JPH0345080B2 - - Google Patents
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- JPH0345080B2 JPH0345080B2 JP57004479A JP447982A JPH0345080B2 JP H0345080 B2 JPH0345080 B2 JP H0345080B2 JP 57004479 A JP57004479 A JP 57004479A JP 447982 A JP447982 A JP 447982A JP H0345080 B2 JPH0345080 B2 JP H0345080B2
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- fibrinogen
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Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は寒冷不溶性グロブリン及びフイブリノ
ゲン含有物、特にCohnの第１分画から寒冷不溶
性グロブリンを製造する方法に関する。
ゲン含有物、特にCohnの第１分画から寒冷不溶
性グロブリンを製造する方法に関する。
寒冷不溶性グロブリン（cold insoluble
globulin：以下CIGと称す）は、従来大外面トリ
プシン感受性蛋白（large external trypsin
sensitive protein：LETS）、細胞表面蛋白（cell
surface protein：CSP）、細胞粘着因子（cell
adhesion factor：CAF）あるいはオプソニツク
α2表面結合糖蛋白（Ｏ−α2SBG）などとして呼
ばれてきたが、最近では概ねCIGあるいは線維芽
細胞膜蛋白（fibronectin）と呼ばれており、血
漿の他線維芽細胞などの間葉系細胞や表皮などの
基底膜に存在する分子量440000の糖蛋白である。
CIGにつき他に知られている物理化学的性状とし
ては、易動度がα2グロブリンであり、等電点は
5.0、分子吸光係数Ａ１％ １cm280nmが12.9〜13.0，
S20，ｗが11〜14S、糖含量が５％などがあげられ
る。
globulin：以下CIGと称す）は、従来大外面トリ
プシン感受性蛋白（large external trypsin
sensitive protein：LETS）、細胞表面蛋白（cell
surface protein：CSP）、細胞粘着因子（cell
adhesion factor：CAF）あるいはオプソニツク
α2表面結合糖蛋白（Ｏ−α2SBG）などとして呼
ばれてきたが、最近では概ねCIGあるいは線維芽
細胞膜蛋白（fibronectin）と呼ばれており、血
漿の他線維芽細胞などの間葉系細胞や表皮などの
基底膜に存在する分子量440000の糖蛋白である。
CIGにつき他に知られている物理化学的性状とし
ては、易動度がα2グロブリンであり、等電点は
5.0、分子吸光係数Ａ１％ １cm280nmが12.9〜13.0，
S20，ｗが11〜14S、糖含量が５％などがあげられ
る。
血液凝固に際しては、血液凝固第因子のト
ランスグルタミネーシヨンの作用によりフイブリ
ンのｒ鎖間結合が促進され、フイブリンの架橋が
形成される。この際、同じ第因子の触媒作用
により、CIGを通じてフイブリンのα鎖間の架橋
が形成され、これにより血液凝固はより完全なも
のとなる。CIGはまた細胞間、細胞支持組織間を
粘着あるいは結合させる作用があり、創傷治癒促
進の薬理効果がある。CIGの薬理効果としてこれ
までに報告されているのものには、敗血病性シヨ
ツクの治療、食細胞のオプソニン作用を高めるこ
とに基づく感染症の治療などがあげられる他、細
胞間の粘着性を高め、癌細胞を壊死に至らしめる
ことによる抗癌、抗白血病作用のあることが知ら
れており、CIGの医薬としての臨床効果に期待が
かけられるところは広大なものである。
ランスグルタミネーシヨンの作用によりフイブリ
ンのｒ鎖間結合が促進され、フイブリンの架橋が
形成される。この際、同じ第因子の触媒作用
により、CIGを通じてフイブリンのα鎖間の架橋
が形成され、これにより血液凝固はより完全なも
のとなる。CIGはまた細胞間、細胞支持組織間を
粘着あるいは結合させる作用があり、創傷治癒促
進の薬理効果がある。CIGの薬理効果としてこれ
までに報告されているのものには、敗血病性シヨ
ツクの治療、食細胞のオプソニン作用を高めるこ
とに基づく感染症の治療などがあげられる他、細
胞間の粘着性を高め、癌細胞を壊死に至らしめる
ことによる抗癌、抗白血病作用のあることが知ら
れており、CIGの医薬としての臨床効果に期待が
かけられるところは広大なものである。
CIGは一般にCohnの第１分画またはACD（酸性
クエン酸デキストロール）血漿の低温沈澱物から
得られることがすでに知られている。
（Mosesson，M.W.，et al.J.Biol.Chem.，245，
5728，1970年およびMatsuda，M.，et al.Ann.
N.Y.Acad.Sci.，312，74，1978年）。これら原料
はいずれもCIGの他にフイブリノゲンを大量に含
有する物質である。
クエン酸デキストロール）血漿の低温沈澱物から
得られることがすでに知られている。
（Mosesson，M.W.，et al.J.Biol.Chem.，245，
5728，1970年およびMatsuda，M.，et al.Ann.
N.Y.Acad.Sci.，312，74，1978年）。これら原料
はいずれもCIGの他にフイブリノゲンを大量に含
有する物質である。
CIGの製造で最も問題となるのはフイブリノゲ
ンの分離である。なぜならCIGはフイブリノゲン
との親和性が強く、通常の分画においては、フイ
ブリノゲンと極めて類似した挙動を示すからであ
る。このことは上述のMosessonやMatsudaの文
献に明らかにされている。
ンの分離である。なぜならCIGはフイブリノゲン
との親和性が強く、通常の分画においては、フイ
ブリノゲンと極めて類似した挙動を示すからであ
る。このことは上述のMosessonやMatsudaの文
献に明らかにされている。
ところで、彼らはグリシン／エタノール分画に
よりCIGとフイブリノゲンの分離を行つている
が、この方法ではフイブリノゲンの除去率は50％
にすぎない。現在までのところフイブリノゲンを
比較的効率よく除去する方法としては、グリシ
ン／エタノール分画とイオン交換樹脂によるクロ
マトグラフイーの２段階法及び56℃で４分間の加
熱処理法（Mori，K.，et al.Thrombosis
Research，16，803，1979年）が知られている。
ところが、前者の方法はCIG回収量が低く、製造
時間および製造コスト等の観点から、また後者の
方法は大規模処理の困難さ等の観点から、即ち、
56℃、４分間の加熱処理においてはこの処理を大
規模で行う場合、CIGが50℃〜56℃に長時間維持
されることから、CIGの回収率は50％〜60％に低
下する等の観点から大規模製造に適した方法とは
いえない。また56℃への到達時間を短縮させるた
めに、外液の温度を70℃以上に高くした場合、
CIGの熱変性によりその回収率は小規模で行う場
合でも約50％に低下する。
よりCIGとフイブリノゲンの分離を行つている
が、この方法ではフイブリノゲンの除去率は50％
にすぎない。現在までのところフイブリノゲンを
比較的効率よく除去する方法としては、グリシ
ン／エタノール分画とイオン交換樹脂によるクロ
マトグラフイーの２段階法及び56℃で４分間の加
熱処理法（Mori，K.，et al.Thrombosis
Research，16，803，1979年）が知られている。
ところが、前者の方法はCIG回収量が低く、製造
時間および製造コスト等の観点から、また後者の
方法は大規模処理の困難さ等の観点から、即ち、
56℃、４分間の加熱処理においてはこの処理を大
規模で行う場合、CIGが50℃〜56℃に長時間維持
されることから、CIGの回収率は50％〜60％に低
下する等の観点から大規模製造に適した方法とは
いえない。また56℃への到達時間を短縮させるた
めに、外液の温度を70℃以上に高くした場合、
CIGの熱変性によりその回収率は小規模で行う場
合でも約50％に低下する。
そこで本発明者らはCIGの損失が少なく、かつ
フイブリノゲンを充分に除去し得、しかも大規模
CIG製造に適した方法を完成すべく種々研究を行
つたところ、CIGは45℃〜52℃にてたとえば90分
加熱しても安定であるのに対して、フイブリノゲ
ンは45℃〜52℃で、たとえば30分加熱によつてほ
ぼ完全に変性・除去されることを見出しさらに研
究を重ねて本発明を完成した。
フイブリノゲンを充分に除去し得、しかも大規模
CIG製造に適した方法を完成すべく種々研究を行
つたところ、CIGは45℃〜52℃にてたとえば90分
加熱しても安定であるのに対して、フイブリノゲ
ンは45℃〜52℃で、たとえば30分加熱によつてほ
ぼ完全に変性・除去されることを見出しさらに研
究を重ねて本発明を完成した。
即ち、本発明は、寒冷不溶性グロブリン及びフ
イブリノゲン含有物を45℃〜52℃にて加熱処理す
ることにより寒冷不溶性グロブリンとフイブリノ
ゲンを分離することを特徴とする寒冷不溶性グロ
ブリンの製造法である。
イブリノゲン含有物を45℃〜52℃にて加熱処理す
ることにより寒冷不溶性グロブリンとフイブリノ
ゲンを分離することを特徴とする寒冷不溶性グロ
ブリンの製造法である。
本発明における出発原料、即ち加熱対象物は
CIGとフイブリノゲンを含有するものであり、そ
の具体例としてはたとえばCohnの第１分画、
ACD血漿の低温沈澱物などが列挙される。これ
らは一般に水溶液（生理食塩溶液、緩衝液など）
の状態で加熱処理される。
CIGとフイブリノゲンを含有するものであり、そ
の具体例としてはたとえばCohnの第１分画、
ACD血漿の低温沈澱物などが列挙される。これ
らは一般に水溶液（生理食塩溶液、緩衝液など）
の状態で加熱処理される。
加熱温度は約45℃〜約52℃、好ましくは約50℃
であり、加熱時間は、フイブリノゲンをほぼ分解
するに十分な時間でかつCIGの分解の少ない時間
であればよく、通常約20分〜約90分、好ましくは
約30分である。
であり、加熱時間は、フイブリノゲンをほぼ分解
するに十分な時間でかつCIGの分解の少ない時間
であればよく、通常約20分〜約90分、好ましくは
約30分である。
本発明に関する加熱処理を大規模製造に適用し
た場合、500の被加熱液が37℃から50℃に上昇
するのに要した時間は、外液を52℃としたとき、
20分であつた。また、たとえ50℃への到達時間に
１時間を要したとしても、CIGの安定性に影響は
ない。このことから、本発明は大規模製造におい
て、CIGとフイブリノゲンの分離を行うのに容易
で有用な方法である。
た場合、500の被加熱液が37℃から50℃に上昇
するのに要した時間は、外液を52℃としたとき、
20分であつた。また、たとえ50℃への到達時間に
１時間を要したとしても、CIGの安定性に影響は
ない。このことから、本発明は大規模製造におい
て、CIGとフイブリノゲンの分離を行うのに容易
で有用な方法である。
本発明で得られたCIG水溶液は、硫安分画、イ
オン交換クロマトグラフイー等の公知の方法で更
に精製したのち、先に本発明者らにより確立され
たCIG水溶液における肝炎ウイルス不活化のため
の60℃、10時間の加熱処理（特願昭56−27448）
を施すことにより、医薬品として提供される。
オン交換クロマトグラフイー等の公知の方法で更
に精製したのち、先に本発明者らにより確立され
たCIG水溶液における肝炎ウイルス不活化のため
の60℃、10時間の加熱処理（特願昭56−27448）
を施すことにより、医薬品として提供される。
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらにより何ら限定されるもの
ではない。
るが、本発明はこれらにより何ら限定されるもの
ではない。
実施例 １
プールした正常成人血漿よりエタノール分画し
て得られる分画−に、10倍量の0.055Mクエン
酸ナトリウム緩衝液、PH6.4を加え溶解する。こ
のときプラスミンによるCIGの分解を防ぐために
0.025MのEDTA−2Na（エチレンジアミン４酢酸
２ナトリウム塩）およびアプロチニン10単位／ml
を加える。このようにして得た分画−溶解液を
小分け分注し、急速に50℃に到達せしめたのち10
分、20分、30分、40分、60分、90分および120分
の加熱処理を施した。加熱処理により生じた沈澱
は遠心分離により除去したのち、上清中のCIG量
とフイブリノゲン量を一元免疫拡散法で定量し
た。第１図に加熱処理前に対する総CIG値および
総フイブリノゲン値の残存率を示した。
て得られる分画−に、10倍量の0.055Mクエン
酸ナトリウム緩衝液、PH6.4を加え溶解する。こ
のときプラスミンによるCIGの分解を防ぐために
0.025MのEDTA−2Na（エチレンジアミン４酢酸
２ナトリウム塩）およびアプロチニン10単位／ml
を加える。このようにして得た分画−溶解液を
小分け分注し、急速に50℃に到達せしめたのち10
分、20分、30分、40分、60分、90分および120分
の加熱処理を施した。加熱処理により生じた沈澱
は遠心分離により除去したのち、上清中のCIG量
とフイブリノゲン量を一元免疫拡散法で定量し
た。第１図に加熱処理前に対する総CIG値および
総フイブリノゲン値の残存率を示した。
この結果、CIGは加熱20分後で96％、30分後で
90％、90分後で83％、120分後で70％残存したの
に対し、フイブリノゲンは最初の10分間は比較的
安定であるが、20分経過すると25％に減少し、30
分ではほぼ完全に除去された。
90％、90分後で83％、120分後で70％残存したの
に対し、フイブリノゲンは最初の10分間は比較的
安定であるが、20分経過すると25％に減少し、30
分ではほぼ完全に除去された。
実施例 ２
50Kgの分画−に500の実施例１で用いたも
のと同様の緩衝液を加え溶解する。溶解液を52℃
の水槽に入れ、溶解液が50℃に到達してから30分
間加熱した。このとき、溶解液が37℃から50℃に
到達するのに要した時間は20分であつた。加熱終
了後、急速に室温にまで冷却したのち、100メツ
シユのナイロン紗によるろ過により加熱中に生じ
た沈澱物を除去した。ろ液は更に、微細な沈澱を
除去するために遠心分離したのち、上清中のCIG
量とフイブリノゲン量を一元免疫拡散法で定量し
た。その結果、加熱処理前に対する総CIG値の残
存率は92％、フイブリノゲンの除去率は100％で
あつた。またCIGは本加熱処理により、画分−
溶解液の５倍に精製された。
のと同様の緩衝液を加え溶解する。溶解液を52℃
の水槽に入れ、溶解液が50℃に到達してから30分
間加熱した。このとき、溶解液が37℃から50℃に
到達するのに要した時間は20分であつた。加熱終
了後、急速に室温にまで冷却したのち、100メツ
シユのナイロン紗によるろ過により加熱中に生じ
た沈澱物を除去した。ろ液は更に、微細な沈澱を
除去するために遠心分離したのち、上清中のCIG
量とフイブリノゲン量を一元免疫拡散法で定量し
た。その結果、加熱処理前に対する総CIG値の残
存率は92％、フイブリノゲンの除去率は100％で
あつた。またCIGは本加熱処理により、画分−
溶解液の５倍に精製された。
第１図は50℃加熱処理した場合の総CIG及び総
フイブリノゲン量の残存率を示すグラフである。
フイブリノゲン量の残存率を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 寒冷不溶性グロブリン及びフイブリノゲン含
有物を45℃〜52℃にて加熱処理することにより寒
冷不溶性グロブリンとフイブリノゲンを分離する
ことを特徴とする寒冷不溶性グロブリンの製造
法。 ２ 加熱処理時間が20分〜90分である特許請求の
範囲第１項記載の寒冷不溶性グロブリンの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57004479A JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57004479A JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58121220A JPS58121220A (ja) | 1983-07-19 |
| JPH0345080B2 true JPH0345080B2 (ja) | 1991-07-09 |
Family
ID=11585239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57004479A Granted JPS58121220A (ja) | 1982-01-13 | 1982-01-13 | 寒冷不溶性グロブリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58121220A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0415062Y2 (ja) * | 1985-08-26 | 1992-04-06 | ||
| JPS63107912A (ja) * | 1986-06-13 | 1988-05-12 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | 創傷治療剤 |
| NL8720257A (nl) * | 1986-06-13 | 1988-05-02 | Japan Immuno Res Lab | Wondbehandelingspreparaat en kosmeticum. |
-
1982
- 1982-01-13 JP JP57004479A patent/JPS58121220A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58121220A (ja) | 1983-07-19 |
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