JPS60244850A - 電気泳動用媒体材料およびその製造方 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本発明は、電気泳動用媒体材料およびその製造法に関す
るものであり、さらに詳しくは、特にＤＮＡの塩基配列
決定操作に用いるのに適した電気泳動用媒体材料および
その製造法に関するものである。

［発明の背景］ ボストラベル法に基づ＜ＤＮＡやＲＮＡの塩基配列決定
法においては、ポリアクリルアミドゲル膜を用いたスラ
ブ電気泳動操作が必須の操作となっている。特に近年に
おいて遺伝子関連の研究が進むにつれて、ＤＮＡ塩基配
列決定の操作の迅速化が急務となっている。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
単量体を触媒の存在下にてＮ、Ｎ’−メチレンビスアク
リルアミドのような二官能性の架橋剤を用い架橋重合さ
せることにより得られる。

なお、このポリアクリルアミドゲル膜の形成に際して通
常は、尿素あるいはホルムアミドのような変性剤を含有
させる。

上記の重合反応はラジカル架橋重合であり、酸素の影響
により反応が阻害されるため、ポリアクリルアミドゲル
膜は酸素を遮断した状態で作成する必要がある。この理
由から、現在では一般に、ポリアクリルアミドゲル膜は
２枚のガラス板で形成されたセル（一定の空間、たとえ
ば約０．３〜１ｍｍを有する）の中にゲル形成液を注入
させ、酸素を遮断した状態で架橋重合させてゲル膜を形
成させている。

この方法は二枚のガラス板の間でゲル膜を形成するため
に、取り扱い性が悪く、かつゲル膜の量産化が困難であ
るといった大きな欠点を有している。

以上のようにして形成したポリアクリルアミドゲル膜を
用いる電気泳動操作は、たとえば、次のようにして実施
される。

ポリアクリルアミドゲル膜はガラス板に挟んだままの状
態で垂直に立てられ、前電気泳動を行なったのち、ゲル
膜上端部に設けられたサンプルスロットに試料（たとえ
ば、マキサム・ギルバート分解した３２Ｆラベル化ＤＮ
Ａ）を一定量注入し、次いで電気泳動を行なう。そして
一定時間（例、約６時間〜１２時間）の電気泳動を行な
った後、片面のガラス板を注意深く除去し、その露出面
をポリ塩化ビニリデンフィルムなどの合成樹脂製フィル
ムでゲル膜を覆い、これを用いてオートラジオグラフィ
ー処理を行なう。

すなわち、ポリアクリルアミドゲル膜を被覆しているフ
ィルムの上にＸ線フィルム、増感スクリーンを順次のせ
て、低温（たとえば、−８０℃）で一定時間（たとえば
、約１０〜２０時間）露光を行なう、そして露光終了後
、Ｘ線フィルムを現像し、ＤＮＡの分離泳動パターンを
読みとることからなるオートラジオグラフィー処理によ
り、ＤＮＡの塩基配列を決定することができる。

オートラジオグラフィー処理は以上のように長時間を必
要、とするため、その迅速化が望まれ、更に読みとりの
高分解能化も望まれている。

従来のアクリルアミドゲル膜を用いた電気泳動媒体材料
は上記のようにガラス板を用いるために取り扱い性に問
題があり、しばしばガラスを割ったりして実験を失敗す
ることがある。更に、オートラジオグラフィーに際し、
上記のように片面のガラスを除く必要があり、この時に
ゲル膜を破損したりする事もあり、この操作は非常に熟
練を必要とする。したがって、この様な欠点を改良した
取り扱い性の良好なポリアクリルアミドゲル膜の開発が
熱望されている。

［発明の要旨］ 本発明の目的は、ガラス板の代りにプラスチックフィル
ム（あるいはシート）を支持体として用い、かつ支持体
と電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜）との
間の接着性が向上した電気泳動媒体材料およびその製造
法を提供することにある。

本発明は、下記の各層が順次積層されてなる三層構造を
含む電気泳動用媒体材料からなるものである： ［Ｉ］　プラスチック支持体層； ［ＩＩ］多官能性不飽和架橋剤からなる接着層；および
、 ［ｎ［］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下
で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで、
変性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化
合物を含む電気泳動用媒体層。

上記の電気泳動用媒体材料は、プラスチック支持体の上
に多官能性不飽和架橋剤を含む中間層を設けたのち、該
中間層の上にてアクリルアミド系化合物と架橋剤とを変
性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化合
物と水との存在下で架橋重合してポリアクリルアミド系
水性ゲル電気泳動用媒体層を形成する方法により製造す
ることができる。

本発明の電気泳動用媒体材料は、上記のように支持体層
と電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミドゲル膜）とを
多官能性不飽和架橋剤から形成された接着層により接合
してなる三層構造を含むものであり、前述の電気泳動後
の電気泳動用媒体層の乾燥工程における各種の操作によ
ってもその三層構造が分離しにくいため、電気泳動用媒
体層の破損が発生することは殆どなく、従って濾紙など
の補助支持具を使用する必要がないとの利点がある。

さらに、本発明の電気泳動用媒体材料は、水平に置いた
支持体の上にを多官能性不飽和架橋剤を含む層を形成し
、次いで電気泳動用媒体層をその上に形成する方法によ
っても製造することが可能であるため、電気泳動用媒体
材料の量産化にも大きく寄与するものである。

［発明の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラスチック
シート（あるいはフィルム）を用いることが好ましい。

このプラスチック製シートとしては、任意のプラスチッ
クから形成したものを用いることができる。好ましいプ
ラスチックシートの例としては、親木性ポリマーまたは
公知の表面処理により表面を親水化したポリマー（例、
ポリエチレンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリ
カルボネート、ポリ塩化ビニル、塩化ビニリデン会塩化
ビニルコポリマー、ポリメチルメタアクリレート、ポリ
エチレン、ポリプロピレン、セルロースアセテート類、
セルロースアセテートプロピオネート等）のフィルム、
板またはシート等の成形物をあげることができる。特に
ポリエチレンテレフタフタレートから形成されたシート
を用いることが好ましい。

これらのポリマー成形物の表面を親水化するための処理
のためには、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電
処理、火焔処理、電子線照射、ケミカルエツチング、電
解エツチング等の公知の方法を適用することができる。

支持体は一般に厚さが、約５０＃Ｌｍ〜約５００終ｍ、
好ましくは約７０給ｍ〜約３００１Ｌｍのものが用いら
れる。

本発明において、支持体の上には多官能性不飽和架橋剤
（以下においては、単に多官能性架橋剤ともいう）、も
しくは多官能性架橋剤を含む組成物からなる接着層が形
成される。

接着層形成のために使用可能な多官能性架橋剤の例とし
ては、ｒＥＩｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　Ｊ　１９８
１，２゜２１３−２２８、「架橋剤ハンドブックＪ　１
９８１．山王、金子１ａｐ５Ｂ２〜５８１（大成社）な
どに記載の公知の化合物（一種または二種以上の組合せ
）を挙げることができる。多官能性架橋剤の具体例とし
ては、Ｎ、Ｎ’−メチレンヒスアクリルアミド（ＢＩＳ
）、Ｎ、Ｎ“−プロピレンビスアクリルアミド（ＰＢＡ
）、ジ（アクリルアミドジメチル）エーテル（ＤＡＥ）
、１．２−ジアクリルアミドエチレングリコール（ＤＥ
Ｇ）；エチレンウレアビスアクリルアミド（ＥＵＢ）；
エチレンジアクリレート　（ＥＤＡ）；Ｎ、Ｎ’−ジア
リルタータルジアミド（ＤＡＴＤ）；Ｎ、Ｎ’−ビスア
クリリルシスタミン、ジビニルベンゼン、２，２−ビス
（４−［アクリロイルポリ（オキシエチレン）］フェニ
ル）プロパン；アリルメタクリレート、ベンタンジオー
ルジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレ
ート、ヘキサンジオールアクリレート、テトラメチロー
ルメタンテトラアクリレート、オリゴエステルアクリレ
ート、１，４−ブタンジオールジアクリレート、トリエ
チレングリコールジメタクリレート、ポリプロピレング
リコニルジメタクリレート、トリメチロールプロパント
リメタクリレート、トリアリルシアヌレート、ジアリル
フタレート、１，３．５−）リアクリロイルへキサヒド
ロ−５−）リアジン、１．４−ジアクリロイルピペラジ
ン等を挙げることができる。

前述のように、接着剤層を形成する多官能性架橋剤は単
独で用いてもよく、あるいは他の化合物と混合した組成
物の状態にて用いてもよい。多官能性架橋剤と併用する
ことのできる化合物としては、該多官能性架橋剤と実質
的に反応するものでない限り特に限定はないが、たとえ
ば、ポリ塩化ビニリデン、ジアセチルセルロース、ニト
ロセルロース、ポリビニルアルコール、ポリメタクリル
酸メチル、ポリアクリルアミド、ヒドロキシプロピルセ
ルロース等の高分子化合物等を挙げることができる。

なお、多官能性架橋剤と他の化合物とからなる組成物よ
り接着層を形成する場合には、その組成物は□少なくと
も１０重量％の多官能性架橋剤を含む必要がある。

上記の接着層は、多官能性架橋剤もしくは多官能性架橋
剤を含む組成物の溶液（塗布液）を支持体の丑に塗布し
乾燥したのち、その上にてポリアクリルアミド系水性ゲ
ル電気泳動用媒体層を形成する方法により形成すること
ができる。なお、上記の塗布液は適当な溶媒を用いて行
なうことができる。たとえば、多官能性架橋剤等が水溶
性である場合には、溶媒として水を用いることができ、
また疎水性で水不溶性である場合には有機溶媒、または
有機−溶媒を主成分とする有機溶媒・水混合溶媒を用い
ることができる。

用いることができる有機溶媒の例としては、アセトン、
メチルエチルケトンなどのケトン類；メタノール、エト
ノールなどのアルコール［；Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド；ジメチルスルホキシド；ジ
メチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類などを挙
げることができる。

乾燥後の接着層の厚さは約０．０５ｐｍから約３延ｍ、
好ましくは約ｏ、ｉ用ｍから約２＃Ｌｍの範囲とする。

次に電気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒体層、ポ
リアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲル膜ともいう）
について説明する。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中で両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることができる。本明細書においては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて単に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。

ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることができる
アクリルアミド系化合物としては、”アクリルアミド、
Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリル
アミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド、ジ
アセトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物や
メタクリルアミドの様なメタクリルアミド系化合物が挙
げられ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以上を
併用して用いることができる。これらのアクリルアミド
系化合物のうちではアクリルアミドが最も好ましく、ま
たアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物、メタ
クリルアミド系化合物の一種以上の併用も好ましい。

架橋剤としてはｒ　ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＪ
　１９８１．　Ｌ２１３−２２８等に記載の公知の化合
物（一種または二種以上の組合せ）を用いることができ
る。架橋剤の具体例としては、Ｎ、Ｎ’−メチレンビス
アクリルアミド（ＢＩＳ）、Ｎ、Ｎ’−プロピレンビス
アクリルアミド（ＰＢＡ）　；ジ（アクリルアミドジメ
チル）エーテル（ＤＡＥ）、１．２−ジアクリルアミド
エチレングリコール（ＤＥＧ）’ｉエチレンウレアビス
アクリルアミド（ＥＵＢ）、エチレンジアクリレート（
ＥＤＡ）、Ｎ、Ｎ’−ジアリルタータルジアミド（Ｎ、
Ｎ’−ｄｉａｌ１７１ｔａｒｔａｒｄｉａｍｉｄｅ　：
　ＤＡＴＤ）　；およびＮ、Ｎ’−ビスアクリリルシス
タミン（Ｎ、Ｎ’−ｂｉｓａｃｒｙｌｙｌｃｙｓｔａｍ
ｉｎｅ。

ＢＡＣ）、１．４−ジアクリロイルピペラジン等の二官
能性化合物が挙げられる。− 架橋剤の量は、単量体と架橋剤の総重量に対して約０．
．５ｗｔ％から約３０ｗｔ％、好ましくは約１ｗｔ％か
ら約１０ｗｔ％の範囲で用いることができる。

ゲル濃度としては、Ｓ、　Ｈｊｅｒｔｅｎ：　ｒ　Ａｒ
ｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｊ　１　（５ｕ
ｐｐ１．　）、　１４７（１９８２）に記載の定義に従
って表示して、単量体、架橋剤および水からなるゲル膜
の容積、に対して、単量体と架橋剤の量が約３　ｗ　／
　ｖ％から約３０ｗ’／ｖ％の範囲で好ましく用いられ
る。

ポリアクリルアミドゲル膜に含有させる変性剤としては
、少なくとも１個のカルバモイル基を持つ化合物を挙げ
ることができ、その具体例としては、尿素、ホルムアミ
ド等が挙げられる。これらのうちで尿素が特に好ましく
用いられる。変性剤の量は単量体と架橋剤とを含む水性
ゲルの容積に対し、約４０　ｗ　ｔ　／　ｖ％から約６
０　ｗ　ｔ　／　ｖ％の範囲で用いられる。尿素を用い
る場合には、単量体と架橋剤とを含む水性ゲル１文に対
し約６華ル（約３６０ｇ）から飽和溶解量まで、好まし
くは約７モル（約４２０ｇ）から飽和溶解量までの範囲
で用いることができる。

ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることができる。

水溶性ポリマーとしては、付加重合型または縮重合型の
水溶性ポリマーを用いることができる。

付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド等
の非イオン性水溶性ポリマーが挙げられる。縮重合型ポ
リマーの具体例としてポリエチレングリコール、ポリプ
ロピレングリコ−′ル等の非イオン性水溶性ポリアルキ
レングリコールが挙げられる゛。水溶性ポリマーの分子
量は、約１万から約ｌＯＯ万の範囲のものが好ましい。

これらの水溶性ポリマーのうちでは、ポリエチレングリ
コール、ポリアクリルアミドが特に好ましい。

水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計重量に対して
約２ｗｔ％から約１００ｗｔ％の範囲、好ましくは約５
ｗｔ％から約５０ｗｔ％の範囲で用いられる。水溶性ポ
リマーを添加することにより、ポリアクリルアミドゲル
膜は可塑性を有するようになるため、裁断加工時に壊れ
ることがなくなり、またゲル膜は乾燥時にも可塑性を有
するようになり、もろさが改良され壊れにくくなるとの
利点がある。また、水溶性ポリマーの分子量および添加
量を選択することにより、ゲル膜の粘度をコントロール
することもできる。

ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロースを含有させる
ことができる。アガロースは公知の７ガロースであれば
特に制限はなく、低電気浸透性、中電気浸透性、高電気
浸透性アガロースのいずれをも用いることができる。用
いることのできるアガロースの例としては特開昭５５−
５７３０号、特開昭５５−１１０９４６号、特表昭５７
−５０２０９８号等の公報に開示されているアガロース
等がある。

アガロースの添加量は、単量体と架橋剤とを含むゲル組
成液の容積に対して約０　、２　ｗ　／　ｖ％から約２
　ｗ　／　ｖ％、好ましくは約０．３ｗ／ｖ％から約１
　、２　Ｗ　／　Ｖ％の割合で用いられる。ゲル膜に７
ガロースを添加することにより、ゲル形成用溶液温度を
変化させることにより、適当な溶液粘度にコントロール
することが可能となり、その流動性を止めることができ
、またゲル膜を成形する時には成形しやすくなるとの利
点がある。

ポリアクリルアミドゲル膜にはｐＨ４１衝剤を含有させ
ることができる。緩衝剤としては、ＰＨ８，０から１０
．０、好マシくはｐＨ８，０から９．０の範囲内のｐＨ
値に緩衝できる緩衝剤であれば、いずれをも用いること
ができる。用いうる緩衝剤としては、日本化学会ｌａｒ
化学便覧　基礎編」（東京、丸首１！１１１８６８年発
行）　１３１２−１３２０頁；ｒＤａｔａ　ｆｏｒ　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ｊ　（Ｒ，
Ｍ、Ｃ；。

Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａ１編　第２版、　０ｘｆｏｒｄ
　ａｔ　ｔｈｅ　Ｃ１ａｒｅｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、１
８６９年発行）　４７ｆｔ−５０８ページ；ｒ　Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｊ　、　５４Ｂ？（１９［ｉ８）
　；ｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅ＋５ｉｓｔ
ｒｙ　ｊ　１０４３００−３１０（１９８０）等の刊行
物に記載の緩衝剤があげられる。そして、その具体例と
してはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒ
ｉｓ）　［ＣＡＳ　Ｒｅｇｉｓｔｒｙ　Ｎ。

７？−８Ｅｌ−１］　、　Ｎ　、　Ｎ−ビス（２−ヒド
ロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）　、　Ｎ　−
２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキ
シプロパン−３−スルホン酸のＮａ塩またはに塩等、Ｎ
−２−とドロキシエチルピペラジン−Ｎ゛−３−プロパ
ンスルホン酸のＮａ塩またはに塩等、Ｎ−［トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホ
ン酸のＮａ塩またはに塩および、これらのいずれかと必
要により組合せられる酸、アルカリまたは塩等をあげる
ことができる。

特に好ましい緩衝剤の例としては７ｒｉｓ、ホウ酸およ
びＥＤＴＡ−２Ｎａ塩の組合せ（ｐＨ８，３）がある。

本発明においてポリアクリルアミドゲル膜はアクリルア
ミドに代表される単量体、二官能性のアリル（ａｌｌｙ
ｌ、　）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水溶
性ポリマー、およびアガロースを実質的に均一に溶解さ
せた水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合さ
せて得られるものであ、す、単量体と架橋剤から形成さ
れた三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガロースが
実質的に分散されて、後二者のポリマー鎖が三次元架橋
重合体とからみあっている構造を有すると推定され、こ
の構造が特徴をなすゲル媒体である。

上記のラジカル架橋重合反応は、分１子状酸素の不存在
下で過酸化物の存在および／または紫外線照射等の公知
の方法により発生させるこ゛とができる。この反応を加
熱および紫外線照射により加速することもできる。

ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ　Ｅｌｅｃｔｒ。

ｐｈｏｒｅｓｉｓ　Ｊ　１８Ｂ１．２．２１３−２１８
．同１９８１．　？。

２２０−２２８　；青水、永井編「最新電気泳動法」（
１９７３年発行）等に記載の公知の低温ラジカル重合開
始剤のうちから適宜選択して用いることができる。好ま
しいラジカル重合開始剤の具体例としては、β−ジメチ
ルアミノプロピオニトリル（ＤＭＡＰＮ）−ペルオクソ
ニ硫酸アンモニウム混合物、Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テト
ラメチルエチレンジアミン（Ｔ　Ｅ　ＭＥ　Ｄ）−ペル
オクソニ硫酸アンモニウム混合物、ＴＥＭＥＤ−リボフ
ラビン混合物、ＴＥＭＥＤ−リボフラビン−過酸化水素
混合物と紫外線照射の組合せ等が挙げられる。ラジカル
重合開始剤の含有量は、単量体と架橋剤の合計重量に対
して約０．３重量％から約５重量％、そして好ましくは
約０．５重量％から約３重量％の範囲である。

ゲル媒体層は、平滑表面を有する支持体の上に設けられ
た前述の多官能性不飽和架橋剤を含む層の上にゲル形成
液を公知の方法により塗布して設けた後゛、ゲル形成液
を架橋重合させることにより、層状に成形することがで
きる。

ゲル形成液を支持体の表面で架橋重合させる場合には、
ゲル形成液の上をさらにカバーフィルム、シートまたは
板などの被覆材料でおおうことができる。この目的に使
用されるカバーフィルム、シート、または板としては前
記支持体と同様な素材からなるものを用゛いることがで
きる。この被覆材料の厚さは３００　ｐｍ以下であり、
実用的に好ましい範囲としては約４ｐｍ〜約２００ｐｍ
、特に好ましい範囲としては約４ｐｍ〜約１００終ｍで
ある。

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応じて抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることができる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうることが知られている種々
の化合物を用いることができる。抗酸化・剤の具体例と
してはジチオスレイトール、２−メルカプトエタノール
を挙げることができる。

その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもできる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約５ｗ／ｖ％
から約４０　ｗ　／　ｖ％の範囲から選ばれる。ポリオ
ール化合物のうちではグリセリンが特に好ましい。湿潤
剤を配合することによりゲル膜の保存時の極端な水分の
蒸発による乾燥を防ぐことが可能となり、また極端な乾
燥に起因するもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル膜
の物性が改善されるとの利点がある。

本発明の電気泳動用ル媒体材料−は、前述の諸文献等に
記載の公知の方法に従って、水平型および垂直型平板電
気泳動法、ディスク電気泳動泳動法等のいずれにも用い
ることができる。

［実施例１］ グロー放電処理により表面を親水性にしたポリエチレン
テレフタレート（ＰＥＴ）シート（支持体）上に第１表
記載の多官能性架橋剤の溶液（塗布液）を塗布（塗布量
１０ｍ文／ｍ’）Ｌ、約１１０°０で乾燥して接着層を
形成した。

第１表　接着層形成用塗布液の組成 試料　多官能性　塗布液濃度 番号　架橋剤　（ｇ／１００ｍ１溶剤）Ｉ　ＢＩＳ　Ｉ
ｇ（メタノール） ２　ＴＡＴ　Ｉｇ（メタノール） 註）ＢＩＳ：Ｎ、Ｎ”−メチレンビスアクリルアミド ＴＡＴ：１，３．５−）リアクリロイルへキサヒドロ−
５−トリアジン 支持体上に設けられた各接着層の上に、アクリルアミド
１１．８７ｇ、ＢＩ３６３０ｍｇ、尿素４２ｇ、トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタン［ＣＡＳ　Ｒｅｇｉ
ｓｔｒｙ　Ｎｏ　７７−８８−１　］　１　、０８ｇ、
−ホウ酸０．５５ｇ、およびＥＤＴＡ・２Ｎａ填９３ｍ
ｇを含有する１００ｍＭの溶液に重合開始剤としてベル
オクソニ硫酸アンモニウム（５重量％）１．３ｍ見、Ｔ
ＥＭＥＴ：）３３ｐ、ｌを加えたものを０．５ｍｍの厚
みで成形し、ポリアクリルアミドゲル膜を形成させた。

なお、別に上記接着層を設けなかった以外は同様にして
ＰＥＴシート上にポリアクリルアミドゲル膜を形成させ
て比較試料ｌを調製した。また、塗布液としてポリ塩化
ビニリデンの１　ｇ／ｌ　Ｏ０ｍＭアセトン溶液を用い
た以外は同様にしてＰＥＴシート上にポリアクリルアミ
ドゲル膜を形成させて比較試料２を調製した。

得られたゲル膜を指でおさえ、ゲル膜と支持体間の接着
性を評価した。その結果、試料ｌ、２（本発明に従う試
料）を接着層としたものは、接着性が優れていることが
確認された。これに対して比較試料ｌおよび比較試料２
は殆ど接着性を示さなかった。

［実施例２］ 比較試料３を、塗布液としてポリ塩化ビニリデン５　ｇ
　７１００　ｍ　ｌアセトン溶液を用いた以外は実施例
１の比較試料２と同様にして調製した。

また、塗布液として、ポリ塩化ビニリデン５ｇ十Ｎ、Ｎ
’−メチレンビスアクリルアミド（ＢＩＳ）Ｉｇ／ｌｏ
ｏｍｕアセトン溶液を用いた以外は実施例１の試料１．
２と同様にして試料３を調製した。

比較試料３は通常の状態では接着性を示していたが、こ
れを水中に浸漬した場合にＰＥＴシート（支持体）、と
ポリアクリルアミドゲル膜とが分離してしまった。一方
、試料３は通常の状態のみならず、これを水中に浸漬し
た場合でも充分な接着（接合）性を示し、支持体とゲル
膜との分離は発生しなかった。

［実施例３〕 実施例１および２と同様にして、ＢＩＳ（Ｉｇ／　１０
０　ｍ　ｌメタノール溶液）、ＴＡＴ　（１ｇ／１００
ｍＪ２メタノール溶液）、およびポリ塩化ビニリデン十
ＢＩＳ　（５ｇ＋１ｇ／１００ｍＪ１アセトン溶液）を
それぞれＰＥＴシートに塗布、乾燥させて、接着層付Ｐ
ＥＴシート１〜３を調製した。

ＰＥＴシートの接着層の上にアクリルアミド１１．８７
ｇ、ＢＩＳ６３０ｍｇ、アガロース（低電気浸透性、ゲ
ル化温度３６℃）０．３ｇ、ポリアクリルアミド２．５
ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１．０８
ｇ、ホウ酸０゜５５ｇおよびＥＤＴＡ１１２Ｎａ塩９３
ｍｇからなる１００ｍ１の溶液に重合開始剤としてベル
オクソニ′ｌ＆酸アンモニウム（５重量％）１．３ｍＡ
、ＴＥＭＥＤ　３３　ｇｌを加えたものを０．５ｍｍの
厚みで成形し、ポリアクリルアミドゲル膜を形成させて
三種類の試料（試料１〜３）を得た。

また、ＰＥＴシートの上に直接上記のポリアクリルアミ
ドゲル膜を形成させることにより比較試料も調製した。

このゲル膜を使用して、３２Ｐ−ＤＮＡをマキサム・ギ
ルバート分解した試料について電気泳動にかけ、ＤＮＡ
塩基配列決定の実験を行なった。電気泳動後にゲル膜を
、脱尿素とＤＮＡ固定のために、１０％酢酸水溶液中に
１時間浸漬した。このゲル膜を乾燥し、次いでオートラ
ジオグラシイ−処理を常法にしたがって行なった。

１０％酢酸水溶液中にゲル膜を浸漬した時の支持体とゲ
ル膜の接着状態を観察した。

比較試料のゲル膜は支持体から完全に剥離した。

一方、試料１〜３（本発明に従う試料）の多官能性架橋
剤接着層の上に形成されたゲル膜は、いずれも支持体上
に完全に接着（接合）していた。

更にゲル膜を乾燥させた後、それと支持体との間の接着
状態を観察したところ、これらの試料のゲル膜はいずれ
も支持体によく接着（接合）していた。またオートラジ
オグラフィー処理した後も、接着性に問題はなく良好な
結果を示した。

［実施例４］ 実施例３と同様にしてＰＥＴシート上にＢＩＳ接着層、
ＴＣＴ接着層、およびポリ塩化ビニリデン＋ＢＩＳ接着
層を形成させ、その上に同様にポリアクリルアミドゲル
膜を形成させて三種類の試料（試料１〜３）を調製した
。また、実施例３と同様にして比較試料も調製した。

このゲル膜を支持体ごと裁断加工したのち、ゲル膜の切
ｉを観察したところ、比較試料についてはゲル膜の剥離
が一部観察されたのに対して、試Ｍｌ〜３（本発明）に
ついてはいずれも裁断口の接着性は良好で、支持体ごと
裁断加工できることがわかった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の各層が順次積層されてなる三層構造を含む電
   気泳動用媒体材料： ［１］　プラスチック支持体層； 抄妻ガ千 ［１１多官能性不飽和架橋剤からなる接着層；および、 ［１１１］アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在
   下で架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルで
   、変性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をもつ
   化合物を含む電気泳動用媒体層。 ２゜上記媒体層がさらに水溶性ポリマーおよびアガロー
   スを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   電気泳動用媒体材料。 ３゜１記変性剤が尿素またはホルムアミドである特許請
   求の範囲第１項または第２項記載の電気泳動用媒体材料
   。 ４、支持体層がプラスチックシートからなることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項もしくは第２項記載の電気
   泳動用媒体材料。 ５、プラスチックシートがポリエチレンテレフタレート
   からなることを特徴とする特許請求の範囲第４項記載の
   電気泳動用媒体材料。 ６、多官能性不飽和架橋剤からなる接着層が、実質的に
   多官能性不飽和架橋剤のみから形成された接着層である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動
   用媒体材料。 ７゜多官能性不飽和架橋剤が、Ｎ、Ｎ’−メチレンビス
   アクリルアミドおよび１，３．５−１リアクリロイルへ
   キサヒドロ−８−トリアジンからなる群より選ばれたも
   のであることを特徴とする特許請求の範囲第１項もしく
   は第６項記載の電気泳動用媒体材料。 ８゜プラスチック支持体の上に多官能性不飽和架橋剤を
   含む中間層を設けたのち、該中間層の上にてアクリルア
   ミド系化合物と架橋剤とを変性剤として少なくとも１個
   のカルバモイル基をもつ化合物と水との存在下で架橋重
   合してポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳動用媒体層
   を形成することを特徴とする電気泳動用媒体材料の製造
   法。 ９゜上記媒体層がさらに水溶性ポリマーおよびアガロー
   スを含むことを特徴とする特許請求の範囲第８項記載の
   電気泳動用媒体材料の製造法。 ｌＯ０上記変性剤が尿素またはホルムアミドであること
   を特徴とする第８項記載の電気泳動用媒体材料の製造法
   。 １１゜多官能性不飽和架橋剤が、Ｎ、Ｎ’−メチレンビ
   スアクリルアミドおよび１，３．５−トリアクリロイル
   へキサヒドロ−５−トリアジンからなる群より選ばれた
   ものであることを特徴とする特許請求の範囲第８項もし
   くは第９項記載の電気泳動用媒体材料の製造法。