JPS5953428A - 低温殺菌されたヒト−フイブリノ−ゲンおよびその製法 - Google Patents

低温殺菌されたヒト−フイブリノ−ゲンおよびその製法

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JPS5953428A JP58149738A JP14973883A JPS5953428A JP S5953428 A JPS5953428 A JP S5953428A JP 58149738 A JP58149738 A JP 58149738A JP 14973883 A JP14973883 A JP 14973883A JP S5953428 A JPS5953428 A JP S5953428A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は低温殺菌されたヒト−フィブリノーゲン（以下
ｒ　Ｉ｛Ｆ　Ｊと略記する｝、その製法および医薬にお
けるその使用に関する。
ＨＦはいわゆる凝固系列の末期に存在する非常に重要な
凝固因子である。ＨＦは例えば損傷後の凝固系の活性化
においてトロンビンによりそのＩＪＴ浴性形態から止血
および創傷治癒に重要な寄Ｉｉをする不６ｊ性のフィブ
リンに変換される。このＨＦは他のすべての凝固因子の
うちで唯一の有効な基質として存在しそしてまた血漿中
に最高幌度すなわち２５０〜４［１０ｑ％で存在する凝
固因子である。止血および創傷治癒に重要なのでＨＦは
例えば敗血症における播種状面管内凝固（Ｄ丁Ｃ）のよ
うな消費反応において臨床的に使用される。
それと並んで最近フィブリノーゲンはまた主に外科手術
および特に肝臓および牌臓のような軟部器官に縫合の代
りにいわゆる「癒着剤」として甘たに縫合のバッキング
にも使用される。
Ｂ型肝炎保持者の血漿から取得されるＩＰ’は肝炎感染
の危険を包含している。これはいわゆる肝炎捕捉体フラ
クションと見做される他の高分子状かつ難溶性の蛋白質
と連合して存在する血漿７ラクシヨンからそれが取得さ
れるからである。前記した理由からｉＪＦげこれ−ｆで
明白に軍費な適応症にのみ使用された。なぜならすなわ
ち肝炎感染の危１倹が絶対の安全性をもって幻排除され
えなかったからである。これにｒｌこれまでＢ型肝炎に
対してもそして勿論非Ａ／非１１型肝炎に対しても絶対
的に信頼しうる試験が全く存在しなかったこともあずか
っている。
これらの状況から、例えば分別法と後記低温殺菌との組
み合せにより調製されうるような肝炎の危険のないＨＦ
の必要が生じていた。しかしながらＨＦは加熱に対して
不安定な蛋白質に属するので血漿を５８°Ｃ（３分間）
に加熱することにより脱線雑水しうろことは血液凝固の
分野に属する専門家すべてに知られている。従ってドイ
ツ特許第２９１＋５７１１号明細併（米国特許第４．２
９７，３４４号明細書相当）に記載されているように第
■因子を加熱するとフィブリノーゲンのない製剤が生ず
る。ＨＦは０．１１５〜０．４％の濃度においてのみ炭
水化物のような既知安定剤により熱的不活性化から保護
されうるというコーロツバ特許第３５２０４号明細書第
２５／２４頁において確認されている所見もこれと一致
する。
これらの観察および知識を考慮すると１本発明によるＨ
Ｆが７≠までの濃度においてヨーロッパ特許第３５２０
４号明細書に記載のようにＨＦの大部分が沈殿すること
なく１０時間以りにわたって６０℃に加熱されうろこと
は全く驚くべきことであった。
本発明方法によれば純度８５チのＨＦをＨＦｉモル当り
少なくとも１グラム原子のカルシウムを含有するｐＨ６
〜Ｂの水浴液中に１〜７％の濃度に浴、俯させそして安
定剤として炭水化物（単糖類または寡糖類壕ｆ′ｒＣは
糖アルコール）またはかかる炭水化物の混合物およびア
ミノ酸好ましくは蔗糖およびグリシンを添加する。カル
シウム、炭水化物およびアミノ酸は安定化に充分な濃度
に添加されそして好都合な１１日序でＵＣａ（ｔ、炭水
化物例えば蔗糖そしてアミノ酸例えばグリシンがＨＦ沼
液に絵加される。かかる浴液は数時間６０℃丑での温度
に保持さｔＬ１低温殺菌されつる。
それゆえ本発明は慣用の安定剤と並んでＨＦ１モル当９
１〜３７．８Ｘ１０”ダラム原子好ましくは１〜１０グ
ラム原子の濃度のＣａイオンの存在下に実施することを
特徴とする水浴液中のＨＦの低温殺菌法に関する。
慣用の安定剤のうちでは浴沿１００　ｒＪ、当り６５〜
６０ｇの濃度の蔗糖および０５〜６モル／ｌの濃度のグ
リシンが好ましい。
この溶液を常法により加熱する。少なくとも６０℃丑で
そして最高１００℃で少なくとも１０時間そして最高２
４時間の加熱が好都合である。
その一度が６０℃での加熱期間中にさらに増大しうる精
製されたＨＦ溶液中に場合により存在するフィブリン重
合体を加熱後に場合により好ましくは０２５〜１．５モ
ル／ｌのグリシンを用いて沈殿させることにより分離し
そしてＨＦ’を沈殿剤濃度例えばグリシン濃度を少なく
とも２．２モル／ｌ（２，０〜２７上２７モル−５で高
めることにより上澄み液から取得しそして同時に安定剤
から分離する。
これらの段階により、良好な理解度性質を有する非常に
清潔な、生来の重合体を會まない、低温殺菌された）（
Ｆが得られ、これは奸才しくけ約２％（Ｗ／Ｖ）のＨＦ
を有する注入浴液としてまたけ約１０≠（Ｗ／Ｖ）のＨ
Ｆを有する組織りピ着剤として全く幅広く治療上使用さ
れうる。かかる薬剤も同じく本発明の目的である。
下記例により本発明をさらに詳しく説明する。
例 １、　出発物質 紀■因子濃縮物ＩｓのＲＩ４製（ドイツ特許第２９１６
７１１号明細書参照）に際し得られるような２．７モル
／１のグリシン沈殿のフィブリノーゲン含有残留物５０
０ｇを６７℃に加温かつ攪拌下に０１５モル／ｌのＮａ
Ｃｌ浴液１２５０ｍ１中に溶解させそして２Ｎ　ＮａＯ
Ｈを用いてｐＨ７，５に調整した。
溶解後に６係フイプリノーゲ゛ンｉ液１７ｏｏηｄが得
られた。
２、安定化および低温殺菌 Ａ）前記第１項で得られたフィブリノーゲン浴液１７１
１０ｄに５ミリモル／ｌのＣａＣｌ２　・２　Ｈ２Ｏ（
１２５０＋７１９）を加えそして溶解するまで攪拌した
。添加されたＣａＣｌ２が完全に恒久的に溶解した抜、
攪拌および加温下に６０係（Ｗ／Ｖ）の蔗糖を加えた。
蔗糖が完全に溶解した後、１モル／ｌのグリシン（１２
７，５，Ｐ）を加えた。グリシンが完全に溶解した後２
Ｎ　ＮａＯＨを用いてｐ）Ｔ値をＺ５に調整した。ナ１
ｆ白石様の混濁した非常に粘稠な溶液が生じこれを続い
て水浴中６０℃で１０時間培養した。
この加熱されたフィブリノーゲン溶液をフィブリン重合
体を分離しく３）そしてフィブリノーゲンを単離する（
４）ためにさらに下記のように処理した。
安定化され、加熱されたフィブリノーゲン溶液２．９１
を２０℃に温度Ｎ”１節した後緩衝液（ＮａＣｌ０．０
６モル／　１　、クエン酸トリナトリウム０．０２モル
／ｌ）８．７１を用いて１：４の比率で希釈すると加熱
され希釈されたフィブリノーゲン溶液１１６ノが得られ
、これをグリシンを用いて分別沈殿した。
Ｂ）前記方法Ａ）はまた比較的高濃度のＣａ＋イオン例
えば１．８モル／　ｌ　（Ｄ　ＣａＣｌ２・２Ｈ２０（
４４９，８Ｆ）を用いても所望の安定化効果をもって実
施されうる。
３、　便１分子成分、なかんずくフィブリン−重合体の
分離 加熱されそして次に希釈されたフィブリノーゲン溶液に
３７℃で８６．２５１１／ｌ　（＝１．１５モル／ｌ）
のグリシンを加えた。′＃４解後２０℃に冷却しそして
得られた沈殿をストック（Ｓｔｏｃｋ）遠心分離器中で
分離した。
４、安定剤媒体からのフィブリノーゲンの単離前記第６
項で得られた新たに３７℃に加温された１、１５モル／
ｌのグリシンを含有する上澄み液にさらにグリシンを添
加して最終り度２２モル／ｌとなしそしてグリシンが完
全に溶解するまで接伴（′５０分間）した。
沈殿を２０℃に冷却しそしてストック遠心分離器で分離
した。
ヒト−フィブリノーゲンとして静脈注入に使用するには
フィブリノーゲン残留物を０．０１モル／ｌクエン酸ト
リナトリウム−０，１５モル／１ＮａＣ７緩衝液２５０
〇−中に２チ溶解させ、同じ緩衝液で透析しそして清澄
濾過および滅菌濾過した後容＠６０ｍ／　（ＨＦ　１．
９’　）ずつ充填しそして凍結乾燥した。
「フィブリン癒着剤」を調製するには同じ方法で得られ
たフィブリノーゲン残留物をｐＨ７５の下記塩溶液すな
わち ＮａＣ１０，０５モル／ｌ クエン酸トリナトリウム　　０．００５モル／１ＮａＨ
ＣＯ５０，０１モル／ｌ Ｌ−アルギニンモノ塩酸塩　　０．３３％からなる溶液
１２５０　ｍｅ中に４％に浴解させ、透析（俗解緩衝液
）しそして次に超遠心器で３５００ＯＮで１時間遠心し
た。清澄濾過および滅ｍ濾過した後容閂４ゴずつ凍結乾
燥した。
この生成物は再構成しそして紀ｘｉｕ因子およびトロン
ビンと組み合せると軟部の癒’１７および脈管縫合のバ
ッキングに適当である。
ゲゼルシャフト 第１頁の続き ’２１Ｄ発明者　　ハンス・マルチイン・プライスドイ
ツ連邦共和国デー−３５５０マ ルブルク１６アムヴエルトヒエン

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）水溶液中のヒト−フィブリノーゲンが慣用の安定剤
    と並んでヒト−フィブリノーゲン１モル当り１〜３７．
    ８Ｘ１０”ダラム原子の濃１ｙのカルシウムを含有しそ
    して次にそれ自体慣用の方法で加熱されることを特徴と
    する、水溶液中のヒト−フィブリノーゲンの低温殺菌法
    。 ２）慣用の安定剤が単塘類または４糖類またはｍフルコ
    ールおよびアミノ酸であることを特徴とする特許 法。 ３）４糖類として蔗糖が溶液１ｏｉｎｔ！．当り３５〜
    ６０ＩＩの濃度で使用されることを特徴とするＭｆＪ記
    ％　ｆｆ＃ｌｉｔ求の範囲第２項記載の方法。 ４）アミノ酸としてグリシンが０．５〜３モル／ｌの濃
    度で使用されることを！１￥徴とする前記特許請求の範
    囲第２項記載の方法。 ５）フイブリノーゲン１モル当り１〜１０グラム原子の
    濃度のカルシラｌ・を含有する低温殺菌されたヒト−フ
    ィブリノーゲン。 ６）注入（インフュージョン）　’ｌ？ｊ　液中でノｔ
    ｅｈ　ｔｆｅ特許請求の範囲第５項記載の低温殺菌され
    たヒト−フィブリノーゲンの１史用。 ７｝　組織の癒着への前記特許請求の範囲第５項記載の
    低温殺菌されたヒト−フィブリノーゲンの使用。
JP58149738A 1982-08-19 1983-08-18 低温殺菌されたヒトーフィブリノーゲンの製造方法 Expired - Lifetime JPH0694419B2 (ja)

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