JPS606634B2 - サイクリツク−３′，５′−グアニル酸の製造法 - Google Patents
サイクリツク−３′，５′−グアニル酸の製造法Info
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- JPS606634B2 JPS606634B2 JP10995381A JP10995381A JPS606634B2 JP S606634 B2 JPS606634 B2 JP S606634B2 JP 10995381 A JP10995381 A JP 10995381A JP 10995381 A JP10995381 A JP 10995381A JP S606634 B2 JPS606634 B2 JP S606634B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はァスベルギルス属に属する微生物の培養物を用
いて、２−アミノーアデノシン−３・５一環状リン酸か
らサィクリツク−３・５−グアニル酸を製造する方法に
関する。
いて、２−アミノーアデノシン−３・５一環状リン酸か
らサィクリツク−３・５−グアニル酸を製造する方法に
関する。
サィクリック−３・５−グアニル酸（以下、ｃＧＭＰと
称する）は生体内に極微量存在する生理活性物であり、
最近生化学の分野においてその重要性が認められ、試薬
としても極めて高価なものである。
称する）は生体内に極微量存在する生理活性物であり、
最近生化学の分野においてその重要性が認められ、試薬
としても極めて高価なものである。
また制ガン剤の中間体としても重要な物質である。そし
て現在ｃＧＭＰを製造する方法としては、化学的に合成
する方法、発酵法、発酵法及び合成法を組み合わせた方
法等が知られているが、これ等は何段階もの複雑な工程
が必要であったり、収量が極度に低い等の欠点があり、
また酵素法によるｃＧＭＰの製造法は全く知られていな
かった。
て現在ｃＧＭＰを製造する方法としては、化学的に合成
する方法、発酵法、発酵法及び合成法を組み合わせた方
法等が知られているが、これ等は何段階もの複雑な工程
が必要であったり、収量が極度に低い等の欠点があり、
また酵素法によるｃＧＭＰの製造法は全く知られていな
かった。
そこで本発明者はｃＧＭＰを簡単な工程で製造する方法
について種々研究した結果、アスベルギルス属に属する
微生物を培養することにより、２−アミノーアデノシン
ー３′・５一環状リン酸に対する基質特異性が極めて高
いデアミナーゼ活性を有し、かつ従来の麹菌にみられる
ホスホジェステラーゼ活性の副生が極めて少ないか又は
実質的に副生しない培養物を得ることができることを見
出し、該培養物を用いることにより、培養物のホスホジ
ェステラーゼ活性を失活させるか又は、該物質を除去す
る等の工程を特別に経なくても２−アミノーアデノシン
−３′・５一環状リン酸（以下、２ーアミノーＣＡＭｍ
と称する）からｃＧＭ円を効率よく製造することに成功
し、本発明を完成するに到つた。すなわち、本発明は２
ーアミノ−ＣＡＭＰをｃＧＭＰに変換するデアミナーゼ
活性を有し、実質的にホスホジェステラーゼ活性を有し
ないアスベルギルス属に属する微生物の培養物を２ーア
ミノ−ＣＡＭＰに作用させることを特徴とするｃＧＭＰ
の製造法である。
について種々研究した結果、アスベルギルス属に属する
微生物を培養することにより、２−アミノーアデノシン
ー３′・５一環状リン酸に対する基質特異性が極めて高
いデアミナーゼ活性を有し、かつ従来の麹菌にみられる
ホスホジェステラーゼ活性の副生が極めて少ないか又は
実質的に副生しない培養物を得ることができることを見
出し、該培養物を用いることにより、培養物のホスホジ
ェステラーゼ活性を失活させるか又は、該物質を除去す
る等の工程を特別に経なくても２−アミノーアデノシン
−３′・５一環状リン酸（以下、２ーアミノーＣＡＭｍ
と称する）からｃＧＭ円を効率よく製造することに成功
し、本発明を完成するに到つた。すなわち、本発明は２
ーアミノ−ＣＡＭＰをｃＧＭＰに変換するデアミナーゼ
活性を有し、実質的にホスホジェステラーゼ活性を有し
ないアスベルギルス属に属する微生物の培養物を２ーア
ミノ−ＣＡＭＰに作用させることを特徴とするｃＧＭＰ
の製造法である。
以下本発明について詳細に説明する。
先ず本発明に使用する微生物としては、アスベルギルス
属に属し、２−アミノーＣＡＭＰをＣＧＭｍに変換する
デアミナーゼ活性を有し、ｃＧＭＰを生成するに不都合
を生じない程度にホスホジェステラーゼ活性が弱いか若
し〈は実質的にホスホジヱステラーゼ活性を有しない培
養物を得ることができる菌が挙げられ、特に好適な菌の
具体例としては、アスベルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒ
ｇｍｕｓｎｉｇｅｒ）ｌＡＭ２５３ュ アスベルギルス
・ニガーｌＡＭ２５３４、アスベルギルス・オリゼ、（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）ｌＡＭ ２７４
７、アスベルギルス・オリゼｌＡＭ ２７４２、ア ス
ベルギルス・ソ ーヤ（Ａｓｐｅｒｇｌｌｕｓｓｏおｅ
）Ｎｏ．７７（徴工研菌寄第６０１６号）等が挙げられ
る。
属に属し、２−アミノーＣＡＭＰをＣＧＭｍに変換する
デアミナーゼ活性を有し、ｃＧＭＰを生成するに不都合
を生じない程度にホスホジェステラーゼ活性が弱いか若
し〈は実質的にホスホジヱステラーゼ活性を有しない培
養物を得ることができる菌が挙げられ、特に好適な菌の
具体例としては、アスベルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒ
ｇｍｕｓｎｉｇｅｒ）ｌＡＭ２５３ュ アスベルギルス
・ニガーｌＡＭ２５３４、アスベルギルス・オリゼ、（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）ｌＡＭ ２７４
７、アスベルギルス・オリゼｌＡＭ ２７４２、ア ス
ベルギルス・ソ ーヤ（Ａｓｐｅｒｇｌｌｕｓｓｏおｅ
）Ｎｏ．７７（徴工研菌寄第６０１６号）等が挙げられ
る。
アスベルギルス・ソーャＮＯ．７７は本発明者が空気中
より分離した菌株で、菌糸に柄足細胞が形成され、それ
より分生胞子柄ができ、その先端に頂のうができる。
より分離した菌株で、菌糸に柄足細胞が形成され、それ
より分生胞子柄ができ、その先端に頂のうができる。
頂のうには第１梗子ができ、３〜５個の分生胞子が着出
する。そして分生胞子の表面は小突起で覆われている。
このためアスベルギル ス・ソ ー ャと認め られる
（ＨｉｄｅｙａＭｕｒａｋａｍｉ、Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐ
ｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１７、２８１〜３０１、１
９７１）。しかし本発明者が分離したアスベルギルス。
する。そして分生胞子の表面は小突起で覆われている。
このためアスベルギル ス・ソ ー ャと認め られる
（ＨｉｄｅｙａＭｕｒａｋａｍｉ、Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐ
ｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１７、２８１〜３０１、１
９７１）。しかし本発明者が分離したアスベルギルス。
ソーャＮｏ．７７は、２−アミノ−ＣＡＭ円をｃＧＭＰ
に変換するデァミナーゼ活性物質を生産し、ホスホジェ
ステラーゼ活性物質を実質的に生産しないことから、従
来のアスベルギルス・ソーャとは異なる。そしてアスベ
ルギルス・ソーャＮｏ．７７は徴工研菌寄第６０１６号
（ＦＥＲＭ Ｐ−６０１６）として寄託されている。
に変換するデァミナーゼ活性物質を生産し、ホスホジェ
ステラーゼ活性物質を実質的に生産しないことから、従
来のアスベルギルス・ソーャとは異なる。そしてアスベ
ルギルス・ソーャＮｏ．７７は徴工研菌寄第６０１６号
（ＦＥＲＭ Ｐ−６０１６）として寄託されている。
これらの菌株の培養は、糸状菌の培養に用いられる培地
を用いて常法に従って固体培養又は液体培養とすること
により行なわれる。
を用いて常法に従って固体培養又は液体培養とすること
により行なわれる。
培地の栄養源としては、微生物の培養に通常用いられる
ものが広く使用される。
ものが広く使用される。
すなわち炭素源としては、資化可能な炭素化合物又はこ
れを含有するものであればよく、例えば小麦、数、グル
コース、シユクロース、スターチ、マルトース、デキス
トリン、グリセリン等が用いられる。窒素源としては、
利用可能な窒素化合物又はこれを含有するものであれば
よく、例えば大豆粉、脱脂大豆粉、グルテン、ベフ。ト
ン、肉エキス、カゼイン、大豆ミール、コーンステイー
プリカー、硫安、塩安等が使用される。またリン酸、カ
リウム、マグネシウム、カルシウム等が適当な無機塩類
を適宜使用することができ、更に必要に応じて菌の生育
に必要な各種の有機物、無機物等を培地に添加使用する
ことができる。先ず固体培養の場合には、適当な固体塔
地原料、例えば数に散水し、１２０００、２０分間殺菌
した後、種菌を接種し、３〜５日間培養を行う。
れを含有するものであればよく、例えば小麦、数、グル
コース、シユクロース、スターチ、マルトース、デキス
トリン、グリセリン等が用いられる。窒素源としては、
利用可能な窒素化合物又はこれを含有するものであれば
よく、例えば大豆粉、脱脂大豆粉、グルテン、ベフ。ト
ン、肉エキス、カゼイン、大豆ミール、コーンステイー
プリカー、硫安、塩安等が使用される。またリン酸、カ
リウム、マグネシウム、カルシウム等が適当な無機塩類
を適宜使用することができ、更に必要に応じて菌の生育
に必要な各種の有機物、無機物等を培地に添加使用する
ことができる。先ず固体培養の場合には、適当な固体塔
地原料、例えば数に散水し、１２０００、２０分間殺菌
した後、種菌を接種し、３〜５日間培養を行う。
このようにして得た培養物はこのまま使用してもよいが
、適宜培養物に適量の水又は緩衝液を加え適当時間抽出
を行い、抽出液を得、必要によりこれを桂藻土猿過又は
遠○分離等の処理を行って透明抽出液とし、あるいはこ
れらを濃縮して用いることができ、更に脱色する場合に
は活性炭処理等と併用することもできる。次に液体培養
を行う場合には、上託炭素源、窒素源及び無機塩を適宜
組み合わせた栄養培地、例えばグルコース、ベプトン、
硫安、酵母エキス、ＫＨ２Ｐ０４等からなる培地をｐＨ
５〜７に調整し、常法による加熱殺菌した培地に種菌を
接種し、培養する。
、適宜培養物に適量の水又は緩衝液を加え適当時間抽出
を行い、抽出液を得、必要によりこれを桂藻土猿過又は
遠○分離等の処理を行って透明抽出液とし、あるいはこ
れらを濃縮して用いることができ、更に脱色する場合に
は活性炭処理等と併用することもできる。次に液体培養
を行う場合には、上託炭素源、窒素源及び無機塩を適宜
組み合わせた栄養培地、例えばグルコース、ベプトン、
硫安、酵母エキス、ＫＨ２Ｐ０４等からなる培地をｐＨ
５〜７に調整し、常法による加熱殺菌した培地に種菌を
接種し、培養する。
この場合、静贋培養、振鰹培養、損梓培養、通気培養な
どの適宜の培養法を用いて実施することができるが、大
量に培養する場合には、振縄又は通気損梓培養を行うの
が好適である。培養温度は該菌株が生育する範囲内で変
更することができるが、通常１０〜８０ｏ○、特に好ま
しくは２０〜５０００である。培養期間は使用菌及び培
養形態によっても異なるが、通常１〜６日程度であって
培養物の２−アミノ−ＣＡＭＰをｃＧＭＰに変換するデ
ァミナーゼ活性が強くなる時期を見計らって培養を終了
すればよい。
どの適宜の培養法を用いて実施することができるが、大
量に培養する場合には、振縄又は通気損梓培養を行うの
が好適である。培養温度は該菌株が生育する範囲内で変
更することができるが、通常１０〜８０ｏ○、特に好ま
しくは２０〜５０００である。培養期間は使用菌及び培
養形態によっても異なるが、通常１〜６日程度であって
培養物の２−アミノ−ＣＡＭＰをｃＧＭＰに変換するデ
ァミナーゼ活性が強くなる時期を見計らって培養を終了
すればよい。
このようにして得た培養物はこのまま使用してもよいが
、菌体を濃別した培養櫨液を固体培養物の抽出液と同様
に処理することもできる。また、これらの培養物中に鰯
生するホスホジヱステラーゼ活性は実質中にｃＧＭＰを
生成するに不都合を生じない程度に弱いか若し〈は実質
的に生じないが、場合によっては適宜ホスホジェステラ
ーゼ活性を失活させるか該物質を除去する工程を経ても
よい。これらの固体培養の抽出液又は液体培養の培養櫨
液より硫安等を用いる塩析法、又はアルコール類、ァセ
トン類を用いる有機溶媒沈殿法により得た粗酵素を本発
明方法に於ける有効な２ーアミノ−ＣＡＭＰをｃＧＭＰ
に変換するデアミナーゼ活性含有物質として使用できる
。
、菌体を濃別した培養櫨液を固体培養物の抽出液と同様
に処理することもできる。また、これらの培養物中に鰯
生するホスホジヱステラーゼ活性は実質中にｃＧＭＰを
生成するに不都合を生じない程度に弱いか若し〈は実質
的に生じないが、場合によっては適宜ホスホジェステラ
ーゼ活性を失活させるか該物質を除去する工程を経ても
よい。これらの固体培養の抽出液又は液体培養の培養櫨
液より硫安等を用いる塩析法、又はアルコール類、ァセ
トン類を用いる有機溶媒沈殿法により得た粗酵素を本発
明方法に於ける有効な２ーアミノ−ＣＡＭＰをｃＧＭＰ
に変換するデアミナーゼ活性含有物質として使用できる
。
本発明方法において使用する培養物の性質は給源により
多少異なるが、通常２−アミノ−ＣＡＭＰデアミナ−ゼ
活性を有し、ｐＨ２〜１０の範囲で作用し「作用温度は
１０〜９０ｑｏ、１０分ないし１０日位である。
多少異なるが、通常２−アミノ−ＣＡＭＰデアミナ−ゼ
活性を有し、ｐＨ２〜１０の範囲で作用し「作用温度は
１０〜９０ｑｏ、１０分ないし１０日位である。
また、２−アミノーＣＡＭＰは、例えば微生物による大
量生産法が確立されているＣＡＭＰより容易に合致する
ことができ〔ヌクレイックアシド リサーチ、スベシヤ
ル パブリケーシヨン、Ｎｏ．２、５５９（１９７８）
〕、精製標品だけでなく２−アミノ−ＣＡＭＰ含有物も
用いることができる。
量生産法が確立されているＣＡＭＰより容易に合致する
ことができ〔ヌクレイックアシド リサーチ、スベシヤ
ル パブリケーシヨン、Ｎｏ．２、５５９（１９７８）
〕、精製標品だけでなく２−アミノ−ＣＡＭＰ含有物も
用いることができる。
２−アミノ−ＣＡＭＰは適宜水又は通常用いられる緩衝
液等に溶解して用いることが好ましく、０．１〜１０％
溶液が用いられる。
液等に溶解して用いることが好ましく、０．１〜１０％
溶液が用いられる。
ここで本願方法で用いられる培養物の基質特異性を実験
例で示す。
例で示す。
実験例
数６夕を１５０机上三角フラスコに加え、更に水４の‘
を添加し、１２０００、１８分間オートクレープで殺菌
した。
を添加し、１２０００、１８分間オートクレープで殺菌
した。
これにアスベルギルス・オリゼｌＡＭ２７４２の胞子を
接種し、３０こ○、５日間培養した。この培養物に水５
０の上を加えよく蝿拝し、１時間静暦後、１２仇．ｐ．
ｍ．ロータリーで１０分間振渇し、これをＮｏ．５Ｃの
横紙で猿遇して清澄液を得、この菌体抽出液を酵素液と
して次の実験を行った。第１表に示す各物質の２％溶液
（溶媒；Ｍ／５酢酸バッファー、ｐＨ５．５）４地に酵
素液１の‘を添加し、３７ｏ０で３び分間反応させた後
、１００℃、３分間加熱処理し、１０００比．ｐ．ｍ．
で１０分間遠心処理した。
接種し、３０こ○、５日間培養した。この培養物に水５
０の上を加えよく蝿拝し、１時間静暦後、１２仇．ｐ．
ｍ．ロータリーで１０分間振渇し、これをＮｏ．５Ｃの
横紙で猿遇して清澄液を得、この菌体抽出液を酵素液と
して次の実験を行った。第１表に示す各物質の２％溶液
（溶媒；Ｍ／５酢酸バッファー、ｐＨ５．５）４地に酵
素液１の‘を添加し、３７ｏ０で３び分間反応させた後
、１００℃、３分間加熱処理し、１０００比．ｐ．ｍ．
で１０分間遠心処理した。
生成した沈殿物を除いた上燈液について生成物を測定し
、酵素活性を測定した。
、酵素活性を測定した。
なお、第１表の２−ァミノーＣＡＭ円１〆外の各物質に
ついての見かけ上のデアミナーゼ活性は植村らの方法で
１分間当りの２６５の仏の０．Ｄ．（１肌セル）変化で
表現し〔ジャーナル オブ ジェネラル アンドアプラ
イドマイクロ バイオロジ一 （ Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ
ＷｎｅｒａＩ ａｎｄ ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ、１入 ２３７〜２４５（１９６７）〕、
ＣＡＭＰに対する相対活性で示した。
ついての見かけ上のデアミナーゼ活性は植村らの方法で
１分間当りの２６５の仏の０．Ｄ．（１肌セル）変化で
表現し〔ジャーナル オブ ジェネラル アンドアプラ
イドマイクロ バイオロジ一 （ Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ
ＷｎｅｒａＩ ａｎｄ ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ、１入 ２３７〜２４５（１９６７）〕、
ＣＡＭＰに対する相対活性で示した。
２−アミノ−ＣＡＭＰについての活性はペーパークロマ
トグラフィーで生成したｃＧＭ円より測定した。
トグラフィーで生成したｃＧＭ円より測定した。
すなわち、２−アミノ−ＣＡＭＰの反応上燈液１０の‘
を東洋Ｎｏ．５１Ａ櫨紙にスポットし、溶媒〔インプロ
ピルアルコール：濃アンモニア水：水＝７：１：２（Ｖ
ｏｌ′Ｖｏｌ）〕で一夜展開した。
を東洋Ｎｏ．５１Ａ櫨紙にスポットし、溶媒〔インプロ
ピルアルコール：濃アンモニア水：水＝７：１：２（Ｖ
ｏｌ′Ｖｏｌ）〕で一夜展開した。
展開後、風乾して紫外線ランプ下に紫外線吸収スポット
（Ｒｆ値；ｃＧＭＰＯ．１、２ーアミノーＣＡＭＰ０．
３）を検出した。ｃＧＭＰに相当する部分を切り抜き、
水５私を加え１００ｏ０で抽出し、２６仇肌で測定し、
標準直線よりｃＧＭＰ量を測定した。次に２ーアミノ−
ＣＡＭＰの反応上燈液と同様にＣＡＭＰの反応上燈液で
ペーパークロマトグラフィーを行ってｃＩＭＰに相当す
る部分（Ｒｆ値；０．１７５）から生成したｃＩＭ円を
測定し、ＣＡＭＰに対する活性を求め、該活性に対する
相対活性で２−アミノ−ＣＡＭ円の活性を表示した。第
１表 ２−アミノ−ＣＡＭＰの反応液よりｃＧＭ円を分離し、
精製するには例えば活性炭による処理、陰イオン交換樹
脂又は陽イオン交換樹脂による処理、ｃＧＭＰ不熔性溶
媒の添加などの手段が適当に組合わされて用いられる。
（Ｒｆ値；ｃＧＭＰＯ．１、２ーアミノーＣＡＭＰ０．
３）を検出した。ｃＧＭＰに相当する部分を切り抜き、
水５私を加え１００ｏ０で抽出し、２６仇肌で測定し、
標準直線よりｃＧＭＰ量を測定した。次に２ーアミノ−
ＣＡＭＰの反応上燈液と同様にＣＡＭＰの反応上燈液で
ペーパークロマトグラフィーを行ってｃＩＭＰに相当す
る部分（Ｒｆ値；０．１７５）から生成したｃＩＭ円を
測定し、ＣＡＭＰに対する活性を求め、該活性に対する
相対活性で２−アミノ−ＣＡＭ円の活性を表示した。第
１表 ２−アミノ−ＣＡＭＰの反応液よりｃＧＭ円を分離し、
精製するには例えば活性炭による処理、陰イオン交換樹
脂又は陽イオン交換樹脂による処理、ｃＧＭＰ不熔性溶
媒の添加などの手段が適当に組合わされて用いられる。
例えば、２ーアミノーＣＡＭＰの反応液中のｃＧＭＰを
活性炭に吸着させ、これをアンモニア性アルコール水又
はアンモニア性アセトン水などで溶出する。この溶出液
はさらに減圧濃縮その他により過剰のアンモニアを除い
た後、陰イオン交換樹脂（例えばダウェックス１クロル
型、ダウェックス１蟻酸型など）に吸着させ、つぎに適
当な溶媒（例えばダウヱックス１クロル型の場合には希
塩酸又は塩化カルシウム＋希徴酸系の溶媒で、ダウェッ
クス１蟻酸型の場合には希蟻酸又は希蟻酸＋蟻酸ソーダ
系の溶媒）で溶出する。この溶出液はさらに活性炭に吸
着し、アンモニア性アルコール水又はアンモニア性アセ
トン水などで溶出し、さらにこの溶出液は減圧濃縮その
他により過剰のアンモニアを除いた後、陽イオン交ギ敷
樹脂（例えばダウェックス５抗Ｋ素型など）に吸着させ
、希塩酸で熔出する。このようにして得た熔出液を減圧
濃縮したのち、冷室に放置するか又はこれにアルコール
、アセトンなどのｃＧＭＰ不溶性溶媒を添加することに
よりｃＧＭＰの結晶が得られる。また他の方法としては
２ーアミノーＣＡＭＰの反応液中のｃＧＭＰを活性炭に
吸着させ、これをアンモニア性アルコール水又はアンモ
ニア性アセトン水などで溶出し、綾出液より減圧濃縮そ
の他により過剰のアンモニアを除いた後、これに塩酸酸
性でアルコール、ァセトン等の有機溶媒を添加して例え
ば冷室に放置することによりｃＧＭＰの粗結晶を得るこ
とができる。この粗結晶は、上記したような陰イオン交
≠剣樹脂又は腸イオン交≠剣樹脂により精製することが
できる。
活性炭に吸着させ、これをアンモニア性アルコール水又
はアンモニア性アセトン水などで溶出する。この溶出液
はさらに減圧濃縮その他により過剰のアンモニアを除い
た後、陰イオン交換樹脂（例えばダウェックス１クロル
型、ダウェックス１蟻酸型など）に吸着させ、つぎに適
当な溶媒（例えばダウヱックス１クロル型の場合には希
塩酸又は塩化カルシウム＋希徴酸系の溶媒で、ダウェッ
クス１蟻酸型の場合には希蟻酸又は希蟻酸＋蟻酸ソーダ
系の溶媒）で溶出する。この溶出液はさらに活性炭に吸
着し、アンモニア性アルコール水又はアンモニア性アセ
トン水などで溶出し、さらにこの溶出液は減圧濃縮その
他により過剰のアンモニアを除いた後、陽イオン交ギ敷
樹脂（例えばダウェックス５抗Ｋ素型など）に吸着させ
、希塩酸で熔出する。このようにして得た熔出液を減圧
濃縮したのち、冷室に放置するか又はこれにアルコール
、アセトンなどのｃＧＭＰ不溶性溶媒を添加することに
よりｃＧＭＰの結晶が得られる。また他の方法としては
２ーアミノーＣＡＭＰの反応液中のｃＧＭＰを活性炭に
吸着させ、これをアンモニア性アルコール水又はアンモ
ニア性アセトン水などで溶出し、綾出液より減圧濃縮そ
の他により過剰のアンモニアを除いた後、これに塩酸酸
性でアルコール、ァセトン等の有機溶媒を添加して例え
ば冷室に放置することによりｃＧＭＰの粗結晶を得るこ
とができる。この粗結晶は、上記したような陰イオン交
≠剣樹脂又は腸イオン交≠剣樹脂により精製することが
できる。
またこの粗結晶は、水に溶かして塩酸酸性又は硫酸酸性
で脱色樹脂〔例えばデュオラィト（Ｄｕｏｌｉｔｅ）Ｓ
−３０など〕で脱色し、さらにアルコール、アセトン等
のｃＧＭＰ不溶性溶媒を添加して例えば冷室に放置する
ことにより、ｃＧＭＰの結晶を得ることができる。ある
いは又、２−アミノ−ＣＡＭ円の反応液中のｃＧＭＰを
直接陰イオン交換樹脂又は陽イオン交換樹脂に吸着させ
、その溶出液について活性炭による処理、脱色樹脂によ
る精製を行った後、ｃＧＭｍ不潟性溶媒を添加して例え
ば冷室に放置することにより分離、精製を行なってｃＧ
Ｍｍの結晶を得ることもできる。
で脱色樹脂〔例えばデュオラィト（Ｄｕｏｌｉｔｅ）Ｓ
−３０など〕で脱色し、さらにアルコール、アセトン等
のｃＧＭＰ不溶性溶媒を添加して例えば冷室に放置する
ことにより、ｃＧＭＰの結晶を得ることができる。ある
いは又、２−アミノ−ＣＡＭ円の反応液中のｃＧＭＰを
直接陰イオン交換樹脂又は陽イオン交換樹脂に吸着させ
、その溶出液について活性炭による処理、脱色樹脂によ
る精製を行った後、ｃＧＭｍ不潟性溶媒を添加して例え
ば冷室に放置することにより分離、精製を行なってｃＧ
Ｍｍの結晶を得ることもできる。
なお、該反応液中に２−アミノーＣＡＭＰが含有されて
いる場合には、精製の過程において例えばイオン交換樹
脂による吸着処理を施した後、溶出剤の種類、塩濃度、
酸濃度などを適当に選択して溶出陳作を行うことにより
、２ーアミノ肘ＣＡＭＰとｃＧＭＰとを分離することが
できる。
いる場合には、精製の過程において例えばイオン交換樹
脂による吸着処理を施した後、溶出剤の種類、塩濃度、
酸濃度などを適当に選択して溶出陳作を行うことにより
、２ーアミノ肘ＣＡＭＰとｃＧＭＰとを分離することが
できる。
そしてＮａ塩とに分離するのが最も安易である。このよ
うにして本発明方法で製造された物質は、元素分析、リ
ボースの定量、燐の定量、さらに紫外線吸収スペクトル
、赤外線吸収スペクトルを測定した結果、純品のｃＧＭ
Ｐと一致した。
うにして本発明方法で製造された物質は、元素分析、リ
ボースの定量、燐の定量、さらに紫外線吸収スペクトル
、赤外線吸収スペクトルを測定した結果、純品のｃＧＭ
Ｐと一致した。
実施例 １アスベルギルス・ニガーｌＡＭ２５３３を米
麹抽出寒天斜面（健度；１ｏｏ ボーメ）に３０００、
５日間培養して得た胞子を、フスマ２夕、脱脂大豆０．
５夕を水道水で１００の‘とし、これを５００の‘容坂
口振盤フラスコに分注し、１２０００、１５分間殺菌し
たものに援種し、３０ｏ０、３日間「 １４び．ｐ．ｍ
．で振濠培養した。
麹抽出寒天斜面（健度；１ｏｏ ボーメ）に３０００、
５日間培養して得た胞子を、フスマ２夕、脱脂大豆０．
５夕を水道水で１００の‘とし、これを５００の‘容坂
口振盤フラスコに分注し、１２０００、１５分間殺菌し
たものに援種し、３０ｏ０、３日間「 １４び．ｐ．ｍ
．で振濠培養した。
培養物を１０００仇．ｐ．ｍ．、３０分間遠心分離し、
その上燈液を得た。この上燈液１０倣を２％の２ーアミ
ノ−ＣＡＭＰ溶液（１／５モル酢酸バッファー、ｐＨ５
．５に溶解）１００の‘に加え、３がｏで２時間反応さ
せた。
その上燈液を得た。この上燈液１０倣を２％の２ーアミ
ノ−ＣＡＭＰ溶液（１／５モル酢酸バッファー、ｐＨ５
．５に溶解）１００の‘に加え、３がｏで２時間反応さ
せた。
反応液を実施例と同様にペーパークロマトグラフィー法
で調べたところ、ｃＧＭＰＩ．９夕／１００の‘生成し
ていた。次に反応液を活性炭カラム（５×２０伽）に通
液し、ｃＧＭＰを活性炭に吸着させ、蒸留水２そで水洗
後、１％アンモニア含有５０％エタノール１そで港出さ
せた。
で調べたところ、ｃＧＭＰＩ．９夕／１００の‘生成し
ていた。次に反応液を活性炭カラム（５×２０伽）に通
液し、ｃＧＭＰを活性炭に吸着させ、蒸留水２そで水洗
後、１％アンモニア含有５０％エタノール１そで港出さ
せた。
この溶出液を減圧下に５０奴に濃縮した後、アンバーラ
イトＩＣＲ−５０Ｎａカラム（５×３０弧）に通液し、
更に水１００似で水洗した。通過液及び水洗液を合わせ
、これをアルミナ（中性）カラム（５×１５肌）に通液
し、水５０の‘で水洗後、この通過液及び水洗液を減圧
下に２０の‘に濃縮した。該濃縮物にインプロピルアル
コール３倍量の徐々に添加した後、３℃に一夜放置して
ｃＧＭＰのＮａ塩の結晶を晶出させ、渡過により該結晶
を集め、五酸化燐上で真空乾燥した。得られたｃＧＭ円
のＮａ塩は１．２９夕であった。実施例 ２ 第２表に記載の菌を、数６夕を１５０の‘三角フラスコ
に加え、更に水４の‘を添加し、１２０ｑｏ、１５分間
オートクレープで殺菌した培地に接種し、３０００で５
日間培養した。
イトＩＣＲ−５０Ｎａカラム（５×３０弧）に通液し、
更に水１００似で水洗した。通過液及び水洗液を合わせ
、これをアルミナ（中性）カラム（５×１５肌）に通液
し、水５０の‘で水洗後、この通過液及び水洗液を減圧
下に２０の‘に濃縮した。該濃縮物にインプロピルアル
コール３倍量の徐々に添加した後、３℃に一夜放置して
ｃＧＭＰのＮａ塩の結晶を晶出させ、渡過により該結晶
を集め、五酸化燐上で真空乾燥した。得られたｃＧＭ円
のＮａ塩は１．２９夕であった。実施例 ２ 第２表に記載の菌を、数６夕を１５０の‘三角フラスコ
に加え、更に水４の‘を添加し、１２０ｑｏ、１５分間
オートクレープで殺菌した培地に接種し、３０００で５
日間培養した。
培養物に水５０の【を加え、よく燈拝し、１時間静暦後
、１２仇．ｐ．ｍ．ロータリーで１０分間振溢し、これ
をＮｏ．弦の櫨紙で櫨過して清澄液を得た。
、１２仇．ｐ．ｍ．ロータリーで１０分間振溢し、これ
をＮｏ．弦の櫨紙で櫨過して清澄液を得た。
この菌体抽出液１００舷を、ｐＨ５。５のＭ／５酢酸バ
ッファーに２ーアミノ−ＣＡＭ円を２％の割合で添加し
た溶液５００柵に加え、良く蝿洋後、３３００で５時間
反応させた。
ッファーに２ーアミノ−ＣＡＭ円を２％の割合で添加し
た溶液５００柵に加え、良く蝿洋後、３３００で５時間
反応させた。
反応液を１００００夕、２０分間遠心分離し、水不熔物
を除去して透明液を得、該溶液中の生成ＣＧＭ円及び残
存２ーアミノーＣＡＭＰを実験例の如く定量した結果を
第２表に示す。
を除去して透明液を得、該溶液中の生成ＣＧＭ円及び残
存２ーアミノーＣＡＭＰを実験例の如く定量した結果を
第２表に示す。
また、反応液６００Ｍを実施例１の如く処理を行いｃＧ
ＭＰを採取した結果を第２表に示す。第２表
ＭＰを採取した結果を第２表に示す。第２表
Claims (1)
- １ ２−アミノ−アデノシン−３′・５′−環状リン酸
をサイクリツク−３′・５′−グアニル酸に変換するデ
アミナーゼ活性を有し、実質的にホスホジエステラーゼ
活性を有しないアスペルギルス属に属する微生物の培養
物を２−アミノ−アデノシン−３′・５′−環状リン酸
に作用させることを特徴とするサイクリツク−３′・５
′−グアニル酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10995381A JPS606634B2 (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | サイクリツク−３′，５′−グアニル酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10995381A JPS606634B2 (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | サイクリツク−３′，５′−グアニル酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5813395A JPS5813395A (ja) | 1983-01-25 |
| JPS606634B2 true JPS606634B2 (ja) | 1985-02-19 |
Family
ID=14523310
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10995381A Expired JPS606634B2 (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | サイクリツク−３′，５′−グアニル酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS606634B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61295178A (ja) * | 1985-06-21 | 1986-12-25 | Kubota Ltd | 高所作業車 |
| JPS62105728A (ja) * | 1985-11-05 | 1987-05-16 | Fuji Tool & Die Co Ltd | パワ−トレインアウトプツト用切換弁 |
| JPH0514521B2 (ja) * | 1986-06-16 | 1993-02-25 | Iwatani Sangyo Kk |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0615556B2 (ja) * | 1989-11-10 | 1994-03-02 | 旭化成工業株式会社 | ４―カルバモイル―１―β―Ｄ―リボフラノシル―イミダゾリウム―５―オレイト無水結晶 |
-
1981
- 1981-07-16 JP JP10995381A patent/JPS606634B2/ja not_active Expired
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61295178A (ja) * | 1985-06-21 | 1986-12-25 | Kubota Ltd | 高所作業車 |
| JPS62105728A (ja) * | 1985-11-05 | 1987-05-16 | Fuji Tool & Die Co Ltd | パワ−トレインアウトプツト用切換弁 |
| JPH0514521B2 (ja) * | 1986-06-16 | 1993-02-25 | Iwatani Sangyo Kk |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5813395A (ja) | 1983-01-25 |
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