JPS59174757A - 全血試料の分析方法 - Google Patents
全血試料の分析方法Info
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- JPS59174757A JPS59174757A JP4930683A JP4930683A JPS59174757A JP S59174757 A JPS59174757 A JP S59174757A JP 4930683 A JP4930683 A JP 4930683A JP 4930683 A JP4930683 A JP 4930683A JP S59174757 A JPS59174757 A JP S59174757A
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- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、全血を試料とし多層分析材料を用いて、試料
中の定量目標成分（アナライト）全分析する方法に関す
るもので、更に詳細には、光透過性水透過性支持体（以
下、透明支持体ということがある。）の片面に少なくと
も一つの試薬層と、最外層に位置してその表面に点着さ
れ友液体試料を該試薬層に単位面積肖りはｙ一定容量供
給することができる多孔性展開層とからなる多層分析材
料を用いて、全血試料中のアナライトラ定量するに際し
、全血を実質的に希釈させた状態で、多層分析材料の展
開層に点着し定量分析することを特徴とする全血試料分
析方法に係る。
中の定量目標成分（アナライト）全分析する方法に関す
るもので、更に詳細には、光透過性水透過性支持体（以
下、透明支持体ということがある。）の片面に少なくと
も一つの試薬層と、最外層に位置してその表面に点着さ
れ友液体試料を該試薬層に単位面積肖りはｙ一定容量供
給することができる多孔性展開層とからなる多層分析材
料を用いて、全血試料中のアナライトラ定量するに際し
、全血を実質的に希釈させた状態で、多層分析材料の展
開層に点着し定量分析することを特徴とする全血試料分
析方法に係る。
透明支持体の上に少くとも一つの試薬層と多孔性展開層
とをこの順に有する多層分析材料およびそれを用いる水
性液体試料の定量分析方法は、特公昭≠Ｆ−３３１＃ｒ
号、特開昭！１０−／３７／り２号、特開昭１７−／グ
ｏｉり１号、特開昭！２−３’ｌｌｒ号、特開昭１３−
７３７０１９号、特開昭ｊＦ−１０／３り町号、特開昭
５ｒ−ｔ。
とをこの順に有する多層分析材料およびそれを用いる水
性液体試料の定量分析方法は、特公昭≠Ｆ−３３１＃ｒ
号、特開昭！１０−／３７／り２号、特開昭１７−／グ
ｏｉり１号、特開昭！２−３’ｌｌｒ号、特開昭１３−
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５ｒ−ｔ。
？！り号、特開昭！ｊ−７４≠３ｊｔ号、特開昭Ｊ−＆
−２１．ＡｊＶｔ号等に、又Ｈ，Ｇ、Ｃｕｒｍｅら及び
Ｒ，Ｗ、５ｐａｙｄらの研究発表としてアメリカ臨床化
学会誌［ｃｌｉｎｉｃａｌ ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＪ第２
４Ａ巻 ／３３ｊｔ 〜／３！０頁（ｌり７ｒ年）等に
記載されており、試料としては無希釈の血清、血漿の他
に、無希釈の全血をその壕ま試料にすることも可能であ
ることが記載されている。
−２１．ＡｊＶｔ号等に、又Ｈ，Ｇ、Ｃｕｒｍｅら及び
Ｒ，Ｗ、５ｐａｙｄらの研究発表としてアメリカ臨床化
学会誌［ｃｌｉｎｉｃａｌ ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＪ第２
４Ａ巻 ／３３ｊｔ 〜／３！０頁（ｌり７ｒ年）等に
記載されており、試料としては無希釈の血清、血漿の他
に、無希釈の全血をその壕ま試料にすることも可能であ
ることが記載されている。
更に具体的には、試料として無希釈全面を、分析用具と
して多層分析材料を用いて血糖をリアルタイムで定量す
る臨床的試用例が 大久保ら： ［Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙＪ 第２７巻 ／ ２ｇ’７−／ ２９０頁（７９
１１年） 太田ら ：「臨床検査機器・試薬」第ｒ＠ｒｔ３−１４
４頁（ｌりｇ２年） 北林ら ： 「臨床検査機器・試薬」第５巻 ♂ｔ７−
４７０頁（１９１２年） 小林ら ＝「基礎と臨床」第１６巻 弘？弘−Ｖｒｔ頁
（／９ｒλ年） 等に記載されている。
して多層分析材料を用いて血糖をリアルタイムで定量す
る臨床的試用例が 大久保ら： ［Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙＪ 第２７巻 ／ ２ｇ’７−／ ２９０頁（７９
１１年） 太田ら ：「臨床検査機器・試薬」第ｒ＠ｒｔ３−１４
４頁（ｌりｇ２年） 北林ら ： 「臨床検査機器・試薬」第５巻 ♂ｔ７−
４７０頁（１９１２年） 小林ら ＝「基礎と臨床」第１６巻 弘？弘−Ｖｒｔ頁
（／９ｒλ年） 等に記載されている。
上記の多層分析材料を用いる全血試料分析方法を模型的
に例示したのが第１図である。例示の多層分析材料は、
透明支持体／の片面に、試薬層λ、光反射層３、多孔性
展開層弘からなる構造の多層分析フィルムである（勿論
支持体と展開層との間には必要に応じて、複数の試狭層
、バリヤ層、スカベンジャ層、パンファ一層、検出器な
どの機能＋ｍ＋挿入することもできる）。今有形成分／
／と液体成分１２とからなる全血試料／３ｆ、多層分析
フィルムの多孔性展開層Ｖの上に点着すると、全血は多
孔性展開層上で急速に点着量にほぼ比例した面積の円状
に拡がった後、有形成分が沖過されつつ液体成分は光反
射層３を通過して試薬層コに到達する。原則的に、試薬
層中には、血液中のアナライトとのみ反応する選択的発
色試薬が予め組込まれているので、アナライトの量に比
例した発色反応がおきる。発色領域／ｌｔの色光学濃度
を支持体側から光学測色して比色法により血液中のアナ
ライ）ｔを算出することができる。
に例示したのが第１図である。例示の多層分析材料は、
透明支持体／の片面に、試薬層λ、光反射層３、多孔性
展開層弘からなる構造の多層分析フィルムである（勿論
支持体と展開層との間には必要に応じて、複数の試狭層
、バリヤ層、スカベンジャ層、パンファ一層、検出器な
どの機能＋ｍ＋挿入することもできる）。今有形成分／
／と液体成分１２とからなる全血試料／３ｆ、多層分析
フィルムの多孔性展開層Ｖの上に点着すると、全血は多
孔性展開層上で急速に点着量にほぼ比例した面積の円状
に拡がった後、有形成分が沖過されつつ液体成分は光反
射層３を通過して試薬層コに到達する。原則的に、試薬
層中には、血液中のアナライトとのみ反応する選択的発
色試薬が予め組込まれているので、アナライトの量に比
例した発色反応がおきる。発色領域／ｌｔの色光学濃度
を支持体側から光学測色して比色法により血液中のアナ
ライ）ｔを算出することができる。
多孔性展開層グは、メンブランフィルタ−状の非繊維等
方多孔性材料、粉粒体よりなる多孔材料、織物、更にク
ロマト現象の少ない紙などから選ばれたもので、その上
に滴状の水性液体試料を点着すると、水性液体試料をま
ず急速に水平方向に円状に拡げ、ついで垂直方向に浸入
させる性質のもので、下に位置する試薬層に単位面積当
りほぼ一定’１Ｇｆｔの水性液体試料を供給する能力を
有するもので、この作用は展開作用又はメータリング作
用と呼ばれている。特に多孔性展開層材料として織物ま
之は特開昭ｊ！−タＯ♂ｊりに記載の連続空隙含有微粒
子粒状構造物等を採用すると、血漿、血清は勿論のこと
、有形成分金倉む全血の如き試料に対しても展開作用が
あり、全面を試料とする定量分析が可能である。
方多孔性材料、粉粒体よりなる多孔材料、織物、更にク
ロマト現象の少ない紙などから選ばれたもので、その上
に滴状の水性液体試料を点着すると、水性液体試料をま
ず急速に水平方向に円状に拡げ、ついで垂直方向に浸入
させる性質のもので、下に位置する試薬層に単位面積当
りほぼ一定’１Ｇｆｔの水性液体試料を供給する能力を
有するもので、この作用は展開作用又はメータリング作
用と呼ばれている。特に多孔性展開層材料として織物ま
之は特開昭ｊ！−タＯ♂ｊりに記載の連続空隙含有微粒
子粒状構造物等を採用すると、血漿、血清は勿論のこと
、有形成分金倉む全血の如き試料に対しても展開作用が
あり、全面を試料とする定量分析が可能である。
本発明者らは前記の多層分析フィルムいる全血試料分析
法の臨床試用成績を詳細に検削し、更に追試を行なった
結果、ヘマトクリット値や流動性等がほぼ正常域にある
新鮮全血（これらを正常全血と呼称する）を試料とする
ときは、良好な分析性能を発揮する方法であるが、分析
対称成分量やヘマトフリントが異常に高い全血及び又は
流動性が低い全血、又は数時間以上経過の全血等（異常
全血と呼称する）を試料とする場合、精度、正確度等の
分析性能が著るしく劣化する例があることがわかった。
法の臨床試用成績を詳細に検削し、更に追試を行なった
結果、ヘマトクリット値や流動性等がほぼ正常域にある
新鮮全血（これらを正常全血と呼称する）を試料とする
ときは、良好な分析性能を発揮する方法であるが、分析
対称成分量やヘマトフリントが異常に高い全血及び又は
流動性が低い全血、又は数時間以上経過の全血等（異常
全血と呼称する）を試料とする場合、精度、正確度等の
分析性能が著るしく劣化する例があることがわかった。
血液中の化学成分（アナライト）を定量するに当って、
採血したままの全血を試料とし、ドライのシート状また
はフィルム状分析用具を用いて簡便かつ即時に分析結果
を得たいと云う要望は多大であり、前述の特許明細書、
文献等の他に米国特許第３，２７１，７１７号、米国特
許第３，３りｊ、０１２号等にも全血全試料とする分析
用具、方法の記載が見られる。しかしかかる特徴をもつ
シート状分析用具法も、血清を用いるルーチンの湿式分
析法に較べて、分析性能が不充分なものと評価されてい
る。その主な理由は、試料とする全血の性状によって分
析性能が、左右されるとと即ち正常全血試料とする場合
に較べて異常全血を試料とする時、分析性能が劣化する
こと、つまり全血試料に対する制限が多いことにあると
考えられる。そこで、試料に対する許容幅を大きくする
ことは、シート状分析用具法の分析性能をルーチンの湿
式法と同等にするための重要なポイントと云うことがで
きる。
採血したままの全血を試料とし、ドライのシート状また
はフィルム状分析用具を用いて簡便かつ即時に分析結果
を得たいと云う要望は多大であり、前述の特許明細書、
文献等の他に米国特許第３，２７１，７１７号、米国特
許第３，３りｊ、０１２号等にも全血全試料とする分析
用具、方法の記載が見られる。しかしかかる特徴をもつ
シート状分析用具法も、血清を用いるルーチンの湿式分
析法に較べて、分析性能が不充分なものと評価されてい
る。その主な理由は、試料とする全血の性状によって分
析性能が、左右されるとと即ち正常全血試料とする場合
に較べて異常全血を試料とする時、分析性能が劣化する
こと、つまり全血試料に対する制限が多いことにあると
考えられる。そこで、試料に対する許容幅を大きくする
ことは、シート状分析用具法の分析性能をルーチンの湿
式法と同等にするための重要なポイントと云うことがで
きる。
そこで本発明者等は、全血をそのまま試料とせず、全血
全溶血させない条件で、これを一定量に希釈したもの全
試料として適用を試みた所、同じト２ライ分析シートヲ
用いて、正常全血は勿舗のこと、異常全血についても、
意外にも良好な定量結果をうろことができることが判明
し本発明に到達した。
全溶血させない条件で、これを一定量に希釈したもの全
試料として適用を試みた所、同じト２ライ分析シートヲ
用いて、正常全血は勿舗のこと、異常全血についても、
意外にも良好な定量結果をうろことができることが判明
し本発明に到達した。
全血を希釈して試料とすることによって、ドライ分析シ
ート法の試料許容幅が拡大される理由は詳細には不明で
あるが、妨害要員であった物質の濃度が相対的に低下す
るのが一つの理由と考えられる。
ート法の試料許容幅が拡大される理由は詳細には不明で
あるが、妨害要員であった物質の濃度が相対的に低下す
るのが一つの理由と考えられる。
本発明の目的は、多１−分析材料を用いる全血試料中の
アナライトの定量分析方法における改良された分析方法
を提供するもので、更に具体的には異常全血を試料とす
る場合も正常全血と同等の分析性能を発揮することがで
きる方法全提供し、更に結果的に簡便迅速の特徴を有す
る多層分析材料法の分析性能をルーチンの湿式法と同等
に向上させる方法全提供するものである。
アナライトの定量分析方法における改良された分析方法
を提供するもので、更に具体的には異常全血を試料とす
る場合も正常全血と同等の分析性能を発揮することがで
きる方法全提供し、更に結果的に簡便迅速の特徴を有す
る多層分析材料法の分析性能をルーチンの湿式法と同等
に向上させる方法全提供するものである。
本発明は、光透過性疎水性支持体の片面に少なくとも一
つの試薬層と最外層に位置してその表面に点着された液
体試料を前記試薬層に単位面積当りほぼ一定容敏供給す
ることができる多孔性展開層を有する多１−分析材料を
用い、液体試料として全血試料を前記展開１−に点着し
全血試料中の特定のアナライトを定量分析するに際し、
前記全血試料があらかじめ全血に水性稀釈液全特定の量
比で加えて稀釈された全血試料であることを特徴とする
全血試料の分析方法である。
つの試薬層と最外層に位置してその表面に点着された液
体試料を前記試薬層に単位面積当りほぼ一定容敏供給す
ることができる多孔性展開層を有する多１−分析材料を
用い、液体試料として全血試料を前記展開１−に点着し
全血試料中の特定のアナライトを定量分析するに際し、
前記全血試料があらかじめ全血に水性稀釈液全特定の量
比で加えて稀釈された全血試料であることを特徴とする
全血試料の分析方法である。
本発明の分析方法の要点である全血をあらかじめ水性稀
釈液で稀釈し、ついで多層分析材料の多孔性展開：脅に
点着する方法を具体的に説明する。
釈液で稀釈し、ついで多層分析材料の多孔性展開：脅に
点着する方法を具体的に説明する。
ヒトや動物から採取した全血は、これを直ちに分析に供
する場合以外は、解糖阻止剤（または解糖防止剤）、凝
固防止剤等の安定剤を加える。ついでその後に水性稀釈
液を用いて稀釈処理を行う。
する場合以外は、解糖阻止剤（または解糖防止剤）、凝
固防止剤等の安定剤を加える。ついでその後に水性稀釈
液を用いて稀釈処理を行う。
稀釈処理を行う際に用いる水性稀釈液は実質的に溶血性
をもたない液で、さらに好ましくは赤血球の凝集ケ伴っ
て稀釈された全血試料の流動性（活量）ヲ実質的に変化
させる性質ヶもたない液である。このような特注をもつ
水性稀釈液として生理的塩類水溶液（例、生理的食塩水
、リンゲル液等）等の無機塩を含む等張液、生理的塩類
水溶液にデキストラン、ポリビニルピロリドン、アルブ
ミン、等の親水性、水可Ｍ性または水可分散姓の有機物
質全含有させて粘度上調節した等張液をあげることがで
きる。ここで等張液とは全血に対して厳密に等しい等張
浸透圧をもつ水性液体のみでなく、実質的に全血全溶血
させない範囲で全血の浸透圧に近似する範囲の浸透正金
もつ水性液体を意味する。従って上述の生理的塩類水溶
液や有機物質を含有させた生理的塩類水溶液として、典
型的な塩類含有量の水溶液のみならず、分析操作全容易
にする目的で、あるいは分析精度に応じて塩類含有量や
有機物質含有賃金変更した水浴液をも包含するのはもち
ろんである。さらに所望により目的とする分析を妨害し
ない範囲で公知の界面活性物質、消泡剤、防腐剤などの
ＩＤ剤を水性稀釈液に含有させることができる。前述の
諸剤をかねる有機溶媒としてメタノール、エタノール、
ベンジルアルコール等のアルコールや他の有機液状物質
を水性稀釈液に添加することもできる。
をもたない液で、さらに好ましくは赤血球の凝集ケ伴っ
て稀釈された全血試料の流動性（活量）ヲ実質的に変化
させる性質ヶもたない液である。このような特注をもつ
水性稀釈液として生理的塩類水溶液（例、生理的食塩水
、リンゲル液等）等の無機塩を含む等張液、生理的塩類
水溶液にデキストラン、ポリビニルピロリドン、アルブ
ミン、等の親水性、水可Ｍ性または水可分散姓の有機物
質全含有させて粘度上調節した等張液をあげることがで
きる。ここで等張液とは全血に対して厳密に等しい等張
浸透圧をもつ水性液体のみでなく、実質的に全血全溶血
させない範囲で全血の浸透圧に近似する範囲の浸透正金
もつ水性液体を意味する。従って上述の生理的塩類水溶
液や有機物質を含有させた生理的塩類水溶液として、典
型的な塩類含有量の水溶液のみならず、分析操作全容易
にする目的で、あるいは分析精度に応じて塩類含有量や
有機物質含有賃金変更した水浴液をも包含するのはもち
ろんである。さらに所望により目的とする分析を妨害し
ない範囲で公知の界面活性物質、消泡剤、防腐剤などの
ＩＤ剤を水性稀釈液に含有させることができる。前述の
諸剤をかねる有機溶媒としてメタノール、エタノール、
ベンジルアルコール等のアルコールや他の有機液状物質
を水性稀釈液に添加することもできる。
全血試料の容積ｌに対して混合される水性稀釈液の（混
合前の）容積をａで表わすと、本発明の方法においては
、ａは０．／から１０の範囲、好ま（７〈はＯ９ｊから
３．０の範囲内の値である。
合前の）容積をａで表わすと、本発明の方法においては
、ａは０．／から１０の範囲、好ま（７〈はＯ９ｊから
３．０の範囲内の値である。
ここで、稀釈係数（ｄ）を（／＋ａ）／／、稀釈倍率（
／／ｄ）ｖｌ／（／＋ａ）と定義すると、ｄが簡単な整
数となるような値、すなわちａがｌ、２゜または３が特
に好ましい。
／／ｄ）ｖｌ／（／＋ａ）と定義すると、ｄが簡単な整
数となるような値、すなわちａがｌ、２゜または３が特
に好ましい。
稀釈操作は、（１）全血に水性稀釈液を添加する、（２
）水性稀釈液に全血全添加する、（３）全血と水性稀釈
液とをそれぞれほぼ同時に第三の容器等の中に加える、
のいずれをもとることができる。全面と水性稀釈液と全
一つにあわせた後にはおだやかに攪拌または振盪して、
全血中の血漿成分と水性稀釈液が実質的に均一に混りあ
い、また全血中の有形成分が実質的に均一に存在する状
態にいたらしめることが好ましい。全血を稀釈する操作
の簡便さのために、例えば、ミクロピペット等の点着用
具に水性稀釈液の一定容績をすいあげ、続いて全血の一
定容績を同じミクロピはット等にすいあげて両者を混合
することも可能で、このようにして稀釈操作がなされた
場合には、ひき続いて、後述する多孔性展開層への点着
操作に移ることができる。
）水性稀釈液に全血全添加する、（３）全血と水性稀釈
液とをそれぞれほぼ同時に第三の容器等の中に加える、
のいずれをもとることができる。全面と水性稀釈液と全
一つにあわせた後にはおだやかに攪拌または振盪して、
全血中の血漿成分と水性稀釈液が実質的に均一に混りあ
い、また全血中の有形成分が実質的に均一に存在する状
態にいたらしめることが好ましい。全血を稀釈する操作
の簡便さのために、例えば、ミクロピペット等の点着用
具に水性稀釈液の一定容績をすいあげ、続いて全血の一
定容績を同じミクロピはット等にすいあげて両者を混合
することも可能で、このようにして稀釈操作がなされた
場合には、ひき続いて、後述する多孔性展開層への点着
操作に移ることができる。
稀釈された全面試料はついで前記の諸特許明細書や文献
等に記載の操作方法に従って多層分析材料の多孔性展開
層に点着（滴下または付着）され、ついで必要によりイ
ンクベーションし、透明支持体側から発色領域の光学濃
度を反射測光法により測定し、比色法の原理により全血
試料中のアナライトの含有量が算出される。多層分析材
料の発色部の測光は螢光法によることも可能である。ア
ナライトの含有量は、稀釈された全血試料中の含有量と
しても、稀釈前の全血試料中の含有量としていずれの債
としても求めることができる。発色領域の光学濃度測定
値からは稀釈され友全血試料中のアナライト含有量に直
ちに換算されるので、通常はこの含有量値に、前述の稀
釈係数（ｄ）’を乗じて稀釈前の全血試料中のアナライ
ト含有量が求められる。ｄが２．３またはぐの場合には
乗算がきわめて容易なことはいうまでもないことで、こ
の点から前述のａが／、２または３が特に好ましい。
等に記載の操作方法に従って多層分析材料の多孔性展開
層に点着（滴下または付着）され、ついで必要によりイ
ンクベーションし、透明支持体側から発色領域の光学濃
度を反射測光法により測定し、比色法の原理により全血
試料中のアナライトの含有量が算出される。多層分析材
料の発色部の測光は螢光法によることも可能である。ア
ナライトの含有量は、稀釈された全血試料中の含有量と
しても、稀釈前の全血試料中の含有量としていずれの債
としても求めることができる。発色領域の光学濃度測定
値からは稀釈され友全血試料中のアナライト含有量に直
ちに換算されるので、通常はこの含有量値に、前述の稀
釈係数（ｄ）’を乗じて稀釈前の全血試料中のアナライ
ト含有量が求められる。ｄが２．３またはぐの場合には
乗算がきわめて容易なことはいうまでもないことで、こ
の点から前述のａが／、２または３が特に好ましい。
全血のへマトクリソト値は個人差（または個体差）が大
きな範囲にわたっており、従って全血中の液状成分であ
る血漿の占める容積割合もヘマトクリット値に依存して
大きな範囲にわたって変動するにもかかわらず、稀釈前
の全血試料の全容積と稀釈係数（ｄ）だけを用いて稀釈
された全血試料中のアナライト含有量から稀釈前の全面
試料中のアナライト含有散音、標準とされている定量分
析方法による測定値に対応する数値として、求めること
ができる点が本発明の方法の著しい特徴である。
きな範囲にわたっており、従って全血中の液状成分であ
る血漿の占める容積割合もヘマトクリット値に依存して
大きな範囲にわたって変動するにもかかわらず、稀釈前
の全血試料の全容積と稀釈係数（ｄ）だけを用いて稀釈
された全血試料中のアナライト含有量から稀釈前の全面
試料中のアナライト含有散音、標準とされている定量分
析方法による測定値に対応する数値として、求めること
ができる点が本発明の方法の著しい特徴である。
もちろん、本発明の方法の実施に当っては前述の稀釈係
数ｄとさらに助係数εを用いて、ｄ・εまたは（ｄ＋ε
）とした係数を用いて稀釈した全血試料中のアナライト
の含有量から稀釈前の全面試料中のアナライトの含有量
を求める方法を排除するものてけない。また、本発明の
方法により測定された稀釈された全血試料中のアナライ
ト含有量値をその！ま目的の測定値として採用すること
も排除するものではない。アナライトの種・類により従
来から標準定量分析方法として広く採用されている定量
分析方法による測定値と本発明の方法による測定値との
相関により、本発明の方法により測定された稀釈された
全血試料中のアナライト含有量値を採用するが、その値
に６１乗じた値を採用するか、あるいは助係数つきのｄ
・εまたは（ｄ＋ε）を乗じた値を採用するかが決めら
れるのである。
数ｄとさらに助係数εを用いて、ｄ・εまたは（ｄ＋ε
）とした係数を用いて稀釈した全血試料中のアナライト
の含有量から稀釈前の全面試料中のアナライトの含有量
を求める方法を排除するものてけない。また、本発明の
方法により測定された稀釈された全血試料中のアナライ
ト含有量値をその！ま目的の測定値として採用すること
も排除するものではない。アナライトの種・類により従
来から標準定量分析方法として広く採用されている定量
分析方法による測定値と本発明の方法による測定値との
相関により、本発明の方法により測定された稀釈された
全血試料中のアナライト含有量値を採用するが、その値
に６１乗じた値を採用するか、あるいは助係数つきのｄ
・εまたは（ｄ＋ε）を乗じた値を採用するかが決めら
れるのである。
以下に本発明の方法を実施例により詳細に具体的に説明
する。
する。
実施例１
全血を稀釈液で稀釈してグルコース定量用多層分析フィ
ルムでグルコース濃度を測定する方法。
ルムでグルコース濃度を測定する方法。
へ・ξリン採血されたヒトの新鮮面を遠心分離し、血漿
成分と血球成分にわけとり、ついで両者の割合を変えて
配合し、ヘマトクリット値がｌＯ係から７０％の範囲内
である全血を再調製し、さらに各々の全血についてグル
コース濃度がそれぞれおおよそｔ ００ ； ２００
； ３００ ； １１００ ； ！Ｏ’０■／ｄｌにな
るようにグルコースを添加溶解させて、第１表に示した
ヘマトクリット値とグルコース濃度が異なる全血試料１
２種を調製した。
成分と血球成分にわけとり、ついで両者の割合を変えて
配合し、ヘマトクリット値がｌＯ係から７０％の範囲内
である全血を再調製し、さらに各々の全血についてグル
コース濃度がそれぞれおおよそｔ ００ ； ２００
； ３００ ； １１００ ； ！Ｏ’０■／ｄｌにな
るようにグルコースを添加溶解させて、第１表に示した
ヘマトクリット値とグルコース濃度が異なる全血試料１
２種を調製した。
一方、次の組成の水性稀釈液用原液全調製した。
水性稀釈液用原液の組成
Ｎａα タｏｇＮａ２ＨＰ
Ｏ４／ ３．１．ｊｊｑ ＮａＨ２ＰＯ４ｍ−２Ｈ２０２（７６ｇ水で全量全
ｔｏｏｏｒｎｌにする。
Ｏ４／ ３．１．ｊｊｑ ＮａＨ２ＰＯ４ｍ−２Ｈ２０２（７６ｇ水で全量全
ｔｏｏｏｒｎｌにする。
使用時にこの原液を水で１０倍に稀釈して水性稀釈液（
ｐＨ７，ｌ）とする。
ｐＨ７，ｌ）とする。
前記の全血試料１００μｌに水性稀釈液１００μｌ′ｆ
ｒ、加えて全血試料を体積比で正確に２倍に稀釈した（
稀釈係数ｄ：２．００）２倍稀釈全血／２種を調製した
。
ｒ、加えて全血試料を体積比で正確に２倍に稀釈した（
稀釈係数ｄ：２．００）２倍稀釈全血／２種を調製した
。
また一方、ゼラチン下塗りが施されである厚さｌｒｊμ
ｍの透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィル
ム上に、下記組成から成る血中グルコース濃度定量用の
試薬層全乾燥後の膜厚がおよそ７５μｍになるように塗
布、乾燥した。
ｍの透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィル
ム上に、下記組成から成る血中グルコース濃度定量用の
試薬層全乾燥後の膜厚がおよそ７５μｍになるように塗
布、乾燥した。
ペルオキシダーゼ ２！０００工Ｕ／、７−
シヒドロキソナフタレン ！ｇ弘−アミノー２，
３−ジメチル 一／−（２，弘、を−トリク ロロフェニル）−３−ピラノ リン〜！−オン ｌ♂ｇゼラチン
コｏｏｇノニオンＨ８，ｚ
ｔｏ（日本油脂■ 製活面活性剤；ポリオキシエチ レンノニルフェニルエーテル）２ｇ この上に、０．２ｆｉのノニオンＨ８２／θ及びグルコ
ースオキシダーゼｊ００００１Ｕｆ含む二酸化チタン微
粉末ｔｇｋゼラチンｔｇに混合分散したものより成る光
遮蔽層を乾燥膜厚がおよそｌ！μｍＫなるように塗布、
乾燥した。
シヒドロキソナフタレン ！ｇ弘−アミノー２，
３−ジメチル 一／−（２，弘、を−トリク ロロフェニル）−３−ピラノ リン〜！−オン ｌ♂ｇゼラチン
コｏｏｇノニオンＨ８，ｚ
ｔｏ（日本油脂■ 製活面活性剤；ポリオキシエチ レンノニルフェニルエーテル）２ｇ この上に、０．２ｆｉのノニオンＨ８２／θ及びグルコ
ースオキシダーゼｊ００００１Ｕｆ含む二酸化チタン微
粉末ｔｇｋゼラチンｔｇに混合分散したものより成る光
遮蔽層を乾燥膜厚がおよそｌ！μｍＫなるように塗布、
乾燥した。
との上に水１００％ｌ中にゼラチンμｇｋ溶解し、更に
これにノニオンＨｆ３２１０ｆＯ，２ｊ９加えて、接着
層塗布液とした。これ全、光遮蔽層の上に乾燥膜厚がグ
μｍとなるように塗布、乾燥し接着層を形成させた。次
に、接着層に３０ｇ／１７Ｌ２の割合で水を湿し水とし
て供給、湿潤させたのち、綿７００係のブロード（１０
０番手ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて多孔
性展開層を設け、グルコース定量用多層分析利料全完成
させた。
これにノニオンＨｆ３２１０ｆＯ，２ｊ９加えて、接着
層塗布液とした。これ全、光遮蔽層の上に乾燥膜厚がグ
μｍとなるように塗布、乾燥し接着層を形成させた。次
に、接着層に３０ｇ／１７Ｌ２の割合で水を湿し水とし
て供給、湿潤させたのち、綿７００係のブロード（１０
０番手ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて多孔
性展開層を設け、グルコース定量用多層分析利料全完成
させた。
この材料を１．タ儂Ｘ７．３儂の正方形のチップに裁断
したのち、特開昭！７−ｔ３４を夕２に開示のプラスチ
ックマウントに収めてグルコース定量用化学分析スライ
ドとした。
したのち、特開昭！７−ｔ３４を夕２に開示のプラスチ
ックマウントに収めてグルコース定量用化学分析スライ
ドとした。
全血試料１２種てついて、ヘキソキナーゼ−〇−１−Ｐ
ＤＨ法によりそれぞれのグルコース濃度全測定し、その
結果を第１表の左側第２欄に記載した。
ＤＨ法によりそれぞれのグルコース濃度全測定し、その
結果を第１表の左側第２欄に記載した。
全血試料および２倍稀釈全血試料各１２種について、そ
れぞれから６μｌをミクロピはントで採取し、上記の分
析スライドの展開層に点着し、３７°Ｃで６分インクベ
ーションした後ＰＥＴフィルム側からの反射光学濃度測
光により比色法によりグルコース濃度値を求め、第１表
の左側から第３欄および第グ欄に記載した。稀釈全血試
料のグルコース濃度値には稀釈係数（この場合ｄ′コ。
れぞれから６μｌをミクロピはントで採取し、上記の分
析スライドの展開層に点着し、３７°Ｃで６分インクベ
ーションした後ＰＥＴフィルム側からの反射光学濃度測
光により比色法によりグルコース濃度値を求め、第１表
の左側から第３欄および第グ欄に記載した。稀釈全血試
料のグルコース濃度値には稀釈係数（この場合ｄ′コ。
００）を乗じて無稀釈試料のグルコース濃度値として第
１表の最右欄に記載シ、り。
１表の最右欄に記載シ、り。
第１表の結果から、血中グルコース濃度値測定方法の標
準方法といわれているヘキソキナ−ボーＧ−１−ＤＰＨ
法によるグルコース濃度値に比べて、稀釈しない全血試
料を多層分析材料に点着してグルコース濃度値全測定す
る従来公知の測定方法によると、高ヘマトクリント全血
試料に対して著しく低いグルコース濃度値に測定される
のに対し、λ倍稀釈全血試料金多層分析材料に点着して
グルコース濃度値を測定する本発明の測定方法によると
正常へマトクリソト値から高ヘマトクリント値にわたる
広い範囲の一＼マトクリソト値の全血試料に対してヘキ
ソキナーゼ−〇−４−ＤＰＨ法測定値とよい一致が見ら
れることが明らかである。
準方法といわれているヘキソキナ−ボーＧ−１−ＤＰＨ
法によるグルコース濃度値に比べて、稀釈しない全血試
料を多層分析材料に点着してグルコース濃度値全測定す
る従来公知の測定方法によると、高ヘマトクリント全血
試料に対して著しく低いグルコース濃度値に測定される
のに対し、λ倍稀釈全血試料金多層分析材料に点着して
グルコース濃度値を測定する本発明の測定方法によると
正常へマトクリソト値から高ヘマトクリント値にわたる
広い範囲の一＼マトクリソト値の全血試料に対してヘキ
ソキナーゼ−〇−４−ＤＰＨ法測定値とよい一致が見ら
れることが明らかである。
実施例２
実施例１と同様にして調製したヘマトフリント値６０％
、ヘキソキナーゼ−〇−１−ＤＰＨ法でのグルコース濃
度値６４ｔｊ■／ｄ／の全血試料に実施例１と同じ水性
稀釈液（稀釈原液を水でｉ。
、ヘキソキナーゼ−〇−１−ＤＰＨ法でのグルコース濃
度値６４ｔｊ■／ｄ／の全血試料に実施例１と同じ水性
稀釈液（稀釈原液を水でｉ。
倍に稀釈した液）を加えて正確にλ倍、ｖ倍、を倍（そ
れぞれ稀釈液係数ｄ：２．００Ｈ弘、００；ｉ ＤＯ）
の稀釈全血試料を調製しｆｃ。無稀釈の全血試料および
前記３種の稀釈全面試料について、実施例１と同様にし
てグルコース定量用化学分析スライドを用いてグルコー
ス濃度値を測定し、一方でヘキソキナーゼ−Ｇ−１−Ｄ
ＰＨ法によりグルコース濃度値を測定した。測定結果は
第２表のとおりであった。
れぞれ稀釈液係数ｄ：２．００Ｈ弘、００；ｉ ＤＯ）
の稀釈全血試料を調製しｆｃ。無稀釈の全血試料および
前記３種の稀釈全面試料について、実施例１と同様にし
てグルコース定量用化学分析スライドを用いてグルコー
ス濃度値を測定し、一方でヘキソキナーゼ−Ｇ−１−Ｄ
ＰＨ法によりグルコース濃度値を測定した。測定結果は
第２表のとおりであった。
第２表の測定値をもとに、縦軸に測定されたグルコース
濃度値、横軸に稀釈倍率（稀釈係数の逆数）をとり、両
測定方法による測定値をとったグラフを第２図に示した
。第２表および第２図から、血中グルコース濃度測定法
の標準法といわれているヘキンキナーゼー〇−１−ＤＰ
Ｈ法による測定値は、無稀釈の場合を含めて稀釈倍率に
対して一直線上にのることが認められた。一方、グルコ
ース定量用多層分析材料を用いる乾式分析法においては
、稀釈倍率ｌ（稀釈せず）の場合にヘキソキナーゼ−〇
−１−ＤＰＨ法の測定値がのっている直線から太きくず
れているが、稀釈倍率／／λから／／ｒの範囲では前記
の直線にきわめて近い位置に測定値が分布しており、稀
釈倍率が小さくなるに従い（すなわち稀釈係数が大きく
なるに従い）前記の直線の上にのる傾向にあることが認
められた。これにより本発明の方法の有効性が明らかに
なった。
濃度値、横軸に稀釈倍率（稀釈係数の逆数）をとり、両
測定方法による測定値をとったグラフを第２図に示した
。第２表および第２図から、血中グルコース濃度測定法
の標準法といわれているヘキンキナーゼー〇−１−ＤＰ
Ｈ法による測定値は、無稀釈の場合を含めて稀釈倍率に
対して一直線上にのることが認められた。一方、グルコ
ース定量用多層分析材料を用いる乾式分析法においては
、稀釈倍率ｌ（稀釈せず）の場合にヘキソキナーゼ−〇
−１−ＤＰＨ法の測定値がのっている直線から太きくず
れているが、稀釈倍率／／λから／／ｒの範囲では前記
の直線にきわめて近い位置に測定値が分布しており、稀
釈倍率が小さくなるに従い（すなわち稀釈係数が大きく
なるに従い）前記の直線の上にのる傾向にあることが認
められた。これにより本発明の方法の有効性が明らかに
なった。
第を図は、多層分析フィルムを用いる全血試料分析方法
を模型的に示す図である。第１図Ａは多孔性展開層に全
血試料を点着するとき、第１図Ｂは全血試料のうちの有
形成分（赤血球等）が多孔性展開層で戸別され展開層の
表面と表面近傍の内側に有形成分が残留し、液体成分は
展開層で展開され光反射層を通過して試薬ｌ−へ到達す
る現象を模型的に示している。 第２図は、実施例２において求められた稀釈倍率とグル
コース濃度測定値との関係を示すグラフである。○印は
へキソキナーゼーＧ−１−ＤＰＨ法、ム印は多層分析フ
ィルム法による測定値である。 ｌ 透明支持体 ２試薬層 ３ 光反射層 弘 多孔性展開層 ／／ 有形成分 〆２ 液体成分 １３ 全血試料 １ｌＩ−発色領域 Ｌ 反射測光用光源（層系せず） Ｄ 測光装置（図示せず） 特許出願人 富士写真フィルム株式会社第１図Ａ 第１図Ｂ 第２図 ４箇ち乍 手続補正書 昭和、りざ年ｊ月２ 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和ｓｉｒ年特願第グ２３０１
＝２、発明の名称 全血試料の分析方法３、補
正をする者 事件との関係 特許出願人件 所 神奈
川県南足柄市中沼２１０番地名 称（ｓ２ｏ）ｉ−ｉ云
ｉフィルム株式会社ノ 電話（４０６） ２５３７ ４、補正の対象 明細書の１発明の詳細な説明」（１
）明細書の下記の個所ｏ ｒＧ−ａ−ＤＰＨＪｆ ｒＧ
−Ｊ−ＰＤＨＪに訂正する。（タカ所）（２）明細書第
ｊ頁第７０行の「・・・材料として」の次に「特開昭！
！−／Ａ４ｔ３ｓＡおよび特開昭５７−Ａｔ、３！り等
に記載の」を挿入する。 （３）明細書第７２頁第≠行の「この上に」を削除する
。 （４）明細書第７６頁第１２行の１材料」の次に「（多
層分析フィルム）」全挿入する。 以上
を模型的に示す図である。第１図Ａは多孔性展開層に全
血試料を点着するとき、第１図Ｂは全血試料のうちの有
形成分（赤血球等）が多孔性展開層で戸別され展開層の
表面と表面近傍の内側に有形成分が残留し、液体成分は
展開層で展開され光反射層を通過して試薬ｌ−へ到達す
る現象を模型的に示している。 第２図は、実施例２において求められた稀釈倍率とグル
コース濃度測定値との関係を示すグラフである。○印は
へキソキナーゼーＧ−１−ＤＰＨ法、ム印は多層分析フ
ィルム法による測定値である。 ｌ 透明支持体 ２試薬層 ３ 光反射層 弘 多孔性展開層 ／／ 有形成分 〆２ 液体成分 １３ 全血試料 １ｌＩ−発色領域 Ｌ 反射測光用光源（層系せず） Ｄ 測光装置（図示せず） 特許出願人 富士写真フィルム株式会社第１図Ａ 第１図Ｂ 第２図 ４箇ち乍 手続補正書 昭和、りざ年ｊ月２ 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和ｓｉｒ年特願第グ２３０１
＝２、発明の名称 全血試料の分析方法３、補
正をする者 事件との関係 特許出願人件 所 神奈
川県南足柄市中沼２１０番地名 称（ｓ２ｏ）ｉ−ｉ云
ｉフィルム株式会社ノ 電話（４０６） ２５３７ ４、補正の対象 明細書の１発明の詳細な説明」（１
）明細書の下記の個所ｏ ｒＧ−ａ−ＤＰＨＪｆ ｒＧ
−Ｊ−ＰＤＨＪに訂正する。（タカ所）（２）明細書第
ｊ頁第７０行の「・・・材料として」の次に「特開昭！
！−／Ａ４ｔ３ｓＡおよび特開昭５７−Ａｔ、３！り等
に記載の」を挿入する。 （３）明細書第７２頁第≠行の「この上に」を削除する
。 （４）明細書第７６頁第１２行の１材料」の次に「（多
層分析フィルム）」全挿入する。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１１光透過性疎水性支持体の片面に少なくとも一つの
試薬層と最外層に位置してその表面に点着された液体試
料を前記試薬層に単位面積当りほぼ一定容量供給するこ
とができる多孔性展開層を有する多層分析材料金用い、
液体試料として全血試料を前記展開層に点着し全血試料
中の特定のアナライトを定量分析するに―し、前記全血
試料があらかじめ全血に水性稀釈液を特定の量比で加え
て稀釈された全血試料であることを特徴とする全血試料
の分析方法。 （２） 前記量比が容積で全血ｌに対して水性稀釈液
が０．／からｌθの範囲内の値である特許請求の範囲ｌ
Ｋ記載の分析方法。 （３）前記水性稀釈液が全血を溶血させない水性稀釈液
である特許請求の範囲ｌに記載の分析方法。 −（４）前記水性稀釈液が全血の実質的な等張溶液であ
る特許請求の範囲３に記載の分析方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4930683A JPS59174757A (ja) | 1983-03-24 | 1983-03-24 | 全血試料の分析方法 |
| EP84302012A EP0123443A3 (en) | 1983-03-24 | 1984-03-26 | Method of analyzing whole blood sample |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4930683A JPS59174757A (ja) | 1983-03-24 | 1983-03-24 | 全血試料の分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59174757A true JPS59174757A (ja) | 1984-10-03 |
Family
ID=12827255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4930683A Pending JPS59174757A (ja) | 1983-03-24 | 1983-03-24 | 全血試料の分析方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0123443A3 (ja) |
| JP (1) | JPS59174757A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS629271A (ja) * | 1985-07-02 | 1987-01-17 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テツド | 多層イオン試験具 |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3725766A1 (de) * | 1987-08-04 | 1989-02-16 | Boehringer Mannheim Gmbh | Testtraeger zur bestimmung eines analyten aus blut und verfahren zu seiner herstellung |
| JPH0726959B2 (ja) * | 1988-01-20 | 1995-03-29 | 富士写真フイルム株式会社 | 全血分析要素 |
| US4994238A (en) * | 1988-06-09 | 1991-02-19 | Daffern George M | Constant volume chemical analysis test device |
| CA2098956C (en) * | 1992-07-15 | 1999-12-07 | Thomas Charles Arter | Sulfhydryl-complexing agents in clinical test elements |
| JP2003287530A (ja) | 2002-03-28 | 2003-10-10 | Fuji Photo Film Co Ltd | 体液検査ユニット |
| JP2003287502A (ja) | 2002-03-28 | 2003-10-10 | Fuji Photo Film Co Ltd | 体液検査装置 |
| JP3808393B2 (ja) * | 2002-03-28 | 2006-08-09 | 富士写真フイルム株式会社 | 血液検査ユニットおよび血液検査装置 |
| CN111521796A (zh) * | 2020-04-21 | 2020-08-11 | 山东第一医科大学(山东省医学科学院) | 一种检测肾癌患者外周血循环肿瘤细胞pd-l1表达的免疫荧光试剂盒及检测方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4042335A (en) * | 1975-07-23 | 1977-08-16 | Eastman Kodak Company | Integral element for analysis of liquids |
| US4213876A (en) * | 1978-08-22 | 1980-07-22 | Coulter Electronics, Inc. | Multi-purpose blood diluent for use in electronic blood analysis instrumentation |
| US4258001A (en) * | 1978-12-27 | 1981-03-24 | Eastman Kodak Company | Element, structure and method for the analysis or transport of liquids |
| JPS58139067A (ja) * | 1982-02-12 | 1983-08-18 | Fuji Photo Film Co Ltd | 液体試料の測定法 |
-
1983
- 1983-03-24 JP JP4930683A patent/JPS59174757A/ja active Pending
-
1984
- 1984-03-26 EP EP84302012A patent/EP0123443A3/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS629271A (ja) * | 1985-07-02 | 1987-01-17 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テツド | 多層イオン試験具 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0123443A3 (en) | 1987-02-25 |
| EP0123443A2 (en) | 1984-10-31 |
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