JPS62247241A - 電気泳動用媒体材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分野］ 本：５１］は、電気泳動用媒体材料に関するものであり
、さらに詳しくは、特にＤＮＡの１′！！基配列決定操
作に用いるのに適した電気泳動用媒体材料に関するもの
である。

［発明の背景］ 化学分解法（Ｍａｘ３ａ−Ｇｉｌｂｃｒｔ法等）、ジデ
オキシ法等による核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）の塩基配列決
定法においては、電気泳動用媒体層としてポリアクリル
アミドゲル膜を用いたスラブ電気泳動操作か必須の操作
となっている。特に近年において遺伝イー関連の研究か
進むにつれて、ＤＮＡ塩基配列決定の操作の迅速化が急
務となっている。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミドのような
Ｑｉ　量体を触媒の存在下にてＮ、Ｎ”−メチレンビス
アクリルアミドのような二官濠性の架橋剤を用い架橋重
合させることにより得られる。

なお、ＤＮＡ１ｉ！基配列決定用のポリアクリルアミド
ゲル膜の形成に際して通常は、尿素あるいはホルムアミ
ドのような少なくとも１個のカルバモイル基をもつ化合
物変性剤を含有させる。

上記の東金反応はラジカル架橋重合であり、酸素の影響
により反応か阻害されるため、ポリアクリルアミドゲル
膜は酸素をｇ断した状態て調製する必要がある。この理
由から、現在ては一般に、ポリアクリルアミドゲル膜は
２枚のガラス板で形成されたセル（一定の空間、たとえ
ば約０．３〜１ｍｍ厚の空間を有するもの）の中にゲル
形成液を注入し、酸素を遮断した状態で架橋重合させて
ゲル膜を形成させている。しかし、この方法は二枚のガ
ラス板の間でゲル膜を形成するために、取り扱い性か悪
く、かつゲル膜の量産化か困難であるといった大きな欠
点を有している。

以上のようにして形成したポリアクリルアミドゲル膜を
電気泳動媒体として用いる電気泳動操作は、たとえば、
次のようにして実施される。

サンプルスロットか上端部に設けられたポリアクリルア
ミドゲル膜をガラス板に挟んだままの状態で垂直に配置
し、まず前電気泳動操作を行なったのち、サンプルスロ
ット中に試料（マキサム・ギルバート分解したコ２Ｐラ
ベル化ＤＮＡなど）を＝一定量注入し、次いで電気泳動
操作を行なう。そして一定時間（例、約６時間〜１２時
間）の電気泳動を行なった後１片面のガラス板を注意深
く除去し、その露出面をポリ塩化ビニリデンフィルムな
どの合１＆樹脂製フィルムでゲル膜を覆い、この状態に
てオートラジオグラフィー処理を行なう。

このオートラジオグラフィー処理は、ポリアクリルアミ
ドゲル膜を覆っているフィルムの上にＸ線フィルム、増
感スクリーンを順次のせて、低温（たとえば、−８０°
Ｃ）で一定時間（たとえば、約ｉｏ〜２０時間）′Ａ光
を行ない、そして露光終了後、Ｘ線フィルムを現像し、
ＤＮＡの分離泳動パターンを画像化する処理である。こ
のようにして得られたＤＮＡの分離泳動パターンに基づ
いてＤＮＡの塩基配列を決定することができる。

オートラジオグラフィー処理は以上のように長時間を必
要とするため、その迅速化が望まれ、更に読みとりの高
分解能化も望まれている。

従来のアクリルアミドゲル膜を用いた電気泳動媒体材料
は上記のようにガラス板を用いるために取り扱い性に問
題かあり、しばしばガラスを割ったりして実験を失敗す
ることがある。更に、オートラジオクラフィーに際し、
上記のように片面のガラスを除く必要があり、この時に
ゲル膜を破損したりする事もあり、この操作は非常に熟
練を必要とする。したがって、この様な欠点を改良した
取り扱い性の良好なポリアクリルアミドゲル膜の開発が
既にすすめられ、支持体としてポリエチレンテレフタレ
ートなどのプラスチック材料からなる支持体を用い、そ
の上にポリアクリルアミドゲル膜を形成した電気泳動媒
体材料が既に提案されている。

上記のプラスチック材料製の支持体を用いた電気泳動媒
体材料は、その製造か容易で、取り扱い性も良いとの利
点を有する。そして、ＤＮＡ分解物などの電気泳動も、
その電気泳動媒体材料を用いて行なうことかできるが１
本発明者か詳細に検討したところによると、支持体とし
てガラス板を用いて製造した電気泳動媒体材料に比較す
ると、その解像力か若干低下する傾向があることかわか
った。

［発明の要旨］ 本発明の目的は、新規なプラスチック製フィルム（ある
いはシート）を支持体として用いたポリアクリルアミド
ゲル膜系電気泳動媒体材料を提供することにある。

本発明の目的は、特にプラスチック製フィルム（あるい
はシート）を支持体として用いたポリアクリルアミドゲ
ル膜系゛−［気泳動媒体材料であって、支持体としてガ
ラス板を用いて製造した電気泳動媒体材料と同笠の解像
力を示す電気泳動媒体材料を提供することにある。

未発ＩＩは、アクリルアミド系化合物と架橋剤とか木の
存在下て架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲ
ルからなり、変性剤として少なくとも１個のカルバモイ
ル基をもつ化合物を含む電気泳動用媒体層およびプラス
チック材料製支持体を含む電気泳動用媒体材料であって
、該電気泳動用媒体層と支持体層との間に１．Ｖ、Ｃｒ
、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｇａ、Ｉｎ、ＧｅおよびＳｎからなる群
より選ばれる金属元素の酸化物もしくは硫化物からなる
酸素透過防止層ｘ層が備えられていることを特徴とする
電気泳動用媒体材料からなるものである。

［発明の効果］ 本発明の電気泳動媒体材料１は、上記のようにプラスチ
ック製支持体からの電気泳動用体層への酸素の透過、拡
散を低ドさせることのできる酸素透過防止層層が設けら
れているため、電気泳動用媒体層（ポリアクリルアミド
ゲル膜）の形成のための架橋を合反応が非常に円滑に進
行し、高度に均質な電気泳動用媒体層が形成される。従
って、そのようなｍ素透過防止層を備えていないプラス
チック支持体上に形成された電気泳動用媒体層に比較し
て、本発明の電気泳動用媒体材料の電気泳動用媒体層は
、更に高い解像性を示す。

また、本発明の蒸着層の形成によって、スマイリング効
果により中央泳動列と両側部泳動列との間で発生しゃす
い泳動速度の差を低減することができるとの効果もある
。

［発ＩＪ１の詳細な記述］ 本発明の電気泳動用媒体材料の支持体は、プラスチック
材料から形成されるシート状￥ｋ（フィルム状物も含む
）である。このプラスチック製シートとしては、任意の
プラスチック材料から形成したものを用いることがてき
る。好ましいプラスチック材料の例としては、ポリエチ
レンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボネ
ート、ポリ塩化ビニル、ポリメチルメタクリレート、ポ
リエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、セルロー
スアセテート、およびセルロースアセテートプロピオネ
ートをあげることができる。

プラスチック材料製支持体は公知の表面活性化処理によ
り表面を親水化したものであることが好ましい。表面親
木化処理のためには紫外線照射。

グロー放電処理、コロナ放電処理、火焔処理、電子線照
射、ケミカルエツチング、電解エツチング等の公知の方
法を適用することができる。

支持体は、一般に厚さが約５０〜５００４ｍ、好ましく
は約７０〜３００ｐｍのものが用いられる。

これまでに提案されているプラスチック製支持体を用い
た電気泳動用媒体においては、プラスチック製支持体」
二に、直接あるいは接着剤層を介してポリアクリルアミ
ドゲル形成用塗布液が塗布され、次いで窒素雰囲気下に
て架橋重合反応が行なわれている。

本発明の電気泳動用媒体においては、プラスチック製支
持体上にＶ、Ｃｒ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｇｅおよ
びＳｎからなる群より選ばれる金属元素の酸化物もしく
は硫化物からなる酸素透過防止層が設けられる。本発明
の酸素透過防止層はＩ　ｎ２０３・５ｎ０２からなるこ
とが好ましい。

上記の金属酸化物をプラスチック支持体表面に蒸着する
方法としては、たとえば電子ビーム法、スパッタリング
法を利用することができる。これらの蒸着法は、既に一
般的に利用されている技術を適用できるので、ここで特
に触れることはしない。

なお、蒸着層には必要に応じてビニルシランのようなシ
ラン系カップリング剤を用いて処理（たとえば、蒸着層
の４二にカップリンク剤を塗Ｉｔｊする処理）してもよ
い。

酸素透過防止層は０．０５〜３μｍの層厚を右すること
か好ましく、特に０．１〜２ｇｍの範囲の層厚を有する
ことが好ましい。

また、酸素透過量Ｉに層は１０１３〜１０３Ω／口の範
囲の表面抵抗（／ｉを有することが望ましい。

酸素透過量止層と上記支持体とからなる積層体の酸素透
過！ｌ：：は１Ｏｃｃ／ｒｒ＋′・ａｔ麿・ｄａｙ以下
であることか好ましく、さらに７　ｃ　ｃ　／ｒｒｆ　
−ａＬｍ　・ｄａｙ以丁であることが特に好ましい。

なお、上記の酸素透過量は、酸素透ｉＭ量の測定方法と
して一般的に利用されているｍｏｃｏｎ法による測定値
である。

Ｌ記の酸素透過防止層の上に直接、あるいは接着剤層な
どの他の中間層を介して電気泳動用媒体層か設けられる
。

次に電気泳動用媒体層（以下において、ゲル媒体層、ポ
リアクリルアミドゲル１模あるいは単にゲル膜ともいう
）について説明する。

ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド系化合物
と架橋剤とを、水溶液または水分散液として水中に溶解
または分散させてゲル形成液を調製したのち、液中て両
者を架橋重合させて架橋重合した水性ゲル膜として形成
することにより得ることかできる。本川細どにおいては
、特にことわらない限り、（水中に）溶解と（水中に）
分散の両者を含めて単に（水中に）溶解といい、水溶液
と水分散液の両者を含めて学に水溶液という。また、溶
媒または分散媒として、所望により加えられる有機溶媒
と水の混合物をも包含する。

ポリアクリルアミドゲル膜の形成に用いることができる
アクリルアミド系化合物の例としては、アクリルアミド
、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリ
ルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド、
ジアセトンアクリルアミド等のアクリルアミド系化合物
やメタクリルアミド等のメタクリルアミド系化合物か挙
げられ、これらの化合物は単独で、あるいは二種以とを
併用して用いることかできる。これらのアクリルアミド
系化合物のうちてはアクリルアミドが最も好ましく、ま
たアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物、メタ
クリルアミド系化合物の一種以七の併用も好ましい。

架橋剤としてはｒ　Ｆ、ＩｃｃＬｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
Ｊ　１９８１．２゜２２０−２２８７に記載の公知の化
合物（一種または二種以上の組合せ）を用いることがで
きる。架橋剤の具体例としては、Ｎ、Ｎ’　−メチレン
ビスアクリルアミド（ＢＩＳ）；Ｎ、Ｎ’　−プロピレ
ンビスアクリルアミド（ＰＢＡ）、ジ（アクリルアミド
ジメチル）エーテル（ＤＡＥ）、ｌ、２−ジアクリルア
ミドエチレングリコール（ＤＥＧ）；エチレンウレアビ
スアクリルアミド（ＥＵＢ）；エチレンジアクリレート
（ＥＤＡ）；Ｎ、Ｎ’　−ジアリルタータルジアミド（
Ｎ、Ｎ’−ｄｉａｌｌｙｌＬａｒＬａｒｄｉａｍ聞ｅ　
　：ＤＡＴＤ）；およびＮ、Ｎ’　−ヒ′スアクリリル
シスタミン（Ｎ　、Ｎ’−ｂｉｓａｃｒｙｌ　ｙｌｃｙ
ｓＬａｓｉｎｅ　。

ＢＡＣ）１の二官能性化合物が挙げられる。

架橋剤の量は、巾賃体と架橋剤の総重量に対して約２〜
３０　ｗ　ｔ％、好ましくは約３〜ｌ　Ｏｗ　ｔ％の範
囲である。

ゲル濃度としては、　Ｓ、　１ｌｊｅｒｔｃｎ：　　ｒ
　　Ａｒｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｓ、　８ｉｏｐｈｙｓ、　Ｊ　ｌ　（５ｕ
ｐｐ１．　）、　＋４７（１９６２）に記載の定義に従
って表示して、弔峨体、架橋剤および水からなるゲル膜
の容積に対して、弔驕体と架橋剤の量が約３　ｗ　／　
ｖ％から約３０ｗ／’ｖ％の範囲で好ましく用いられる
。

ポリアクリルアミドゲル膜に含有させる変性剤は、少な
くとも１個のカルバモイル基を持つ化合物であり、その
具体例としては、尿素、ホルムアミド等が挙げられる。

これらのうちで尿素か特に好ましく用いられる。変性剤
は、単量体と架橋剤とを含む水性ゲルの容積に対して、
約４０〜６０ｗ　ｔ　／　ｖ％の範囲の雀で用いられる
。尿素な用いる場合には、単量体と架橋剤とを含む水性
ゲル１文に対し約６モル（約３６０ｇ）から飽和溶解：
１１まで、好ましくは約７モル（約４２０ｇ）から飽和
溶解量までの範囲の量で用いることかできる。

ポリアクリルアミドゲル膜には水溶性ポリマーを含有さ
せることかできる。

水溶性ポリマーとしては、付加東金型または縮重合型の
水溶性ポリマーを用いることかできる。

付加重合型ポリマーの具体例としては、ポリビニルアル
コール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド笠
の非イオン性水溶性ポリマーか挙げられる。縮重合型ポ
リマーの具体例としてポリエチレングリコール、ポリプ
ロピレングリコール笠の非イオン性水溶性ポリアルキレ
ングリコールが挙げられる。水溶性ポリマーの分子量は
、約１万から約１００万の範囲のものか好ましい。これ
らの水溶性ポリマーのうちては、ポリエチレングリコー
ル、ポリアクリルアミドか特に好ましい。

水溶性ポリマーは、単量体と架橋剤の合計重量に対して
約２ｗｔ％から約１００ｗｔ％の範囲、好ましくは約５
　ｗ　ｔ％から約５０ｗｔ％の範囲のｊＩｉて用いられ
る。水溶性ポリマーを添加することにより、ポリアクリ
ルアミドゲル膜はｔｉＴ塑性を有するようになるため、
裁断加工時に壊れることがなくなり、またゲル膜は乾燥
時にも可塑性を有するようになり、もろさか改良され、
壊れにくくなるとの利点かある。また、水溶性ポリマー
の分子＋、Ｈおよび添加■を選択することにより、ゲル
膜の粘度をコントロールすることもてきる。

ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロ一スを含有させる
ことができる。アガロースは公知のアガロースであれば
特に制限はなく、低電気浸透性、中電気侵透性、高電気
浸透性アガロースのいずれをも用いることかできる。用
いることのできるアガロースの例としては特開昭５５−
５７３０号。

特開昭５５−１１０９４６号、特表昭５７−５０２０９
８号等の公報に開示されているアガロース等がある。

アガロースは、ｎＡＮ体と架橋剤とを含むゲル組成液の
容積に対して約０．２ｗ／ｖ％から約２　ｗ　／　ｖ％
、好ましくは約０−３ｗ／ｖ％から約１．２ｗ／ｖ％の
割合にて添加される。ゲル膜にアガロースを添加するこ
とにより、ゲル形成用溶液温度を変化させることにより
、適当な溶液粘度にコントロールすることが可渣となり
、その流動性を止めることかてき、またゲル膜を成形す
る時には成形しやすくなるとの利点かある。

ポリアクリルアミドゲル膜にはＰ）（緩衝剤を含有させ
ることかできる。緩衝剤としては、ｐＨ８，０か６１０
．Ｏ１好ましくにｔｐＨ８，ｏから９６０の範囲内のｐ
ｉ−を値に緩衝できる緩衝剤であれば、いずれをも用い
ることができる。用いうる緩衝剤としては、日本化学会
編「化学便覧　基礎編１（東京、大片■１９６６年発行
）　１３１２−１：１２０頁；ｒ　Ｄａｔａ　ｔａｒ　
Ｉｌｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｊ　（
ＲＪ、Ｃ。

Ｄａｗｓｏｎ　　ａｔ　ａｔ編　第２版、　０ｘｆｏｒ
ｄ　ａｔ　Ｌｈｅ　Ｃ１ａｒｃｎｄｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、
１９６９年発行）　４７６−５０８ベージ：ｒ　Ｉｌｉ
ｏｃｈｗｍｉｓｔｒｙ　Ｊ　、　５，４６７（＋９６６
）　　；ｒ　八ｎａｌｙｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔ、ｒｙ　　Ｊ　　＋０４．：１００−：１１０（
１９８０）等の刊行物に記載の緩衝剤があげられる。そ
して、その具体例としてはトリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン（Ｔｒｉｓ）　　［（ＡＳ　ＲｃｇｉｓＬ
ｒｙ　Ｎ。

７７−８６−１１　、Ｎ　、　Ｎ−ビス（２−ヒドロキ
シエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｃ）　、　Ｎ　−２−
ヒトロキシエチルビベラジンーＮ’−２−ヒドロキシプ
ロパン−３−スルホン酸のＮａ塩またはにｋｍ’３、Ｎ
−２−ヒトロキシエチルピベラシン−Ｎ’　−３−プロ
パンスルホン酸のＮａ塩またはにｔｉｌｔ；、Ｎ−［ト
リス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパ
ンスルホン酸のＮａ１′１！またはに塩および′、これ
らのいずれかと必要により組合せられる酸、アルカリま
たは塩等をあげることかできる。

特に好ましい緩衝剤の例としてはＴｒｉｓ、ホウ酸およ
びＥＤＴＡ　・２Ｎａ塩の組合せ（ｐＨ８，３）がある
。

本発明においてポリアクリルアミドゲル膜はアクリルア
ミドに代表される単量体、二官渣性のアワル（ａｌｌｙ
ｌ　）化合物またはアクリル化合物（架橋剤）、水溶性
ポリマー、およびアガロースを実質的に均一に溶解させ
た水溶液中で単量体と架橋剤とをラジカル架橋重合させ
て得られるものであり、単量体と架橋剤から形成された
三次元架橋重合体に水溶性ポリマーとアガロースが実質
的に分散されて、後二者のポリマー釦か三次元架橋重合
体とからみあっている構造を有すると推定される。

上記のラジカル架橋を合反応は、分子状酸素の不存在Ｆ
て過酸化物の存在および／または紫外線照射笠の公知の
方υ：により発生させることかてきる。この反応を加熱
および紫外線照射により加速することもてきる。

ラジカル架橋重合用触媒としては、ｒ　　ＥＩｅｃＬｒ
。

ｐｈｏｒｃｓｉｓＪ　１９８１．２．２１：ｌ−２１９
，同＋９８１．２．２２０−２２８　；　ｉ＋＋’木、
水井編「最新電気泳動法Ｊ　　（１９７：１年発行）Ｔ
に記載の公知の低温ラジカル重合開始剤のうちから適宜
選択して用いることができる。

好ましいラジカル重合開始剤の具体例としては、β−ジ
メチルアミノプロピオニトリル（ＤＭＡＰＮ）−ベルオ
クソニ硫酸アンモニウム混合物。

Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　−テトラメチルエチレンシアミ
ン（ＴＥＭＥＤ）−ベルオクソニ硫酸アンモニウム混合
物、ＴＥＭＥＤ−リボフラどン混合物、ＴＥＭＥＤ−リ
ボフラビン−過酸化水素混合物と紫外線照射の組合せ等
が挙げられる。ラジカル重合開始剤の含有量は、単量体
と架橋剤の合計重量に対して約０．３〜５重呈％、そし
て好ましくは約０．５〜３屯ｊ１ニ一％の範囲である。

ゲル媒体層は、支持体りの前記の＃素透過防ｔＬ層のに
に直接あるいは接着剤層などの他の中間層を介してＥ記
のゲル形成液を公知の方法により塗布して設けたのち、
ゲル形成液を架橋重合させることにより形成することか
てきる。

ゲル形成液を支持体の表面て架橋重合させる場合には、
ゲル形成液塗布層の上をさらにカバーフィルム、シート
または板などの被覆材料でおおうことができる。この目
的に使用されるカバーフィルム、シート、または板とし
ては前記支持体と同様な素材からなり、更に支持体同様
、酸素透過ｆ七を低下させているものを用いることがで
きる。この被覆材料の厚さは３００ＪＬｍ以下てあり、
実用的に好ましい厚さの範囲は約４〜２００ｐＬｍてあ
り、特に好ましい範囲は約４μｍ〜１００ｇｍである。

ポリアクリルアミドゲル膜には、必要に応して抗酸化剤
などの他の添加剤を含有させることかできる。抗酸化剤
としては、ゲル膜に配合しうろことか知られている種々
の化合物を用いることかできる。抗酸化剤の具体例とし
てはジチオスレイトール、２−メルカプトエタノールを
挙げることかできる。

その他の添加剤としては湿潤剤があり、ポリアクリルア
ミドゲル膜にはグリセリン、エチレングリコール等のポ
リオール化合物を含有させることもできる。ポリオール
化合物の含有量は、ゲル膜の容積に対して約５〜約４０
　ｗ　／　ｖ％の範囲から選ばれる。ポリオール化合物
のうちではグリセリンか特に好ましい。湿潤剤を配合す
ることによりゲル膜の保存時の極端な水分の蒸発による
乾燥を防ぐことが可俺となり、また極端な乾燥に起因す
るもろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル１模の物性か
改９されるとの利点かある。

本発明の電気泳動用媒体材料は、前述の諸文献等に記載
の公知の方法に従って、水平型および垂直型平板電気泳
動法、ディスク電気泳動泳動法等のいずれにも用いるこ
とができる。

以丁に本発明の実施例を記載するか、これらは本発明の
範囲を限定するものではない。

〔実施例１〕 紫外線照射処理により表面を親木性にした厚さ１８０＃
Ｌｍの無色透明ポリエチレンテレフタレートシート（支
持体）上に、１ｎ２０３のベレットとＳｎＯ２のベレ・
ントとを用いて層厚か約０．５ＪＬｍのＩｎ２Ｏ３−５
ｎ０２　（１０：　１）混合蒸着層を形成した。この層
厚は水晶振動式膜厚ヘッドモニターを用いて測定した。

Ｌ記の蒸着層が付設された支持体の酸素透過係数は５ｃ
ｃ／ｌｒｆ′−ａｔｅ　−ｄａｙてあった。

支持体上に設けられた蒸着層の上に、アクリルアミド７
．６０ｇ、ＢＩＳ４００ｍｇ、リボフラビン（０，２５
ｗＬ％水溶液）１．５ｍＪ１、尿素４２ｇ、トリス（ヒ
ドロキシメチル）アミノメタン［ＣＡ　Ｓ　　ｌｌｅｇ
ｉｓｔｒｙ　Ｎｏ、　７７−８６−１　］　１　、２１
　ｇ、ホウ酸０．６５４ｇおよびＥＤＴＡ　−２Ｎａ塩
７５ｍｇを含有するｌｏｏｍＪｌの溶液に重合開始剤と
してベルオクソニ硫酸アンモニウム（５ｗｔ％）１．３
ｍ５Ｌ、ＴＥＭＥＤ３３ｇｌを加えたものを０．３ｍｍ
の厚みに塗布成形し、１００ｗ高圧水銀灯をＬＯｃｍの
距離から照射し、１０分間静置しポリアクリルアミドゲ
ル膜を得た。

［比較例１］ ポリエチレンテレフタレートシート（支持体）Ｌに、蒸
着層を設けなかったこと以外は実施例１と同様にして支
持体上にポリアクリルアミドゲル膜を形成した。

なお、１−記の支持体の酸素透過係数は１７ｃｃ／　ｍ
’　−ａｔ、＋＋　・ｄａｙてあった。

［参考例１］ 支持体としてポリエチレンテレフタレートシートの代り
にガラス板を用い、蒸着層を設けなかったこと以外は実
施例１と同様にして支持体上にポリアクリルアミドゲル
膜を形成した。

［電気泳動試験］ 実施例１．比較例１および参考例１で得られたポリアク
リルアミドゲル膜にサンプル注入口を形成し、次いでゲ
ル膜に厚さ６３ｇｍのポリエチレンテレフタレートシー
ト（カバーシート）をかぶせた。

このポリアクリルアミドゲル膜を使用して、ジデオキシ
法により調製された試料を電気泳動にかけ、ＤＮＡ塩基
配列決定の実験を行なった。

すなわち、電気泳動終了後に、ゲル膜に対して一８０°
Ｃてオートラジオグラフィー処理を常法に従って行ない
、得られた泳動パターンの可視画像に基いてＤＮＡ塩基
配列の決２操作を行なった。

実施例１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力（実施例１のゲルＩＵにおける塩基
解読数二２０５、参照例１のゲル膜における塩基解読数
：１９５）を示し、解読が容易であった。一方、比較例
１のゲル膜により得られた。泳動パターンの解像力は、
実施例１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンの解像力に比較して低く、ｔｌ！基解読数も１２
０と低かった。

また、実施例１および参照例１のゲル膜により得られた
泳動パターンのスマイリング効果による中央部泳動列と
両測部泳動列（それぞれ中央部泳動列から８ｃｍｆｉれ
た位置）との泳動距離の差はいずれも約５ｍｍ（スロッ
トから３０ｃｍの位とての測定値）と低い値であったが
、比較例１のゲル膜により得られた泳動パターンのスマ
イリング効果による中央部泳動列と両測部泳動列（それ
ぞれ中央部泳動列から８ｃｍｊｌｊｌれた位置）との泳
動距離の差は約３０ｍｍ（スロットから３０ｃｍの位置
での測定ｆｌｌｌ　）と高かった。

［実施例２］ 支持体りに設ける蒸着層の厚さをＩＪＬｍとして形成し
た以外は実施例１と同様にして蒸着層を有する支持体を
形成した。

ｔｘ記の蒸着層か付設された支持体の酸素透過係数（ま
４　ｃ　ｃ　／ば・ａｔ−・ｄａｙであった。

次いで、Ｌ記支持体、Ｌの蒸着層の上に実施例１と同様
にしてポリアクリルアミドゲル膜を形成した。

［電気泳動試験］ 実施例２、比較例１および参考例１てｆｉＩられたポリ
アクリルアミドゲル膜にサンプル注入口な形成し１次い
でゲル膜に厚さ５０＃Ｌｍのポリエチレンテレフタレー
トシート（カバーシート）をかぶせた。

Ｌ記のポリアクリルアミドゲル膜を使用して、３２Ｐ　
−Ｄ　Ｎ　Ａをマキサム・ギルバート分解した試料を電
気泳動にかけ、ＤＮＡＩ′！！基配列決定の実験を行な
った。

すなわち、電気泳動終了後に、ゲル膜に対して−８０’
（：でオートラジオグラフィー処理を常法に従って行な
い、得られた泳動パターンの可視画像に）＾いてＤＮＡ
塩基配列の決定操作を行なった。

実施例２および参照例１のゲル膜により得られた泳動パ
ターンは高い解像力（実施例１のゲル１悶における塩基
解読数＝７２．参照例１のゲル膜における塩基解読数＝
６９）を示し、解読か容易であった。一方、比較例１の
ゲル膜により得られた泳動パターンの解像力は、実施例
１および参照例１のゲル膜により得られた泳動パターン
の解像力に比較して低く、塩基解読ａも６３と低かった
。

また、実施例１および参照例１のゲル膜により得られた
泳動パターンのスマイリンク効果による中央部泳動列と
両測部泳動列（それぞれ中央部泳動列から８ｃｍｆｉれ
た位置）との泳動距離の差はそれぞれ約５ｍｍ、約８ｍ
ｍ（スロットから３０ｃｍの位置での測定値）と低い値
であったか。

比較例１のゲル膜により得られた泳動パターンのスマイ
リング効果による中央部泳動列と両測部泳動列（それぞ
れ中央部泳動列からａｃｍａれた位置）との泳動距離の
差は約３０ｍｍ（スロ、ントから３０ｃｍの位置での測
定値）と高かった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アクリルアミド系化合物と架橋剤とが水の存在下で
   架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲルからな
   り、変性剤として少なくとも１個のカルバモイル基をも
   つ化合物を含む電気泳動用媒体層およびプラスチック材
   料製支持体を含む電気泳動用媒体材料であって、該電気
   泳動用媒体層と支持体層との間に、Ｖ、Ｃｒ、Ｎｉ、Ｃ
   ｕ、Ｇａ、Ｉｎ、ＧｅおよびＳｎからなる群より選ばれ
   る金属元素の酸化物もしくは硫化物からなる酸素透過防
   止層が備えられていることを特徴とする電気泳動用媒体
   材料。 ２、上記酸素透過防止層が金属酸化物の蒸着層であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳動用
   媒体材料。 ３、上記酸素透過防止層が０．０５〜３μｍの層厚を有
   することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気
   泳動用媒体材料。 ４、上記酸素透過防止層が、Ｉｎ＿２Ｏ＿３・ＳｎＯ＿
   ２からなることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
   の電気泳動用媒体材料。 ５、該酸素透過防止層と支持体とが形成する積層体の酸
   素透過量が１０ｃｃ／ｍ＾２・ａｔｍ・ｄａｙ以下であ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の電気泳
   動用媒体材料。 ６、プラスチック材料製支持体がポリエチレンテレフタ
   レートからなることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の電気泳動用媒体材料 ７、上記電気泳動用媒体層がさらに水溶性ポリマーおよ
   びアガロースを含むことを特徴とする特許請求の範囲第
   １項乃至第６項のいずれかの項記載の電気泳動用媒体材
   料。 ８、上記変性剤が尿素またはホルムアミドであることを
   特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第６項のいずれか
   の項記載の電気泳動用媒体材料。