−スルホン酸(HEPPSO)またはその塩、N−2
−ヒトロキシエチルビベラシン−N’−3−プロパンス
ルホン酸(EPPS)またはその塩、N−[トリス(ヒ
ドロキシメチル)]−]3−アミノプロパンスルホン酸
TAPS)またはそのIM等をおよび、これらのいずれ
かと必要により組合せられる酸、アルカリ、または塩等
を挙げることができる。好ましい緩衝剤の具体例として
は、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム、Tr
is・ホウ醜ナトリウム、Tris−ホウ酸ナトリウム
・EDTA2Na塩、Tris・クエン酸、ハルビター
ルナトリウム・酢酸ナトリウム、ハルビタールナ1ヘリ
ウム・塩酸、バルビツール・ハルビタールナ1−リウム
、酢触・酢酸ナトリウム、乳酸・乳酸ナトリウム、クエ
ン酸−燐酸水素二ナトリウム、ビシン(Bicine)
、 HE P P S O、HE P P S Oナ
トリウム塩、EPPS、EPPSナトIJ ’7 ムI
、TAPS、TAPSナトリウム塩等を挙げることかて
きる。
本発明における代表的なポリアクリルアミドゲル膜は、
アクリルアミドに代表される単量体、二官能性のアリル
(ally+ )化合物またはアクリル化合物(lJ橋
剤)、水溶性ポリマー、およびアガロースを実質的に均
一に溶解させた水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル
架橋重合させて得られるものであり、単量体と架橋剤か
ら形成された三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガ
ロースか実質的に分散されて、後二者のポリマー鎖か三
次元架橋重合体とからみあっている構造を有すると推定
され、この構造か特徴をなすゲル奴体であるということ
ができる。
アクリルアミドに代表される単量体、二官能性のアリル
(ally+ )化合物またはアクリル化合物(lJ橋
剤)、水溶性ポリマー、およびアガロースを実質的に均
一に溶解させた水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル
架橋重合させて得られるものであり、単量体と架橋剤か
ら形成された三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガ
ロースか実質的に分散されて、後二者のポリマー鎖か三
次元架橋重合体とからみあっている構造を有すると推定
され、この構造か特徴をなすゲル奴体であるということ
ができる。
−1−記のラジカル架橋重合反応は、分子状酸素の不存
在下で過酸化物の存在および/または紫外線照射等の公
知の方法により発生させることかできる。この反応を加
熱および紫外線照射により加速することもできる。
在下で過酸化物の存在および/または紫外線照射等の公
知の方法により発生させることかできる。この反応を加
熱および紫外線照射により加速することもできる。
ラジカル架橋重合用触媒としては、r Electr。
phoresis J +981.2.213−219
.同198+、 2.220−228 、古木、水弁編
「最新電気泳動状J(1973年発行)等に記載の公知
の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜選択して用い
ることかできる。
.同198+、 2.220−228 、古木、水弁編
「最新電気泳動状J(1973年発行)等に記載の公知
の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜選択して用い
ることかできる。
好ましいラジカル重合開始剤の例としては、β−ジメチ
ルアミノプロピオニトリル(DMAPN)−ベルオクソ
ニ硫酸アンモニウム混合物、N。
ルアミノプロピオニトリル(DMAPN)−ベルオクソ
ニ硫酸アンモニウム混合物、N。
N、N’ 、N”−テトラメチルエチレンジアミン(T
EMED)−ベルオクソ二硫酸アンモニウム混合物、T
EMED−リボフラビン(リボフラビンリン酸エステル
ナトリウムIM)混合物、TEMED−リボフラビン−
過酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ等が挙げられる
。ラジカル重合開始剤の使用量は1通常中門体と架橋剤
の合計重量に対して約0.3重量%から約5重量%てあ
り、好ましくは約0.5重量%から約3重量%の範囲で
ある。
EMED)−ベルオクソ二硫酸アンモニウム混合物、T
EMED−リボフラビン(リボフラビンリン酸エステル
ナトリウムIM)混合物、TEMED−リボフラビン−
過酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ等が挙げられる
。ラジカル重合開始剤の使用量は1通常中門体と架橋剤
の合計重量に対して約0.3重量%から約5重量%てあ
り、好ましくは約0.5重量%から約3重量%の範囲で
ある。
ラジカル重合の励起光としては光増感剤の励起に有効な
波長的200〜900nm (近紫外線から可視光の範
囲)を含む光が一般に利用される。
波長的200〜900nm (近紫外線から可視光の範
囲)を含む光が一般に利用される。
励起光の光源の具体例としては、高圧水銀灯、超高圧水
銀灯、へロゲンランプ、メタルハライドランプ、タング
ステンランプ、重水素ランプ、キセノン放電灯などが利
用できる。
銀灯、へロゲンランプ、メタルハライドランプ、タング
ステンランプ、重水素ランプ、キセノン放電灯などが利
用できる。
ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうることか知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、2−メルカプトエタノールを
挙げることができる。
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうることか知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、2−メルカプトエタノールを
挙げることができる。
その他の添加剤としては湿潤剤かあり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもできる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約5 w /
v%から約40 w / v%の範囲から選ばれる。
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもできる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約5 w /
v%から約40 w / v%の範囲から選ばれる。
ポリオール化合物のうちではグリセリンが特に好ましい
。湿潤剤を配合することによりゲル膜の保存時の極端な
水分の蒸発による乾燥を防ぐことが可能となり、また極
端な乾鰻に起因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等の
ゲル膜の物性が改善されるとの利点がある。
。湿潤剤を配合することによりゲル膜の保存時の極端な
水分の蒸発による乾燥を防ぐことが可能となり、また極
端な乾鰻に起因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等の
ゲル膜の物性が改善されるとの利点がある。
ゲル媒体層は、平滑表面を有する支持体の上にゲル形成
液を公知の方法により塗布して設けたのち、ゲル形成液
を架橋重合させることにより、層状に成形することがで
きる。
液を公知の方法により塗布して設けたのち、ゲル形成液
を架橋重合させることにより、層状に成形することがで
きる。
ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
酸素を除去した不活性ガス(窒素ガスなど)の雰囲気下
で、あるいはゲル形成液の上をカバーシート、シートま
たは板などの被覆材料で覆った状態にて架橋重合を実施
する。
酸素を除去した不活性ガス(窒素ガスなど)の雰囲気下
で、あるいはゲル形成液の上をカバーシート、シートま
たは板などの被覆材料で覆った状態にて架橋重合を実施
する。
プラスチック製カバーシートは、前記のプラスチック製
支持体の記述において説明した各種の材料から製造する
ことができる。プラスチック製カバーシートとプラスチ
ック製支持体とは同一の材料からなっていてもよく、あ
るいは互いに異なった材料からなっていてもよい。
支持体の記述において説明した各種の材料から製造する
ことができる。プラスチック製カバーシートとプラスチ
ック製支持体とは同一の材料からなっていてもよく、あ
るいは互いに異なった材料からなっていてもよい。
プラスチック製カバーシートの厚さは300ルm以下で
あり、実用的に好ましい範囲としては約4pm〜約20
0 gm、特に好ましい範囲とじては約4gm〜約10
0gmである。カバーシートは支持体よりも薄いことか
望ましい。
あり、実用的に好ましい範囲としては約4pm〜約20
0 gm、特に好ましい範囲とじては約4gm〜約10
0gmである。カバーシートは支持体よりも薄いことか
望ましい。
カバーシートはガラス製であってもよい。
なおL記では支持体ににゲル膜を形成し、その1−にカ
バーシー1へな付設する方法を例にして本発明の電気泳
動用媒体材料の製造性を説明したか、前述のようにカバ
ーシート[−にゲル膜を形成し、そのにに支持体を付設
するような方法を利用して本発明の電気泳動用媒体材料
1を製造することかてきることは勿論である。
バーシー1へな付設する方法を例にして本発明の電気泳
動用媒体材料の製造性を説明したか、前述のようにカバ
ーシート[−にゲル膜を形成し、そのにに支持体を付設
するような方法を利用して本発明の電気泳動用媒体材料
1を製造することかてきることは勿論である。
また、支持体、電気泳動媒体層およびカバーシートのそ
れぞれの間には所望によりF塗り層を設けてもよい。
れぞれの間には所望によりF塗り層を設けてもよい。
本発明の電気泳動用媒体材料は、前述の諸文献等に記載
の公知の方法に従って、水乎型および垂直型平板電気泳
動法、ディスク電気泳動泳動法等のいずれにも用いるこ
とかできる。
の公知の方法に従って、水乎型および垂直型平板電気泳
動法、ディスク電気泳動泳動法等のいずれにも用いるこ
とかできる。
以下に本発明の実施例を記載するか、これらは本発明の
範囲を限定するものではない。
範囲を限定するものではない。
[実施例11
特開昭60−203847壮公報記載のタイプの連続塗
布装置を用いて、厚さ180pLmの長尺ポリエチレン
テレフタレートシート(支持体)1−に、アクリルアミ
ド118.7g、N’、N’−メチレンビスアクリルア
ミl〜6.3g、リン酸木素二ナトリウム・−トー水f
j、i35.8g、リン酸く水素す1〜リウム・十三水
用3.3g、ドデシル硫酸ナトリウム1.0g、トリス
(ヒドロキシメチル)アミノメタンIO,8g、アガロ
ース3.0g、および前記(8)のアニオン界面活性剤
の2 w t、%水溶液10 m lを含有するl O
OOm lの溶液に重合開始剤としてベルオクソ二硫M
アンモニウム(5wt%)13m文とTEMED(25
wt%)330g見、およびリボフラビン(0,25w
t%)10m文を加えたものを0.2mmの厚みで成形
し、窒素雰囲気下でキセノン放電灯(500W)を利用
して照射し架橋重合させ、ポリアクリルアミl−ゲル膜
を得た。
布装置を用いて、厚さ180pLmの長尺ポリエチレン
テレフタレートシート(支持体)1−に、アクリルアミ
ド118.7g、N’、N’−メチレンビスアクリルア
ミl〜6.3g、リン酸木素二ナトリウム・−トー水f
j、i35.8g、リン酸く水素す1〜リウム・十三水
用3.3g、ドデシル硫酸ナトリウム1.0g、トリス
(ヒドロキシメチル)アミノメタンIO,8g、アガロ
ース3.0g、および前記(8)のアニオン界面活性剤
の2 w t、%水溶液10 m lを含有するl O
OOm lの溶液に重合開始剤としてベルオクソ二硫M
アンモニウム(5wt%)13m文とTEMED(25
wt%)330g見、およびリボフラビン(0,25w
t%)10m文を加えたものを0.2mmの厚みで成形
し、窒素雰囲気下でキセノン放電灯(500W)を利用
して照射し架橋重合させ、ポリアクリルアミl−ゲル膜
を得た。
L記のゲル膜の表面を観察したところ、その表面は高度
に均一て、かつ非常に平滑であることか確認された。
に均一て、かつ非常に平滑であることか確認された。
この電気泳動用媒体材料を使用して、標準蛋白質を電気
泳動にかけた。ゲル膜I−に現われた泳動パターンは正
常であった。さらに、電気泳動操作における解像力を調
べたところ満足できるレベルにあった。
泳動にかけた。ゲル膜I−に現われた泳動パターンは正
常であった。さらに、電気泳動操作における解像力を調
べたところ満足できるレベルにあった。
[比較例1]
ゲル膜形成液に前記(8)のアニオン界面活性剤を入れ
なかった以外は実施例1と同様にして、ポリアクリルア
ミドゲル膜を得た。
なかった以外は実施例1と同様にして、ポリアクリルア
ミドゲル膜を得た。
L記のゲル膜の表面を観察したところ、その表面の均一
性およびW滑性は実施例1てt!Iたものに劣り、ハジ
キなどか発生していた。
性およびW滑性は実施例1てt!Iたものに劣り、ハジ
キなどか発生していた。
さらに、電気泳動操作における解像力か実施例1て得た
ものに劣っていた。
ものに劣っていた。
[実施例2]
ゲル膜形成液に入れる界面活性剤を前記(1)の非イオ
ン界面活性剤に変えた以外は実施例1と同様にして、ポ
リアクリルアミドゲル膜を得た。
ン界面活性剤に変えた以外は実施例1と同様にして、ポ
リアクリルアミドゲル膜を得た。
I−記のゲル膜の表面を観察したところ、その表面は高
度に均・て、かつ非常に平滑であることか確認された。
度に均・て、かつ非常に平滑であることか確認された。
この電気泳動用媒体材料を使用1ノで、標準蛋白質を電
気泳動にかけた。ゲル膜上に現われた泳動パターンは正
常であった。さらに、電気泳動操作における解像力を調
べたところ満足できるレベルにあった。
気泳動にかけた。ゲル膜上に現われた泳動パターンは正
常であった。さらに、電気泳動操作における解像力を調
べたところ満足できるレベルにあった。
[実施例31
支持体としてガラス板を用い、ケル形成液にアガロース
を入れるなかった以外は実施例1と同様にして、ポリア
クリルアミ1ヘゲル膜をVIIだ。
を入れるなかった以外は実施例1と同様にして、ポリア
クリルアミ1ヘゲル膜をVIIだ。
L記のゲル膜の表面を観察したところ、その表面は高度
に均一て、かつ非常にモ滑であることか確認された。
に均一て、かつ非常にモ滑であることか確認された。
この電気泳動用媒体材料を使用して、標準蛋白質を電気
泳動にかけた。ゲル膜1−に現われた泳動パターンは正
常であった。さらに、電気泳動操作における解像力を調
べたところ満足できるレベルにあった。
泳動にかけた。ゲル膜1−に現われた泳動パターンは正
常であった。さらに、電気泳動操作における解像力を調
べたところ満足できるレベルにあった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、[ I ]支持体層; [II]アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下で
架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで、ア
ルキル硫酸塩および 他の界面活性剤を含む電気泳動用媒体層; および [III]カバーシート層 の各層が順次積層されてなる積層体を含む電気泳動用媒
体材料。 2,電気泳動用媒体層がさらにアガロースを含むことを
特徴とする特許請求の範囲第1項記載の電気泳動用媒体
材料。l電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーおよ
びアガロースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第
1項記載の電気泳動用媒体材料。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61145480A JPS631964A (ja) | 1986-06-20 | 1986-06-20 | 電気泳動用媒体材料 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61145480A JPS631964A (ja) | 1986-06-20 | 1986-06-20 | 電気泳動用媒体材料 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS631964A true JPS631964A (ja) | 1988-01-06 |
Family
ID=15386228
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61145480A Pending JPS631964A (ja) | 1986-06-20 | 1986-06-20 | 電気泳動用媒体材料 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS631964A (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5949210A (ja) * | 1982-09-14 | 1984-03-21 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 耐熱性に優れた共重合体 |
JP2008094064A (ja) * | 2006-10-16 | 2008-04-24 | Asahi Kasei Chemicals Corp | 透明導電膜形成用耐熱アクリル系樹脂積層体 |
US8309670B2 (en) | 2008-01-03 | 2012-11-13 | Lg Chem, Ltd. | Optical film, protection film for polarizer, polarizing plate fabricated therefrom, and display device employing thereof |
US8895682B2 (en) | 2008-07-31 | 2014-11-25 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Thermoplastic acrylic resin, and molded product thereof |
WO2019013520A1 (ko) | 2017-07-10 | 2019-01-17 | 주식회사 엘지화학 | 원편광판 |
-
1986
- 1986-06-20 JP JP61145480A patent/JPS631964A/ja active Pending
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5949210A (ja) * | 1982-09-14 | 1984-03-21 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 耐熱性に優れた共重合体 |
JPH0445522B2 (ja) * | 1982-09-14 | 1992-07-27 | Asahi Chemical Ind | |
JP2008094064A (ja) * | 2006-10-16 | 2008-04-24 | Asahi Kasei Chemicals Corp | 透明導電膜形成用耐熱アクリル系樹脂積層体 |
US8309670B2 (en) | 2008-01-03 | 2012-11-13 | Lg Chem, Ltd. | Optical film, protection film for polarizer, polarizing plate fabricated therefrom, and display device employing thereof |
US8895682B2 (en) | 2008-07-31 | 2014-11-25 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Thermoplastic acrylic resin, and molded product thereof |
WO2019013520A1 (ko) | 2017-07-10 | 2019-01-17 | 주식회사 엘지화학 | 원편광판 |
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