JPS60239659A - 電気泳動用媒体材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、電気泳動用媒体材料に関するものであり、さ
らに詳しくは特に蛋白質等の生体高分子成分の電気泳動
分析に使用するのに適した電気泳動用媒体材料に関する
ものである。

［発明の背景１ 電気泳動分析の代表的な態様としては、ガラス板支持体
に寒天、セルロース、セルロースアセテート、デンプン
、シリカゲル、ポリアクリルアミド等の膜形成材料を塗
布または流延して製造した電気泳動膜に緩衝液をしみこ
ませ、この上に分析対象の物質を付着させ、支持体の両
端に電圧をかけ、支持体の上または内部で展開（移動）
させたのち、染色し、この染色した試料の光学濃度を測
定して物質の各成分の定量分析を行なう態様を挙げるこ
とができる。

このような電気泳動分析および電気泳動膜の詳細につい
ては、電気泳動実験法「電気泳動実験法（改訂第５版）
」（文光堂、１９７５年発行）、青水、水弁１ａ著「最
新電気泳動法」　（床用書店、１９７３年発行）等に記
載されている。

近年において、電気泳動法は生体成分の分析に多用され
ており、特に蛋白分析は病気診断のための生化学検査に
おいて頻繁に用いられている。

電気泳動用膜またはシートとしては古くから濾紙が用い
られていたが、上述のように性能上の面から最近はアガ
ロース膜やポリアクリルアミドゲル膜が用いられるよう
になり、特に分子ふるい効果を有するポリアクリルアミ
ドゲルＨ々は現在数も多く利用されている。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
単量体を、重合触媒の存在下、Ｎ、Ｎ’−メチレンビス
アクリルアミドのような二官能性の架橋剤で酸素不存在
条件下で重合架橋させることによって得られている。

なお、ポリアクリルアミドゲル膜の製造に際しては変性
剤として陰イオン界面活性剤が添加されることが多いが
、蛋白質分析用ゲル膜の製造においては、変性剤の必要
量が少ないため、湿潤ゲル膜に変性剤水溶液を塗布する
方法、ゲル膜を変性剤水溶液に浸漬する方法等によりゲ
ル膜内に変性剤を含浸させることができる。

上記のようにポリアクリルアミド形成の重合反応はラジ
カル架橋重合であるため、酸素の影響により架橋重合が
阻害される。従って、ポリアクリルアミドゲル膜は酸素
を遮断した状態で作成する必要がある。このため、一般
にポリアクリルアミドゲル膜は、二枚のガラス板から構
成されたセル（一定の空間、たとえば０．３ｍｍ−１ｎ
ｍ）の中にゲル形成液を注入したのち酸素を遮断し架橋
重合させてゲル化させることにより形成されている。し
かしながら、二枚のガラス板の間でゲル膜を形成する作
業は、ガラスが割れやすく、かっ亜い等の欠点があり、
またガラスに挟まれたゲル膜は持ち運びに不便で取扱い
性が悪いため、ゲル膜を量産するには多大の困難を伴う
。

更に従来では、ガラス板に挟まれたポリアクリルアミド
ゲル膜を用いて、所定条件で一定時間水平あるいは垂直
スラブ電気泳動を行なったのち、ゲル膜を染色（例えば
、デンソ３Ｒ染色、クマシーブリリアントブルーＧ−２
５０染色、銀染色等がある）処理し、生体成分の分析を
行なうような操作が行なわれているが、ガラス板と湿潤
状態のゲル膜との接着性が悪いためこの染色工程におい
てゲル膜がガラス板より剥離しやすく、その作業には高
度の熟練した技術が必要となる。

前記の取り扱い性の難点を解決するためにガラス支持体
の代りに、軽いプラスチック支持体に設けたポリアクリ
ルアミドゲル膜の開発が望まれている。この・ような目
的に用いられるプラスチック支持体の好ましい材料とし
ては、たとえばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）
のように、取扱い性がよく、かつ各種性能の優れたプラ
スチックが想定されるが、これらのプラスチックは一般
に疎水性であり、このためゲル膜と支持体との間の接着
性が乏しいとの問題がある。また疎水性プラスチックシ
ートの表面を親水性にしたとしても、あるいは親水性の
プラスチックシートを用いたとしても、ゲル膜と支持体
との接着性は必ずしも満足できるレベルには達しない。

［発明の要旨］ 従って、本発明は、プラスチック支持体層と電気泳動用
媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜）とからなる電気泳
動用媒体材料であって、取り扱い性、および湿潤状態で
の電気泳動用媒体層と支持体との間の接着性が優れた電
気泳動用媒体材料を提供することを目的とするものであ
る。

本発明はまた、電気泳動後の染色工程ないし染色処理後
の乾燥工程などにおいても電気泳動用媒体層（ポリアク
リルアミドゲル膜）が支持体から剥離することのない電
気泳動用媒体材料を提供することもその目的とするもの
である。

本発明は、下記の各層が順次積層されてなる三層構造を
含む電気泳動用媒体材料からなるものである： ［Ｉ］　プラスチック支持体層； ［１１セルロ一ス誘導体を含有する接着層；および、 ［１］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下で
架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳
動用媒体層。

本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のように支持体層
と電気泳動用媒体層とをセルロース誘導体を含有する接
着層により接合してなる三層構造を含むものであり、前
述の電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜）の
染色工程における各種の操作によっても、その三層構造
が分離しにくいため、作業上非常に有利となる。さらに
、本発明の電気泳動用媒体材料は、水平に置いた支持体
の上にセルロース誘導体を含有する接着層を形成し、次
いで電気泳動用媒体層をその上に形成する方法によって
も製造することが可能であるため、電気泳動用媒体材料
の量産化にも大きく寄与するものである。

［発明の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料の支持体としては各種のプ
ラスチックシートを用いることができる。このプラスチ
ックシートとしては、任意のプラスチ・ンクから形成し
たものを用いることができる。好ましいプラスチックシ
ートの例としては、親水性ポリマーまたは公知の表面処
理により表面を親水化したポリマー（例、ポリエチレン
テレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボネート
、ポリ塩化ビニル、塩化ビニリデン拳塩化ビニルコポリ
マー、ポリメチルメタアクリレート、ポリエチレン、ポ
リプロピレン、セルロースアセテート類、セルロースア
セテートプロピオネート等）のシート（フィルム、板状
物も含む）等を挙げることができる。なおプラスチック
シートの表面を親水化するための処理としては、紫外線
照射、グロー放電処理、コロナ放電処理、火焔処理、電
子線照射、ケミカルエツチング、電解エツチング等の公
知の方法を適用することができる。

ただし、支持体表面の親木化は必須ではなく。

前述のプラスチックンートをそのまま支持体として用い
ることができる。

本発明において支持体の上にはセルロース誘導体を含有
する接着層が設けられる。セルロース誘導体としては、
ジアセチルセルロース、トリアセチルセルロース、ニト
ロセルロースなどが好ましいが、他のセルロース誘導体
も膜形成性である限り用いることが可能である。これら
のセルロース誘導体は単独で使用しても、併用してもよ
い。また、層形成成分の５０重量％以内である限り他の
高分子物質や添加剤を含むことができる。このような高
分子物質および添加剤の例としては、ゼラチン、デキス
トラン、ポリメチルメタクリレート、ポリアクリルアミ
ド、ポリアクリル酩、ポリビニルアルコール、ｐ−クロ
ロフェノール、レゾルシン、グリセリン、エチレングリ
コール等を挙げることができる。

セルロース誘導体を含有する接着層はセルロース誘導体
を８０重量％以上含むことが望ましく、特に実質的にセ
ルロース誘導体のみからなる層であることが望ましい。

また、この接着層は単一層であっても複合層であっても
よく、複合層の場合には、そのセルロース誘導体を含む
層重外は他の重合体層であってもよい。そのような他の
重合体層の例としては、ゼラチン、ポリメチルメタアク
リレート、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール
、ポリ塩化ビニリデンなどからなる層を挙げることがで
き、これらの重合体層はセルロース誘導体を含む層の下
側に設けることができる。

次に電気泳動用媒体層（以下においてゲル媒体層、ポリ
アクリルアミドゲル膜あるいは単にゲル膜ともいう）に
ついて説明する。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中で両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。また溶媒
または分散媒としては、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。

ポリアクリルアミドゲル膜の製造に用いることができる
アクリルアミド系化合物としては、アクリルアミド、Ｎ
−メチルアクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリルア
ミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド、ジア
セトンアクリルアミド等のアクリルアミドホモログやメ
クリルアミドのようなメクリルアミド系化合物があげら
れ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上を併用
して用いることができる。これらのアクリルアミド系化
合物のうちではアクリルアミドが最も好ましく、またア
クリルアミドと他のアクリルアミド系化合物の一種以上
の併用も好ましい。

架橋剤としてはｒ　ＥＩｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ」
ＩＨＩ、　２゜２２０−２２８等に記載の公知の化合物
（一種または二種以上の組合せ）を用いることができる
。架橋剤の具体例としては、Ｎ、Ｎ’−メチレンビスア
クリルアミド（ＢＩＳ）、Ｎ、Ｎ’−プロピレンビスア
クリルアミド（ＰＢＡ）、ジ（アクリルアミドメチル）
エーテル（またはＮ、Ｎ’−オギシジメチレンアクリル
アミド）；１，２−ジアクリルアミドエチレングリコー
ル；１，３−ジアクリロイルエチレンウレア；エチレン
ジアクリレート（ＥＤＡ）、Ｎ、Ｎ’−ジアリルタータ
ルジアミド　（Ｎ、Ｎ’−ｄｉａｌｌｙｌｔａｒｔａｒ
ｄｉａｍｉｄｅ、　Ｄ　Ａ　Ｔ　Ｄ　）　；Ｎ、Ｎ’−
ビスアクリリルシスタミン（Ｎ、Ｎ’−ｂｉｓａｃｒｙ
ｌｙｌｃｙｓｔａ＋５ｉｎｅ、　Ｂ　Ａ　Ｃ）等の二官
能性化合物があげられる。

架橋剤は、単量体と架橋剤の総重量に対して約２重量％
から約３０重量％、好ましくは約３重量％から約１０重
量％の範囲の量で用いることができる。

ゲル濃度としては、Ｓ、　Ｈｊｅｒｔｅｎ：　ｒ　Ａｒ
ｃｈ、　Ｂｉ。

ｃｈｅｗ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｊ　１　（５ｕｐｐ１．
）、　１４？　（１９８２）に記載の定義に従って表示
して、単量体、架橋剤および水からなるゲル媒体の容積
に対して、単量体と架橋剤の量が約３　ｗ　／　ｖ％か
ら約３０　ｗ　／　ｖ％の範囲で好ましく用いられる。

本発明の電気泳動用媒体材料は、主として蛋白質または
複合蛋白質（たとえば、リボプロティン、糖プロティン
など）の分析に有利に用いられるものであり、電気泳動
用媒体層には、変性剤として陰イオン性界面活性剤を含
有させることができる０分析試料が蛋白質または複合蛋
白質（例えばリポ蛋白質、糖蛋白質など）の場合には陰
イオン界面活性剤を含ませることは好ましいか、または
必須であることが多い。陰イオン界面活性剤をゲル媒体
層に含有させないことがあることは勿論である。たとえ
ば陰イオン界面活性剤を含有しないゲル媒体層は、ＤＮ
Ａフラグメント分析に基づく遺伝病診断あるいは制限酵
素分解を利用したＤＮＡ構造解析などの目的に用いるこ
とができる。

陰イオン界面活性剤を電気泳動用媒体層に含有させるこ
とにより、蛋白質または複合蛋白質の効率的な分離およ
びそれらの分子量測定が可能となる。

陰イオン性界面活性剤の例としてはアルキル硫酸塩が挙
げることができ、特に炭素原子数１０以上の長鎖アルキ
ル基を有するアルキル硫酸塩が好ましく用いられる。塩
を形成する陽イオンとしては、ナトリウムイオン、カリ
ウムイオン、リチウムイオン等のアルカリ金属イオンが
一般的であり、これらのうちではナトリウムイオンが用
いやすい。アルキル硫酸塩のうちではドデシル硫酸塩（
ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等）が好ましく
、なかでもドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が最も好
ましい。ＳＯＳを本発明のゲル媒体層に含有させること
により蛋白質または複合蛋白質の効率的な分離およびそ
れらの分子量測定が可能となる。

変性剤としての陰イオン界面活性剤の含有量はゲル形成
液に対して約０．０５ｗ／ｖ％から約２、Ｏｗ／ｖ％、
好ましくは約０．１ｗ／ｖ％から約１．５ｗ／ｖ％の範
囲である。

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
を含有させることができる。抗酸化剤としては、ポリア
クリルアミドゲル膜に配合しうろことが知られている種
々の化合物を用いることができる。抗酸化剤の具体例と
しては、ジチオスレイトール、２−メルカプトエタノー
ルを挙げることができる。

またポリアクリルアミドゲル膜には、場合によって水溶
性ポリマーが添加される。水溶性ポリマーとしては、付
加重合型または縮重合型の水溶性ポリマーを用いること
ができる。付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリ
ビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリ
ルアミド等の非イオン性水溶性ポリマーが挙げられる。

また縮重合型ポリマーの具体例としては、ポリエチレン
グリコール、ポリプロピレングリコール等の非イオン性
水溶性ポリアルキレンゲリコールが挙げられる。これら
の水溶性ポリマーのうちでは、ポリアクリルアミドとポ
リエチレングリコールが好ましい。

水溶性ポリマーの分子量は約１万から約１００万の範囲
のものが好ましい。水溶性ポリマーは単量体と架橋剤の
合計重量に対して、約２重量％から約１００重量％の範
囲、そして好ましくは約５重量％から約５０重量％の範
囲で用いられる。

水溶性ボリア−の添加によりポリアクリルアミドゲル膜
が可塑性を有するようになり、裁断加工時に壊れること
が−なくなり、またゲル膜は乾燥時にも可塑性を有する
ようになり、もろさが改良され壊れにくくなるとの利点
がある。また、水溶性ポリマーの分子量および添加量を
選択することにより、ゲル膜の粘度をコントロールする
こともできる。ポリアクリルアミドゲル膜は、さらにア
ガロースを含有することが好ましい、アガロースとして
は任意のものを使用することができ、低電気浸透性、中
電気浸透性、高電気浸透性アガロースのいずれをも用い
ることができる。用いることができるアガロースの例と
しては、特開昭５５−５７３０号、特開昭５５−１１０
９４６号、特表昭’５７−５０２０９８号等の各公報に
開示のアガロース等がある。アガロースは、単量体と架
橋剤を含む水性ゲルの容積に対して約０　、２　ｗ　／
　ｖ％から約２　Ｗ　／　Ｖ％、好ましくは約０．３ｗ
／ｖ％から約１−２ｗ／ｖ％の割合で用いられる。

ポリアクリルアミドゲル膜が７ガロースを含有する場合
には、ゲル形成用溶液の温度を変化させることにより適
当な液粘度にコントロールすることが可能となるため、
その流動性を止めることができ、またゲル膜を成形する
操作において成形しやすくなるとの利点がある。

ゲル媒体層にはｐＨ緩衝剤を含有させるこ−ともできる
。Ｉｌ衝剤としては、電気泳動分析される試料に応じて
、ｐＨ２，５から１０．Ｏの範囲内のｐＨ値に緩衝でき
る公知の緩衝剤から適宜選択して用いることができる。

用いうる緩衝剤としては、日本化学全編「化学便覧　基
礎編」（東京、丸首■１θ８８年発行）１３１２−１３
２０ページ；青水、水弁編「最新電気泳動法」　（東京
、床用書店１．１９７３年発行３２Ｇ−３２２ページ；
　ｒ　Ｄａｔａ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｃｈｅ＋５ｉｃａｌ　
Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ　（Ｒ，Ｍ。

Ｃ０ロａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、ｉｉ、　第　２　版、
　０！デｏｒｄ　ａｔ　ｔｈｅＣｌａｒｅｎｄａｎ　Ｐ
ｒｅｓｓ、　１１１８９年発行）　４７Ｂ−５０８ペー
ジ；　ｒ　Ｂｉｏｃｈｅ＋ｗｉｓｔｒｙ　Ｊ　５．４８
？　（Ｉｎ２）、ｒ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　１０４．３００−３１０（１９８
０）等に記載の緩衝剤が挙げられる。

緩衝剤の例としては、バルビタールを含む緩衝剤、トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴｒｉＳ）を含
む一緩衝剤、燐酸塩を含む緩衝剤、ホウ酸塩を含む緩衝
剤、酢酸または酢酸塩を含む緩衝剤、クエン酸またはク
エン酸塩を含む緩衝剤、乳酸または乳酸塩を含む緩衝剤
、グリシンを含む緩衝剤、Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキ
シエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、Ｎ−２−ヒドロ
キシエチルピペラジン−Ｎ゛−２−ヒドロキシプロパン
−３−スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）またはその塩、Ｎ−
２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパン
スルホン酸（ＥＰＰＳ）またはその塩、Ｎ−［トリス（
ヒドロキシメチル）］−］３−アミノプロパンスルホン
酸ＴＡＰＳ）またはその塩等をおよび、これらのいずれ
かと必要により組合せられる酸、アルカリ、または塩等
を挙げることができる。好ましい緩衝剤の具体例として
は、燐酸二水素カリウム−燐酸水素二ナトリウム、Ｔｒ
ｉｓ・ホウ酸ナトリウム、Ｔｒｉｓ・ホウ酸ナトリウム
・ＥＤＴＡ２Ｎ　ａ塩、Ｔｒｔｓ・クエン酸、パルビタ
ールナトリウム等酢酸ナトリウム、パルビタールナトリ
ウム・塩酸、バルビタール・パルビタールナトリウム、
酢酸・酢酸ナトリウム、乳酸Φ乳酸ナトリウム、クエン
酸−燐酸水素二ナトリウム、ビシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、
ＨＥＰＰＳＯ，ＨＥＰＰＳＯナトリウム塩、ＥＰＰＳ、
ＥＰＰＳナトリウム塩、ＴＡＰＳ、ＴＡＰＳナトリウム
塩等を挙げることができる。

本発明の電気泳動用媒体材料における電気泳動用媒体層
（ポリアクリルアミドゲルＭ）は、上記のようにアクリ
ルアミドに代表される単量体、二官能性のアリル（ａｌ
ｌｙｌ　）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水
溶性ポリマー、およびアガロースを、実質的に均一な水
溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合させて得
られるものであり、単量体と架橋剤から形成された三次
元架橋重合体に水溶性ポリで−とアガロースが実質的に
分散されて、後二者のポリマー鎖が三次元架橋重合体と
からみあっている構造を有すると推定される。

上記のラジカル架橋重合反応は分子状酸素の不存在下で
過酸化物の存在および／または紫外線照射等公知の方法
により発生させることができる。

さらに、この架橋重合反応は加熱または紫外線照射によ
り加薫することもできる。

ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ　Ｅｌｅｃｔｒ。

ｐｈｏｒｅｓｉｓＪ　１８８１．２．２１３−２１８．
同１１１Ｂ１．２．２２０−２２８；青水、水弁編「最
新電気泳動法Ｊ、（１９７３年発行）等に記載の公知の
低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜選択して用いる
ことができる。好ましいラジカル重合開始剤の具体例と
しては、β−ジメチルアミノプロピオニトリル（ＤＭＡ
　ＰＮ）・ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物、Ｎ、
Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（Ｔ
ＥＭＥＤ）　・ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物、
ＴＥＭＥＤ・リボフラビン混合物、ＴＥＭＥＤ・リボフ
ラビン・過酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ等が挙
げられる。ラジカル重合開始剤の含有量は、単量体と架
橋剤の合計重量に対して約０．３重量％から約５重量％
、そして好ましくは約０．５重量％から約３重量％の範
囲である。

ゲル媒体層は、平滑表面を有する支持体の上に設けられ
た前述の接着層の上にゲル形成液を公知の方法により塗
布して設けたのち、ゲル形成液を架橋重合させることに
より、層状に成形することができる。

ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
ゲル形成液の上を更にカバーフィルム、シートまたは厳
などの被覆材料でおおうことができる。この目的に使用
されるカバーフィルム、シート、または板としては前記
支持体と同様な素材からなるものを用いることができる
。この被覆材料の厚さは３００ｐｍ以下であり、実用的
に好ましい範囲としては約４７ｚｍ〜約２００ｇｍ、特
に好ましい範囲としては約４ｐｍ〜約１００ｇｍである
。

なお、ポリアクリルアミドゲル膜には、湿潤剤としてグ
リセリン、エチレングリコール等のポリオール化合物を
含有させることもできる。ポリオール化合物の含有量は
、ゲル膜の容積に対して約５　ｗ　／　ｖ％から約４０
　ｗ　／　ｖ％の範囲から選ばれる。これらのうちでは
グリセリンが特に好ましい。湿潤剤を配合することによ
りゲル膜の保存時の極端な水分の蒸発による乾燥を防ぐ
ことが可能となり、また極端な乾燥に起因するもろさの
発生を防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲルｎりの物・性が改
善されるとの利点がある。

本発明の電気泳動用媒体材料における電気泳動用媒体層
（ポリアクリルアミドゲル膜）は支持体との接着性が高
い（接着力が大きい）ため、通常の工程においては電気
泳動用媒体層と支持体とは常に一体として処理すること
ができる。従って、本発明の電気泳動用媒体材料を用い
ることによって、特に蛋白質または複合蛋白質の電気泳
動操作において従来必要とされていた複雑な操作工程の
省略が可能になり、また支持体−Ｆに電気泳動用媒体層
（ポリアクリルアミドゲル膜）をのせたままで、電気泳
動操作および染色操作を実施することが可能となる。

次に本発明の実施例を示す。

［実施例１］ 紫外線照射処理により表面を親水性にした厚さ１８０　
ｐ−ｍのホリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）シート
（支持体）上に約０．５１Ｌｍの厚み（固形分）になる
ように第１表記載のセルロース誘導体をア七トンに溶解
して得た塗布液を塗布し、約１１０℃で乾燥してセルロ
ース誘導体接着層を形成した。

第１表　接着層形成用塗布液の組成 試料　セルロース誘導体　塗布液濃度 番号　（ｇ／１００ｍ１溶剤） ｌ　ニトロセルロース　５ｇ ２　ジアセチルセルロース　５ｇ ３゛　ニトロセルロース　２．５ｇ ジアセチルセルロース　２．５ｇ まず、ＰＥＴシート（支持体）と接着層との間の接着性
をクロスカット法により評価した。その結果、試料１〜
３（本発明に従う試料）は接着性が良好であった。

支持体上に設けられた各接着層の上に、アクリルアミド
９，５ｇ、ＢＩＳｏ、５ｇ、リン酸水素二ナトリウム・
十二水場３．５８ｇ、リン酸二水素ナトリウム９二水塩
０．３３ｇ、および５Ｏ３０，１０ｇを含有する１００
ｍＭの溶液に重合開始剤としてベルオクソニ硫醜アンモ
ニウム（５重量％）１．３ｍ文、ＴＥＭＥＤ３３ｐ文を
加えたものを０．５ｍｍの厚みで成形し、ポリアクリル
アミドゲル膜を形成させた。

また別にセルロース誘導体接着層を設けなかった以外は
同様にしてＰＥＴシート上にポリアクリルアミドゲル膜
を形成させ比較試料を調製した。

得られたゲル膜を指で押さえ、ゲル膜と支持体間の接着
性を評価した。その結果、試料１〜３（本発明に従う試
料）を接着層としたものは接着性が優れていたが、比較
試料は接着性が劣っていた。

［実施例２］ 実施例１の第１表と同じセルロース誘導体接着層が形成
されたＰＥＴシートを作成し、この接着層の上にアクリ
ルアミド９．５ｇ、ＢＩＳ＜）、５ｇ、アガロース１６
００　（和光紬薬■製）０．３ｇ、ポリアクリルアミド
２，５ｇ、リン酸水素二ナトリウム・−二本塩３．５８
ｇ、リン酸二水素ナトリウム・二本塩０．３３ｇ、およ
び５ＤＳＯ，１０ｇからなる１００ｍＭの溶液に重合開
始剤として過硫酸アンモニウム（５重量％）１．３ｍｊ
Ｌ、ＴＥＭＥＤ３３ａｌを加えたものを０．５ｍｍの厚
みで成形しポリアクリルアミドゲル膜を形成させて三種
類の試料（試料１〜３）を得た。パまた、ＰＥＴシート
の上に直接上記のポリアクリルアミドゲル膜を形成させ
ることにより比較試料も調製した。

このゲル膜を使用して、標準蛋白質を電気泳動にかけた
。次いで、ゲル膜を、０．１％コーマシーブルー（Ｃｏ
ｏｍａｓｓｉｅ　Ｂｌｕｅ）　Ｒ−２５０（Ｇｏｌｏｒ
Ｉｎｄｅｘ　Ｃｏｎ５ｔｉｔｕｔｉｏｎ　Ｎｕｍｂｅｒ
　４２Ｇ６０）に浸漬し、染色を行ない、この染色工程
における支持体とゲル膜との接着状態を観察した。

比較試料では、ゲル膜は染色液につけると同時に支持体
から完全に剥離した。

一方、試料１〜３（本発明に従うもの）においては、ゲ
ル膜はいずれも染色工程において終始支持体上に完全に
接着していた。しかも電気泳動特性にはいずれについて
も問題はなかった。

［実施例３］ 実施例１の第１表と同じセルロース誘導体接着層が形成
されたＰＥＴシート上に実施例２と同様にしてポリアク
リルアミドゲル膜を形成させて三種類の試料（試料１〜
３）を調製した。また、実施例２と同様にして比較試料
も調製した。

このゲル膜を支持体ごと裁断加工したのち、ゲル膜の切
口を観察したところ、比較試料についてはゲル膜の剥離
が一部観察されたのに対して、試料１〜３（本発明）に
ついてはいずれも裁断口の接着性は良好で、支持体ごと
裁断加工できることがわかった。

［実施例４］ 実施−例１の第１表と同じセルロース誘導体接着層が形
成されたＰＥＴシートの上にアクリルアミド４．５６ｇ
、ＢＩＳｏ、２４ｇ、ポリアクリルアミド１．２ｇ、ア
ガロース０．３ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン［ＣＡＳＲｅｇｉｓｔｒｙ　１１ｂ７？−８６−
１］　１　、０８　ｇ、ホウ酸０．５５ｇおよびＥＤＴ
Ａ・２Ｎａ塩９３ｍｇ、グリセリン２０ｇを含有する１
００ｍＭ溶液に重合開始剤として過硫酸アンモニウム（
５ｗｔ％）１．３ｍ文、ＴＥＭＥＤ３３ｐＪｌを加えた
ものを１ｍｍの厚みで塗布し、窒素雰囲気下で重合させ
ポリアクリルアミドゲル膜を形成させた。

大腸菌のプラスミドｐＢＲ−３２２を制限酵素ＡｓｕＩ
で処理し、上述のゲル膜にて電気泳動操作を行ない、エ
チジウム染色によりＤＮＡの分解パターンを調べたとこ
ろ正常な染色パターンを示した。

ゲル膜をカッターナイフを用いて裁断し、サンプル注入
口を形成させた、切口は鋭くカットできた。更に分離さ
れたＤＮＡバンドを高い精度で分取することが出来るこ
ともわかった。

特許出願人　富士写真フィルム株式会社代理人　弁理士
　柳　川　泰　男

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の各層が順次積層されてなる三層構造を含む電
   気泳動用媒体材料： ［Ｉ］　プラスチック支持体層； ［Ｉ［］セルロース誘導体を含有する接着層：および、 ［■］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下で
   架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳
   動用媒体層。 ２゜上記媒体層がさらに水溶性ポリマーおよびアガロー
   スを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   電気泳動用媒体材料。 ３゜上記媒体層がさらに陰イオン界面活性剤からなる変
   性剤を含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項また
   は第２項記載の電気泳動用媒体材料。 ４、上記陰イオン界面活性剤がアルキル硫酸塩であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の電気泳動用
   媒体材料。 ５゜上記陰イオン界面活性剤がドデシル硫酸ナトリウム
   であることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の電
   気泳動用媒体材料。 ６゜上記プラスチック支持体層がポリエチレンテレフタ
   レートからなることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の電気泳動用媒体材料。 ７゜セルロース誘導体を含有する接着層が、実質的にセ
   ルロース誘導体のみからなる層であることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項記載の電気泳動用媒体材料。 ８゜セルロース誘導体が、ジアセチルセルロース、トリ
   アセチルセルロースおよび、ニトロセルロースからなる
   群より選ばれたものであることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項もしくは第７項記載の電気泳動用媒体材料。