JPS58135818A - 貯蔵寿命の長い高酸素輸送能力を有する交叉結合されたヘモグロビン剤の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、貯蔵寿命の長い高酸素輸送能力を有する交叉
結合され良へモグａビン剤の１ＩＩｌ法に関し、それに
於て、基質の含まれないヘモグロビン溶液は作用物質で
処理され、５乃至８個の炭素原子の炭素鎖を有するジア
ルデヒドと交叉結合される。

１血液交替”としてヘモグロビン溶液を使用することの
努力は、今世紀の前半から成されている。注射によって
赤血球の溶血物を与える企てによって発展が初まった。

しかしながら、これらの製剤中に含まれる基質成分は腎
臓に毒性の影響を有し、且つまた凝固の化学反応に影響
を及ぼすことがすぐにわかった。努力は次に基質の含ま
れないヘモグロビン溶液の製造に向けられた。これに対
する與なった２つの研究がある。ラビナーとその協力者
は１９６７年に遠心力と限外濾過によって基質の含まれ
ない溶液をＭ　初に−ａｌｌ剤した〔ラビナー　ニス　
エフ（ＲａｂｉｎｓｒＳ、？、）その他、ジャーナル　
エクスペリメンタル　メデイシン（Ｊ、　Ｉｘｐ、　Ｍ
ａｄ、）、１２６　１１２７．１９６７年〕。この方法
はカー　ボンハル）　（Ｋ、　Ｂｏ龜ｒｄ　）によって
改良された（西独特許発明明細書第！、２４・、４７５
号）。最近結晶され九基質Ｏ會會れないへ毫ダロビンが
報告され九〔ドウ　ペニュシエヌ（胸Ｖ＠皿ｔｏ　ＩＦ
、　）　、ジャーナル　ラプラトリー　タリュッタ　・
メデイシン（Ｊ、　Ｘａｈ、０Ｌｉｎ、勘も〕、８９、
ｉｏ？、１９７７年〕。しかしながら、これらの基質の
金倉れないへ毫ダ四ビン溶液は、それらが明らかな不利
益を多徽有しているために、麿筐交換に使用するために
は適していない。

赤處球内の声値は、血漿Ｏ声値よりも低く１７．４に駕
して約７．２である。こｏ＠ｎｏ相興は酸素固定曲線の
左側へＯ移行を引き起こす・それは、即ち酸素親和力の
増加は、赤血球中Ｏ酸素の解離を調節する作用物質、２
．ｓ−ジ−ホス本グリセリン酸ｆｉ（ｎｙｅ）０回収に
よってさらに増大され拳。上記の方法で製剤され九へモ
グ田ビン漕液は、約１４攬リパールだけの半飽和圧Ｐｏ
：を有している。皺半飽和圧Ｐｓｅ　ｔ　２　＊　’−
ジーホス＊グリセリン酸塩Ｏ添加によって生体外でｓ１
考リバールに上昇させることは可能であ為、しかしなが
ら、鋏ジーホス本グリ七リン酸塩のヘモグロビンに対す
る弱い結合に起因して生体内では不可能である。該作用
物質・は腎臓によって非常に急速に排出される。この不
利益はもつと強く結合され要件用物質の使用によって除
去される。西独特許出願公開明細書第２゜６１７．８２
２号中に多量の酸素を生じさせるヘモグロビン剤を導き
出す燐酸ピリドキサールを使用する方法が記述されてい
る。

酸素製出量の低さの間−は解決されたが、記述されてい
る溶液に疑いのない不利−が残されている。即ち、これ
らの溶液の血管内の半減期はわずかに約１０・０分であ
る。血漿中に溶解しその構造及び大きさ く分子量６４５０Ｇ）によって、腎臓によって急速に除
去される。又、もしそれが血液交替に会費な大量を注射
されたならば、゛それは一時的血管内の半減期を延ばす
ために、種々の方々が使用されている。それらの方法の
全てはへモグリビンの分子量の増大に目的が向けられて
いる。１つの企ては、へ毫ダリビンｔＳえばデ命スジラ
ン〔チャング　ジエー　イー（Ｏｋ＆！１ｇｓ　”１、
）その他、カナダ　ジャーナル　生化学（Ｏ錦。

Ｊ、　ｌｉｏｏｈｓｍ、　）　Ｓ　Ｓ　Ｉ　Ｎ　？・、
１９７７年）〕、ｋ）’Ｗｅジエチル蒙粉（西独特許出
願公開明細書第！。

４１４、Ｏ・１１、ゼラナン（Ｉｉｌｋ４１１許出厘公
告明細書嬉２，４４９．・Ｓト１、アルプ竜ン（！１ｉ
ｌｌｋ特許出厘公告明細書第１．４４９．８１１５号）
及びぼりエチレングリコール（Ｉｉ独特許出願公−明細
書ｍ暴、＠！４，１９８量）０機な高分子量重舎体と結
合させ為ごとであゐ。又、ヘモダ璽ビン分子肯士を結合
すゐ１１＃て非常に多く０種ＩＩＯ交叉結会剤が使用さ
れている（西独特許出願公告明細書第２．４４９．　ｌ
ｌｌ５号、米国特許第４、　（１ｇ１１．２００号、章
国勢許第４，００１，４１号）。

これら交叉結合され九−剤の全ては麿管内の半減期は延
長され九が、それらは多数の他の不利益を受は為。

意価Ｏ試確によって、腋へ毫ダービンを互いに又は他の
高分子と結合することは、均一な分子量の製造物を生じ
させない。それはむしろ４本の鎖の基本構造から始まり
それのオリゴマーｔ−ｎつ、高度に重合した分子に到る
限界を定める広い分子量の分布を生じさせる。そのよう
に広い分子量の分布がそれらの溶液の耐性に及ぼす影畳
が何かということはまだ十分に知られていない。しかし
ならが実験動物の腎臓及び肝臓の組−宇土の変質は単量
体及び重合体の成分に夫々起因することは明らかである
。

ヘモグロビン分子の化学的変更は、しばしば酸素固定曲
−に影１ｍを与える。はとんどの場合、ｆ！に素に対す
る親和力は増加する。それゆえに、オ〕ずかな＠素は生
理学的条件下で組織に生じさせられる。他の場合、化学
的に変更されたヘモグロビンは肺の中の酸素の分圧下で
低い電荷の酸素を受容する。それ由に箱−な酸素の輸送
は保証されない。燐酸ビリ・ドキサールの様な作用物質
の結合は、酸素の親和力の増大に対して作用する交叉結
合に優さる。しかし、血漿のｐ［（−飽和圧！１．を得
るこ七は不可能である。

鎖交叉結合は、同時に、ヘモグ田ビン溶筐Ｏ貯藏寿命を
非常に減少させ為、貯蔵寿命の限界の要因は、メトヘモ
ダービンＯ形威であり、それは酸素を輸送せず且つ除々
に腋溶液の効果をなくさせる。

本発明の目的は、麿管内Ｏ半減期が延ｄＩＦれ九交叉結
合し喪下記ヘモダ讐ビン剤の製剤にあり）それは〜狭い
分子量分布を有する。即ち１高度に重合され九ヘモグロ
ビンを含まず且つ交叉結合していないへ毫グ費ビンが少
ない。ｂ）又、この安定し九分子量分布を保持し且つ交
叉結合にかかわらない。・）又、高い酸素輸送能力を有
し、１つめ良好な安定性（貯蔵寿命）を有する。

この目的は本発明によって達成される。即ち、基質を禽
まない濃縮”ヘモグロビン溶液を、酸素分圧をＯＩリバ
ールより４低くする量の酸素消費還元剤で処理し、この
ように公知の方法で得られ九酸嵩をＩｋ＊され良製造物
を生湯学的に耐性の作用物質で処理し、ただちにｐＨ値
６乃至８でジアルデヒドで処理し、交叉結合された製造
物を５乃至２０倍の量のカルボニル基特定還元剤で還元
し、該溶液を水で希釈しても必要ならばそれを活性炭で
処理し、それを交叉結合していないヘモグロビンの量が
１５％以下になるまで限外濾過器を通してポンプで循環
し、交叉結合は限外濾過の前又はその間に遂され且つ還
元剤の添加によって製造瞼を安定化する。

本発明によって製造されるヘモグロビン剤は、上述の不
利益は１つも有しない０ 上述の望まれる性質１）乃至ｄ）は実質的に下記の全体
的な製造工程によって達成される。

−限外濾過 ｂ）　カルボニル基特定還元剤での還元ｏ）酸素消費還
元剤での化学的酸素除去の遂行優　交叉結合され、限外
濾過されたヘモグロビン剤に対する還元剤の添加。

交叉結合は、炭素原子数５乃至８の炭素鎖を含むジアル
デヒドで遂行される。それらは、例えば西独特許出願公
告明細書２，４４９，８８５号に記述されている。

更に低い酸素親和力の丸めに、交叉結合は例えば西独特
許出願°公開明細書菖２，４１７，８２１号に記述され
ている燐酸ビリドキ葉−ル又は西独特許出願公開明細書
第１，７４０，０１１号に記述書れているヘキサ燐酸イ
ノシトールの様な生ＩＩ学的に耐性の作用物質でＯ処理
が遂行され為。

これら上述の方法で製剤され九溶液は上昇されえ酸素親
和力（約２０ミリバールの半飽和圧Ｐ、。）を有する。

西独勢許出願公告明細書第２，４４９．ＩＩ＠５−９１
に記述Ｏ交叉結合過程の１実施例に於て、該ヘモグロビ
ン溶液は交叉結合Ｏ前にデソキシ■に転換されている。

しかし、酸素除去は窒素の排出及び溢流によって遂され
る。しかしながら、比較的に大量が使用されるならば、
酸素除去は完全ではない・こＯ方法によって、Ｓリット
ル春−中の意すツ）ル０１＠ｆｉヘモダービン博波Ｏ酸
嵩＊＊に談−ｃ、１ｏｌｌｌｌＯ返し九俵テさえ、酸素
の分圧鯰わずかにｓｓセリパールに低下し良だけであつ
え、酸素固定曲軸から腋ヘモダ四ビン鯰依然、この酸素
分圧で７５−飽和してい為ことがわかる。

驚（べ會ことには、もし該ヘモグ璽ビン溶液か、化学的
に交叉締金Ｏ前にデソキシ飄に完全に転換書れゐならば
、燐酸ビリドキ賃−ルの様な作用物質で処理されえ交叉
結合し、還元され、且つＩＩ外濾過され九へ啼ダ習ピン
剤が一値７．４でｉｉ−、−１１１手パールの半飽和圧
ｒ１．で製剤され得ることが見い出された。

本偽嘴によれげ、全ての酸素はアスクルピン酸、還元ダ
ルタチオン、還元メチレンブルー又は遣崩に中和され九
アスコルビン酸Ｏ橡な酸素消費還元剤によって該滴液か
ら除＊される。この方法０１１１呆は褒１かられかる。

褒１− 上述の交叉結合されえヘモダービン溶液は、依然として
分子量分布の安定性１ＩＸＩＩＩられていゐという不利
益を有してい為、それらが貯票中、大きな分子量の方に
移行する（ＩＩＩｉ［）。アルデヒドとア攬ノ基とでア
ゾメチンを製する反応は非常に急速に起こゐ、＋れは動
力学的に制御される。しかしながらアゾメチン結合は容
易に加水分解約に切断す４＠＋０ために、アゾメチン結
合Ｏ再配列によって貯劇中に熱力学的にさらに安定な結
合が形成される。これを避けるえめ％諌７ゾメチ、ど結
◆は−Ｎ、Ｑ又は璽−圓。

Ｏ様なカルｆｘル基勢定還元剤での還元と解媒的な水素
化によって安定化される。

第４１１４’、ｌＩａｍ４　’ｔ’　０還元０ｎ−ｈＸ
示されテいル。

反応中に形成するｍＯ，は膜外−過中に＃＊され為・ もし、燐酸ビリドキ豐−ルが作用物質分子としτ便用さ
れ為ならば他の有利性が与えられ為。

１ＩＩＩ＃ｌビ菅ドキ豐−ルは重えアゾメチン結合によ
って腋へモダ豐ビン分子を結合する。還元によって、干
れゆえ交叉結合が安定化されるたけでなく、腋作用物質
はその結合点で固定されゐ。

重金され大へ令〆田ビンを含まず且つ交叉結合していな
いへ毫グ撃ビンの非常に少ない交叉結合し大へ令ダ■ビ
ン誘導体０７ｔめに使用され為■膜濾過装置は好會しく
は中空繊維カートリッジから威る。しかしながら、平坦
な膜フィルターを會え使用し得る・ ｗ１眼外濾過は下記に示される２つの方法によって遂行
され得ゐ。

：Ｊｉｍｌ（第１ＩＩ） 作用物質が加えられ良、酸素除資され交叉結合されない
へ毫ダ冑ビン溶液は冷却され大供給春響ム内に置かれ、
ぎンプによって分子量１・・、Ｏ・・Ｏ浸違性を有する
中空繊維装置１を介して循環される。１１！外浦遥箇は
最初に分子量１ｔ１０．００ｔｌの浸透性を有する第意
中空繊維装置らによって濃縮されゐ。それは塾で交叉結
合剤と混合され、屓応春＠ｌ内で墨７℃に加熱され、次
で該供給客器ムに戻されゐ・交叉結合され九分子はも暴
言や限外濾過装置１０ＩＩを通過することができない。

この配列はいかなる交叉結合し九へ令ダービンも２度と
交叉結合剤と接触することができないこと１換言すれば
重合体の形成が除来されることを保証する。依然として
交叉結合していない残余のへ号ダ胃ビンは反応Ｏ＃了１
ｉｉｉ外浦遥によって除責される。

方法２（第２１１） 更に均一な交叉結合ｌ１ｌｌ物０違威の第２の可能性は
、下記の１慮に基いている。交叉結合反応に兼ては、分
子間及び分子内交叉結合が鏡台する。へ毫ダ璽ビン浪度
の上昇によって、該反応は分子間交叉結合に有利に移行
され得ゐ、今、４し交叉結合剤の量が重合体のＳａｔ物
が形成しないような量に選択され、その時一定量の交叉
結合していないヘモグルビンに加えられ為ならば、単に
オリゴマーが得られ為、交叉結合していないヘモグー１
ン分子は、部分的に分離され、続いて分子量１００、０
ｓ１ｍで遮断する膜上で限外濾過される。

諌交夏―会は反応春響ム内で起こる。腋反応Ｏ終了後　
ｍ１ｌｌ液はぎンプによって該隈外浦過装置１を介して
循環される。該装置１内では、交叉結合していないヘモ
グルビンは鼓膜を通過する。＠外漉過の溢流によゐ循環
中の容量Ｏ損失は、倶翰春器ａからの水によって厘め会
わされる。

これらＯ方法で製剤され九交叉結合され九オリゴマーの
ヘモグーピン滴液（分子量約２Ｇｏ、０００　）は、重
合体Ｏｗ毫ダービンを全く含まず且つＩｓ−以下の交叉
結合していないヘモグルビンを會＼ む。

方法１に展では工程は、交叉結合されていないへモダ璽
ビンから全てられ、交叉結合は限外が形成されないよう
に制御されるが、方法冨に於ては、既に制御され九交夏
結合を有する交叉結合製造物が使用“される。

カルボニル基特定試■で反応後、非常にあわ立つえ浦波
上のあわをっぷすえめに、腋混金物は水で希釈される。

９＆フィリッタ物質０還元及び濾過の向上。

ために、腋希釈溶液はもし線型れるならば活性炭で処運
され得る。

本発明Ｏ全ての工程は１もし方法３が使用書れるならば
下記の如く行なわれる。

最初の１ｓ乃至１Ｇ−ヘモダーピン博波は、酸素の分圧
に依存して、酸素の分圧がｏミリパールに減少されるよ
うなｉＩ−にイソーダで中和され九アスコルビンｉｌの
ような酸素消費還元剤で処理される。ヘモｌ′四ビンが
酸素ガスで飽和されている場合、これは、へ畳ダービン
１％ル轟り４毫ルＯ７スコルビン酸でなければならない
。

Ｏ乃至１０℃に冷却されえｇａｓ液は、！乃至Ｓ曽１好
會しくはＩ、１１偵Ｏモル歇ＯＩＩ酸ピリド◆！−ル會
えはへキサ燐酸イノシシールＯような作用物質で処ｉｉ
＊れ為。・次で交叉結合は、好會しくは１０ｊｌｌ水溶
液中で坪値番乃至Ｓ１好會しくは１．０で、ジアルデヒ
ドによって遂行され為、量は重合体Ｏヘモグ窒ビンが形
成されないような開会である。

続く還元は、最初のへモダ璽ビンを基に計算して％ｌ′
ＰＩ亜１０倍、好ましくは１１．・倍Ｏ啼ル量ＯｋＭ４
（）橡なカルｌニル基ｌｌＩ室還元剤で遂行され為。

次で、−外瀘過は、分子量１００，０００に合わせ大淡
違愉のフィルターを介して、交叉結合されていないへモ
ダ璽ビンの量が瀘゛液中の金へモダ璽ビン０ｓｈｙ１ｓ
ｓになる重で遂行されえ。

交叉請合され九へ毫ダービン溶液の貯蔵寿命はメジへ毫
ダ買ビンＯｉ＃威によって護憲される。

本発明に従って、これらのヘモダ讐ビン剤は、アスコル
ビン酸、還元ダルタチオン又は還元メチレンブルー０機
な還元物質の添加によって自動酸化に対して安定化され
る。１部間Ｏ貯ｉｕｉ間の後、メトへ毫グ四ビンＯ内春
量は、依然として金へモダ璽ビンの量の１・−以下であ
りえ。

會九、どの作用物簀が使用されるのかということは取る
に足りない。好會しくは、テスタルピン酸は、安定化の
ために、ヘモグルビンに関して４俯を越えて使用され為
・ 燐酸ピリドキサールを使用して本発明に従って製剤され
九交叉結合され大ヘモダ買ビン濱諌Ｏ酸素一定曲纏は第
１１ｇ１中に示される。亭亀和圧１１．は１１リバール
てあ為、驚（べきことに、該曲線は、自然のへ噌ダ資ビ
ンと同様に８字状である。そのような曲線は、交叉結合
されたへモダ璽ビンにはかつて決して見られなかった。

へ＋賃憐酸イノシ）−ルを使用して得られ九酸嵩一定―
纏は、第４１１中に示される。

本発明の方法によって製剤され喪へ毫ダ曽ビン溶液の効
果及び耐−′は、う１Ｍｖ及びラツ）０動物実験によっ
て証明されえ。本発明Ｏ方法によって形成され良製剤に
は麟曹性慟熱物質は會會れていなかつ友。

下記Ｏ実施例は本発明の詳細な説明を助は為であろう。

実施例１ 西独特許尭明明細書第ｆｆｉ、　ｆｆ１４４１．４７５
号の実施例１によって製剤され良ヘモグービン溶液は、
分子量ＩＨＩ、　ａｇｏに合せられ九浸逸性を有する中
蜜織雑カートリッジでの＠外浦通によって１９．４ｆｔ
に濃縮された。この溶液に４脩のモル量以上の中和され
良アスコルビン酸が加えられ、腋混合物は無曹瀘過され
、次で少くとも２４時間置かれた。この酸素１に＊され
＊１？％ヘモダービン博液は滴液湊−内に置かれ、冷却
され、次で水１リットル中に溶解した４、１りＯＩａｌ
１１Ｎ’０４とｉｇのＭ−罰、で処理された。

次で、か貴重ぜなかｊ２．２Ｆの燐酸ビリドキ賃−ルが
加えられ大。声値は４．６に低下しえ、Ｘ臨時間ａ１時
間であつ九、この後、激しくか貴重ザタが６１１．ｔａ
ｕｏｌｏ−水性グルタリツタジアルデヒド滴液が加えら
れ、腋混合物は再び１時間かきまぜられえ。還元の丸め
に、１．５４　Ｆ　ｅ）ＮａＱが加えられ良・それは１
リツトルの水中に手短かにあらかじめ溶解されていゐ。

ｎｏ分の反応時間の後、非常にあわ立つえ溶液が６リツ
トルの水で希釈され、そＯ！１呆あわは大部分つぶされ
、次でこの溶液は、１９ッＦル当り１０りのｔｓ性炭で
０処珈の１時間後に無菌フィルターを遷して濾過され友
。分子量１００，０００に合わされ喪浸遥性の中空繊維
カートリッジを介する限外濾過の九めに、最初に限外濾
過装置は充填され、次で１．１リツトルの希釈溶液は閉
鎖容器内に置かれる。この量は、ｌンプによって絶えず
再＊ｍ＊れる。限外濾過によって起こる容量の損失は絶
えず希釈へ唱ダ璽ビン溶筐で置會換えられる。この方法
で、腋＊＊は再えび濃縮される。鋏ヘモダ讐ビン博筐が
容量損失の補充に消費されゐとすぐに、皺限外浦遥は！
リットルの烏留水で続けられ、次て約１ｏ乃至１１襲に
濃縮される。：１ｖ１イドＯ浸透圧及びへ毫ダ胃ビン濃
度の調節のために、１１ｆｉｍＯ！ａｍｉｔ）アルプ電
ンが加えられ九。最終的な無曹瀘過Ｏ＃に５、次の成分
即ちｓ、ｓ’ｉｐのＭａｏｌ、１４．ｓｇのダルコース
、１．４６ｆｉのＩ□、、０．１４ｆｌＯ肛１、及び０
．１！ｇのＭｇ叩鴫）頁に安定化〇九めに０．４１ｇの
中和され九アスツルビン酸が重九加えられ九・ 収量側４６０− ヘモダーピン濃度ｓ８．５％　　　　　　。

メトヘモダレビン富　５．１相９１７１％コーイドの浸
透圧１　３４．８　宅すバール半飽和圧！、、　ｓ　１
８．　ｊ　ｌリバール輯駕粘度ｔ１．４ 分子量分布曲線１図参照 （七５７ア四−Ｊｋ１４Ｂ上のゲルタリマトグラ＾）　
　　−実施例雪 処場は一箇儒１と同様である。リン酸ビリドキナールの
換りに、水に溶解されてＶ値が７．４に調節され九’１
，５９９のへキ量燐酸イノシＦ−ルが作用物質として加
えられ九。

収量：　？　２５ｉＬｌ へそダ費ビン濃度エ　尋、９囁　　　　　　　　　、メ
トヘモダレビン＋２，４相％ｊＧ 半飽和圧Ｐ、。富２７セリバール 分子量分布：第７ｂ［Ｉ参照 （セファ田−ゼ６１上Ｏゲルタ田マトダラム）

【図面の簡単な説明】

第１ｍは本発明製法の１実施例の工ｉｉｍ、第’１＠は
他の実−例の工ｌ！図、第５１０１本讐明調法によって
得られへ毫ダービン剤の分子量分布曲線、第４図はＩａ
ｌＨ４で還元しえ場合の前記分子量分布ｔｌｉ１１１第
ｓｉｌは鱗験ビ９ドキナールを使用し大場合Ｏ本発明製
法によって得られたへモグ胃ピン剤の酸素調定曲線、第
６図はへ中葉燐酸イノシトールを使用し大場合の前記酸
素固定曲線、１Ｅ７ＩＮは実施例１及び２のゲルターマ
トダラムを示す・ 手続補正書 １６事件の表示 昭和ｓ１年特許願第１９３６７１号 ２、発明の名称 貯■寿命Ｏａい高−嵩輪道能力を有する交叉−舎１Ａれ
九へ毫ダロビン剤の製法３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 ビオテス＞−４１に＾−インスチナ１−ト１ＪＩ１１ル
シャフト　竜ツ）　べｖルンタター　＾フッシダ４、代
　理　人 明細書の発明の詳細な説明の−、図面の簡単な説明の＠
並に図面 ７、補正の内容 …　明細書第１２頁第９行の「（第Ｓ図）、」を下記の
通り訂正する。 記 「（第ｊｌａ１１５、第１１に＋！ＩＩＩ）ｏ崗、第５
ａ図は製造直後、第５ｂＷＪ＃ｉ製造５遍間後の上記ヘ
モグ田ビン剤の分子量分布−−を夫々示す、」（２）　
　仝書仝頁＄１１？行のｒ籐４＠中・・・・・・いる、
」を「第４ａ１１、第４ｋｇ１ｌ（は、１ｍ１１４での
還元の例が示されている。崗嬉４＆図は製造直後、（３
）　　全書＃Ｉ２１頁第１Ｓ行の［塵７図Ｊｔｒ馬７＆
図」と訂正する。 （４１仝１第２１責第１０行乃至第１ｓ行の「第５ｉｉ
！ｌは・・・・・・分布曲線」を１票５１図、第５ｂｌ
ｌｌは従来Ｓ！によって得られえヘモダルビン剤Ｏ分子
量分布ａｍ、第４ａ図、第４ｂ図は本発＠刺決によって
得られ九へモグリビン剤の分子量分布画線」と訂正する
。 （５）　　仝書仝頁第１７行の［第７図Ｊｔｒ第７＆図
、第７ｂ図」と訂正する。 （６）正式−画をｍａｉｌます。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　基質を含まないヘモグリピン溶液１作用物質で処
   理し、炭素原子数５乃至８個の炭素鎖を有するジアルデ
   ヒドと交叉結合された貯蔵寿命の長い高酸素輸送能力を
   有する交叉結合されたヘモグロビン剤の製法に於て、基
   質を含まない濃縮ヘモグロビン溶液は酸素の分圧をＯｔ
   リバールに小さくする量の酸素消費還元剤で処理され、
   かくして得られた酸素除去製造物は公知の方法で生理学
   的に耐性の作用物質で処理され、次で一値６乃至８でジ
   アルデヒドで処理され、該交叉結合された製造物は５乃
   至２０倍の量のカルボニル基特定還元剤で還元され、該
   溶液は水で希釈され、望まれる場合は活性炭で処理され
   、交叉結合していないヘモグービンの量が１５％以下に
   なる倉で一環しつつ限外濾過遣れ、皺交夏結合は限外濃
   過の前又は最中に遂行され、且つ製造物は還元剤Ｏ添加
   によって安定化されることを特徴とする貯−寿、会の長
   い高酸素輸送能力を有する交叉結合されえへ毫ダ胃ビン
   剤０Ｉｌｌ造法。 ＬＩＩＩ［作用物質として燐酸ビリドキを一ル又はへキ
   を燐酸イノシトールが使用されゐことを特徴とする特許
   請求の範囲ｌＥ１項に記Ｉ！のヘモグロビン剤Ｏ製法。 五　腋酸嵩消費達元剤として中和され九アスコルビンＩ
   ｌｌが使用されることを特徴とす、＆特許請求の範！ａ
   第１項又は第２種に記載のへ啼ダレビン剤の製法。 ４　ｖＬカルボ１ル基特定連元剤として一謳、が使用さ
   れることｔ−特徴とする特許請求の範囲第１項乃至、謳
   ＳＺＯ何れか１項に記載のヘモグロビン剤ｏ　ｓｉ　ｉ
   ｉｔ　＊