NO138145B - Fremgangsmaate for fremstilling av et enzympreparat - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av et enzympreparat Download PDFInfo
- Publication number
- NO138145B NO138145B NO97/72A NO9772A NO138145B NO 138145 B NO138145 B NO 138145B NO 97/72 A NO97/72 A NO 97/72A NO 9772 A NO9772 A NO 9772A NO 138145 B NO138145 B NO 138145B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- solution
- phenol
- enzyme
- active substance
- enzyme product
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 86
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 45
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 claims description 16
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 14
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000002435 venom Substances 0.000 claims description 14
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 13
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 12
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 11
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 11
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 241000271506 Bothrops Species 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 5
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 claims description 5
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 claims description 5
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 229960004025 sodium salicylate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 claims description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims description 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims description 2
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 claims description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 84
- 239000000047 product Substances 0.000 description 68
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 21
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 21
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 15
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 13
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 13
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 13
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 230000002345 thrombinlike Effects 0.000 description 9
- -1 acetic acid Chemical class 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 8
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 241000271511 Bothrops atrox Species 0.000 description 7
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 7
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940097597 bothrops atrox venom Drugs 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 5
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-methyl-PhOH Natural products CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 230000009424 thromboembolic effect Effects 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 3
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 3
- ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 2-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Cl ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 101000772006 Bombus ignitus Venom serine protease Bi-VSP Proteins 0.000 description 2
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 206010062713 Haemorrhagic diathesis Diseases 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271496 Lachesis Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FKMJXALNHKIDOD-LBPRGKRZSA-N TAMe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)OC)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 FKMJXALNHKIDOD-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N anhydrous trimethylamine Natural products CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 2
- MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N diisopropyl fluorophosphate Chemical compound CC(C)OP(F)(=O)OC(C)C MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 2
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 2
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 2
- 229960005051 fluostigmine Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-methyl phenol Natural products CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N orcinol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1 OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N pentan-3-one Chemical compound CCC(=O)CC FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 2
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HORNXRXVQWOLPJ-UHFFFAOYSA-N 3-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=CC(Cl)=C1 HORNXRXVQWOLPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000271517 Bothrops jararaca Species 0.000 description 1
- 241000392415 Bothrops moojeni Species 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108010065152 Coagulase Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010000196 Factor XIIIa Proteins 0.000 description 1
- 101800000974 Fibrinopeptide A Proteins 0.000 description 1
- 101800003778 Fibrinopeptide B Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001499 Heparinoid Polymers 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CAHKINHBCWCHCF-JTQLQIEISA-N N-acetyl-L-tyrosine Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CAHKINHBCWCHCF-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229940122344 Peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910000288 alkali metal carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008041 alkali metal carbonates Chemical class 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 230000004531 blood pressure lowering effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 150000001896 cresols Chemical class 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003536 defibrinogenating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 150000001983 dialkylethers Chemical class 0.000 description 1
- DOBMPNYZJYQDGZ-UHFFFAOYSA-N dicoumarol Chemical class C1=CC=CC2=C1OC(=O)C(CC=1C(OC3=CC=CC=C3C=1O)=O)=C2O DOBMPNYZJYQDGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006264 diethylaminomethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- CJGXMNONHNZEQQ-JTQLQIEISA-N ethyl (2s)-2-amino-3-phenylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CJGXMNONHNZEQQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000000246 fibrin derivative Substances 0.000 description 1
- 230000001723 fibrinogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 150000004675 formic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940019334 heparin group antithrombotic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002554 heparinoid Substances 0.000 description 1
- 229940025770 heparinoids Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- KPNBUPJZFJCCIQ-LURJTMIESA-N methyl L-lysinate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CCCCN KPNBUPJZFJCCIQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N monoethyl amine Natural products CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 229940099459 n-acetylmethionine Drugs 0.000 description 1
- 229960001682 n-acetyltyrosine Drugs 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920001568 phenolic resin Polymers 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 210000001957 retinal vein Anatomy 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L sodium sulphate Substances [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001026 thromboplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000003673 urethanes Chemical class 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000003021 water soluble solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/10—Polypeptides; Proteins
- A61L24/106—Fibrin; Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4833—Thrombin (3.4.21.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/04—Materials for stopping bleeding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/4609—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from reptiles
- G01N2333/4613—Snake venom
- G01N2333/4636—Snake venom from Bothrops sp.
- G01N2333/464—Snake venom from Bothrops sp. from Bothrops atrox; Reptilase; Atroxin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
- G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
- Y10S435/815—Enzyme separation or purification by sorption
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
- Y10S435/816—Enzyme separation or purification by solubility
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Surgery (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrorer en fremgangsmåte for fremstilling av
et enzympreparat fra giftormslange, som på den ene side i lave doser virker som hemostatikum og på den annen side ved hoyere doser virker antikoagulerende på blodet hos mennesker og pattedyr. Oppfinnelsen er karakterisert ved at man brin-
ger en vandig losning av giften fra slanger av familien . Bothrops eller av slanger hvis gift inngår en immunologisk kryssreaksjon med Bothrops-giften, til omsetning med fenol eller et fenolderivat og spalter det erholdte uloselige reaksjonsprodukt for å frigjore det enzymatiske virkestoff.
Ifolge britisk patent nr. 1 094 301 kan man få et enzym med
en thrombinlignende og antikoagulerende virkning fra giften
fra Ancistrodon rhodostoma. Dette enzym har folgende egenska-
per: Det er proteinholdig og i alt vesentlig farvelost når det er rent, det er adsorberbart på svakt basiske anionbytter-materialer, såsom dietylaminometyl-cellulose og trietylamino-.etyl-cellulose, det er loselig i fysiologisk salin, det har
en elektroforetisk mobilitet på 3.9 x 10<->^ volt/cm/sek..i 0.1
M fosfatbuffer med pH = 7.0, det har en molekylvekt som ikke overstiger 40.000 i monomer form og som er bestemt i ultrasen-trifuge, det har en sedimentasjons-koeffisient (Svedbergs)
<S>2qW= 3.4 ved en konsentrasjon på 4.86 mg/ml, det har et partielt spesifikt volum på ca. 0.7 ved en konsentrasjon på
4.86 mg/ml, dets biologiske aktivitet er thrombinlignende og antikoagulerende in vivo, og det blir ikke merkbart inhibert
_3
med 1 x 10 mol diisopropylfluorfosfat innen 5 minutter.
i
Ansokeren har funnet at det,er mulig å erholde fra giften til Bothrops atrox eller en hvilken som helst annen slange hvis gift er immunologisk kryss-reaktiv med Bothrops atrox gift;
en enzymsammensetning som på den ene side ved adekvat små doser virker som et hemostatisk middel, og som på den annen side ved hoyere doser oppviser en indirekte koagulasjons-inhiberende virkning på blod fra mennesker eller andre pattedyr ved i alt vesentlig å fjerne fibrinogen fra blodsirkula-sjonen uten særlig påvirkning av hemostasis, og som fol.gelig kan anvendes som et blod-antikoagulerende middel. Dette enzymprodukt representerer sammenligned med enzymet ifolge britisk patent nr. 1 094 301 flere fordeler som senere skal beskrives.
Enzympreparatet ifolge foreliggende oppfinnelse har riktig-nok i likhet med det fra Chemical Abstracts 55, 7676a (1961), 54, 25325b (1960) og 70, 25843k (1969) en thrombinlignende virkning, dvs. at det under visse betingelser liksom thrombin virker blodkoagulerende. På den annen side adskiller enzympreparatet ifolge foreliggende oppfinnelse seg fra thrombin og de i den publiserte litteratur beskrevne thrombinlignende produkter helt vesentlig ved at det virker defibrinogenerende på blodet hos mennesker og pattedyr og som folge derav blodantikoagulerende. Hverken thrombin eller de i den tidligere publiserte litteratur beskrevne produkter har en defibrinogenerende virkning på blod, slik at disse absolutt ikke er anvendbare som blodantikoagulanter.
Enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen som ved lavere doseringer bevirker en hemostatisk aktivitet, og som ved hoyere doseringer oppviser en blodantikoagulerende aktivitet på mennesker og andre pattedyr, er karakterisert bl.a. ved folgende egenskaper: (a) det har en thrombin-lignende og -endopeptidas virkning, (b) det består av en peptid-komponent og en karbohydrat-komponent, hvorved peptid-komponenten omfatter en eller flere polypeptider med en molekylvekt mellom 18 000 og 55.000, og som er bestemt ved likevekts-ultrasentri-fuge-metoden, (c) det har et karbohydrat- (noytralt sukker) innhold på
2-10 vekts-%, basert på proteinholdet,
(d) det er tungt loselig i destillert vann men lett loselig
i fysiologisk natriumklorid-losning,
(e) det danner komplekser med fenol og fenolderivater,
og disse kompleksene er tungt loselige eller uloselige i vann,
(f) det bevirker koagulering av fibrinogen ved selektiv eliminering av fibrinopeptidene A fra fibrinogen uten frigjoring av fibrinopeptidene B. (g) det har en thrombin-lignende virkning som tilsvarer ca. 30 til 450 NIH-thrombin-enheter pr. mg proteininnhold, (h) det splitter tosylarginin-metylester og gelatin men ikke lysinmetylester, fenylalaninetylester, N-acetylmetionin, N-acetyltyrosin, leucylglycin og kasein, (i) det inhiberes ikke av heparin, heparinoider, hirudiri, antithrombiner og polyvalent peptidase-inhibitor av KUNITZ, (sml. J. Gen. Physiol. 19, 991-1007 (1936)), (k) det inhiberes av en enzymkonsentrasjon på ca. 5 mg pr. ml i en størrelsesorden på ca. 95% med hensyn til dets _3 koagulerings- og esterase-aktivitet ved 2.5 x 10 mol diisopropylfluorfosfat ved pH 8 og i lopet av 2 timer, (1) det blir godt inhibert av tosylargininmetylester og fullstendig inhibert av antikroppen som forekommer i anti-bothrops-serum,
(m) det blir ikke fiksert og vil derfor ikke inaktiveres av
fibrin,
(n) det har en vesentlig lengere biologisk halveringstid enn
heparin,
(o) det bevirker dannelse av et fibrinderivat som gjensidig påvirker overskudd av fibrinogen under dannelse av et ikke-polymeriserbart fibrin-fibrinogen-kompleks,
(p) det påvirker fibrinogen under dannelse av et fibrin som har fysikalsk-kjemiske egenskaper som er forskjellige fra egenskapene til fibrin, og som produseres av thrombin, forsåvidt som det hurtig blir hydrolysert av fibrinolytiske
enzymer, f.eks. plasmin, selv i nærvær av den aktiverte faktor XIII og av kalsiumioner, og er loselig i 5 mol
vandig urea, og
(q) det bevirker in vivo en defibrinogenering og en sekundær fibrinolyse uten hemorrhagiske og thrombo-emboliske bieffekter.
Ifolge oppfinnelsen erholdes enzymproduktet fortrinnsvis ved hjelp av en fremgangsmåte som består i: (1) fremstilling av en isotonisk vandig losning av gift fra Bothrops atrox eller en eller annen giftslange, hvis
gift er immunologisk kryss-reaktiv med Bothrops atrox
gift, og hvis pH er regulert til 4.5 til 7,
(2) enten ved (a) å gjore nevnte isotoniske losning til gjenstand for en fraksjonert salt-utfelling for forst å eliminere ballaststoffer og derefter for å utfelle en fraksjon som inneholder enzym-materialet, hvorefter nevnte fraksjon blir opplost i destillert vann, regulering av losningens pH til 3-4, oppvarmning av losningen i få minutter til ca. 2 timer ved temperaturer på 30 - 5o°C, separering av de utfelte proteiner og regulering av restlosningens pH til 4-6, eller
(b) regulering av nevnte isotoniske losning til en pH på
3 - 4 og oppvarmning av losningen i få minutter til ca. 2
timer til temperaturer på 30 - 50°C, separering av de utfelte proteiner, regulering av restlosningens pH til 4.5-7 og med losningen foreta en fraksjonert saltutfelling for forst å eliminere ballaststoffer og derefter utfelle en fraksjon som inneholder det aktive enzym-produkt, opplosning av nevnte fraksjon i destillert vann og regulering av
losningens pH til 4 - 6, og
(3) tilsetning av fenol eller et fenolderivat til den erholdte losning ifolge (a) eller (b) for å utfelle et uloselig
kompleks som inneholder enzym-produktet, og enten
(c) dekomponere komplekset ved behandling med fortynnet eddiksyre i et polart organisk løsningsmiddel, og isolering av det frigjorte og ulbste enzym-materialet, eller (d) behandle komplekset i et vandig medium med en base ved en pH på 7.5 - 8.5, og isolering av det frigjorte enzym-produktet ved ultrafiltrering, dialyse eller gelfiltrering, og ytterligere r-ensning av det således erholdte enzym-produkt.
Gift som anvendes som utgangsmateriale for fremstilling av enzym-produktet er fortrinnsvis det fra slangen Bothrops atrox. Andre navn og identifiseringer når det gjelder denne slange finnes i litteraturen, f.eks. Coluber atrox LiNNAEUS (Sys. Nat. Ed. 10, 1:222, 1758), Bothrops atrox LINNAEUS (Dumeril, Bibron et Dumeril, Erpet. gen., 7:1507, 1854), Lachesis lanceolatus BOULENGER (Cat.Snak.Brit.Mus., 3:535, 1896), Lachesis atrox LINNAEUS (Boulenger, Cat.Snak.Brit. Mus., 3:537, 1896), Bothrops atrox atrox LINNAEUS (J.A. Peters, Bull.Mus. comp. Zool., Cambridge, Mass., 122:509, 1960), og Bothrops moojeni HOGE (A.R. Hoge, Mem, Inst. Butantan, 32:126, 1965). Giften fra andre Bothrops-arter, f.eks. fra Bothrops jararaca, kan også anvendes. Som en regel kan man si at giften fra en hvilken som helst slange som er immunologisk kryssreaktiv med Bothrops atrox-gift kan anvendes. En definisjon og forklaring av.uttrykket "immunologisk krystreaktiv" kan finnes, f.eks. i "Einfuhrung in die Immunchemie und Immunologie" av E.A. KABAT, Springer Verlag 1971, side 1 ff.
En mere spesiell måte for utforelse av fremgangsmåten for fremstilling av enzym-produktet ifolge oppfinnelsen skal i det folgende beskrives.
Fryse-tbrket slangegift, f.eks. Bothrops atrox venom, opplb-ses i fysiologis natriumkloridlosning ved en pH på 4.5 - 7. Ulost materiale fjernes fra losningen ved hjelp av sentrifugering eller filtrering. Den klare giftlosning reguleres til svakt sur pH, f.eks. til 3-4, ved tilsetning av en mineral-syre, f.eks. saltsyre eller svovelsyre, eller en organisk syre, f.eks. eddiksyre, hvorefter man oppvarmer under omroring,
slik at ballast-proteinene utfelles uten tap av aktivstoff.
Graden av utfelling beror på oppvarmningstid og på tempera-turen såvel som på losningens pH. Ved pH 3 er noen få minutter tilstrekkelig, f.eks. 10 minutter ved 30°C. Ved pH 3.5 blir oppvarmningstiden strukket ut vanligvis til 1
time ved 30°C, eller 30 minutter ved 40°C. Ved en pH på 4
kan oppvarmningstiden strekkes ut til ca. 2 timer og tem-peraturen okes til ca. 50°C.
Utfelte proteiner separeres ved sentrifugering. Filtratet
blir regulert til en pH på 4.5 - 1, fortrinnsvis ca. 6.5, og blir gjenstand for fraksjonert salt-utfelling for forst å fjerne fraksjonen med ballast-stoffer og derefter for å utfelle fraksjonen som inneholder aktiv-stoffet. Denne frak-sjonerte utfelling kan utfores med ammonium, alkalimetall eller jordalkalimeta11-salter av mineralsyrer, f.eks. natriumklorid eller -sulfat, magnesium-klorid eller -sulfat og ammonium-klorid eller -sulfat. Hvis ammoniumsulfat anvendes ved pH
6.5, så er balla stfraksjonen utfelt ved 40 % metning, og den aktive fraksjon ved 55 % metning ved 20°C. Hvis andre salter, andre pH-verdier og andre utfellingstemperaturer anvendes, så kreves andre metningsgrader.
Den aktive fraksjon separeres fra moderluten ved sentrifugering og opplosning i destillert vann. Losningens pH reguleres til 4-6, fortrinnsvis til ca. 5.0. Det aktive stoff utfelles som et kompleks ved tilsetning av ca. 7 vekts% fenol eller en tilsvarende mengde av et fenolderivat. Egnede fenolderivater er fenolkarboksylsyrer, f.eks. salicylsyre, alkyl-fenoler, f.eks. o-, m- eller p-cresol, halogenerte fenoler, f.eks. o-, m- eller p-klorfenol, halogenerte eller alkylerte fenolkarboksylsyrer, f.eks. cresolsyrer og klorfenolsyrer, eller salter av fenolkarboksylsyrer eller deres derivater, f.eks. natriumsalicylat, samt. natriumsalter av cresolkarboksyl-syrer. Fortrinnsvis anvender man fenol, cresol eller natriumsalicylat, fordi disse stoffer er lett opploselige og gir store utbytter av enzympreparatet. Fenolformaldehydharpikser har frie fenolgrupper, f.eks. "Amberlite XE 97" kan anvendes. Den nodven-dige mengde fellingsmiddel tilsvarer som regel -grensen for løse-ligheten av det tilsvarende derivat, eller i tilfelle syrer grensen for 16.se lignet em av den tilsvarende frie syre. Det uloselige kompleks av det aktive stoff som er dannet på denne må-te, separeres ved sentrifugering og kan derefter dekomponeres ifolge en av de folgende beskrevne metoder (c) og (d): (c) Det separerte kompleks vaskes flere ganger med en opplosning av 0.1 - 0.5 % eddiksyre i et polart losningsmidde1 for derved å dekomponere komplekset og for å opplose fenol eller fenolderivatet, mens derimot det aktive stoff forblir som en uloselig rest. Egnede polare losningsmidler omfatter f.eks. alkanoler med en kjedelengde på f.eks. C, til C., dialkylketo-1 2 12
ner med R - CO - R , hvori R og R betyr alkylgrupper med en kjedelengde som f.eks.. C, til CA, såvel som dialkyletere med 1 2 12
formel R - 0 - R , hvori R og R betyr alkylgrupper med en kjedelengde som f.eks. til C^. (d) Komplekset bestående av aktivstoff og fenol eller fenolderivat blir opplost i vann ved en pH på ca. 7.5 til 8.5, fortrinnsvis 8. pH-verdien kan reguleres ved hjelp av alkalime-tallhydroksyd, alkalimetallacetat, alkalimetall-karbonat eller bikarbonat, alkalimetallcitrat, di- eller trialkalimetallfosfat eller et annet basisk buffermiddel eller ved hjelp av ammonium-hydroksyd eller ammoniakk. Losningen filtreres under ^-trykk gjennom et ultrafilter hvis maskevidde er slik at den aktive bestanddel, nemlig enzym-bestanddelen, gjenblir på filteret, mens fenol eller fenol-derivatet passerer gjennom filteret i 16st form. Egnede filtere er "Diaflo"-filteret av typene UM-05, UM-2, UM-10 og PM-10 ("Diaflo"-filtere er ultrafiltere, f.eks. membraner av syntetiske polymerer, markedsfort av AMI CON, Ooster-hout N.B., Nederland. Den aktive bestanddel som gjenblir på filteret vaskes med flere porsjoner destillert vann eller med en losning av et egnet konserveringsmiddel for derved å fjerne resten av fenol eller fenolderivat og samtidig oppnå en oppkonsen-. trasjon.
Den aktive enzymbestanddelen, hvorfra fenol eller fenolderivat er fjernet, .har en aktivitet på ca. 10-15 NIH-thrombin-enheter pr. 1 mg torr substans (renhetsgrad I); enzymproduktet viser imidlertid fremdeles tre preciptin-linjer i immunoferogram-
met og fire proteinsoner i acrylamid-ferogrammet, og har en gul
farge. Dessuten viser enzymproduktet med renhetsgrad 1
også thromboplastisk aktivitet.
For ytterligere rensing kan enzymproduktet med renhetsgrad
I opploses i tris(hydroksymetyl)-aminometan-fosfat-buffer
(pH 6.0/0.02 mol) under dannelse av en 5%'ig losning, hvorefter bestanddelen blir gjenstand for kromatografering på en kolonne av DEAE-"Sephadex A-50" (DEAE dietylaminoetyl; "Sephadex"
er et handelsnavn for polydekstranprodukter som leveres av PHARMACIA, Uppsala, Sverige), og som på forhånd er overfort i. PO^-formen og bragt til likevekt med TRIS-fosfatbuffer (pH 6.0/0.02 mol). Kromatograferingen foretas ved å helle losningen med enzymbestanddelen i kolonnen, fjerning av medfolgende stoffer ved vasking av kolonnen med 4 ganger kolonnens volum av TRIS-fosfat-buffer (pH 6.0/0.02 mol) [TRIS = tris (hydroksymetyl)-aminometan] og derefter opplosning av enzymproduktet ved eluering med to ganger kolonnens volum av TRIS-fosfatbuffer
(pH 6.O/O.04 mol). Saltene fjernes fra det aktive eluatet ved ultrafiltrering. Frysetørking av filtratet gir et enzym-
produkt med renhetsgrad II, hvilken tilsvarer en aktivitet på lOO - 200 NIH-thrombinenheter pr. mg protein-innhold. Immunoferogrammet viser derefter en enkelt precipitinlinje,
mens to soner kan observeres i acrylamin-ferogrammet.
Enzymproduktet kan erholdes i krystallinsk form ved å la
det saltfrie konsentratet, som man fikk ved ultrafiltreringen,
stå i 48 timer ved +2°C, oppsamle de separerte krystallene ved sentrifugering under kjbling, samt vasking av krystallene med iskaldt destillert vann. Derved får man et lite utbytte av rektangulære plater av amorfe partikler. Disse fås hurtig når man tbrker i vakuum og suksessivt når man torker i luft.
Når slike krystall-suspensjoner torkes, så har enzym-bestand-delene en aktivitet på mer enn ca. 200 NIH-thrombin-enheter pr.
mg proteininnhold (renhetsgrad III).
Enzymproduktet med renhetsgrad II viser seg å være homogen
ved papirelektroferogram, membranelektroferogram, gelkromatogram, ionbytterkromatogram og immunodiffusogram ifolge OUCHTER-LOHNY.
Imidlertid kan en farmakologisk inaktiv polypeptidfraksjon separeres fra den aktive emzymfraksjonen ved elektroforese i polyakrylamid-gel. Den inaktive komponenten kan separeres fra den aktive emzymfraksjonen ved å gjore enzymbestanddelen av renhetsgrad II gjenstand for en gelkromatografering, hvorved man anvender en blanding av en alifatisk karboksylsyre med vann, eller ved å anvende en blanding av en vandig bufferlosning med et vann-loselig organisk løsningsmiddel som elusjonsmiddel.
Ved denne gelkromatograferingen kan man anvende enten hydrofobe eller hydrofile geler. Eksempler på hydrofile geler omfatter polydekstran-geler, såsom f.eks. "Sephadex" (solgt av PHARMACIA, Uppsala, Sverige), polyakrylamid-geler, såsom "Bio-Gel" (fremstilt av Bio-Rad Laboratories, Richmond, California), og agarose eller agargeler, såsom "Sepharose" (PHARMACIA, Sverige). Gelkromatograferingen utfores vanligvis ved en konstant hydrogenione-konsentråsjon, f.eks. innen et pH-område
på 2-9, fortrinnsvis ved et pH på 2 - 6. Egnede kar-boksylsyrer er, f.eks. vann-loselige alifatiske monokarboksylsyrer med en rett eller forgrenet kjede på 1 - 4 karbonatomer. Vanlige buffere, hvilke er loselige i blandingér bestående av vann og løsningsmidler, kan anvendes, f.eks. formater, acetater, fosfater, citrater og karbonater av uorganiske baser, såsom alkalimetaller eller ammonium, eller organiske baser, såsom pyridin eller tris(hydroksymetyl)-amino-metan. Buffere som ikke absorberer UV-stråling og som er flyktige i vakuum, såsom ammoniumformat eller..ammoniumacetat, anvendes vanligvis slik at forløpet ved krornatograferingen kan folges ved densitometrisk vurdering av eluatene i UV-området, og eluatene kan oppkonsen-treres ved frysetørking. De alifatiske karbbksylsyrené kan anvendes ved konsentrasjoner på 5-95 volum-% i vann.
Når hydrofile geler anvendes ved kromatograferingen, er kar-boksyl syr ekonsentr as j onen vanligvis på mellom 5 og 50 volum-%. Når vandige bufferlosninger anvendes tilsettes vann-loselig organisk løsningsmiddel ved en konsentrasjon mellom
5 til 95 volum-%. Hvis hydrofile geler anvendes er lbs-ningskonsentrasjonen vanligvis mellom 10 til 50 volum-%. Eksempler på egnede vannlbselige losningsmidler omfatter alkanoler med en rett eller forgrenet kjede inneholdene 1-5 karbonatomer, ketoner såsom aceton, dietylketon eller metyl-etylketon, alkylaminer såsom mono-, di- eller tri-metyl-, etyl- eller propylamin, uretaner, såsom etyluretan. Eftersom eluatene foretrinnsvis konsentreres ved frysetørking er det tilrådelig å anvende losningsmidler som er flyktige i vakuum
og som ikke i vesentlig grad senker frysepunktet til losningen.
Eksempler på egnede losningsmidler er tert.-butanol og cykloheksanol.
Enzymproduktene som erholdes ved den oven beskrevne gel-kromatograf ering har en biologisk aktivitet som varierer mellom 200 og 400 NIH-thrombin-enheter pr. mg protein-innhold (renhetsgrad III). En vesentlig del av den inaktive fraksjonen fjernes fra enzymproduktet ved gel-kromatografering.
Uttrykkene "renhetsgrad II" og "renhetsgrad III" anvendes
i denne beskrivelse med folgende betydning:
Renhetsgrad II = 100 til 200 NIH-thrombin-enheter pr. mg protein-innhold5
Renhetsgrad III = 200 til 400 NIH-thrombin-enheter pr. mg protein-innhold.
Verdiene av aminosyre-analysene fra enzymproduktet varierer, beroende på renhetsgraden, mellom nedenfor angitte cirka-grenser. Aminosyreanalysen ble utfort ved å foreta hydrolyse
med enzymbestanddelen ved hjelp av en konstant kokende saltsyre ved 110°C i 22 til 72 timer i nitrogenatmosfære.
Ved hjelp av eksempel er noen verdier fra aminosyreanalysen gitt:
A = et enzymprodukt med renhetsgrad II
B = et enzymprodukt med renhetsgrad III (dvs. et enzym-produkt med et vesentlig redusert innhold av inaktivt materiale)
Karbohydratkomponenten fra enzymproduktet antas i det minste å være delvis bundet til et polypeptid som en glykopeptid. Karbohydrat- (noytralt sukker) bestemmelse utfores ved orcinol-metoden (cf.L.F. Hewitt, Biochem. J. 31, 360 (1937)).
Enzymproduktet med renhetsgrad III (dvs. bestanddelen med et redusert innhold av inaktivt materiale) inneholder tydeligvis en peptidbestanddel med en sannsynlig molekylvekt mellom 38.000 og 55.O0O. Peptidbestanddelen i enzymproduktet med renhetsgrad II har en tilsynelatende molekylvekt på 28.000
til 55.000.
Enzymproduktet i renhetsgrad II-form inneholder tilsynelatende en komponent som aktiverer faktor XIII.
I hby renhetstilstand (renhetsgrad III) har enzymproduktet folgende aminosyre-sekvens (bestemt ifolge Edman-Degradation-Method som er beskrevet i "Protein Sequence Determination", S.B. Neddleman, Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg, New Yrok, 1970, S. 211 ff.) med start fra den endestående N i kjedens ende: valin —> isoleucin glycin > glycin asparaginsyre —> glutaminsyre.
Enzymproduktet er fri for neurotoksiner, hvilke har en uheldig virkning på nervesystemet, bradykinindannende proteaser (brady-kinin utover en blodtrykks-senkende virkning) fosfolipaser (hvilke virker hemolytisk og forårsaker skader i nyren), aminosyre -oksyda ser og fosfataser.
Enzymproduktet kan anvendes som en reagens og hjelpemiddel ved koagulérings-fysiologiske in vitro undersøkelser, f.eks. ved undersbkelser når det gjelder fibrinogen-fibrin-omdannelsen i nærvær av heparin og antithrombiner, ved undersbkelser ved-rbrende fihrinopeptider, patologiske fibrinogen-strukturer, fibrinogen-nedbrytningsprodukter, faktor VIII og faktor XIII. Ved in vivo administrasjon i moderate doser forårsaker enzymproduktene en reduksjon av blbdningen og koaguleringstiden ved dyreeksperiment, såvel som når det gjelder pasienter med en normal eller patologisk tilstand med hensyn til hemostasis. Ved intravenos administrasjon til friske mennesker i moderate doser forårsaker enzymproduktet dannelsen av loselige fibrin-fibrinogen-komplekser i det sirkulerende blodet, hvilket er vist ved positiv -cryofibrin og parakoagulerings-prove i plasma, såvel som endestående N-analyser av plasmafraksjoner som stammer fra pasienter. Folgelig er enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen anvendbar som et hemostatisk middel.
Når det nye enzymprodukt administreres i hoyere doser til hunder kan man iaktta en hurtig defibrinogenering såvel som en sekundær fibrinolyse samt oppkomst av fibrinogen-nedbrytningsprodukter (FDP) i blodet. Defibrinogeneririgen og fibrino-lysen finner sted uten noen sjokksymptomer, uten thrombocytopenia og uten thromboemboliske eller hemorrhagiske kompli-kasjoner. Kliniske eksperimenter med pasienter med throm-bose i leggvenen eller i retina-venen har vist at enzym-produktet ifolge oppfinnelsen er spesielt egnet ved defibrinogenering og.fibrinolytisk terapi.
Såvidt vi vet kan det nye enzymproduktet ikke erstattes av andre sammenlignbare preparater ved den spesielle anvendelse som et reagens. Selv om thrombin-koagulase erholdes med et staphylococc-enzym, hvilket også er et thrombinlignende enzym som ikke inhiberes av antithrombiner, så spalter et peptid A såvel som peptid fi fra det fibrinogene molekylet, mens enzym-produktet fremstilt ifolge oppfinnelsen bare utloser peptid A.
Blandt de hemostatiske produkter med en thrombinlignende aktivitet er enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen unik på .grunn av injiserbarheten.. Thrombin, thrombin-koagulering og thrombinfremkaIlende midler såsom hele thromboplastiner og gift fra Russel-slange, forårsaker ved parenteral administrasjon thromboemboliske symptomer og thrombocytopenia, og folgelig kan de derfor bare administreres lokalt.
Når enzymproduktet anvendes i hoyere doseringer ved defi-brinogeneringsbehandling av thromboemboliske forstyrrelser, virker den som et antikoaguleringsmiddel og samtidig bevirker den fibrinolyse. På grunn av fjernelsen og nedbrytnin-gen av det meste av fibrinogenet, mister blodet sin koagu-leringsevne som et resultat av defibrinogeneringsprosessen. Dessuten har fibrinogen-nedbrytningsproduktene som produseres i .lopet av den tid fibrinolyse finner sted, en koagulerings-inhiberende virkning. Efter få dagers behandling (f.eks. 2 til 3 dager) er nivået av fibrinogen-nedbrytningsproduktene så lavt at de ikke oker blodningstendensen. Det er ingen thrombocytopenia i lopet av defibrinogeneringen, og pasien-tene viser ingen tegn på oket blbdningstendens ved et fibri-nogennivå på 0.01 til 0.05 g pr. 100 ml plasma. Slike pasienter kan også undergå kirurgiske inngrep uten fare for blodning. Den relativt svake svekkelse av hemostatis, og som forårsakes av enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen, utgjor et stort fremskritt sammenlignet med antikoaguleringsmidlene av heparingruppen og antikoaguleringsmidlene av dicoumarol-seriene, hvilke inhiberer syntesen av forskjellige koagule-ringsfaktorer i leveren og også sterkt svekker den hemostatiske prosess. På grunn av dens utmerkede antikoagulerende virkning er det nye enzymprodukt spesielt egnet for å forebygge thrombus-dannelse under kirurgiske inngrep. Man har ikke iakttatt noen motstand (aktiv immunisering) med dette enzymprodukt når det blir administrert intravenost til pasienter. Medisinsk behandling og kontroll av terapien er meget enkel når man anvender enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen.
Sammenlignet med antikoaguleringsmiddelet som fåes ifolge britisk patent nr. 1 094 301, representerer enzymproduktet fremstilt ifolge nærværende oppfinnelse vesentlige fordeler ved at dens fysiologiske virkning varer vesentlig lenger.
Ved sammenlignbare doseringer oppviser det nye enzymprodukt
en lengre varig defibrinogenerende virkning. Mens heparin må injiseres hver 4 til 6 time, vil en dosering av det nye
enzymprodukt være aktiv i minst 24 timer. Dessuten bevirker det nye produkt aktiv immunisering (motstand) når det administreres intravenost. Mens antikoaguleringsmiddelet som er beskrevet i britisk patent nr. 1 094 301 må anvendes i doser på 4 til 6 ganger 60 enheter pr. 60 kg kroppsvekt i lopet av 24 timer ( 1 enhet = mengden av enzym som når det anvendes på menneske-fibrinogen har den samme koagule-ringstid som 1 NIH-enhet av thrombin; NIH = National Insti-tute of Health), vil en enkel dosering på ikke mere enn 14 enheter av enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen pr. 60 kg legemsvekt være tilstrekkelig for i 24 timer å opprett-holde en tilstand med defibrinogenering i et voksent menneske.
Virkningen av enzymproduktet ble målt og vist. på basis av dens thrombinlignende virkning på menneskefibrinogen. En enhet av enzymproduktet fremstilt ifolge oppfinnelsen er ekvi-valent med mengden som forårsaker koagulering av en fibrinogen-losning og på samme tid som den får en NIH-enhet av standard-thrombin.
I renset tilstand er enzymproduktet lett loselig i utspedde saltlosninger, men tungt loselig i destillert vann. Den kan utfelles fra vandige losninger ved hjelp av salter eller vann-loselige organiske losningsmidler. Den kan fikseres rever-sibelt på basiske ionebyttere samt danne vannuloselige komplekser med fenol og dennes derivater. Dessuten krakterise-res den ved en hoy varmemotstand og en uttalt motstand over-for syrer.
Som et hemostatisk middel er enzymproduktet enkelt å admini-strere i daglige doser på 0.25 til 1.5 NIH-enheter pr. 60 kg legemsvekt. Som et blodantikoaguleringsmiddel kan enzymproduktet lett anvendes i daglige doser på 2 til 100 NIH-enheter, fortrinnsvis 7 til 14 NIH-enheter pr. 60 kg legemsvekt.
EKSEMPEL 1
20 g Bothrops atrox-gift ble opplost i 1000 ml 0.9%'ig NaCl-losning, og derefter sentrifugert i 10 minutter ved 3000 omdreininger pr. minutt. Presipitatet ble kassert. Sentrifugatets pH ble regulert til 3.5 ved hjelp av fortynnet eddiksyre, oppvarmet ved 30 o C i 1 time pa „ vannbad og derefter igjen sentrifugert. Resten ble kassert, og sentrifugatets pH ble regulert til 6.5 ved hjelp av NaOH, og dets volum ble fylt opp til 1000 ml med 0.9%'ig NaCl-losning. Til denne losning ble det under omroring tilsatt 670 ml mettet ammoniumsulfat-16sning. Blandingen fikk stå ved romtemperatur i 1 time, og det resulterende presipitat ble separert ved sentrifugering. En ytterligere mettet ammoniumsulfatlosning på 552 ml ble tilsatt til sentrifugatet, og efter 1 time ble blandingen sentrifugert. Sentrifugatet ble kassert, presipitatet opplost i 100 ml destillert vann og losningens pH ble regulert til 5.0 ved hjelp av fortynnet eddiksyre. 7.7 ml 90%'ig fenol ble tilsatt til losningen under omroring. Blandingen fikk stå 15 timer ved romtemperatur. Derefter ble det utfelte enzymet separert ved sentrifugering. Sentrifugatet ble kassert. Presipitatet ble vasket to ganger med 10 ml vann som var mettet med fenol, separert ved sentrifugering og opptatt i 50 ml etanol som inneholdt 1% eddiksyre. Blandingen ble omrort 1 time og derefter filtrert på et glass-sugningsfilter. Det isolerte stoffet ble vasket med mange porsjoner 20 ml etanol og torket i vakuum. Derved fikk man 2 til 2.5 g enzymbestanddel med renhetsgrad 1, og denne bestanddel hadde en thrombinlignende virkning på 10 - 12 NIH-enheter pr. mg torrstoff.
Dette produkt var stabilt ved lagring.
Det råe enzymet ble tatt opp i 40 ml TRIS-fosfatbuffer (pH 6.0/0.02 mol) og omrort 15 minutter. Uloste deler ble fjernet fra losningen ved sentrifugering. Det klare sentrifugatet ble med en hastighet på 0.8 til 1.0 ml/min tilsatt en kolonne på
200 ml, som inneholdt "DEAE-Sephadex" som er holdt i likevekt med TRIS-PO^-buffer og derefter eluert med 800 ml av den samme buffer-16sning. Den forste eluatfraksjonen ble kassert.
Derefter ble enzymet eluert med 400 ml TRIS-P04-buffer (0.04 mol). Det aktive eluatet ble gjenvunnet og oppkonsentrert på et ultrafilter UM-10 (AMICON) under trykk og vasket inntil det brukte vaskevannet var fritt for salter. Det saltfrie konsentrat ble torket i vakuum over P2°5 eller det ble frysetorket. På denne måte erholdt man 200 - 250 mg av enzymproduktet med renhetsgrad II, og produktet hadde en aktivitet på ca. 100 til 150 NIH-thrombin-enheter pr. mg protein-innhold.
Det saltfrie konsentrat ble ytterligere konsentrert til 5 ml på ultrafilteret. Losningen ble filtrert gjennom et glass-sugningsfilter med porbsitet G-4 for fjerning av eventuelt stbv. Den klare losningen fikk stå minst 24 timer i fryseskap ved +2°C. Enzymproduktet skilte seg ut i form av rektangulære krystaller. De sistnevnte ble separert ved sentrifugering ved 0-2°C, vasket flere ganger med 0.5 ml porsjoner destillert vann under kjbling med is, og derefter torket over P2°5" Således erholdt man 45 mg av et fargelbst enzymprodukt med en aktivitet på 150 til 200 NIH thrombin-enheter pr. mg proteininnhold.
EKSEMPEL 2
20 g Bothrops atrox-gift ble opplost i 1000 ml 0.9%'ig NaCl-lbsning, og pH til den resulterende losningen ble innstilt på 6.5. Efter tilsetning av 670 ml mettet ammoniumsulfatlosning fikk blandingen stå 1 time ved 20°C, og losningen ble derefter sentrifugert. Ytterligere 552 ml mettet ammonium-rsulfatlosning ble tilsatt til sentrifugatet. Efter 1 time "ble det erholdte presipitatet utskilt ved sentrifugering, og derefter opplost i 100 ml destillert vann. Losningen ble innstilt på pH 3.5 ved hjelp av fortynnet eddiksyre, og derefter ble losningen oppvarmet 1 time til 30°C. Det dannede presipitatet ble separert ved sentrifugering, sentrifugatet ble innstilt på pH 5.0, og efter tilsetning av 3 ml m-cresol fikk det hele stå ved romtemperatur i 15 timer. Presipitatet ble avskilt ved sentrifugering, vasket to ganger med 10 ml porsjoner vann som var mettet med cresol, presipitatet ble opplost i 50 ml destillert vann under tilsetning av l-n NaOH ved pH 8.0. Efter fjerning av uloste deler ved sentrifugering, ble losningen filtrert gjennom et ultrafilter "AMICON UM-10". Resten på filteret ble vasket med destillert vann inntil man ikke kunne påvise mere cresol i det utstrommende filtrat ved hjelp av jernII"I'-kloridreaksjon. Den enzymhol-dige filterrest ble opptatt i 20 ml TRIS-P04-buffer (pH 6.0/ 0.02 mol). Efter fjerning av uloste deler ved sentrifugering, ble losningen med en hastighet på 0.8 - 1 ml/min tilsatt til en kolonne som var fylt med 200 ml "DEAE-Sephadex A-50", og som ble holdt i likevekt med den samme buffer og derefter vasket med 800 ml TRIS-PO^buf f er (pH 6.0/0.02 mol): Det thrombinlignende enzym ble derefter eluert med 400 ml TRIS-PO^-buffer (0.04 mol/pH 6.0). Det aktive eluat ble konsentrert på et ultrafilter "UM-10" under trykk og vasket inntil saltene var borte.
Det således erholdte konsentrat ble enten direkte bearbeidet for tilvirkning av en steril losning for injiseringsformål eller torket i vakuum. Efter torking fikk man ca. 200 mg enzymprodukt med en aktivitet på 120 til 160 NIH thrombin-enheter pr. mg protein-innhold.
E KSEMPEL 3
En kolonne med tverrsnitt på 1.8 cm 2 og 92 cm lengde ble fylt med "SEPHADEX G-lOO". "Sephadex"-gelen ble holdt i likevekt med 10%ig eddiksyre. 6.26 mg av det erholdte enzymprodukt ifolge eksempel 1 (renhetsgrad II) ble opplost i 0.3 ml 10 %ig vandig eddiksyre. Losningen ble tilfort en kolonne. 10 %ig vandig eddiksyre fikk stromme gjennom kolonnen nedenfra og opp-over ved en stromningshastighet på 5.6 ml pr time. To UV-absor-berende soner (280 mu) ble dannet. Eluatet som kom fra den forste sone ble frysetorket og ga 4.25 mg enzymprodukt med en aktivitet på 200 til 250 NIH thrombinenheter pr. mg protein-innhold.
Claims (3)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et enzympreparat som på den ene side i lave doser virker som hemostatikum og på den annen side ved ho<y>ere doser virker antikoagulerende på blodet hos mennesker og pattedyr, karakterisert ved at man bringer en vandig losning av giften fra slanger av familien Bothrops eller av slanger hvis gift inngår en immunologisk kryssreaksjon med Bothrops-giften, til omsetning med fenol eller et fenolderivat og spalter det erholdte uloselige reaksjonsprodukt for å frigjore det enzymatiske virkestoff.
2. Fremgangsmåte ifolge krav 1, karakterisert ved at man
forst fremstiller en isotonisk vandig losning av slange-giften med en pH på 4,5 - 7,
for -det annet enten (a) underkaster den nevnte isotoniske losning en fraksjonert saltfelling, for forst å utskille ballast-stoffene og så å utskille en fraksjon som innholder det enzymatiske virkestoffet, loser nevnte fraksjon i destillert vann, innstiller losningen på en pH fra 3- 4, oppvarmer i noen minutter til 2 timer ved temperaturer på 30 - 50°C, adskiller utfelte proteiner og innstiller pH i den tilbakeblivende losning på 4- 6, eller (b) innstiller den nevnte isotoniske losning på en pH på 3 - 4 og oppvarmer i noen minutter opp til 2 timer ved temperaturer på 30 - 50°C, adskiller utfelte proteiner, innstiller den tilbakeblivende losning på en pH på 4,5 - 7 og underkaster den en fraksjonert saltfelling for forst å utfelle baliaststoffene og så utfelle en fraksjon som inneholder det enzymatiske virkestoff, lose sistnevnte i destillert vann og inn-stille losningen på en pH på 4 - 6, og
for det tredje bringer den ifolge (a) eller (b) erholdte losning som inneholder fraksjonen med det enzymatiske virkestoff til omsetning med fenol eller et fenolderivat, spalter det uloselige reaksjonsprodukt ved behandling med fortynnet eddiksyre i polart organisk løsningsmiddel eller med en base i vandig medium ved en pH på 7,5 - 8,5 og isolerer det frigjorte enzymatiske virkestoff ved ultrafiltrering, dialyse eller gelfiltrering.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at man som fenolderivat anvender fenol, cresol eller natriumsalicylat.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH73371A CH586233A5 (no) | 1971-01-18 | 1971-01-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO138145B true NO138145B (no) | 1978-04-03 |
| NO138145C NO138145C (no) | 1978-07-12 |
Family
ID=4193923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO97/72A NO138145C (no) | 1971-01-18 | 1972-01-18 | Fremgangsmaate for fremstilling av et enzympreparat |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3849252A (no) |
| AR (1) | AR196298A1 (no) |
| AT (1) | AT321456B (no) |
| AU (1) | AU476722B2 (no) |
| BE (1) | BE778226A (no) |
| BR (1) | BR7200318D0 (no) |
| CA (1) | CA966418A (no) |
| CH (1) | CH586233A5 (no) |
| CS (1) | CS168578B2 (no) |
| DE (1) | DE2201993C2 (no) |
| ES (1) | ES398962A1 (no) |
| FI (1) | FI51485C (no) |
| HU (1) | HU165725B (no) |
| IL (1) | IL38536A (no) |
| NL (1) | NL176955C (no) |
| NO (1) | NO138145C (no) |
| PH (1) | PH15651A (no) |
| PL (1) | PL82807B1 (no) |
| SE (1) | SE407805B (no) |
| SU (1) | SU581872A3 (no) |
| ZA (1) | ZA72132B (no) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2615844A1 (de) * | 1976-04-10 | 1977-10-20 | Knoll Ag | Fibrinogen spaltendes enzymsystem |
| CH626917A5 (no) * | 1976-08-17 | 1981-12-15 | Pentapharm Ag | |
| CH681693A5 (no) * | 1991-02-28 | 1993-05-14 | Pentapharm Ag | |
| US6613324B1 (en) * | 1991-02-28 | 2003-09-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Adhesive for the gluing of biological tissues |
| EP0534178B1 (en) * | 1991-09-27 | 2001-04-18 | Omrix Biopharmaceuticals S.A. | Improved tissue glue prepared by using cryoprecipitate |
| DE4202667C1 (no) * | 1992-01-29 | 1993-05-13 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg, De | |
| DE4203965A1 (de) * | 1992-02-11 | 1993-08-12 | Max Planck Gesellschaft | Antidot fuer hirudin und synthetische thrombininhibitoren |
| CN1091315A (zh) * | 1992-10-08 | 1994-08-31 | E·R·斯奎布父子公司 | 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法 |
| CA2159469C (en) * | 1993-03-30 | 2004-06-22 | Uri Martinowitz | Two component fibrin glue |
| US5681815A (en) * | 1993-06-28 | 1997-10-28 | Sophie Chen | Antiviral and antitumor agents |
| JP3742675B2 (ja) * | 1995-06-28 | 2006-02-08 | 東菱薬品工業株式会社 | 虚血−再灌流障害の予防および治療薬 |
| JP3866800B2 (ja) * | 1996-08-29 | 2007-01-10 | 東菱薬品工業株式会社 | アポトーシス関連疾患の予防及び／又は治療薬 |
| US6132598A (en) * | 1997-01-08 | 2000-10-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Centrifuge apparatus with temperature control means |
| WO1998030304A1 (en) * | 1997-01-08 | 1998-07-16 | Bristol-Myers Squibb Company | A centrifuge apparatus with temperature control means |
| US6365380B2 (en) | 2000-02-23 | 2002-04-02 | Pcbu Services, Inc. | Method for stereoselectively inverting a chiral center of a chemical compound using an enzyme and a metal catalyst |
| CN100335622C (zh) * | 2003-03-28 | 2007-09-05 | 上海万兴生物制药有限公司 | 巴曲酶基因的合成及其表达产物的纯化制备 |
| GB2431655A (en) * | 2005-10-27 | 2007-05-02 | Pentapharm Ag | Antagonisation of anticoagulants |
| AU2007350619B2 (en) * | 2007-03-30 | 2013-12-19 | Shanghai Tenry Pharmaceutical Co., Ltd. | A purified recombinant batroxobin with high specific activity |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1094301A (en) * | 1964-02-21 | 1967-12-06 | Nat Res Dev | Improvements relating to anticoagulants |
| GB1293795A (en) * | 1969-07-04 | 1972-10-25 | Twyford Lab Ltd | Improvements relating to anticoagulants |
-
1971
- 1971-01-18 CH CH73371A patent/CH586233A5/xx not_active IP Right Cessation
-
1972
- 1972-01-10 IL IL38536A patent/IL38536A/xx unknown
- 1972-01-10 ZA ZA720132A patent/ZA72132B/xx unknown
- 1972-01-12 CA CA132,228A patent/CA966418A/en not_active Expired
- 1972-01-14 US US00217994A patent/US3849252A/en not_active Expired - Lifetime
- 1972-01-14 AU AU37939/72A patent/AU476722B2/en not_active Expired
- 1972-01-17 DE DE2201993A patent/DE2201993C2/de not_active Expired
- 1972-01-17 NL NLAANVRAGE7200638,A patent/NL176955C/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-01-17 PL PL1972152947A patent/PL82807B1/pl unknown
- 1972-01-18 ES ES398962A patent/ES398962A1/es not_active Expired
- 1972-01-18 FI FI720109A patent/FI51485C/fi active
- 1972-01-18 HU HUPE811A patent/HU165725B/hu unknown
- 1972-01-18 AT AT39972A patent/AT321456B/de not_active IP Right Cessation
- 1972-01-18 SU SU7201738944A patent/SU581872A3/ru active
- 1972-01-18 CS CS311A patent/CS168578B2/cs unknown
- 1972-01-18 NO NO97/72A patent/NO138145C/no unknown
- 1972-01-18 SE SE7200546A patent/SE407805B/xx unknown
- 1972-01-19 AR AR240143A patent/AR196298A1/es active
- 1972-01-19 BE BE778226A patent/BE778226A/xx unknown
- 1972-01-19 BR BR318/72A patent/BR7200318D0/pt unknown
-
1973
- 1973-01-18 PH PH13212A patent/PH15651A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS168578B2 (no) | 1976-06-29 |
| IL38536A0 (en) | 1972-03-28 |
| FI51485C (fi) | 1977-01-10 |
| AR196298A1 (es) | 1973-12-18 |
| ZA72132B (en) | 1972-09-27 |
| SU581872A3 (ru) | 1977-11-25 |
| DE2201993A1 (de) | 1972-08-10 |
| NL176955C (nl) | 1985-07-01 |
| DE2201993C2 (de) | 1986-09-18 |
| PH15651A (en) | 1983-03-11 |
| CH586233A5 (no) | 1977-03-31 |
| CA966418A (en) | 1975-04-22 |
| PL82807B1 (no) | 1975-10-31 |
| NL176955B (nl) | 1985-02-01 |
| NO138145C (no) | 1978-07-12 |
| HU165725B (no) | 1974-10-28 |
| ES398962A1 (es) | 1976-01-01 |
| BE778226A (fr) | 1972-07-19 |
| NL7200638A (no) | 1972-07-20 |
| AT321456B (de) | 1975-04-10 |
| IL38536A (en) | 1975-08-31 |
| FI51485B (no) | 1976-09-30 |
| BR7200318D0 (pt) | 1973-10-04 |
| SE407805B (sv) | 1979-04-23 |
| AU476722B2 (en) | 1976-09-30 |
| US3849252A (en) | 1974-11-19 |
| AU3793972A (en) | 1973-07-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO138145B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av et enzympreparat | |
| CA1126652A (en) | Antithrombin preparation and process for the production thereof | |
| US5877152A (en) | Method for isolation of highly pure von Willebrand Factor | |
| US4081431A (en) | Blood fractionation | |
| US4877866A (en) | Method of producing a virus safe, storage-stable, and intravenously tolerable immunoglobulin-G preparation | |
| CA1179263A (en) | Chymopapain and method for its use | |
| JPH05186369A (ja) | 治療的用途のためのヒトトロンビン濃厚液の製造法 | |
| NO742216L (no) | ||
| DK155568B (da) | Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering | |
| NO142381B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av den antihemofile faktor | |
| JPS62174023A (ja) | 抗血液凝固物質、その製法及びそれを有効成分とする抗血液凝固剤 | |
| US8476054B2 (en) | Thrombin-like enzyme of Agkistrodon acutus | |
| JPH0676337B2 (ja) | 高純度抗血友病性因子濃縮物の製造法 | |
| US5097019A (en) | Pharmaceutical containing tissue protein pp4, a process for the preparation of pp4 and for the pasteurization thereof, and the use of pp4 | |
| DE2734427C3 (de) | Verfahren zur Gewinnung von thrombinartigen Enzymen aus Schlangengiften | |
| FI81363B (fi) | Foerfarande foer pastoerisering av preparat av blodkoaguleringsfaktorerna ii, vii, ix och x. | |
| US4115551A (en) | Compounds of the plasminogen type and method for obtaining such compounds from placental pulps | |
| US2808362A (en) | Preparation of hyaluronidase | |
| US5811279A (en) | Method for activating prothrombin with polyethylene glycol | |
| US4361510A (en) | Blood coagulation promoting product | |
| JPS61189228A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| US5945103A (en) | Process for producing thrombin | |
| CN1548534B (zh) | 一种蛇毒血凝酶及其生产方法与应用 | |
| RU2256464C1 (ru) | Способ получения с1-эстеразного ингибитора человека и продукт для использования в медицине | |
| US4873222A (en) | Placenta-derived anticoagulating substance |