JPS58121220A - 寒冷不溶性グロブリンの製造法 - Google Patents
寒冷不溶性グロブリンの製造法Info
- Publication number
- JPS58121220A JPS58121220A JP57004479A JP447982A JPS58121220A JP S58121220 A JPS58121220 A JP S58121220A JP 57004479 A JP57004479 A JP 57004479A JP 447982 A JP447982 A JP 447982A JP S58121220 A JPS58121220 A JP S58121220A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cig
- fibrinogen
- minutes
- globulin
- heat treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は寒冷不溶性グロブ°リン及びフイプリノゲン含
有物、特にＣｏｈｎ ｐ第１分画から寒冷不溶性グロブ
リンを製造する方法に関する。
有物、特にＣｏｈｎ ｐ第１分画から寒冷不溶性グロブ
リンを製造する方法に関する。
寒冷不溶性グロブリン（ｃｏｌｄ ｉｎａｏｌｕｂｌｅ
ｇｌｏｂｕｌｉｎ ：以下ｃ 工：ｃ、と称す）は、従
来大外面トリズシン感受性蛋白（ｌａｒｇｅ ｅｘｔｅ
ｒｎａｌ ｔｒｙ−ｐａｉｎ ５ｅｎｓｉｔｉｖｅ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ：ＬＥＴＳ ） 、細胞表面蛋白（ｃｅ
ｌｌ ｄｕｒｆａｅｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ：Ｃ３Ｐ）
。
ｇｌｏｂｕｌｉｎ ：以下ｃ 工：ｃ、と称す）は、従
来大外面トリズシン感受性蛋白（ｌａｒｇｅ ｅｘｔｅ
ｒｎａｌ ｔｒｙ−ｐａｉｎ ５ｅｎｓｉｔｉｖｅ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ：ＬＥＴＳ ） 、細胞表面蛋白（ｃｅ
ｌｌ ｄｕｒｆａｅｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ：Ｃ３Ｐ）
。
細胞粘着因子（ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｆａｃｔ
ｏｒ ：ＣＡＦ）あるいはオプソニックα２表面結合糖
蛋白（〇−α、８ＢＧ ）などとして呼はれてきたが、
最近で紘概ねＣＩＧあるい・は線維芽細胞膜蛋白（ｆｉ
ｂｒ−ｏｎ＠ｃｔｉｎ ）と呼ばれてお）、血漿の他糾
維芽細胞などの関東系細胞や表皮などの基底膜に存在す
る分子量４４０，０００の糖蛋白である。ＣＩＧにつき
他に知られている物理化学的性状としては、易動度がα
８グロブリンであシ、等電点は５．０、分子吸光係数Ａ
” ２８０ ｎｍがｌＺ９〜１３．０、ｌ眞 Ｓ が１１−１４８．糖含量が５−などかあ！・、
Ｗ けられる。
ｏｒ ：ＣＡＦ）あるいはオプソニックα２表面結合糖
蛋白（〇−α、８ＢＧ ）などとして呼はれてきたが、
最近で紘概ねＣＩＧあるい・は線維芽細胞膜蛋白（ｆｉ
ｂｒ−ｏｎ＠ｃｔｉｎ ）と呼ばれてお）、血漿の他糾
維芽細胞などの関東系細胞や表皮などの基底膜に存在す
る分子量４４０，０００の糖蛋白である。ＣＩＧにつき
他に知られている物理化学的性状としては、易動度がα
８グロブリンであシ、等電点は５．０、分子吸光係数Ａ
” ２８０ ｎｍがｌＺ９〜１３．０、ｌ眞 Ｓ が１１−１４８．糖含量が５−などかあ！・、
Ｗ けられる。
血液凝固に際しては、血液凝固第×１１１因子のトラン
スグルタミネーションの作用によシフイブリンのｒ鎖間
結合が促進され、フィブリンの架橋が形成される。この
際、同じ第×１１１因子の触媒作用により、ＣＩＧｔ−
通じてフィブリンのα船間の架橋が形成され、これによ
）血液凝固はより完全なものとなる。ＣＩＧはまた細胞
間、細胞支持組織間を粘着あるいは結合させる作用があ
）、創傷治癒促進の薬理効果がある。ＣＩＧの薬理効果
としてこれまでに報告されているものには、敗血病性シ
ョックの治療、食細胞のオプソニン作用を高めることに
基づく感染症の治療などがあげられる他、細胞間の粘着
性を高め、癌細胞を壊死に室らしめることによる抗癌、
抗白血病作用のあることが知られており、ＣＩＧの医薬
としての臨床効果に期待がかけられるところは広大なも
のである。
スグルタミネーションの作用によシフイブリンのｒ鎖間
結合が促進され、フィブリンの架橋が形成される。この
際、同じ第×１１１因子の触媒作用により、ＣＩＧｔ−
通じてフィブリンのα船間の架橋が形成され、これによ
）血液凝固はより完全なものとなる。ＣＩＧはまた細胞
間、細胞支持組織間を粘着あるいは結合させる作用があ
）、創傷治癒促進の薬理効果がある。ＣＩＧの薬理効果
としてこれまでに報告されているものには、敗血病性シ
ョックの治療、食細胞のオプソニン作用を高めることに
基づく感染症の治療などがあげられる他、細胞間の粘着
性を高め、癌細胞を壊死に室らしめることによる抗癌、
抗白血病作用のあることが知られており、ＣＩＧの医薬
としての臨床効果に期待がかけられるところは広大なも
のである。
ＣＩＧは一般にＣｏｈｎの第１分画またはＡＣＤ（酸性
クエン酸デキストロース）血漿の低温沈澱物から得られ
ることがすでに知られてｉる。（Ｍｏ−ｓｅｓｓｏｎ、
Ｍ−Ｗ、、 ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅｍ、。
クエン酸デキストロース）血漿の低温沈澱物から得られ
ることがすでに知られてｉる。（Ｍｏ−ｓｅｓｓｏｎ、
Ｍ−Ｗ、、 ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅｍ、。
２４５．５７２８．１９７０年およびＭａｔａｕｄａ。
Ｍ、、 ｅｔ ａｌ、 Ａｎｎ、 Ｎ、 Ｙ＊ Ａｃａ
ｄ、 Ｓｅｔ、、 ３１２゜７４．１９７８年）０ こ
れら原料はいずれもＣＩＧの他にフイブリノゲン全大量
に含有する物質である０ ＣＩＧの製造で最も問題となるのはフイブリノグンの分
離である。なぜならＣＩＧはフイブリノグンとの親和性
が強く、通常の分画においては、フイプリノゲンと極め
て類似した挙動金示すからである０このことば上述のＭ
ｏ ｓ ｅ ａ ａ ｏ ｎやＭａｔｓｕｄａの文献に
明らかにされている。
ｄ、 Ｓｅｔ、、 ３１２゜７４．１９７８年）０ こ
れら原料はいずれもＣＩＧの他にフイブリノゲン全大量
に含有する物質である０ ＣＩＧの製造で最も問題となるのはフイブリノグンの分
離である。なぜならＣＩＧはフイブリノグンとの親和性
が強く、通常の分画においては、フイプリノゲンと極め
て類似した挙動金示すからである０このことば上述のＭ
ｏ ｓ ｅ ａ ａ ｏ ｎやＭａｔｓｕｄａの文献に
明らかにされている。
ところで、彼らはグリシン／エタノール分画によ、りＣ
ＩＧとフイブリノゲンの分離を行っているが、この方法
ではフイブリノゲンの除去率は５０チにすぎない。現在
までのところフイプリノゲン全比較的効率よく除去する
方法としては、グリシン／エタノール分画とイオン交換
樹脂によるクロマトグラフィーの２段階法及び５６℃で
４分間の加熱処理法（Ｍｏｒｉ、 Ｋ、、 ａｔ ａｌ
、 ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ、 １６
． ８０３． １９７９年）が知られている。ところが
、前者の方法Ｆｓ、ＣＩＧ回収量が低く、製造時間およ
び製造コスト等の観点から、また後者の方法は大規模処
理の困難さ等の観点から、即ち、５６℃、４分間の加熱
処理においてはこの処理を大規模で行う場合、ＣＩＧが
５０℃〜５６℃に長時間維持されることから、ＣＩＧの
回収率は５０チ〜６０チに低下する等の観点から大規模
製造に適した方法とはいえない。また５６℃への到達時
間を短縮させるために、外液の温度を７０℃以上に高く
した場合、ＣＩＧの熱変性によシその回収率は小規模で
行う場合でも約５（ｌに低下する。
ＩＧとフイブリノゲンの分離を行っているが、この方法
ではフイブリノゲンの除去率は５０チにすぎない。現在
までのところフイプリノゲン全比較的効率よく除去する
方法としては、グリシン／エタノール分画とイオン交換
樹脂によるクロマトグラフィーの２段階法及び５６℃で
４分間の加熱処理法（Ｍｏｒｉ、 Ｋ、、 ａｔ ａｌ
、 ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ、 １６
． ８０３． １９７９年）が知られている。ところが
、前者の方法Ｆｓ、ＣＩＧ回収量が低く、製造時間およ
び製造コスト等の観点から、また後者の方法は大規模処
理の困難さ等の観点から、即ち、５６℃、４分間の加熱
処理においてはこの処理を大規模で行う場合、ＣＩＧが
５０℃〜５６℃に長時間維持されることから、ＣＩＧの
回収率は５０チ〜６０チに低下する等の観点から大規模
製造に適した方法とはいえない。また５６℃への到達時
間を短縮させるために、外液の温度を７０℃以上に高く
した場合、ＣＩＧの熱変性によシその回収率は小規模で
行う場合でも約５（ｌに低下する。
そこで本発明者らはＣＩＧの損失が少なく、かつフイプ
リノゲンを充分に除去し得、しかも大規模ＣＩ Ｇ製造
に適した方法を完成すべく種々研究全行ったところ、Ｃ
ＩＧは４５℃〜５２℃にてたとえば９０分加熱しても安
定であるのに対して、フイプリノゲンは４５℃〜５２℃
で、友とえは３０分加熱によってほぼ完全に変性・除去
されることを見出しさらに研究を重ねて本発ＢＡを完成
した０即ち、本発明は、ＣＩＧとフイブリノゲンとの分
離を４５℃〜５２℃の加熱処理にて行うことによるＣＩ
Ｇ及びフイブリノグン含有智からのＣＩＧの製造法であ
る。
リノゲンを充分に除去し得、しかも大規模ＣＩ Ｇ製造
に適した方法を完成すべく種々研究全行ったところ、Ｃ
ＩＧは４５℃〜５２℃にてたとえば９０分加熱しても安
定であるのに対して、フイプリノゲンは４５℃〜５２℃
で、友とえは３０分加熱によってほぼ完全に変性・除去
されることを見出しさらに研究を重ねて本発ＢＡを完成
した０即ち、本発明は、ＣＩＧとフイブリノゲンとの分
離を４５℃〜５２℃の加熱処理にて行うことによるＣＩ
Ｇ及びフイブリノグン含有智からのＣＩＧの製造法であ
る。
本発明における出発原料、即ち加熱対象物はＣＩＧとフ
イブリノゲンを含有するものでちゃ１その具体例として
はたとえｔｆｃｏｈｎの第１分画、ＡＣＤ血漿の低温沈
澱智などが列挙される。これらは一般に水溶液（生理食
塩溶液、緩衝液など）の状態で加熱処理される。
イブリノゲンを含有するものでちゃ１その具体例として
はたとえｔｆｃｏｈｎの第１分画、ＡＣＤ血漿の低温沈
澱智などが列挙される。これらは一般に水溶液（生理食
塩溶液、緩衝液など）の状態で加熱処理される。
加熱温度は約り５℃〜約５２℃、好ましくは約５０℃で
６夛、加熱時間社、フイブリノゲンをほぼ分解するに十
分な時間でかつＣＩＧの分解の少ない時間であればよく
、通常約２０分〜約９０分、好ましくは約３０分である
。
６夛、加熱時間社、フイブリノゲンをほぼ分解するに十
分な時間でかつＣＩＧの分解の少ない時間であればよく
、通常約２０分〜約９０分、好ましくは約３０分である
。
本発明に関する加熱処理を大規模製造に適用し九場合、
５ｏｏｔの被加熱液が３７℃から５０℃に上昇するのに
要した時間は、外液を５２℃としたとき、２０分であっ
た０また、たとえ５０℃への到達時間に１時間を要した
としても、ＣＩＧの安定性に影響はない０このことから
、本発明は大規模製造において、ＣＩＧとフイブリノゲ
ンの分離上行うのに容易で有用な方法である。
５ｏｏｔの被加熱液が３７℃から５０℃に上昇するのに
要した時間は、外液を５２℃としたとき、２０分であっ
た０また、たとえ５０℃への到達時間に１時間を要した
としても、ＣＩＧの安定性に影響はない０このことから
、本発明は大規模製造において、ＣＩＧとフイブリノゲ
ンの分離上行うのに容易で有用な方法である。
本発明で得られ九ｃＩＧ水溶液は、硫安分画、イオン交
換クロマトグラフィー等の公知の方法で更に精製したの
ち、先に本発明者らによｐ確立されたＣＩＧ水酊液にお
ける肝炎フィルス不活化のための６０℃、１０時間の加
熱処理（特願昭５６−２７４４８）ｉ施すことにより、
医薬品として折供される。
換クロマトグラフィー等の公知の方法で更に精製したの
ち、先に本発明者らによｐ確立されたＣＩＧ水酊液にお
ける肝炎フィルス不活化のための６０℃、１０時間の加
熱処理（特願昭５６−２７４４８）ｉ施すことにより、
医薬品として折供される。
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらによシ何ら限定されるものではない。
発明はこれらによシ何ら限定されるものではない。
実施例１
プールした正常成人血漿よジェタノール分画して得られ
る両分−１に、１０倍量の０．０５５Ｍクエン酸す）
ＩＪウム緩衝液、ｐＨ６，４を加え溶解する。このとき
プラスミンによるＣＩＧの分解を防ぐ次めに０．０２５
ＭのＥＤＴＡ−２ＮＩＬ（エチレンジアミン４酢酸２ナ
トリウム塩）およびアプロチニン１０単位／ｄｆ加える
。このようにして得た両分−■溶解液を小分は分注し、
急速に５０℃に到達せしめたのち１０分、２０分、３０
分、４０分、６０分、９０分および１２０分の加熱処理
を施した。加熱処理によシ生じた沈澱は遠心分離により
除去したのち、上清中のＣＩＧ量とフイブリノゲン量を
一元免疫拡散法で定量した。第１図に加熱処理前に対す
る総ＣＩＧ値および総フィブリノグン値の残存率を示し
た。
る両分−１に、１０倍量の０．０５５Ｍクエン酸す）
ＩＪウム緩衝液、ｐＨ６，４を加え溶解する。このとき
プラスミンによるＣＩＧの分解を防ぐ次めに０．０２５
ＭのＥＤＴＡ−２ＮＩＬ（エチレンジアミン４酢酸２ナ
トリウム塩）およびアプロチニン１０単位／ｄｆ加える
。このようにして得た両分−■溶解液を小分は分注し、
急速に５０℃に到達せしめたのち１０分、２０分、３０
分、４０分、６０分、９０分および１２０分の加熱処理
を施した。加熱処理によシ生じた沈澱は遠心分離により
除去したのち、上清中のＣＩＧ量とフイブリノゲン量を
一元免疫拡散法で定量した。第１図に加熱処理前に対す
る総ＣＩＧ値および総フィブリノグン値の残存率を示し
た。
この結果、ＣＩＧは加熱２０分後で９６チ、３０分後で
９０チ、９０分後で８３ｑＩｂ、１２０分後て７０１残
存しｆｔｆ）Ｋ対し、フイプリノグンは最初の１０分間
は比較的安定であるが、２０分軽過すると２５％に減少
し、３０分ではほぼ完全に除去された。
９０チ、９０分後で８３ｑＩｂ、１２０分後て７０１残
存しｆｔｆ）Ｋ対し、フイプリノグンは最初の１０分間
は比較的安定であるが、２０分軽過すると２５％に減少
し、３０分ではほぼ完全に除去された。
実施例２
５０１１の画分−■に５００ｔの実施例１で用いたもの
と同様の緩衝液を加え溶解する。溶解液を５２℃の水槽
に入れ、溶解液が５０℃に到達してから３０分間加熱し
た。このとき、溶解液が３７℃から５０℃に封達するの
に要した時間は２０分であった。加熱終了後、急速に室
温にまで冷却したのち、１００メツシユのナイロン紗に
よるろ過により加熱中に生じた沈澱物を除去した。ろ液
は更に、微細な沈澱を除去する九めに遠心分離したのち
、上清中のＣＩＧ量とフイブリノグン量Ｖ −元免疫拡
散法で定量した。その結果、加熱処理前に対する総ＣＩ
Ｇ値の残存率は９２チ、フイブリノゲンの除去率は１０
０％であつ九。またＣＩＧは本加熱処理により、両分−
■溶解液の５倍に精製された。
と同様の緩衝液を加え溶解する。溶解液を５２℃の水槽
に入れ、溶解液が５０℃に到達してから３０分間加熱し
た。このとき、溶解液が３７℃から５０℃に封達するの
に要した時間は２０分であった。加熱終了後、急速に室
温にまで冷却したのち、１００メツシユのナイロン紗に
よるろ過により加熱中に生じた沈澱物を除去した。ろ液
は更に、微細な沈澱を除去する九めに遠心分離したのち
、上清中のＣＩＧ量とフイブリノグン量Ｖ −元免疫拡
散法で定量した。その結果、加熱処理前に対する総ＣＩ
Ｇ値の残存率は９２チ、フイブリノゲンの除去率は１０
０％であつ九。またＣＩＧは本加熱処理により、両分−
■溶解液の５倍に精製された。
第１図は５０℃加熱処理した場合の総ＣＩＧ及び総フイ
ブリノゲン量の残存率を示すグラフである０
ブリノゲン量の残存率を示すグラフである０
Claims (2)
- （１）寒冷不溶性グロブリンとフイブリノゲンとの分離
を４５℃〜５２℃の加熱処理にて行うことを特徴とする
寒冷不溶性グロブリン及びフイブリンノゲン含有物から
の寒冷不溶性グロブリンの製造方法。 - （２）−加熱処理時間が２０分〜９０分である特許請求
の範囲第（１）項記載の寒冷不溶性グロブリリンの製造
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57004479A JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57004479A JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58121220A true JPS58121220A (ja) | 1983-07-19 |
| JPH0345080B2 JPH0345080B2 (ja) | 1991-07-09 |
Family
ID=11585239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57004479A Granted JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58121220A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6239520U (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-09 | ||
| WO1987007505A1 (en) * | 1986-06-13 | 1987-12-17 | Japan Immuno Research Laboratories Co., Ltd. | Wound-healing drug and cosmetics |
| GB2200282A (en) * | 1986-06-13 | 1988-08-03 | Japan Immuno Res Lab | Wound-healing drug and cosmetics |
-
1982
- 1982-01-13 JP JP57004479A patent/JPS58121220A/ja active Granted
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6239520U (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-09 | ||
| JPH0415062Y2 (ja) * | 1985-08-26 | 1992-04-06 | ||
| WO1987007505A1 (en) * | 1986-06-13 | 1987-12-17 | Japan Immuno Research Laboratories Co., Ltd. | Wound-healing drug and cosmetics |
| GB2200282A (en) * | 1986-06-13 | 1988-08-03 | Japan Immuno Res Lab | Wound-healing drug and cosmetics |
| GB2200282B (en) * | 1986-06-13 | 1990-06-13 | Japan Immuno Res Lab | Wound treating agent and cosmetic |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0345080B2 (ja) | 1991-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1126652A (en) | Antithrombin preparation and process for the production thereof | |
| USRE29698E (en) | Stabilization of AHF using heparin | |
| CA1074698A (en) | Method of collecting anti-hemophilic factor viii from blood and blood plasma | |
| US8598319B2 (en) | Process for separating proteins fibrinogen, factor XIII and biological glue from a solubilized plasma fraction and for preparing lyophilised concentrates of said proteins | |
| DE2916711A1 (de) | Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung | |
| JPH0348169B2 (ja) | ||
| JPS5953428A (ja) | 低温殺菌されたヒト−フイブリノ−ゲンおよびその製法 | |
| EP2293776B1 (de) | Lagerstabiles, funktionell intaktes virus-inaktiviertes fibrinogen | |
| US4104266A (en) | Method for preparation of antihemophilic factor | |
| EP0173242B2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer pasteurisierten, isoagglutininfreien Faktor VIII Präparation aus einem Kryopräzipitat | |
| DK163107B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et koncentrat af antihaemofilisk faktor med hoej renhed | |
| JPS5967228A (ja) | 寒冷不溶性グロブリンの凍結乾燥方法 | |
| EP0512883B1 (fr) | Procédé de préparation d'un concentré de facteur XI de la coagulation sanguine à haute activité spécifique, approprié à un usage thérapeutique | |
| USH1509H (en) | Heparin enhanced process for separating antihemophilic factor (Factor VIII) and fibronectin from cryoprecipitate | |
| US4348315A (en) | Process in purification and concentration of the factor VIII-complex | |
| JPH0348888B2 (ja) | ||
| DE3643182A1 (de) | Arzneimittel enthaltend das gewebeprotein pp4, verfahren zur herstellung von pp4 und zu seiner pasteurisierung sowie die verwendung von pp4 | |
| US4285933A (en) | Process for concentrating blood coagulation Factor XIII derived from human placentae | |
| US4294826A (en) | Process for the preparation of highly purified antihemophilic factor | |
| EP3404037B1 (en) | Method for purifying fibrinogen | |
| US4822872A (en) | Method of purifying factor VIII | |
| JPS58121220A (ja) | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 | |
| EP0127025A2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Antihämophiliefaktor-Konzentrats | |
| JPS6242887B2 (ja) | ||
| US4169829A (en) | Process for the preparation of purified albumin and albumin obtained by said process |