JPS58121220A - 寒冷不溶性グロブリンの製造法 - Google Patents
寒冷不溶性グロブリンの製造法Info
- Publication number
- JPS58121220A JPS58121220A JP57004479A JP447982A JPS58121220A JP S58121220 A JPS58121220 A JP S58121220A JP 57004479 A JP57004479 A JP 57004479A JP 447982 A JP447982 A JP 447982A JP S58121220 A JPS58121220 A JP S58121220A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cig
- fibrinogen
- minutes
- globulin
- heat treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は寒冷不溶性グロブ°リン及びフイプリノゲン含
有物、特にCohn p第1分画から寒冷不溶性グロブ
リンを製造する方法に関する。
有物、特にCohn p第1分画から寒冷不溶性グロブ
リンを製造する方法に関する。
寒冷不溶性グロブリン(cold inaoluble
globulin :以下c 工:c、と称す)は、従
来大外面トリズシン感受性蛋白(large exte
rnal try−pain 5ensitive p
rotein :LETS ) 、細胞表面蛋白(ce
ll durfaee protein :C3P)
。
globulin :以下c 工:c、と称す)は、従
来大外面トリズシン感受性蛋白(large exte
rnal try−pain 5ensitive p
rotein :LETS ) 、細胞表面蛋白(ce
ll durfaee protein :C3P)
。
細胞粘着因子(cell adhesion fact
or :CAF)あるいはオプソニックα2表面結合糖
蛋白(〇−α、8BG )などとして呼はれてきたが、
最近で紘概ねCIGあるい・は線維芽細胞膜蛋白(fi
br−on@ctin )と呼ばれてお)、血漿の他糾
維芽細胞などの関東系細胞や表皮などの基底膜に存在す
る分子量440,000の糖蛋白である。CIGにつき
他に知られている物理化学的性状としては、易動度がα
8グロブリンであシ、等電点は5.0、分子吸光係数A
” 280 nmがlZ9〜13.0、l眞 S が11−148.糖含量が5−などかあ!・、
W けられる。
or :CAF)あるいはオプソニックα2表面結合糖
蛋白(〇−α、8BG )などとして呼はれてきたが、
最近で紘概ねCIGあるい・は線維芽細胞膜蛋白(fi
br−on@ctin )と呼ばれてお)、血漿の他糾
維芽細胞などの関東系細胞や表皮などの基底膜に存在す
る分子量440,000の糖蛋白である。CIGにつき
他に知られている物理化学的性状としては、易動度がα
8グロブリンであシ、等電点は5.0、分子吸光係数A
” 280 nmがlZ9〜13.0、l眞 S が11−148.糖含量が5−などかあ!・、
W けられる。
血液凝固に際しては、血液凝固第×111因子のトラン
スグルタミネーションの作用によシフイブリンのr鎖間
結合が促進され、フィブリンの架橋が形成される。この
際、同じ第×111因子の触媒作用により、CIGt−
通じてフィブリンのα船間の架橋が形成され、これによ
)血液凝固はより完全なものとなる。CIGはまた細胞
間、細胞支持組織間を粘着あるいは結合させる作用があ
)、創傷治癒促進の薬理効果がある。CIGの薬理効果
としてこれまでに報告されているものには、敗血病性シ
ョックの治療、食細胞のオプソニン作用を高めることに
基づく感染症の治療などがあげられる他、細胞間の粘着
性を高め、癌細胞を壊死に室らしめることによる抗癌、
抗白血病作用のあることが知られており、CIGの医薬
としての臨床効果に期待がかけられるところは広大なも
のである。
スグルタミネーションの作用によシフイブリンのr鎖間
結合が促進され、フィブリンの架橋が形成される。この
際、同じ第×111因子の触媒作用により、CIGt−
通じてフィブリンのα船間の架橋が形成され、これによ
)血液凝固はより完全なものとなる。CIGはまた細胞
間、細胞支持組織間を粘着あるいは結合させる作用があ
)、創傷治癒促進の薬理効果がある。CIGの薬理効果
としてこれまでに報告されているものには、敗血病性シ
ョックの治療、食細胞のオプソニン作用を高めることに
基づく感染症の治療などがあげられる他、細胞間の粘着
性を高め、癌細胞を壊死に室らしめることによる抗癌、
抗白血病作用のあることが知られており、CIGの医薬
としての臨床効果に期待がかけられるところは広大なも
のである。
CIGは一般にCohnの第1分画またはACD(酸性
クエン酸デキストロース)血漿の低温沈澱物から得られ
ることがすでに知られてiる。(Mo−sesson、
M−W、、 et al、 J、 Biol、 C
hem、。
クエン酸デキストロース)血漿の低温沈澱物から得られ
ることがすでに知られてiる。(Mo−sesson、
M−W、、 et al、 J、 Biol、 C
hem、。
245.5728.1970年およびMatauda。
M、、 et al、 Ann、 N、 Y* Aca
d、 Set、、 312゜74.1978年)0 こ
れら原料はいずれもCIGの他にフイブリノゲン全大量
に含有する物質である0 CIGの製造で最も問題となるのはフイブリノグンの分
離である。なぜならCIGはフイブリノグンとの親和性
が強く、通常の分画においては、フイプリノゲンと極め
て類似した挙動金示すからである0このことば上述のM
o s e a a o nやMatsudaの文献に
明らかにされている。
d、 Set、、 312゜74.1978年)0 こ
れら原料はいずれもCIGの他にフイブリノゲン全大量
に含有する物質である0 CIGの製造で最も問題となるのはフイブリノグンの分
離である。なぜならCIGはフイブリノグンとの親和性
が強く、通常の分画においては、フイプリノゲンと極め
て類似した挙動金示すからである0このことば上述のM
o s e a a o nやMatsudaの文献に
明らかにされている。
ところで、彼らはグリシン/エタノール分画によ、りC
IGとフイブリノゲンの分離を行っているが、この方法
ではフイブリノゲンの除去率は50チにすぎない。現在
までのところフイプリノゲン全比較的効率よく除去する
方法としては、グリシン/エタノール分画とイオン交換
樹脂によるクロマトグラフィーの2段階法及び56℃で
4分間の加熱処理法(Mori、 K、、 at al
、 ThrombosisResearch、 16
. 803. 1979年)が知られている。ところが
、前者の方法Fs、CIG回収量が低く、製造時間およ
び製造コスト等の観点から、また後者の方法は大規模処
理の困難さ等の観点から、即ち、56℃、4分間の加熱
処理においてはこの処理を大規模で行う場合、CIGが
50℃〜56℃に長時間維持されることから、CIGの
回収率は50チ〜60チに低下する等の観点から大規模
製造に適した方法とはいえない。また56℃への到達時
間を短縮させるために、外液の温度を70℃以上に高く
した場合、CIGの熱変性によシその回収率は小規模で
行う場合でも約5(lに低下する。
IGとフイブリノゲンの分離を行っているが、この方法
ではフイブリノゲンの除去率は50チにすぎない。現在
までのところフイプリノゲン全比較的効率よく除去する
方法としては、グリシン/エタノール分画とイオン交換
樹脂によるクロマトグラフィーの2段階法及び56℃で
4分間の加熱処理法(Mori、 K、、 at al
、 ThrombosisResearch、 16
. 803. 1979年)が知られている。ところが
、前者の方法Fs、CIG回収量が低く、製造時間およ
び製造コスト等の観点から、また後者の方法は大規模処
理の困難さ等の観点から、即ち、56℃、4分間の加熱
処理においてはこの処理を大規模で行う場合、CIGが
50℃〜56℃に長時間維持されることから、CIGの
回収率は50チ〜60チに低下する等の観点から大規模
製造に適した方法とはいえない。また56℃への到達時
間を短縮させるために、外液の温度を70℃以上に高く
した場合、CIGの熱変性によシその回収率は小規模で
行う場合でも約5(lに低下する。
そこで本発明者らはCIGの損失が少なく、かつフイプ
リノゲンを充分に除去し得、しかも大規模CI G製造
に適した方法を完成すべく種々研究全行ったところ、C
IGは45℃〜52℃にてたとえば90分加熱しても安
定であるのに対して、フイプリノゲンは45℃〜52℃
で、友とえは30分加熱によってほぼ完全に変性・除去
されることを見出しさらに研究を重ねて本発BAを完成
した0即ち、本発明は、CIGとフイブリノゲンとの分
離を45℃〜52℃の加熱処理にて行うことによるCI
G及びフイブリノグン含有智からのCIGの製造法であ
る。
リノゲンを充分に除去し得、しかも大規模CI G製造
に適した方法を完成すべく種々研究全行ったところ、C
IGは45℃〜52℃にてたとえば90分加熱しても安
定であるのに対して、フイプリノゲンは45℃〜52℃
で、友とえは30分加熱によってほぼ完全に変性・除去
されることを見出しさらに研究を重ねて本発BAを完成
した0即ち、本発明は、CIGとフイブリノゲンとの分
離を45℃〜52℃の加熱処理にて行うことによるCI
G及びフイブリノグン含有智からのCIGの製造法であ
る。
本発明における出発原料、即ち加熱対象物はCIGとフ
イブリノゲンを含有するものでちゃ1その具体例として
はたとえtfcohnの第1分画、ACD血漿の低温沈
澱智などが列挙される。これらは一般に水溶液(生理食
塩溶液、緩衝液など)の状態で加熱処理される。
イブリノゲンを含有するものでちゃ1その具体例として
はたとえtfcohnの第1分画、ACD血漿の低温沈
澱智などが列挙される。これらは一般に水溶液(生理食
塩溶液、緩衝液など)の状態で加熱処理される。
加熱温度は約り5℃〜約52℃、好ましくは約50℃で
6夛、加熱時間社、フイブリノゲンをほぼ分解するに十
分な時間でかつCIGの分解の少ない時間であればよく
、通常約20分〜約90分、好ましくは約30分である
。
6夛、加熱時間社、フイブリノゲンをほぼ分解するに十
分な時間でかつCIGの分解の少ない時間であればよく
、通常約20分〜約90分、好ましくは約30分である
。
本発明に関する加熱処理を大規模製造に適用し九場合、
5ootの被加熱液が37℃から50℃に上昇するのに
要した時間は、外液を52℃としたとき、20分であっ
た0また、たとえ50℃への到達時間に1時間を要した
としても、CIGの安定性に影響はない0このことから
、本発明は大規模製造において、CIGとフイブリノゲ
ンの分離上行うのに容易で有用な方法である。
5ootの被加熱液が37℃から50℃に上昇するのに
要した時間は、外液を52℃としたとき、20分であっ
た0また、たとえ50℃への到達時間に1時間を要した
としても、CIGの安定性に影響はない0このことから
、本発明は大規模製造において、CIGとフイブリノゲ
ンの分離上行うのに容易で有用な方法である。
本発明で得られ九cIG水溶液は、硫安分画、イオン交
換クロマトグラフィー等の公知の方法で更に精製したの
ち、先に本発明者らによp確立されたCIG水酊液にお
ける肝炎フィルス不活化のための60℃、10時間の加
熱処理(特願昭56−27448)i施すことにより、
医薬品として折供される。
換クロマトグラフィー等の公知の方法で更に精製したの
ち、先に本発明者らによp確立されたCIG水酊液にお
ける肝炎フィルス不活化のための60℃、10時間の加
熱処理(特願昭56−27448)i施すことにより、
医薬品として折供される。
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらによシ何ら限定されるものではない。
発明はこれらによシ何ら限定されるものではない。
実施例1
プールした正常成人血漿よジェタノール分画して得られ
る両分−1に、10倍量の0.055Mクエン酸す)
IJウム緩衝液、pH6,4を加え溶解する。このとき
プラスミンによるCIGの分解を防ぐ次めに0.025
MのEDTA−2NIL(エチレンジアミン4酢酸2ナ
トリウム塩)およびアプロチニン10単位/df加える
。このようにして得た両分−■溶解液を小分は分注し、
急速に50℃に到達せしめたのち10分、20分、30
分、40分、60分、90分および120分の加熱処理
を施した。加熱処理によシ生じた沈澱は遠心分離により
除去したのち、上清中のCIG量とフイブリノゲン量を
一元免疫拡散法で定量した。第1図に加熱処理前に対す
る総CIG値および総フィブリノグン値の残存率を示し
た。
る両分−1に、10倍量の0.055Mクエン酸す)
IJウム緩衝液、pH6,4を加え溶解する。このとき
プラスミンによるCIGの分解を防ぐ次めに0.025
MのEDTA−2NIL(エチレンジアミン4酢酸2ナ
トリウム塩)およびアプロチニン10単位/df加える
。このようにして得た両分−■溶解液を小分は分注し、
急速に50℃に到達せしめたのち10分、20分、30
分、40分、60分、90分および120分の加熱処理
を施した。加熱処理によシ生じた沈澱は遠心分離により
除去したのち、上清中のCIG量とフイブリノゲン量を
一元免疫拡散法で定量した。第1図に加熱処理前に対す
る総CIG値および総フィブリノグン値の残存率を示し
た。
この結果、CIGは加熱20分後で96チ、30分後で
90チ、90分後で83qIb、120分後て701残
存しftf)K対し、フイプリノグンは最初の10分間
は比較的安定であるが、20分軽過すると25%に減少
し、30分ではほぼ完全に除去された。
90チ、90分後で83qIb、120分後て701残
存しftf)K対し、フイプリノグンは最初の10分間
は比較的安定であるが、20分軽過すると25%に減少
し、30分ではほぼ完全に除去された。
実施例2
5011の画分−■に500tの実施例1で用いたもの
と同様の緩衝液を加え溶解する。溶解液を52℃の水槽
に入れ、溶解液が50℃に到達してから30分間加熱し
た。このとき、溶解液が37℃から50℃に封達するの
に要した時間は20分であった。加熱終了後、急速に室
温にまで冷却したのち、100メツシユのナイロン紗に
よるろ過により加熱中に生じた沈澱物を除去した。ろ液
は更に、微細な沈澱を除去する九めに遠心分離したのち
、上清中のCIG量とフイブリノグン量V −元免疫拡
散法で定量した。その結果、加熱処理前に対する総CI
G値の残存率は92チ、フイブリノゲンの除去率は10
0%であつ九。またCIGは本加熱処理により、両分−
■溶解液の5倍に精製された。
と同様の緩衝液を加え溶解する。溶解液を52℃の水槽
に入れ、溶解液が50℃に到達してから30分間加熱し
た。このとき、溶解液が37℃から50℃に封達するの
に要した時間は20分であった。加熱終了後、急速に室
温にまで冷却したのち、100メツシユのナイロン紗に
よるろ過により加熱中に生じた沈澱物を除去した。ろ液
は更に、微細な沈澱を除去する九めに遠心分離したのち
、上清中のCIG量とフイブリノグン量V −元免疫拡
散法で定量した。その結果、加熱処理前に対する総CI
G値の残存率は92チ、フイブリノゲンの除去率は10
0%であつ九。またCIGは本加熱処理により、両分−
■溶解液の5倍に精製された。
第1図は50℃加熱処理した場合の総CIG及び総フイ
ブリノゲン量の残存率を示すグラフである0
ブリノゲン量の残存率を示すグラフである0
Claims (2)
- (1)寒冷不溶性グロブリンとフイブリノゲンとの分離
を45℃〜52℃の加熱処理にて行うことを特徴とする
寒冷不溶性グロブリン及びフイブリンノゲン含有物から
の寒冷不溶性グロブリンの製造方法。 - (2)−加熱処理時間が20分〜90分である特許請求
の範囲第(1)項記載の寒冷不溶性グロブリリンの製造
方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP57004479A JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP57004479A JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS58121220A true JPS58121220A (ja) | 1983-07-19 |
JPH0345080B2 JPH0345080B2 (ja) | 1991-07-09 |
Family
ID=11585239
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP57004479A Granted JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS58121220A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6239520U (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-09 | ||
WO1987007505A1 (en) * | 1986-06-13 | 1987-12-17 | Japan Immuno Research Laboratories Co., Ltd. | Wound-healing drug and cosmetics |
GB2200282A (en) * | 1986-06-13 | 1988-08-03 | Japan Immuno Res Lab | Wound-healing drug and cosmetics |
-
1982
- 1982-01-13 JP JP57004479A patent/JPS58121220A/ja active Granted
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6239520U (ja) * | 1985-08-26 | 1987-03-09 | ||
JPH0415062Y2 (ja) * | 1985-08-26 | 1992-04-06 | ||
WO1987007505A1 (en) * | 1986-06-13 | 1987-12-17 | Japan Immuno Research Laboratories Co., Ltd. | Wound-healing drug and cosmetics |
GB2200282A (en) * | 1986-06-13 | 1988-08-03 | Japan Immuno Res Lab | Wound-healing drug and cosmetics |
GB2200282B (en) * | 1986-06-13 | 1990-06-13 | Japan Immuno Res Lab | Wound treating agent and cosmetic |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0345080B2 (ja) | 1991-07-09 |
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