JPS58139067A - 液体試料の測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、献体試料を乾式分析定量するための改良され
た方法に関゛シ、史に叶しくは、展開不良ｔもたらすよ
う１に一粘性敵体賦料の分析足型に軸に有効な転弐分有
方ｆｆ１ＫＩ＊するＯ数体試料中の特定化学成分を乾式
で、かつ迅速、簡便に定皺する材料としての多層分析シ
ートはすでに公知である０たとえは、特開昭４９−６３
８８８号、ＩＮ開昭５０−１３７１９２号、％開昭５１
−４０１９１号、特開昭５２−３４８８号、特開昭５２
−１３１７８６号、特開昭５３−１３１０８９号、籍−
陥６４−２９７００号、狩−昭５４−３４２９８号、米
国籍計第４．１１０，０７９　号、同第４，１３２，５
２８　号などの谷明細書および［ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃ
ｈｅｍｉａｔｒｙＪ　ｇ８２４舎纂１３３５〜ｌａ５ｏ
ＪＸ（ｘ９７ｇ年〕などに静軸に記述されている◎かか
る多ノー分併シートは、液体試料を展姑する展開層や分
析に必嶽な試乗類を含肩する鳩などｔ予め支持体の上に
慎層した形式のもので、＊赤の化学分析に麩してｒｚ、
　［慣敵試料のｌ調をシート上に付層させる慄作と、６
斌化の＃！直−ｊ厘辣作との２つの基本的な慄ｆ←のみ
で定量がｏＪ詑であり、健米汰の如く区緘宮の用意、区
条彪赦の脚衾押菫、絵肌、緻密な試料秤取などを一切必
費としない乾式の化学分析用の躬科である。・ これらの多層化学分析シートの基本構造は、支持体、試
薬層、試料展開層がこの１ＩｉＫ＆るよう構成されたも
のである・ この分析シートの展開層上ＫＭ下された液体試料液滴は
、展開層によって均一に拡散すると同時に試薬を層中に
浸入して反応し、そこで検出−■舵な化学種に変換され
る（通常、着色又は変色が生じる）ので、その着色ある
いは変色の度合１１１−綾祭し足置することによって液
体試料中に含まれる儂検榔質を定量することができる・
このような乾式分析操作かり能である蛾大の理由は、液
体試料展開層が適用された液体試料の容置に応じて、単
位面積轟ヤはソ一定容量の液体試料を試薬層に供給する
作用、すなわち、液体試料展開層用ｔもつことによる。

液体試料ｊＩＩ嬌作用にすぐれ′＃−展關展開得るため
、最近では樵々の木材が研究開発−れている０しかしな
がら、粘度の尚い液体試料、特に、保存血液やへ！トク
リット値の着しく高い全血を液体試料として使用する場
合には、従来のＩＩｋＮＰＩＪ巣材會用いて一満足でき
る展延作用ｔ１１ることができず、事実上−ｊ定不能の
領域が存在していた。このような領域は必ずしも恒常的
に存在するものではないが、特に臨床検査の分野におい
ては異常に＾１１１度（高粘度でもある）１示す病的因
子の横比が検査の主眼であることｔ考遥すると、測定不
能とされていた領域をできるだけ少なくして測定レンジ
の拡大を図ることが望まれた０従来法においては、１％
枯性敵体試料ｋｍ定可貌な領域にまで予め鞠釈する方法
（以下「率＃ＩＩＩ＋１１駅と叶ぶことかある。〕が保
られた０この楕釈法によれば、液体試料の粘ｔｎＭじて
殉釈度を虜竪することができるから、場−的には相尚尚
帖性の液体試料であっても多層分析フィルムの展処作用
を利用する被検物質の測定が可能な否である◎ところが
、准体試料の４１１釈直が尚ければ高い機、試薬層にお
いて生じるべき検出１６号のレベル（・発色ないし変色
のＩＩＩＩｆＩＬ）は反比例して減少し、元字的ｇ取９
が不正＠　ｒｃなるおそれかめる〇また、全血、竹にへ
ｉトクリット寺が尚〈袖柱の高い血液試料の少量を正確
に秤量することＦｉ暖しく、従って稀釈−差が大きくな
９がちである０試料採取時の容量誤差は、１００μｍ以
下の少ＩＩｋをマイク闘ピペット等で秤量する場合に大
きく、時にａｌｏμｊ以下の場合にはよはどの工夫をし
、よほどの注意を払わないかぎゃ建菫的な採取は不可能
といっても過言ではないほどである０さらに、実際の櫂
釈法では液体試料に対して相当量の水音使用しなければ
ならず（例えば、液体試料６ｓｌ対水ｓｓｌという椰釈
Ｆｉ参実上不可能である］、このことも樽釈の巾を狭め
る賛因であった＠ また、反応系外で稀釈を行う必要があることから、−」
足操作に新たな手練が付加されることになるし、さらに
、樽釈のための別の容器が必要となる。その上、正＃ｉ
Ｋ槽釈を行なって檜釈度を定めておかなければ、被検物
質の足置は不可能でめる。実際に検知される着色ある匹
は変色は＠釈された液体試料のそれであり、櫓釈直に乗
じなければその絶対量を知る仁とができないからである
。これらの操作は、試料の敵密な秤取を必要とせず、簡
便に測定を行うことができると、多層分析フィルムの最
大のメリッ）１−減殺するものであり、多層分析フィル
ムの長所を損うことのない対応が望まれていた。

展開に改良する一つの方法として、液体試料展開層の表
Ｉ１１［ｌｔ−表面活性剤で処理しておき、液体試料が
この層に点漕されたときに液体試料の展開を補助するよ
うな工夫が特開昭５２−１３１７８６及び特開昭５５−
１６４３５６に記載されている。また、展開層木材を予
めグロー放電処理等により物理的に活性化しておいて、
回じ〈液体試料の展開【補助する方法が特願昭５６−１
４０５３２（Ｊ？１１１昭　　−〕Ｋ記載されている・
しかしながら、これらの方法はいずれにしてもはぼ完全
に乾燥した状悪の多層分析フィルム上に液体試料を適用
するものであるから、その展開層上で液体試料による謹
れが開始して展開が過性するのに迅速性を欠くのＦｉ当
然である０ｊＩ一層中に・宿性剤やグリセリンなど吸湿
性の高い成分を添加しておくと展開性が良好になること
は公知であるが、一般に多層分析材料の含水率を高くす
る仁とはかえって保存中の試薬の安定性ｔ８くしたり、
不必要な増色（ｆ４存カブリ）音生ずる等不都合が多く
、親水性の付与Ｋｔｉ限界があるのが実情であったＯそ
してこのように改良された展開層を備えたチー分析フィ
ルムを使用する場合でもなお展開不良を生じたり、展開
に長い時間ｔｌ！する等の不都合をもたらす高粘性液体
試料が存在し、どのような液体試料にも対応できる多層
分析フィルムの出現が望まれていた。

本発明は、上記公知技鈎の欠点ｔすべて解消する改良さ
れた測定法を提供するものであるＯ本発明の目的は、従
って、多層分析フィルムのメリットを損わず、画定のラ
チチユードを拡大することができる被検−質、の改良さ
れ丸編定法を提供することにある。

本発明の目的はさらに高粘性液体試料をＩｌ！崩しても
展開不良を生じない１ｗ１便な測定法を提供することに
ある。

本発明の測定法は、被検′４ＩＪ質を含む？１に捧試料
會、支持体、当該被検物質と反応して検出可能な化学種
に変換し得る吻買を含む少くとも一つの試薬層及び液体
試料展開層を編次慣−してなる多層分析要素の罰配朧開
層に適用し、前ｍｌｌ出出可能化学種を検出することか
らなる仮慎切貿の測定法において、液体試料ｔｍｔｔ配
多ノー分析蒙素に通用する１に湿詞敵を前記多層分析材
料の展一層に通用することを軸値とする０ここで［検出
可能な化学種」とは光学的もしくは輻射的手段で直接又
は開俵に４＆検吻負の仔在及び／又は−直の（−悼とな
る慣知可すにな仏号又は備考の変化であって、例えば、
発色元字磯涙、螢光光字衾良、電磁波（放射−ｔざむ）
強直あるいはこれらの談ＪＪＩＬ直化またｒｉ独匿変化
婦である〇 ［液体試料展開層」とは、準位ｔｈｌ慎当りはソ　　　
　　　　　（一定谷一〇敵体試料ｔ−緘桑増に惧紺する
１＆棒賦科に開姑作用ｔもつ栴成層であ６０以下、率に
展開層と略記する〇 ［試薬層」とは、上記の如く供給される液体試料に含ま
れる被検物質と反応して検出可能な化学種に変換するこ
とができる物質を含む試薬組成物を含有する層であり、
この層で検出可能な化学種が生成される。

［湿潤液１とは、多層分析フィルムの展開層上に適用し
、展開層０ＩＩＳ及び／又は内Ｓｔで會湿−状１１にも
たらすことができる筐体であって、少くとも値検液と容
易に混和する筐体である。従って、被検液が血液、尿、
すい液等の体液である場合には、水と混和性の水性躯体
である。即ち、多層分析材料の展開層を均一に湿潤する
水又は液体であって、グリセリン、アルコール、あるい
は極性溶剤を主体とする、粘性の低い液状物を指す０ ここにいう「湿−状態」とは、上記湿−譲により展開層
が均一に湿潤された状態であって、ｋ一層の１７当り０
．１μ）以上の鏝濶淑を含む状ｍｅいう・ 湿潤液には、活性剤、グリセリン、アルフイン等の水蓄
性高分子物質、食塩、塩化カルシウムなどの水溶性塩の
他、０１ｆＩ４以外の検出反応を改良、促進する目的で
、ｆＩｋ（ｉｌ剤、ビリルビン膳離剤、加水分解酵素ア
ルスコルビン酸オキシダーゼなどの紡曹物質の除去剤な
どｔｇｓ加しておくことができる。

本発明の測定法においては、支持体、試薬層及び液体試
料展開層が仁の順に積層一体化された多層分析要素（フ
ィルム）【使用して普慣物質の冗量分析を行うに当り、
まず、肢開層上に＆１＠Ｉ％ｉｔ−適用し、その後猷体
賦、＄＋【適用するものである。液体試料を適用するに
先立って匿詞液ｔＭ＆開層に供給すると、湿Ｉｓ液は辰
一層の表向を湿潤すると同時に展開層の展延作用により
Ｍｋ開層を体を湿詞状庫にする０こうして湿閥状膳とな
った展開層に液体試料を魚屑すると、従来展開不良を生
じていたような＾粘性本体ド科ｋＷ用した場合でも、均
一な展開が、しかも短時間で実機できたのである０、員
ＩＰｉ４Ｉ＠自身は、献体の均−展嬌作用をもつもので
あるとは言え、湿胸液の均一展開が行われた後では、展
開層は湿潤液をその中に含んだ状態であり、その時の展
開層の物性が乾燥状態のそれと全く同一であるとは考え
られず、従って、引き続き点着される液体試料が同じよ
うに均一展開されるとは考えられないのが普通である・
ところがこの予測に反して、試薬層に供給される液体試
料の容量は、供給量とは無関係に単位向横当）＃１ソ不
変でめり、展開層の展嬌作用に関しては乾燥状態と全く
変らない機能を発現することが見出された。この展延作
用は、相当＾粘性の箪体試料會使用した場合でも同様に
発現されるばかりでなく、湿＠液を供給しない乾燥状態
の多層分析フィルムの展地作用に比較すると、著しく早
い速度で展開が行われることも見出された０こＯように
、湿＠＊１予め供給した場合にはもちろん従来法に観察
されるような展開不要は全く起らないＯ また本発明の方法によれば、多層分析フィルムの０１ｆ
Ａ状態が憾されるのはその使用時であり、使用されるま
では完全に乾燥した状態で保存されるから、湿潤状態と
されることによって懸念される保存時のかぶりのおそれ
は全く生じない。

このような本発明の効果は、湿潤液の供給によって単に
展開層が湿潤状態となったことだけＫもとずくものでは
なく、展開速度を促進すると同時にミクロ的にはいわゆ
る単純稀釈と同様な稀釈現象が展開層の各部分において
生じていることによるものではな込かと思われる０湿掴
状態となった展開層に成体試料を点着すると、その展開
層を通して率位面槓当９はｙ−逆菫の液体試料が一律に
稀釈された一度で展開層の下に位置する試薬層に供給さ
れるからである。しかしながら、本発明において、生じ
るこのような徹体の定量供給を伴う権釈曳象ｒｉ華なる
単純稀釈の果合とはまた全く異質のものである。このこ
とは、後に詳記するように、本発明の方法にお藝ては、
殉釈するに従って発色−ｋが下るという従来の単純稀釈
における欠点は全く観察されず、むしろ、液体試料の種
ＭＫ応じである稀釈度に発色負度のピークがある仁とか
ら推察できる。

本発明は多層分析材料による液体試料の分析法の改良に
関するものであり、条件ｔ−選べば、展開層上でのいわ
ゆる稀釈操作も可能であるから、稀釈の場合には稀釈液
と試料液体との何らかの攪拌がより分析結果を得る為の
必要秦件であるのに対し、本発明では、意図的な攪拌は
一切不要であることもＩＩ＃徴の−っである。

こ仁に［湿潤准比ｊとは、多層分析材料に適用される被
検液の量に対する湿潤液の菫の比である０仮慎液を２倍
から数１０倍に稀釈する通常の稀釈とは異なり、湿潤液
は展開層上温調するのが目的であるので、湿＠液の量は
槓検液量と同綾あるいはそれ以下、すなわち湿潤液比は
１以下とするのが望ましい０澤濶液比ｔ−ＩＪｊＡ上に
することも勿論本発明の範囲からはずれる賜のではない
が、ｆＩｌ＠液量がチいと多層分析材料の実質部分をＯ
ｉ温調液満してしまい被検液中の被検物質との円滑な反
応が妨けられてしまう。

本発明において使用される湿＃４液は、水性であり、液
体試料よりも゛低粘度のものであることそして、被検物
質の定量データＫｇ差を与えるような干渉物質を含まず
液体試料と混和性のよいものであれば、特ＫＩＩｌｌ＠
がなくどのような液体であってもよい＠ 敵も代表的な湿＠＃ＬＦｉ水、グリセリンあるいは水と
極性溶剤との混合物であるが、このｔよか生垣的食塩水
も同様に使用することができる。

これらにはさらに１塩ＣＨＬば、塩化ナトリウ″ム、燐
酸塩、塩化カルシウム）、赦−剰（拘えば、Ｎ　＆　１
　ＨＰ　０４−Ｋ　Ｈ＠　Ｐ　Ｏ４ａ　Ｎ＆　、ｋｉＰ
ｏ、　−くえん酸、トリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタン−塩酸など「化学便覧」基鍵−璽（九晋、１９６
６年発付３１３１２−１３２０ｊｌ、「Ｂｉｏｅｈ＠ｍ
１ｓｔｒＦＪ　、　６　、４６７　（１９６６年ンに１
１６献の峨備液用の駿僑剤の岨合せ）、界面粘性剤（例
、アニオン性、カチオン性、非イオン性の界面活性剤〕
、蛋日質（例、アルブ々ン）等ｔ−添加してもよい。

鍼洞液は−―的には展開層を湿潤させる役目を来すもの
であるが、会費に応じ仁れに付加的な機能ｔもたせるこ
ともできる０例えば、内因番 性の購合物質あるいは妨害物質の除去及び／又ｔＩ′１
組害して分析積度ｔさらに＾めるという目的で、湿＠赦
に１１１Ｉ々の添加剤′に添加することができる。仁の
ような厳加剤のｍ類及びその作用ないし憬能Ｆｉ従来の
湿式分４１′ｒにおいて広く知られているが、代表的な
−のｔ以下に列挙する０第　ｌ　妖 本発明は、多層分析材料の有する簡便性と南いｎ度など
の性能を損うことなく軸足しうる試料液体のラテテエー
ドを広ける多層分析材料の改良に関するものである。本
発明においては譲＃４液と液体試料との意図的な攪拌會
必豊としない０湿＠液七のもの主目的は、展開表面の均
一な０１＠である０多層分析材料の展開層の均一展開作
用によりｏｉｌＩＩＩｆｒＬも又均一展開されるｏ値っ
て、粂ｆＦｔＳべばａｕｓｔ液量さえも敵智に秤量され
る必費はない０展開層が丹塊性よく蓬詞される条件Ｆｉ
展開層の材質、構造、膜厚、衣（２）の処理状−などと
湿＠菰の性員によって與なる０湿詞液は、展開層に直接
（例えば、マイフロピペラ）ｋｆ用）点着するかあるい
は液体ａｍ性担体（例えば、綿棒、ｆｓ紙ススティツタ
に一旦湿一液ｔｔｉｉｉ賦させた後でこれ會展開層に押
しあてて間接に供給すゐ手段、紙片を橿潤液に浸して儒
らした後これｔａｓｇ層上に重ねて圧着する手取、ある
いは展開層Ｋｆｉ＃［ｔスプレィするなどの千＊によ）
直接又は関１１に供給するこ゛とができる。

湿ａ叡は被検液の展開層への通用に先立って適用される
Ｏ湿ｌ５ＩＩ［と被検液との適用のタイミングはできる
だけ近いことが好ましく、龜調敵の展開恢直ちに試料液
体音道用する０湿−猷麓が斧い吻合には籍にタイミング
が重責であるＯ誕１４猷瀘が５ｆｉｌ／ａｌである場合
、湿潤後試料献体適用までの時間が１０秒以上経過し友
ときは、ａ１１調直後の通用に比べてｈきらかによく４
い績米を与えた０遁常この通用までの時間は橿＠＠愉か
ら５秒以内であることが孟ましい・橿＃４？＆ｌ菫が１
ｆｉ１７１４以下と少な一場合は、湿−のタイミングは
大巾に広がる０ＩＶＩＫ湿＃１１液中にグリセリン勢揮
発しにくい水性成分が含まれている場合には、湿潤のタ
イミングはあまり間瓶とならない＠ 適用される湿ｍ液の量は多層分析フィルムの展開層の少
くとも！！Ｒ函を前記湿潤状態とする童であれば充分で
ある０従って、その１には展開層のサイズ及び材質によ
って定まるが、およそ０　、１　＃ｊ／ｃａｔ−１０ｓ
　Ｉ／ｄの量であることが望ましい。被検液体の適用量
が２〜１０μ）の場合、特に好ましい範囲は０．５〜５
μノの範ｄであり、被検做体に対する湿１１ｍ敵の容重
比（儀＃液比）は０．１〜ｌである。展開不良を改醤す
ると同時に稀釈及び定量供給効果ｔも実現するためには
展開層全体が前記ａ１ｇ状−となることがｉｌましい０ 液体試料が着しく高１１１度の４ｉ［慣物實會含む場合
あるいは相当＾粘ｆｆ１（！Ｏ〜６０ＣＰ８機直）であ
る場合には、展開性の改良に加えて展開層における櫂釈
効米ｔＳ実にするために１：ｌないし０　、１　：　１
０湿ｌ＃Ｉｌｔ比、好ましくは１：ｌないし０．５：１
となるように、まず一定量の湿−液を展開層上に供給し
、次いで、一定量の敵体試料ｔ−供艙すゐ＠すると、仁
のようＫＩＬ定されて所望の槽釈度に稀釈され九液体試
料が単位面積当９はソ一定量ずつ試薬層に供給される・
高曖度のグルコース中コレステロールなどをオキシダー
ゼｍ嵩ｔＭ！Ａ％Ａて検出する場合、筐体区科の湿ｇ液
比と試薬層において生成する検知可能な化学種、例えば
、着色物質の発色酸度との関係については最適条件が存
在する。Ｉ！米の単＃４惰釈によれば、稀釈の直置が大
きければ大きい根、発色１１１にはこれに反比例して小
さくなる０ところが、本発明においてはこのような反比
例関係社Ｉｌ！察されず、ある温調液比において発色Ｗ
Ｉ！度のビータが観察されるのである・最大発色ＩＩＩ
ＩＩＬｔ−示す権釈弊、は検知可能な種θ種鎮、すなわ
ち、被検物質の種類によって＾なる。例えは、全血中の
ダルコース欄定において、発色ｍ直を細定すると、全血
［容量対温貞淑０．２容ｊｌｉ（温調液比０．２）を使
用する系よりも全血ｌ容量対湿調液ｌ容量（温調液比ｌ
）を使用する系の方が高い発色鎖＊１示す０その一例會
後記実施例に挙げる・すなわち、湿＠ｔｔが少ないと全
血試料の均一展開が妨げられて良好な発色が得られにく
く、ｔた湿＃敵量が多すぎても発色酸度が低下する０こ
れは、いずれもオキシダー−ｖ＃素による被検物質の酸
化に会費な酸素の良ｎ）艙が妨げられることによるもの
と思われる〇 本発明の方法に使用される多層分析賛＄（フィルム）は
支持体、少くとも一つの試薬層及び展開層の三層から構
成されていればよい。

展開層は、液体試料を展延させる性Ｘｔ−もつ材料で構
成されている＠９、特別の制限を蒙しない０例えば、推
々の孔ｆ！ｋをもつポリマーｔ４ｓ換（メンプライフィ
ルター］、セファデックス、１１ 等の非繊維責鍼体；パルグ、綿、綱、羊毛のような天然
繊維；セルロースエステル、ビスコースレーヨンの１う
な牛合成繊−；ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフ
ィンのような合成繊維；史に、城−質無機材料、例えば
、ガラス繊維、増色ガラス繊維、石綿静上繊物、フェル
ト、連枕窒障含有不織布などの形にして用いることがで
き、あるいは、疎水性合成ポリマーパルプ（親水化処理
されたもの）から抄いて製造され、紙、疎水性合成ポリ
マーパルプと天然パルプとの混抄紙などｔ用いることが
できる〇 メンブランフィルターとしては「々りｏフィルター」（
菖士写真フィルム社Ｊｌｌり、ｒ々リボアー」（ミリボ
アーコーボレーシＭ／＃）など音用いることができる〇 展開層に用いろことができる織物としては、ｍｗ、動物
及び鉱物などの天然繊織、無機、鼻先、半合成及び合成
などの人造繊−から得られる広範囲の徨餉の臓物があり
、臓物鑑識のうちでは、たて糸とよこ糸とで繊った平織
が好ましい０平威會構成するたて糸およびＬこ糸として
は、２０査中から１２０９手の範ｌｓＩが好ましい０平
繊繊榔のうちでは、細布、全島、プレード、ボブリンと
よばれる種類のｌＪｓ臓物が好ましい０これらと岡じ繊
）方をした天然繊維（カポック、亜麻、大麻、う建−１
絹等）または化学繊維（ビスコースレーヨン、銅アン毫
二アレー曹ン、竜ルロースアセテート、セルローストリ
アセテート、ビニロン、ポリエチレンテレフタレート等
）と綿との混紡練物、化学繊維糸を用いてこれらと四じ
練り方をした織物も用いることができる。

＃記轍維ｔ１賊物とせず布状に連続空−が内部に存在す
るように成製せしめた不織布も、織物と同様に展開層に
用いることかできる。

ＪｌｉＦＭ層に用いることができる航としては、水透過
性であれば広範囲の種類の紙が用いられる。

具体的には、例えは、ｆＩ紙を用いることができ、薄手
で目の細かいｆＪ紙が籍に好ましい０インディアン紙、
こうぞ、みつまたなどの和紙も用いることがてきる。天
然セルロースの厭はか９でなく、合成＾分子の繊維をす
いて紙状にした透過性【有する紙や合成＾分子の繊維（
パルプフと天然パルプとの混抄紙、石綿、ガラス繊維１
紙も展開層として用いることができる・さらに、これら
の多孔性物質、殊に繊維質多孔性ｖＩＪ買に絡めて、デ
キストラン、アガ四−ス、アクリルアミド、セルロース
などの黴粒秋物を混入すると、試料液の保水能力が増し
好適であるＯ なお、展開層の構成及びこれに用いられる材料のＩＩＰ
細は、％圓昭！１６−１６４３６４、轡關１１ｄ４９−
５３１１１１１１ｊｉＰ！びＩ￥Ｉ願昭６６−３４３７
０に開示されている０ 上記展開層は多層分析フィルムの最外層に位置し、約５
０＾ＩＩｌ〜６００μ翼好ましくは１００〜２００７１
１１の厚１！ｉｔ４つ層であり。

試薬層は、液体試料中の被検物′Ｘを定量するための試
薬ｔゼラチン、ポリビニルアルブーｋ、ポリビニルピロ
リドン、アガロース、ポリビニルベンゼンスルホン績ナ
トリウムなト公知ノ履水性バインダー中に分散包含させ
九組威物［１μ凰から１００Ｊ１票Ｏ！＃さに設けたも
のである０例えば、液体試料中のプドク糖【定量するた
めの試薬層の工費組成としては、グルコースオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン、１，
７−ジヒドａｄＦシナフタレンの４成分をゼラチンをバ
インダーとして用いてｌＯμ翼から２０μ藁の厚さの層
に設けることができる・ この試薬層の上に前記展開層會うミネート優着するか、
または展開層用の組成物の分散額を塗布し、制御下に乾
燥して＃記展開層を設ける０試薬層は二層以上に構成し
てもよい。共やく反応【利用して検知可能なｔＩＡ會生
酸生成場合に、各反応１に段階的に行う方が効率がよい
場合があるからである。支持体としては、ポリエチレン
テレフタレート、竜ルロースエステル（セルロースジア
セテート、セル關−ストリアセテート、セルロースアセ
テートフーヒオネートなト）、ポリヵーボネートリポリ
）Ｉｆｋ□クリい一トなどのフィル人類やガラス板など
厚さ約ｂＯμ翼から約２−までの公知の水不参選性透明
支持体【用いることかでｔ！る・支持体として、上記の
透明支持体にカーボンプラッタ、酸化チタン、７タロシ
ア工ン銅等ｅ＠料を分散したもの中、１１型紙等の不透
明支持体も使用すｈことができる０この場合には、分析
反応終了役、支持体をはく離した後で柵定をおこなう０ 以上の基本的な層の外、その構造及び／又はｆＪＩＡ能
【補助するため種々の任意の層を設けることができる０
例えば、基本の構成層間ｅａｓｔ改良するための接着層
、欄定機能を補助するえめの色遁薮層または光反射層な
どである。

接着層としては試薬層、また蝶色纏薮層宜えは光反射層
などＯ分析機能補助層のバインダーとして用いられてい
る親水性ポリマーｔａｖｈｈことかでき、この場合には
接着層の嵐本性ポダマーが牛乾きの状ｌｌＯとき、まえ
は親水性ポリマーを水または米自活性剤を含む水でｍ濶
させておいて、練物からなる液体試料展一層を過蟻な圧
力をかけて接着層に１１着することができる。

候層層の厚さは０．１ｊＮａからｌＳμ雪、好筐しくは
０．６μ翼から５μ翼の範凹である。

上記のように構成された多層分析フィルムに本発明の方
法を適用すると、従来−１定不能とされていた高挨度の
被検物質を含む、あるいは為粘性の液体試料を検体とす
る場合でも、簡便に定量分析を行うことができ、精屓の
＾い結果が得られる。

本発明の方法が特に有効である液体試料は、全血、殊に
保存血液、ヘマトクリット値の高い血液、すでに凝固が
始まっている血液、蛋白質金倉の高い血液等、何らかの
理由で高い粘度を示すものである。

本発明の方法の利点ｔ−豐約ずれは、次の通りである。

■　液体試料の展開が改讐され、あるいは健米法でＭ開
不能とされていた液体試料の皺ｒＲ４を可能にすること
ができる。

■　均−稀釈効果及び試薬層への足鴛供給効果がもたら
される。

■　補釈のための容−が不費である。

■　特別な器具を必要とすることなく、例外的に商議ｊ
ｆ′ｆｒ示す患者から採取し九試料にも対応することが
でき、測定のラチチユードを拡大することができる。

■　短時間の単純な操作でよい０ ■　稀釈の鴨が広い。

以下実施例上参照して本＠明の方法をさらに秤細に説明
する・実施例中に使用した多層分析スライドは、綿とポ
リエチレンテレフタレートの混紡ブロードの片面上グロ
ー放電処理したほかは、特開昭５５−１６４３５６実施
例！と同様にこして多項分析フィルム’ｋｆｌｉｊｌ、
得られた多層分析フィルムを軸片に＊１ＩＴＬ、ＩＩ開
隋６６−１４２４５４に開示されているスライド枠に収
めて作製した。

実施例１ 正常なヒトの血液にダルコース粉末を飽加し、：：・ 楯＃Ｉｋ約６５０ＩＱ／ｄｊの検体をつくった◇この検
体（６μｌ）を前記全血分析用スライドに点着し、６分
間イン中エベーシ曹ンし光Ｏち、５００ｎｍの反射光学
濃度１測定したところ０．８７ｇであって、発色は不安
定であり、〈）返し再現性もよくなかった０ 次に、同じ全血試料の点着に先立って、ｌ〇−のグリセ
リンと２０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）ｌｉ−含
む生理食塩水のｌＯμｌｔ点着し、５秒後に全血を点着
した◎その後の測定操作は上記と同様に実施したところ
、５００ｎｍにおける反射光学濃度は０．９８１であり
、均一な発色で再現性もよかった。

実施例２ 実施例１のグリセリン水にかえて、７チアルブミン水溶
液のｌＯμｌを前記多層分析スライドの展開層上に点着
し喪。５００　ｎｍにおける反射光学濃度は０．９６８
であった。同じ慄作ｔくり返し九ところ、良好な書塊性
が得られた。

実施例３ ０．９％の塩化ナトリウム會含む１０９６グリセリン水
浴液からなるｔ！１＠ｇｌＯμｌｋ多増分析スライドの
多回分析スライドした。次いで、１００．２００．３０
０　＃　４００．５００及び６００Ｉす／ｄｉの各濃度
のグルコースを含有する保存全血を検体として用い、実
施例１と同様に点着及びインキエペーシ曹ンを行ない、
反射光学濃度の測定を行なった０得られた結果を第１図
にＸ−Ｘで示す。

上記の湿潤液と同じ組成の液体を用いて上記検体を椰釈
用セルにて稀釈したのち、各稀釈検体を多ノー分析スラ
イドの展開層の上に点着した・上記と同様にインキエペ
ートした後、反射光学＠表の１＃ｌ定を行なった・得ら
れた結果會Ｉｇ１図に・−・でボす。

第１図から明らかなように、系外稀釈を行なった場合に
は、グルコース徴度が＾〈なＩ４００Ｗ／ｄｌｌを超え
ると、グルコースａｆと反射光学ａ寂との比例関係が失
われる０すなわち、従来の稀釈法によると、４００■／
ｌｌ１以上Ｏグルコース＃匿ヲ示す全血では、それ以上
の濃度域の・測定で不可能であることを示している０仁
れに対し、本発明の方法によると、４００Ｗｔｌ１以上
のグルコースａｍｔ示す全血においても、グルコース＃
に度と反射光学ＩＩＩＩ＆との良好な直−関係が得られ
ており、測定レンジが拡大されていることがわかる。

【図面の簡単な説明】

纂１図は、抛々のグルコース製置を示す保存全血（６μ
ｍ）を検体として用い、グルコース酸度と反射光学濃度
との関係管示すグラフである０図中、ｘ−×は本発明の
方法による結果を示し、・−・は従来法によるｌｊＭ米
を示す。 以　　上 特許出願人　　冨士写真フィルム休式会社代理人　　弁
理士　　砂　　川　　五　　部（ほか１名） 手続補正書（１員） 昭和Ｓ＄年５月Ｈｏ日 特許庁畏富＊＊＊＊殿 １、事件の表示 昭和　１１年　譬許　　願第・ｓＯ−・・号２、尭明の
名称　筐体−一一電法 ３、　補正をする者 事件との関係：４Ｉ許出履人 住　所　　神奈川系南凰柄市中８１１１０書地氏　　名
（名称）（Ｉｌｌ）富士写真フィルム株式自社側者大画
　實 ４、代理人 ５、　補正命令の日付　　　　　　　　　　　−員（別
紙） （１）　　明細書の４頁ｌＯ行の［（以下［単純稀釈と
ｊｔ−［（以下［単純稀釈１と１と訂正する。 （２）同７頁３行の［きると、１を［きるという１と罰
正し、同頁１４行）ｒ　５！１−１４０５３２　（特開
昭−）　Ｉ　ｋ　ｒ　５５−１４０５３２　（４１開昭
５７−６６３５９）１と訂正する。 （３）　　１Ｍｌ０Ｊ［５行の「アルスコルビン酸１ｔ
−ｒ了スコルビン酸１と訂正する。 （４）同１３ｊ［９行の［攪拌がより分析結果１ｔ−「
攪拌がよい分析結果１と訂正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　被検′＃ＩＪ買を含む液体試料ｔ、支持体、
   当咳仮伏切貴と反応して検出可能な化学種に変換し侍る
   物質を含む、少くとも一つの試薬層及び液体試料展開層
   を騰次槓層してなる多層分析資本の１ｉＩｌ記展開層に
   適用し、藺−記検出可能劇圀噛懺することからなる被検
   物質の測定法において、液体試料ｔ−面に２チ層分析費
   素に４川する面に、Ｏｉ温調液繭記多層分析費素の展＠
   Ｉ−に適用すること１０値とする数体試料中の４１１慣
   物質の測定法。