JPH09313179A - 酵素固定化用担体及び固定化リパーゼ - Google Patents
酵素固定化用担体及び固定化リパーゼInfo
- Publication number
- JPH09313179A JPH09313179A JP8157619A JP15761996A JPH09313179A JP H09313179 A JPH09313179 A JP H09313179A JP 8157619 A JP8157619 A JP 8157619A JP 15761996 A JP15761996 A JP 15761996A JP H09313179 A JPH09313179 A JP H09313179A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- enzyme
- coupling agent
- lipase
- carboxylic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 酵素の固定化操作が容易であり、得られた固
定化酵素が高い活性を示し、しかも繰り返し使用時にお
ける活性の低下が少ない無機の酵素固定化用担体とそれ
にリパ−ゼを固定化した固定化リパ−ゼを提供すること
を目的とする。 【解決手段】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させたことによって上記の
課題を解決した。無機質担体としてはカオリナイト系酵
素固定化用担体もしくは多孔質ガラス等のシランカップ
リング剤と結合可能な官能基を有する担体を用いる。更
にカルボン酸エステル結合を有するカップリング剤をそ
れらの無機質担体に結合させた後、所定の濃度のリパー
ゼ溶液に無機質担体を混合して撹拌し、濾過，乾燥する
ことにより、リパーゼ蛋白に含まれる官能基を担体のカ
ルボン酸エステルと結合させた固定化リパ−ゼを提供す
る。
定化酵素が高い活性を示し、しかも繰り返し使用時にお
ける活性の低下が少ない無機の酵素固定化用担体とそれ
にリパ−ゼを固定化した固定化リパ−ゼを提供すること
を目的とする。 【解決手段】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させたことによって上記の
課題を解決した。無機質担体としてはカオリナイト系酵
素固定化用担体もしくは多孔質ガラス等のシランカップ
リング剤と結合可能な官能基を有する担体を用いる。更
にカルボン酸エステル結合を有するカップリング剤をそ
れらの無機質担体に結合させた後、所定の濃度のリパー
ゼ溶液に無機質担体を混合して撹拌し、濾過，乾燥する
ことにより、リパーゼ蛋白に含まれる官能基を担体のカ
ルボン酸エステルと結合させた固定化リパ−ゼを提供す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は酵素を生体触媒とし
て生化学反応を工業的に行わせるためのバイオリアクタ
ー、バイオセンサー等の用途で使用される酵素固定化用
担体及び固定化リパーゼに関するものである。
て生化学反応を工業的に行わせるためのバイオリアクタ
ー、バイオセンサー等の用途で使用される酵素固定化用
担体及び固定化リパーゼに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】酵素を利用した生体反応を工業的に行わ
せる固定化酵素バイオリアクター、バイオセンサー等の
研究は近年非常に盛んに行われており、これに使用され
る酵素固定化用担体の開発も進んでいる。固定化酵素バ
イオリアクターとは、酵素を担体に固定して触媒として
用いる反応装置であり、担体の種類も高分子有機材料と
か、一般的な多孔質ガラス、セラミックス質等の無機材
料等各種のものが提案されている。
せる固定化酵素バイオリアクター、バイオセンサー等の
研究は近年非常に盛んに行われており、これに使用され
る酵素固定化用担体の開発も進んでいる。固定化酵素バ
イオリアクターとは、酵素を担体に固定して触媒として
用いる反応装置であり、担体の種類も高分子有機材料と
か、一般的な多孔質ガラス、セラミックス質等の無機材
料等各種のものが提案されている。
【０００３】無機質担体は、有機質担体に比べて機械的
強度や滅殺菌のための熱及び化学薬品に強い利点を持つ
反面、酵素の吸着力が弱いために繰り返し使用できない
欠点があった。このような欠点を除くため、例えば特公
昭５５−３２３５７号公報及び特公昭５６−１５２３１
号公報には、多孔質ガラス，アルミナ，シリカ等の無機
質担体に反応性有機基を導入したシランカップリング剤
を結合させ、次いで酵素側の官能基をシランカップリン
グ剤の反応性有機基と反応させて結合を形成させる方法
が開示されている。
強度や滅殺菌のための熱及び化学薬品に強い利点を持つ
反面、酵素の吸着力が弱いために繰り返し使用できない
欠点があった。このような欠点を除くため、例えば特公
昭５５−３２３５７号公報及び特公昭５６−１５２３１
号公報には、多孔質ガラス，アルミナ，シリカ等の無機
質担体に反応性有機基を導入したシランカップリング剤
を結合させ、次いで酵素側の官能基をシランカップリン
グ剤の反応性有機基と反応させて結合を形成させる方法
が開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】これらのシランカップ
リング剤を結合させた無機質担体に固定化した酵素（以
下固定化酵素という）には糖質分解酵素であるα−アミ
ラーゼ，グルコアミラーゼ等があるが、担体に固定しな
い酵素の反応性と比較して澱粉あるいはその他の基質と
の反応性、即ち活性が低いため、多量の固定化酵素が必
要であって工業生産には適していないという問題があ
る。上記に対処して、特公平５−２１９９５２号公報と
か特公平４−５１８９４号公報には新規な担体と固定化
方法が提案されている。
リング剤を結合させた無機質担体に固定化した酵素（以
下固定化酵素という）には糖質分解酵素であるα−アミ
ラーゼ，グルコアミラーゼ等があるが、担体に固定しな
い酵素の反応性と比較して澱粉あるいはその他の基質と
の反応性、即ち活性が低いため、多量の固定化酵素が必
要であって工業生産には適していないという問題があ
る。上記に対処して、特公平５−２１９９５２号公報と
か特公平４−５１８９４号公報には新規な担体と固定化
方法が提案されている。
【０００５】一方、油脂分解酵素であるリパーゼは、油
脂の分解のみならずモノエステル分解，エステル合成，
エステル交換反応等によるラセミ体の光学分割等有機合
成化学分野における用途が最近急速に広がっているが、
工業的な固定化法としては珪藻土に高濃度のリパーゼ溶
液を物理吸着させて固定化する程度の研究しか成されて
いないのが実状である。
脂の分解のみならずモノエステル分解，エステル合成，
エステル交換反応等によるラセミ体の光学分割等有機合
成化学分野における用途が最近急速に広がっているが、
工業的な固定化法としては珪藻土に高濃度のリパーゼ溶
液を物理吸着させて固定化する程度の研究しか成されて
いないのが実状である。
【０００６】そのため、珪藻土吸着リパ−ゼを得るため
には、粗酵素リパ−ゼの高濃度溶液に珪藻土を混合した
後、全量を乾燥させる操作が必要であるが、珪藻土の物
理吸着能力には限度があり、しかも物理吸着のため吸着
力が弱く、繰り返しの使用では活性が低下するという問
題がある。
には、粗酵素リパ−ゼの高濃度溶液に珪藻土を混合した
後、全量を乾燥させる操作が必要であるが、珪藻土の物
理吸着能力には限度があり、しかも物理吸着のため吸着
力が弱く、繰り返しの使用では活性が低下するという問
題がある。
【０００７】本来、固定化酵素を使用する目的は、高価
な酵素を使い捨てにしないで繰り返し使用することによ
ってコストを下げ、かつ、反応生成物中に酵素を残留さ
せないことにある。換言すれば出来るだけ少量で長期間
繰り返し使用可能な固定化酵素が望ましい。固定化酵素
の活性が高ければ反応装置は小型で良く、設備費と動力
費が少なくて済むという利点がある。
な酵素を使い捨てにしないで繰り返し使用することによ
ってコストを下げ、かつ、反応生成物中に酵素を残留さ
せないことにある。換言すれば出来るだけ少量で長期間
繰り返し使用可能な固定化酵素が望ましい。固定化酵素
の活性が高ければ反応装置は小型で良く、設備費と動力
費が少なくて済むという利点がある。
【０００８】そこで本発明は、リパ−ゼの固定化操作が
容易であり、得られた固定化リパ−ゼが高い活性を示
し、しかも繰り返し使用時における活性の低下が少ない
無機の酵素固定化用担体及び固定化リパーゼを提供する
ことを課題とするものである。
容易であり、得られた固定化リパ−ゼが高い活性を示
し、しかも繰り返し使用時における活性の低下が少ない
無機の酵素固定化用担体及び固定化リパーゼを提供する
ことを課題とするものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は上記課題を解決
するために、カルボン酸エステル結合を有するカップリ
ング剤を無機質担体に結合させたこと、及びカルボン酸
エステル結合を有するカップリング剤を無機質担体に結
合させたことにより、リパーゼを担持する担体を得たこ
と、カルボン酸エステル結合を有するカップリング剤が
シランカップリング剤であることを基本構成としてい
る。この無機質担体としてカオリナイト系酵素固定化用
担体もしくは多孔質ガラス，ベントナイト，シリカゲ
ル，アルミナ，シリカ，シリカ−アルミナヒドロキシア
パタイト，リン酸カルシウムゲル等のシランカップリン
グ剤と結合可能な官能基を有する担体を用いる。
するために、カルボン酸エステル結合を有するカップリ
ング剤を無機質担体に結合させたこと、及びカルボン酸
エステル結合を有するカップリング剤を無機質担体に結
合させたことにより、リパーゼを担持する担体を得たこ
と、カルボン酸エステル結合を有するカップリング剤が
シランカップリング剤であることを基本構成としてい
る。この無機質担体としてカオリナイト系酵素固定化用
担体もしくは多孔質ガラス，ベントナイト，シリカゲ
ル，アルミナ，シリカ，シリカ−アルミナヒドロキシア
パタイト，リン酸カルシウムゲル等のシランカップリン
グ剤と結合可能な官能基を有する担体を用いる。
【００１０】カルボン酸エステル結合を有するシランカ
ップリング剤としては一般式ＲＣＯＯ（ＣＨ2）ｎＳｉ
Ｒ’3（Ｒは有機官能基，Ｒ’は低級アルコキシ、フェ
ノキシ、ハロゲンからなる群から選んだ基、ｎは整数）
であるカルボン酸エステル結合を有するカップリング剤
を使用する。具体的には、γ−メタクリロキシプロピル
トリメトキシシラン、γ−アセトキシプロピルトリメト
キシシラン、γ−アクリロキシプロピルトリメトキシシ
ラン等のシランカップリング剤を用いる。
ップリング剤としては一般式ＲＣＯＯ（ＣＨ2）ｎＳｉ
Ｒ’3（Ｒは有機官能基，Ｒ’は低級アルコキシ、フェ
ノキシ、ハロゲンからなる群から選んだ基、ｎは整数）
であるカルボン酸エステル結合を有するカップリング剤
を使用する。具体的には、γ−メタクリロキシプロピル
トリメトキシシラン、γ−アセトキシプロピルトリメト
キシシラン、γ−アクリロキシプロピルトリメトキシシ
ラン等のシランカップリング剤を用いる。
【００１１】また、カルボン酸エステル結合を有するカ
ップリング剤を無機質担体に結合させた後、所定の濃度
のリパーゼ溶液に無機質担体を混合して撹拌し、濾過，
乾燥することにより、リパーゼ蛋白に含まれる官能基を
カルボン酸エステルと結合させた固定化リパ−ゼを提供
する。
ップリング剤を無機質担体に結合させた後、所定の濃度
のリパーゼ溶液に無機質担体を混合して撹拌し、濾過，
乾燥することにより、リパーゼ蛋白に含まれる官能基を
カルボン酸エステルと結合させた固定化リパ−ゼを提供
する。
【００１２】かかる酵素固定化用担体及び固定化リパー
ゼは、他のカルボン酸エステル結合を有しないシランカ
ップリング剤を結合させた担体や未処理の担体にリパー
ゼを担持させた場合に比べて担体に吸着した蛋白量が特
に多くなくても活性が非常に高く、即ち担体に吸着した
蛋白量に対する比活性が非常に高いものであり、かつ、
活性の低下が非常に少ないという特徴的作用がある。ま
た、製造時にも困難な固定化操作を必要とせず、所定の
濃度のリパーゼ溶液に担体を混合撹拌した後に濾過，乾
燥するという通常の固定化操作によってリパーゼ蛋白に
含まれる官能基をカルボン酸エステルと結合させること
が可能である。更に繰り返し使用によっても活性の低下
が非常に少なく、繰り返し回分反応における活性の低下
がほとんど認められないという顕著な特徴が得られる。
ゼは、他のカルボン酸エステル結合を有しないシランカ
ップリング剤を結合させた担体や未処理の担体にリパー
ゼを担持させた場合に比べて担体に吸着した蛋白量が特
に多くなくても活性が非常に高く、即ち担体に吸着した
蛋白量に対する比活性が非常に高いものであり、かつ、
活性の低下が非常に少ないという特徴的作用がある。ま
た、製造時にも困難な固定化操作を必要とせず、所定の
濃度のリパーゼ溶液に担体を混合撹拌した後に濾過，乾
燥するという通常の固定化操作によってリパーゼ蛋白に
含まれる官能基をカルボン酸エステルと結合させること
が可能である。更に繰り返し使用によっても活性の低下
が非常に少なく、繰り返し回分反応における活性の低下
がほとんど認められないという顕著な特徴が得られる。
【００１３】
【発明の実施の形態】以下本発明にかかる酵素固定化用
担体及び固定化リパーゼの具体的な実施形態を説明す
る。本発明ではカルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させること、及びカルボン
酸エステル結合を有するカップリング剤を無機質担体に
結合させたことにより、リパーゼを担持する担体を得た
ことによって上記の課題を解決したことが特徴となって
いる。
担体及び固定化リパーゼの具体的な実施形態を説明す
る。本発明ではカルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させること、及びカルボン
酸エステル結合を有するカップリング剤を無機質担体に
結合させたことにより、リパーゼを担持する担体を得た
ことによって上記の課題を解決したことが特徴となって
いる。
【００１４】表１により各種カップリング剤の構造式を
示す。
示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】表１中のＮｏ１〜Ｎｏ３は本発明で採用し
たカルボン酸エステル結合を持つシランカップリング剤
であり、Ｎｏ４〜Ｎｏ９は比較例としての他のシランカ
ップリング剤である。このように本発明で用いたカップ
リング剤はカルボン酸エステル結合を有し、かつ、好ま
しくはカップリング剤がシランカップリング剤であり、
一般式ＲＣＯＯ（ＣＨ2）ｎＳｉＲ’3で表されるものが
好適である。ここでＲは有機官能基であり、末端に無機
の官能基を持っていても良い。Ｒ’は低級アルコキシ、
フェノキシ、ハロゲンからなる群から選んだ基であり、
ｎは整数である。
たカルボン酸エステル結合を持つシランカップリング剤
であり、Ｎｏ４〜Ｎｏ９は比較例としての他のシランカ
ップリング剤である。このように本発明で用いたカップ
リング剤はカルボン酸エステル結合を有し、かつ、好ま
しくはカップリング剤がシランカップリング剤であり、
一般式ＲＣＯＯ（ＣＨ2）ｎＳｉＲ’3で表されるものが
好適である。ここでＲは有機官能基であり、末端に無機
の官能基を持っていても良い。Ｒ’は低級アルコキシ、
フェノキシ、ハロゲンからなる群から選んだ基であり、
ｎは整数である。
【００１７】また、無機質担体としてカオリナイト系酵
素固定化用担体、もしくは多孔質ガラス、ベントナイ
ト、シリカゲル、アルミナ、シリカ、シリカ−アルミナ
ヒドロキシアパタイト、リン酸カルシウムゲル等のシラ
ンカップリング剤と結合可能な官能基を有する担体を用
いる。
素固定化用担体、もしくは多孔質ガラス、ベントナイ
ト、シリカゲル、アルミナ、シリカ、シリカ−アルミナ
ヒドロキシアパタイト、リン酸カルシウムゲル等のシラ
ンカップリング剤と結合可能な官能基を有する担体を用
いる。
【００１８】本発明では以下に例示するように、平均粒
径２００μｍに造粒したカオリナイト系酵素固定化用担
体の表面に各種のシランカップリング剤を結合させた後
にリパーゼを担持させて反応性を検討した。その結果、
前記Ｎｏ１〜Ｎｏ３で示したγ−メタクリロキシプロピ
ルトリメトキシシラン、γ−アセトキシプロピルトリメ
トキシシラン、γ−アクリロキシプロピルトリメトキシ
シラン等のカルボン酸エステル結合を有するシランカッ
プリング剤を結合させた担体にリパーゼを担持させた固
定化リパーゼ（以下エステル結合固定化リパーゼとい
う）は、他のカルボン酸エステル結合を有しないシラン
カップリング剤を結合させた担体にリパーゼを担持させ
た固定化リパーゼ（以下他のシランカップリング固定化
リパーゼという）に比べて担体に吸着した蛋白量が特に
多くなくても活性が非常に高いという知見を得た。
径２００μｍに造粒したカオリナイト系酵素固定化用担
体の表面に各種のシランカップリング剤を結合させた後
にリパーゼを担持させて反応性を検討した。その結果、
前記Ｎｏ１〜Ｎｏ３で示したγ−メタクリロキシプロピ
ルトリメトキシシラン、γ−アセトキシプロピルトリメ
トキシシラン、γ−アクリロキシプロピルトリメトキシ
シラン等のカルボン酸エステル結合を有するシランカッ
プリング剤を結合させた担体にリパーゼを担持させた固
定化リパーゼ（以下エステル結合固定化リパーゼとい
う）は、他のカルボン酸エステル結合を有しないシラン
カップリング剤を結合させた担体にリパーゼを担持させ
た固定化リパーゼ（以下他のシランカップリング固定化
リパーゼという）に比べて担体に吸着した蛋白量が特に
多くなくても活性が非常に高いという知見を得た。
【００１９】上記カオリナイト系酵素固定化用担体と
は、カオリン鉱物に強酸を加え、水と共に水熱処理を施
した後、水洗したスラリー又は粉体を造粒し、３５０℃
〜１０００℃の温度で焼成することにより得た酵素固定
化用担体であって、シャープで均一な細孔分布と大きな
細孔量を持つ。
は、カオリン鉱物に強酸を加え、水と共に水熱処理を施
した後、水洗したスラリー又は粉体を造粒し、３５０℃
〜１０００℃の温度で焼成することにより得た酵素固定
化用担体であって、シャープで均一な細孔分布と大きな
細孔量を持つ。
【００２０】上記の工程は強酸を用いて水熱処理を行う
ため、不純物として含まれているアルカリ成分が溶出
し、得られたスラリー又は多孔質粉体にはほとんど可溶
性アルカリ成分は含まれておらず、カオリン鉱物本来の
化学的安定性が更に向上するという特徴を有している。
ため、不純物として含まれているアルカリ成分が溶出
し、得られたスラリー又は多孔質粉体にはほとんど可溶
性アルカリ成分は含まれておらず、カオリン鉱物本来の
化学的安定性が更に向上するという特徴を有している。
【００２１】なお、シランカップリング剤としてリパー
ゼ以外の酵素で効果の高いとされるγ−アミノプロピル
トリメトキシシラン（表１のＮｏ８）を結合させた担体
でもリパーゼの場合は固定化量も少なく、活性の低いも
のしか得られなかった。
ゼ以外の酵素で効果の高いとされるγ−アミノプロピル
トリメトキシシラン（表１のＮｏ８）を結合させた担体
でもリパーゼの場合は固定化量も少なく、活性の低いも
のしか得られなかった。
【００２２】一般に市販されているリパ−ゼは、粗酵素
粉末が多く純粋なリパ−ゼ蛋白以外に多くの他の蛋白質
を含んでおり、純粋なリパーゼ蛋白だけを選択的に担体
に担持することは困難である。そのため活性を向上させ
るには大量の粗酵素リパ−ゼ粉末を高濃度溶液にして大
量の蛋白を吸着させなければならず、固定化操作が困難
であるとともに用いる担体は蛋白吸着能力が非常に高い
ものが要求される。これに比べ、エステル結合を有する
シランカップリング剤を結合させた担体を用いると多量
の蛋白を吸着させなくても非常に高い活性を持つ固定化
リパーゼを得ることができる。
粉末が多く純粋なリパ−ゼ蛋白以外に多くの他の蛋白質
を含んでおり、純粋なリパーゼ蛋白だけを選択的に担体
に担持することは困難である。そのため活性を向上させ
るには大量の粗酵素リパ−ゼ粉末を高濃度溶液にして大
量の蛋白を吸着させなければならず、固定化操作が困難
であるとともに用いる担体は蛋白吸着能力が非常に高い
ものが要求される。これに比べ、エステル結合を有する
シランカップリング剤を結合させた担体を用いると多量
の蛋白を吸着させなくても非常に高い活性を持つ固定化
リパーゼを得ることができる。
【００２３】そのため、従来の珪藻土吸着リパ−ゼの固
定化で必要な粗酵素リパ−ゼの高濃度溶液を使用して珪
藻土と混合した後、全量乾燥するという困難な固定化操
作を必要とせず、通常の固定化操作、即ち所定の濃度の
リパ−ゼ溶液に担体を混合撹拌後、濾過し、乾燥すると
いう簡単な操作で充分である。その理由は現時点では必
ずしも明らかではないが以下のように推察される。即
ち、酵素は触媒として働く蛋白質であり、その２０種類
のアミノ酸残基にはアミノ基やカルボキシル基をはじめ
とする種々の官能基を持っている。リパーゼ蛋白の場合
それらの官能基の何れかがカルボン酸エステルと特に結
合し易く、そのため他の蛋白よりもリパ−ゼ蛋白を選択
的に多く結合させることができるものと考えられる。
定化で必要な粗酵素リパ−ゼの高濃度溶液を使用して珪
藻土と混合した後、全量乾燥するという困難な固定化操
作を必要とせず、通常の固定化操作、即ち所定の濃度の
リパ−ゼ溶液に担体を混合撹拌後、濾過し、乾燥すると
いう簡単な操作で充分である。その理由は現時点では必
ずしも明らかではないが以下のように推察される。即
ち、酵素は触媒として働く蛋白質であり、その２０種類
のアミノ酸残基にはアミノ基やカルボキシル基をはじめ
とする種々の官能基を持っている。リパーゼ蛋白の場合
それらの官能基の何れかがカルボン酸エステルと特に結
合し易く、そのため他の蛋白よりもリパ−ゼ蛋白を選択
的に多く結合させることができるものと考えられる。
【００２４】一方、繰り返し使用による活性の低下を比
較した結果、エステル結合固定化リパーゼは、他のシラ
ンカップリング固定化リパーゼとかシランカップリング
剤で処理していない担体にリパーゼを担持させた固定化
リパーゼに比べ、リパーゼの吸着力が強いため活性が高
いだけでなく、活性の低下が非常に少ないことが判明し
た。以下に具体的に実施例を説明する。
較した結果、エステル結合固定化リパーゼは、他のシラ
ンカップリング固定化リパーゼとかシランカップリング
剤で処理していない担体にリパーゼを担持させた固定化
リパーゼに比べ、リパーゼの吸着力が強いため活性が高
いだけでなく、活性の低下が非常に少ないことが判明し
た。以下に具体的に実施例を説明する。
【００２５】
【実施例】ラセミ体の光学分割を目的とした反応の１例
として、ＤＬ−１−フェネチルアルコールに、アシル供
与体としてビニルアセテートを混合し、リパ−ゼを触媒
としてＲ体のエステル化反応を行った。また、リパ−ゼ
としてはＲ体を選択的に触媒反応することが既に確認さ
れており、特に上記の反応においては非常に高い選択性
を示すリパ−ゼＰＳ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐ
ａｃｉａ 起源，天野製薬社製）を担体に固定化して使
用した。
として、ＤＬ−１−フェネチルアルコールに、アシル供
与体としてビニルアセテートを混合し、リパ−ゼを触媒
としてＲ体のエステル化反応を行った。また、リパ−ゼ
としてはＲ体を選択的に触媒反応することが既に確認さ
れており、特に上記の反応においては非常に高い選択性
を示すリパ−ゼＰＳ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐ
ａｃｉａ 起源，天野製薬社製）を担体に固定化して使
用した。
【００２６】《実施例１〜３》表１に示すＮｏ１〜Ｎｏ
３のカルボン酸エステル結合を持つシランカップリング
剤０．２ｇをトルエン１．８ｇで希釈した溶液にカオリ
ナイト系酵素固定化用担体１．５ｇを投入し１時間混合
した後、固液分離をし、１１０℃で３０分間乾燥させて
担体を得た。
３のカルボン酸エステル結合を持つシランカップリング
剤０．２ｇをトルエン１．８ｇで希釈した溶液にカオリ
ナイト系酵素固定化用担体１．５ｇを投入し１時間混合
した後、固液分離をし、１１０℃で３０分間乾燥させて
担体を得た。
【００２７】そして、リパーゼ粗酵素（リパーゼＰＳ
天野製薬社製）２．５ｇをリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
２５ｍｌに溶解した後、濾過により不溶成分を除去し、
得られた酵素溶液に実施例で得られた担体０．５ｇを投
入し、振とうしながら一昼夜固定化を行った後、濾過を
行って固定化リパ−ゼを回収した。
天野製薬社製）２．５ｇをリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
２５ｍｌに溶解した後、濾過により不溶成分を除去し、
得られた酵素溶液に実施例で得られた担体０．５ｇを投
入し、振とうしながら一昼夜固定化を行った後、濾過を
行って固定化リパ−ゼを回収した。
【００２８】《比較例４〜６》表１に示すＮｏ４〜Ｎｏ
９の他のシランカップリング剤０．２ｇをトルエン１．
８ｇで希釈した溶液にカオリナイト系酵素固定化担体
１．５ｇを投入し、１時間混合した後、固液分離をし、
１１０℃で３０分間乾燥させて担体を得た。
９の他のシランカップリング剤０．２ｇをトルエン１．
８ｇで希釈した溶液にカオリナイト系酵素固定化担体
１．５ｇを投入し、１時間混合した後、固液分離をし、
１１０℃で３０分間乾燥させて担体を得た。
【００２９】そして、リパーゼ粗酵素（リパーゼＰＳ
天野製薬社製）２．５ｇをリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
２５ｍｌに溶解した後、濾過により不溶成分を除去し、
得られた酵素溶液に比較例で得られた担体０．５ｇを投
入し、振とうしながら一昼夜固定化を行った後、濾過を
行って固定化リパ−ゼを回収した。
天野製薬社製）２．５ｇをリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
２５ｍｌに溶解した後、濾過により不溶成分を除去し、
得られた酵素溶液に比較例で得られた担体０．５ｇを投
入し、振とうしながら一昼夜固定化を行った後、濾過を
行って固定化リパ−ゼを回収した。
【００３０】《活性試験》こうして得られた実施例１〜
３と比較例４〜９の各固定化リパーゼ１２０ｍｇをＤＬ
−１−フェネチルアルコール１．２ｍｌ、ビニルアセテ
ート４．６ｍｌの混合液に投入して２５℃でエステル化
反応を行った。反応開始２０分後の初期活性（Ｕ／ｇ）
と蛋白吸着量（ｍｇ／ｇ−担体）との関係を図１に示
す。活性は１分間に１μｍｏｌのフェネチルエステルを
生成する酵素量を１Ｕｎｉｔ（Ｕ）とした。
３と比較例４〜９の各固定化リパーゼ１２０ｍｇをＤＬ
−１−フェネチルアルコール１．２ｍｌ、ビニルアセテ
ート４．６ｍｌの混合液に投入して２５℃でエステル化
反応を行った。反応開始２０分後の初期活性（Ｕ／ｇ）
と蛋白吸着量（ｍｇ／ｇ−担体）との関係を図１に示
す。活性は１分間に１μｍｏｌのフェネチルエステルを
生成する酵素量を１Ｕｎｉｔ（Ｕ）とした。
【００３１】図中のＡで囲んだ３種の初期活性は、本発
明で採用した前記表１に示すＮｏ１〜Ｎｏ３で示したγ
−メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、γ−ア
セトキシプロピルトリメトキシシラン、γ−アクリロキ
シプロピルトリメトキシシラン等のカルボン酸エステル
結合を有するシランカップリング剤を結合させた担体に
リパ−ゼを担持させたエステル結合固定化リパ−ゼを用
いた本発明にかかる実施例であり、他のシランカップリ
ング固定化リパーゼを用いた比較例４〜９の６種の例及
び未処理の例と比較して、担体に吸着した蛋白量が特に
多くなくても初期活性が非常に高くなっているという結
果が得られた。例えば、実施例１〜３と略同量の蛋白吸
着量を有するＮｏ９のフェネチルトリメトキシシランで
処理した比較例９と比較してＡで囲んだ３種の活性が数
倍高いことが判る。また、実施例１〜３より蛋白吸着量
の多いＮｏ４のアリルトリメトキシシランで処理した比
較例４と比較しても、Ｎｏ１〜Ｎｏ３の活性が数倍高い
ことが判る。
明で採用した前記表１に示すＮｏ１〜Ｎｏ３で示したγ
−メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、γ−ア
セトキシプロピルトリメトキシシラン、γ−アクリロキ
シプロピルトリメトキシシラン等のカルボン酸エステル
結合を有するシランカップリング剤を結合させた担体に
リパ−ゼを担持させたエステル結合固定化リパ−ゼを用
いた本発明にかかる実施例であり、他のシランカップリ
ング固定化リパーゼを用いた比較例４〜９の６種の例及
び未処理の例と比較して、担体に吸着した蛋白量が特に
多くなくても初期活性が非常に高くなっているという結
果が得られた。例えば、実施例１〜３と略同量の蛋白吸
着量を有するＮｏ９のフェネチルトリメトキシシランで
処理した比較例９と比較してＡで囲んだ３種の活性が数
倍高いことが判る。また、実施例１〜３より蛋白吸着量
の多いＮｏ４のアリルトリメトキシシランで処理した比
較例４と比較しても、Ｎｏ１〜Ｎｏ３の活性が数倍高い
ことが判る。
【００３２】《回分反応試験》実施例１〜３の各固定化
リパーゼの中で、Ｎｏ１のγ−メタクリロキシプロピル
トリメトキシシランで処理を行った担体（実施例１）に
ついて繰り返し回分反応を３０回行った。更に比較例と
して、表面処理を行っていない担体及び比較例４〜９の
各固定化リ−パゼの中でＮｏ４のアリルトリメトキシシ
ランで処理を行った担体（比較例４）についても同様に
繰り返し回分反応を行った。本実施例と比較例及び未処
理の例について回分反応回数（回）と活性（Ｕ／ｇ）の
関係を合わせて図２に示す。
リパーゼの中で、Ｎｏ１のγ−メタクリロキシプロピル
トリメトキシシランで処理を行った担体（実施例１）に
ついて繰り返し回分反応を３０回行った。更に比較例と
して、表面処理を行っていない担体及び比較例４〜９の
各固定化リ−パゼの中でＮｏ４のアリルトリメトキシシ
ランで処理を行った担体（比較例４）についても同様に
繰り返し回分反応を行った。本実施例と比較例及び未処
理の例について回分反応回数（回）と活性（Ｕ／ｇ）の
関係を合わせて図２に示す。
【００３３】図２のＡで示す本実施例の担体は回分数１
０回程度までは活性がやや低下したが、以後繰り返し回
分反応を３０回行っても活性の低下は微小であったのに
対して、Ｎｏ４のアリルトリメトキシシランで処理を行
った比較例の担体と未処理の担体は活性自体が当初から
小さく、かつ、繰り返し回分反応を行うことによって活
性が急激に低下していることが判る。
０回程度までは活性がやや低下したが、以後繰り返し回
分反応を３０回行っても活性の低下は微小であったのに
対して、Ｎｏ４のアリルトリメトキシシランで処理を行
った比較例の担体と未処理の担体は活性自体が当初から
小さく、かつ、繰り返し回分反応を行うことによって活
性が急激に低下していることが判る。
【００３４】次に、実施例１〜３で用いたカオリナイト
系酵素固定化用担体と、他の無機質担体として市販のガ
ラスビーズ（粒径５００μｍ）に実施例１から３と同様
の処理方法で本発明にかかるＮｏ１のγ−メタクリロキ
シプロピルトリメトキシシランと、比較例としてのＮｏ
４のアリルトリメトキシシラン剤をそれぞれ結合させ、
リパ−ゼの固定化及び実施例１〜３と同様な反応系によ
るエステル化反応を行った。表２に未処理の担体と本発
明及び比較例にかかる各担体の蛋白吸着量（ｍｇ／ｇ）
及び初期活性（Ｕ／ｇ）並びに初期活性を吸着蛋白量当
りの活性で示した比活性（Ｕ／ｍｇ）の結果を示す。
系酵素固定化用担体と、他の無機質担体として市販のガ
ラスビーズ（粒径５００μｍ）に実施例１から３と同様
の処理方法で本発明にかかるＮｏ１のγ−メタクリロキ
シプロピルトリメトキシシランと、比較例としてのＮｏ
４のアリルトリメトキシシラン剤をそれぞれ結合させ、
リパ−ゼの固定化及び実施例１〜３と同様な反応系によ
るエステル化反応を行った。表２に未処理の担体と本発
明及び比較例にかかる各担体の蛋白吸着量（ｍｇ／ｇ）
及び初期活性（Ｕ／ｇ）並びに初期活性を吸着蛋白量当
りの活性で示した比活性（Ｕ／ｍｇ）の結果を示す。
【００３５】
【表２】
【００３６】表２によれば、本発明の例は、比較例及び
未処理の例に比べて担体に吸着した蛋白量が特に多くな
くても、初期活性が非常に高いという結果が得られた。
例えばカオリナイト系酵素固定化用担体を使用した場
合、蛋白吸着量そのものは未処理の例が３９．５ｍｇ／
ｇ、比較例が３９．１ｍｇ／ｇ、本発明の例が３３．２
ｍｇ／ｇであって、未処理の例及び比較例が多いが、初
期活性はそれぞれ、２５４Ｕ／ｇ、３４８Ｕ／ｇ、８７
３Ｕ／ｇであって、本発明の例が数倍高い値を示してお
り、比活性を示すとそれぞれ、６．４Ｕ／ｍｇ８．９Ｕ
／ｍｇ、２６．３Ｕ／ｍｇとなり本発明の例が圧倒的に
高い値を示している。
未処理の例に比べて担体に吸着した蛋白量が特に多くな
くても、初期活性が非常に高いという結果が得られた。
例えばカオリナイト系酵素固定化用担体を使用した場
合、蛋白吸着量そのものは未処理の例が３９．５ｍｇ／
ｇ、比較例が３９．１ｍｇ／ｇ、本発明の例が３３．２
ｍｇ／ｇであって、未処理の例及び比較例が多いが、初
期活性はそれぞれ、２５４Ｕ／ｇ、３４８Ｕ／ｇ、８７
３Ｕ／ｇであって、本発明の例が数倍高い値を示してお
り、比活性を示すとそれぞれ、６．４Ｕ／ｍｇ８．９Ｕ
／ｍｇ、２６．３Ｕ／ｍｇとなり本発明の例が圧倒的に
高い値を示している。
【００３７】更に、無機質担体としてガラスビーズを用
いた場合の本発明の例でも同様に蛋白吸着量そのものは
未処理の例や比較例に比較して少なくても、初期活性は
１５０Ｕ／ｇと未処理の例や比較例より数倍高い値を示
している。そして、比活性は２６．３Ｕ／ｍｇと圧倒的
に高い値を示している。このガラスビーズを用いた場合
の本発明の例の比活性２６．３Ｕ／ｍｇはカオリナイト
系酵素固定化用担体を用いた場合の本発明の例の比活性
と同様の値を示しており、母体となる担体の種類にかか
わらず、本発明にかかるカルボン酸エステル結合を有す
るカップリング剤を結合させることにより、担体に吸着
した蛋白量が特に多くなくても活性が非常に高くなるこ
とが判る。即ち、ガラスビーズはカオリナイト系酵素固
定化用担体に比較して、活性の絶対値は低いものの、比
活性は同一の値であって、未処理の例や比較例に比して
同様に非常に高い比活性を示しており、カルボン酸エス
テル結合を有するシランカップリング剤のリパ−ゼとの
結合効果は同様に優れていることが判る。よって、本発
明は無機質担体に限定はなく、どのようなものであって
も前記した作用効果を泰することが判る。
いた場合の本発明の例でも同様に蛋白吸着量そのものは
未処理の例や比較例に比較して少なくても、初期活性は
１５０Ｕ／ｇと未処理の例や比較例より数倍高い値を示
している。そして、比活性は２６．３Ｕ／ｍｇと圧倒的
に高い値を示している。このガラスビーズを用いた場合
の本発明の例の比活性２６．３Ｕ／ｍｇはカオリナイト
系酵素固定化用担体を用いた場合の本発明の例の比活性
と同様の値を示しており、母体となる担体の種類にかか
わらず、本発明にかかるカルボン酸エステル結合を有す
るカップリング剤を結合させることにより、担体に吸着
した蛋白量が特に多くなくても活性が非常に高くなるこ
とが判る。即ち、ガラスビーズはカオリナイト系酵素固
定化用担体に比較して、活性の絶対値は低いものの、比
活性は同一の値であって、未処理の例や比較例に比して
同様に非常に高い比活性を示しており、カルボン酸エス
テル結合を有するシランカップリング剤のリパ−ゼとの
結合効果は同様に優れていることが判る。よって、本発
明は無機質担体に限定はなく、どのようなものであって
も前記した作用効果を泰することが判る。
【００３８】
【発明の効果】以上詳細に説明したように本実施例にか
かるカルボン酸エステル結合を有するシランカップリン
グ剤を結合した担体は、未処理及び他のシランカップリ
ング剤を結合した担体と比較して蛋白吸着量に対する活
性（比活性）が数倍高い上、繰り返し回分反応において
も活性低下が非常に少なく、長期間にわたる使用が可能
という効果が得られた。
かるカルボン酸エステル結合を有するシランカップリン
グ剤を結合した担体は、未処理及び他のシランカップリ
ング剤を結合した担体と比較して蛋白吸着量に対する活
性（比活性）が数倍高い上、繰り返し回分反応において
も活性低下が非常に少なく、長期間にわたる使用が可能
という効果が得られた。
【図１】本実施例と比較例及び未処理の担体の蛋白吸着
量と初期活性の関係を示すグラフ。
量と初期活性の関係を示すグラフ。
【図２】本実施例と比較例及び未処理の担体の繰り返し
反応における回分反応回数と活性の変化を示すグラフ。
反応における回分反応回数と活性の変化を示すグラフ。
Claims (7)
- 【請求項１】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させたことを特徴とする酵
素固定化用担体。 - 【請求項２】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させたことにより、リパー
ゼを担持する担体を得たことを特徴とする酵素固定化用
担体。 - 【請求項３】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤がシランカップリング剤である請求項１又は２
記載の酵素固定化用担体。 - 【請求項４】 カルボン酸エステル結合を有するシラン
カップリング剤が一般式ＲＣＯＯ（ＣＨ2）ｎＳｉＲ’3
（Ｒは有機官能基，Ｒ’は低級アルコキシ、フェノキ
シ、ハロゲンからなる群から選んだ基、ｎは整数）であ
る請求項３記載の酵素固定化用担体。 - 【請求項５】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤として、γ−メタクリロキシプロピルトリメト
キシシラン、γ−アセトキシプロピルトリメトキシシラ
ン、γ−アクリロキシプロピルトリメトキシシランの何
れか１種のシランカップリング剤を用いた請求項３又は
４記載の酵素固定化用担体。 - 【請求項６】 無機質担体として、カオリナイト系酵素
固定化用担体，多孔質ガラス，ベントナイト，シリカゲ
ル，アルミナ，シリカ，シリカ−アルミナヒドロキシア
パタイト，リン酸カルシウムゲル等のシランカップリン
グ剤と結合可能な官能基を有する担体を用いた請求項
１，２，３，４又は５記載の酵素固定化用担体。 - 【請求項７】 カルボン酸エステル結合を有するカップ
リング剤を無機質担体に結合させた後、所定の濃度のリ
パーゼ溶液に無機質担体を混合して撹拌し、濾過，乾燥
することにより、リパーゼ蛋白に含まれる官能基をカル
ボン酸エステルと結合させたことを特徴とする固定化リ
パ−ゼ。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8157619A JP2862509B2 (ja) | 1996-05-28 | 1996-05-28 | リパーゼ固定化用担体及び固定化リパーゼ |
| US08/847,512 US6004786A (en) | 1996-05-28 | 1997-04-24 | Inorganic carrier containing bound silane coupling agent having carboxylic-ester group for immobilizing lipase |
| GB9708308A GB2313597B (en) | 1996-05-28 | 1997-04-24 | Enzyme immobilizing carrier and immobilized lipase |
| CH01089/97A CH692150A5 (fr) | 1996-05-28 | 1997-05-07 | Support d'immobilisation d'enzymes et lipase immobilisée. |
| NL1006056A NL1006056C2 (nl) | 1996-05-28 | 1997-05-14 | Enzym-immobiliserende drager en geïmmobiliseerd lipase. |
| FR9706154A FR2749320B1 (fr) | 1996-05-28 | 1997-05-21 | Support d'immobilisation d'enzyme et lipase immobilisee |
| DE19722374A DE19722374C2 (de) | 1996-05-28 | 1997-05-28 | Enzym-immobilisierender Träger und immobilisierte Lipase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8157619A JP2862509B2 (ja) | 1996-05-28 | 1996-05-28 | リパーゼ固定化用担体及び固定化リパーゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09313179A true JPH09313179A (ja) | 1997-12-09 |
| JP2862509B2 JP2862509B2 (ja) | 1999-03-03 |
Family
ID=15653694
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8157619A Expired - Lifetime JP2862509B2 (ja) | 1996-05-28 | 1996-05-28 | リパーゼ固定化用担体及び固定化リパーゼ |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6004786A (ja) |
| JP (1) | JP2862509B2 (ja) |
| CH (1) | CH692150A5 (ja) |
| DE (1) | DE19722374C2 (ja) |
| FR (1) | FR2749320B1 (ja) |
| GB (1) | GB2313597B (ja) |
| NL (1) | NL1006056C2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2773170A1 (fr) * | 1997-12-31 | 1999-07-02 | Ase & Bio Soc Civ | Enzymes immobilisees sur un support a base d'alumine, leurs procedes de preparation et leurs applications |
| JP2002536422A (ja) * | 1999-02-12 | 2002-10-29 | バイオストリーム インコーポレイテッド | 薬物輸送用マトリックス、ならびにその作成方法および使用方法 |
| JP2007010469A (ja) * | 2005-06-30 | 2007-01-18 | Fujifilm Holdings Corp | バイオセンサーを用いた測定方法 |
| KR100916151B1 (ko) * | 2004-12-14 | 2009-09-08 | (주)아모레퍼시픽 | 키토산-리파아제 접합체를 포집한 메조 포러스 실리카복합 분체 및 이의 제조 방법 |
| WO2010110435A1 (ja) | 2009-03-27 | 2010-09-30 | 国立大学法人岡山大学 | 有機・無機複合材料及びその製造方法 |
| JP2011523356A (ja) * | 2008-05-09 | 2011-08-11 | エアバス オペレーションズ リミテッド | 固定化酵素あるいは防氷性を有するタンパク質を持った表面 |
| KR20200094473A (ko) * | 2019-01-30 | 2020-08-07 | 성신여자대학교 연구 산학협력단 | 하이드록시아파타이트에 단백질이 공유 결합된 생체접합용 복합체 및 이의 제조방법 |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7022522B2 (en) | 1998-11-13 | 2006-04-04 | Limin Guan | Macroporous polymer scaffold containing calcium phosphate particles |
| DE19901925A1 (de) * | 1999-01-19 | 2000-07-27 | Aventis Res & Tech Gmbh & Co | Verfahren zur Trennung optischer Isomerer durch simultane Durchführung einer enzymatischen Reaktion und einer chromatographischen Trennung |
| DE10041809A1 (de) * | 2000-08-25 | 2002-03-07 | Giesing Michael | Arrays immobilisierter Biomoleküle, deren Herstellung und Verwendung |
| CA2445746C (en) * | 2001-04-30 | 2012-09-18 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers |
| US6808908B2 (en) * | 2001-05-30 | 2004-10-26 | Porex Technologies Corporation | Functionalized porous substrate for binding chemical and biological moieties |
| AU2003257211A1 (en) * | 2002-08-09 | 2004-02-25 | The Procter And Gamble Company | A process for immobilizing an enzyme |
| US7344491B1 (en) | 2003-11-26 | 2008-03-18 | Nanobiomagnetics, Inc. | Method and apparatus for improving hearing |
| US7723311B2 (en) * | 2003-06-18 | 2010-05-25 | Nanobiomagnetics, Inc. | Delivery of bioactive substances to target cells |
| US8651113B2 (en) * | 2003-06-18 | 2014-02-18 | Swr&D Inc. | Magnetically responsive nanoparticle therapeutic constructs and methods of making and using |
| US7964380B2 (en) * | 2005-01-21 | 2011-06-21 | Argylia Technologies | Nanoparticles for manipulation of biopolymers and methods of thereof |
| ES2319059B1 (es) * | 2007-09-07 | 2010-02-12 | Universidad Complutense De Madrid | Brushita como sistema de inmovilizacion de enzimas y su uso en biosensores amperometricos biocompatibles. |
| CN101883485A (zh) * | 2007-10-02 | 2010-11-10 | 世界矿物公司 | 经由包括功能颗粒载体材料的表面处理的方法而增强的保留能力和由其制得的功能颗粒载体材料 |
| FR2947564B1 (fr) * | 2009-07-06 | 2011-07-22 | Univ Paris Curie | Catalyseur enzymatique heterogene, procede de preparation et utilisation |
| EP3444328A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-20 | The Procter & Gamble Company | Cleaning agent |
| CA3071086A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | The Procter & Gamble Company | Cleaning agent |
| EP3444337A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-20 | The Procter & Gamble Company | Method of cleaning |
| WO2019035037A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | The Procter & Gamble Company | CLEANING KIT |
| CN109422270B (zh) * | 2017-08-29 | 2020-10-02 | 湖南大学 | 介孔化膨润土及其制备方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3519538A (en) * | 1968-09-05 | 1970-07-07 | Corning Glass Works | Chemically coupled enzymes |
| DE2758507C3 (de) * | 1977-12-28 | 1981-05-27 | Byk-Mallinckrodt Chemische Produkte Gmbh, 6057 Dietzenbach | Stabilisierte biochemische Präparate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
| JPS608745B2 (ja) * | 1978-02-14 | 1985-03-05 | 三洋化成工業株式会社 | 免疫活性物質−つや消しガラス複合体，その製造法及び該複合体を含有してなる測定試薬 |
| EP0003923B1 (fr) * | 1978-02-16 | 1982-10-20 | Rhone-Poulenc Specialites Chimiques | Complexes support-enzyme et leur procédé de préparation |
| JPS5532357A (en) * | 1978-08-29 | 1980-03-07 | Matsushita Electric Works Ltd | Dimming device |
| DE2928314A1 (de) * | 1979-07-13 | 1981-02-12 | Ruhrchemie Ag | Verfahren zur herstellung von aldehyden |
| CA1130228A (en) * | 1980-05-21 | 1982-08-24 | Chiang-Chang Liao | Support matrix for amino-containing biologically active substances |
| DE3172131D1 (en) * | 1980-06-27 | 1985-10-10 | Akzo Nv | Porous inorganic support material coated with an organic stationary phase, for use in chromatography, and process for its preparation |
| JPS59122429A (ja) * | 1982-12-28 | 1984-07-14 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | 生物学的物質の担体用磁性粒子 |
| DK638688D0 (da) * | 1988-11-16 | 1988-11-16 | Novo Industri As | Partikelformet immobiliseret lipase-praeparat, fremgangsmaade til fremstilling deraf og anvendelse deraf |
| JPH0451894A (ja) * | 1990-06-15 | 1992-02-20 | Toto Ltd | 酵素固定化担体 |
| JPH05219952A (ja) * | 1992-02-14 | 1993-08-31 | Tdk Corp | 酵素固定用担体 |
-
1996
- 1996-05-28 JP JP8157619A patent/JP2862509B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-04-24 GB GB9708308A patent/GB2313597B/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-04-24 US US08/847,512 patent/US6004786A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-07 CH CH01089/97A patent/CH692150A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1997-05-14 NL NL1006056A patent/NL1006056C2/nl not_active IP Right Cessation
- 1997-05-21 FR FR9706154A patent/FR2749320B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-28 DE DE19722374A patent/DE19722374C2/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2773170A1 (fr) * | 1997-12-31 | 1999-07-02 | Ase & Bio Soc Civ | Enzymes immobilisees sur un support a base d'alumine, leurs procedes de preparation et leurs applications |
| WO1999035250A1 (fr) * | 1997-12-31 | 1999-07-15 | Societe Civile Ase & Bio | Enzymes immobilisees actives sur un support a base d'alumine, leurs procedes de preparation et leurs applications |
| JP2002536422A (ja) * | 1999-02-12 | 2002-10-29 | バイオストリーム インコーポレイテッド | 薬物輸送用マトリックス、ならびにその作成方法および使用方法 |
| JP4812167B2 (ja) * | 1999-02-12 | 2011-11-09 | モレキュラー インサイト ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | 薬物輸送用マトリックス、ならびにその作成方法および使用方法 |
| KR100916151B1 (ko) * | 2004-12-14 | 2009-09-08 | (주)아모레퍼시픽 | 키토산-리파아제 접합체를 포집한 메조 포러스 실리카복합 분체 및 이의 제조 방법 |
| JP2007010469A (ja) * | 2005-06-30 | 2007-01-18 | Fujifilm Holdings Corp | バイオセンサーを用いた測定方法 |
| JP4580291B2 (ja) * | 2005-06-30 | 2010-11-10 | 富士フイルム株式会社 | バイオセンサーを用いた測定方法 |
| JP2011523356A (ja) * | 2008-05-09 | 2011-08-11 | エアバス オペレーションズ リミテッド | 固定化酵素あるいは防氷性を有するタンパク質を持った表面 |
| WO2010110435A1 (ja) | 2009-03-27 | 2010-09-30 | 国立大学法人岡山大学 | 有機・無機複合材料及びその製造方法 |
| US8841105B2 (en) | 2009-03-27 | 2014-09-23 | National University Corporation Okayama University | Organic-inorganic composite material and process for producing same |
| KR20200094473A (ko) * | 2019-01-30 | 2020-08-07 | 성신여자대학교 연구 산학협력단 | 하이드록시아파타이트에 단백질이 공유 결합된 생체접합용 복합체 및 이의 제조방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL1006056A1 (nl) | 1997-12-03 |
| DE19722374A1 (de) | 1997-12-04 |
| FR2749320B1 (fr) | 2000-09-29 |
| CH692150A5 (fr) | 2002-02-28 |
| NL1006056C2 (nl) | 1999-05-18 |
| GB9708308D0 (en) | 1997-06-18 |
| US6004786A (en) | 1999-12-21 |
| GB2313597A (en) | 1997-12-03 |
| GB2313597B (en) | 2000-11-08 |
| FR2749320A1 (fr) | 1997-12-05 |
| JP2862509B2 (ja) | 1999-03-03 |
| DE19722374C2 (de) | 1998-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH09313179A (ja) | 酵素固定化用担体及び固定化リパーゼ | |
| de Oliveira et al. | Immobilisation studies and catalytic properties of microbial lipase onto styrene–divinylbenzene copolymer | |
| US3802997A (en) | Method of stabilizing enzymes | |
| JP2873251B2 (ja) | 粒状固定化リパーゼ調製品、その製法およびその使用 | |
| EP1042458B1 (en) | A process for immobilisation of enzymes | |
| EP0158909A2 (en) | Immobilized enzymes, processes for preparing same and use thereof | |
| US6582942B1 (en) | Immobilization of enzymes on particulate porous carriers for use in organic mediums | |
| US3930951A (en) | Bonding enzymes to porous inorganic carriers | |
| JPS5978687A (ja) | 固定化酵素配合体 | |
| Basri et al. | Immobilization of hydrophobic lipase derivatives on to organic polymer beads | |
| CN112980807B (zh) | 一种基于dna与氧化石墨烯和金属有机骨架材料间相互作用构建固定多酶系统的方法 | |
| CN1935994A (zh) | 一种有机基团功能化介孔分子筛酶固定化载体及其制备方法 | |
| JP2678341B2 (ja) | 固定化リパーゼ | |
| JP2000139459A (ja) | 超安定化酵素 | |
| Soares et al. | Intensification of lipase performance for long-term operation by immobilization on controlled pore silica in presence of polyethylene glycol | |
| CN108690842A (zh) | 海洋微生物脂肪酶ys2071的固定化方法 | |
| Zhang et al. | Template enhanced activity of lipase accommodated in siliceous mesocellular foams | |
| JPS61181376A (ja) | 固定化された生物学的活性化合物の製造方法 | |
| Sharma et al. | Study of immobilization of protease and sorption of bsa on cellulose, cellulose derivatives, and graft copolymers | |
| DE2605797A1 (de) | Immobilisiertes enzym und verfahren zu dessen herstellung | |
| Herdan et al. | Enantioselective hydrolysis of racemic esters using pig liver esterase | |
| JP3025947B2 (ja) | 乾燥固定化リパーゼ担体の製造方法 | |
| RU2204600C2 (ru) | Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы | |
| Topcular et al. | Immobilisation of horseradish peroxidase onto monodisperse poly (glycidyl methacrylate) microspheres | |
| WO1995033047A1 (en) | Method for reusing a carrier for lipase immobilization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071211 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101211 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101211 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131211 Year of fee payment: 15 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20141211 Year of fee payment: 16 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |