JPS61115490A - 制限酵素の製造法 - Google Patents
制限酵素の製造法Info
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- JPS61115490A JPS61115490A JP59237242A JP23724284A JPS61115490A JP S61115490 A JPS61115490 A JP S61115490A JP 59237242 A JP59237242 A JP 59237242A JP 23724284 A JP23724284 A JP 23724284A JP S61115490 A JPS61115490 A JP S61115490A
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- JP
- Japan
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- enzyme
- restriction enzyme
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- buffer
- halococcus
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-
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は制限酵素の製造法に関し、更に詳細にはハロコ
ツカス属の細菌の生産する制限酵素の製膜法に關する。
ツカス属の細菌の生産する制限酵素の製膜法に關する。
従来の技術
制限酵素とはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ ）上のある特
定の塩基配列を認識しに重鎖を切断するエンド型ヌクレ
アーゼである０分子遺伝学や生化学等の発達により、Ｄ
ＮＡが遺伝をつかさどる本体であることが明らかになっ
て以来、制限酵素は遺伝病解明のための利用や、遺伝子
操作による遺伝物質の大量生産への利用等現在広（用い
られている有用な酵素である。制限酵素は種々の微生物
より単離されており、その認識する塩基配列、切断様式
により現在までに約１００種類が知られている。
定の塩基配列を認識しに重鎖を切断するエンド型ヌクレ
アーゼである０分子遺伝学や生化学等の発達により、Ｄ
ＮＡが遺伝をつかさどる本体であることが明らかになっ
て以来、制限酵素は遺伝病解明のための利用や、遺伝子
操作による遺伝物質の大量生産への利用等現在広（用い
られている有用な酵素である。制限酵素は種々の微生物
より単離されており、その認識する塩基配列、切断様式
により現在までに約１００種類が知られている。
これまでに
５／−↓ＧＡＴＯ−３’
３’ −０ＴＡＧ↑−、，５／
（式中Ａはアデノシン、０はシチジン、Ｇはグアノシン
、Ｔはチミジンを示す）という塩基配列を認識し、矢印
の位置で切断する制限酵素（以下、本酵素と称する）と
して、モラギセラボビス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｂｏｖ
ｉｓ ） ＡＴＯ（！ ｌ Ｏ９００か生産するＭｂ
ＯＩ〔ヌクレイツク・アシッド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 ）第１１巻、ｒ第１３５
頁、１９８３年）〕が知られている。
、Ｔはチミジンを示す）という塩基配列を認識し、矢印
の位置で切断する制限酵素（以下、本酵素と称する）と
して、モラギセラボビス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｂｏｖ
ｉｓ ） ＡＴＯ（！ ｌ Ｏ９００か生産するＭｂ
ＯＩ〔ヌクレイツク・アシッド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅ
ｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 ）第１１巻、ｒ第１３５
頁、１９８３年）〕が知られている。
発明か解決しようとする間領点
Ｍｂｏ ｌではその生産量が低いこと、またＭｂ。
■の混入があり１除去が困帷であることなど工業化には
問題かある。
問題かある。
本発明の目的はＭｂｏ ｌと同様の塩基配列の認識部位
および切断部位を有する制限酵素の工業的生産に適した
製造法を提供することにある。
および切断部位を有する制限酵素の工業的生産に適した
製造法を提供することにある。
問題点を解決するための手段
本発明を概説すれば、本発明はハロコッカス属に邑し、
下記ヌクレオチド配列の式中矢印の部位で特゛異的に切
断する制限酵素生産能を有する細菌を培養し、得られた
培養物より下記ヌクレオチド配列の式中矢印の部位で特
異的に切断する制限酵素を採取することを特徴とする制
限酵素の製造法に関する。
下記ヌクレオチド配列の式中矢印の部位で特゛異的に切
断する制限酵素生産能を有する細菌を培養し、得られた
培養物より下記ヌクレオチド配列の式中矢印の部位で特
異的に切断する制限酵素を採取することを特徴とする制
限酵素の製造法に関する。
５′−↓ＧＡＴＯ−３’
３’−０ＴＡＧ↑−５１
（式中Ａはアデノシン、Ｏはシチジン、Ｇはグアノシン
ＳＴはチミジンを示す） 本発明者らはＭｂｏ ｌと同様の塩基配列の認識部位お
よび切断部位を有する制限酵素か新たにハロコツカス属
細菌によって生産されること翫かつ該細菌は該制限酵素
以外の制限酵素を生成しないことから精製を容易に行な
うことができることを見出し本発明を完成した。
ＳＴはチミジンを示す） 本発明者らはＭｂｏ ｌと同様の塩基配列の認識部位お
よび切断部位を有する制限酵素か新たにハロコツカス属
細菌によって生産されること翫かつ該細菌は該制限酵素
以外の制限酵素を生成しないことから精製を容易に行な
うことができることを見出し本発明を完成した。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明で使用する微生物はへ四コツカスかに属する本酵
素生産菌は全て使用できるか、たとえば東京大学応用微
生物研究所保存菌ハロフツカス アセトイン７アシエン
ス（Ｈａｌｏｃｏｃｃｕｇａｏｅｔｏｉｎｆａｏｉｅｎ
ｇ ）工ＡＭ１２０９４がある。
素生産菌は全て使用できるか、たとえば東京大学応用微
生物研究所保存菌ハロフツカス アセトイン７アシエン
ス（Ｈａｌｏｃｏｃｃｕｇａｏｅｔｏｉｎｆａｏｉｅｎ
ｇ ）工ＡＭ１２０９４がある。
培養を行なう場合には、培地組成としては使用微生物が
資化でき、かつ本酵素を生産する炭素源、窒素源および
無機塩等を適宜組合わせて ゛使用する。培地の
ｐＨは４．５〜８．０が好ましい。
資化でき、かつ本酵素を生産する炭素源、窒素源および
無機塩等を適宜組合わせて ゛使用する。培地の
ｐＨは４．５〜８．０が好ましい。
培養法としては振盪培養、攪拌培養、通気培養を用いる
ことかできるが大量に培養するには通気攪拌培養が好ま
しい。培養温度は酵素を生産する範囲内で変更すること
ができるが、特に好ましくは３０℃〜３７℃である。培
養時間は、培養条件により異なり、本酵素の生産量が最
高に達するまで培養を行なう。
ことかできるが大量に培養するには通気攪拌培養が好ま
しい。培養温度は酵素を生産する範囲内で変更すること
ができるが、特に好ましくは３０℃〜３７℃である。培
養時間は、培養条件により異なり、本酵素の生産量が最
高に達するまで培養を行なう。
本酵素は主として菌体内に生産される。
培養液からの菌体の分離はたとえば遠心分離により行な
うことができる。
うことができる。
本酵素の抽出、精製は一般の制限酵素精製法に従った方
法で行なえる。すなわち、菌体を縁衝液にネｆｆＡ後、
超音波処理により破砕し、細胞内Ｍ、素の抽出を行なう
。次に細胞残渣を超遠心分離により除去後、抽出液を硫
酸アンモニウムで塩析する。沈澱物をリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ７，５＞に溶解し、同緩衝液にて透析を行な
う。
法で行なえる。すなわち、菌体を縁衝液にネｆｆＡ後、
超音波処理により破砕し、細胞内Ｍ、素の抽出を行なう
。次に細胞残渣を超遠心分離により除去後、抽出液を硫
酸アンモニウムで塩析する。沈澱物をリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ７，５＞に溶解し、同緩衝液にて透析を行な
う。
得られる透析内液をホスホセルロース、ＤＫＡＫ−セル
ロースのイオン交換クロマトグラフィー、ヘパリンセフ
ァロースの７フイニテイクロマトグラフイーを用いた精
製法で本酵素を得る。本酵辺の活性測定法を示す。下記
表１に示す組成の反応液５０μｌを予め３７°Ｃで予熱
した後、本酵素を加え酵素反応を進める０６０分後に酵
素反応停止液（１％ＳＤＳ％５０％グリセロール、０．
０２％ブロムフェノールブルー）を５μｌ添加して反応
を停止させる。
ロースのイオン交換クロマトグラフィー、ヘパリンセフ
ァロースの７フイニテイクロマトグラフイーを用いた精
製法で本酵素を得る。本酵辺の活性測定法を示す。下記
表１に示す組成の反応液５０μｌを予め３７°Ｃで予熱
した後、本酵素を加え酵素反応を進める０６０分後に酵
素反応停止液（１％ＳＤＳ％５０％グリセロール、０．
０２％ブロムフェノールブルー）を５μｌ添加して反応
を停止させる。
表 １
ｌ１０ｎ１ ）リス−Ｈ（１、ｐＨ７，５７ｍＭ
Ｍｇ０１１ １７５ｍＭ Ｍａｉ１ ７ｍＭ ２−メルカプトエタノール００１％
牛血清アルブミン １．０ｔｔｔ Ｄａｍ−λ−ＤＮＡ反応液を１％ア
ガローススラブゲルに重層シ、１０Ｖ／ｃｍの定電圧下
で約１時間から２時間電気泳動を行う。電気分動用緩衝
液は９０ｍＭ）ＩＪスス−う酸緩衝液（ｐＨ８，３）
２．５ ｍＭ ＥＤＴＡを用いる。
Ｍｇ０１１ １７５ｍＭ Ｍａｉ１ ７ｍＭ ２−メルカプトエタノール００１％
牛血清アルブミン １．０ｔｔｔ Ｄａｍ−λ−ＤＮＡ反応液を１％ア
ガローススラブゲルに重層シ、１０Ｖ／ｃｍの定電圧下
で約１時間から２時間電気泳動を行う。電気分動用緩衝
液は９０ｍＭ）ＩＪスス−う酸緩衝液（ｐＨ８，３）
２．５ ｍＭ ＥＤＴＡを用いる。
ゲルに前もって０．５μ７ ／ ａｔのエチジウム−゛
ロマイドを含ませておくことによりＵＶ照射でＤＮＡ（
ｙ） ハン）−カ検１ｉ５可能である。ＤＮＡフラクメ
ントのバンドの数と岨が変化しなくなった時を終点とす
る。
ロマイドを含ませておくことによりＵＶ照射でＤＮＡ（
ｙ） ハン）−カ検１ｉ５可能である。ＤＮＡフラクメ
ントのバンドの数と岨が変化しなくなった時を終点とす
る。
活性の定額は３７°Ｃで１時間に１μｍのＤａｍ−λ−
ＤＮＡを完全に分解する酵素活性を１単位とする。
ＤＮＡを完全に分解する酵素活性を１単位とする。
本発明により得られた本酵素は以下のような理化学的性
質を持っている。
質を持っている。
（１）作用および基質特異性
本酵素は二本鎖デオキシリボ核酸中の
５′−↓ＧＡＴＯ−３’
３’−０ＴＡＧ↑−５′
という塩基配列を認識し、矢印の位置で切断する酵素で
、公知の制限酵素Ｍｂｏ ｉとアイソシゾマーである。
、公知の制限酵素Ｍｂｏ ｉとアイソシゾマーである。
本発明による酵素の認識部位の決定はＤａｍ＋λ−ＤＮ
Ａ （￥９肯造製品）とＤａｍ−λ−ＤＮＡを基質に用
いて行なった。その結果、本発明による酵素はＤａｍ−
λ−ＤＮＡを切断し５０本以上の７ラグメントを生成し
たが、Ｄａｍ＋λ−ＤＮＡ は切断しなかったことから
Ｄａｍ遺伝子により認識されＡがメチル化を受ける塩基
配列５′−ＧＡＴｏ −３’が本発明による酵素の認識
部位内に存在することが示唆された０そこでＧＡＴＯを
認識切断する既知制限酵素Ｍｂｏ （をＤａｍ−λ−Ｄ
ＮＡに作用させ為本発明による酵素のそれと切断パター
ンを比較したところ同一パターンを示した。以上の結果
より本発明による酵素の認識するＤＮＡ上のヌクレオチ
ド配列は５’ −ＧＡＴｏ−３′であると結論された。
Ａ （￥９肯造製品）とＤａｍ−λ−ＤＮＡを基質に用
いて行なった。その結果、本発明による酵素はＤａｍ−
λ−ＤＮＡを切断し５０本以上の７ラグメントを生成し
たが、Ｄａｍ＋λ−ＤＮＡ は切断しなかったことから
Ｄａｍ遺伝子により認識されＡがメチル化を受ける塩基
配列５′−ＧＡＴｏ −３’が本発明による酵素の認識
部位内に存在することが示唆された０そこでＧＡＴＯを
認識切断する既知制限酵素Ｍｂｏ （をＤａｍ−λ−Ｄ
ＮＡに作用させ為本発明による酵素のそれと切断パター
ンを比較したところ同一パターンを示した。以上の結果
より本発明による酵素の認識するＤＮＡ上のヌクレオチ
ド配列は５’ −ＧＡＴｏ−３′であると結論された。
本発明の制限酵素の切断部位の決定には、本酵素認識部
位をもつオリゴヌクレオチドを合成し、これに本発明に
よる酵素を作用させ生成物の銅長から切断部位を決定す
る方法を用いた。
位をもつオリゴヌクレオチドを合成し、これに本発明に
よる酵素を作用させ生成物の銅長から切断部位を決定す
る方法を用いた。
詳細は以下のとおりである。
セルフコンプリメンタリ−の構造をもつオリゴヌクレオ
チドｄ （ＧＯＡＧＡＴＯＴＧＯ）を同相法により合廣
しポリヌクレオチドキナーゼと１（−、−、Ｉ Ｈｐ
）アデノシン三リン酸を用いて５′末端に放射性リン酸
を付加する。オリゴヌクレオチドをアニーリングさせて
二本鎖ＤＮＡとした後、本発明による酵素で切断し、Ｄ
ＥＡｌセルロース落層プレート（マシエレイ・ナゲル社
製品）により分析した・この時１生成物として鎖長三塩
基（５’−ＧＯＡ ）の標識されたスポットが検出され
た。
チドｄ （ＧＯＡＧＡＴＯＴＧＯ）を同相法により合廣
しポリヌクレオチドキナーゼと１（−、−、Ｉ Ｈｐ
）アデノシン三リン酸を用いて５′末端に放射性リン酸
を付加する。オリゴヌクレオチドをアニーリングさせて
二本鎖ＤＮＡとした後、本発明による酵素で切断し、Ｄ
ＥＡｌセルロース落層プレート（マシエレイ・ナゲル社
製品）により分析した・この時１生成物として鎖長三塩
基（５’−ＧＯＡ ）の標識されたスポットが検出され
た。
このことから本発明による酵素は
５′−五〇ＡＴＯ−３／
３’−０ＴＡＧ↑−５′
を１情減し矢印の位置で切断していると結論された。
（２）至適酵素活性条件
Ｉ）至適温度
至適温度は約４５°Ｃであった。
旧至鈎ｐＨ
至適ｐＨは、ｐＨ７，１〜７５の範朋にある。
１１１）塩濃度
Ｎａ１ｌ、 ＫＯＩ 濃度について両者とも１７５〜３
００ｍＭといった高塩濃度で至適酵素活性を示す。
００ｍＭといった高塩濃度で至適酵素活性を示す。
実施例
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発
明はこれら実施例に限定されるものではない。
明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例 １
２１容三角フラスコ１０本に下記表２に示す培地各々５
００ ｍｉを仕込み常法により培地を滅菌した。
００ ｍｉを仕込み常法により培地を滅菌した。
表 ２
バクトドリプトン １０５’イーストエキ
ス ５ｆグルコース
ＩＰＭａｉｌ ３０
グ脱イオン水 １ｅ ｐＨ７，２ 上記上回じ培地で３５０°Ｃで２７時間振盪培養シタハ
ロコツカス アセトイン７アシエンスエＡＭ１２０９４
の種培養液２００ ｍＡを上記三角７ラスフに移植し、
３５°Ｃで１３時間開Ｍ盛培谷を行なった。次いで冷却
遠心機を用いて菌体をｒ；した。培養液５１から湿重鼠
にして約１５ｙ−の菌体か得られた。
ス ５ｆグルコース
ＩＰＭａｉｌ ３０
グ脱イオン水 １ｅ ｐＨ７，２ 上記上回じ培地で３５０°Ｃで２７時間振盪培養シタハ
ロコツカス アセトイン７アシエンスエＡＭ１２０９４
の種培養液２００ ｍＡを上記三角７ラスフに移植し、
３５°Ｃで１３時間開Ｍ盛培谷を行なった。次いで冷却
遠心機を用いて菌体をｒ；した。培養液５１から湿重鼠
にして約１５ｙ−の菌体か得られた。
得られた１５Ｆの菌体を２００ ｍｌの抽出緩衝液（２
０ｆｆＩＭトリスーＨ０Ｉ 、ｐＨ７，５，１０ｍＭ２
−メルカプトエタノール）に懸濁し、超音波破砕機を用
いて破砕後、１０００００ｘＰで１時間遠心分離を行な
い、残渣を除去、抽出液を得た。
０ｆｆＩＭトリスーＨ０Ｉ 、ｐＨ７，５，１０ｍＭ２
−メルカプトエタノール）に懸濁し、超音波破砕機を用
いて破砕後、１０００００ｘＰで１時間遠心分離を行な
い、残渣を除去、抽出液を得た。
得られた抽出液に硫酸アンモニウムを８０％飽和になる
ように加え、沈澱物を遠心分離にて集め、緩衝液Ａ（ｌ
ＱｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７，５，１０ｍＭ２
−メルカプトエタノール、５％ダリセロール）に溶解後
、同緩衝液Ａで一晩透析を行なった。
ように加え、沈澱物を遠心分離にて集め、緩衝液Ａ（ｌ
ＱｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７，５，１０ｍＭ２
−メルカプトエタノール、５％ダリセロール）に溶解後
、同緩衝液Ａで一晩透析を行なった。
次に透析内液を予め゛緩陽液Ａで平衡化させておいたホ
スホ−セルロース（ワットマン製品Ｐ−１１）のカラム
（２０Ｘ８０団）に吸着させ、緩衝液Ａで洗浄後、０〜
１．０Ｍの塩化カリウムのＷ線濃度勾配を持つ緩衝液Ａ
で溶出させると００５〜０１８Ｍの塩化カリウム濃度画
分に本酵素の活性が検出できた〇 次に得られた活性画分を合わせＢ Ｆ 液Ａで一晩透析
後、透析内液を予め緩衝液Ａで平衡化させておいりｎＫ
１１ｔ−セルロース（ワットマンＤＥ５２）のカラム（
１２Ｘ９０閣）に吸着させ、Ｒ（？ｉ液Ａで洗浄後０〜
１．０Ｍの塩化カリウムの直線ｆ上度勾配を持つ緩衝液
Ａで溶出させると、００６〜０．１４ Ｍの塩化カリウ
ム濃度画分に本酵素の活性が検出できた。
スホ−セルロース（ワットマン製品Ｐ−１１）のカラム
（２０Ｘ８０団）に吸着させ、緩衝液Ａで洗浄後、０〜
１．０Ｍの塩化カリウムのＷ線濃度勾配を持つ緩衝液Ａ
で溶出させると００５〜０１８Ｍの塩化カリウム濃度画
分に本酵素の活性が検出できた〇 次に得られた活性画分を合わせＢ Ｆ 液Ａで一晩透析
後、透析内液を予め緩衝液Ａで平衡化させておいりｎＫ
１１ｔ−セルロース（ワットマンＤＥ５２）のカラム（
１２Ｘ９０閣）に吸着させ、Ｒ（？ｉ液Ａで洗浄後０〜
１．０Ｍの塩化カリウムの直線ｆ上度勾配を持つ緩衝液
Ａで溶出させると、００６〜０．１４ Ｍの塩化カリウ
ム濃度画分に本酵素の活性が検出できた。
次に得られた活性画分を合わせ、緩衝液Ａで一晩透析後
、透析内液を予め緩衝液Ａで平衡化させて詔いたヘパリ
ン−セファロース（ファルマシア製品、０Ｌ１３Ｂ）の
カラム（８Ｘ１００醜）に吸着させ、緩衝液Ａで洗浄後
、０〜１．５Ｍの塩化カリウムの直線濃度勾配を持つ緩
衝液Ｂで溶出させると０．２５〜０．３５ Ｍの塩化カ
リウム濃度画分に本酵素の活性が検出できた。
、透析内液を予め緩衝液Ａで平衡化させて詔いたヘパリ
ン−セファロース（ファルマシア製品、０Ｌ１３Ｂ）の
カラム（８Ｘ１００醜）に吸着させ、緩衝液Ａで洗浄後
、０〜１．５Ｍの塩化カリウムの直線濃度勾配を持つ緩
衝液Ｂで溶出させると０．２５〜０．３５ Ｍの塩化カ
リウム濃度画分に本酵素の活性が検出できた。
次に得られた活性画分を合わせ、Ｑ、 Ｉ Ｍ ＩＱ化
カリウム、５０％グリセロールを含む緩衝液で透析し、
本酵素の最終標品として得た。
カリウム、５０％グリセロールを含む緩衝液で透析し、
本酵素の最終標品として得た。
この酵素標品には非特異的なりＮＡ分解酵素およびホス
ファターゼは夾雑していなかった。
ファターゼは夾雑していなかった。
以上述べた方法により１５ｙ−の湿菌体より３０００単
位の活性単位を得た。
位の活性単位を得た。
発明の効諜
以上詳細に説明したとあり、本発明によりＭｂｏ ｌと
同様の塩基配列の認識部位および切断部位を有する制限
酵素の工業的に有利な製造法が提供された。
同様の塩基配列の認識部位および切断部位を有する制限
酵素の工業的に有利な製造法が提供された。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ハロコッカス属に属し、下記ヌクレオチド配列の式
中矢印の部位で特異的に切断する制限酵素生産能を有す
る細菌を培養し、得られた培養物より下記ヌクレオチド
配列の式中矢印の部位で特異的に切断する制限酵素を採
取することを特徴とする制限酵素の製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ａはアデノシン、Ｃはシチジン、Ｇはグアノシン
、Ｔはチミジンを示す）
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59237242A JPS61115490A (ja) | 1984-11-09 | 1984-11-09 | 制限酵素の製造法 |
| US06/783,634 US4724209A (en) | 1984-11-09 | 1985-10-03 | Process for producing restriction enzyme |
| GB08524739A GB2166744B (en) | 1984-11-09 | 1985-10-08 | Process for producing restriction enzyme |
| DE19853539521 DE3539521A1 (de) | 1984-11-09 | 1985-11-07 | Verfahren zur herstellung einer restriktionsendonuklease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59237242A JPS61115490A (ja) | 1984-11-09 | 1984-11-09 | 制限酵素の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61115490A true JPS61115490A (ja) | 1986-06-03 |
Family
ID=17012497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59237242A Pending JPS61115490A (ja) | 1984-11-09 | 1984-11-09 | 制限酵素の製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4724209A (ja) |
| JP (1) | JPS61115490A (ja) |
| DE (1) | DE3539521A1 (ja) |
| GB (1) | GB2166744B (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5860986A (ja) * | 1981-10-05 | 1983-04-11 | Yakult Honsha Co Ltd | 新規制限酵素及びその製造法 |
-
1984
- 1984-11-09 JP JP59237242A patent/JPS61115490A/ja active Pending
-
1985
- 1985-10-03 US US06/783,634 patent/US4724209A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-10-08 GB GB08524739A patent/GB2166744B/en not_active Expired
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