JPS6166150A - 免疫反応測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は、抗原−抗体反応に基く免疫反応の測定方法に
閏するものである。

（従来技術） 免疫物質、ホルモン、医薬品、免疫調節等生体内微量成
分の測定法として免疫反応の特胃的選択反応を利用した
免疫分析法があり、大別すると酵素や放射性アイソトー
プを標識物質と（）て用いる標識免疫分析法と、抗原・
抗体複合体を直接測定する非標識免疫分析法の２方法が
よく知られている。

前者の標識免疫分析法とじＣはラジオイノ、ノアッセイ
（ＲｒＡ）、酵素免疫分析（ＦＩＡ）、螢光免疫分析（
ＰＴＡ）等がよく知られており、高感度であるがアイソ
１−−ブの取り扱い、廃棄物９ノ！理等の種々の制限が
あり、又測定に長時間を要ηるうえに標識試薬が高価で
あるため検査」ストが高い等の欠点がある。

後者の非標識免疫分析法には免疫電気泳動法、免疫拡散
法、沈降法等があり、簡便な分析法であるが感度、定望
性、再環性の点で精密測定としては不充分である。この
ような免疫分析法に関しては「臨床検査法提要」　（金
井泉原著、金井正光細著、金原出版）や、「臨床検査」
＼１０℃、２２゜Ｎｏ　、５　（１９７８）、第４７１
〜４８７真に詳しく説明されている。

また、［ｌ　ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　、　Ｖ
ｏ　ｐ　、　１２゜Ｎｏ、４　（１９７５）、第３４９
〜３５１頁には、抗体または抗原を表面に担持さＵだ粒
子を抗原または抗体と反応させ、凝集粒子の大ぎさに比
例して減少するブラウン運動の指標となる平均拡散定数
を、レ−Ｉｆ’　＞１１の散乱ソ１１のスベク１ヘル幅
の変化から求めることにＪ５り抗原また（Ｊ１抗陣を定
尾分析する方法が開示されている。この分４Ｊ’１方法
では標識試檗を用いイｆい利点はあるが、粒子のブラウ
ン運動にＪ、るドツプラ効果にＪ、って入０１光のスペ
クＩ〜ルが広がるのを分光泪を用いて検出しているため
、装置が人形で高価と４１゛る欠点があると杖に分光δ
１を１幾械的に駆動する際に誤差が生じ、精度および再
現１（１が悲くイＴす、さらに凝集反応に］）１１間が
かかる欠点がある。Ａ：た、この方法で（Ｊ光のスペク
１〜ル幅から平均拡散定数を求めているだ（〕であり、
情報帛が少ないという欠点もある。

トｉ＋Ｉｉ　シたように従来の免疫分析方法では、高価
ｌｒ　（￥！　識試桑を用いるため分析のランニングコ
ス１へが高価となると共に液体の取扱いおよび処理が面
倒となった（・）、処理時間が良くなる欠点があったり
、高価“で人形り分光泪を必要どするど共に精度や再現
性が特に低１１ｉ！度の反応液では悪く、得られる情報
ｉ４ｊ　４）少／、、にいという欠点があった。

（発明の目的） 本発明の目的は、子連した種々の欠点のうち長い処理時
間と低ｌｌａ度での測定精度の悪化を解消し、短時間か
つ高精度で免疫反応をＪｌ＋定することができる測定方
法を提供しようとするものである。

（発明の概要） 本発明の免疫反応の測定方法は、微粒子を含む抗原−抗
体反応液をセルに収容し、このセルの外部から超音波を
与えて反応液中の微粒子を１辰動させて抗原−抗体反応
を促進させた後、ＴｎＤ−抗体反応を測定するものであ
る。

（実施例） 以下本発明を図面を参照して詳細に説明する。

第１図は本発明の免疫反応測定方法を実施する免疫反応
測定装置の一実施例の構成を示１線図である。本例にお
いては、コヒーレント光を放出する光源として波長６３
２．８置ｍのト１ｅ−Ｎｅガスレーザ１を設ける。コヒ
ーレント光を放射する光源としては、このようなガスレ
ーザの仙に半導体レーザのような固体レーザを用いるこ
ともできる。光源１から！〃射されるシー１Ｊ″光束２
を半透鏡３にＪ、り光束４ど光束５とに分離ηる。一方
の光束４を集光１ノンス（３にＪ：り集光して、透明イ
丁しル７に投Ｑ＝１する。他方の光束５をシリコシフＡ
１−ダイオードより成る＞ｖ、検出器８に入用させ、光
源１の出力光強磨の変動を表ねりモニタ信号に変換する
。

セル７の中に（１１、表面に抗体または抗原を結合した
微粒子９を分散さけた緩衝液と、抗原また（」抗イホを
含む被検液どの混合物である抗原−抗体反応ｃ（ｋを収
容する。したがってセルフ中で抗原−抗体反応が起こり
、微粒子間に相”７７作用が生じたり、微粒子が相７′
７（二ｆ１肴するた砧、ブラウン運動の状態が変化づる
ことになる。このとき、セル７の光検出器が設（ノられ
る側と反対側に超音波振動子１０１を１？ルアど接触覆
るように設け、セルフの壁を介して約２０〜４０Ｋｌｌ
ｚの超音波をセル内の反応液に照ＣＩＪ−４る。そのた
め、セル７内の微粒子９が振動されて抗原および抗体が
出会うＩｉｕ率が高くなり、超？）波を印加１ノイｆい
場合に比べて例えば１Ｏ−９１Ｊ／ｍ℃程１αの低温度
抗原を用いる場合でも、抗原−抗体反応が促進され、短
時間で十分な反応が行イ１われることになる。なお、超
音波振動子１０１が発生する超音波のエネルギーは、あ
まり強すぎるど抗原−抗体反応による結合がこわされる
ため、反応液の振動には十分だが抗原ど抗体の結合をこ
わさない適当な強度に設定する必要がある。また、超音
波の印加は測定時だけ印加しないよう制御しても良いし
、超音波の周波数領域がブラウン運動の周波数と大幅に
異なるため測定中も超音波を加えても測定に悪影響はな
い。一般に、セルは、例えば１０ｎ＋ｌｌ１ｘ　１０ｍ
ｍｘ　１ｍｍと非常に小さいので通常の攪拌を行なうこ
とはできないが、セル外部から超音波を与える攪拌は有
効に行なうことができると共に凝集した粒子には悪影響
を与えイ【いという優れた効果がある。ヒル７中の微粒
子９によって散乱された散乱光を、一対のピンホールを
有する］リメータ１０を経て光電子増倍管より成る光検
出器１１に入射させる。光検出器８の出力モニタ信号は
低雑音増幅器１３を経てデータ処理１置１４に供給する
。また、光検出器１１の出力信号を低雑音増幅器１ＦＭ
；よび低域通過フィルタ１６を軽で一アータ処理装置１
４に供給づる。ア゛−タ処叩）シｉ？４１４に１よＡ／
Ｄ変換部１７．高速−ノーリＴ変換部１８お、Ｉ、び演
紳処理部１９を設置−１，後）４１するＪ、うな信号処
理を行ない、抗原−抗体反応の測定結架を出力覆る。こ
の測定結果（ま表示装置１８に供給して表示号る。

ＩＹシルアらの（１９乱光強度ｔニジ、光検出器８から
の抗原強度モニタ信号の短時間平均値出力にＪ：つて規
格化され、光源から放射される１ノ一ザ光強亀の変！）
）を除去した後、散乱光の強度ゆらぎのパワースペクト
ル密度を求め、これにλ１いてセルフ中での微粒子９の
凝集状態、したがって抗原−抗体反応の進行状態の測定
を行なう。

第２図は第１図に示した〕］コリメータ０の詳ｌＩＩな
構成を示４図である。本例の］リメータ１０は空胴構造
となっており、空胴１０ａは外光の影響を除くために暗
箱４Ｍ造となつＣおり、その内面は反則防止格造となっ
ている。空胴１０ａの前後にはビンボール１０１）お、
」：び１０Ｃを形成する。今、これらピンボール１０１
１および１０ｃの半径をイれぞれａ７おにびａ　ビンホ
ール間の距離を１−１空１１ｉｉ１０ａの内に（Ｗ体の
屈折率を１１．波長をλとするとき、次式（１）を満足
覆るように構成−りる。

本発明では、−］−）ホしたように散乱光の強度Ｉｔら
ぎのパワースペクトル密度を検出Ｊるが、このパワース
ペクトル密１αは、微粒子が波長程葭の距離を拡散して
ゆくことによる干渉成分のゆらき゛による頂ど、散乱体
積への微粒子の出入りによって生ずる粒子数のゆらす゛
による項とから成っている。

この内、干渉による散乱光のゆらぎはスペックルパター
ンの空間的なゆらぎとして観測されるが、これをそのま
ま広い受光面を持った光検出器１１に大剣させると、受
光面の面積に負って空間的な平滑化が行なわれるので、
検出されるゆらぎは小さくなってしまう。そこで上述し
たようなピンホールを有する：１リメータ１０を用いて
光検出器１１の視野を限定覆ることにより、ゆらぎを高
感［９で検出することができるようにｌ≧る。本実施例
で（よ上式（１）を満了さ（↓るには、空胴１０．’ｌ
内の（（％ｊ体（ｊ屈折率ｎ　＝１の空気で１分実用的
である。１なわち、ｒｉｎ　０．３ｎ＋ｎ＋ノｅ’　ン
＊−Ｊ１ｚｌＯｂ　、　１０ｃ　ヲ３０ｃｕ＋＃ｆ　シ
１．−コリメータ１０を用いれば上式（１）は満犀され
ることにイする。

上）本１ノだ実施例においＣは、［？ルアに入ｑ・１す
る光束４の方向と、コリメータ１０の光軸方向とを９０
°とし、入射光束は直接光検出器１１に入（Ｊ　シ！に
いボ七ゲイン法を採用したが、入射光束の〜部を光検出
器１１に大川さ１するヘテロゲイン法を採用することも
できる。ずなわら、本発明においては、第３図に示Ｊよ
うにゼル７への入射光束４と］リメータ１０の光軸との
成す角葭θは任意にとることができる。ここでホモゲイ
ン的に散乱光を検出でる場合１こは、光電子増倍管より
成る光検出器１１の出力信号は、散乱光の電界強度を「
８とするど、その自乗の平均値Ｆ：６　に比例したもの
となり、散乱光と入射光とを（ｊｆわ口て検出するへｉ
−ログイン的検出の場合に（ま、直接の入ｑ１光の電界
強度を［ｅどづると、光検出器１１の出力信号は、（Ｅ
ｏ＋Ｉ−＞　　２−　リ＋　２−一罷十　［二となる。

ここでＦ。（ｊゆらぎがない（もしあったとしても散乱
光のゆらぎに比べて緩つくりしている）ので、光検出器
１１の出力の変動成分は殆んど第２項２　Ｅｏ・［８に
等しい。つまり、散乱光の電界強［グーにほぼ比例した
出力信号が得られることになる。

また、コリメータ１０も−１−述した（ん成に限定され
るものではなく、光検出器１１の視野を１スペツクルパ
ターン以下に制限できるものであれは（Ｔ意の構成とす
ることができる。

上述した装置を用い、光検出器１１の出力信号を低域通
過フィルタ１６を経−（データ処理装置１４へ供給し、
光検出器８からのモニタ信号と共に処理をして散乱光の
強度ゆらぎのパワ−スペクトル密度を求めた結果を次に
説明ηる。ここで定常確立過程×（［）のパワースペク
トル密度Ｓ　（ｒ　）は、次のように表わすことができ
る。

この（２）式をもどに高速フー９■変模を用いてパワー
スペク１〜ル密度の針幹を行なう。すなわち、光検出器
１１からの出ノノイ５号を低９．１１　ｇＪＰ１幅器１
５により、データ処理装置１４にお（づるＡ　、’　ｒ
）変換の量子化レベルを信号の１ｌｆｔ　ｌ＋ｆｆがで
きろだ（ｊ広くおおうＪ、うに増幅し、このｍ子化した
データをマイクロブ１’ｌ　ｔッ１）によって演算ダｌ
理してパワースペクトル密度を求めた。このように１ノ
で求砧たパワースペクトル密度から免疫反応の進行状況
を表示装置２゜ｒ：に！伯的に表示した。

Ｎ’ｒ　’Ｉ図ａ′３よび第５図は、粒径がそ４１ぞれ
０．１８８１１　ｍおよび０．３０５７ｚｍのラテック
スネずｌ子を分散さ１！た液をセルフに収容したときに
得られるパワースペクトル密度を示号ものであり、これ
はローレンツ型パ「７−スペクトル密ｔσを表わすしの
であり、散乱光の強ｍゆらぎのパワースペクトル密度の
内、１浮動里によるものである。これらのパワースペク
トル密度の緩和周波数は微粒子のｌ＋３．径に反比例す
ることがわかる。す＜−ｉわら、散乱）１−の強瘍ゆら
ぎは子連したように微粒子の運動に基く］ヒーレント光
の干渉による成分ど、散乱体積内の粒子数の変動による
成分どの合成されたものどなるが、本実施例では干渉成
分が１［どして検出されており、パワースペクトル密度
の緩和周波数は粒子が光の波長の距離を移動する時間の
逆数となるので、粒径が大きくなると移動面間は長くな
り、緩和周波数が減少することになる。

第６図は横軸に粒径をμｍの単位でとり、縦軸に緩和周
波数をとってそれぞれ対数目盛りで示したものである。

すなわち、粒径０．０９１５μｍの粒子の緩和周波数は
約４００＋１ｚ　、　　０．１８８μｍでは約２００ｔ
ｌｚ　、　　０．３０５μｍでは約１００旧となる。こ
の第６図のグラフから明らかなように、パワースペクト
ル密疾の緩和周波数は粒径に反比例するので、この緩和
周波数の変化から抗原−抗体にＪ：る凝集の有無や凝集
の程度を検出することができる。

第７図および第８図は、粒径０．３μ■のラテックス粒
子を緩衝液中に０．１重量％および０，０９小吊％の濃
度で分散させたときのパワースペクトル密度を示すグラ
フであり、ともにローレンツ型のパワースペクトル密度 る。１−述したように、散乱光の強度ゆらぎは粒子のブ
ラウン運動による干渉Ｍ成分と、１）シ乱体積内の粒子
数の変化による非干渉１／１成分との和になるが、散乱
体積内の粒子数が少イ’ｔ　＜イＴす、干渉性成分が少
なくなって、非干渉性成分と同程度となると、粒子のブ
ラウン運動による散乱光強度変イ］″、以外の成分も検
出してしまい、抗原−抗体反応を精１αよく検出Ｊるこ
とはでさなくイｆる。したがって、粒子の濶１σは、散
乱体積内で゛の入ｆｌ＝１児強度が十分前らねる稈瓜に
但く、がっ干渉ｆ［成分が非゛「渉竹成分にす４：）大
きくなるような範囲に選ぶ心安がある。

第９図は横軸に１ｎＩＩＩ１３中の粒子数をどり、縦軸
が、散乱体のに＋径が一定であれば相当広い粒子濃度に
亘って相対ゆらぎは一定どなる。

第１０図お、１、び第１１図は、直径０　、３　／、７
ｍのう７ツクス粒子の表面に免疫グ［１プリンＧの抗体
を固定した１）のを、王ｒｉｓ　−ＩＩ　Ｃ、ｆ２でＰ
　Ｌｌ　７に調整した緩衝液に分散させたものに、抗原
として１０−’ｏ／ＩＲβおよび１Ｏ−９ｑ／ｍβの濃
度の免疫グロブリンＧを加えた抗原−抗体反応液をセル
に収容し、抗原−抗体反応の開始前と開始後のパワース
ペク１〜ル密度を示すものＣある。本発明ではセルに超
音波を印加しているため、従来の方法に比べて反応に必
要な時間は大巾に短縮できる。第１０図に示す抗原濃度
１０−’ｇ／ｍ℃の場合には、反応前の緩和周波数が約
５０　Ｈ２であるのに対し、反応７分後の緩和周波数が
１０　ｆｉｚに変化している。これに対し、抗原濃度が
１０−９ｇ／ｒｎ　１２の場合には、反応開始前の緩和
周波数は約９５１（ｚで、反応７分後の緩和周波数は約
４０　Ｈ２どなっている。したがって、抗原−抗体反応
前後の緩和周波数の比Ｆを、 と定義し、この値を幾つかの抗原濃度について求めると
第１２図に示ずようになる。すなわち、第１２図におい
て横軸は抗原製電をとり、縦軸は緩和周波数の比Ｆの値
をとって示すものであるが、緩和周波数の比［を求める
ことにより抗原濃度を検出することができる。

一方、第１０図および第１１図におい−Ｃ１抗原−抗体
反応の前後における相対ゆらぎの比（Ｒ）が抗原濃度と
一定の関係を有することもわかる。次にこのことについ
て説明づる。第１図において、光検出器１１によって散
乱光を変換した電気信月を１メ下に示すＪ：うな１八達
ｒＡ数を？′］４る低域通過フィルタに通り。

ここに「。は低域通過フィルタのカットオフ周波数であ
り、緩和周波数ｆｒ、にりも十分低い周波数どする。こ
のとき、低域通過フィルタの出力として得られる電流ｌ
のゆらぎのパリアンスは、（δＩ＞　２　＝−に２＜Ｎ
）　十に２　＜Ｎ＞　２ｆ。、／ｆｒ・・・（４） どなる。ただしＫは定数、〈Ｎ〉は散乱体積中の′平均
粒子数である。したがって、低域通過フィルタの出力電
流の相対ゆらぎとして次式（５）が成立する。

ここでＹは比例定数である１、ここで散乱体積中の粒子
数は十分に大きいとすると、（５）式は次のように書き
直づことができる。

したがって、パワースペクトル密度のグラフから緩和周
波数ｆｒを求めることにより相対ゆらぎを粋出すること
ができる。このとき相対ゆらぎ比Ｒは次式で表わすこと
ができる。

この（７）式により相対ゆらぎ比Ｒを求め、これと抗原
濃度どの関係をグラフにして求めたのが第１３図である
。このグラフより明らかなように、抗原−抗体反応前後
にお【Ｊる相対ゆらぎの比Ｒを求めることにより未知の
抗原濃度を知ることができる。ずなわら、測定に先立っ
て既知の異なる抗原濃度の標１１ｃ　（Ｊンプルについ
て相対ゆらぎ比Ｒを求めて第１３図のように検ｍ線を求
めておぎ、未知の抗原濃度の被検体について相対ゆらぎ
比Ｒを求め、先に求めＩ、：検印線に基いて抗原濃度を
知ることができる。

一７ｊ、（７）式による相対ゆらぎ比Ｒは第１０図およ
び第１１図に示すパワースペクトル密度の低周波帯域に
おＩＪる梢分飴の空化の比としても求めることができる
。すむわｔう、 に基いて相対ゆらぎ比Ｒを求めることができる。

ここで抗原−抗体反応前のパワースペクｉ−ルＰＩ７度
の積分値Ａおよび反応後の積分値Ｂは、ｉｏ−＋−１０
’１１７．０低周波帯域における積分値である。したか
って低域通過フィルタは１０’ｌｌｚ以下の周波数を通
過するものとする。

上述した例では第１０図および第１１図に示すようにパ
ワースペクトル密度の低周波領域における積分値Ａおよ
びＢの、比として相対ゆらぎ比Ｒを求めるようにしたが
、低周波領域における特定の周波数、例えば１０　Ｈｚ
におけるパワースペクトル密度のレベルの比から相対ゆ
らぎ比を求めるようにしてもよい。このように周波数を
特定するときには、高速フーリエ変換器の代りにディジ
タルフィルタを用いることができ、構成が筒中となると
共に処理時間も短くなる。このような場合には超音波に
よる反応の促進効果と相俟って測定時間は著しく短縮さ
れることになる。

粒径が一定の場合にはパワースペクトル密度はローレン
ツ型であり、緩和周波数より大きい周波数においては周
波数の自乗に反比例して減少４る。

ところが、粒径が分布している場合には、ぞれぞれの粒
径にλ・ｊ応した緩和周波数を持っにローレンツ型スペ
クトルを重ね合わせたものが観測されるので高周波部分
にお１“Ｊるパワースペク１ヘル密度は最早や周波数の
自乗に反比例しなくなる。したがってこの部分の形状か
ら逆に反応によって凝集した粒子の粒径分布を知ること
がひきる。このよう（７データは従来は得Ｉうれなかっ
たものであり、抗原−抗体反応の状態を解析する十で有
用２）情報である３゜ 第１４図は本弁明の測定方法を実行する超音波１１に動
子を取り付（プる第１図に示す免疫反応測定装置の　実
施例を示す線図である。本実施例では、ターンテーブル
３０十に複数のキコベツ１〜等よりなる１＝ル３１を載
ｉｄシ、矢印へ方向に間【９つ的に移動して試石分ｉ↑
、試薬分）１等の操作を行なう構成をとっている。例え
ば、ａの位置で一すンｌル分注を、ｌ）の位置で第１回
目の測光を、Ｃの位置で試薬分注を行ノ、Ｈい、適当な
反応時間経過後ｄの位置で第２回目の測光を行ないｅの
位置で洗浄する構成どなっている。このとき、例えば抗
原ど抗体の反応時間は、特に被検体の試料が少量でイバ
濃度の場合非常＃Ｊ長くかかるため、ターンテーブルの
移動速度ひいては測定時間が長くかかっていた。そこで
本発明測定方法ではセル３１内の反応液に対して超音波
を印加して抗原−抗体反応を促進することにより反応時
ｆｉｌｌを短縮させ−Ｃいる。

以下、超音波振動子の取り付（プ方法について説明する
。第１５図は本発明の測定方法を実施する超音波］辰動
子の取り付は方法の　実施例を示す線図である。本実施
例では、恒温槽３３の下部に超音波振動子３４を設け、
常時超音波を恒温槽３３に印加している。恒温槽３３内
の水等の恒温液３５は一般に超音波の良伝導媒体である
ため、ターンテーブル３０上のすべてのセル３１には超
音波が印加されることとなり、本発明を有効に達成でき
る。第１６図および第１７図はそれぞれ本発明の測定方
法を実施する超音波撮動子の取り付は方法の仙の実施例
を示す線図である。第１６図に示す実施例では、ターン
テーブル３０の間けつ移動の停止時にセル３１が存在す
る位置に対応して超音波振動子３４が設けられでいる。

超音波振動子３４は図示しないアクチユエータ等により
、ターンテーブル３０が回転するときにはＩ？ル３１か
ら若Ｔ　１ｉｆｌｌれた場所に、そしてターンテーブル
３０が１を山した場合にはセル３１に接融づ−る場所に
位置づるにう寸イ丁わち両矢印Ｂ方向に移動りるよう制
御されている。ま１ζ、超音波振動子３４は超音波を印
加Ｊる必要があるレル３１にだ【ノ設ければよく、例え
ば第１４図に示す実施例では試薬分注の０点から第２回
目の測光を行なうｄ点の間のセル３１に対応して超音波
振動子３４を設置−ｊればよい。第１７図に示Ｊ−実施
例では、１′！ル３１自身に超音波撮動子３４を一体的
に設（）ている。超音波振動子３４への電源の供給は、
レール状にセル３１の下方に配設した導電性部材３７に
超音波振動子３４の電極である導電↑１１ブラシ３６を
摺動さりことによっＣ行なっている。そのため、例えば
第１４図に示す実施例では試薬分注の０点から第２回目
の測光を行なうｄ点の間のセル３１の下方に、レール状
の導電性部材３７を配設すれば、必要なセル３１だけに
超音波を印加することができる。勿論、この場合には導
電性の恒温液は用いないか、Ｔアバスタイプの恒温槽を
用いる必要がある。

本発明は上述した実施例にのみ限定されるものではなく
、幾多の変形、変更が可能である。例えば、−ト）ホし
た各実施例にお（プる超音波振動子の取り付は方法はあ
くまでその一例を示したもので、有効に超音波をセルに
印加できればどのように取り付けてもよい。また、上述
した実施例ではターンテーブル型の化学分析装置を例に
して説明したが、反応ラインの形状はリニアのものなど
仙の形状のものであってもよい。さらに、上述した実施
例では散乱光の強度ゆらぎのパワースペク１ヘル密度に
基いて抗原−抗体反応を測定するようにしたが、散乱光
の強度１強度ゆらぎのスペクトル幅などに基いて測定す
ることもでき、さらに標識試薬を用いる免疫反応測定に
も適用することができる。

（発明の効果） 以上詳細に説明したところから明らかなように、本発明
の免疫反応の測定方法によれば、超音波によりセル内の
微粒子を運動さけることにより、反応液中の抗原−抗体
反応が促進されるため、被検体の試別が少量で低濃度例
えば１０−９ｇ／Ｉｌ１℃の場含でも測定Ｉｈ間を短縮
できるど共に測定を正確に行なうことができる。

また、散乱光の強度ゆらぎのパワースペクトル密度に塁
いて抗原−抗体反応を測定する上述した実施例の効果と
して、酵素やラジオ−アイソ１−−プのような標識試薬
のような高価で、取扱いの面倒（２試薬を用いる必要が
＜１いので、安価か−）容易に実施づることができる。

さらに、免疫電気泳動法、免疫拡散法、沈降法などの非
標識免疫分析法に比べ精度が高く、再現性が高いので信
頼性の高い測定結東を高精度で得ることができる。さら
にまた、微粒子のブラウン運動に基く散乱光の強度ゆら
ぎを検出覆るものであるから、超微量の被検体で高精度
の測定ができると共に測定時間も短時間となる。また、
平均拡散定数を散乱光のスペクトル幅の変化から求める
ことにより抗原または抗体を定量する方法に比べ分光８
１が不要であるので装置は小形かつ安価となると共に精
度および信頼性の高い測定結采が得られる。さらにまた
、光ゆらぎのパワースペクトル密度に基いて測定を行な
うため、抗原−抗体反応についての多くの有用な情報を
得ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の免疫反応測定方法を実施する免疫反応
測定装置の一実施例の構成を示す線図、第２図は同じく
そのコリメータの詳細な構成を示す線図、 第３図は本発明の免疫反応測定装置の他の実施例の要部
の構成を示す線図、 第４図および第５図はそれぞれ粒径が０．１８８μｍお
よび０，３０５７１ｍの微粒子に対するパワースペク［
−ル密度を示すグラフ、 第６図は粒径と、パワースペクトル密度の緩和周波数と
の関係を示すグラフ、 第７図および第８図はそれぞれ粒子濃度が０．１重陽％
および０．０９重量％のときのパワースペクトル密度を
示すグラフ、 第９図は粒子濃度と緩和周波数との関係を示すグラフ、 第１０図および第１１図はそれぞれ抗原濃度が１０−４
ｇ／ｍ、（ｌおよび１０−９す／ｌｌｌβに対する抗原
−抗体反応前および後のパワースペクトル密度を示すグ
ラフ、 第１２図は抗原濃度と緩和周波数の比との関係を示Ｊグ
ラフ、 第１３図は抗原ｍ麿と相対ゆらぎ比どの関係を示づグラ
フ、 第１４図ＩＪ本発明の測定方法を実行づる超音波振動子
を取り付ける第１図に示づ免疫反応測定装置の一実施例
を示す線図、 第１５図、第１６図、第１７図は本発明の測定方法を実
施りる超音波振動子の取り付（プ方法の一実施例を示す
線図である。 １・・・シー１Ｆ光源　　　２．　４．　５・・・光束
３・・・半透鏡　　　　　６・・・集光レンズト・・セ
ル　　　　　　８・・・光検出器９・・・微粒子　　　
　　１０・・・コリメータ１１・・・光検出器　　　　
１３．１５・・・低雑音増幅器１４・・・データ処理装
量　１６・・・低域通過フィルタ２０・・・表示装置　
　　　１０ａ・・・空朋１０わ、　Ｉｎｃ・・・ピンホ
ール １０１、３４・・・超音波振動子。 特許出願人　　　オリンパス光学工業株式会ネ１■仮数
（Ｈｚ） Ｍンｇ〔数（Ｈ２） 訂径Ｃμ？Ｆ！〕 第１１図 第１２図 抗原温度（ｆ／ｍυ 第１３図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、微粒子を含む抗原−抗体反応液をセルに収容し、こ
   のセルの外部から超音波を与えて反応液中の微粒子を振
   動させて抗原−抗体反応を促進させた後、抗原−抗体反
   応を測定することを特徴とする免疫反応の測定方法。