JPH09121852A - インターフェロン誘起酵素 - Google Patents
インターフェロン誘起酵素Info
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- JPH09121852A JPH09121852A JP8225793A JP22579396A JPH09121852A JP H09121852 A JPH09121852 A JP H09121852A JP 8225793 A JP8225793 A JP 8225793A JP 22579396 A JP22579396 A JP 22579396A JP H09121852 A JPH09121852 A JP H09121852A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6897—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids involving reporter genes operably linked to promoters
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 インターフェロンを誘起することのできる新
たな酵素を提供することを目的とする。 【解決手段】 （２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活
性のある酵素をコードするヒトＤＮＡの塩基配列より、
該酵素のアミノ酸配列が決定され、該アミノ酸配列は、
３６４個のアミノ酸残基からなる。
たな酵素を提供することを目的とする。 【解決手段】 （２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活
性のある酵素をコードするヒトＤＮＡの塩基配列より、
該酵素のアミノ酸配列が決定され、該アミノ酸配列は、
３６４個のアミノ酸残基からなる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はインターフェロン誘
起の（２′−５′）オリゴＡ合成酵素遺伝子、ｍＲＮ
Ａ、ｃＤＮＡ、および（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼ活性を保有する諸酵素に関する。
起の（２′−５′）オリゴＡ合成酵素遺伝子、ｍＲＮ
Ａ、ｃＤＮＡ、および（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼ活性を保有する諸酵素に関する。
【０００２】
【従来の技術】インターフェロンの生物学的影響の多く
は、ＩＦＮにさらされた細胞で新しく誘起されるｍＲＮ
Ａと蛋白とに仲介されるように見える（抄録：Ｒｅｖｅ
ｌ，１９８４；Ｌｅｂｌｅｕ ａｎｄ Ｃｏｎｔｅｎ
ｔ，１９８２：Ｂａｇｌｉｏｎｉａｎｄ Ｎｉｌｓｏ
ｎ，１９８３）。これらＩＦＮ−誘起蛋白質のうち二群
が特に重要である：１）翻訳調整諸酵素（ｄｓＲＮＡ依
存蛋白キナーゼおよび（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼ，（２′−５′）オリゴＡで活性化されたヌクレア
ーゼの２′−フォスフォ デイ エステラーゼ）及び
２）細胞表面諸抗原（ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｂ２−ミク
ログロブリン，ＨＬＡ−ＤＲ）．他の細胞内蛋白質や放
出蛋白質も又重要な役目を演ずるであろう（Ｗｅｉｌ
ｅｔ ａｌ，１９８３；Ｃｈｅｂａｔｈ ｅｔ ａｌ，
１９８３，Ｗａｌｌａｃｈ ｅｔ ａｌ，１９８３）。
ＨＬＡ諸遺伝子を例外として（Ｍａｌｉｓｓｅｎ ｅｔ
ａｌ，１９８２，Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ ｅｔ ａ
ｌ，１９８３），ＩＦＮ−誘起の諸蛋白質の構造と場合
によっては機能は不明であり、従ってそれに依って諸Ｉ
ＦＮが特定的にこれら諸遺伝子を活性化する機構も不明
である。これらの疑問に答えて、幾つかのＩＦＮ−誘起
遺伝子のｃＤＮＡが最近クローン化された（Ｃｈｅｂａ
ｔｈ ｅｔ ａｌ，１９８３；Ｍｅｒｌｉｎ ｅｔ ａ
ｌ，１９８３；Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ，１９８
４；Ｓａｍａｎｔａ ｅｔ ａｌ，１９８４）。特に、
人間の（２′−５′）オリゴＡシンセターゼをコードし
たｃＤＮＡと遺伝子が研究されて，その酵素はｄｓＲＮ
Ａ−誘起のものでＡＴＰをｐｐｐ（Ａ２′ｐＡ）ｎオリ
ゴマーに転換し（Ｋｅｒｒ ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，１９
７８），その代わりに潜在のＲＮａｓｅ Ｆに結合して
活性化する（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔａｌ，１９７８）。
この（２′−５′）オリゴＡシンセターゼは、これら三
型のヒトＩＦＮ総てで細胞内で強く誘起され、そしてそ
の増加は、ＩＦＮ活性の優れた指標である（Ｗａｌｌａ
ｃｈ ｅｔ ａｌ，１９８２）．この酵素は造血細胞の
分化中に誘起され、ＩＦＮ−βのオートクリン分泌を指
示する（Ｙａｒｄｅｎ ｅｔ ａｌ，１９８４）．この
酵素は後に胚の同調繊維芽細胞のＳ期にも同様に誘起さ
れる（Ｗｅｌｌｓ ａｎｄ Ｍａｌｌｕｃｃｉ，１９８
５）．この酵素活性は細胞生長が始まると低下し（Ｅｔ
ｉｅｎｎｅ−Ｓｍｅｋｅｎｓ ｅｔａｌ，１９８３；Ｃ
ｒｅａｓｅｙ ｅｔ ａｌ，１９８３）そして、ＩＦＮ
の反生長作用に関連しているように見える（Ｋｉｍｃｈ
ｉ ｅｔ ａｌ，１９８１）．（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼ又は（２′−５′）オリゴＡ−誘起のＲＮ
ａｓｅＦ欠乏は、これがＩＦＮのウイルス生長抑制の唯
一の機構では多分無いが（Ｌｅｂｌｅｕ ａｎｄ Ｃｏ
ｎｔｅｎｔ，１９８２），諸ＩＮＦの抗ウイルス効果の
部分消滅と関連づけられて来た（Ｓａｌｚｂｅｒｇ ｅ
ｔ ａｌ，１９８３；Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，１
９８１）．
は、ＩＦＮにさらされた細胞で新しく誘起されるｍＲＮ
Ａと蛋白とに仲介されるように見える（抄録：Ｒｅｖｅ
ｌ，１９８４；Ｌｅｂｌｅｕ ａｎｄ Ｃｏｎｔｅｎ
ｔ，１９８２：Ｂａｇｌｉｏｎｉａｎｄ Ｎｉｌｓｏ
ｎ，１９８３）。これらＩＦＮ−誘起蛋白質のうち二群
が特に重要である：１）翻訳調整諸酵素（ｄｓＲＮＡ依
存蛋白キナーゼおよび（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼ，（２′−５′）オリゴＡで活性化されたヌクレア
ーゼの２′−フォスフォ デイ エステラーゼ）及び
２）細胞表面諸抗原（ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｂ２−ミク
ログロブリン，ＨＬＡ−ＤＲ）．他の細胞内蛋白質や放
出蛋白質も又重要な役目を演ずるであろう（Ｗｅｉｌ
ｅｔ ａｌ，１９８３；Ｃｈｅｂａｔｈ ｅｔ ａｌ，
１９８３，Ｗａｌｌａｃｈ ｅｔ ａｌ，１９８３）。
ＨＬＡ諸遺伝子を例外として（Ｍａｌｉｓｓｅｎ ｅｔ
ａｌ，１９８２，Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ ｅｔ ａ
ｌ，１９８３），ＩＦＮ−誘起の諸蛋白質の構造と場合
によっては機能は不明であり、従ってそれに依って諸Ｉ
ＦＮが特定的にこれら諸遺伝子を活性化する機構も不明
である。これらの疑問に答えて、幾つかのＩＦＮ−誘起
遺伝子のｃＤＮＡが最近クローン化された（Ｃｈｅｂａ
ｔｈ ｅｔ ａｌ，１９８３；Ｍｅｒｌｉｎ ｅｔ ａ
ｌ，１９８３；Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ，１９８
４；Ｓａｍａｎｔａ ｅｔ ａｌ，１９８４）。特に、
人間の（２′−５′）オリゴＡシンセターゼをコードし
たｃＤＮＡと遺伝子が研究されて，その酵素はｄｓＲＮ
Ａ−誘起のものでＡＴＰをｐｐｐ（Ａ２′ｐＡ）ｎオリ
ゴマーに転換し（Ｋｅｒｒ ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，１９
７８），その代わりに潜在のＲＮａｓｅ Ｆに結合して
活性化する（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔａｌ，１９７８）。
この（２′−５′）オリゴＡシンセターゼは、これら三
型のヒトＩＦＮ総てで細胞内で強く誘起され、そしてそ
の増加は、ＩＦＮ活性の優れた指標である（Ｗａｌｌａ
ｃｈ ｅｔ ａｌ，１９８２）．この酵素は造血細胞の
分化中に誘起され、ＩＦＮ−βのオートクリン分泌を指
示する（Ｙａｒｄｅｎ ｅｔ ａｌ，１９８４）．この
酵素は後に胚の同調繊維芽細胞のＳ期にも同様に誘起さ
れる（Ｗｅｌｌｓ ａｎｄ Ｍａｌｌｕｃｃｉ，１９８
５）．この酵素活性は細胞生長が始まると低下し（Ｅｔ
ｉｅｎｎｅ−Ｓｍｅｋｅｎｓ ｅｔａｌ，１９８３；Ｃ
ｒｅａｓｅｙ ｅｔ ａｌ，１９８３）そして、ＩＦＮ
の反生長作用に関連しているように見える（Ｋｉｍｃｈ
ｉ ｅｔ ａｌ，１９８１）．（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼ又は（２′−５′）オリゴＡ−誘起のＲＮ
ａｓｅＦ欠乏は、これがＩＦＮのウイルス生長抑制の唯
一の機構では多分無いが（Ｌｅｂｌｅｕ ａｎｄ Ｃｏ
ｎｔｅｎｔ，１９８２），諸ＩＮＦの抗ウイルス効果の
部分消滅と関連づけられて来た（Ｓａｌｚｂｅｒｇ ｅ
ｔ ａｌ，１９８３；Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，１
９８１）．
【０００３】この（２′−５′）オリゴＡヌクレオチド
は、多くの真核生物細胞で検出され、バクテリアでさえ
見出された（Ｌａｕｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ，１９８
４）。そして、この合成酵素は多分広範囲に分布したも
のであろう。この酵素はマウスから（Ｄｏｕｇｈｅｒｔ
ｙ ｅｔ ａｌ，１９８０）及びヒト細胞から（Ｙａｎ
ｄ ｅｔ ａｌ，１９８１；Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ，
１９８１）純化され、大小二型の酵素が観察されている
が（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ，１９８２；Ｓｔ，Ｌａｕ
ｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ，１９８３）、構造は未解明であ
る。
は、多くの真核生物細胞で検出され、バクテリアでさえ
見出された（Ｌａｕｒｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ，１９８
４）。そして、この合成酵素は多分広範囲に分布したも
のであろう。この酵素はマウスから（Ｄｏｕｇｈｅｒｔ
ｙ ｅｔ ａｌ，１９８０）及びヒト細胞から（Ｙａｎ
ｄ ｅｔ ａｌ，１９８１；Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ，
１９８１）純化され、大小二型の酵素が観察されている
が（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ，１９８２；Ｓｔ，Ｌａｕ
ｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ，１９８３）、構造は未解明であ
る。
【０００４】ＩＦＮにさらされた細胞内に誘起された
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ（Ｈｏｂａｎｅｓ
ｓｉａｎ ｅｔ ａｌ，１９７７；Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅ
ｉｎｅｔ ａｌ，１９７８）は種々の異常な特性を持
つ。それの主な活性は、ＡＴＰから５′三燐酸化短オリ
ゴＡ鎖を合成する事である（主として２連体から５連
体、最長１５連Ａの）が、他のＲＮＡ重合酵素と違っ
て、オリゴＡのアデニン化物の２′ＯＨに特定的にアデ
ニン化物又はもう１つのヌクレオチドを添加（Ｋｅｒｒ
ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，１９７８；Ｓａｍａｎｔａ ｅｔ
ａｌ，１９８０）するか、ＮＡＤのようなフリー２′
ＯＨのアデニン化物を持った他の（オリゴ）又はヌクレ
オチド（Ｂａｌｌ，１９８０）又は、ｔＲＮＡにさえ
（Ｆｅｒｂａｓｅｔ ａｌ，１９８１）添加する。活性
を保つためには、この酵素は、最短５０ｂｐ以上のＲＮ
Ａ複鎖部分と結合しなければならない（Ｍｉｎｋｓ ｅ
ｔ ａｌ，１９７９）、従って、幾つかの結合部分を所
有しなければならない：ヌクレオチド三燐酸用、２′Ｏ
Ｈアデノシン ポリヌクレオチド用および複鎖ＲＮＡ
用。この酵素は、２′，５′ＡＤＦ−セファロース（Ｊ
ｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ，１９８０）、ポリ（ｒ
Ｉ）（ｒＣ）−アガロース（Ｈｏｒａｎｅｓｓｉａｎ
ｅｔ ａｌ，１９７７）及びＣｉｂａｃｒｏｎブルーセ
ファロース（Ｒｅｖｅｌｅｔ ａｌ １９８１）に吸着
する。細胞の違いによって、この（２′−５′）オリゴ
シンセターゼ活性はサイトゾル（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａ
ｌ，１９８１）中で見られたり、リボソーム塩洗出物
（Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ，１９８０）で見ら
れたり、核液中にあったり（Ｎｉｌｓｅｎ ｅｔ ａ
ｌ，１９８２ｂ）、核膜にさえ多量に見出されている。
細胞ＲＮＡはこの酵素の活性化に際し、ポリ（ｒＩ）
（ｒｃ）に代行し得る事は注意すべきであり（Ｒｅｖｅ
ｌ ｅｔａｌ，１９８０）、このシンセターゼは、Ｈｎ
ＲＮＡの加工にさえ役割を持つかも知れない（Ｎｉｅｌ
ｓｅｎ ｅｔ ａｌ，１９８２ａ）．（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼの幾らかは細胞質膜に結合し、出芽
ウイルス粒に包含される（Ｗａｌｌａｃｈ ａｎｄ Ｒ
ｅｖｅｌ，１９８０）．このような複雑な相互作用は、
（２′−５′）オリゴＡシステムの局所的作用を確保し
て（Ｎｉｌｓｅｎａｎｄ Ｂｅｇｌｉｏｎｉ，１９８
３）正常細胞、ウイルス感染細胞で指摘される複数の役
割を説明可能にする。この合成酵素の含量は、ＩＦＮ−
処理細胞の全蛋白質の０．１％以下であり、その分子構
造は直接に決定できなかった。
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ（Ｈｏｂａｎｅｓ
ｓｉａｎ ｅｔ ａｌ，１９７７；Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅ
ｉｎｅｔ ａｌ，１９７８）は種々の異常な特性を持
つ。それの主な活性は、ＡＴＰから５′三燐酸化短オリ
ゴＡ鎖を合成する事である（主として２連体から５連
体、最長１５連Ａの）が、他のＲＮＡ重合酵素と違っ
て、オリゴＡのアデニン化物の２′ＯＨに特定的にアデ
ニン化物又はもう１つのヌクレオチドを添加（Ｋｅｒｒ
ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，１９７８；Ｓａｍａｎｔａ ｅｔ
ａｌ，１９８０）するか、ＮＡＤのようなフリー２′
ＯＨのアデニン化物を持った他の（オリゴ）又はヌクレ
オチド（Ｂａｌｌ，１９８０）又は、ｔＲＮＡにさえ
（Ｆｅｒｂａｓｅｔ ａｌ，１９８１）添加する。活性
を保つためには、この酵素は、最短５０ｂｐ以上のＲＮ
Ａ複鎖部分と結合しなければならない（Ｍｉｎｋｓ ｅ
ｔ ａｌ，１９７９）、従って、幾つかの結合部分を所
有しなければならない：ヌクレオチド三燐酸用、２′Ｏ
Ｈアデノシン ポリヌクレオチド用および複鎖ＲＮＡ
用。この酵素は、２′，５′ＡＤＦ−セファロース（Ｊ
ｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ，１９８０）、ポリ（ｒ
Ｉ）（ｒＣ）−アガロース（Ｈｏｒａｎｅｓｓｉａｎ
ｅｔ ａｌ，１９７７）及びＣｉｂａｃｒｏｎブルーセ
ファロース（Ｒｅｖｅｌｅｔ ａｌ １９８１）に吸着
する。細胞の違いによって、この（２′−５′）オリゴ
シンセターゼ活性はサイトゾル（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａ
ｌ，１９８１）中で見られたり、リボソーム塩洗出物
（Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ，１９８０）で見ら
れたり、核液中にあったり（Ｎｉｌｓｅｎ ｅｔ ａ
ｌ，１９８２ｂ）、核膜にさえ多量に見出されている。
細胞ＲＮＡはこの酵素の活性化に際し、ポリ（ｒＩ）
（ｒｃ）に代行し得る事は注意すべきであり（Ｒｅｖｅ
ｌ ｅｔａｌ，１９８０）、このシンセターゼは、Ｈｎ
ＲＮＡの加工にさえ役割を持つかも知れない（Ｎｉｅｌ
ｓｅｎ ｅｔ ａｌ，１９８２ａ）．（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼの幾らかは細胞質膜に結合し、出芽
ウイルス粒に包含される（Ｗａｌｌａｃｈ ａｎｄ Ｒ
ｅｖｅｌ，１９８０）．このような複雑な相互作用は、
（２′−５′）オリゴＡシステムの局所的作用を確保し
て（Ｎｉｌｓｅｎａｎｄ Ｂｅｇｌｉｏｎｉ，１９８
３）正常細胞、ウイルス感染細胞で指摘される複数の役
割を説明可能にする。この合成酵素の含量は、ＩＦＮ−
処理細胞の全蛋白質の０．１％以下であり、その分子構
造は直接に決定できなかった。
【０００５】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ含量
測定値をｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎｖｉｖｏで、細胞が
ＩＦＮにさらされ、それに反応しているか否かの決定に
使用できる。この測定は、未知の溶液におけるＩＦＮの
検定に、細胞を刻溶液にさらし、（２′−５′）オリゴ
Ａシンセターゼ含量を決定する事で使用することができ
る（Ｒｅｖｅ１ ｅｔ ａｌ．，米国特許４，３０２，
５３３）。この測定は人間を含む総ての生物でＩＦＮ生
産量が増したか否かを決めるのにも又使用できる。
測定値をｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎｖｉｖｏで、細胞が
ＩＦＮにさらされ、それに反応しているか否かの決定に
使用できる。この測定は、未知の溶液におけるＩＦＮの
検定に、細胞を刻溶液にさらし、（２′−５′）オリゴ
Ａシンセターゼ含量を決定する事で使用することができ
る（Ｒｅｖｅ１ ｅｔ ａｌ．，米国特許４，３０２，
５３３）。この測定は人間を含む総ての生物でＩＦＮ生
産量が増したか否かを決めるのにも又使用できる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ測定の臨床的反応 健康個体の末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）では（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼ含量が比較的に恒常である
ことがわかっている（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ ｅｔ ａ
ｌ，１９８１ｂ）。（２′−５′）オリゴＡシンセター
ゼの増加は、急性ウイルス感染患者（Ｓｃｈａｔｔｎｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１ｂ；Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄ
ｅｔ ａｌ．，１９８５）、持続性ウイルス感染（Ｗ
ａｌｌａｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８２）、自己免疫病
及びヤコブ−クロイツフェルト病のような感染病と見ら
れる幾つかの他の症候群（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ．，
１９８２）などに見られる。（２′−５′）オリゴＡシ
ンセターゼの基本含量は顆粒球では低いが、ウイルス感
染により大きく増量することがみられた（Ｓｃｈａｔｔ
ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４）。ＡＩＤＳ患者のＰ
ＢＭＣにおける（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ酵
素増加が最近報告された（Ｒｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１
９８５）。動物の場合、（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼ量の増加は速く、ＩＦＮの血中出現より恒常的で
ある（ｓｃｈａｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２
ａ）．（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ量は数週間
高水準を保つのに対してＩＦＮの最高値は短期的であ
る。
５′）オリゴＡシンセターゼ含量が比較的に恒常である
ことがわかっている（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ ｅｔ ａ
ｌ，１９８１ｂ）。（２′−５′）オリゴＡシンセター
ゼの増加は、急性ウイルス感染患者（Ｓｃｈａｔｔｎｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１ｂ；Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄ
ｅｔ ａｌ．，１９８５）、持続性ウイルス感染（Ｗ
ａｌｌａｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８２）、自己免疫病
及びヤコブ−クロイツフェルト病のような感染病と見ら
れる幾つかの他の症候群（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ．，
１９８２）などに見られる。（２′−５′）オリゴＡシ
ンセターゼの基本含量は顆粒球では低いが、ウイルス感
染により大きく増量することがみられた（Ｓｃｈａｔｔ
ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４）。ＡＩＤＳ患者のＰ
ＢＭＣにおける（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ酵
素増加が最近報告された（Ｒｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１
９８５）。動物の場合、（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼ量の増加は速く、ＩＦＮの血中出現より恒常的で
ある（ｓｃｈａｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２
ａ）．（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ量は数週間
高水準を保つのに対してＩＦＮの最高値は短期的であ
る。
【０００７】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの造
血細胞分化中の増加は、ＩＦＮ−βのオートクリン分泌
の結果である（Ｙａｒｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８
４）。急性白血病で多数の芽細胞と共に（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼ水準の低下が見られる（Ｗａｌｌ
ａｃｈ ｅｔ ａｌ．１９８２；Ｓｃｈａｔｔｎｅｒｅ
ｔ ａｌ，１９８２ｂ）．（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼ測定の重要な応用分野の他の１つは、ＩＦＮ治
療患者の監視である。臨床変化の他に、ＰＢＭＣの
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ水準を測定し、患
者のＩＦＮ投与への反応を決定することができ、この全
身投与の場合、ＩＦＮ−αの投与でもＩＦＮ−βの投与
でも酵素水準は５−１０倍の増大となる（ｓｃｈａｔｔ
ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１ａ，Ｓｃｈｏｅｎｆｅ
ｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８４）．他の、ＩＦＮ誘起の
諸活性又は諸分子の検定は、（２′−５′）オリゴＡシ
ンセターゼ酵素の検定と同様に使用可能であることは明
らかであるが、この方法が最も広く用いられている（Ｒ
ｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１９８５；Ｍｅｒｒｉｔｔ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８５）．これらの研究ではすべて、Ａ
ＴＰの（２′−５′）（Ａ）ｎオリゴマーへの転換を測
定する酵素的検定を用いている（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．，米国特許４，３０２，５３３）。
血細胞分化中の増加は、ＩＦＮ−βのオートクリン分泌
の結果である（Ｙａｒｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８
４）。急性白血病で多数の芽細胞と共に（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼ水準の低下が見られる（Ｗａｌｌ
ａｃｈ ｅｔ ａｌ．１９８２；Ｓｃｈａｔｔｎｅｒｅ
ｔ ａｌ，１９８２ｂ）．（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼ測定の重要な応用分野の他の１つは、ＩＦＮ治
療患者の監視である。臨床変化の他に、ＰＢＭＣの
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ水準を測定し、患
者のＩＦＮ投与への反応を決定することができ、この全
身投与の場合、ＩＦＮ−αの投与でもＩＦＮ−βの投与
でも酵素水準は５−１０倍の増大となる（ｓｃｈａｔｔ
ｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１ａ，Ｓｃｈｏｅｎｆｅ
ｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８４）．他の、ＩＦＮ誘起の
諸活性又は諸分子の検定は、（２′−５′）オリゴＡシ
ンセターゼ酵素の検定と同様に使用可能であることは明
らかであるが、この方法が最も広く用いられている（Ｒ
ｅａｄ ｅｔ ａｌ．，１９８５；Ｍｅｒｒｉｔｔ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８５）．これらの研究ではすべて、Ａ
ＴＰの（２′−５′）（Ａ）ｎオリゴマーへの転換を測
定する酵素的検定を用いている（Ｒｅｖｅｌ ｅｔ ａ
ｌ．，米国特許４，３０２，５３３）。
【０００８】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの検
定には、抗（２′−５′）オリゴＡシンセターゼペプチ
ド抗体を用いることができる。（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼのための抗体入手には、種々の（２′−
５′）オリゴＡ諸シンセターゼの全アミノ酸配列からペ
プチド配列を選び、内在（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼ分子への抗体誘起のための抗原に用いることがで
きる。兎に抗体を作らせる為に抗原ペプチドを皮下注射
した。抗体反応が最大となる迄促進注射を繰返した。
定には、抗（２′−５′）オリゴＡシンセターゼペプチ
ド抗体を用いることができる。（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼのための抗体入手には、種々の（２′−
５′）オリゴＡ諸シンセターゼの全アミノ酸配列からペ
プチド配列を選び、内在（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼ分子への抗体誘起のための抗原に用いることがで
きる。兎に抗体を作らせる為に抗原ペプチドを皮下注射
した。抗体反応が最大となる迄促進注射を繰返した。
【０００９】
【課題を解決するための手段】今回の発明は、（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼ活性のある１つの酵素をコ
ードするヒトＤＮＡに関するものである。ＤＮＡの型の
１つは図７Ａに示したヌクレオチド配列を持つ。他の型
のＤＮＡはＦｉｇｕｒｅ７Ａに示し、図７Ｂに示す９０
１−１５９０のヌクレオチド配列と重複する１−１３２
２のヌクレオチド配列を持つ。
５′）オリゴＡシンセターゼ活性のある１つの酵素をコ
ードするヒトＤＮＡに関するものである。ＤＮＡの型の
１つは図７Ａに示したヌクレオチド配列を持つ。他の型
のＤＮＡはＦｉｇｕｒｅ７Ａに示し、図７Ｂに示す９０
１−１５９０のヌクレオチド配列と重複する１−１３２
２のヌクレオチド配列を持つ。
【００１０】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性
を持つ１つの酵素は、図７Ａに示すアミノ酸配列を持
つ。（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性をもつも
う１つの酵素は、図７Ａに示す１−３６４のアミノ酸配
列を持ち、図７Ｂに示す２９０−４００のアミノ酸配列
と重複する。図７Ａと図７Ｂのヌクレオチド配列と相補
的なヌクレオチド配列を持つ１．６Ｋｂと１．８Ｋｂの
ＲＮＡが単離されている。患者のインターフェロン投与
に対する反応を監視する方法は、（２′−５′）オリゴ
ＡシンセターゼｍＲＮＡの細胞内又は体内濃度をそれに
相補的なＤＮＡとそのｍＲＮＡとをハイブリッド形成を
行うことによって測定することから成っている。現発明
の抗原性蛋白質は図７Ａと図７Ｂに示したアミノ酸配列
の中に含まれるアミノ酸配列を持つ。この抗原諸ペプチ
ドに対して生じた諸抗体は（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼを認識し、免疫沈澱を行う。
を持つ１つの酵素は、図７Ａに示すアミノ酸配列を持
つ。（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性をもつも
う１つの酵素は、図７Ａに示す１−３６４のアミノ酸配
列を持ち、図７Ｂに示す２９０−４００のアミノ酸配列
と重複する。図７Ａと図７Ｂのヌクレオチド配列と相補
的なヌクレオチド配列を持つ１．６Ｋｂと１．８Ｋｂの
ＲＮＡが単離されている。患者のインターフェロン投与
に対する反応を監視する方法は、（２′−５′）オリゴ
ＡシンセターゼｍＲＮＡの細胞内又は体内濃度をそれに
相補的なＤＮＡとそのｍＲＮＡとをハイブリッド形成を
行うことによって測定することから成っている。現発明
の抗原性蛋白質は図７Ａと図７Ｂに示したアミノ酸配列
の中に含まれるアミノ酸配列を持つ。この抗原諸ペプチ
ドに対して生じた諸抗体は（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼを認識し、免疫沈澱を行う。
【００１１】被検体でのインターフェロン活性を監視す
る方法は、被検体の細胞内又は体液の（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼ含量を、既定の時間隔で測定する
事、被検体の細胞内又は体液内でのシンセターゼ含有量
の相異を種々の時間隔で決定し、そこから被検体の細胞
内や体液内でのシンセターゼの量を決定し、それによっ
て被検体のインターフェロン活性をはかるものである。
このシンセターゼは、シンセターゼを今回の発明による
抗体と接触させて複合体を作り、作られた複合体の量を
決定することによって測定される。
る方法は、被検体の細胞内又は体液の（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼ含量を、既定の時間隔で測定する
事、被検体の細胞内又は体液内でのシンセターゼ含有量
の相異を種々の時間隔で決定し、そこから被検体の細胞
内や体液内でのシンセターゼの量を決定し、それによっ
て被検体のインターフェロン活性をはかるものである。
このシンセターゼは、シンセターゼを今回の発明による
抗体と接触させて複合体を作り、作られた複合体の量を
決定することによって測定される。
【００１２】更に、今回の発明は（２′−５′）オリゴ
Ａシンセターゼの２つの抗体に関するもので、その抗体
は、（２′−５′）オリゴＡシンセターゼのアミノ酸配
列の一部を持つ抗原を調整することにより得られるもの
である。その抗−（２′−５′）オリゴシンセターゼペ
プチド抗体は、その酵素を検出する為に使用できるもの
である。
Ａシンセターゼの２つの抗体に関するもので、その抗体
は、（２′−５′）オリゴＡシンセターゼのアミノ酸配
列の一部を持つ抗原を調整することにより得られるもの
である。その抗−（２′−５′）オリゴシンセターゼペ
プチド抗体は、その酵素を検出する為に使用できるもの
である。
【００１３】図１は（２′−５′）オリゴＡシンセター
ゼＥ１ｃＤＮＡクローン１７４−３の構造と配列とを示
す：図１ＡはＥ１ｃＤＮＡクローン１７４−３の制限酵
素切断位置地図を示す。挿入の諸塩基対は、ｐＢＲ３２
２ＤＮＡと同じ順序で番号付けしてある。ｐＢＲＥｃｏ
ＲＩ位置は右にある。挿入のどちらの鎖も（点線）、縦
線で示した制限切断位置から配列決定をした（Ｍａｘａ
ｍ ＆ Ｇｉｌｂｅｒｔ，１９８０）。コード鎖は、右
から左に向って５′から３′のものである。右Ｐｓｔ１
位置につづいて１７Ｇと７２Ｔがあり、２ヌクレオチド
のＧＡが続き、（Ｂ）に示した配列であり従って尾の一
部でない３Ｔと続く。３′の末端には４５Ａと１０Ｃの
尾があり左Ｐｃｔ１位置で終結する。図１Ｂは細長のコ
ード枠を持ったヌクレオチド配列を示す。最初のＴはヌ
クレオチド９２であり、挿入の尾（Ａの右端）の後に位
置する。挿入部のＳａｕ３Ａ１位置とＥｃｏＲ１位置は
示した配列の夫々１２９と４８０に当る。Ｆｉｇｕｒｅ
２はＳＶ８０とＮａｍａｌｖａ細胞内のＥ１特定の諸ｍ
ＲＮＡの大きさとその誘導を示す。
ゼＥ１ｃＤＮＡクローン１７４−３の構造と配列とを示
す：図１ＡはＥ１ｃＤＮＡクローン１７４−３の制限酵
素切断位置地図を示す。挿入の諸塩基対は、ｐＢＲ３２
２ＤＮＡと同じ順序で番号付けしてある。ｐＢＲＥｃｏ
ＲＩ位置は右にある。挿入のどちらの鎖も（点線）、縦
線で示した制限切断位置から配列決定をした（Ｍａｘａ
ｍ ＆ Ｇｉｌｂｅｒｔ，１９８０）。コード鎖は、右
から左に向って５′から３′のものである。右Ｐｓｔ１
位置につづいて１７Ｇと７２Ｔがあり、２ヌクレオチド
のＧＡが続き、（Ｂ）に示した配列であり従って尾の一
部でない３Ｔと続く。３′の末端には４５Ａと１０Ｃの
尾があり左Ｐｃｔ１位置で終結する。図１Ｂは細長のコ
ード枠を持ったヌクレオチド配列を示す。最初のＴはヌ
クレオチド９２であり、挿入の尾（Ａの右端）の後に位
置する。挿入部のＳａｕ３Ａ１位置とＥｃｏＲ１位置は
示した配列の夫々１２９と４８０に当る。Ｆｉｇｕｒｅ
２はＳＶ８０とＮａｍａｌｖａ細胞内のＥ１特定の諸ｍ
ＲＮＡの大きさとその誘導を示す。
【００１４】図２ＡはクローンＥ１のニックトランスレ
ーションを行った〔３２Ｐ〕−ｃＤＮＡのＳＶ８０細胞
からの変成ポリＡ＋−ＲＮＡ電気泳動諸ブロットへの交
配を示す。その諸ＲＮＡはＩＦＮ−ベーター１の添加か
ら、示してある時間数の後に調整された。ＲＮＡの見か
けの大きさはオートラジオグラフィに示される。左レー
ン：ｒＲＮＡ諸マーカー。図２Ｂは図２Ａと同じくＩＦ
Ｎ−アルファで示したある時間数の処理をしたＮａｍａ
ｌｖａ細胞よりのＲＮＡである。左レーン：ｒＲＮＡ諸
マーカー。図３はＩＦＮ−処理したＳＶ８０細胞（Ｉ）
又は非処理細胞（Ｃ）からのＩＦＮ−誘起のｍＲＮＡポ
リ（Ａ）＋ＲＮＡの為のｃＤＮＡを含んだ組換プラズミ
ドクローンＣ５６のＲＮＡ諸ブロットへの交配による特
性決定を示し、７ミクログラムがアガロースゲルで電気
泳動され、ニトロセルローズにブロットの後に、Ｃ５６
クローン、ヒトＨＬＡ ｃＤＮＡクローン又はラットの
チュブリンｃＤＮＡクローンのいずれかの、ニックトラ
ンスレーションを行った〔３２Ｐ〕−プラズミドＤＮＡ
と交配した。接触時間は４８時間である。リボソームＲ
ＮＡマーカーの放射性１８ｓの位置が示してある。
ーションを行った〔３２Ｐ〕−ｃＤＮＡのＳＶ８０細胞
からの変成ポリＡ＋−ＲＮＡ電気泳動諸ブロットへの交
配を示す。その諸ＲＮＡはＩＦＮ−ベーター１の添加か
ら、示してある時間数の後に調整された。ＲＮＡの見か
けの大きさはオートラジオグラフィに示される。左レー
ン：ｒＲＮＡ諸マーカー。図２Ｂは図２Ａと同じくＩＦ
Ｎ−アルファで示したある時間数の処理をしたＮａｍａ
ｌｖａ細胞よりのＲＮＡである。左レーン：ｒＲＮＡ諸
マーカー。図３はＩＦＮ−処理したＳＶ８０細胞（Ｉ）
又は非処理細胞（Ｃ）からのＩＦＮ−誘起のｍＲＮＡポ
リ（Ａ）＋ＲＮＡの為のｃＤＮＡを含んだ組換プラズミ
ドクローンＣ５６のＲＮＡ諸ブロットへの交配による特
性決定を示し、７ミクログラムがアガロースゲルで電気
泳動され、ニトロセルローズにブロットの後に、Ｃ５６
クローン、ヒトＨＬＡ ｃＤＮＡクローン又はラットの
チュブリンｃＤＮＡクローンのいずれかの、ニックトラ
ンスレーションを行った〔３２Ｐ〕−プラズミドＤＮＡ
と交配した。接触時間は４８時間である。リボソームＲ
ＮＡマーカーの放射性１８ｓの位置が示してある。
【００１５】図４はＣ５６ ４５０ｂｐ挿入部の制限酵
素切断位置地図の一部とヌクレオチド配列を示す。Ｃ５
６プラズミドはＨｉｎｄ３で消化し、アルファー〔３２
Ｐ〕−ｄＣＴＰを用いてＤＮＡポリメラーゼＩ−大断片
（クレノウ酵素、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）で標識され、
そのＨｉｎｄ３−Ｐｓｔ１断片が１％アガロースゲル上
で分離された。相補鎖の配列を決めるため、そのプラズ
ミドのＢｇ１２位置をガンマ〔３２Ｐ〕−ＡＴＰを用い
てＴ４−ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｂｉｏｌａｂｓ）
で５′−標識をした後にそのＢｇｌ２−Ｐｓｔ１断片を
分離した。配列決定はＭａｘａｍ ａｎｄ Ｇｉｌｂｅ
ｒｔ法で行った。コード鎖Ａの配列（右から左へ）は下
のパネルに示してある。Ａ鎖配列の最初の２個のチミヂ
ン残基は多分上部の図にあるＡＴ尾に対応するのであろ
う。
素切断位置地図の一部とヌクレオチド配列を示す。Ｃ５
６プラズミドはＨｉｎｄ３で消化し、アルファー〔３２
Ｐ〕−ｄＣＴＰを用いてＤＮＡポリメラーゼＩ−大断片
（クレノウ酵素、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）で標識され、
そのＨｉｎｄ３−Ｐｓｔ１断片が１％アガロースゲル上
で分離された。相補鎖の配列を決めるため、そのプラズ
ミドのＢｇ１２位置をガンマ〔３２Ｐ〕−ＡＴＰを用い
てＴ４−ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｂｉｏｌａｂｓ）
で５′−標識をした後にそのＢｇｌ２−Ｐｓｔ１断片を
分離した。配列決定はＭａｘａｍ ａｎｄ Ｇｉｌｂｅ
ｒｔ法で行った。コード鎖Ａの配列（右から左へ）は下
のパネルに示してある。Ａ鎖配列の最初の２個のチミヂ
ン残基は多分上部の図にあるＡＴ尾に対応するのであろ
う。
【００１６】図５はＩＦＮによるＣ５６ ｍＲＮＡ誘起
の時間経過を示す：図５Ａはポリ（Ａ）＋ＲＮＡでＩＦ
Ｎ−アルファ１０００Ｕ／ｍｌで示された時間数の処理
を受けたＮａｍａｌｖａ細胞からの７ミクログラムをア
ガロースゲルで電気泳動し、ブロットした後にニックト
ランスレーションを行った〔３２Ｐ〕−Ｃ５６プラズミ
ドＤＮＡと交配したものを示す。図５Ｂはポリ（Ａ）＋
ＲＮＡで、２００Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−ベータで示された
時間数処理したＳＶ８０細胞からの７ミクログラムのも
のを示す。星マークは単クローン抗体のカラム（２×１
０８Ｕ／ｍｇ）で純化したＩＦＮ−ベーター１で処理し
た細胞から得たＲＮＡを示す。図５Ｃはポリ（Ａ）＋Ｒ
ＮＡで、（５Ｂ）と同様に処理したＳＶ８０からの１マ
イクログラムがＣ５６ＤＮＡの断片１（Ｆｉｇ．４を見
よ）の３′末端に標識したものと液中交配したものを示
す。交配体はＳ１−ヌクレアーゼで処理し、変性ゲルで
分析した。ｍＲＮＡ−交雑検針（→）は自己再結合のも
の（−−→）より短かい。
の時間経過を示す：図５Ａはポリ（Ａ）＋ＲＮＡでＩＦ
Ｎ−アルファ１０００Ｕ／ｍｌで示された時間数の処理
を受けたＮａｍａｌｖａ細胞からの７ミクログラムをア
ガロースゲルで電気泳動し、ブロットした後にニックト
ランスレーションを行った〔３２Ｐ〕−Ｃ５６プラズミ
ドＤＮＡと交配したものを示す。図５Ｂはポリ（Ａ）＋
ＲＮＡで、２００Ｕ／ｍｌのＩＦＮ−ベータで示された
時間数処理したＳＶ８０細胞からの７ミクログラムのも
のを示す。星マークは単クローン抗体のカラム（２×１
０８Ｕ／ｍｇ）で純化したＩＦＮ−ベーター１で処理し
た細胞から得たＲＮＡを示す。図５Ｃはポリ（Ａ）＋Ｒ
ＮＡで、（５Ｂ）と同様に処理したＳＶ８０からの１マ
イクログラムがＣ５６ＤＮＡの断片１（Ｆｉｇ．４を見
よ）の３′末端に標識したものと液中交配したものを示
す。交配体はＳ１−ヌクレアーゼで処理し、変性ゲルで
分析した。ｍＲＮＡ−交雑検針（→）は自己再結合のも
の（−−→）より短かい。
【００１７】図６は（２′−５′）オリゴＡシンセター
ゼの１．６及び１．８Ｋｂ ｍＲＮＡのための諸ｃＤＮ
Ａの制限酵素切断地図を示す。図６Ａは１．６Ｋｂのｃ
ＤＮＡの地図である。Ｅ１ｃＤＮＡ（Ｍｅｒｌｉｎｅｔ
ａｌ．，１９８３）の位置とラムダｇｔ１０ｃＤＮＡ
のものが示してある。ｐＡはポリアデニレーションの起
る位置である。エクソンの端は縦点線で示してある。各
エクソンを持つゲノムＤＮＡ諸断片の大きさは括弧内に
示す。縦矢は１．８Ｋｂ ＲＮＡに更に存在するスプラ
イス位置を示す。９−２１及び５−２１両ｃＤＮＡの配
列決定法を示した。３′ＥｃｏＲ１位置（Ｅ）からＰｓ
ｔ１位置（Ｐ）の配列はＥ１ ｃＤＮＡの中で決定した
（Ｍｅｒｌｉｎｅｔａｌ．，１９８３）．図６Ｂは１．
８Ｋｂ ｃＤＮＡの地図である。ラムダｇｔ１０クロー
ン４８−１は１．８Ｋｂ ＲＮＡのエクソン８を含むゲ
ノム断片Ｐｓｔ１−Ｐｓｔ−１を用いて分離した。（図
９）諸エクソンは１．６ＫｂのＥ１ｃＤＮＡの場合と同
じく番付けした。切詰めたエクソン７は７ａとした。
ゼの１．６及び１．８Ｋｂ ｍＲＮＡのための諸ｃＤＮ
Ａの制限酵素切断地図を示す。図６Ａは１．６Ｋｂのｃ
ＤＮＡの地図である。Ｅ１ｃＤＮＡ（Ｍｅｒｌｉｎｅｔ
ａｌ．，１９８３）の位置とラムダｇｔ１０ｃＤＮＡ
のものが示してある。ｐＡはポリアデニレーションの起
る位置である。エクソンの端は縦点線で示してある。各
エクソンを持つゲノムＤＮＡ諸断片の大きさは括弧内に
示す。縦矢は１．８Ｋｂ ＲＮＡに更に存在するスプラ
イス位置を示す。９−２１及び５−２１両ｃＤＮＡの配
列決定法を示した。３′ＥｃｏＲ１位置（Ｅ）からＰｓ
ｔ１位置（Ｐ）の配列はＥ１ ｃＤＮＡの中で決定した
（Ｍｅｒｌｉｎｅｔａｌ．，１９８３）．図６Ｂは１．
８Ｋｂ ｃＤＮＡの地図である。ラムダｇｔ１０クロー
ン４８−１は１．８Ｋｂ ＲＮＡのエクソン８を含むゲ
ノム断片Ｐｓｔ１−Ｐｓｔ−１を用いて分離した。（図
９）諸エクソンは１．６ＫｂのＥ１ｃＤＮＡの場合と同
じく番付けした。切詰めたエクソン７は７ａとした。
【００１８】図７Ａと図７Ｂは２個の（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示
す。１．８Ｋｂ ｃＤＮＡクローン４８−１の諸ヌクレ
オチドは１．６Ｋｂ ｃＤＮＡクローン９−２１に準じ
て番付けした。アミノ酸の番付けは括弧内に示す。翻訳
はＡＴＧＡＴＧ配列の第１又は第２のコドンから始ま
る。諸エクソンの端は縦棒で示してある。（Ｇｌｙｃｏ
ｓ．）はＥ１８の中にあるグリコキシレーションの可能
性位置を示す。多分対立形質の相異による単塩基変異は
クローンとゲノムＤＮＡの相異として１．６Ｋｂ配列の
３７６番（ＴとＣ）、５２５番（ＧとＡ）、８０７（Ｇ
とＣ）、８１１（ＡとＧ）；１．８Ｋｂ配列の１０８７
（ＧとＡ）、１１１５（ＧとＣ）として発見された。図
８はＥ１６とＥ１８の（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼのＣ−末端のハイドロパシープロットを示す。Ｋｙ
ｔｅとＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８２）のコンピュータ
ープログラムを用いた。疎水的部分は中央の線の上にあ
る。Ｅ１８の酸性部位はＦｉｇｕｒｅ７のアミノ酸の３
５３から３５８に相当する。
リゴＡシンセターゼｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示
す。１．８Ｋｂ ｃＤＮＡクローン４８−１の諸ヌクレ
オチドは１．６Ｋｂ ｃＤＮＡクローン９−２１に準じ
て番付けした。アミノ酸の番付けは括弧内に示す。翻訳
はＡＴＧＡＴＧ配列の第１又は第２のコドンから始ま
る。諸エクソンの端は縦棒で示してある。（Ｇｌｙｃｏ
ｓ．）はＥ１８の中にあるグリコキシレーションの可能
性位置を示す。多分対立形質の相異による単塩基変異は
クローンとゲノムＤＮＡの相異として１．６Ｋｂ配列の
３７６番（ＴとＣ）、５２５番（ＧとＡ）、８０７（Ｇ
とＣ）、８１１（ＡとＧ）；１．８Ｋｂ配列の１０８７
（ＧとＡ）、１１１５（ＧとＣ）として発見された。図
８はＥ１６とＥ１８の（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼのＣ−末端のハイドロパシープロットを示す。Ｋｙ
ｔｅとＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８２）のコンピュータ
ープログラムを用いた。疎水的部分は中央の線の上にあ
る。Ｅ１８の酸性部位はＦｉｇｕｒｅ７のアミノ酸の３
５３から３５８に相当する。
【００１９】図９はヒト（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼ遺伝子の制限酵素切断位置地図を示す。三つの重
複するゲノムクローンから作成した地図は１．６Ｋｂ
ＲＮＡの７つのエクソンと１．８Ｋｂ ＲＮＡ（黒棒）
に更に１つある８番目のエクソンを示す。挿入は、ゲノ
ムＤＮＡのサザンブロットとプローブ用の４８−１ｃＤ
ＮＡのものを示す。ＳｌｏｔｌはＤａｕｄｉ ＤＮＡ；
Ｓｌｏｔ２は２倍体繊維芽細胞ＦＳ１１のＤＮＡ。図１
０はヒト（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ遺伝子の
プロモーター部分を示す。Ｓｐｈ１−Ｓｐｈ１間の０．
８５Ｋｂ断片で、Ｆｉｇｕｒｅ９の４．２Ｋｂ Ｅｃｏ
Ｒ１ゲノムＤＮＡ断片に由来するものの制限酵素切断位
置地図を示す。諸ｍＲＮＡの５′末端はｃａｐとマーク
してある。図１１はヒト（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼプロモーター部位を示す。Ｆｉｇｕｒｅ１０で示
したＳａｕ３ａ−Ｈｐａ１断片の配列は、ヒトＩＦＮ−
ベーター１遺伝子のプロモーター部位との対比のために
ならべた（Ｄｅｇｒａｖｅｅｔ ａｌ．，１９８１）。
番付けはｃａｐ位置と予想される部分から始まる。ＩＦ
Ｎ−ベーター１プロモーター内で約−７５に位置するプ
リンに富んだ転写制御配列（Ｚｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，
１９８３）で、−１０附近で繰返されるものは、アンダ
ーラインで示した。
ターゼ遺伝子の制限酵素切断位置地図を示す。三つの重
複するゲノムクローンから作成した地図は１．６Ｋｂ
ＲＮＡの７つのエクソンと１．８Ｋｂ ＲＮＡ（黒棒）
に更に１つある８番目のエクソンを示す。挿入は、ゲノ
ムＤＮＡのサザンブロットとプローブ用の４８−１ｃＤ
ＮＡのものを示す。ＳｌｏｔｌはＤａｕｄｉ ＤＮＡ；
Ｓｌｏｔ２は２倍体繊維芽細胞ＦＳ１１のＤＮＡ。図１
０はヒト（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ遺伝子の
プロモーター部分を示す。Ｓｐｈ１−Ｓｐｈ１間の０．
８５Ｋｂ断片で、Ｆｉｇｕｒｅ９の４．２Ｋｂ Ｅｃｏ
Ｒ１ゲノムＤＮＡ断片に由来するものの制限酵素切断位
置地図を示す。諸ｍＲＮＡの５′末端はｃａｐとマーク
してある。図１１はヒト（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼプロモーター部位を示す。Ｆｉｇｕｒｅ１０で示
したＳａｕ３ａ−Ｈｐａ１断片の配列は、ヒトＩＦＮ−
ベーター１遺伝子のプロモーター部位との対比のために
ならべた（Ｄｅｇｒａｖｅｅｔ ａｌ．，１９８１）。
番付けはｃａｐ位置と予想される部分から始まる。ＩＦ
Ｎ−ベーター１プロモーター内で約−７５に位置するプ
リンに富んだ転写制御配列（Ｚｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，
１９８３）で、−１０附近で繰返されるものは、アンダ
ーラインで示した。
【００２０】ＴＡＴＡボックスは二重アンダーラインと
した。図１２は合成ペプチドに抗血清で免疫沈澱させた
ＩＦＮ処理のＷＩＳＨ細胞からの３５Ｓ−メチオニンで
標識した蛋白質のＳＤＳ−アクリルアミドゲル電気泳動
を示す。図１３はＥ１６ｃＤＮＡの大腸菌内発現を示
す。大腸菌の溶原菌Ａｇｔ１１−Ｅ１６で４２℃でＩＰ
ＴＧによって誘起されたものの抽出物はポリ（ｒＩ）
（ｒＣ）アガロース粒上で（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼについて検定した。Ｃｏｎｔ＝ｌａｃＺ遺伝子
の配向と逆配向のＥ１６ｃＤＮＡを用いた大腸菌の挿出
物．Ｎａｍ＝ＩＦＮ−処理Ｎａｍａｌｖａ細胞の挿出
物。アルカリフォスターゼで作用させ、３２Ｐ−ａ−Ａ
ＴＰで標識した産物のｐＨ３．５による電気泳動が示し
てある。図１４はヒト末梢白血球中の（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼＲＮＡの迅速なアッセイ法を図示し
ている。
した。図１２は合成ペプチドに抗血清で免疫沈澱させた
ＩＦＮ処理のＷＩＳＨ細胞からの３５Ｓ−メチオニンで
標識した蛋白質のＳＤＳ−アクリルアミドゲル電気泳動
を示す。図１３はＥ１６ｃＤＮＡの大腸菌内発現を示
す。大腸菌の溶原菌Ａｇｔ１１−Ｅ１６で４２℃でＩＰ
ＴＧによって誘起されたものの抽出物はポリ（ｒＩ）
（ｒＣ）アガロース粒上で（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼについて検定した。Ｃｏｎｔ＝ｌａｃＺ遺伝子
の配向と逆配向のＥ１６ｃＤＮＡを用いた大腸菌の挿出
物．Ｎａｍ＝ＩＦＮ−処理Ｎａｍａｌｖａ細胞の挿出
物。アルカリフォスターゼで作用させ、３２Ｐ−ａ−Ａ
ＴＰで標識した産物のｐＨ３．５による電気泳動が示し
てある。図１４はヒト末梢白血球中の（２′−５′）オ
リゴＡシンセターゼＲＮＡの迅速なアッセイ法を図示し
ている。
【００２１】図１５は、Ｆｉｇｕｒｅ１４の方法に従っ
ての、ヒトＰＢＭＣの（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼ、ＥＲＮＡに対するクイックルセルブロットを図示
している。示されている番号の細胞とインターフェロン
（１６Ｈ処理）を用いた。３ ２Ｐ−ｃＤＮＡに関してオ
ートラジオグラフィーを行った。図１６は、抗−Ｂ及び
抗−Ｃ ＩｇＧ−タンパク−Ａ−セファロースに吸着さ
れている（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性が例
に示されているように測定されたことを図示している。
下のスキームは、Ｂｅｎｅｃｈら（１９８５ｂ）によっ
て配列が決定された２つの（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼの型、Ｅ１６とＥ１８におけるペプチドＢとペ
プチドＣの位置を示している。黒く塗った領域は、Ｅ１
６がＥ１８分子と異なっている部分を示している。
ての、ヒトＰＢＭＣの（２′−５′）オリゴＡシンセタ
ーゼ、ＥＲＮＡに対するクイックルセルブロットを図示
している。示されている番号の細胞とインターフェロン
（１６Ｈ処理）を用いた。３ ２Ｐ−ｃＤＮＡに関してオ
ートラジオグラフィーを行った。図１６は、抗−Ｂ及び
抗−Ｃ ＩｇＧ−タンパク−Ａ−セファロースに吸着さ
れている（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性が例
に示されているように測定されたことを図示している。
下のスキームは、Ｂｅｎｅｃｈら（１９８５ｂ）によっ
て配列が決定された２つの（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼの型、Ｅ１６とＥ１８におけるペプチドＢとペ
プチドＣの位置を示している。黒く塗った領域は、Ｅ１
６がＥ１８分子と異なっている部分を示している。
【００２２】図１７は例２に記載のヒト細胞由来の抽出
物の電気泳動およびイムノブロッティングを示す。
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの４型の位置は各
ブロットＭ＝１４Ｃ−タン白分子量マーカーの右側の数
により示す。ＩＦＮ処理は＋により示す。図１８はアン
チ−（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ ペプチドＢ
をもつヒトＳＶ８０細胞由来の抽出物の電気泳動イムノ
ブロットを示す。左：粗細胞質抽出物（Ｓ１．５）、細
胞液（Ｓ１００）およびミクロソーム（Ｐ１００）。
右：ミクロソーム（ＤＯＣ−可溶性）のナトリウムデオ
キシコレート１０％抽出物、ミクロソームの高塩洗浄
（ＲＷＦ）および塩抽出後のミクロソームペレット（ミ
クロソーム−ＫＣＩ）。図１９はＳ１００の分画化およ
びＤＮＡＥ−セルロースとカルボキシメチルセルロース
によるミクロソームの高塩洗浄（ＲＷＦ）続くグリセロ
ール勾配を示す。アンチ−Ｂにより示した（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼプロフィルとタン白は勾配
の下に示す。電気泳動イムノブロットは左のブロットに
対するフラクションＣＭ（ＤＥＡＥ−セルロースに吸着
されないＳ１００タン白由来のＣＭ−セルロース溶離
液）を示す。左側のブロットフラクションに、ＤＥ（Ｒ
ＷＦのＤＥＡＥ−セルロース溶離液）とフラクションＧ
Ｇ（フラクションＤＥのグリセロル勾配からの８０−１
００Ｋｄのヘビィーピーク）。
物の電気泳動およびイムノブロッティングを示す。
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの４型の位置は各
ブロットＭ＝１４Ｃ−タン白分子量マーカーの右側の数
により示す。ＩＦＮ処理は＋により示す。図１８はアン
チ−（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ ペプチドＢ
をもつヒトＳＶ８０細胞由来の抽出物の電気泳動イムノ
ブロットを示す。左：粗細胞質抽出物（Ｓ１．５）、細
胞液（Ｓ１００）およびミクロソーム（Ｐ１００）。
右：ミクロソーム（ＤＯＣ−可溶性）のナトリウムデオ
キシコレート１０％抽出物、ミクロソームの高塩洗浄
（ＲＷＦ）および塩抽出後のミクロソームペレット（ミ
クロソーム−ＫＣＩ）。図１９はＳ１００の分画化およ
びＤＮＡＥ−セルロースとカルボキシメチルセルロース
によるミクロソームの高塩洗浄（ＲＷＦ）続くグリセロ
ール勾配を示す。アンチ−Ｂにより示した（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼプロフィルとタン白は勾配
の下に示す。電気泳動イムノブロットは左のブロットに
対するフラクションＣＭ（ＤＥＡＥ−セルロースに吸着
されないＳ１００タン白由来のＣＭ−セルロース溶離
液）を示す。左側のブロットフラクションに、ＤＥ（Ｒ
ＷＦのＤＥＡＥ−セルロース溶離液）とフラクションＧ
Ｇ（フラクションＤＥのグリセロル勾配からの８０−１
００Ｋｄのヘビィーピーク）。
【００２３】図２０はＳＶ８０細胞からの（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼの種々の型にＲＮＡ複鎖の
要求されるものを示す。諸断片はＦｉｇｕｒｅｌ９に準
じて標識した。酵素活性はポリ（ｒＩ）（ｒｃ）の示さ
れた濃度について測定した。図２１は例３に述べられた
ように抗−Ｂ ＩｇＧと１２５Ｉ−蛋白質Ａを用いて行
った（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの放射線−免
疫検定を示す。オートラジオグラフィーが示してある。
細胞は５００Ｕ／ｍｌ（７）ＩＦＮ−β１で１６時間処
理か又は無処理であった。図２２はウイルス病患者の血
液から得たリンパ球（中段）の（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼレベルの上昇を免疫蛍光顕微鏡で検知する
に抗−Ｂを用いる事を示す。右：正常血清によるコント
ロール：左：抗−Ｂ色素入りの健康献血者の血液。（リ
ンパ球は染色しない、マクロファージ又は顆粒白血球が
不特定のバックグラウンドを為す。
５′）オリゴＡシンセターゼの種々の型にＲＮＡ複鎖の
要求されるものを示す。諸断片はＦｉｇｕｒｅｌ９に準
じて標識した。酵素活性はポリ（ｒＩ）（ｒｃ）の示さ
れた濃度について測定した。図２１は例３に述べられた
ように抗−Ｂ ＩｇＧと１２５Ｉ−蛋白質Ａを用いて行
った（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの放射線−免
疫検定を示す。オートラジオグラフィーが示してある。
細胞は５００Ｕ／ｍｌ（７）ＩＦＮ−β１で１６時間処
理か又は無処理であった。図２２はウイルス病患者の血
液から得たリンパ球（中段）の（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼレベルの上昇を免疫蛍光顕微鏡で検知する
に抗−Ｂを用いる事を示す。右：正常血清によるコント
ロール：左：抗−Ｂ色素入りの健康献血者の血液。（リ
ンパ球は染色しない、マクロファージ又は顆粒白血球が
不特定のバックグラウンドを為す。
【００２４】
【発明の実施の形態】現発明は、（２′−５′）オリゴ
Ａシンセターゼ活性を持つ酵素のコードを持ったヒトＤ
ＮＡで、図７Ａに示すヌクレオチド配列を持つものに関
している。このＤＮＡは図７Ａに示した１−１３２２の
ヌクレオチド配列でも、又図７Ｂに示したそれと重複す
る９０１−１５９０のヌクレオチド配列であっても良
い。現発明のＤＮＡは、図９に示した制限酵素切断位置
を持つ。（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性を持
つ酵素は、図７Ａに示すアミノ酸配列を持つ。この酵素
は約３６４のアミノ酸より成り、約４１，５００ダルト
ンの分子量を示す。他の酵素で（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼ活性を持つものは、図７Ａに示す１−３６
４のアミノ酸配列に加えて図７Ｂに示す２９０−４００
のアミノ酸配列を持つ。この酵素は約４００のアミノ酸
より成り、その分子量は約４６，０００ダルトンであ
る。
Ａシンセターゼ活性を持つ酵素のコードを持ったヒトＤ
ＮＡで、図７Ａに示すヌクレオチド配列を持つものに関
している。このＤＮＡは図７Ａに示した１−１３２２の
ヌクレオチド配列でも、又図７Ｂに示したそれと重複す
る９０１−１５９０のヌクレオチド配列であっても良
い。現発明のＤＮＡは、図９に示した制限酵素切断位置
を持つ。（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活性を持
つ酵素は、図７Ａに示すアミノ酸配列を持つ。この酵素
は約３６４のアミノ酸より成り、約４１，５００ダルト
ンの分子量を示す。他の酵素で（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼ活性を持つものは、図７Ａに示す１−３６
４のアミノ酸配列に加えて図７Ｂに示す２９０−４００
のアミノ酸配列を持つ。この酵素は約４００のアミノ酸
より成り、その分子量は約４６，０００ダルトンであ
る。
【００２５】現発明は図７Ａに示したヌクレオチド配列
と相補のヌクレオチド配列を持った１．６ＫｂのＲＮＡ
を提供する。図７Ａに示す１−１３２２のヌクレオチド
配列に相補的であると同時にＦｉｇｕｒｅ７Ｂに示す９
０１−１５９０にも相補的であるヌクレオチド配列より
成る１．８Ｋｂ ＲＮＡも提供する。現発明の転移ベク
ターは現発明のｌａｍｂｄａ−ｇｔ １１−Ｅ１６ Ｄ
ＮＡとｌａｃＺ遺伝子とより成り、そのＤＮＡはｌａｃ
Ｚ遺伝子と相的に接着していて、適当な寄主細胞中でＤ
ＮＡ発現を可能にする。微生物はこの転移ベクターで形
質転換を受ける。大腸菌はこの形質転換に適した微生物
である。患者のインターフェロンに対する反応を監視す
る方法は、患者の細胞又は体液の（２′−５′）オリゴ
ＡシンセターゼｍＲＮＡの濃度をこれと相補のＤＮＡで
交配させて測定する事より成る。そのｍＲＮＡは現発明
の１．６Ｋｂ又は１．８ＫｂのＲＮＡであろう。
と相補のヌクレオチド配列を持った１．６ＫｂのＲＮＡ
を提供する。図７Ａに示す１−１３２２のヌクレオチド
配列に相補的であると同時にＦｉｇｕｒｅ７Ｂに示す９
０１−１５９０にも相補的であるヌクレオチド配列より
成る１．８Ｋｂ ＲＮＡも提供する。現発明の転移ベク
ターは現発明のｌａｍｂｄａ−ｇｔ １１−Ｅ１６ Ｄ
ＮＡとｌａｃＺ遺伝子とより成り、そのＤＮＡはｌａｃ
Ｚ遺伝子と相的に接着していて、適当な寄主細胞中でＤ
ＮＡ発現を可能にする。微生物はこの転移ベクターで形
質転換を受ける。大腸菌はこの形質転換に適した微生物
である。患者のインターフェロンに対する反応を監視す
る方法は、患者の細胞又は体液の（２′−５′）オリゴ
ＡシンセターゼｍＲＮＡの濃度をこれと相補のＤＮＡで
交配させて測定する事より成る。そのｍＲＮＡは現発明
の１．６Ｋｂ又は１．８ＫｂのＲＮＡであろう。
【００２６】インターフェロンに対する細胞や組織の反
応の評価の方法はインターフェロンで処理した細胞又は
組織より得たＲＮＡをそのＲＮＡと相補のｃＤＮＡと交
配し、その交雑量を決定することより成る。そのＲＮＡ
はインターフェロンにさらした細胞又は組織から抽出
し、膜フィルター上で固定し、インターフェロン−誘起
したｍＲＮＡに特定の、標識付ＣＤＮで交配する。この
方法は組織切片を標識付ｃＤＮＡで原位置交雑し、顕微
鏡観察オートグラフィ又は蛍光で標価する事より成る。
分析する細胞又は組織はヒト又は他の動物起原であろ
う。細胞又は組織のインターフェロンに対する反応を評
価する方法を実施する為のキットには、図７Ａ又は図７
Ｂに示した配列に相補のｃＤＮＡ、デオキシリボヌクレ
アーゼＩと〔３２Ｐ〕−ガンマーｄＣＴＰで割れ目移動
をする際の交雑テストを実施するに必要な試薬類、ニト
ロセルローズ膜上で交雑するための試薬類および細胞か
らＲＮＡを抽出するための試薬類を含んでいる。
応の評価の方法はインターフェロンで処理した細胞又は
組織より得たＲＮＡをそのＲＮＡと相補のｃＤＮＡと交
配し、その交雑量を決定することより成る。そのＲＮＡ
はインターフェロンにさらした細胞又は組織から抽出
し、膜フィルター上で固定し、インターフェロン−誘起
したｍＲＮＡに特定の、標識付ＣＤＮで交配する。この
方法は組織切片を標識付ｃＤＮＡで原位置交雑し、顕微
鏡観察オートグラフィ又は蛍光で標価する事より成る。
分析する細胞又は組織はヒト又は他の動物起原であろ
う。細胞又は組織のインターフェロンに対する反応を評
価する方法を実施する為のキットには、図７Ａ又は図７
Ｂに示した配列に相補のｃＤＮＡ、デオキシリボヌクレ
アーゼＩと〔３２Ｐ〕−ガンマーｄＣＴＰで割れ目移動
をする際の交雑テストを実施するに必要な試薬類、ニト
ロセルローズ膜上で交雑するための試薬類および細胞か
らＲＮＡを抽出するための試薬類を含んでいる。
【００２７】図７Ａと図７Ｂに示したアミノ酸配列に含
まれるアミノ酸配列を持った抗原性諸ペプチドも又提供
されている。現発明による抗原性ペプチドの１つはＣ−
末端アミノ酸の１７個を図７Ａに示した配列で所持し、
そのアミノ酸配列がＡＲＧ−ＰＲＯ−ＰＲＯ−ＡＬＡ−
ＳＥＲ−ＳＥＲ−ＬＥＵ−ＰＲＯ−ＰＨＥ−ＩＬＥ−Ｐ
ＲＯ−ＡＬＡ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＨＩＳ−ＧＬＵ−ＡＬ
Ａである。もう一つの抗原性ペプチドのアミノ酸配列
は、ＧＬＵ−ＬＹＳ−ＴＹＲ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＡＲＧ
−ＧＬＮ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＬＹＳ−ＰＲＯ−ＡＲＧ−
ＰＲＯ−ＶＡＬ−ＩＬＥ−ＬＥＵ−ＡＳＰ−ＰＲＯ−Ａ
ＬＡ−ＡＳＰである。現発明の抗原性両ペプチドに対し
て生ずる諸抗体は（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ
を識別し、免疫沈澱する。被験体でのインターフェロン
活性を監視する方法は、（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼの細胞又は体液中での濃度を既定の時間間隔で測
定し、被験体の細胞又は体液中の該シンセターゼ量の相
異を、異なる時間間隔の間で決定し、それから被験体で
のシンセターゼの量を決定し、それにより被験体でのイ
ンターフェロン活性を決める事より成る。シンセターゼ
の量はそのシンセターゼを現発明の抗体と接触させ、そ
こで複合体を形成し、この形成された複合体量決定する
事から測定される。
まれるアミノ酸配列を持った抗原性諸ペプチドも又提供
されている。現発明による抗原性ペプチドの１つはＣ−
末端アミノ酸の１７個を図７Ａに示した配列で所持し、
そのアミノ酸配列がＡＲＧ−ＰＲＯ−ＰＲＯ−ＡＬＡ−
ＳＥＲ−ＳＥＲ−ＬＥＵ−ＰＲＯ−ＰＨＥ−ＩＬＥ−Ｐ
ＲＯ−ＡＬＡ−ＰＲＯ−ＬＥＵ−ＨＩＳ−ＧＬＵ−ＡＬ
Ａである。もう一つの抗原性ペプチドのアミノ酸配列
は、ＧＬＵ−ＬＹＳ−ＴＹＲ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＡＲＧ
−ＧＬＮ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＬＹＳ−ＰＲＯ−ＡＲＧ−
ＰＲＯ−ＶＡＬ−ＩＬＥ−ＬＥＵ−ＡＳＰ−ＰＲＯ−Ａ
ＬＡ−ＡＳＰである。現発明の抗原性両ペプチドに対し
て生ずる諸抗体は（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ
を識別し、免疫沈澱する。被験体でのインターフェロン
活性を監視する方法は、（２′−５′）オリゴＡシンセ
ターゼの細胞又は体液中での濃度を既定の時間間隔で測
定し、被験体の細胞又は体液中の該シンセターゼ量の相
異を、異なる時間間隔の間で決定し、それから被験体で
のシンセターゼの量を決定し、それにより被験体でのイ
ンターフェロン活性を決める事より成る。シンセターゼ
の量はそのシンセターゼを現発明の抗体と接触させ、そ
こで複合体を形成し、この形成された複合体量決定する
事から測定される。
【００２８】インターフェロン活性を監視する方法は、
更に（２′−５′）オリゴＡシンセターゼをインターフ
ェロンにさらした細胞又は体液から抽出し、この抽出シ
ンセターゼを識別し得るマーカーで標識付をしてラベル
付シンセターゼを作り、このラベル付シンセターゼを現
発明の抗体と適当な条件下で接触させて、標識付のシン
セターゼ−抗体複合体を作らせ、複合体中の標識を検出
し、それによってシンセターゼを検出する。その標識は
３５ｓ−メチンニンであるだろう。インターフェロン活
性を監視する方法を実施する為のキットは、現発明の抗
体を１つ、シンセターゼ抽出用諸材料、シンセターゼ標
識付けの諸材料及び標識を検出し、シンセターゼ量を決
定する為の諸材料より成る。
更に（２′−５′）オリゴＡシンセターゼをインターフ
ェロンにさらした細胞又は体液から抽出し、この抽出シ
ンセターゼを識別し得るマーカーで標識付をしてラベル
付シンセターゼを作り、このラベル付シンセターゼを現
発明の抗体と適当な条件下で接触させて、標識付のシン
セターゼ−抗体複合体を作らせ、複合体中の標識を検出
し、それによってシンセターゼを検出する。その標識は
３５ｓ−メチンニンであるだろう。インターフェロン活
性を監視する方法を実施する為のキットは、現発明の抗
体を１つ、シンセターゼ抽出用諸材料、シンセターゼ標
識付けの諸材料及び標識を検出し、シンセターゼ量を決
定する為の諸材料より成る。
【００２９】現発明は又、インターフェロンにさらした
後ヒト細胞に現れる諸メッセンジャーＲＮＡと特定的に
交雑するクローン化したＤＮＡを提出する。そのクロー
ン化ｃＤＮＡは、３．６，１．８と１．６キロベースの
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ両ｍＲＮＡに特定
的であろう。現発明のクローン化ＤＮＡは５６，０００
Ｍｒ蛋白質のｍＲＮＡに特定的であり、そのｍＲＮＡは
２キロベースで図１に示す配列を持つ。ヒトＳＶ８０細
胞から得た（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮ
Ａのための部分ｃＤＮＡクローン（Ｅ１）は、それがア
フリカツメガエル卵細胞中での翻訳で（Ｍｅｒｌｉｎ
ｅｔ ａｌ．，１９８３）（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼ活性を起すｍＲＮＡを交配で選別する能力を通
じて始めて獲得された。Ｅ１ｃＤＮＡの挿入（６７５ｂ
ｐ）はＲＮＡの１．６，１．８および３．６Ｋｂの三種
類で、ＳＶ８０細胞のＩＦＮに符合するものと交雑し、
１２時間の蓄積で細胞質ポリソーム分画に見出される
（Ｂｅｎｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。他の二種
の早期転写体（２．７および４Ｋｂ）は、より少い分量
で現れる。ヒト細胞の種々の型の分析から、これら諸Ｒ
ＮＡは各細胞の特定の方法で別個に発現される事がわか
った。Ｂリンパ芽細胞では（Ｎａｍａｌｖａ，Ｄａｕｄ
ｉ）１．８ＫｂのＲＮＡが集積するが、一方、羊膜のＷ
ＩＳＨ細胞、組織球のリンパ腫Ｕ９３７細胞、およびＨ
ｅＬａ細胞では１．６ＫｂのＲＮＡが幾らかの３．６Ｋ
ｂ ＲＮＡと共に主としてＩＦＮで誘起されるが１．８
Ｋｂ ＲＮＡは殆ど作られない。２倍体繊維芽細胞ＦＳ
１１内、ＳＶ８０繊維プラストイド細胞内およびＴ細胞
ＣＥＮＴ系では安定ＲＮＡの三型全部が発現される（Ｂ
ｅｎｅｃｈ ｅｔａｌ．，１９８５）。（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼの発現される型は用いたＩＦＮの
種（α，βまたはγ）の相異には依らず、むしろ細胞内
で発生的に規制されるように見える。
後ヒト細胞に現れる諸メッセンジャーＲＮＡと特定的に
交雑するクローン化したＤＮＡを提出する。そのクロー
ン化ｃＤＮＡは、３．６，１．８と１．６キロベースの
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ両ｍＲＮＡに特定
的であろう。現発明のクローン化ＤＮＡは５６，０００
Ｍｒ蛋白質のｍＲＮＡに特定的であり、そのｍＲＮＡは
２キロベースで図１に示す配列を持つ。ヒトＳＶ８０細
胞から得た（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮ
Ａのための部分ｃＤＮＡクローン（Ｅ１）は、それがア
フリカツメガエル卵細胞中での翻訳で（Ｍｅｒｌｉｎ
ｅｔ ａｌ．，１９８３）（２′−５′）オリゴＡシン
セターゼ活性を起すｍＲＮＡを交配で選別する能力を通
じて始めて獲得された。Ｅ１ｃＤＮＡの挿入（６７５ｂ
ｐ）はＲＮＡの１．６，１．８および３．６Ｋｂの三種
類で、ＳＶ８０細胞のＩＦＮに符合するものと交雑し、
１２時間の蓄積で細胞質ポリソーム分画に見出される
（Ｂｅｎｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。他の二種
の早期転写体（２．７および４Ｋｂ）は、より少い分量
で現れる。ヒト細胞の種々の型の分析から、これら諸Ｒ
ＮＡは各細胞の特定の方法で別個に発現される事がわか
った。Ｂリンパ芽細胞では（Ｎａｍａｌｖａ，Ｄａｕｄ
ｉ）１．８ＫｂのＲＮＡが集積するが、一方、羊膜のＷ
ＩＳＨ細胞、組織球のリンパ腫Ｕ９３７細胞、およびＨ
ｅＬａ細胞では１．６ＫｂのＲＮＡが幾らかの３．６Ｋ
ｂ ＲＮＡと共に主としてＩＦＮで誘起されるが１．８
Ｋｂ ＲＮＡは殆ど作られない。２倍体繊維芽細胞ＦＳ
１１内、ＳＶ８０繊維プラストイド細胞内およびＴ細胞
ＣＥＮＴ系では安定ＲＮＡの三型全部が発現される（Ｂ
ｅｎｅｃｈ ｅｔａｌ．，１９８５）。（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼの発現される型は用いたＩＦＮの
種（α，βまたはγ）の相異には依らず、むしろ細胞内
で発生的に規制されるように見える。
【００３０】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの異
った転写物は、１遺伝子に由来するようである（Ｂｅｎ
ｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。制限酵素切断位置
地図に依れば、１）Ｅ１ｃＤＮＡは１．６Ｋｂ ＲＮＡ
の３′末端に相当する、２）１．８Ｋｂ ＲＮＡは１．
６Ｋｂ ＲＮＡと異った３′末端を持ち、下流エクソン
１つを余分に持つ、３）３．６Ｋｂ ＲＮＡは１．８Ｋ
ｂ ＲＮＡと共通の３′末端を持つが、不完全にスプラ
イスされている。特定のゲノムＤＮＡ断片を用いた交雑
−翻訳試験は、これも１．８と１．６Ｋｂの両ＲＮＡ
は、積極的に（２′−５′）オリゴＡシンセターゼをコ
ードする事を示した（Ｂｅｎｅｃｈ ｅｔａｌ．，１９
８５）。
った転写物は、１遺伝子に由来するようである（Ｂｅｎ
ｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。制限酵素切断位置
地図に依れば、１）Ｅ１ｃＤＮＡは１．６Ｋｂ ＲＮＡ
の３′末端に相当する、２）１．８Ｋｂ ＲＮＡは１．
６Ｋｂ ＲＮＡと異った３′末端を持ち、下流エクソン
１つを余分に持つ、３）３．６Ｋｂ ＲＮＡは１．８Ｋ
ｂ ＲＮＡと共通の３′末端を持つが、不完全にスプラ
イスされている。特定のゲノムＤＮＡ断片を用いた交雑
−翻訳試験は、これも１．８と１．６Ｋｂの両ＲＮＡ
は、積極的に（２′−５′）オリゴＡシンセターゼをコ
ードする事を示した（Ｂｅｎｅｃｈ ｅｔａｌ．，１９
８５）。
【００３１】１．６と１．８Ｋｂ両ＲＮＡのためのｃＤ
ＮＡ諸クローンは単離され配列決定が行われ、これはヒ
ト細胞に二型あるＩＦＮ−誘起の（２′−５′）オリゴ
Ａシンセターゼのアミノ酸配列の由来解明を可能にし
た。二種の蛋白質はｃ−末端を異にし、１．６Ｋｂ Ｒ
ＮＡ産物（Ｅ１６）では疎水性であり、１．８Ｋｂ Ｒ
ＮＡの産物（Ｅ１８）では酸性である。（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼ遺伝子の完全地図では、１．６Ｋ
ｂ ＲＮＡは７つのエクソンにコードされ、１．８Ｋｂ
ＲＮＡは８つのエクソンにコードされる。ＩＦＮ−誘
起のヒト（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ遺伝子の
転写開始位置と仮定される位置の配列はヒトＩＦＮ−β
１遺伝子のプロモーター部位と強い相同性を示す。
ＮＡ諸クローンは単離され配列決定が行われ、これはヒ
ト細胞に二型あるＩＦＮ−誘起の（２′−５′）オリゴ
Ａシンセターゼのアミノ酸配列の由来解明を可能にし
た。二種の蛋白質はｃ−末端を異にし、１．６Ｋｂ Ｒ
ＮＡ産物（Ｅ１６）では疎水性であり、１．８Ｋｂ Ｒ
ＮＡの産物（Ｅ１８）では酸性である。（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼ遺伝子の完全地図では、１．６Ｋ
ｂ ＲＮＡは７つのエクソンにコードされ、１．８Ｋｂ
ＲＮＡは８つのエクソンにコードされる。ＩＦＮ−誘
起のヒト（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ遺伝子の
転写開始位置と仮定される位置の配列はヒトＩＦＮ−β
１遺伝子のプロモーター部位と強い相同性を示す。
【００３２】
【実施例】例１ （２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮＡのｃＤＮ
Ａクローンによる測定Ａ）Ｅ−ｃＤＮＡ諸クローンの単
離 全ＲＮＡは１０９のＳＶ８０細胞（ＳＶ４０−形質転換
ヒト繊維芽細胞）をｍｌ当り２００単位ＩＦＮ−ベータ
で１２時間処理して調整した。そのＲＮＡは３ＭのＬｉ
Ｃｌ−６Ｍ尿素で抽出し、オリゴｄＴ−セルロースの上
を通して純化した。得たポリＡ＋−ＲＮＡの０．４ｍｇ
は１．５％アガロース／６Ｍ尿素２５ｍＭクエン酸ナト
リウムｐＨ３．５で、ゲノム電気泳動装置のプレパレー
ション中で分画された。その１７−１８ｓＲＮＡ分画が
次のようにｃＤＮＡの調整に用いられた：２ミリグラム
のＲＮＡを１分間、９０℃で２ミクログラムのオリゴ
（ｄＴ）１２−１８と、６０ミクロリットルの水中で熱
した、次に０℃で冷却、その後塩の最終濃度が５０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８．３、１０ｍＭ ＭｇＣｌ
２、７５ｍＭ ＫＣｌとなるように補足し、５分間４２
℃で保温後に１ｍＭヂチオトレイトール、各１ｍＭのｄ
ＡＴＰ、ｄＴＧＰ、０．５ｍＭのｄＣＴＰ、２０ミクロ
−Ｃｉの３２ｐ−ｄＣＴＰ（３００（Ｃｉ／ｍｍｏ
ｌ））、４ｍＭのピロ燐酸ナトリウムと２０単位の逆転
写酵素を最終容量０．１ｍｌにして加える。この混合物
を４２℃で４５分間保温し、１０ｍＭ ＥＤＴＡで反応
を止め、０．２％ナトリウム−ドヂシル硫酸、そしてｃ
ＤＮＡはフェノール−クロロフォルムで抽出し、０．３
ＮのＮａＯＨで２０時間５２℃の処理をし、中性化し
た。そのｃＤＮＡをＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５で濾過
し、エタノール沈澱をし、そしてｄＡＴＰと末端トラン
スファラーゼとで尾付けをした。
Ａクローンによる測定Ａ）Ｅ−ｃＤＮＡ諸クローンの単
離 全ＲＮＡは１０９のＳＶ８０細胞（ＳＶ４０−形質転換
ヒト繊維芽細胞）をｍｌ当り２００単位ＩＦＮ−ベータ
で１２時間処理して調整した。そのＲＮＡは３ＭのＬｉ
Ｃｌ−６Ｍ尿素で抽出し、オリゴｄＴ−セルロースの上
を通して純化した。得たポリＡ＋−ＲＮＡの０．４ｍｇ
は１．５％アガロース／６Ｍ尿素２５ｍＭクエン酸ナト
リウムｐＨ３．５で、ゲノム電気泳動装置のプレパレー
ション中で分画された。その１７−１８ｓＲＮＡ分画が
次のようにｃＤＮＡの調整に用いられた：２ミリグラム
のＲＮＡを１分間、９０℃で２ミクログラムのオリゴ
（ｄＴ）１２−１８と、６０ミクロリットルの水中で熱
した、次に０℃で冷却、その後塩の最終濃度が５０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ８．３、１０ｍＭ ＭｇＣｌ
２、７５ｍＭ ＫＣｌとなるように補足し、５分間４２
℃で保温後に１ｍＭヂチオトレイトール、各１ｍＭのｄ
ＡＴＰ、ｄＴＧＰ、０．５ｍＭのｄＣＴＰ、２０ミクロ
−Ｃｉの３２ｐ−ｄＣＴＰ（３００（Ｃｉ／ｍｍｏ
ｌ））、４ｍＭのピロ燐酸ナトリウムと２０単位の逆転
写酵素を最終容量０．１ｍｌにして加える。この混合物
を４２℃で４５分間保温し、１０ｍＭ ＥＤＴＡで反応
を止め、０．２％ナトリウム−ドヂシル硫酸、そしてｃ
ＤＮＡはフェノール−クロロフォルムで抽出し、０．３
ＮのＮａＯＨで２０時間５２℃の処理をし、中性化し
た。そのｃＤＮＡをＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５で濾過
し、エタノール沈澱をし、そしてｄＡＴＰと末端トラン
スファラーゼとで尾付けをした。
【００３３】第二のｃＤＮＡ鎖の合成はオリゴ（ｄＴ）
でプライム付けをし、第一鎖と同様に２時間４２℃で進
行させたが、放射性ヌクレオチドとピロ燐酸は用いなか
った。末尾の整形を確保する為にｄｓ ｃＤＮＡは大腸
菌ポリメラーゼＩ大断片と共に先ず２０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ ｐＨ８、７５ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣ
ｌ１、１ｍＭチチオトレイトールで５分間３７℃（角切
り反応）で処理し、次にＡＴＰ存在下に充填条件に置い
た。そのｄｓ ｃＤＮＡは５−２０％の蔗糖傾斜で沈澱
分画し、最も重い分画にｄＣＴＰで尾付けをして、等モ
ル量のＰｓｔ１−切断ｐＢＲ３２２プラズミドＤＮＡの
ｄＣＴＰで尾付けしたものでアニールした。約７ｎｇの
ＤＮＡを１００ミクロリットルの凍結し、ＣａＣｌ２−
処理した大腸菌ＭＭ２９４と混合した。０℃で３０分と
３７℃で５分の処理後、そのバクテリアは２ｍｌのＬＢ
−ブロス中で３７℃で２時間の生育をさせ、ＬＢ−寒天
プレートに１０ミクログラム／ｍｌのテトラサイクリン
で接種した。約１．４×１０５のテトラサイクリン−耐
性でアンピシリン−感受性のコロニーが、ミリグラム当
りの組換プラズミドＤＮＡから得られた。
でプライム付けをし、第一鎖と同様に２時間４２℃で進
行させたが、放射性ヌクレオチドとピロ燐酸は用いなか
った。末尾の整形を確保する為にｄｓ ｃＤＮＡは大腸
菌ポリメラーゼＩ大断片と共に先ず２０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ ｐＨ８、７５ｍＭ ＫＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣ
ｌ１、１ｍＭチチオトレイトールで５分間３７℃（角切
り反応）で処理し、次にＡＴＰ存在下に充填条件に置い
た。そのｄｓ ｃＤＮＡは５−２０％の蔗糖傾斜で沈澱
分画し、最も重い分画にｄＣＴＰで尾付けをして、等モ
ル量のＰｓｔ１−切断ｐＢＲ３２２プラズミドＤＮＡの
ｄＣＴＰで尾付けしたものでアニールした。約７ｎｇの
ＤＮＡを１００ミクロリットルの凍結し、ＣａＣｌ２−
処理した大腸菌ＭＭ２９４と混合した。０℃で３０分と
３７℃で５分の処理後、そのバクテリアは２ｍｌのＬＢ
−ブロス中で３７℃で２時間の生育をさせ、ＬＢ−寒天
プレートに１０ミクログラム／ｍｌのテトラサイクリン
で接種した。約１．４×１０５のテトラサイクリン−耐
性でアンピシリン−感受性のコロニーが、ミリグラム当
りの組換プラズミドＤＮＡから得られた。
【００３４】（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲ
ＮＡのｃＤＮＡクローンを識別するため、総計３，００
０のプラズミドクローンをＩＦＮ−処理ＳＶ８０細胞の
ＲＮＡと交雑しスクリーンし、そのＤＮＡで選抜したＲ
ＮＡをＸｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ卵細胞に注射して
テストし、Ｓｈｕｌｍａｎ ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ（１９
８０）の方法で（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活
性測定した。１２の個別のクローン（各３ミクログラム
のＤＮＡ：ＥｃｏＲ１で分断）からのプラズミドＤＮＡ
の合併物は直径０．４ｃｍのニトロセルローズ濾紙を通
し、３７℃２時間の予備交雑を５０％フォルムアミド、
２ｍＭ Ｐｉｐｅｓ緩衝液ｐＨ６．４、０．７５Ｍ Ｎ
ａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ（緩衝液Ａ）中で行った。ｐ
ＢＲ３２２ＤＮＡによる濾紙３本、組換ＤＮＡによる濾
紙３０本を３００ミクログラムのポリＡ＋−ＲＮＡと共
に（仮定の（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮ
Ａ量、０．０９ミクログラム又は０．０３％の１０倍過
剰のｃＤＮＡの添加になる計算で）、１ｍｌの緩衝液Ａ
中で３７℃で２０時間保温した。これらの濾紙は３７℃
の緩衝液Ａで２回、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌのｐＨ
７．５と０．１５ＭＮａＣｌと１ｍＭ ＥＤＴＡと０．
５％ナトリウムドデシル硫酸の混合物で４回（１度は３
７度で、残り３度は５２℃で）、そして１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌのｐＨ７．５と１ｍＭ ＥＤＴＡの混合物
（緩衝液Ｃ）で５２℃において４回の諸洗滌を行った。
ＮＡのｃＤＮＡクローンを識別するため、総計３，００
０のプラズミドクローンをＩＦＮ−処理ＳＶ８０細胞の
ＲＮＡと交雑しスクリーンし、そのＤＮＡで選抜したＲ
ＮＡをＸｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ卵細胞に注射して
テストし、Ｓｈｕｌｍａｎ ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ（１９
８０）の方法で（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ活
性測定した。１２の個別のクローン（各３ミクログラム
のＤＮＡ：ＥｃｏＲ１で分断）からのプラズミドＤＮＡ
の合併物は直径０．４ｃｍのニトロセルローズ濾紙を通
し、３７℃２時間の予備交雑を５０％フォルムアミド、
２ｍＭ Ｐｉｐｅｓ緩衝液ｐＨ６．４、０．７５Ｍ Ｎ
ａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ（緩衝液Ａ）中で行った。ｐ
ＢＲ３２２ＤＮＡによる濾紙３本、組換ＤＮＡによる濾
紙３０本を３００ミクログラムのポリＡ＋−ＲＮＡと共
に（仮定の（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮ
Ａ量、０．０９ミクログラム又は０．０３％の１０倍過
剰のｃＤＮＡの添加になる計算で）、１ｍｌの緩衝液Ａ
中で３７℃で２０時間保温した。これらの濾紙は３７℃
の緩衝液Ａで２回、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌのｐＨ
７．５と０．１５ＭＮａＣｌと１ｍＭ ＥＤＴＡと０．
５％ナトリウムドデシル硫酸の混合物で４回（１度は３
７度で、残り３度は５２℃で）、そして１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌのｐＨ７．５と１ｍＭ ＥＤＴＡの混合物
（緩衝液Ｃ）で５２℃において４回の諸洗滌を行った。
【００３５】各濾紙は、次に個別にして緩衝液Ｃで５２
℃の洗滌をし、次に９６℃で０．３ｍｌの緩衝液Ｃに１
ｍｌ当り４０ミクログラムの兎肝ｔＲＮＡを加えたも
の、中で２分間加熱してＲＮＡを取り出した。そのエタ
ノール沈澱物を急冷の後、そのＲＮＡは２ミクロリット
ルの水に溶解した。０．７ミクロリットルのＲＮＡを１
０個のアフリカツメガエル卵細胞に注射し、１９℃１８
時間の保温後、その卵細胞を孵卵液中でホモゲナイズし
（Ｓｈｕ１ｍａｎ ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ，１９８０）、
そのホモゲネート０．１５ｍｌをポリ（ｒＩ）（ｒＣ）
−アガロース粒と混合した。その粒は３０℃で１６時
間、２．５ｍＭの（３２Ｐ）−アルファーＡＴＰ（０．
３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と１０ｍＭジチオトレイトールとの
混合物中で保温し、この１０ミクロリットルの液相部を
０．３５単位のバクテリア アルカリ フォスファター
ゼと共に３０ｍＭのＴｒｉｓ−ｂａｓｅ中で３７℃６０
分の保温をした。その消化物はＷａｔｍａｎ ３ＭＭ濾
紙上で濾紙電気泳動に３，０００Ｖで４時間かけ、
（２′−５′）ＡｐＡと（２′−５′）ＡｐＡｐＡに相
当する汚点を切り取り、シンチレーション測定をした。
ＤＮＡ−選抜ＲＮＡから、１ミクロリットルを取り網赤
血球分解物でＷｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ ｅｔ ａｌ，
（１９７９）に述べられたようにｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳
に用い、資料の全ｍＲＮＡ活性の測定を行った。
℃の洗滌をし、次に９６℃で０．３ｍｌの緩衝液Ｃに１
ｍｌ当り４０ミクログラムの兎肝ｔＲＮＡを加えたも
の、中で２分間加熱してＲＮＡを取り出した。そのエタ
ノール沈澱物を急冷の後、そのＲＮＡは２ミクロリット
ルの水に溶解した。０．７ミクロリットルのＲＮＡを１
０個のアフリカツメガエル卵細胞に注射し、１９℃１８
時間の保温後、その卵細胞を孵卵液中でホモゲナイズし
（Ｓｈｕ１ｍａｎ ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ，１９８０）、
そのホモゲネート０．１５ｍｌをポリ（ｒＩ）（ｒＣ）
−アガロース粒と混合した。その粒は３０℃で１６時
間、２．５ｍＭの（３２Ｐ）−アルファーＡＴＰ（０．
３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）と１０ｍＭジチオトレイトールとの
混合物中で保温し、この１０ミクロリットルの液相部を
０．３５単位のバクテリア アルカリ フォスファター
ゼと共に３０ｍＭのＴｒｉｓ−ｂａｓｅ中で３７℃６０
分の保温をした。その消化物はＷａｔｍａｎ ３ＭＭ濾
紙上で濾紙電気泳動に３，０００Ｖで４時間かけ、
（２′−５′）ＡｐＡと（２′−５′）ＡｐＡｐＡに相
当する汚点を切り取り、シンチレーション測定をした。
ＤＮＡ−選抜ＲＮＡから、１ミクロリットルを取り網赤
血球分解物でＷｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ ｅｔ ａｌ，
（１９７９）に述べられたようにｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳
に用い、資料の全ｍＲＮＡ活性の測定を行った。
【００３６】ＤＮＡ選抜ＲＮＡ資料中の（２′−５′）
オリゴＡシンセターゼ活性の全ｍＲＮＡ活性に対する比
は各濾紙毎に計算した。１２の各個別プラズミドからの
２５０合併資料のプール１７４を持つ濾紙は、他の合併
資料のものやｐＢＲ３２２ＤＮＡのものに比し１０倍高
い値が常に現れた。プール１７４の各個のクローンのプ
ラズミドを各個別の濾紙で試し、１７４−３が常に、
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮＡの全ｍＲ
ＮＡに対しての濃度について全ＲＮＡ又はｐＢＲ３２２
のＤＮＡ選抜ＲＮＡに比し３５−１００倍の高さを示し
た（Ｔａｂ１ｅ１）。クローン１７４−３は、（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼｃＤＮＡと同定され、Ｅ−
ｃＤＮＡと命名した。このｃＤＮＡの構造と配列とを図
１に示す。このＥ−ｃＤＮＡクローンはその酵素のカル
ボキシ末端のアミノ酸を１００個塩基配列中に保有し、
ポリＡの尾の前に翻訳されない１９２塩基長の部位を持
つ。
オリゴＡシンセターゼ活性の全ｍＲＮＡ活性に対する比
は各濾紙毎に計算した。１２の各個別プラズミドからの
２５０合併資料のプール１７４を持つ濾紙は、他の合併
資料のものやｐＢＲ３２２ＤＮＡのものに比し１０倍高
い値が常に現れた。プール１７４の各個のクローンのプ
ラズミドを各個別の濾紙で試し、１７４−３が常に、
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮＡの全ｍＲ
ＮＡに対しての濃度について全ＲＮＡ又はｐＢＲ３２２
のＤＮＡ選抜ＲＮＡに比し３５−１００倍の高さを示し
た（Ｔａｂ１ｅ１）。クローン１７４−３は、（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼｃＤＮＡと同定され、Ｅ−
ｃＤＮＡと命名した。このｃＤＮＡの構造と配列とを図
１に示す。このＥ−ｃＤＮＡクローンはその酵素のカル
ボキシ末端のアミノ酸を１００個塩基配列中に保有し、
ポリＡの尾の前に翻訳されない１９２塩基長の部位を持
つ。
【００３７】Ｔａｂｌｅ １ （２′−５′）オリゴＡシンセターゼｃＤＮＡのクロー
ンの交雑−翻訳による同定 誘起ＲＮＡの卵細胞注射（２）により測定したＥｍＲＮ
Ａの活性
ンの交雑−翻訳による同定 誘起ＲＮＡの卵細胞注射（２）により測定したＥｍＲＮ
Ａの活性
【００３８】
【表１】
【００３９】Ｂ） Ｅ−ｃＤＮＡの交雑による、インタ
ーフェロン−誘起（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ
ｍＲＮＡの測定 クローン１７４−３（Ｅ−ｃＤＮＡ）のプラズミドＤＮ
Ａは細胞の全ＲＮＡによる電気泳動諸汚点から相補的Ｒ
ＮＡを検出するのに使用できる。ポリＡ＋−ＲＮＡは２
０００／ｍｌのインターフェロンビータで種々の回数処
理したＳＶ８０細胞から調整して、その７ミクログラム
のＲＮＡは５０％フォルムアミドと６％のフォルムアル
デヒド中で変性し、１．３％のアガロースと６％のフォ
ルムアルデヒド中で電気泳動にかけ、Ｔｈｏｍａｓ（１
９８０）とＦｅｌｌｏｕｓ ｅｔａｌ，（１９８２）の
手順でニトロセルローズにブロットした。Ｍｅｒｌｉｎ
ｅｔ ａｌ，（１９８０）に依り、（３２Ｐ）−ガンマ
ーｄＣＴＰを用いて割れ目移動で構織付けしたそのＥ−
ｃＤＮＡプラズミドは、先のニトロセルローズの汚点と
交雑した。
ーフェロン−誘起（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ
ｍＲＮＡの測定 クローン１７４−３（Ｅ−ｃＤＮＡ）のプラズミドＤＮ
Ａは細胞の全ＲＮＡによる電気泳動諸汚点から相補的Ｒ
ＮＡを検出するのに使用できる。ポリＡ＋−ＲＮＡは２
０００／ｍｌのインターフェロンビータで種々の回数処
理したＳＶ８０細胞から調整して、その７ミクログラム
のＲＮＡは５０％フォルムアミドと６％のフォルムアル
デヒド中で変性し、１．３％のアガロースと６％のフォ
ルムアルデヒド中で電気泳動にかけ、Ｔｈｏｍａｓ（１
９８０）とＦｅｌｌｏｕｓ ｅｔａｌ，（１９８２）の
手順でニトロセルローズにブロットした。Ｍｅｒｌｉｎ
ｅｔ ａｌ，（１９８０）に依り、（３２Ｐ）−ガンマ
ーｄＣＴＰを用いて割れ目移動で構織付けしたそのＥ−
ｃＤＮＡプラズミドは、先のニトロセルローズの汚点と
交雑した。
【００４０】ＳＶ８０細胞中で、インターフェロン処理
で同時に誘起された三種のＲＮＡ、３．６キロベースの
大きいＲＮＡ１つと１．８５、１．６５キロベースの小
さいＲＮＡは、Ｅ−ｃＤＮＡと交雑する（図２）。非処
理のＳＶ８０細胞ではＥ−限定のＲＮＡは見出せない。
４時間目に現れるこの三種のＲＮＡは１２時間で最大値
となり、その後徐々に減少する。この諸ＲＮＡはインタ
ーフェロン処理後２４時間でも明瞭に検出される。わず
か４時間後に出現する別のＲＮＡ諸種は、更に安定度の
高い諸種の前駆体である可能性が強い。同じ三種のＲＮ
Ａは、インターフェロン処理を受けたヒト２倍体繊維芽
細胞にも見られる。しかし、リンパ芽球Ｎａｍａｌｖａ
細胞のような造血細胞系の細胞では、一つの主要種だけ
がＥ−ｃＤＮＡと雑種化し（図２）それは１．８５キロ
ベースのＲＮＡ種に相当する。同様のＲＮＡパターンが
多種のリンパ芽球細胞である赤血球ＨＬ−６０および原
モノサイトＵ９３７に見られる。
で同時に誘起された三種のＲＮＡ、３．６キロベースの
大きいＲＮＡ１つと１．８５、１．６５キロベースの小
さいＲＮＡは、Ｅ−ｃＤＮＡと交雑する（図２）。非処
理のＳＶ８０細胞ではＥ−限定のＲＮＡは見出せない。
４時間目に現れるこの三種のＲＮＡは１２時間で最大値
となり、その後徐々に減少する。この諸ＲＮＡはインタ
ーフェロン処理後２４時間でも明瞭に検出される。わず
か４時間後に出現する別のＲＮＡ諸種は、更に安定度の
高い諸種の前駆体である可能性が強い。同じ三種のＲＮ
Ａは、インターフェロン処理を受けたヒト２倍体繊維芽
細胞にも見られる。しかし、リンパ芽球Ｎａｍａｌｖａ
細胞のような造血細胞系の細胞では、一つの主要種だけ
がＥ−ｃＤＮＡと雑種化し（図２）それは１．８５キロ
ベースのＲＮＡ種に相当する。同様のＲＮＡパターンが
多種のリンパ芽球細胞である赤血球ＨＬ−６０および原
モノサイトＵ９３７に見られる。
【００４１】繊維芽細胞やリンパ細胞に見られる異型の
Ｅ−限定ＲＮＡパターンは、これらの細胞内の（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼの異型に相当する。リンパ
細胞は分子量３０，０００ダルトンの酵素を持つが、繊
維芽細胞では分子量８０，０００ダルトンと３０，００
０ダルトンの２型をＲｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ，（１９８
２）の発表のように含有している。小さい１．８５キロ
ベースｍＲＮＡは３０，０００Ｍｒの酵素をコードする
に十分の長さがあるが、大型の方には足りない。一方、
３．６キロベースのＥ−ｍＲＮＡは８０，０００Ｍｒの
型の酵素をコードする。三型のＥ−限定ＲＮＡ種は全部
ヒトのゲノムＤＮＡの単クローンと交雑し、３．６キロ
ベースのＲＮＡは１．８５キロベースのＲＮＡと比べて
インターフェロンエクソンを一つ余分に持っている。
Ｅ−限定ＲＮＡパターンは、これらの細胞内の（２′−
５′）オリゴＡシンセターゼの異型に相当する。リンパ
細胞は分子量３０，０００ダルトンの酵素を持つが、繊
維芽細胞では分子量８０，０００ダルトンと３０，００
０ダルトンの２型をＲｅｖｅｌ ｅｔ ａｌ，（１９８
２）の発表のように含有している。小さい１．８５キロ
ベースｍＲＮＡは３０，０００Ｍｒの酵素をコードする
に十分の長さがあるが、大型の方には足りない。一方、
３．６キロベースのＥ−ｍＲＮＡは８０，０００Ｍｒの
型の酵素をコードする。三型のＥ−限定ＲＮＡ種は全部
ヒトのゲノムＤＮＡの単クローンと交雑し、３．６キロ
ベースのＲＮＡは１．８５キロベースのＲＮＡと比べて
インターフェロンエクソンを一つ余分に持っている。
【００４２】白血球インターフェロン−アルファは繊維
芽細胞のインターフェロン−ベータと同じようにＥ．限
定ＲＮＡを誘起する。ＲＮＡに複数種がある事はＥ−ｃ
ＤＮＡとの交雑から明らかとなった。インターフェロン
にも異同がある。それらは総て（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼを誘起するが、違った型のＲＮＡや酵素も
誘起するだろう事を示唆する。異ったインターフェロン
種は、Ｅ−ｍＲＮＡ誘起の効率に差のある事もあり得
る。上記のＥ−ｃＤＮＡとの交雑検定で処理されるＲＮ
Ａは、種々の培養細胞から又はインターフェロン治療を
受けている患者から又はウイルス病の病人から或いは
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの昂進する病気
（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒｅｔ ａｌ．，１９８１）から調
整できる。ＲＮＡは他に白血球のような末梢血液からの
血球からも調整できる。電気泳動ブロットは点−交雑法
で代行でき、それではＲＮＡの資料を、ニトロセルロー
ズの上に一定の広さで円形、矩形等で直接設置する。そ
して放射性ｃＤＮＡはニトロセルローズ布上で直接に交
雑される。各円形又は矩形は次に直接計測又はオートラ
ヂオグラフフィルムの選別後にオートラヂオグラフする
事で測定される。
芽細胞のインターフェロン−ベータと同じようにＥ．限
定ＲＮＡを誘起する。ＲＮＡに複数種がある事はＥ−ｃ
ＤＮＡとの交雑から明らかとなった。インターフェロン
にも異同がある。それらは総て（２′−５′）オリゴＡ
シンセターゼを誘起するが、違った型のＲＮＡや酵素も
誘起するだろう事を示唆する。異ったインターフェロン
種は、Ｅ−ｍＲＮＡ誘起の効率に差のある事もあり得
る。上記のＥ−ｃＤＮＡとの交雑検定で処理されるＲＮ
Ａは、種々の培養細胞から又はインターフェロン治療を
受けている患者から又はウイルス病の病人から或いは
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼの昂進する病気
（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒｅｔ ａｌ．，１９８１）から調
整できる。ＲＮＡは他に白血球のような末梢血液からの
血球からも調整できる。電気泳動ブロットは点−交雑法
で代行でき、それではＲＮＡの資料を、ニトロセルロー
ズの上に一定の広さで円形、矩形等で直接設置する。そ
して放射性ｃＤＮＡはニトロセルローズ布上で直接に交
雑される。各円形又は矩形は次に直接計測又はオートラ
ヂオグラフフィルムの選別後にオートラヂオグラフする
事で測定される。
【００４３】代替法としては、インターフェロンにさら
した組織を生検して組織切片に原位置交雑で行う。脳の
ウイルス病又は腫瘍のためインターフェロンの投与を受
けた患者に対し投薬が莢壁内注射であったか体内注射で
あった時に脳インターフェロン処理を受けているかを測
るのに脳生検として優先的に応用される。この方法はイ
ンターフェロン投与が局所的に皮膚病斑の軟膏として行
われた時に皮膚生検に対して行われる。他に様々な応用
ができる事は明白である。組織片は固定し、原位置で放
射性ＤＮＡと交雑し、次に感度の良い感光剤でオートラ
ヂオグラフにかける。このｃＤＮＡは蛍光ヌクレオチド
で又は蛍光分子と結合するよう改造したヌクレオチドで
標識し、組織切片と交雑すれば蛍光顕微鏡で監視でき
る。
した組織を生検して組織切片に原位置交雑で行う。脳の
ウイルス病又は腫瘍のためインターフェロンの投与を受
けた患者に対し投薬が莢壁内注射であったか体内注射で
あった時に脳インターフェロン処理を受けているかを測
るのに脳生検として優先的に応用される。この方法はイ
ンターフェロン投与が局所的に皮膚病斑の軟膏として行
われた時に皮膚生検に対して行われる。他に様々な応用
ができる事は明白である。組織片は固定し、原位置で放
射性ＤＮＡと交雑し、次に感度の良い感光剤でオートラ
ヂオグラフにかける。このｃＤＮＡは蛍光ヌクレオチド
で又は蛍光分子と結合するよう改造したヌクレオチドで
標識し、組織切片と交雑すれば蛍光顕微鏡で監視でき
る。
【００４４】Ｅ−ｃＤＮＡの交雑が増加すれば、通常の
コントロール細胞ＲＮＡ又は組織資料と比較して、その
細胞や組織がインターフェロンにさらされた事を意味す
る。この方法は速断性（４−２４時間）と高感応性（ｍ
ｌ当り１〜２００単位のインターフェロン）のために外
来のインターフェロン投与又は患者の血液や組織での内
生インターフェロンの形成の後に非常に有用である。
コントロール細胞ＲＮＡ又は組織資料と比較して、その
細胞や組織がインターフェロンにさらされた事を意味す
る。この方法は速断性（４−２４時間）と高感応性（ｍ
ｌ当り１〜２００単位のインターフェロン）のために外
来のインターフェロン投与又は患者の血液や組織での内
生インターフェロンの形成の後に非常に有用である。
【００４５】例２ インターフェロンで誘導した５６，０００Ｍｒタンパク Ａ）クローニングしたＣ５６−ｃＤＮＡの単離 クローニングしたｃＤＮＡを例１に記述した組み換えプ
ラスミッドのライブラリーから単離した。 １． 使用された方法の原理は、判別ハイブリッド形成
であった。ニトロセルローズロ紙上に、生育させた３，
０００のバクテリアのクローンの２つの重複セットを、
インターフェロン−β（２００Ｕ／ｍｌ）で処理したＳ
Ｖ８０細胞の１７Ｓから１８ＳのポリＡ＋−ＲＮＡから
の（３２Ｐ）−ｃＤＮＡか、もしくは、無処理のＳＶ８
０細胞の全ポリＡ＋−ＲＮＡからの（３２Ｐ）−ｃＤＮ
Ａとハイブリッド形成を行なった。放射活性のｃＤＮＡ
は、例１におけるように、ｍＲＮＡから逆転写した。バ
クテリアのクローンのうち、役４０％が“インターフェ
ロン処理”ｃＤＮＡプローブと、強くハイブリッドを形
成し、８％が、明確な判別シグナルを与え、“無処理”
ｃＤＮＡとくらべて、優先的または、特別に“インター
フェロン処理”ｃＤＮＡとハイブリッド形成を行なっ
た。後者のグループのクローンを、次に、ニックトラン
スレーションによって放射活性ラベルをした各クローン
からのプラスミッドＤＮＡを、インターフェロンで処理
したＳＶ８０細胞から、及び、無処理の細胞から、ＲＮ
Ａの電気泳動ブロットとハイブリッドを形成することに
よってスクリーニングを行なった。この基準によって、
最初の３，０００のバクテリアのクローンのうち、１−
２％が、インターフェロンによって誘導されたｍＲＮＡ
に相当するプラスミッドｃＤＮＡクローンを含んでいる
ことが見出された。
ラスミッドのライブラリーから単離した。 １． 使用された方法の原理は、判別ハイブリッド形成
であった。ニトロセルローズロ紙上に、生育させた３，
０００のバクテリアのクローンの２つの重複セットを、
インターフェロン−β（２００Ｕ／ｍｌ）で処理したＳ
Ｖ８０細胞の１７Ｓから１８ＳのポリＡ＋−ＲＮＡから
の（３２Ｐ）−ｃＤＮＡか、もしくは、無処理のＳＶ８
０細胞の全ポリＡ＋−ＲＮＡからの（３２Ｐ）−ｃＤＮ
Ａとハイブリッド形成を行なった。放射活性のｃＤＮＡ
は、例１におけるように、ｍＲＮＡから逆転写した。バ
クテリアのクローンのうち、役４０％が“インターフェ
ロン処理”ｃＤＮＡプローブと、強くハイブリッドを形
成し、８％が、明確な判別シグナルを与え、“無処理”
ｃＤＮＡとくらべて、優先的または、特別に“インター
フェロン処理”ｃＤＮＡとハイブリッド形成を行なっ
た。後者のグループのクローンを、次に、ニックトラン
スレーションによって放射活性ラベルをした各クローン
からのプラスミッドＤＮＡを、インターフェロンで処理
したＳＶ８０細胞から、及び、無処理の細胞から、ＲＮ
Ａの電気泳動ブロットとハイブリッドを形成することに
よってスクリーニングを行なった。この基準によって、
最初の３，０００のバクテリアのクローンのうち、１−
２％が、インターフェロンによって誘導されたｍＲＮＡ
に相当するプラスミッドｃＤＮＡクローンを含んでいる
ことが見出された。
【００４６】これらのプラスミッドｃＤＮＡクローンの
うち、Ｃ５６と呼んだ１つが、特別に強い判別ハイブリ
ッド形成を示した。このＣ５６ＤＮＡは、インターフェ
ロンで処理した細胞に存在するが、コントロール細胞Ｒ
ＮＡには存在しない１８ＳＲＮＡとハイブリッドを形成
する（図３）。対照的に、インターフェロン処理によっ
て、ＳＶ８０細胞に、５倍に増加しているＨＬＡ−Ａ，
Ｂ，Ｃ ｍＲＮＡは、Ｃ５６ｍＲＮＡよりも誘導がはる
かに少いようであり、Ｆｉｇ．３の実験条件下では、
“無処理”ＲＮＡとも明確なシグナルを与える。ニトロ
セルローズロ紙に固定化したＣ５６ｃＤＮＡとハイブリ
ッドを形成することによって選ばれたｍＲＮＡは、続い
てフィルムから溶出され、（例１におけるように）網状
赤血球溶解産物のセルフリー系で翻訳し、３５Ｓ−メチ
オニンでラベルした翻訳産物を、Ｌｅａｍｌｅ（１９７
０）から応用したＷｅｉｓｓｅｎｂａｃｋら（１９７
９）が記述した方法に従ってＮａ−ｄｏｄｅｃｙｌ ｓ
ｕｌｆａｔｅ中でポリアクリルアミドゲル電気泳動によ
って分析した。Ｃ５６のｃＤＮＡで選ばれたＲＮＡは、
５６，０００Ｍｒタンパクに翻訳された。Ｃ５６ｃＤＮ
Ａの塩基配列のうち、５６，０００Ｍｒの、カルボキシ
ル末端の６５のアミノ酸が、その道の技術を持った人に
より、導き出された（図４）。
うち、Ｃ５６と呼んだ１つが、特別に強い判別ハイブリ
ッド形成を示した。このＣ５６ＤＮＡは、インターフェ
ロンで処理した細胞に存在するが、コントロール細胞Ｒ
ＮＡには存在しない１８ＳＲＮＡとハイブリッドを形成
する（図３）。対照的に、インターフェロン処理によっ
て、ＳＶ８０細胞に、５倍に増加しているＨＬＡ−Ａ，
Ｂ，Ｃ ｍＲＮＡは、Ｃ５６ｍＲＮＡよりも誘導がはる
かに少いようであり、Ｆｉｇ．３の実験条件下では、
“無処理”ＲＮＡとも明確なシグナルを与える。ニトロ
セルローズロ紙に固定化したＣ５６ｃＤＮＡとハイブリ
ッドを形成することによって選ばれたｍＲＮＡは、続い
てフィルムから溶出され、（例１におけるように）網状
赤血球溶解産物のセルフリー系で翻訳し、３５Ｓ−メチ
オニンでラベルした翻訳産物を、Ｌｅａｍｌｅ（１９７
０）から応用したＷｅｉｓｓｅｎｂａｃｋら（１９７
９）が記述した方法に従ってＮａ−ｄｏｄｅｃｙｌ ｓ
ｕｌｆａｔｅ中でポリアクリルアミドゲル電気泳動によ
って分析した。Ｃ５６のｃＤＮＡで選ばれたＲＮＡは、
５６，０００Ｍｒタンパクに翻訳された。Ｃ５６ｃＤＮ
Ａの塩基配列のうち、５６，０００Ｍｒの、カルボキシ
ル末端の６５のアミノ酸が、その道の技術を持った人に
より、導き出された（図４）。
【００４７】インターフェロン−β（２００Ｕ／ｍｌ）
で、時間を種々変えて処理したＳＶ８０から抽出したＲ
ＮＡに対するＣ５６ｃＤＮＡのハイブリッド形成からＣ
５６ｍＲＮＡが、インターフェロンを加えてから１時間
後に現れ始めるということがわかる（図５）。Ｃ５６Ｒ
ＮＡは４時間後にその極大に達するが、しかし、減少は
するものも、２４時間後もまだ検出できる。Ｃ５６ｍＲ
ＮＡの誘導は、倍数体、線維芽細腕、及びリンパ芽球様
細胞においても示される。誘導は、インターフェロン１
０から２００単位／ｍｌの間で濃度に比例していた。
で、時間を種々変えて処理したＳＶ８０から抽出したＲ
ＮＡに対するＣ５６ｃＤＮＡのハイブリッド形成からＣ
５６ｍＲＮＡが、インターフェロンを加えてから１時間
後に現れ始めるということがわかる（図５）。Ｃ５６Ｒ
ＮＡは４時間後にその極大に達するが、しかし、減少は
するものも、２４時間後もまだ検出できる。Ｃ５６ｍＲ
ＮＡの誘導は、倍数体、線維芽細腕、及びリンパ芽球様
細胞においても示される。誘導は、インターフェロン１
０から２００単位／ｍｌの間で濃度に比例していた。
【００４８】Ｃ５６ｍＲＮＡは、後者は能率が悪かった
が、インターフェロンーα、インターフェロン−γによ
っても誘導された。このｍＲＮＡが、未処理の細胞に存
在していないことと、インターフェロンを添加した後、
急速に増加することにより、Ｃ５６ｃＤＮＡは、細胞の
インターフェロンに対する反応を評価するための素晴ら
しいプローブとなっている例１中のＥ−ｃＤＮＡに対し
て、記述された技術は、同様にＣ５６ｃＤＮＡにも適用
できる。インターフェロンによって誘導されたｍＲＮＡ
に相当する多数のｃＤＮＡが手に入るということは、新
しい展望を提供している。特に、Ｅ−ｍＲＮＡやＣ５６
ｍＲＮＡを誘導するためよりも、ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ
ｍＲＮＡを誘導するために、インターフェロンは、１／
１００の濃度しか必要としない。（Ｗａｌｌａｃｈら、
（１９８２））；他方、α−ｄのようなインターフェロ
ン−αの亜種は、ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ ｍＲＮＡを誘導
するのに必要な濃度より１００倍低い濃度でＥ−ｍＲＮ
Ａを誘導できる。異った、クローン化されるｃＤＮＡを
同じＲＮＡサンプルとハイブリッド結合させることによ
り、どういう種類のインターフェロンが含まれるかを示
すことができる。かくして、唯１つのｃＤＮＡプローブ
を用いるよりも、異ったｃＤＮＡの比較からもっと多く
の知識が誘導できる。
が、インターフェロンーα、インターフェロン−γによ
っても誘導された。このｍＲＮＡが、未処理の細胞に存
在していないことと、インターフェロンを添加した後、
急速に増加することにより、Ｃ５６ｃＤＮＡは、細胞の
インターフェロンに対する反応を評価するための素晴ら
しいプローブとなっている例１中のＥ−ｃＤＮＡに対し
て、記述された技術は、同様にＣ５６ｃＤＮＡにも適用
できる。インターフェロンによって誘導されたｍＲＮＡ
に相当する多数のｃＤＮＡが手に入るということは、新
しい展望を提供している。特に、Ｅ−ｍＲＮＡやＣ５６
ｍＲＮＡを誘導するためよりも、ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ
ｍＲＮＡを誘導するために、インターフェロンは、１／
１００の濃度しか必要としない。（Ｗａｌｌａｃｈら、
（１９８２））；他方、α−ｄのようなインターフェロ
ン−αの亜種は、ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ ｍＲＮＡを誘導
するのに必要な濃度より１００倍低い濃度でＥ−ｍＲＮ
Ａを誘導できる。異った、クローン化されるｃＤＮＡを
同じＲＮＡサンプルとハイブリッド結合させることによ
り、どういう種類のインターフェロンが含まれるかを示
すことができる。かくして、唯１つのｃＤＮＡプローブ
を用いるよりも、異ったｃＤＮＡの比較からもっと多く
の知識が誘導できる。
【００４９】例３ インターフェロン誘導ｍＲＮＡｓの測定のためのキット このキットは、デオキシ−リボヌクレアーゼＩと（３２
Ｐ）−γ−ｄＣＴＰとのニック翻訳のための試薬ニトロ
セルローズメンブラン上のハイブリッド形成のための試
薬、及び細胞からのＲＮＡ抽出用の試薬と同じく（２′
−５′）オリゴＡシンテターゼのｍＲＮＡに対して、特
異的な、そして、ここに記述した、５６，０００Ｍｒタ
ンパクのｍＲＮＡに特異的なクローン化したｃＤＮＡを
提供するだろう。
Ｐ）−γ−ｄＣＴＰとのニック翻訳のための試薬ニトロ
セルローズメンブラン上のハイブリッド形成のための試
薬、及び細胞からのＲＮＡ抽出用の試薬と同じく（２′
−５′）オリゴＡシンテターゼのｍＲＮＡに対して、特
異的な、そして、ここに記述した、５６，０００Ｍｒタ
ンパクのｍＲＮＡに特異的なクローン化したｃＤＮＡを
提供するだろう。
【００５０】例４ １．６ＫＢ（２′−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮ
Ａに対するｃＤＮＡの配列 ヒトの細胞中のインターフェロンによる１．６Ｋｂ
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの末端であること
がわかった（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）部分的なＥ１
ｃＤＮＡクローン（Ｍｅｒｌｉｎら、１９８３）が、Ｓ
Ｖ８０細胞ＲＮＡから、ラムダーｇｔ１０ｃＤＮＡライ
ブラリーをスクリーニングするのに用いられた（Ｗｏｌ
ｆとＲｏｔｔｅｒ、１９８５）。制限酵素を用いたマッ
ピングにより、クローンラムダーｇｔ１０ ９−２はｐ
ＢＲ（９−２１ｃＤＮＡ）中にサブクローンニングを行
った１．３２Ｋｂ ＥｃｏＲ１インサート（図６Ａ）の
３′の端に、Ｅ１ｃＤＮＡを含むことが見出された。
配列決定は、図６Ａに概説したように行なわれ、以前に
Ｅ１ｃＤＮＡについて報告されたｃ−末端と３′の翻訳
されていない配列を含むことが確認された（Ｍｅｒｌｉ
ｎら、１９８３）。９−２１ｃＤＮＡ配列（図７）は、
ＡＴＧＡＴＧ配列において出発する３４６アミノ酸のオ
ープンリーディングフレームを予告する。タンパクのコ
ーディング配列の３塩基周期性に基いたコンピューター
プログラム（Ｔｒｉｆｏｎｏｖ，１９８４）により唯一
の矛盾しないリーディングフレームは、このＡＴＧＡＴ
Ｇから出発するものであることがわかった。翻訳が、こ
の場合の２番目のＡＴＧにおいてはじまることは可能で
ある。何故なら、それは、−３におけるＡが前にあり、
コンセンサス翻訳イニシエーション配列と相同性がある
唯一のものであるからである（Ｋｏｚａｋ，１９８
４）。
Ａに対するｃＤＮＡの配列 ヒトの細胞中のインターフェロンによる１．６Ｋｂ
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの末端であること
がわかった（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）部分的なＥ１
ｃＤＮＡクローン（Ｍｅｒｌｉｎら、１９８３）が、Ｓ
Ｖ８０細胞ＲＮＡから、ラムダーｇｔ１０ｃＤＮＡライ
ブラリーをスクリーニングするのに用いられた（Ｗｏｌ
ｆとＲｏｔｔｅｒ、１９８５）。制限酵素を用いたマッ
ピングにより、クローンラムダーｇｔ１０ ９−２はｐ
ＢＲ（９−２１ｃＤＮＡ）中にサブクローンニングを行
った１．３２Ｋｂ ＥｃｏＲ１インサート（図６Ａ）の
３′の端に、Ｅ１ｃＤＮＡを含むことが見出された。
配列決定は、図６Ａに概説したように行なわれ、以前に
Ｅ１ｃＤＮＡについて報告されたｃ−末端と３′の翻訳
されていない配列を含むことが確認された（Ｍｅｒｌｉ
ｎら、１９８３）。９−２１ｃＤＮＡ配列（図７）は、
ＡＴＧＡＴＧ配列において出発する３４６アミノ酸のオ
ープンリーディングフレームを予告する。タンパクのコ
ーディング配列の３塩基周期性に基いたコンピューター
プログラム（Ｔｒｉｆｏｎｏｖ，１９８４）により唯一
の矛盾しないリーディングフレームは、このＡＴＧＡＴ
Ｇから出発するものであることがわかった。翻訳が、こ
の場合の２番目のＡＴＧにおいてはじまることは可能で
ある。何故なら、それは、−３におけるＡが前にあり、
コンセンサス翻訳イニシエーション配列と相同性がある
唯一のものであるからである（Ｋｏｚａｋ，１９８
４）。
【００５１】このようにして、１．６Ｋｂ（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼＲＮＡによってコードされ
た酵素は、４１，７００の分子量を持ち、ＥｌｃＤＮＡ
とハイブリッド結合をしたｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳産物
（Ｍｅｒｌｉｎら１９８３）のＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動によってみられる、みかけ上の３８，
０００−Ｍｒのタンパクとよく一致する。オープンリー
ディングフレームによって予告されたｃ−末端ヘプタデ
カペプチドが化学的に合成され、ラビットを免疫するの
に用いられた。得られた抗血清（図１２のｃ）は、未処
理の細胞には存在していないインターフェロンによって
処理した細胞の３５−Ｓメチオニンラベルの抽出物から
のＳＤＳ電気泳動中の３８，０００−Ｍｒに移動するタ
ンパクを特異的に沈澱させる。２つの実験により、この
タンパクは、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性
をもつことが確かめられた。それは、ポリ（ｒＩ）（ｒ
Ｃ）アガロース・カラムを通すことによって抽出物から
除かれ、免疫沈澱後残っている上澄液は酵素活性の大部
分がなくなった。
５′）オリゴＡシンテターゼＲＮＡによってコードされ
た酵素は、４１，７００の分子量を持ち、ＥｌｃＤＮＡ
とハイブリッド結合をしたｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳産物
（Ｍｅｒｌｉｎら１９８３）のＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動によってみられる、みかけ上の３８，
０００−Ｍｒのタンパクとよく一致する。オープンリー
ディングフレームによって予告されたｃ−末端ヘプタデ
カペプチドが化学的に合成され、ラビットを免疫するの
に用いられた。得られた抗血清（図１２のｃ）は、未処
理の細胞には存在していないインターフェロンによって
処理した細胞の３５−Ｓメチオニンラベルの抽出物から
のＳＤＳ電気泳動中の３８，０００−Ｍｒに移動するタ
ンパクを特異的に沈澱させる。２つの実験により、この
タンパクは、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性
をもつことが確かめられた。それは、ポリ（ｒＩ）（ｒ
Ｃ）アガロース・カラムを通すことによって抽出物から
除かれ、免疫沈澱後残っている上澄液は酵素活性の大部
分がなくなった。
【００５２】例５ １．８ＫＢ（２′−５′）オリゴシンテターゼｍＲＮＡ
に対するｃＤＮＡの配列 １．８Ｋｂ ＲＮＡの追加のエクソン（Ｂｅｎｅｃｈ
ら、１９８５；図９をみよ。）に相当する遺伝子ＤＮＡ
断片ＳＶ８０ＲＮＡの同じラムダーｇｔ１０ｃＤＮＡラ
イブラリーからＥ１８ｃＤＮＡクローン−８−１を単離
するプローブとして用いられた。Ｅ１８ｃＤＮＡクロー
ンの制限マップ（図６Ｂ）はその５′末端がＥ１６ｃＤ
ＮＡの一部であるが、３′末端は違っているということ
を確かめた。配列決定の結果（図７）結合部は、Ｅ１６
９−２１ｃＤＮＡクローンの１０７１のヌクレオチド
の位置にあり、Ｅ１６の最後の２４７ヌクレオチドが異
なるポリアデニル化の位置によって終っている５１５の
ヌクレオチドの長い配列によって置き換っている。この
差は、ノーザンブロット上にみられる２つのｍＲＮＡの
間の大きさの差０．２Ｋｂを説明する。Ｅ１８ｃＤＮＡ
の５′の部分は、Ｅ１６ｃＤＮＡの配列から、塩基の変
化がないことを示しているが、未完成である。下に述べ
られる遺伝子のマッピングによると、１．６と１．８Ｋ
ｂ ｍＲＮＡｓの両者とも同じ５′末端を有している。
に対するｃＤＮＡの配列 １．８Ｋｂ ＲＮＡの追加のエクソン（Ｂｅｎｅｃｈ
ら、１９８５；図９をみよ。）に相当する遺伝子ＤＮＡ
断片ＳＶ８０ＲＮＡの同じラムダーｇｔ１０ｃＤＮＡラ
イブラリーからＥ１８ｃＤＮＡクローン−８−１を単離
するプローブとして用いられた。Ｅ１８ｃＤＮＡクロー
ンの制限マップ（図６Ｂ）はその５′末端がＥ１６ｃＤ
ＮＡの一部であるが、３′末端は違っているということ
を確かめた。配列決定の結果（図７）結合部は、Ｅ１６
９−２１ｃＤＮＡクローンの１０７１のヌクレオチド
の位置にあり、Ｅ１６の最後の２４７ヌクレオチドが異
なるポリアデニル化の位置によって終っている５１５の
ヌクレオチドの長い配列によって置き換っている。この
差は、ノーザンブロット上にみられる２つのｍＲＮＡの
間の大きさの差０．２Ｋｂを説明する。Ｅ１８ｃＤＮＡ
の５′の部分は、Ｅ１６ｃＤＮＡの配列から、塩基の変
化がないことを示しているが、未完成である。下に述べ
られる遺伝子のマッピングによると、１．６と１．８Ｋ
ｂ ｍＲＮＡｓの両者とも同じ５′末端を有している。
【００５３】Ｅ１６配列から分れた１８ｃＤＮＡの３′
領域は、５４のコドンの後終るオープンリーディングフ
レームを含んでいる。３５０のヌクレオチドの長さの翻
訳されない領域を残しているリーディングフレームは、
タンパク−コーディング配列の３塩基の周期性に基いた
コンピュータープログラム（Ｔｒｉｆｏｎｏｖ，１９８
４）によって確かめられた。交互のより長いオープンリ
ーディングフレームは、Ｅ１６ｃＤＮＡに共通な５′部
分のように、同じコンピューティッドフレーズの中には
ないだろう。１．６と１．８Ｋｂ ｍＲＮＡタンパク産
物のｃ−末端上のハイドロパシープロット（Ｋｙｔｅと
Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２）により（２′−５′）
オリゴシンテターゼ（図８）の２つの形の間に著しい違
いが示される。Ｅ１６タンパクのｃ末端は、非常に疎水
性であるが、Ｅ１８タンパクのｃ末端は親水性であり、
２つの酸性領域をもっている（ＡＳＰ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｔｈｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−とＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓ
ｐ）（図７）さらに、Ｅ１８産物のｃ末端に可能なグリ
コシル化の場所が存在している。（図７） ９−２４ ｃＤＮＡを１ａｃ Ｚ遺伝子とフェーズをあ
わせて融合するように、λｇｔ１１にサブクローンニン
グを行なった。このフェーズを含んでいるＥ．Ｃｏｌｉ
のリソーゲンは、ポリ（ｒＩ）（ｒＣ）アガロースに結
合した後、明らかに（２′−５′）オリゴＡシンテター
ゼ活性を示した。一方、９−２１ｃＤＮＡが反対の方向
に融合した場合には、何も活性が生じなかった（図１
３）。
領域は、５４のコドンの後終るオープンリーディングフ
レームを含んでいる。３５０のヌクレオチドの長さの翻
訳されない領域を残しているリーディングフレームは、
タンパク−コーディング配列の３塩基の周期性に基いた
コンピュータープログラム（Ｔｒｉｆｏｎｏｖ，１９８
４）によって確かめられた。交互のより長いオープンリ
ーディングフレームは、Ｅ１６ｃＤＮＡに共通な５′部
分のように、同じコンピューティッドフレーズの中には
ないだろう。１．６と１．８Ｋｂ ｍＲＮＡタンパク産
物のｃ−末端上のハイドロパシープロット（Ｋｙｔｅと
Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２）により（２′−５′）
オリゴシンテターゼ（図８）の２つの形の間に著しい違
いが示される。Ｅ１６タンパクのｃ末端は、非常に疎水
性であるが、Ｅ１８タンパクのｃ末端は親水性であり、
２つの酸性領域をもっている（ＡＳＰ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ
−Ｔｈｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−とＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓ
ｐ）（図７）さらに、Ｅ１８産物のｃ末端に可能なグリ
コシル化の場所が存在している。（図７） ９−２４ ｃＤＮＡを１ａｃ Ｚ遺伝子とフェーズをあ
わせて融合するように、λｇｔ１１にサブクローンニン
グを行なった。このフェーズを含んでいるＥ．Ｃｏｌｉ
のリソーゲンは、ポリ（ｒＩ）（ｒＣ）アガロースに結
合した後、明らかに（２′−５′）オリゴＡシンテター
ゼ活性を示した。一方、９−２１ｃＤＮＡが反対の方向
に融合した場合には、何も活性が生じなかった（図１
３）。
【００５４】このＥ．Ｃｏｌｉにおける発現は、ｃＤＮ
Ａは確かにｄｓＲＮＡで活性化された（２′−５′）オ
リゴＡシンテターゼをコードする構造遺伝子に相当して
おり、インターフェロンで誘導されたＲＮＡによりコー
ドされた約４０Ｋｄのタンパクは、酵素そのものであ
り、制御因子ではないということを証明している。この
タンパクは、酵素活性を示すために、翻訳後の修飾は必
要としないようである。９−２１ｃＤＮＡを含むトラン
スフォームした細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉラムダーｇｔ１１−Ｅ１６と呼ばれ、取得番号１４
９６の下にＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎ Ｃｕ
ｌｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅ
ｓ，パストール研究所、２５ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅ
ｕｒ Ｒｅｕｘ，７５７２４−Ｐａｒｉｓ−Ｃｅｄｅｘ
１５、フランスに預けられている。この寄託は、パテ
ントの手続きの目的のために、微生物の寄託の国際的認
識に関するブタペスト条約に従って行なわれたものであ
る。
Ａは確かにｄｓＲＮＡで活性化された（２′−５′）オ
リゴＡシンテターゼをコードする構造遺伝子に相当して
おり、インターフェロンで誘導されたＲＮＡによりコー
ドされた約４０Ｋｄのタンパクは、酵素そのものであ
り、制御因子ではないということを証明している。この
タンパクは、酵素活性を示すために、翻訳後の修飾は必
要としないようである。９−２１ｃＤＮＡを含むトラン
スフォームした細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉラムダーｇｔ１１−Ｅ１６と呼ばれ、取得番号１４
９６の下にＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎ Ｃｕ
ｌｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅ
ｓ，パストール研究所、２５ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅ
ｕｒ Ｒｅｕｘ，７５７２４−Ｐａｒｉｓ−Ｃｅｄｅｘ
１５、フランスに預けられている。この寄託は、パテ
ントの手続きの目的のために、微生物の寄託の国際的認
識に関するブタペスト条約に従って行なわれたものであ
る。
【００５５】例６ ヒト（２′−５′）オリゴシンテターゼ遺伝子の組織化 ３つの重なり合った遺伝子のクローンが、１つが、ヒト
血球細胞ＤＮＡ（Ｍｏｒｙら、１９８１）の部分的Ｅｃ
ｏＲ１消化物のライブラリーから（Ｍａｎｉａｔｉｓ
ら、１９７８）Ｅ１ｃＤＮＡをプローブとして用いて単
離した。（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８７）。遺伝子クロー
ンは、ヒトＤＮＡの約２９Ｋｂを表しており、ライブラ
リーをスクリーニングしても、１個のＥ遺伝子以上に対
する証拠は存在しなかった。遺伝子的ＤＮＡのサザーン
ブロットは、単一遺伝子の存在と一致していた（図
９）。ノーザンブロット解析によって、遺伝子ＤＮＡ断
片をプローブとするノーザンブロット解析により、Ｓ１
ヌクレアーゼマッピングと配列決定により、Ｅ１６ｃＤ
ＮＡ９−２１は、遺伝子上の５エキソンに相当すること
が示された。（図９）
血球細胞ＤＮＡ（Ｍｏｒｙら、１９８１）の部分的Ｅｃ
ｏＲ１消化物のライブラリーから（Ｍａｎｉａｔｉｓ
ら、１９７８）Ｅ１ｃＤＮＡをプローブとして用いて単
離した。（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８７）。遺伝子クロー
ンは、ヒトＤＮＡの約２９Ｋｂを表しており、ライブラ
リーをスクリーニングしても、１個のＥ遺伝子以上に対
する証拠は存在しなかった。遺伝子的ＤＮＡのサザーン
ブロットは、単一遺伝子の存在と一致していた（図
９）。ノーザンブロット解析によって、遺伝子ＤＮＡ断
片をプローブとするノーザンブロット解析により、Ｓ１
ヌクレアーゼマッピングと配列決定により、Ｅ１６ｃＤ
ＮＡ９−２１は、遺伝子上の５エキソンに相当すること
が示された。（図９）
【００５６】ＡＴＧＡＴＧ配列は、エクソン３に見出さ
れたが、停止コドンと１．６ＫｂＲＮＡのポリアデニレ
ーションの位置を持った翻訳されない領域は、エクソン
７中に見出された。別の５′エクソン１と２の構造が下
に記してある。イントローエキソン境界の配列が決定さ
れ（Ｔａｂｌｅ ２）スプライスアクセプター、ドナー
サイトに対するＣＡＧとＧＴ規則にしたがう（Ｂｒｅａ
ｔｈｎａｃｈ ａｎｄＣｈａｍｂｏｎ，１９８１）。最
近Ｋｅｌｌｅｒ（１９８４）によって総説されたよう
に、ＣＴＧＡＣ／Ｔは、共通してスプライスアクセプタ
ーから遠くないところに見出される。（アクセプターサ
イト：Ｔａｂｌｅ ２）Ｋｅｌｅｒ（１９８４）によ
り、ラリアートモデルで役割を演じていることが指摘さ
れているＣＴＧＡＣ配列とイントロン−ドナーの相補性
に加えて、ＣＴＧＡＣ／Ｔ領域が、イントロン／エクソ
ンの３′境界の配列と相補性があるということは注目す
べきことである。
れたが、停止コドンと１．６ＫｂＲＮＡのポリアデニレ
ーションの位置を持った翻訳されない領域は、エクソン
７中に見出された。別の５′エクソン１と２の構造が下
に記してある。イントローエキソン境界の配列が決定さ
れ（Ｔａｂｌｅ ２）スプライスアクセプター、ドナー
サイトに対するＣＡＧとＧＴ規則にしたがう（Ｂｒｅａ
ｔｈｎａｃｈ ａｎｄＣｈａｍｂｏｎ，１９８１）。最
近Ｋｅｌｌｅｒ（１９８４）によって総説されたよう
に、ＣＴＧＡＣ／Ｔは、共通してスプライスアクセプタ
ーから遠くないところに見出される。（アクセプターサ
イト：Ｔａｂｌｅ ２）Ｋｅｌｅｒ（１９８４）によ
り、ラリアートモデルで役割を演じていることが指摘さ
れているＣＴＧＡＣ配列とイントロン−ドナーの相補性
に加えて、ＣＴＧＡＣ／Ｔ領域が、イントロン／エクソ
ンの３′境界の配列と相補性があるということは注目す
べきことである。
【００５７】１．６ＫｂのｍＲＮＡによって生産される
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼのコーディング領
域を含む５エリクソンの配列は、酵素が異なるアミノ酸
組成（Ｔａｂｌｅ ３）をもった領域から成立っている
ことを示している。最初のエクソンのドメイン（６０ア
ミノ酸）は、アスパラギン酸に富んでおり、２番目では
（アミノ酸６１から１５６）アルギニンが優先してお
り、２番目の次のエクソンは（アミノ酸１５７から２１
８と２１９から２９５）リジンに富み、産物（２９６か
ら３６４）のｃ末端はプロリンとアラニンに富んでい
る。エクソンの番号のつけ方については、図７と図９を
見よ。ＣＧＡＴ／Ｃまたは、ＣＴＴＡＣ，ＣＴＧＴＣ
（Ｋｅｌｌｅｒ，１９８４）とスプライスアクセプタ−
ＣＡＧの間の自己・補性領域に下線が引いてある。ヒト（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ遺伝子のエク
ソン−イントロン境界
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼのコーディング領
域を含む５エリクソンの配列は、酵素が異なるアミノ酸
組成（Ｔａｂｌｅ ３）をもった領域から成立っている
ことを示している。最初のエクソンのドメイン（６０ア
ミノ酸）は、アスパラギン酸に富んでおり、２番目では
（アミノ酸６１から１５６）アルギニンが優先してお
り、２番目の次のエクソンは（アミノ酸１５７から２１
８と２１９から２９５）リジンに富み、産物（２９６か
ら３６４）のｃ末端はプロリンとアラニンに富んでい
る。エクソンの番号のつけ方については、図７と図９を
見よ。ＣＧＡＴ／Ｃまたは、ＣＴＴＡＣ，ＣＴＧＴＣ
（Ｋｅｌｌｅｒ，１９８４）とスプライスアクセプタ−
ＣＡＧの間の自己・補性領域に下線が引いてある。ヒト（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ遺伝子のエク
ソン−イントロン境界
【００５８】
【表２】
【００５９】１．６及び１．８Ｋｂ ＲＮＡｓ（図７を
見よ）の保持されたウンデカヌクレオチドをもったポリ
アデニレーションサイトには、下に点線が記されてい
る。カッコ内の数は、イントロンまたはエクソン（図９
を見よ）になっているＥｃｏＲＩ遺伝子断片の大きさで
ある。各エクソンの出発点と終点は、図７の９−２１Ｅ
ｃＤＮＡにおけるように数字がついている。Ｅ１６とＥ１８の（２′−５′）オリゴシンテターゼの
エクソンドメイン
見よ）の保持されたウンデカヌクレオチドをもったポリ
アデニレーションサイトには、下に点線が記されてい
る。カッコ内の数は、イントロンまたはエクソン（図９
を見よ）になっているＥｃｏＲＩ遺伝子断片の大きさで
ある。各エクソンの出発点と終点は、図７の９−２１Ｅ
ｃＤＮＡにおけるように数字がついている。Ｅ１６とＥ１８の（２′−５′）オリゴシンテターゼの
エクソンドメイン
【００６０】
【表３】
【００６１】Ｅ１８ｃＤＮＡ４８−１は不完全であるけ
れども、我々は、エクソン１−６（図９）がノーザンブ
ロット上の１．６Ｋｂと同様に１．８ＫｂのｍＲＮＡと
ハイブリッド結合することを見出した。２つのＲＮＡの
構造はエクソン７迄は同一であることはかなり確からし
い。Ｅ１８ｃＤＮＡを特徴づけるエクソン７の中央から
エクソン８への追加的スプライシングは、遺伝子ＤＮＡ
クローン中のこれらのイントロン−エクソンの境界の配
列を決定することにより確かめられた（Ｔａｂｌｅ
２）。Ｅ１８ｃＤＮＡ中に存在する切りつめたエクソン
７ａは１．６Ｋｂ ＲＮＡのポリアデニレーションの位
置を含む１．６Ｋｂのイントロンに続いている。エクソ
ン８はその遺伝子のユニークなＢａｍ Ｈ１の位置か
ら、９８ｂｐ下流で始まる（Ｔａｂｌｅ ２，図９）Ａ
ＡＴＡＡＡシグナルの二連の繰返しによって特徴づけら
れる１．８Ｋｂ ＲＮＡのポリアデニレーションサイト
によって終る。エクソン７と８は相同性がないけれど
も、その中で３番目のシチジンが、ポリアデニル化され
ている保持されたウンデカヌクレオチドＡＣＣＡＴＴＴ
ＡＴＴＣが両方のエクソン（Ｔａｂｌｅ ２）の端に存
在している。以前に指摘されたように、（Ｂｅｎｅｃｈ
ら、１９８５）ヘアピンループ構造が、両方の場合にそ
の保持されたウンデカヌクレオチドと、ＡＡＴＴＡＡＡ
領域の間に形成されることができる。このような構造
が、転写物の開裂と、ポリアデニル化が、エクソン７の
端でおこるか、エクソン８の端でおこるかを決定する、
細胞特有のメカニズムに関与しているかもしれない。上
記の遺伝子マッピングに基いて、１．８Ｋｂ ｍＲＮＡ
によってコードされる酵素は、最初の３４６のアミノ酸
中のＥ１６産物と同一であるべきであり、その次にアス
パラギン酸、グルタミン酸、ヌクレオチンに富んでい
る。５４のアミノ酸の長い領域が続く。４００のアミノ
酸の長さの、Ｅ１８酵素は４６，０００の分子量を持っ
ているであろう。
れども、我々は、エクソン１−６（図９）がノーザンブ
ロット上の１．６Ｋｂと同様に１．８ＫｂのｍＲＮＡと
ハイブリッド結合することを見出した。２つのＲＮＡの
構造はエクソン７迄は同一であることはかなり確からし
い。Ｅ１８ｃＤＮＡを特徴づけるエクソン７の中央から
エクソン８への追加的スプライシングは、遺伝子ＤＮＡ
クローン中のこれらのイントロン−エクソンの境界の配
列を決定することにより確かめられた（Ｔａｂｌｅ
２）。Ｅ１８ｃＤＮＡ中に存在する切りつめたエクソン
７ａは１．６Ｋｂ ＲＮＡのポリアデニレーションの位
置を含む１．６Ｋｂのイントロンに続いている。エクソ
ン８はその遺伝子のユニークなＢａｍ Ｈ１の位置か
ら、９８ｂｐ下流で始まる（Ｔａｂｌｅ ２，図９）Ａ
ＡＴＡＡＡシグナルの二連の繰返しによって特徴づけら
れる１．８Ｋｂ ＲＮＡのポリアデニレーションサイト
によって終る。エクソン７と８は相同性がないけれど
も、その中で３番目のシチジンが、ポリアデニル化され
ている保持されたウンデカヌクレオチドＡＣＣＡＴＴＴ
ＡＴＴＣが両方のエクソン（Ｔａｂｌｅ ２）の端に存
在している。以前に指摘されたように、（Ｂｅｎｅｃｈ
ら、１９８５）ヘアピンループ構造が、両方の場合にそ
の保持されたウンデカヌクレオチドと、ＡＡＴＴＡＡＡ
領域の間に形成されることができる。このような構造
が、転写物の開裂と、ポリアデニル化が、エクソン７の
端でおこるか、エクソン８の端でおこるかを決定する、
細胞特有のメカニズムに関与しているかもしれない。上
記の遺伝子マッピングに基いて、１．８Ｋｂ ｍＲＮＡ
によってコードされる酵素は、最初の３４６のアミノ酸
中のＥ１６産物と同一であるべきであり、その次にアス
パラギン酸、グルタミン酸、ヌクレオチンに富んでい
る。５４のアミノ酸の長い領域が続く。４００のアミノ
酸の長さの、Ｅ１８酵素は４６，０００の分子量を持っ
ているであろう。
【００６２】例７ 同一遺伝子を二者選一的スプライシングによって生産さ
れるヒト（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの２つの
形 ＳＶ８０ＲＮＡｓのノーザンブロット分析の結果、イン
ターフェロンに接触した後、１２時間迄に、Ｅ１ｃＤＮ
Ａとハイブリッドを作る３種の（１．６，１．８及び
３．６Ｋｂ）が蓄積することが明らかになった（Ｍｅｒ
ｌｉｎら、１９８３）。更にその外に不安定な転写物も
みられた。これらのＲＮＡｓの間の関係を遺伝的ＤＮＡ
クローン上の転写マッピングによって研究した。２つの
ヒト遺伝的ライブラリーにおいて、Ｅ１ｃＤＮＡは、ヒ
トＤＮＡ（図９）の２９Ｋｂを表す重なり合っている遺
伝的ＤＮＡのクローンの一系列のみを同定し、明らかに
ユニークな（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ遺伝子
（Ｂｅｎｅｃｈら、１９５５ａ）を含むことが見出され
た。Ｓ１ヌクレアーゼ分析と部分的遺伝子の配列決定に
より、９−２１（Ｅ１）のｃＤＮＡが５つのエクソンに
相当することが見出された。（図９Ａと図７の配列に３
−７の番号がついている）このｃＤＮＡの３′未満とポ
リアデニレーションの位置は、エクソン７の端にあるこ
とが同定された（図９）。
れるヒト（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの２つの
形 ＳＶ８０ＲＮＡｓのノーザンブロット分析の結果、イン
ターフェロンに接触した後、１２時間迄に、Ｅ１ｃＤＮ
Ａとハイブリッドを作る３種の（１．６，１．８及び
３．６Ｋｂ）が蓄積することが明らかになった（Ｍｅｒ
ｌｉｎら、１９８３）。更にその外に不安定な転写物も
みられた。これらのＲＮＡｓの間の関係を遺伝的ＤＮＡ
クローン上の転写マッピングによって研究した。２つの
ヒト遺伝的ライブラリーにおいて、Ｅ１ｃＤＮＡは、ヒ
トＤＮＡ（図９）の２９Ｋｂを表す重なり合っている遺
伝的ＤＮＡのクローンの一系列のみを同定し、明らかに
ユニークな（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ遺伝子
（Ｂｅｎｅｃｈら、１９５５ａ）を含むことが見出され
た。Ｓ１ヌクレアーゼ分析と部分的遺伝子の配列決定に
より、９−２１（Ｅ１）のｃＤＮＡが５つのエクソンに
相当することが見出された。（図９Ａと図７の配列に３
−７の番号がついている）このｃＤＮＡの３′未満とポ
リアデニレーションの位置は、エクソン７の端にあるこ
とが同定された（図９）。
【００６３】しかし、ＳＶ８０ＲＮＡのノーザンブロッ
トに対する、さらに下流のジェノミックＤＮＡ断片のハ
イブリッド形成により、１．６ＫｂのＲＮＡだけが、エ
クソン７のポリアデニレーションの位置に終っており、
１．８と３．６ＫｂのＲＮＡｓは１．６Ｋｂ下流に位置
しており、やはり、ポリアデニレーションの位置に終っ
ている（エクソン８、図９）、更に、別のエクソンとハ
イブリッド形成を行なうことが明らかとなった。このよ
うにして、９−２１（Ｅ１）ｃＤＮＡは、１．６Ｋｂ
ＲＮＡを呈しており、Ｅ１６ｃＤＮＡと名前をつけ直し
た。さらに、エクソンの３′の半分は、１．８ＫｂのＲ
ＮＡとはハイブリッド結合せず、転写がエクソン７から
エクソン８への中間からスプライシングイベントによっ
て形成されるということを示している。５′の上流のエ
キソンはすべて、１．６及び１．８Ｋｂ ＲＮＡｓとハ
イブリッド結合し、２ＲＮＡｓは、その３′末端におい
てのみ異なることを示している。このことは、ＳＶ８０
λｇｔ１０ｃＤＮＡライブラリーから１．８Ｋｂ ＲＮ
Ａに対する判別スプライシングを証明しており、エクソ
ン８（図４）のポリアデニレーションの位置で終ってい
る、（図４）ｃＤＮＡクローンの単離によって確かめら
れた（クローン４８−１または、Ｅ１８ｃＤＮＡ，図７
Ｂ）。同様なｃＤＮＡクローンが、Ｓａｕｎｄｅｒｓと
Ｗｉｌｌｉａｍｓ（１９８４）によるＤａｕｄｉ ｃＤ
ＮＡライブラリーにおいて見出された。Ｅ１８の配列
は、５１５のヌクレオチドによって置きかえられている
Ｅ１６の最後の２４７のヌクレオチドをロックしてお
り、１．６Ｋｂと１．８Ｋｂ ＲＮＡｓの間の大きさの
差を説明している。
トに対する、さらに下流のジェノミックＤＮＡ断片のハ
イブリッド形成により、１．６ＫｂのＲＮＡだけが、エ
クソン７のポリアデニレーションの位置に終っており、
１．８と３．６ＫｂのＲＮＡｓは１．６Ｋｂ下流に位置
しており、やはり、ポリアデニレーションの位置に終っ
ている（エクソン８、図９）、更に、別のエクソンとハ
イブリッド形成を行なうことが明らかとなった。このよ
うにして、９−２１（Ｅ１）ｃＤＮＡは、１．６Ｋｂ
ＲＮＡを呈しており、Ｅ１６ｃＤＮＡと名前をつけ直し
た。さらに、エクソンの３′の半分は、１．８ＫｂのＲ
ＮＡとはハイブリッド結合せず、転写がエクソン７から
エクソン８への中間からスプライシングイベントによっ
て形成されるということを示している。５′の上流のエ
キソンはすべて、１．６及び１．８Ｋｂ ＲＮＡｓとハ
イブリッド結合し、２ＲＮＡｓは、その３′末端におい
てのみ異なることを示している。このことは、ＳＶ８０
λｇｔ１０ｃＤＮＡライブラリーから１．８Ｋｂ ＲＮ
Ａに対する判別スプライシングを証明しており、エクソ
ン８（図４）のポリアデニレーションの位置で終ってい
る、（図４）ｃＤＮＡクローンの単離によって確かめら
れた（クローン４８−１または、Ｅ１８ｃＤＮＡ，図７
Ｂ）。同様なｃＤＮＡクローンが、Ｓａｕｎｄｅｒｓと
Ｗｉｌｌｉａｍｓ（１９８４）によるＤａｕｄｉ ｃＤ
ＮＡライブラリーにおいて見出された。Ｅ１８の配列
は、５１５のヌクレオチドによって置きかえられている
Ｅ１６の最後の２４７のヌクレオチドをロックしてお
り、１．６Ｋｂと１．８Ｋｂ ＲＮＡｓの間の大きさの
差を説明している。
【００６４】１．８ＫｂのＲＮＡは、したがって、Ｅ１
６タンパクとそのＣ末端が異なっている４６，０００−
Ｍｒのタンパクをコードしている。Ｅ１６タンパクと同
様に、Ｅ１８産物は、ｄｓＲＮＡ結合を有しており、
（２′−５′）Ｅ１８固有のＤＮＡ断片へのハイブリッ
ド形成によって選ばれたｍＲＮＡの翻訳によって示され
た（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。このことは、２種の
タンパクに共通な最初の３４６アミノ酸が触媒の場所を
含んでいることを示唆している。エクソン組成を試験す
ることにより、この共通の部分は、３つの塩基性領域が
続いているＮ末端酸性ドメインから構成されているよう
に思われる。Ｅ１６タンパクの最後の１８残基は、非常
に疎水性の領域を形成しており、それはＥ１８において
は、潜在的グリコシル化の位置を含んでいるもっと長い
水溶性で酸性の領域でおきかえられている。２つの酸素
の間のこの差は、それらが二量化したり、または他のタ
ンパク類や細胞構造と相互作用を行なう能力を決定する
かもしれない。例えば、Ｅ１６は膜と結合するが、Ｅ１
８はリボゾームや核の中の塩基性タンパクと相互作用を
行なうかもしれない。
６タンパクとそのＣ末端が異なっている４６，０００−
Ｍｒのタンパクをコードしている。Ｅ１６タンパクと同
様に、Ｅ１８産物は、ｄｓＲＮＡ結合を有しており、
（２′−５′）Ｅ１８固有のＤＮＡ断片へのハイブリッ
ド形成によって選ばれたｍＲＮＡの翻訳によって示され
た（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。このことは、２種の
タンパクに共通な最初の３４６アミノ酸が触媒の場所を
含んでいることを示唆している。エクソン組成を試験す
ることにより、この共通の部分は、３つの塩基性領域が
続いているＮ末端酸性ドメインから構成されているよう
に思われる。Ｅ１６タンパクの最後の１８残基は、非常
に疎水性の領域を形成しており、それはＥ１８において
は、潜在的グリコシル化の位置を含んでいるもっと長い
水溶性で酸性の領域でおきかえられている。２つの酸素
の間のこの差は、それらが二量化したり、または他のタ
ンパク類や細胞構造と相互作用を行なう能力を決定する
かもしれない。例えば、Ｅ１６は膜と結合するが、Ｅ１
８はリボゾームや核の中の塩基性タンパクと相互作用を
行なうかもしれない。
【００６５】（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの２
つの形は、インターフェロン処理のヒト細胞（Ｒｅｖｅ
ｌら、１９８２）の抽出物中ゲルロ過を行なうことによ
って見出された（Ｒｅｖｅｌら、１９８２）、即ち、Ｅ
１６またはＥ１８タンパクの単量形に相当するかもしれ
ない３０−４０Ｋｄの酵素と、今後同定しなければなら
ない６０−８０Ｋｄのタンパクである。転写物のマッピ
ングが、このＲＮＡは、１．８ＫｂのＲＮＡから除去さ
れるイントロン領域を（例えば、エクソン７と８の間）
含んでおり、そしてオープンリーディングフレームがな
いことを示したので、３．６ＫｂのＲＮＡは、大きい酵
素をコードしているとは思われない。我々は、接合子に
おける翻訳において、大きなｍＲＮＡを観察できなかっ
た。精製ヒト（ＨｅＬａ）合成酵素中に８０Ｋｄタンパ
クが報告された（Ｙａｎｄら、１９８１）が、その酵素
活性は証明されなかった。
つの形は、インターフェロン処理のヒト細胞（Ｒｅｖｅ
ｌら、１９８２）の抽出物中ゲルロ過を行なうことによ
って見出された（Ｒｅｖｅｌら、１９８２）、即ち、Ｅ
１６またはＥ１８タンパクの単量形に相当するかもしれ
ない３０−４０Ｋｄの酵素と、今後同定しなければなら
ない６０−８０Ｋｄのタンパクである。転写物のマッピ
ングが、このＲＮＡは、１．８ＫｂのＲＮＡから除去さ
れるイントロン領域を（例えば、エクソン７と８の間）
含んでおり、そしてオープンリーディングフレームがな
いことを示したので、３．６ＫｂのＲＮＡは、大きい酵
素をコードしているとは思われない。我々は、接合子に
おける翻訳において、大きなｍＲＮＡを観察できなかっ
た。精製ヒト（ＨｅＬａ）合成酵素中に８０Ｋｄタンパ
クが報告された（Ｙａｎｄら、１９８１）が、その酵素
活性は証明されなかった。
【００６６】ＮａｍａｌｖａとＣＭＬ細胞から精製した
（Ｒｅｖｅｌら、１９８１ｂ）酵素において、我々はＳ
ＤＳ中に、４０Ｋｄのバンドを検出できた。したがっ
て、６０−８０Ｋｄ酵素が、４０Ｋｄタンパクのダイマ
ーである可能性が残っている。ヒトのシンテターゼは、
３０Ｋｄ酵素（主に核の）をコードしている１．５Ｋｂ
ＲＮＡに加えて、８０Ｋｄ酵素（主に細胞質の）をコー
ドする大きな３．８ＫｂのＲＮＡが、変性条件でみられ
るマウスの細胞中のそれとは異なっているかもしれない
（Ｓｔ．Ｌａｕｒｅｎｔら、１９８３）。ヒトＥｃＤＮ
Ａは、３．８ Ｍｂと０．６−１．７ＫｂのＲＮＡを検出
し、大きなＲＮＡは、Ｅ１８に特異的なＤＮＡとハイブ
リッド形成をする（Ｍａｌｌｕｃｃｉら、１９８５）。
ヒトの細胞では、大きなＲＮＡが更に加工されて、１．
８Ｋｂ ＲＮＡとなり、それがマウスの細胞にみられな
いという可能性がある。（Ｓｈｕｌｍａｎら、１９８
４）は、ヒト細胞の（２′−５′）オリゴＡシンテター
ゼの大きさは、ヒト細胞中でも、ヒト−げっし類のハイ
ブリッド細胞染色体へのシンテターゼ遺伝子をマップす
るマウスの細胞中よりも、もっと小さいタンパクとして
挙動するという事実を用いた。Ｅ１６とＥ１８に特異的
な抗血清は、これからのタンパクと２種の天然のままの
酵素の２つの形の間の関係を解明するのに役立つであろ
う。
（Ｒｅｖｅｌら、１９８１ｂ）酵素において、我々はＳ
ＤＳ中に、４０Ｋｄのバンドを検出できた。したがっ
て、６０−８０Ｋｄ酵素が、４０Ｋｄタンパクのダイマ
ーである可能性が残っている。ヒトのシンテターゼは、
３０Ｋｄ酵素（主に核の）をコードしている１．５Ｋｂ
ＲＮＡに加えて、８０Ｋｄ酵素（主に細胞質の）をコー
ドする大きな３．８ＫｂのＲＮＡが、変性条件でみられ
るマウスの細胞中のそれとは異なっているかもしれない
（Ｓｔ．Ｌａｕｒｅｎｔら、１９８３）。ヒトＥｃＤＮ
Ａは、３．８ Ｍｂと０．６−１．７ＫｂのＲＮＡを検出
し、大きなＲＮＡは、Ｅ１８に特異的なＤＮＡとハイブ
リッド形成をする（Ｍａｌｌｕｃｃｉら、１９８５）。
ヒトの細胞では、大きなＲＮＡが更に加工されて、１．
８Ｋｂ ＲＮＡとなり、それがマウスの細胞にみられな
いという可能性がある。（Ｓｈｕｌｍａｎら、１９８
４）は、ヒト細胞の（２′−５′）オリゴＡシンテター
ゼの大きさは、ヒト細胞中でも、ヒト−げっし類のハイ
ブリッド細胞染色体へのシンテターゼ遺伝子をマップす
るマウスの細胞中よりも、もっと小さいタンパクとして
挙動するという事実を用いた。Ｅ１６とＥ１８に特異的
な抗血清は、これからのタンパクと２種の天然のままの
酵素の２つの形の間の関係を解明するのに役立つであろ
う。
【００６７】例８ ２つ（２′−５′）のオリゴＡシンテターゼの細胞特異
的な発現 多数のヒトの細胞系からのＲＮＡが、ノーザンブロット
中で、ＥｃＤＮＡプローブについて試験された（Ｍｅｒ
ｌｉｎら、１９８３；Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。Ｔ
ａｂｌｅ ４は、ヒト細胞が、インターフェロンで誘導
された重要ＥｍＲＮＡ種にしたがって、３つの細胞にわ
けることができることを示している。Ｂｕｒｋｉｔｔリ
ンパ腫からのリンパ芽球様Ｂ細胞系は、主として１．８
Ｋｂ ＲＮＡを有している。そうではなくて、いくつか
の細胞系は、１．６と３．６ＫｂＲＮＡをもっている
が、１．８ＫｂのＲＮＡは殆どもっていない。
的な発現 多数のヒトの細胞系からのＲＮＡが、ノーザンブロット
中で、ＥｃＤＮＡプローブについて試験された（Ｍｅｒ
ｌｉｎら、１９８３；Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。Ｔ
ａｂｌｅ ４は、ヒト細胞が、インターフェロンで誘導
された重要ＥｍＲＮＡ種にしたがって、３つの細胞にわ
けることができることを示している。Ｂｕｒｋｉｔｔリ
ンパ腫からのリンパ芽球様Ｂ細胞系は、主として１．８
Ｋｂ ＲＮＡを有している。そうではなくて、いくつか
の細胞系は、１．６と３．６ＫｂＲＮＡをもっている
が、１．８ＫｂのＲＮＡは殆どもっていない。
【００６８】もし３．６Ｋｂ ＲＮＡが部分的にスプラ
イスを受けた１．８Ｋｂ ＲＮＡのプリカーサーだとす
ると、これらの細胞は、３．６Ｋｂ ＲＮＡの加工に阻
害をしているかもしれない。Ｔ−リンパ球系（急性白血
病からのＣＥＭＴとヘアリー細胞白血病からのＧａｓ
ｈ）は、繊維芽細胞と同様に、すべての３ＥＲＮＡシリ
ーズを含んでいる。だから、Ｅ１８ポリアデニレーショ
ンの位置は、すべての人の細胞の中で利用され、３．６
か１．８Ｋｂ ＲＮＡを生産しているように思われる。
Ｅ１６ｐＡの位置は、Ｂリンパ芽球様細胞では用いられ
ていないようである。Ｅ１６とＥ１８ｐＡの位置の両方
において、存在している保存されているウンデカヌクレ
オチドは（図９Ｂ）ＡＡＴＡＡＡシグナルとヘアピンル
ープを作ることができ、場所の選択に役割を演じるかも
しれない（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。Ｅ１８は、Ａ
ＡＴＡＡＡシグナル（図９Ｂ）の２連性繰返しを有して
おり、より強いｐＡの位置であるかもしれない。Ｅ１８
のｐＡの位置で終る転写は、インターフェロン添加の
後、１．６Ｋｂ ＲＮＡ（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）
よりも早く蓄積する。優先的に存在する（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ
ＲＮＡ種
イスを受けた１．８Ｋｂ ＲＮＡのプリカーサーだとす
ると、これらの細胞は、３．６Ｋｂ ＲＮＡの加工に阻
害をしているかもしれない。Ｔ−リンパ球系（急性白血
病からのＣＥＭＴとヘアリー細胞白血病からのＧａｓ
ｈ）は、繊維芽細胞と同様に、すべての３ＥＲＮＡシリ
ーズを含んでいる。だから、Ｅ１８ポリアデニレーショ
ンの位置は、すべての人の細胞の中で利用され、３．６
か１．８Ｋｂ ＲＮＡを生産しているように思われる。
Ｅ１６ｐＡの位置は、Ｂリンパ芽球様細胞では用いられ
ていないようである。Ｅ１６とＥ１８ｐＡの位置の両方
において、存在している保存されているウンデカヌクレ
オチドは（図９Ｂ）ＡＡＴＡＡＡシグナルとヘアピンル
ープを作ることができ、場所の選択に役割を演じるかも
しれない（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。Ｅ１８は、Ａ
ＡＴＡＡＡシグナル（図９Ｂ）の２連性繰返しを有して
おり、より強いｐＡの位置であるかもしれない。Ｅ１８
のｐＡの位置で終る転写は、インターフェロン添加の
後、１．６Ｋｂ ＲＮＡ（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）
よりも早く蓄積する。優先的に存在する（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ
ＲＮＡ種
【００６９】
【表４】
【００７０】優先して作られるシンテターゼの型は、ヒ
トの細胞が異なれば変化する。我々は、シンテターゼの
細胞質または核の高圧と細胞中に存在するＲＮＡの型と
の間になんら相関関係を見出さなかった。しかし、ゲル
ロカを行なったとき、Ｎａｍａｌａｖａ細胞は、主とし
て、３０ ０Ｋｄ酵素であったが、一方ＨｅＬａと
ＳＶ８０細胞は、６０−８０Ｋｄ型ももっていた（Ｒｅ
ｖｅｌら、１９８２）
トの細胞が異なれば変化する。我々は、シンテターゼの
細胞質または核の高圧と細胞中に存在するＲＮＡの型と
の間になんら相関関係を見出さなかった。しかし、ゲル
ロカを行なったとき、Ｎａｍａｌａｖａ細胞は、主とし
て、３０ ０Ｋｄ酵素であったが、一方ＨｅＬａと
ＳＶ８０細胞は、６０−８０Ｋｄ型ももっていた（Ｒｅ
ｖｅｌら、１９８２）
【００７１】例９ （２′−５′）グリコＡシンテターゼの 領域 Ｅ１６ｃＤＮＡ９−２１クローンのエクソン３の部分を
含んでいる４．２ＫｂＥｃｏ Ｒ１フラグメント（Ｆｉ
ｇ．９）から、０．８５Ｋｂ（Ｆｉｇ．１０）のＳｐｈ
１−Ｓｐｈ１が、１．６，１．８，２．７及び３．６Ｋ
ｂ ＲＮＡｓとノーザンブロックで、ハイブリッドを形
成した。しかし、上流域はハイブリッド形成をしなかっ
た。いくつかの実験により、その断片の転写の出発点の
位置がわかるようになった。Ｓ１ヌクレアーゼによる分
析によって、まず、エクソン３が、９−２１ｃＤＮＡの
終りの、上流約５０ヌクレオチドから出発していること
がわかった。９−２１ｃＤＮＡの終りからのオリゴヌク
レオチドを用いてのプライマーの拡張実験により、ｍＲ
ＮＡの５′末端は、このｃＤＮＡの５′の端からの、約
２３０ヌクレオチドであるということを示した。リボプ
ローブとのＲＮＡのハイブリッド形成は
（Ｇｒｅｅｎら、１９８３）及びＲＮａｓｅによる分解
によってエクソン３の前に、７０及び、１１０ヌクレオ
チドの２つのエクソンの存在が示された。
含んでいる４．２ＫｂＥｃｏ Ｒ１フラグメント（Ｆｉ
ｇ．９）から、０．８５Ｋｂ（Ｆｉｇ．１０）のＳｐｈ
１−Ｓｐｈ１が、１．６，１．８，２．７及び３．６Ｋ
ｂ ＲＮＡｓとノーザンブロックで、ハイブリッドを形
成した。しかし、上流域はハイブリッド形成をしなかっ
た。いくつかの実験により、その断片の転写の出発点の
位置がわかるようになった。Ｓ１ヌクレアーゼによる分
析によって、まず、エクソン３が、９−２１ｃＤＮＡの
終りの、上流約５０ヌクレオチドから出発していること
がわかった。９−２１ｃＤＮＡの終りからのオリゴヌク
レオチドを用いてのプライマーの拡張実験により、ｍＲ
ＮＡの５′末端は、このｃＤＮＡの５′の端からの、約
２３０ヌクレオチドであるということを示した。リボプ
ローブとのＲＮＡのハイブリッド形成は
（Ｇｒｅｅｎら、１９８３）及びＲＮａｓｅによる分解
によってエクソン３の前に、７０及び、１１０ヌクレオ
チドの２つのエクソンの存在が示された。
【００７２】ユニークなＨｐａｌの位置（図９）におい
て、ラベルしたプローブを用いてＳｌヌクレアーゼを解
析することによって、ｍＲＮＡの５′末端は、最終的に
Ｈｐａｌの位置から１７ヌクレオチド上流に位置してい
ることがわかった。この領域の配列は、図６に示されて
いる。Ｈｐａｌ ｓｉｔｅの前の１７残基の転写開始位
置の決定は、−３０の位置に、ＴＡＴＡＡボックスが存
在することによって支持されている。上流配列の著しい
特徴は、プリン含量が高いことであり（６９．６％）、
主としてアデニン（５８．９％）である。他の既知のプ
ロモーターの上流配列との、相同性のマトリックスを比
較したところ、ヒトインターフェロンプロモーター、と
りわけ、インターフェロンβ１遺伝子プロモーター（Ｄ
ｅｇｒａｖｅら、１９８１）の配列と著しい相同性が明
らかになった。Ｚｉｎｎら（１９８３）によって記述さ
れた本質的な転写シグナルを含むＩＦＮ−β１プロモー
ターの−７５から−８５のプリンに富んだ領域は、ＴＡ
ＴＡＡボックス（−４０から−５０）の丁度上流にある
（２′−５′）オリゴシンテターゼの のプロモー
ターの領域との９ ％の相同性を示した（図１１）この
プリンに富んだシグナルは、ＴＡＴＡＡボックスとその
キャップの位置の間の小片の中のＩＦＮβ１プロモータ
ーの中に繰返されている。やはり、制御的な機能をもっ
ているかもしれない（Ｎｉｒら、１９８４）この領域に
おいて、ＩＦＮ−β１遺伝子と（２′−５′）オリゴシ
ンテターゼ遺伝子は高い。
て、ラベルしたプローブを用いてＳｌヌクレアーゼを解
析することによって、ｍＲＮＡの５′末端は、最終的に
Ｈｐａｌの位置から１７ヌクレオチド上流に位置してい
ることがわかった。この領域の配列は、図６に示されて
いる。Ｈｐａｌ ｓｉｔｅの前の１７残基の転写開始位
置の決定は、−３０の位置に、ＴＡＴＡＡボックスが存
在することによって支持されている。上流配列の著しい
特徴は、プリン含量が高いことであり（６９．６％）、
主としてアデニン（５８．９％）である。他の既知のプ
ロモーターの上流配列との、相同性のマトリックスを比
較したところ、ヒトインターフェロンプロモーター、と
りわけ、インターフェロンβ１遺伝子プロモーター（Ｄ
ｅｇｒａｖｅら、１９８１）の配列と著しい相同性が明
らかになった。Ｚｉｎｎら（１９８３）によって記述さ
れた本質的な転写シグナルを含むＩＦＮ−β１プロモー
ターの−７５から−８５のプリンに富んだ領域は、ＴＡ
ＴＡＡボックス（−４０から−５０）の丁度上流にある
（２′−５′）オリゴシンテターゼの のプロモー
ターの領域との９ ％の相同性を示した（図１１）この
プリンに富んだシグナルは、ＴＡＴＡＡボックスとその
キャップの位置の間の小片の中のＩＦＮβ１プロモータ
ーの中に繰返されている。やはり、制御的な機能をもっ
ているかもしれない（Ｎｉｒら、１９８４）この領域に
おいて、ＩＦＮ−β１遺伝子と（２′−５′）オリゴシ
ンテターゼ遺伝子は高い。
【００７３】対照的に、インターフェロンで活性化され
る（Ｆｅｌｌｏｕｓら、１９８２；Ｒｏｓａら、１９８
３ｂ；Ｆｒｉｅｄｍａｎら、１９８４）ＨＬＡ遺伝子や
（Ｍａｌｉｓｓｅｎら１９８２：Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ
ら、１９８３） ＩＩ遺伝子（ＫａｒｉｎとＲｉ
ｃｈａｒｄｓ，１９８２）は、この（２′−５′）オリ
ゴＡシンテターゼ遺伝子のプロモーターにおいて、なん
ら明らかな配列関係を生じなかった。ＩＮＦ−β１の遺
伝子本体とは、やはり、有意な相同性はみられなかっ
た。（２′−５′）オリゴシンテターゼｍＲＮＡ（エク
ソン１，２，及びエクソン３の１部）の翻訳されないリ
ーダーは、その位置がＦｉｇ．６に示されたような、Ｓ
１分析によって、仮に決定された２つの短いイントロン
を含んでいる。全体のヒト（２′−５′）オリゴＡシン
テターゼ遺伝子は、約１３Ｋｂ（図９）であり、エクソ
ンの総計はｍＲＮＡｓの観察された大きさと一致してい
る。
る（Ｆｅｌｌｏｕｓら、１９８２；Ｒｏｓａら、１９８
３ｂ；Ｆｒｉｅｄｍａｎら、１９８４）ＨＬＡ遺伝子や
（Ｍａｌｉｓｓｅｎら１９８２：Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ
ら、１９８３） ＩＩ遺伝子（ＫａｒｉｎとＲｉ
ｃｈａｒｄｓ，１９８２）は、この（２′−５′）オリ
ゴＡシンテターゼ遺伝子のプロモーターにおいて、なん
ら明らかな配列関係を生じなかった。ＩＮＦ−β１の遺
伝子本体とは、やはり、有意な相同性はみられなかっ
た。（２′−５′）オリゴシンテターゼｍＲＮＡ（エク
ソン１，２，及びエクソン３の１部）の翻訳されないリ
ーダーは、その位置がＦｉｇ．６に示されたような、Ｓ
１分析によって、仮に決定された２つの短いイントロン
を含んでいる。全体のヒト（２′−５′）オリゴＡシン
テターゼ遺伝子は、約１３Ｋｂ（図９）であり、エクソ
ンの総計はｍＲＮＡｓの観察された大きさと一致してい
る。
【００７４】例１０ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼのラムダー−ＧＴ
１０ｃＤＮＡクローン ヒトＳＶ８０細胞のポリＡ＋ＲＮＡから調整したλｇｔ
１０ｃＤＮＡライブラリー（ＷｏｌｆとＲｏｔｔｅｒ、
１９８５）を、前に記述された（Ｍｅｒｌｉｎら、１９
８５）Ｅ１ｃＤＮＡプラスミッドＰｓｔ１−Ｐｓｔ１イ
ンサートをプローブとしてスクリーニングした。１．６
Ｋｂ ＥＲＮＡの３′の端に相当するインサート（Ｂｅ
ｎｅｃｈら、１９８５）を、アガロースゲル電気泳動に
よって精製し、ニック−トランスレーションを行なった
（Ｒｉｇｂｙら、１９７７）。プラークを、９ｃｍのプ
レート（１０５ファージ）から繰返し拾いあげ、小量の
λＤＮＡ調製物を、ルーチン法によって（Ｍａｎｉａｔ
ｉｓら、１９８２）制限マッピングによって解析した。
１０ｃＤＮＡクローン ヒトＳＶ８０細胞のポリＡ＋ＲＮＡから調整したλｇｔ
１０ｃＤＮＡライブラリー（ＷｏｌｆとＲｏｔｔｅｒ、
１９８５）を、前に記述された（Ｍｅｒｌｉｎら、１９
８５）Ｅ１ｃＤＮＡプラスミッドＰｓｔ１−Ｐｓｔ１イ
ンサートをプローブとしてスクリーニングした。１．６
Ｋｂ ＥＲＮＡの３′の端に相当するインサート（Ｂｅ
ｎｅｃｈら、１９８５）を、アガロースゲル電気泳動に
よって精製し、ニック−トランスレーションを行なった
（Ｒｉｇｂｙら、１９７７）。プラークを、９ｃｍのプ
レート（１０５ファージ）から繰返し拾いあげ、小量の
λＤＮＡ調製物を、ルーチン法によって（Ｍａｎｉａｔ
ｉｓら、１９８２）制限マッピングによって解析した。
【００７５】Ｅ１ｃＤＮＡ断片をふくむ１５のλｇｔ１
０ｃＤＮＡクローンが単離され、最も長いインサートを
もったファージ９−２と５−２を、ＥｃｏＲ１できり、
インサートをｐＢＲ３２２にサブクローニングを行な
い、図１ＡのＥ１６ｃＤＮＡクローン９−２１と５−２
１を得た。同じライブラリーが、１．８Ｋｂ ＲＮＡと
特異的にハイブリッドを作る１断片であるファージλｃ
ｈＥ１（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）からのヒト遺伝子
的Ｐｓｔ１−Ｐｓｔ１０．９Ｋｂ断片についてスクリー
ニングされた。その際、我々は、部分的にスプライスを
行なったＲＮＡを表している他のｃＤＮＡクローンとと
もに、図１Ｂのλｇｔ１０ｃＤＮＡクローン４８−１を
単離した。配列決定は、ＭａｘａｍとＧｉｌｂｅｒｔ
（１９８０）に従って行なわれた。制限酵素は、Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓと、Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒからであった。ＰｕｓｔｅｌｌとＫａｆａｔｏｓ
（１９８２ａ，ｂ）の相同性マトリックスと、ハイドロ
プロットコンピュータープログラムは、ＩＢＭＰＣで行
なった。タンパクのコーディングフレームの位置を決め
る３塩基の周期性は、Ｔｒｉｆｏｎｏｖ（１９８４）に
従って計算した。
０ｃＤＮＡクローンが単離され、最も長いインサートを
もったファージ９−２と５−２を、ＥｃｏＲ１できり、
インサートをｐＢＲ３２２にサブクローニングを行な
い、図１ＡのＥ１６ｃＤＮＡクローン９−２１と５−２
１を得た。同じライブラリーが、１．８Ｋｂ ＲＮＡと
特異的にハイブリッドを作る１断片であるファージλｃ
ｈＥ１（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）からのヒト遺伝子
的Ｐｓｔ１−Ｐｓｔ１０．９Ｋｂ断片についてスクリー
ニングされた。その際、我々は、部分的にスプライスを
行なったＲＮＡを表している他のｃＤＮＡクローンとと
もに、図１Ｂのλｇｔ１０ｃＤＮＡクローン４８−１を
単離した。配列決定は、ＭａｘａｍとＧｉｌｂｅｒｔ
（１９８０）に従って行なわれた。制限酵素は、Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓと、Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒからであった。ＰｕｓｔｅｌｌとＫａｆａｔｏｓ
（１９８２ａ，ｂ）の相同性マトリックスと、ハイドロ
プロットコンピュータープログラムは、ＩＢＭＰＣで行
なった。タンパクのコーディングフレームの位置を決め
る３塩基の周期性は、Ｔｒｉｆｏｎｏｖ（１９８４）に
従って計算した。
【００７６】例１１ （２′−５′）オリゴシンテターゼ遺伝子を含む遺伝子
ＤＮＡのクローン ３つの重なりのある遺伝子のクローンが、以前に記述し
たように単離された（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。す
なわち、部分的にＥｃｏＲ１で切ったＤＮＡライブラリ
ーからの、λｃｈ Ｅ１ （Ｍｏｒｙら、１９８１）と
部分的な、Ａｌｕ１／Ｈａｅ３ ＤＮＡライブラリー
（Ｍａｎｉａｔｉｓら、１９７８）からのλｃｈ Ｅ２
とＥ３である。これらのファージのＥｃｏＲ１遺伝子断
片が、ｐＢＲ３２２サブクローニングされた。エクソン
マッピングは、１）サブクローニングを行なった遺伝子
断片の制限酵素による分解物のサザンブロットを、種々
のｃＤＮＡプローブに、ハイブリッド形成を行なわせる
ことにより、２）遺伝子ＤＮＡの制限酵素断片を、記述
されてあるように（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）ＩＦＮ
で処理したが、処理していない細胞から、ポリＡ＋ＲＮ
Ａのノーザンブロットとハイブリット結合させることに
より、そして、３）ｃＤＮＡと比較して、イントロン−
エクソンの境界の配列を決めることによって行なった。
ＤＮＡのクローン ３つの重なりのある遺伝子のクローンが、以前に記述し
たように単離された（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。す
なわち、部分的にＥｃｏＲ１で切ったＤＮＡライブラリ
ーからの、λｃｈ Ｅ１ （Ｍｏｒｙら、１９８１）と
部分的な、Ａｌｕ１／Ｈａｅ３ ＤＮＡライブラリー
（Ｍａｎｉａｔｉｓら、１９７８）からのλｃｈ Ｅ２
とＥ３である。これらのファージのＥｃｏＲ１遺伝子断
片が、ｐＢＲ３２２サブクローニングされた。エクソン
マッピングは、１）サブクローニングを行なった遺伝子
断片の制限酵素による分解物のサザンブロットを、種々
のｃＤＮＡプローブに、ハイブリッド形成を行なわせる
ことにより、２）遺伝子ＤＮＡの制限酵素断片を、記述
されてあるように（Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）ＩＦＮ
で処理したが、処理していない細胞から、ポリＡ＋ＲＮ
Ａのノーザンブロットとハイブリット結合させることに
より、そして、３）ｃＤＮＡと比較して、イントロン−
エクソンの境界の配列を決めることによって行なった。
【００７７】ｍＲＮＡの５′末端を含む遺伝子４．２Ｋ
ｂ ＥｃｏＲ１断片の内部のＳｐｈ１−Ｓｐｈ１０．７
８Ｋｂ小片を配列決定を行なう前にｐＢＲ３２２のＳｐ
ｈ１の位置にサブクローニングを行なった。ｍＲＮＡ
（Ｄｒ．Ｄ．Ｓｅｇｅｖ，Ｉｎｔｅｒｙｅｄａのおくり
もの）に相補的な１８−２０塩基の合成オリゴヌクレオ
チドを用いて、以前と同様にプライマー拡張を行なった
（Ｒｏｓｅら、１９８３ａ）。ＳＰ６ベクター中のサブ
クローニングの後、リボプロープの合成は、Ｐｒｏｍｅ
ｇａ Ｂｉｏｔｅｃの教えに従って行なった。Ｄａｕｄ
ｉリンパ芽球様細胞と、ＦＳ１１包皮繊維芽細胞からの
ＤＮＡは、Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９）に従って調整
し、サザンブロットアナリシスは、製造者（Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ）によって推奨されている
ハイブリッド形成操作Ｂを用いてＧｅｎｅ−Ｓｃｒｅｅ
ｎ Ｐｌｕｓナイロンファイバー上で行なった。
ｂ ＥｃｏＲ１断片の内部のＳｐｈ１−Ｓｐｈ１０．７
８Ｋｂ小片を配列決定を行なう前にｐＢＲ３２２のＳｐ
ｈ１の位置にサブクローニングを行なった。ｍＲＮＡ
（Ｄｒ．Ｄ．Ｓｅｇｅｖ，Ｉｎｔｅｒｙｅｄａのおくり
もの）に相補的な１８−２０塩基の合成オリゴヌクレオ
チドを用いて、以前と同様にプライマー拡張を行なった
（Ｒｏｓｅら、１９８３ａ）。ＳＰ６ベクター中のサブ
クローニングの後、リボプロープの合成は、Ｐｒｏｍｅ
ｇａ Ｂｉｏｔｅｃの教えに従って行なった。Ｄａｕｄ
ｉリンパ芽球様細胞と、ＦＳ１１包皮繊維芽細胞からの
ＤＮＡは、Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９）に従って調整
し、サザンブロットアナリシスは、製造者（Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ）によって推奨されている
ハイブリッド形成操作Ｂを用いてＧｅｎｅ−Ｓｃｒｅｅ
ｎ Ｐｌｕｓナイロンファイバー上で行なった。
【００７８】例１２ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼのＲＮＡのインタ
ーフェロン作用の臨床モニター用の迅速セル・ブロット
・アッセイ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼの測定の有用性
は、患者のインターフェロン−βに対する反応をモニタ
ーするため、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において
（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら、１９８１ａ）と、筋肉注射
（Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄら、１９８４）によって示され
た。正常な個人個人におけるＰＢＭＣの酵素レベルは、
どちらかというと一定であるからこのアッセイによっ
て、ＰＢＭＣや、顆粒球の酵素の増加（Ｓｃｈａｔｔｅ
ｒら、１９８１ｂ，１９８４；Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄら、
１９８５）によって、証拠づけられるウイルスの感染の
診断が可能となった。酵素の減少は、様々な芽細胞に関
する急性白血病をもちつづける（Ｗａｌｌａｃｈら、１
９８２；Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら、１９８２）。この技術
はまた、Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９８１）によって開拓
され、現在では、広く用いられている。
ーフェロン作用の臨床モニター用の迅速セル・ブロット
・アッセイ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼの測定の有用性
は、患者のインターフェロン−βに対する反応をモニタ
ーするため、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において
（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら、１９８１ａ）と、筋肉注射
（Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄら、１９８４）によって示され
た。正常な個人個人におけるＰＢＭＣの酵素レベルは、
どちらかというと一定であるからこのアッセイによっ
て、ＰＢＭＣや、顆粒球の酵素の増加（Ｓｃｈａｔｔｅ
ｒら、１９８１ｂ，１９８４；Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄら、
１９８５）によって、証拠づけられるウイルスの感染の
診断が可能となった。酵素の減少は、様々な芽細胞に関
する急性白血病をもちつづける（Ｗａｌｌａｃｈら、１
９８２；Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら、１９８２）。この技術
はまた、Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９８１）によって開拓
され、現在では、広く用いられている。
【００７９】シンテターゼＥは、すべての３種の型のイ
ンターフェロン、α，β，γによって処理された細胞で
強く誘導され、その増加は、インターフェロン活性のよ
いマーカーである（Ｗａｌｌａｃｈら、１９８２）。し
たがって、Ｅレベルの測定を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
またはｉｎ ｖｉｖｏの細胞がインターフェロンに触
れ、それに反応するかどうかを決定することが可能であ
る。この測定は、該溶液に細胞をさらし、Ｅレベルの増
加を決定することによって、この測定をインターフェロ
ンのアッセイに用いることができる（Ｆｅｖｅｌら、
Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，３０２，５３３）こ
の測定は、また、インターフェロンが人をはじめとし
て、全生体中に増加して生産されるかどうかを確立する
ためにも用いられる。
ンターフェロン、α，β，γによって処理された細胞で
強く誘導され、その増加は、インターフェロン活性のよ
いマーカーである（Ｗａｌｌａｃｈら、１９８２）。し
たがって、Ｅレベルの測定を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
またはｉｎ ｖｉｖｏの細胞がインターフェロンに触
れ、それに反応するかどうかを決定することが可能であ
る。この測定は、該溶液に細胞をさらし、Ｅレベルの増
加を決定することによって、この測定をインターフェロ
ンのアッセイに用いることができる（Ｆｅｖｅｌら、
Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，３０２，５３３）こ
の測定は、また、インターフェロンが人をはじめとし
て、全生体中に増加して生産されるかどうかを確立する
ためにも用いられる。
【００８０】インターフェロン−βの自動的分泌作用の
結果として、造血性細胞の分化を通じて、（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼは増加する（Ｙａｒｄｅｎ
ら、１９８４）。もう１つのＥ測定の重要な応用は、イ
ンターフェロン治療を行なっている患者のモニターを行
なうことにある。臨床的変化の外に、全身性のインター
フェロンβ処理と同様に、インターフェロンα処理によ
って５−１０倍増加するＰＢＭＣＥレベルを測定するこ
とによって、患者が、インターフェロンに反応している
ことを確立することが可能である（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ
ら、１９８１ａ；Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄら、１９８
４）。他のＩＦＮによって誘導された活性または分子
が、Ｅ酵素のアッセイと同様に用いられるかもしれな
い。しかし、この方法は、もっとも広く用いられている
（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｂｏｒｄｅｎ）。さて、ヒトＰ
ＢＭＣ中のＥＲＮＡのアッセイが同じ目的に使われる。
９−２１ＥｃＤＮＡをプローブとして用い、素早いセル
ブロットが（ＣｈｅｌｅｙとＡｎｄｅｒｓｏｎ，１９８
４）ＰＭＢＣについて開発された（図１４）。ＥｃＤＮ
Ａから誘導したオリゴヌクレオチドも、プローブとして
使うことができる。１０Ｕ／ｍｌのインターフェロンの
効果は、この方法で容易に検出できる（図１５）１０７
単位／１日のインターフェロンα−Ｃによって処理され
た患者において陽性の結果が得られた。
結果として、造血性細胞の分化を通じて、（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼは増加する（Ｙａｒｄｅｎ
ら、１９８４）。もう１つのＥ測定の重要な応用は、イ
ンターフェロン治療を行なっている患者のモニターを行
なうことにある。臨床的変化の外に、全身性のインター
フェロンβ処理と同様に、インターフェロンα処理によ
って５−１０倍増加するＰＢＭＣＥレベルを測定するこ
とによって、患者が、インターフェロンに反応している
ことを確立することが可能である（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ
ら、１９８１ａ；Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄら、１９８
４）。他のＩＦＮによって誘導された活性または分子
が、Ｅ酵素のアッセイと同様に用いられるかもしれな
い。しかし、この方法は、もっとも広く用いられている
（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｂｏｒｄｅｎ）。さて、ヒトＰ
ＢＭＣ中のＥＲＮＡのアッセイが同じ目的に使われる。
９−２１ＥｃＤＮＡをプローブとして用い、素早いセル
ブロットが（ＣｈｅｌｅｙとＡｎｄｅｒｓｏｎ，１９８
４）ＰＭＢＣについて開発された（図１４）。ＥｃＤＮ
Ａから誘導したオリゴヌクレオチドも、プローブとして
使うことができる。１０Ｕ／ｍｌのインターフェロンの
効果は、この方法で容易に検出できる（図１５）１０７
単位／１日のインターフェロンα−Ｃによって処理され
た患者において陽性の結果が得られた。
【００８１】例１３ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼに対する抗体の獲
得 天然の（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性分子に
対する抗体の誘導のための抗原として役立てるため、Ｅ
１６及びＥ１８の全アミノ酸配列が選ばれた。 ペプチドＢ：ＧＬＵ ＬＹＳ ＴＹＲ ＬＥＵ ＡＲＧ
ＡＲＧ ＧＬＮ ＬＥＵ ＴＨＲＬＹＳ ＰＲＯ Ａ
ＲＧ ＰＲＯ ＶＡＬ ＩＬＥ ＬＥＵ ＡＳＰ ＰＲ
ＯＡＬＡ ＡＳＰは、Ｅ１８とＥ１６配列に共通なアミ
ノ酸２８４から３０３迄を含んでいる。 ペプチドＣ：ＡＲＧ ＰＲＯ ＰＲＯ ＡＬＡ ＳＥＲ
ＳＥＲ ＬＥＵ ＰＲＯ ＰＨＥＩＬＥ ＰＲＯ Ａ
ＬＡ ＰＲＯ ＬＥＵ ＨＩＳ ＧＬＵ ＡＬＡＥ１６
（３４８から３６４迄の残基）のＣ末端を含んでいる。
両ペプチドともＢａｒａｎｙとＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ
（１９８０）の固相ペプチド合成法によって合成され
た。
得 天然の（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性分子に
対する抗体の誘導のための抗原として役立てるため、Ｅ
１６及びＥ１８の全アミノ酸配列が選ばれた。 ペプチドＢ：ＧＬＵ ＬＹＳ ＴＹＲ ＬＥＵ ＡＲＧ
ＡＲＧ ＧＬＮ ＬＥＵ ＴＨＲＬＹＳ ＰＲＯ Ａ
ＲＧ ＰＲＯ ＶＡＬ ＩＬＥ ＬＥＵ ＡＳＰ ＰＲ
ＯＡＬＡ ＡＳＰは、Ｅ１８とＥ１６配列に共通なアミ
ノ酸２８４から３０３迄を含んでいる。 ペプチドＣ：ＡＲＧ ＰＲＯ ＰＲＯ ＡＬＡ ＳＥＲ
ＳＥＲ ＬＥＵ ＰＲＯ ＰＨＥＩＬＥ ＰＲＯ Ａ
ＬＡ ＰＲＯ ＬＥＵ ＨＩＳ ＧＬＵ ＡＬＡＥ１６
（３４８から３６４迄の残基）のＣ末端を含んでいる。
両ペプチドともＢａｒａｎｙとＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ
（１９８０）の固相ペプチド合成法によって合成され
た。
【００８２】セファデックスＧ２５カラム上で２Ｍの酢
酸中で精製し、ペプチドは、Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐ
ｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅ
ｍ．）と結合した。ペプチドＣのアミノ末端アルギニン
のアミノ基を、Ｐ−アミノフェニール酢酸でエステル化
することによって、そのアミノ末端を通じて、キャリア
ータンパクと共軛ペプチド結合することができる（Ｓｐ
ｉｒｅｒら、１９７７）。ペプチドＢは、エチレンジア
ミンカルボジイミド（ＨｏａｒｅとＫｏｓｈｌａｎｄ，
１９６７）によって、キャリヤータンパクとカップルさ
せた。ラビットに完全なＦｒｅｕｎｄのアジュバンド中
に乳化させた１ｍｇのキャリヤーにカップしたペプチド
（０．２ｍｇの純粋なペプチドに相当する）を皮下注射
した。ラビットは２週間おきに２回強化注射により、不
完全アジュバンド中の０．５ｍｇのキャリヤーにカップ
ルしたペプチドを与え、最大の抗体反応が出るまで続け
た。ラビットの血清中の抗体の力価は、キャリヤーフリ
ーのペプチドを用いて、エンザイムにリンクした、イミ
ュノソルベントアッセイ（Ｇｒｅｅｎら、１９８２）に
おいて測定された。
酸中で精製し、ペプチドは、Ｋｅｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐ
ｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅ
ｍ．）と結合した。ペプチドＣのアミノ末端アルギニン
のアミノ基を、Ｐ−アミノフェニール酢酸でエステル化
することによって、そのアミノ末端を通じて、キャリア
ータンパクと共軛ペプチド結合することができる（Ｓｐ
ｉｒｅｒら、１９７７）。ペプチドＢは、エチレンジア
ミンカルボジイミド（ＨｏａｒｅとＫｏｓｈｌａｎｄ，
１９６７）によって、キャリヤータンパクとカップルさ
せた。ラビットに完全なＦｒｅｕｎｄのアジュバンド中
に乳化させた１ｍｇのキャリヤーにカップしたペプチド
（０．２ｍｇの純粋なペプチドに相当する）を皮下注射
した。ラビットは２週間おきに２回強化注射により、不
完全アジュバンド中の０．５ｍｇのキャリヤーにカップ
ルしたペプチドを与え、最大の抗体反応が出るまで続け
た。ラビットの血清中の抗体の力価は、キャリヤーフリ
ーのペプチドを用いて、エンザイムにリンクした、イミ
ュノソルベントアッセイ（Ｇｒｅｅｎら、１９８２）に
おいて測定された。
【００８３】例１４ 酵素を探知するための抗−（２′−５′）オリゴＡシン
テターゼ活性ペプチドの抗体の使用 インターフェロン処理のヒト細胞培養物の抽出物 繊維芽様細胞系ＳＶ８０と羊皮細胞系Ｗｉｓｈをプラス
チックでプレートでコンフルエンモノレイヤー培養を行
なった。Ｄａｕｄｉ細胞系は、サスペンジョンで、１．
５×１０６細胞／ｍｌまで生育させた。培養液をγＩＦ
Ｎ−β１，５００μ／ｍｌで１６−２４時間処理した。
ヒトγＩＦＮ−β１は、遺伝子工学にかけたＣＨＯ細胞
によって生産され、モノクロナール抗体クロマトグラフ
ィーによって均一になるまで精製した（Ｃｈｅｒｎａｊ
ｏｖｓｋｙら、１９８４）。
テターゼ活性ペプチドの抗体の使用 インターフェロン処理のヒト細胞培養物の抽出物 繊維芽様細胞系ＳＶ８０と羊皮細胞系Ｗｉｓｈをプラス
チックでプレートでコンフルエンモノレイヤー培養を行
なった。Ｄａｕｄｉ細胞系は、サスペンジョンで、１．
５×１０６細胞／ｍｌまで生育させた。培養液をγＩＦ
Ｎ−β１，５００μ／ｍｌで１６−２４時間処理した。
ヒトγＩＦＮ−β１は、遺伝子工学にかけたＣＨＯ細胞
によって生産され、モノクロナール抗体クロマトグラフ
ィーによって均一になるまで精製した（Ｃｈｅｒｎａｊ
ｏｖｓｋｙら、１９８４）。
【００８４】細胞は、４℃で、燐酸緩衝液を含んだ食塩
水で２度洗い、緩衝液、即ち２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝
液、ｐＨ７、５．５ｍＭ酢酸マグネシウム、３０ｍＭ
β−メルカプトエタノール１００μＭフェニルメチルス
ルフォニルフラロイド（ＰＭＳＦ）１０％グリセロール
及び０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＤ４０）中
で冷時融解した。核と、こわれていない細胞を１５００
γで１０分間遠心分離して除いた。上澄（Ｓ１．５）を
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ中で、ミトコ
ンドリアとライソゾームのない上澄（Ｓ１５）を得るた
め、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ中で、１
５，０００γで１０分遠心分離した。タンパクの濃度
は、ミクロアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ １９７６）に
よって測定した。Ｂｅｃｋｍａｎｎ冷凍遠心器中で、Ｓ
１５を、１００，０００γで２時間遠心分離して細胞液
（Ｓ１０００）とミクロソーム（Ｐ１００）区分を調製
した。
水で２度洗い、緩衝液、即ち２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝
液、ｐＨ７、５．５ｍＭ酢酸マグネシウム、３０ｍＭ
β−メルカプトエタノール１００μＭフェニルメチルス
ルフォニルフラロイド（ＰＭＳＦ）１０％グリセロール
及び０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＤ４０）中
で冷時融解した。核と、こわれていない細胞を１５００
γで１０分間遠心分離して除いた。上澄（Ｓ１．５）を
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ中で、ミトコ
ンドリアとライソゾームのない上澄（Ｓ１５）を得るた
め、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ中で、１
５，０００γで１０分遠心分離した。タンパクの濃度
は、ミクロアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ １９７６）に
よって測定した。Ｂｅｃｋｍａｎｎ冷凍遠心器中で、Ｓ
１５を、１００，０００γで２時間遠心分離して細胞液
（Ｓ１０００）とミクロソーム（Ｐ１００）区分を調製
した。
【００８５】例１５ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼのアッセイ １−２μｇのタンパクを含むＳ１５の割当て量を２０μ
ｌの、２５ｍＭ Ｈｐｅｓ緩衝液、ｐＨ７．５、２０ｍ
Ｍｇ Ａｃｅｔａｔｅ，１ｍＭ ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅ
ｉｔｏｌ，１．５ｍＭ ＡＴＰ，４μＣｉの３２Ｐ−α
−ＡＴＰ，５０μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ（ｒＩ）（ｒＣ）
（ＰＬ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから）を含む反応液中
で３０℃２時間インキュベートした。５分間沸とうさせ
た後、Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ遠心分離した後、バクテリア
のアルカリ性フォスファターゼを２５０Ｕ／ｍｌ加え、
反応物を３７℃で２時間インキュベートした。２から７
μｌをＷｈａｔｍａｎｎ３ｍｍ濾紙にスポットし、ピリ
ジン酢酸中ｐＨ３．５で３，０００Ｖで電気泳動を行な
って分折した。オートラジオグラフィーで分折した後、
（Ａ２′ｐ）ｎＡオリゴマースポットを切出し、カウン
トした。
ｌの、２５ｍＭ Ｈｐｅｓ緩衝液、ｐＨ７．５、２０ｍ
Ｍｇ Ａｃｅｔａｔｅ，１ｍＭ ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅ
ｉｔｏｌ，１．５ｍＭ ＡＴＰ，４μＣｉの３２Ｐ−α
−ＡＴＰ，５０μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ（ｒＩ）（ｒＣ）
（ＰＬ−Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから）を含む反応液中
で３０℃２時間インキュベートした。５分間沸とうさせ
た後、Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ遠心分離した後、バクテリア
のアルカリ性フォスファターゼを２５０Ｕ／ｍｌ加え、
反応物を３７℃で２時間インキュベートした。２から７
μｌをＷｈａｔｍａｎｎ３ｍｍ濾紙にスポットし、ピリ
ジン酢酸中ｐＨ３．５で３，０００Ｖで電気泳動を行な
って分折した。オートラジオグラフィーで分折した後、
（Ａ２′ｐ）ｎＡオリゴマースポットを切出し、カウン
トした。
【００８６】例１６ 電気泳動−トランスファーインミュノブロット 粗細胞区分の一部分（３０μプロテイン）を、Ｌａｅｍ
ｍｌｉのナトリウム−ドデシル−サルフェート−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動ローディング緩衝液で調節し
（Ｌａｅｍｍｌｉ，１９７０）で１０分間沸騰してか
ら、７．５または、１０％ゲル上で電気泳動にかけた。
Ａｍｅｒｓｈａｍの１４Ｃ−メチル化したタンパクを分
子量標準物質として用いた（１０４ｃｐｍ）。ニトロセ
ルローズペーパーへの電気泳動トランスファーは、（Ｓ
ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ及びＳｃｈｕｌｌ ＥＡ８５）２５
ｍＭトリスベース、１９２ｍＭグリシン及び２０％メタ
ノール中で行なわれた。ブロットを０．０９Ｍ ＮａＣ
ｌ，０．０１Ｍトリスー塩酸、ｐＨ７．５、１０％（ｖ
／ｖ）の１％ファットミルク溶液、１０％（ｖ／ｖ）の
熱で不活性化した仔牛胎児血清、そして、０．０５％ト
ゥイーン−２０、中で３７℃で２時間か、４℃で一夜、
続いて、３７℃で３０分予備的インキュベーションを行
なった。次に、ブロットは、ラビット１ｇＧ０．１ｍｇ
／ｍｌの形で、アンチー（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼペプチドＢ抗体と２時間３７℃でインキュベート
した。ブロットは、４％仔牛血清中で１０分間５回洗
い、１０６ｃｐｍ／ｍｌの１２５Ｉ−タンパクＡ（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ，３０ｍＣｉ／ｍｇ）を含む完全な上記前
インキュベーション混合物中で、３７℃で１時間インキ
ュベートし、ブロットを洗い、オートラヂオグラフィー
にかけた。
ｍｌｉのナトリウム−ドデシル−サルフェート−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動ローディング緩衝液で調節し
（Ｌａｅｍｍｌｉ，１９７０）で１０分間沸騰してか
ら、７．５または、１０％ゲル上で電気泳動にかけた。
Ａｍｅｒｓｈａｍの１４Ｃ−メチル化したタンパクを分
子量標準物質として用いた（１０４ｃｐｍ）。ニトロセ
ルローズペーパーへの電気泳動トランスファーは、（Ｓ
ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ及びＳｃｈｕｌｌ ＥＡ８５）２５
ｍＭトリスベース、１９２ｍＭグリシン及び２０％メタ
ノール中で行なわれた。ブロットを０．０９Ｍ ＮａＣ
ｌ，０．０１Ｍトリスー塩酸、ｐＨ７．５、１０％（ｖ
／ｖ）の１％ファットミルク溶液、１０％（ｖ／ｖ）の
熱で不活性化した仔牛胎児血清、そして、０．０５％ト
ゥイーン−２０、中で３７℃で２時間か、４℃で一夜、
続いて、３７℃で３０分予備的インキュベーションを行
なった。次に、ブロットは、ラビット１ｇＧ０．１ｍｇ
／ｍｌの形で、アンチー（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼペプチドＢ抗体と２時間３７℃でインキュベート
した。ブロットは、４％仔牛血清中で１０分間５回洗
い、１０６ｃｐｍ／ｍｌの１２５Ｉ−タンパクＡ（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ，３０ｍＣｉ／ｍｇ）を含む完全な上記前
インキュベーション混合物中で、３７℃で１時間インキ
ュベートし、ブロットを洗い、オートラヂオグラフィー
にかけた。
【００８７】例１７ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性とラベルタン
パクの免疫沈澱 ５−１０μｌのアンチーオリゴＡシンテターゼペプチド
Ｂラビット血清の最初の適量を、３％牛血清アルブミン
（ＢＳＡ）とともに、ＰＢＳ中で平衡させた３ｍｇのタ
ンパクＡ−セファロース（ｐｈａｒｍａｃｉａ）に吸着
させ、３０分室温で、次にＰＢＳ−１％ＢＳＡで洗っ
た。（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ酵素活性の免
疫沈澱には、２μｇのＳ１５タンパクの適量を緩衝液Ａ
最終量２０μｌとして、上のペレットにした１ｇＧ−タ
ンパクＡセファローズに、２時間４℃で吸着させた。緩
衝液は、バッファーＡで５倍にうすめ、上澄液を別のチ
ューブに移した。ペレットを０．５ｍｌのバッファーＡ
で３回洗い、次に、２５μｌの酵素反応液中でけん濁さ
せた（上を見よ）。活性は、結合していない上澄の一部
についても測定を行なった。
パクの免疫沈澱 ５−１０μｌのアンチーオリゴＡシンテターゼペプチド
Ｂラビット血清の最初の適量を、３％牛血清アルブミン
（ＢＳＡ）とともに、ＰＢＳ中で平衡させた３ｍｇのタ
ンパクＡ−セファロース（ｐｈａｒｍａｃｉａ）に吸着
させ、３０分室温で、次にＰＢＳ−１％ＢＳＡで洗っ
た。（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ酵素活性の免
疫沈澱には、２μｇのＳ１５タンパクの適量を緩衝液Ａ
最終量２０μｌとして、上のペレットにした１ｇＧ−タ
ンパクＡセファローズに、２時間４℃で吸着させた。緩
衝液は、バッファーＡで５倍にうすめ、上澄液を別のチ
ューブに移した。ペレットを０．５ｍｌのバッファーＡ
で３回洗い、次に、２５μｌの酵素反応液中でけん濁さ
せた（上を見よ）。活性は、結合していない上澄の一部
についても測定を行なった。
【００８８】（２′−５′）オリゴＡシンテターゼをラ
ベルするために、Ｗｉｓｈ細胞をコンフルエントモノレ
イヤー迄、３ｃｍのプラスチック皿で生育させ、１２時
間、５００Ｕ／ｍｌのｒＩＦＮ−β１で処理した。培地
は、５００μＣｉの、３５Ｓ−メチオニン（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ ４００ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を含むメチオニンフ
リーＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）で置き換え、細胞は、２時
間インキュベートし、ＰＢＳで洗いバッファーＡでホモ
ジナイズした。Ｓ１５を免疫沈澱に用いた。約１０７ｃ
ｐｍのＳ１５タンパクをペレット状にしたタンパクＡ−
セファロースに加え４℃で２時間混合した。ビーズを１
％ＢＳＡ、１％ＮＰ４０、ＰＢＳ中の２Ｍ ＫＣｌで洗
い、そして、ＰＢＳだけで２回洗った。サンプルをナト
リウムードデシル−サルフェート−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動によって解折した。
ベルするために、Ｗｉｓｈ細胞をコンフルエントモノレ
イヤー迄、３ｃｍのプラスチック皿で生育させ、１２時
間、５００Ｕ／ｍｌのｒＩＦＮ−β１で処理した。培地
は、５００μＣｉの、３５Ｓ−メチオニン（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ ４００ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を含むメチオニンフ
リーＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）で置き換え、細胞は、２時
間インキュベートし、ＰＢＳで洗いバッファーＡでホモ
ジナイズした。Ｓ１５を免疫沈澱に用いた。約１０７ｃ
ｐｍのＳ１５タンパクをペレット状にしたタンパクＡ−
セファロースに加え４℃で２時間混合した。ビーズを１
％ＢＳＡ、１％ＮＰ４０、ＰＢＳ中の２Ｍ ＫＣｌで洗
い、そして、ＰＢＳだけで２回洗った。サンプルをナト
リウムードデシル−サルフェート−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動によって解折した。
【００８９】例１８ （２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性を検知するた
めの抗ペプチド抗体の使用 アンチ−（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性ペプ
チド抗体による（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活
性の免疫沈澱 抗血清Ｂは、Ｅ１６とＥ１８配列に共通なペプチドに対
して作り、一方、抗血清Ｃは、Ｅ１６においてのみ見出
されたペプチドに対して作った。我々は、これらの抗体
が、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性を、特異
的に沈澱させるかどうかを確かめるために用いた。免疫
１ｇＧ−タンパクＡセファロース上に吸着した合成活性
と、上澄に残っている同活性は、免疫していないＩｇＧ
から得られた同じ分画と比較した。１．６Ｋｂ ＮＡ
（Ｗｉｓｈ細胞）または、１．８Ｋｂ ＲＮＡ（Ｄａｕ
ｄｉ ｃｅｌｌ）を、優先的に表している２つの細胞系
からの抽出物を比較した。正常血清のバックグラウンド
を差し引くことにより、抗−Ｂ、抗Ｃに特異的に結合す
るものを評価できるようになる（図１６）。抗Ｃは、Ｗ
ｉｓｈ細胞からの（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ
活性を保持していたが、Ｄａｕｄｉ細胞からの活性は保
持していなかった。これは、これらの細胞にＥ１６ｍＲ
ＮＡそして、４０Ｋｄタンパクが存在しないことと一致
している（例１９をみよ）。抗Ｂは、ＤａｕｄｉとＷｉ
ｓｈの細胞抽出物から（２′−５′）オリゴＡシンテタ
ーゼ活性を吸着した。クローニングを行なったｃＤＮＡ
ｓから、引き出したペプチドに対してつくられたアンチ
ボディーは、従って、特異的に異った（２′−５′）オ
リゴＡシンテターゼの形を認識する。
めの抗ペプチド抗体の使用 アンチ−（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性ペプ
チド抗体による（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活
性の免疫沈澱 抗血清Ｂは、Ｅ１６とＥ１８配列に共通なペプチドに対
して作り、一方、抗血清Ｃは、Ｅ１６においてのみ見出
されたペプチドに対して作った。我々は、これらの抗体
が、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性を、特異
的に沈澱させるかどうかを確かめるために用いた。免疫
１ｇＧ−タンパクＡセファロース上に吸着した合成活性
と、上澄に残っている同活性は、免疫していないＩｇＧ
から得られた同じ分画と比較した。１．６Ｋｂ ＮＡ
（Ｗｉｓｈ細胞）または、１．８Ｋｂ ＲＮＡ（Ｄａｕ
ｄｉ ｃｅｌｌ）を、優先的に表している２つの細胞系
からの抽出物を比較した。正常血清のバックグラウンド
を差し引くことにより、抗−Ｂ、抗Ｃに特異的に結合す
るものを評価できるようになる（図１６）。抗Ｃは、Ｗ
ｉｓｈ細胞からの（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ
活性を保持していたが、Ｄａｕｄｉ細胞からの活性は保
持していなかった。これは、これらの細胞にＥ１６ｍＲ
ＮＡそして、４０Ｋｄタンパクが存在しないことと一致
している（例１９をみよ）。抗Ｂは、ＤａｕｄｉとＷｉ
ｓｈの細胞抽出物から（２′−５′）オリゴＡシンテタ
ーゼ活性を吸着した。クローニングを行なったｃＤＮＡ
ｓから、引き出したペプチドに対してつくられたアンチ
ボディーは、従って、特異的に異った（２′−５′）オ
リゴＡシンテターゼの形を認識する。
【００９０】例１９ ヒト細胞からの（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活
性の異なる形のインミュノブロット分析 ペプチドＢに対する抗体を、ナトリウムードデシル−サ
ルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離
し、電気泳動的に、ニトロセルローズ紙にブロットされ
たヒト細胞の抽出物中の（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼに特異的に結合する能力について調べた。インミ
ュノブロット中の抗体によって認識される存在の他に、
我々は、インターフェロン処理によって誘導される抽出
物中に存在する天然の（２′−５′）オリゴＡシンテタ
ーゼタンパクを期待している。そこで我々は、インミュ
ノタンパクによって明らかとなる誘導タンパクのみを調
べた（図１７）。
性の異なる形のインミュノブロット分析 ペプチドＢに対する抗体を、ナトリウムードデシル−サ
ルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離
し、電気泳動的に、ニトロセルローズ紙にブロットされ
たヒト細胞の抽出物中の（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼに特異的に結合する能力について調べた。インミ
ュノブロット中の抗体によって認識される存在の他に、
我々は、インターフェロン処理によって誘導される抽出
物中に存在する天然の（２′−５′）オリゴＡシンテタ
ーゼタンパクを期待している。そこで我々は、インミュ
ノタンパクによって明らかとなる誘導タンパクのみを調
べた（図１７）。
【００９１】（２′−５′）オリゴＡシンテターゼｍＲ
ＮＡｓ（例１８をみよ）の表現のパターンの差のため
に、Ｄａｕｄｉ，Ｗｉｓｈ及びＳＶ８０の細胞系を比較
した（例１８をみよ）。抗体Ｂは、期待されたように、
Ｅ１８産物に大きさが類似している４５−４６Ｋｄのタ
ンパクを、Ｄａｕｄｉ細胞中に検出し、Ｄａｕｄｉ細胞
中に発現されていないｍＲＮＡのＥ１６に相当すると考
えられる４０Ｋｄを検出できない。対照的に、４０Ｋｄ
Ｅ１６タンパクが、Ｗｉｓｈ細胞には存在し、これら
の細胞に、１．８Ｋｂ ＲＮＡが存在していないことと
一致して、４６Ｋｄ Ｅ１８が存在しない。両方のタン
パクともＳＶ８０細胞中に検出された。これらの結果
は、ヒトの細胞が、４０と４６Ｋｄタンパクを生産し、
そしてそれは、細胞がそれぞれ、１．６と１．８Ｋｂ
ＲＮＡｓを表現する場合のみに起るということを、この
結果は示している。
ＮＡｓ（例１８をみよ）の表現のパターンの差のため
に、Ｄａｕｄｉ，Ｗｉｓｈ及びＳＶ８０の細胞系を比較
した（例１８をみよ）。抗体Ｂは、期待されたように、
Ｅ１８産物に大きさが類似している４５−４６Ｋｄのタ
ンパクを、Ｄａｕｄｉ細胞中に検出し、Ｄａｕｄｉ細胞
中に発現されていないｍＲＮＡのＥ１６に相当すると考
えられる４０Ｋｄを検出できない。対照的に、４０Ｋｄ
Ｅ１６タンパクが、Ｗｉｓｈ細胞には存在し、これら
の細胞に、１．８Ｋｂ ＲＮＡが存在していないことと
一致して、４６Ｋｄ Ｅ１８が存在しない。両方のタン
パクともＳＶ８０細胞中に検出された。これらの結果
は、ヒトの細胞が、４０と４６Ｋｄタンパクを生産し、
そしてそれは、細胞がそれぞれ、１．６と１．８Ｋｂ
ＲＮＡｓを表現する場合のみに起るということを、この
結果は示している。
【００９２】抗−Ｂのインミュノブロットは、また、ヒ
トの細胞には（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの２
つの形のみならず、多分４つの形があることを明らかに
している。この事実は、インターフェロンによって誘導
される１００Ｋｄと６７Ｋｄの２つの他のタンパクを、
抗−Ｂが、４０と４６Ｋｄのタンパクの外にはっきりと
検出したという事実から導き出せる。１００ＫｄはＤａ
ｕｄｉ細胞には検出されず、抗Ｂによって検出される大
きなタンパクも、やはり、細胞特異的なパターンで表現
されるということを示した。抗−Ｂが、天然の（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼの形の配列から誘導された
ペプチドに対し作られ、インターフェロンによって、２
つのより大きいタンパクが誘導されるということから、
それらが（２′−５′）オリゴＡシンテターゼシステム
に属する可能性が非常に高い。これらが（２′−５′）
オリゴＡシンテターゼの形であることを確かめるため
に、我々は、ＳＶ８０の異なる細胞区分から、（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼを精製した、そして平行し
て抗体Ｂによって検出されたタンパクを追跡した。
トの細胞には（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの２
つの形のみならず、多分４つの形があることを明らかに
している。この事実は、インターフェロンによって誘導
される１００Ｋｄと６７Ｋｄの２つの他のタンパクを、
抗−Ｂが、４０と４６Ｋｄのタンパクの外にはっきりと
検出したという事実から導き出せる。１００ＫｄはＤａ
ｕｄｉ細胞には検出されず、抗Ｂによって検出される大
きなタンパクも、やはり、細胞特異的なパターンで表現
されるということを示した。抗−Ｂが、天然の（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼの形の配列から誘導された
ペプチドに対し作られ、インターフェロンによって、２
つのより大きいタンパクが誘導されるということから、
それらが（２′−５′）オリゴＡシンテターゼシステム
に属する可能性が非常に高い。これらが（２′−５′）
オリゴＡシンテターゼの形であることを確かめるため
に、我々は、ＳＶ８０の異なる細胞区分から、（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼを精製した、そして平行し
て抗体Ｂによって検出されたタンパクを追跡した。
【００９３】２つの異なる（２′−５′）オリゴＡシン
テターゼ活性型の分離 抗体Ｂによって探知された異なる２つのタンパクの分離
が、Ｆｉｇ．１８とＦｉｇ．１９に示してある４０Ｋｄ
タンパクの大部分は、ＳＶ８０細胞からのＮＰ４０細胞
質抽出物の１００，０００ｇの上澄（Ｓ１００）中に残
っている。それは、低塩濃度では、ＤＥＡＥ−セルロー
ズには吸着されず、高濃度で吸着、溶出される。対照的
に、１００Ｋｄタンパクは、Ｓ１００からのものに殆ど
存在せず、ミクロゾームペレット（Ｐ１００）に存在し
ており、それから、Ｎａ ｄｅｏｘｙ ｃｈｏｌａｔｅ
（ＤＯＣ）または０．５Ｍ ＫＣｌによって溶解するこ
とができる。このタンパクは、ＤＥＡＥ−セルローズに
低塩濃度に吸着し、高塩濃度で溶出される。６７Ｋｄと
４５−４６Ｋｄは、１部Ｓ１００に残っているが、比較
的ミクロゾームペレット中のｍｇタンパクあたりに比較
的濃縮されている。それらは、ミクロゾームからＤＯＣ
または、ＫＣｌによって容易に抽出されにくいようであ
る。
テターゼ活性型の分離 抗体Ｂによって探知された異なる２つのタンパクの分離
が、Ｆｉｇ．１８とＦｉｇ．１９に示してある４０Ｋｄ
タンパクの大部分は、ＳＶ８０細胞からのＮＰ４０細胞
質抽出物の１００，０００ｇの上澄（Ｓ１００）中に残
っている。それは、低塩濃度では、ＤＥＡＥ−セルロー
ズには吸着されず、高濃度で吸着、溶出される。対照的
に、１００Ｋｄタンパクは、Ｓ１００からのものに殆ど
存在せず、ミクロゾームペレット（Ｐ１００）に存在し
ており、それから、Ｎａ ｄｅｏｘｙ ｃｈｏｌａｔｅ
（ＤＯＣ）または０．５Ｍ ＫＣｌによって溶解するこ
とができる。このタンパクは、ＤＥＡＥ−セルローズに
低塩濃度に吸着し、高塩濃度で溶出される。６７Ｋｄと
４５−４６Ｋｄは、１部Ｓ１００に残っているが、比較
的ミクロゾームペレット中のｍｇタンパクあたりに比較
的濃縮されている。それらは、ミクロゾームからＤＯＣ
または、ＫＣｌによって容易に抽出されにくいようであ
る。
【００９４】グリセロールグリーディエント沈降によ
り、ＣＭ−セルローズ精製後Ｓ１００から精製した活性
は、４０ＫｄタンパクＥ１６の沈降と平行していること
がわかった。Ｐ１００から精製し、ＤＥＡＥ−セルロー
ズから溶出し、１００及び４６Ｋｄタンパク類を含む分
画は、グリセロールグレーディエントで２つのピークに
わかれ、８０，０００及び４５，０００Ｍｒタンパクと
して沈澱した。重いピーク中の、（２′−５′）オリゴ
Ａシンテターゼは、１００Ｋｄタンパクの存在と平行し
ている。
り、ＣＭ−セルローズ精製後Ｓ１００から精製した活性
は、４０ＫｄタンパクＥ１６の沈降と平行していること
がわかった。Ｐ１００から精製し、ＤＥＡＥ−セルロー
ズから溶出し、１００及び４６Ｋｄタンパク類を含む分
画は、グリセロールグレーディエントで２つのピークに
わかれ、８０，０００及び４５，０００Ｍｒタンパクと
して沈澱した。重いピーク中の、（２′−５′）オリゴ
Ａシンテターゼは、１００Ｋｄタンパクの存在と平行し
ている。
【００９５】種々の（２′−５′）オリゴＡシンテター
ゼ活性型の異なる酵素的性質 グリセロールグレーディエントからの４０Ｋｄタンパク
は、その活性に対する至適ｐＨが６．８であり、ｐＨ
７．８では２５％しか活性がない。さらに、ｐｏｌｙ
（ｒｌ）（ｒｃ）の濃度が１μｇ／ｍｌより低いと、４
０Ｋｄ（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの活性は全
く認められず、最大活性には、５０−１００μｇ／ｍｌ
を必要とする（図２０）。同じ高いｄｓＲＮＡ要求性
が、Ｅ．ｃｏｌｉにおける組み換えＤＮＡ技術によって
作られた。Ｅ１６ ｃＤＮＡ産物について見出された。
グリセロールグレーディエントの後１００Ｋｄタンパク
は（２′−５′）オリゴＡシンテターゼについての至適
ｐＨは、７．６であり、酸性では活性がより低い。それ
は、極度に低いｐｏｌｙ（ｒｌ）（ｒＣ）の濃度あるい
は、存在しない状態で、既に最大の活性を有し、そして
高濃度のｄｓＲＮＡで阻害さえ起る。これは、異なる
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの形がそれらの細
胞質中の局在位置及び酵素的性質が違っているため、異
なる条件で使用されることを強く示唆している。
ゼ活性型の異なる酵素的性質 グリセロールグレーディエントからの４０Ｋｄタンパク
は、その活性に対する至適ｐＨが６．８であり、ｐＨ
７．８では２５％しか活性がない。さらに、ｐｏｌｙ
（ｒｌ）（ｒｃ）の濃度が１μｇ／ｍｌより低いと、４
０Ｋｄ（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの活性は全
く認められず、最大活性には、５０−１００μｇ／ｍｌ
を必要とする（図２０）。同じ高いｄｓＲＮＡ要求性
が、Ｅ．ｃｏｌｉにおける組み換えＤＮＡ技術によって
作られた。Ｅ１６ ｃＤＮＡ産物について見出された。
グリセロールグレーディエントの後１００Ｋｄタンパク
は（２′−５′）オリゴＡシンテターゼについての至適
ｐＨは、７．６であり、酸性では活性がより低い。それ
は、極度に低いｐｏｌｙ（ｒｌ）（ｒＣ）の濃度あるい
は、存在しない状態で、既に最大の活性を有し、そして
高濃度のｄｓＲＮＡで阻害さえ起る。これは、異なる
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの形がそれらの細
胞質中の局在位置及び酵素的性質が違っているため、異
なる条件で使用されることを強く示唆している。
【００９６】多くの観察の結果、インターフェロンで誘
導された（２′−５′）オリゴＡシンテターゼは、（１
９８４年Ｒｅｖｅｌによって総説されている）その抗ウ
イルス効果に加えて２つの、みたところ反対の細胞成長
のフェーズ（セルサイクリングと成長の阻害）に関与し
ていることが示唆される。これは、複数の（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼの型の問題と関係している
かもしれない。同調細胞培養において、我々は、（２′
−５′）オリゴＡシンテターゼが、セルサイクルタンパ
クとして作用することを観察した（Ｍａｌｌｕｃｃｉ
ら、１９８５）。このようにして、マウス胚芽の繊維芽
細胞の同調培養により、（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼ活性と、（２′−５′）ＡシンテターゼｍＲＮＡ
が、Ｓ−期の終りに上昇し、細胞がＧ２期に進むと、そ
のＲＮＡと酵素活性が急速に消えることが示された。
導された（２′−５′）オリゴＡシンテターゼは、（１
９８４年Ｒｅｖｅｌによって総説されている）その抗ウ
イルス効果に加えて２つの、みたところ反対の細胞成長
のフェーズ（セルサイクリングと成長の阻害）に関与し
ていることが示唆される。これは、複数の（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼの型の問題と関係している
かもしれない。同調細胞培養において、我々は、（２′
−５′）オリゴＡシンテターゼが、セルサイクルタンパ
クとして作用することを観察した（Ｍａｌｌｕｃｃｉ
ら、１９８５）。このようにして、マウス胚芽の繊維芽
細胞の同調培養により、（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼ活性と、（２′−５′）ＡシンテターゼｍＲＮＡ
が、Ｓ−期の終りに上昇し、細胞がＧ２期に進むと、そ
のＲＮＡと酵素活性が急速に消えることが示された。
【００９７】抗マウスインターフェロン抗体は、オリゴ
Ａシンテターゼ誘導を減少した。この系において、我々
は、Ｓ−フェーズにおいて蓄積する（２′−５′）オリ
ゴＡシンテターゼは、外生インターフェロンで処理した
とき、同じ細胞に蓄積する１．７Ｋｂ ＲＮＡ種とは異
った大きな４−５Ｋｂの転写物であることも観察した。
このことは、Ｓ−フェーズの（２′−５′）オリゴＡシ
ンテターゼは、外から加えたインターフェロンによって
成長を止められた細胞中のシンテターゼとは異なる形で
あることを示唆している。その大きなｍＲＮＡのため、
それは、低いｄｓＲＮＡを要求する形である１００Ｋｄ
に近いものと思われる。抗−Ｂ抗体は、マウス細胞中
に、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの複数の型を
検出している。これらの観察は、（２′−５′）オリゴ
Ａシンテターゼの４つの型を別々にアッセイすることが
出来ることの利点を、わかり易く説明している。このシ
ンテターゼは、個々に、種々の生理的条件及び病気によ
って変化しうる。
Ａシンテターゼ誘導を減少した。この系において、我々
は、Ｓ−フェーズにおいて蓄積する（２′−５′）オリ
ゴＡシンテターゼは、外生インターフェロンで処理した
とき、同じ細胞に蓄積する１．７Ｋｂ ＲＮＡ種とは異
った大きな４−５Ｋｂの転写物であることも観察した。
このことは、Ｓ−フェーズの（２′−５′）オリゴＡシ
ンテターゼは、外から加えたインターフェロンによって
成長を止められた細胞中のシンテターゼとは異なる形で
あることを示唆している。その大きなｍＲＮＡのため、
それは、低いｄｓＲＮＡを要求する形である１００Ｋｄ
に近いものと思われる。抗−Ｂ抗体は、マウス細胞中
に、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの複数の型を
検出している。これらの観察は、（２′−５′）オリゴ
Ａシンテターゼの４つの型を別々にアッセイすることが
出来ることの利点を、わかり易く説明している。このシ
ンテターゼは、個々に、種々の生理的条件及び病気によ
って変化しうる。
【００９８】例２０ 抗−（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性ペプチド
抗体を（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性のイン
ミュノアッセイに使用すること 抗−Ｂ抗体は、（２′−５’）オリゴＡシンテターゼの
すべての型を認識するので、それは、培養または直接患
者から得られたヒト細胞からの分別前の抽出物中におい
ての（２′−５′）オリゴＡシンテターゼのインミュノ
アッセイのために用いることができる。固相のラジオイ
ンミュノアッセイの例が、図２１に示される。インター
フェロンで処理してあるか、処理していないか、いずれ
のＷｉｓｈとＤａｕｄｉ ＣｅｌｌをＮＰ４０を含む、
Ｂｕｆｆｅｒ Ａで融解し、上記の如く、ｍｉｃｒｏｆ
ｕｇｅ遠心で、Ｓ１５を調整した。１〜１０μｇのタン
パクを含む１部をとり、直接にニトロセルローズペーパ
ー（もしくは、他のタンパク結合性紙）に適用し、その
シートを、正規のインミュノブロット（例１９）に対す
る場合のように抗−Ｂで処理した。Ｆｉｇ．１１のオー
トラジオグラフィーが示すように、１２５Ｉ−タンパク
Ａは、インターフェロン処理細胞から由来するサンプル
のみと結合する。このアッセイは、ラベルタンパクＡ
を、パーオキシダーゼかβガラクトシダーゼを共軛させ
た抗−ラビットＩｇＧと置き換えることによって、エン
ザイム−リンクトーインミュノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）
の形でも使うことができるのは明らかである。（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼのインミュノアッセイは迅
速であり、細胞抽出物調製に２０分、抗−Ｅとタンパク
−Ａ吸着及び洗浄に２時間である。このアッセイは感度
が高く、非常に少量の細胞抽出物でも、その（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼレベルを測るのに十分であ
る。それは特異性があり、インターフェロン処理をして
いない細胞においては、全くシグナルが表れない。
抗体を（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性のイン
ミュノアッセイに使用すること 抗−Ｂ抗体は、（２′−５’）オリゴＡシンテターゼの
すべての型を認識するので、それは、培養または直接患
者から得られたヒト細胞からの分別前の抽出物中におい
ての（２′−５′）オリゴＡシンテターゼのインミュノ
アッセイのために用いることができる。固相のラジオイ
ンミュノアッセイの例が、図２１に示される。インター
フェロンで処理してあるか、処理していないか、いずれ
のＷｉｓｈとＤａｕｄｉ ＣｅｌｌをＮＰ４０を含む、
Ｂｕｆｆｅｒ Ａで融解し、上記の如く、ｍｉｃｒｏｆ
ｕｇｅ遠心で、Ｓ１５を調整した。１〜１０μｇのタン
パクを含む１部をとり、直接にニトロセルローズペーパ
ー（もしくは、他のタンパク結合性紙）に適用し、その
シートを、正規のインミュノブロット（例１９）に対す
る場合のように抗−Ｂで処理した。Ｆｉｇ．１１のオー
トラジオグラフィーが示すように、１２５Ｉ−タンパク
Ａは、インターフェロン処理細胞から由来するサンプル
のみと結合する。このアッセイは、ラベルタンパクＡ
を、パーオキシダーゼかβガラクトシダーゼを共軛させ
た抗−ラビットＩｇＧと置き換えることによって、エン
ザイム−リンクトーインミュノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）
の形でも使うことができるのは明らかである。（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼのインミュノアッセイは迅
速であり、細胞抽出物調製に２０分、抗−Ｅとタンパク
−Ａ吸着及び洗浄に２時間である。このアッセイは感度
が高く、非常に少量の細胞抽出物でも、その（２′−
５′）オリゴＡシンテターゼレベルを測るのに十分であ
る。それは特異性があり、インターフェロン処理をして
いない細胞においては、全くシグナルが表れない。
【００９９】例２１ 細胞中の（２′−５′）オリゴＡシンテターゼの免疫蛍
光顕微鏡法 酵素的アッセイによって、ウイルスに感染した患者の末
梢血単核細胞において、（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼが上昇することが確立された（前の研究をみ
よ）。抗体−（２′−５’）オリゴＡシンテターゼペプ
チド抗体は、細胞一般、特に白血球中の（２′−５’）
オリゴＡシンテターゼの上昇を探知するために、抗−
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼを免疫蛍光顕微鏡
法の形で用いることができる。
光顕微鏡法 酵素的アッセイによって、ウイルスに感染した患者の末
梢血単核細胞において、（２′−５′）オリゴＡシンテ
ターゼが上昇することが確立された（前の研究をみ
よ）。抗体−（２′−５’）オリゴＡシンテターゼペプ
チド抗体は、細胞一般、特に白血球中の（２′−５’）
オリゴＡシンテターゼの上昇を探知するために、抗−
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼを免疫蛍光顕微鏡
法の形で用いることができる。
【０１００】健康な供血者及び急性ウイルス疾患をもっ
た患者から血液（２ｍｌ）を採血した。単核血液細胞を
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（ファルマシア）遠心に
よって分離し、カバーグラスの上に、直接かまたはサイ
トスピンミクロフュージ（ミクロヘマトクリット）を用
いてひろげた。細胞をＰＢＳで洗い、３％フォルムアル
デヒド常温で３０分間固定し、ＰＢＳですすぎ、Ｈａｎ
ｋの塩中で０．５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で５分間処
理し、再びＰＢＳとＰＢＳ−２％ゼラチンですすいだ。
次に、ＰＢＳゼラチンで１：５に稀釈した抗Ｂ血清４０
μｌの小滴をパラフィルム上に加え、カバーグラスを重
ね、インキュベートした。室温で６０分後、カバーグラ
スＰＢＳ−ゼラチン及び１：２０に稀釈したＦＩＩＣ共
軛抗−ラビットＩｇＧ（Ｂｉｏｙｅｄａ）中ですすぎ、
パラフィルム操作にかけた。室温で２０分たってから、
カバーグラスをＰＢＳ−ゼラチンで２回洗い、次に水で
洗い、Ｍｉｖｉｏｌ ４−８８（ヘキスト）−グリセロ
ール（２．５ｇ Ｍｏｖｉｏｌ，６ｇグリセロール及び
１２ｍｌの０．２Ｍトリス塩酸ｐＨ８．５を加えた水６
ｍｌ、５０℃でインキュベートし、５，０００ｇで１５
分沈澱物をのぞいたもの）とともに、顕微鏡スライド状
にマウントする。同時に、抗−Ｂの代りに、正常のラビ
ットの血清を用いてカバーグラスを処理した。スライド
をツアイス蛍光顕微鏡で観察し、３０秒の露出で、ポロ
ライドフィルムに写した。
た患者から血液（２ｍｌ）を採血した。単核血液細胞を
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（ファルマシア）遠心に
よって分離し、カバーグラスの上に、直接かまたはサイ
トスピンミクロフュージ（ミクロヘマトクリット）を用
いてひろげた。細胞をＰＢＳで洗い、３％フォルムアル
デヒド常温で３０分間固定し、ＰＢＳですすぎ、Ｈａｎ
ｋの塩中で０．５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で５分間処
理し、再びＰＢＳとＰＢＳ−２％ゼラチンですすいだ。
次に、ＰＢＳゼラチンで１：５に稀釈した抗Ｂ血清４０
μｌの小滴をパラフィルム上に加え、カバーグラスを重
ね、インキュベートした。室温で６０分後、カバーグラ
スＰＢＳ−ゼラチン及び１：２０に稀釈したＦＩＩＣ共
軛抗−ラビットＩｇＧ（Ｂｉｏｙｅｄａ）中ですすぎ、
パラフィルム操作にかけた。室温で２０分たってから、
カバーグラスをＰＢＳ−ゼラチンで２回洗い、次に水で
洗い、Ｍｉｖｉｏｌ ４−８８（ヘキスト）−グリセロ
ール（２．５ｇ Ｍｏｖｉｏｌ，６ｇグリセロール及び
１２ｍｌの０．２Ｍトリス塩酸ｐＨ８．５を加えた水６
ｍｌ、５０℃でインキュベートし、５，０００ｇで１５
分沈澱物をのぞいたもの）とともに、顕微鏡スライド状
にマウントする。同時に、抗−Ｂの代りに、正常のラビ
ットの血清を用いてカバーグラスを処理した。スライド
をツアイス蛍光顕微鏡で観察し、３０秒の露出で、ポロ
ライドフィルムに写した。
【０１０１】図２２は、リンパ球が、ウイルスの感染患
者からの血液サンプル中においては、抗−（２′−
５′）−オリゴ−シンテターゼで染まり、健康な供血サ
ンプルでは染らず、マクロファージと顆粒球だけに弱い
蛍光がみられるにすぎないことを示している。正常の血
清は、リンパ球を染めないが、マクロファージまたは顆
粒球においても、低いバックグラウンドを与える。従っ
て、本抗−（２′−５′）オリゴＡシンテターゼペプチ
ド抗体は、細胞が、インターフェロンと反応して、
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼを蓄積したかどう
かを評価するために、培養、血液組織片中の細胞の顕微
鏡的観察に用いることができる。
者からの血液サンプル中においては、抗−（２′−
５′）−オリゴ−シンテターゼで染まり、健康な供血サ
ンプルでは染らず、マクロファージと顆粒球だけに弱い
蛍光がみられるにすぎないことを示している。正常の血
清は、リンパ球を染めないが、マクロファージまたは顆
粒球においても、低いバックグラウンドを与える。従っ
て、本抗−（２′−５′）オリゴＡシンテターゼペプチ
ド抗体は、細胞が、インターフェロンと反応して、
（２′−５′）オリゴＡシンテターゼを蓄積したかどう
かを評価するために、培養、血液組織片中の細胞の顕微
鏡的観察に用いることができる。
【０１０２】先行技術の文献名ＲＥＦＥＲＥＮＣＥＳ −Ｂａｇｌｉｏｎｉ Ｃ． ａｎｄ Ｎｉｌｓｅｎ
Ｔ．Ｗ．（１９８３）ｉｎＧｒｅｓｓｅｒ， Ｉ．（ｅ
ｄ）Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ５，Ａｃａｄ． Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ ２３−４２． −Ｂａｌｌ Ｌ．Ａ．（１９８０）Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．３５０，４８６−４９６． −Ｂａｒａｎｙ Ｇ，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ Ｒ（１９
８０）．Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ． Ｉｎ Ｇｒｏｓｓ Ｅ，Ｍｅｉｅ
ｎｈｏｆｅｒ Ｊ（ｅｄｓ）；“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ
Ｂｉｏｌｏｇｙ”．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄ ｐ
ｒｅｓｓ．２：１−２８４． −Ｂｅｎｅｃｈ，Ｐ．，Ｍｅｒｌｉｎ，Ｇ．，ａｎｄ
Ｃｈｅｂａｔｈ，Ｊ．（１９８５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ． １３，１２６７−１２８１． −Ｂｒａｄｆｏｒｄ Ｍ（１９７６）．Ａｎａｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ ７２：２４８． −Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ，Ｒ． ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏ
ｎ， Ｐ．（１９８１）Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ． ５０，３４９−３８３． −Ｃｈｅｂａｔｈ，Ｊ．，Ｍｅｒｌｉｎ， Ｇ．，Ｍｅ
ｔｚ， Ｒ．，Ｂｅｎｅｃｈ，Ｐ． ａｎｄ Ｒｅｖｅ
ｌ Ｍ．（１９８３）Ｎｕｃｌ． ＡｃｉｄｓＲｅｓ．
１１，１２１３−１２２６． −Ｃｈｅｌｅｙ，Ｓ．，ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，
Ｒ．（１９８４）Ａ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｍｉ
ｃｒｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｙ ｄｏｔ−ｂｌｏ
ｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ａｎａｌ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ． １３７，１５−１９．
Ｔ．Ｗ．（１９８３）ｉｎＧｒｅｓｓｅｒ， Ｉ．（ｅ
ｄ）Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ５，Ａｃａｄ． Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ ２３−４２． −Ｂａｌｌ Ｌ．Ａ．（１９８０）Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．３５０，４８６−４９６． −Ｂａｒａｎｙ Ｇ，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ Ｒ（１９
８０）．Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ． Ｉｎ Ｇｒｏｓｓ Ｅ，Ｍｅｉｅ
ｎｈｏｆｅｒ Ｊ（ｅｄｓ）；“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ
Ｂｉｏｌｏｇｙ”．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄ ｐ
ｒｅｓｓ．２：１−２８４． −Ｂｅｎｅｃｈ，Ｐ．，Ｍｅｒｌｉｎ，Ｇ．，ａｎｄ
Ｃｈｅｂａｔｈ，Ｊ．（１９８５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ． １３，１２６７−１２８１． −Ｂｒａｄｆｏｒｄ Ｍ（１９７６）．Ａｎａｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ ７２：２４８． −Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ，Ｒ． ａｎｄ Ｃｈａｍｂｏ
ｎ， Ｐ．（１９８１）Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ． ５０，３４９−３８３． −Ｃｈｅｂａｔｈ，Ｊ．，Ｍｅｒｌｉｎ， Ｇ．，Ｍｅ
ｔｚ， Ｒ．，Ｂｅｎｅｃｈ，Ｐ． ａｎｄ Ｒｅｖｅ
ｌ Ｍ．（１９８３）Ｎｕｃｌ． ＡｃｉｄｓＲｅｓ．
１１，１２１３−１２２６． −Ｃｈｅｌｅｙ，Ｓ．，ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，
Ｒ．（１９８４）Ａ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｍｉ
ｃｒｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｙ ｄｏｔ−ｂｌｏ
ｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ａｎａｌ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ． １３７，１５−１９．
【０１０３】−Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙ Ｙ．Ｍｏｒ
ｙ Ｙ．Ｃｈｅｎ Ｌ，ＭａｒｋｓＺ，Ｎｏｖｉｃｋ
Ｄ，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ Ｍ，Ｒｅｖｅｌ Ｍ（１９
８４）．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖ
ｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｆｉｂ
ｒｏｌａｓｔ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｂｙＨａｍｓｔ
ｅｒ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈｅＩＦＮ−β１ Ｇｅｎｅ Ｆｕｓｅｄ ｔｏ
ａｎ ＳＶ４０ Ｅａｒｌｙｐｒｏｍｏｔｅｒ． ＤＮ
Ａ ３：２９７−３０８． −Ｃｒｅａｓｅｙ Ａ．，Ｅｐｐｓｔｅｉｎ Ｄ．
Ａ．，Ｍａｒｓｈ Ｙ．Ｖ．，Ｋｈａｎ Ｚ． ａｎｄ
Ｍｅｒｉｇａｎ Ｔ．Ｃ．（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｂｉｏｌ． ３，７８０−７８６． −Ｄｅｇｒａｖｅ Ｗ．，Ｄｅｒｙｎｃｋ Ｒ．，Ｔａ
ｖｅｒｎｉｅｒ Ｊ．，Ｈａｅｇｅｍａｎ Ｇ． ａｎ
ｄ Ｆｉｅｒｓ Ｗ．（１９８１）Ｇｅｎｅ１４，１３
７−１４３． −Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ Ｊ．，Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，
Ｆａｒｒｅｌｌ Ｐ．ａｎｄ Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．
（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２５５，３８
１３−３８１６． −Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｄ．Ａ．，Ｃｚａｒｎｉｅｃｋｉ
Ｗ．，ＪａｃｏｂｓｏｎＨ．， Ｆｒｉｅｄｍａｎ
Ｒ．Ｍ． ａｎｄ Ｐａｎｅｔ Ａ．（１９８１）Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １１８，９−１５． −Ｅｔｉｅｎｎｅ−Ｓｍｅｋｅｎｓ Ｍ．，Ｇｏｌｄｓ
ｔｅｉｎ Ｊ．，Ｏｏｍｓ Ｈ． ａｎｄ Ｄｕｍｏｍ
ｔ Ｊ．（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１３０，２６９−２７３． −Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ．，Ｎｉｒ Ｕ．，Ｗａｌｌａｃ
ｈ Ｄ．，ＭｅｒｌｉｎＣ．，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ
Ｍ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８２）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７９，３
０８２−３０８６． −Ｆｅｒｂｕｓ Ｄ．，Ｊｕｓｔｅｓｅｎ Ｊ．，Ｂｅ
ｓａｎｃｏｎ Ｆ． ａｎｄ Ｔｈａｎｇ Ｍ．Ｎ．
（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． １００，８４７−８５６． −Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ｒ．Ｌ．，Ｍａｎｌｙ Ｓ．
Ｐ．，ＭｃＭａｈｏｎ Ｍ．，Ｋｅｒｒ Ｉ．Ｍ． ａ
ｎｄ Ｓｔａｒｋ Ｇ．Ｒ．（１９８４）Ｃｅｌｌ３
８，７４５−７５５． −Ｇｒｅｅｎ Ｍ．，Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ． ａｎｄ
Ｍｅｌｔｏｎ Ｄ．Ａ．（１９８３）Ｃｅｌｌ ３
２，６８１−６９４． −Ｇｒｅｅｎ Ｎ．，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｈ．，Ｏｌ
ｓｏｎ Ｓ．，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｓ．， Ｓｃｈｉ
ｎｎｉｃｋ Ｔ．，Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ Ｇ．，Ｌｅｒ
ｎｅｒ Ｒ．（１９８２）．Ｃｅｌｌ ２８：４７７−
４８７．
ｙ Ｙ．Ｃｈｅｎ Ｌ，ＭａｒｋｓＺ，Ｎｏｖｉｃｋ
Ｄ，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ Ｍ，Ｒｅｖｅｌ Ｍ（１９
８４）．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖ
ｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｆｉｂ
ｒｏｌａｓｔ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｂｙＨａｍｓｔ
ｅｒ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈｅＩＦＮ−β１ Ｇｅｎｅ Ｆｕｓｅｄ ｔｏ
ａｎ ＳＶ４０ Ｅａｒｌｙｐｒｏｍｏｔｅｒ． ＤＮ
Ａ ３：２９７−３０８． −Ｃｒｅａｓｅｙ Ａ．，Ｅｐｐｓｔｅｉｎ Ｄ．
Ａ．，Ｍａｒｓｈ Ｙ．Ｖ．，Ｋｈａｎ Ｚ． ａｎｄ
Ｍｅｒｉｇａｎ Ｔ．Ｃ．（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｂｉｏｌ． ３，７８０−７８６． −Ｄｅｇｒａｖｅ Ｗ．，Ｄｅｒｙｎｃｋ Ｒ．，Ｔａ
ｖｅｒｎｉｅｒ Ｊ．，Ｈａｅｇｅｍａｎ Ｇ． ａｎ
ｄ Ｆｉｅｒｓ Ｗ．（１９８１）Ｇｅｎｅ１４，１３
７−１４３． −Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ Ｊ．，Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，
Ｆａｒｒｅｌｌ Ｐ．ａｎｄ Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．
（１９８０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２５５，３８
１３−３８１６． −Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｄ．Ａ．，Ｃｚａｒｎｉｅｃｋｉ
Ｗ．，ＪａｃｏｂｓｏｎＨ．， Ｆｒｉｅｄｍａｎ
Ｒ．Ｍ． ａｎｄ Ｐａｎｅｔ Ａ．（１９８１）Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． １１８，９−１５． −Ｅｔｉｅｎｎｅ−Ｓｍｅｋｅｎｓ Ｍ．，Ｇｏｌｄｓ
ｔｅｉｎ Ｊ．，Ｏｏｍｓ Ｈ． ａｎｄ Ｄｕｍｏｍ
ｔ Ｊ．（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１３０，２６９−２７３． −Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ．，Ｎｉｒ Ｕ．，Ｗａｌｌａｃ
ｈ Ｄ．，ＭｅｒｌｉｎＣ．，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ
Ｍ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８２）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７９，３
０８２−３０８６． −Ｆｅｒｂｕｓ Ｄ．，Ｊｕｓｔｅｓｅｎ Ｊ．，Ｂｅ
ｓａｎｃｏｎ Ｆ． ａｎｄ Ｔｈａｎｇ Ｍ．Ｎ．
（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍｕｎ． １００，８４７−８５６． −Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ｒ．Ｌ．，Ｍａｎｌｙ Ｓ．
Ｐ．，ＭｃＭａｈｏｎ Ｍ．，Ｋｅｒｒ Ｉ．Ｍ． ａ
ｎｄ Ｓｔａｒｋ Ｇ．Ｒ．（１９８４）Ｃｅｌｌ３
８，７４５−７５５． −Ｇｒｅｅｎ Ｍ．，Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ． ａｎｄ
Ｍｅｌｔｏｎ Ｄ．Ａ．（１９８３）Ｃｅｌｌ ３
２，６８１−６９４． −Ｇｒｅｅｎ Ｎ．，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｈ．，Ｏｌ
ｓｏｎ Ｓ．，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｓ．， Ｓｃｈｉ
ｎｎｉｃｋ Ｔ．，Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ Ｇ．，Ｌｅｒ
ｎｅｒ Ｒ．（１９８２）．Ｃｅｌｌ ２８：４７７−
４８７．
【０１０４】−Ｈｏｖａｎｅｓｓｉａｎ Ａ．Ｇ．，Ｂ
ｒｏｗｎ Ｒ．Ｅ． ａｎｄ Ｋｅｒｒ Ｉ．Ｍ．（１
９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６８，５３７−５４０． −Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｍ．，Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ｒ．
Ｍ． ａｎｄ Ｔｏｒｒｅｎｃｅ Ｐ．Ｆ．（１９８
０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９，５５８０−５５
８５． −Ｋａｒｉｎ Ｍ． ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｒ．
Ｉ．，（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ ２９９，７９７−８
０２． −Ｋｅｌｌｅｒ Ｗ．（１９８４）Ｃｅｌｌ ３９，
４２３−４２５． −Ｋｅｒｒ Ｉ．Ｍ． ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ， Ｒ．
Ｅ．（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ７５， ２５６−２６０． −Ｋｉｍｉｃｈｉ Ａ．，Ｓｈｕｒｅ Ｈ．，Ｌａｐｉ
ｄｏｔ Ｙ．，Ｒａｐｏｐｏｒｔ Ｓ．，Ｐａｎｅｔ
Ａ ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８１）ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ． １３４，２１２−２１６． −Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｎ．，Ｓｅｍｌｅｒ Ｂ．Ｌ．，
Ｒｏｔｈｂｅｒｇ Ｐ．Ｇ．，Ｌａｒｓｅｎ Ｇ．
Ｒ．，Ａｄｌｅｒ Ｃ．Ｊ．，Ｄｏｒｎｅｒ Ａ．
Ｊ．，Ｅｍｉｎｉ Ｅ．Ａ．，Ｈａｎｅｃａｋ Ｒ．，
Ｌｅｅ Ｊ．Ｊ．，Ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｒｆ Ｓ．，
Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃ．Ｗ． ａｎｄ Ｗｉｍｍｅｒ
Ｅ．（１９８１），Ｎａｔｕｒｅ ２９１：５４７−５
５３． −Ｋｏｚａｋ Ｍ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ ３０
８， ２４１−２４６． −Ｋｙｔｅ Ｊ． ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ Ｒ．
Ｆ．（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １５７，１
０５−１３２．
ｒｏｗｎ Ｒ．Ｅ． ａｎｄ Ｋｅｒｒ Ｉ．Ｍ．（１
９７７）Ｎａｔｕｒｅ ２６８，５３７−５４０． −Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｍ．，Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ｒ．
Ｍ． ａｎｄ Ｔｏｒｒｅｎｃｅ Ｐ．Ｆ．（１９８
０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９，５５８０−５５
８５． −Ｋａｒｉｎ Ｍ． ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｒ．
Ｉ．，（１９８２）Ｎａｔｕｒｅ ２９９，７９７−８
０２． −Ｋｅｌｌｅｒ Ｗ．（１９８４）Ｃｅｌｌ ３９，
４２３−４２５． −Ｋｅｒｒ Ｉ．Ｍ． ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ， Ｒ．
Ｅ．（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ７５， ２５６−２６０． −Ｋｉｍｉｃｈｉ Ａ．，Ｓｈｕｒｅ Ｈ．，Ｌａｐｉ
ｄｏｔ Ｙ．，Ｒａｐｏｐｏｒｔ Ｓ．，Ｐａｎｅｔ
Ａ ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８１）ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ． １３４，２１２−２１６． −Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｎ．，Ｓｅｍｌｅｒ Ｂ．Ｌ．，
Ｒｏｔｈｂｅｒｇ Ｐ．Ｇ．，Ｌａｒｓｅｎ Ｇ．
Ｒ．，Ａｄｌｅｒ Ｃ．Ｊ．，Ｄｏｒｎｅｒ Ａ．
Ｊ．，Ｅｍｉｎｉ Ｅ．Ａ．，Ｈａｎｅｃａｋ Ｒ．，
Ｌｅｅ Ｊ．Ｊ．，Ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｒｆ Ｓ．，
Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃ．Ｗ． ａｎｄ Ｗｉｍｍｅｒ
Ｅ．（１９８１），Ｎａｔｕｒｅ ２９１：５４７−５
５３． −Ｋｏｚａｋ Ｍ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ ３０
８， ２４１−２４６． −Ｋｙｔｅ Ｊ． ａｎｄ Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ Ｒ．
Ｆ．（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １５７，１
０５−１３２．
【０１０５】−Ｌａｅｍｍｌｉ Ｗ．Ｋ．（１９７
０），Ｎａｔｕｒｅ ２２７：６８０−６８５． −Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ｌ．，Ｍａｒｔｉ Ｊ．，Ｒｏｕ
ｘ Ｄ． ａｎｄ Ｃａｉｌｌａ Ｈ．（１９８４）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８
１．２３２２−２３２６． −Ｌｅｂｌｅｕ Ｂ． ａｎｄ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｊ．
（１９８２）ｉｎ Ｇｒｅｓｓｅｒ，Ｉ．（ｅｄ）Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎ ４，Ａｃａｄ． Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ４７−８４． −Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８２），Ａｎｎ． Ｒｅ
ｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．５１：２５１−２８２． −Ｍａｌｉｓｓｅｎ Ｍ．，Ｍａｌｉｓｓｅｎ Ｂ．
ａｎｄ ＪｏｒｄａｎＢ．（１９８２），Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７９，８９３−
８９７． −Ｍａｌｌｕｃｃｉ Ｌ．，Ｃｈｅｂａｔｈ Ｊ．，Ｒ
ｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗｅｌｌｓ Ｖ．，Ｂｅｎｅｃｈ
Ｐ．（１９８５）．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ ２
−５Ａ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ Ｄｕｒｉｎｇ Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃ
ｌｅ． Ｉｎ：Ｄｉａｎｚａｎｉ Ｆ，Ｒｏｏｓｉ Ｇ
Ｂ（ｅｄｓ）；“Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｙ
ｓｔｅｍ”，Ｓｅｒｏｎｏ Ｓｙｍｐｏｓｉａ Ｖｏｌ
２４．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，
ｐｐ１６５−１７０． −Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，Ｈａｒｄｉｓｏｎ Ｒ．，
Ｌａｃｙ Ｅ．，Ｌａｕｅｒ Ｊ．，Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌ
ｌ Ｃ．，Ｑｕｏｎ Ｄ．，Ｇｅｋ ＫｅｅＳ． ａｎ
ｄ Ｅｆｓｔｒａｄｉａｔｉｓ Ａ．（１９７８）Ｃｅ
ｌｌ １５，６８７−７０１． −Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ Ｐ． ａ
ｎｄ ＳａｍｂｒｏｏｋＪ．（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃ１ｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ． −Ｍａｘａｍ Ａ．Ｍ．ａｎｄ Ｇｉｂｅｒｔ Ｗ．
（１９８０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ． ６５，４９
９−５６０．
０），Ｎａｔｕｒｅ ２２７：６８０−６８５． −Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ｌ．，Ｍａｒｔｉ Ｊ．，Ｒｏｕ
ｘ Ｄ． ａｎｄ Ｃａｉｌｌａ Ｈ．（１９８４）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８
１．２３２２−２３２６． −Ｌｅｂｌｅｕ Ｂ． ａｎｄ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｊ．
（１９８２）ｉｎ Ｇｒｅｓｓｅｒ，Ｉ．（ｅｄ）Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎ ４，Ａｃａｄ． Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ４７−８４． −Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８２），Ａｎｎ． Ｒｅ
ｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．５１：２５１−２８２． −Ｍａｌｉｓｓｅｎ Ｍ．，Ｍａｌｉｓｓｅｎ Ｂ．
ａｎｄ ＪｏｒｄａｎＢ．（１９８２），Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７９，８９３−
８９７． −Ｍａｌｌｕｃｃｉ Ｌ．，Ｃｈｅｂａｔｈ Ｊ．，Ｒ
ｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗｅｌｌｓ Ｖ．，Ｂｅｎｅｃｈ
Ｐ．（１９８５）．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ ２
−５Ａ Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ Ｄｕｒｉｎｇ Ｔｈｅ Ｃｅｌｌ Ｃｙｃ
ｌｅ． Ｉｎ：Ｄｉａｎｚａｎｉ Ｆ，Ｒｏｏｓｉ Ｇ
Ｂ（ｅｄｓ）；“Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｙ
ｓｔｅｍ”，Ｓｅｒｏｎｏ Ｓｙｍｐｏｓｉａ Ｖｏｌ
２４．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，
ｐｐ１６５−１７０． −Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，Ｈａｒｄｉｓｏｎ Ｒ．，
Ｌａｃｙ Ｅ．，Ｌａｕｅｒ Ｊ．，Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌ
ｌ Ｃ．，Ｑｕｏｎ Ｄ．，Ｇｅｋ ＫｅｅＳ． ａｎ
ｄ Ｅｆｓｔｒａｄｉａｔｉｓ Ａ．（１９７８）Ｃｅ
ｌｌ １５，６８７−７０１． −Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ Ｐ． ａ
ｎｄ ＳａｍｂｒｏｏｋＪ．（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃ１ｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ． −Ｍａｘａｍ Ａ．Ｍ．ａｎｄ Ｇｉｂｅｒｔ Ｗ．
（１９８０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ． ６５，４９
９−５６０．
【０１０６】−Ｍｅｒ１ｉｎ Ｇ．，Ｃｈｅｂａｔｈ
Ｊ．，Ｂｅｎｅｃｈ Ｐ．，ＭｅｔｚＰ． ａｎｄ Ｒ
ｅｖｅｌ Ｍ．（１９８３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８０， ４９０４−４９０
８． −Ｍｅｒｒｉｔｔ ＪＡ， Ｂｏｒｄｅｎ ＥＣ， Ｂ
ａｌｌ ＬＡ（１９８５）．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ
ｏｆ ２′−５′Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｒｅｃ
ｅｉｖｉｎｇＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−Ａｌｐｈａ． Ｊ
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ５：１９１−１９８． −Ｍｉｎｋｓ Ｍ．Ａ．，Ｗｅｓｔ Ｄ．Ｋ．，Ｂｅｎ
ｖｉｎ Ｓ． ａｎｄＢａｇｌｉｏｎｉ Ｃ．（１９７
９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２５４，１０１８０−
１０１８３． −Ｍｏｒｙ Ｙ．，Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙ Ｙ．，
Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ Ｓ．Ｌ．，Ｃｈｅｎ Ｌ．，Ｎｉ
ｒ．，Ｕ．，Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ Ｊ．，Ｍａｌｐ
ｉｅｃｅ Ｙ．，Ｔｉｏｌｌａｉｓ Ｐ．，Ｍａｒｋｓ
Ｄ．，Ｌａｄｎｅｒ Ｍ．，Ｃｏｌｂｙ Ｃ． ａｎ
ｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ． １２０，１９２−２０２． −Ｎｉｌｓｅｎ Ｔ．Ｍ．，Ｍａｒｏｎｅｙ Ｐ．
Ａ．，Ｒｏｂｒｔｓｏｎ Ｈ．Ｄ． Ａｎｄ Ｂａｇｌ
ｉｏｎｉ Ｃ．（１９８２ａ）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏ１． ２，１５４−１６０． −Ｎｉ１ｓｅｎ Ｔ．Ｍ．，Ｗｏｏｄ Ｄ．Ｌ． ａｎ
ｄ Ｂａｇ１ｉｏｎｉＣ．（１９８２ｂ）Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ． ２５７，１６０２−１６０５ −Ｎｉｒ Ｕ．，Ｃｏｈｅｎ Ｂ．，Ｃｈｅｎ Ｌ．
ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ． １２，６９７９−６９９３ −Ｐｕｓｔｅｌｌ Ｊ． ａｎｄ Ｋａｆａｔｏｓ
Ｆ．Ｃ．（１９８２ａ）Ｎｕｃ１．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ． １０，４７６５−４７８２．
Ｊ．，Ｂｅｎｅｃｈ Ｐ．，ＭｅｔｚＰ． ａｎｄ Ｒ
ｅｖｅｌ Ｍ．（１９８３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８０， ４９０４−４９０
８． −Ｍｅｒｒｉｔｔ ＪＡ， Ｂｏｒｄｅｎ ＥＣ， Ｂ
ａｌｌ ＬＡ（１９８５）．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ
ｏｆ ２′−５′Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｒｅｃ
ｅｉｖｉｎｇＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−Ａｌｐｈａ． Ｊ
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ５：１９１−１９８． −Ｍｉｎｋｓ Ｍ．Ａ．，Ｗｅｓｔ Ｄ．Ｋ．，Ｂｅｎ
ｖｉｎ Ｓ． ａｎｄＢａｇｌｉｏｎｉ Ｃ．（１９７
９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２５４，１０１８０−
１０１８３． −Ｍｏｒｙ Ｙ．，Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙ Ｙ．，
Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ Ｓ．Ｌ．，Ｃｈｅｎ Ｌ．，Ｎｉ
ｒ．，Ｕ．，Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ Ｊ．，Ｍａｌｐ
ｉｅｃｅ Ｙ．，Ｔｉｏｌｌａｉｓ Ｐ．，Ｍａｒｋｓ
Ｄ．，Ｌａｄｎｅｒ Ｍ．，Ｃｏｌｂｙ Ｃ． ａｎ
ｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ． １２０，１９２−２０２． −Ｎｉｌｓｅｎ Ｔ．Ｍ．，Ｍａｒｏｎｅｙ Ｐ．
Ａ．，Ｒｏｂｒｔｓｏｎ Ｈ．Ｄ． Ａｎｄ Ｂａｇｌ
ｉｏｎｉ Ｃ．（１９８２ａ）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏ１． ２，１５４−１６０． −Ｎｉ１ｓｅｎ Ｔ．Ｍ．，Ｗｏｏｄ Ｄ．Ｌ． ａｎ
ｄ Ｂａｇ１ｉｏｎｉＣ．（１９８２ｂ）Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ． ２５７，１６０２−１６０５ −Ｎｉｒ Ｕ．，Ｃｏｈｅｎ Ｂ．，Ｃｈｅｎ Ｌ．
ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ． １２，６９７９−６９９３ −Ｐｕｓｔｅｌｌ Ｊ． ａｎｄ Ｋａｆａｔｏｓ
Ｆ．Ｃ．（１９８２ａ）Ｎｕｃ１．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ． １０，４７６５−４７８２．
【０１０７】−Ｐｕｓｔｅｌｌ Ｊ． ａｎｄ Ｋａｆ
ａｔｏｓ Ｆ．Ｃ．（１９８２ｂ）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ． １０，５１−５９． −Ｒａｊ Ｎ．Ｂ．Ｋ． ａｎｄ Ｐｉｔｈａ Ｐ．
Ｎ．（１９８１），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ ７８：７４２６−７４３０． −Ｒｅａｄ ＳＥ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＢＲＧ， Ｃ
ｏａｔｅｓ ＲＡ， Ｅｖａｎｓ ＷＫ， Ｆａｎｎｉ
ｎｇ ＭＭ， Ｇａｒｖｅｙ ＭＢ， Ｓｈｅｐｈｅｒ
ｄ ＦＡ（１９８５）． Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｌｅｖｅ
ｌｓ ｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ
２′−５′Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｔａｓｅ ｉｎ Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ Ｐｅｒｓ
ｉｓｔｅｎｔ Ｌｙｍｐｈｏａｄｅｎｏｐａｔｈｙ ａ
ｎｄ ｔｈｅ Ａｃｑｕｉｒｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ． Ｊ Ｉｎｆｅｃ
ｔ Ｄｉｓ ３：４６６−４７２． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８４） ｉｎ Ｂｅｃｋｅ
ｒ，Ｙ．（ｅｄ） Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｄｒｕｇｓ
ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ａｃｔｉｖ
ｉｔｙ， Ｍａｒｔｉｎｕｓ Ｎｉｊｈｏｆｆ，Ｂｏｓ
ｔｏｎ， ｐｐ３５７−４３３． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｋｉｍｃｈｉ Ａ．，Ｓｈｕｌｍ
ａｎ Ｌ．，Ｆｒａｄｉｎ Ａ．，Ｓｈｕｓｔｅｒ
Ｒ．，Ｙａｋｏｂｓｏｎ Ｅ．，Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓ
ｋｙ Ｙ．，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａ．，Ｓｈｕｒｅ Ｈ．
ａｎｄ Ｂｅｎｄｏｒｉ Ｒ．（１９８０） Ａｎ
ｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ３５０，４５９−４
７２． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｍｅｒｌ
ｉｎ Ｇ．，Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｓｃｈｍｉｄ
ｔ Ａ．，Ｗｏｌｄ Ｄ．，ＳｈｕｌｍａｎＬ． ａｎ
ｄ Ｋｉｍｃｈｉ Ａ．（１９８１） Ｍｅｔｈ．Ｅｎ
ｚｙｍｏｌ７９，１４９−１６１． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｋｉｍｃｈｉ Ａ．，Ｆｒｉｅｄ
ｍａｎ Ｍ．，ＷｏｌｄＤ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｐ
ａｎｅｔ Ａ．，Ｒａｐｏｐｏｒｔ Ｓ． ａｎｄ Ｌ
ａｐｉｄｏｔ Ｙ．（１９８２） Ｔｅｘａｓ Ｒｅ
ｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ． ４１，４５２−４６２．
ａｔｏｓ Ｆ．Ｃ．（１９８２ｂ）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ． １０，５１−５９． −Ｒａｊ Ｎ．Ｂ．Ｋ． ａｎｄ Ｐｉｔｈａ Ｐ．
Ｎ．（１９８１），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ ７８：７４２６−７４３０． −Ｒｅａｄ ＳＥ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＢＲＧ， Ｃ
ｏａｔｅｓ ＲＡ， Ｅｖａｎｓ ＷＫ， Ｆａｎｎｉ
ｎｇ ＭＭ， Ｇａｒｖｅｙ ＭＢ， Ｓｈｅｐｈｅｒ
ｄ ＦＡ（１９８５）． Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｌｅｖｅ
ｌｓ ｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ
２′−５′Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｔａｓｅ ｉｎ Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ Ｐｅｒｓ
ｉｓｔｅｎｔ Ｌｙｍｐｈｏａｄｅｎｏｐａｔｈｙ ａ
ｎｄ ｔｈｅ Ａｃｑｕｉｒｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ． Ｊ Ｉｎｆｅｃ
ｔ Ｄｉｓ ３：４６６−４７２． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８４） ｉｎ Ｂｅｃｋｅ
ｒ，Ｙ．（ｅｄ） Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｄｒｕｇｓ
ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ａｃｔｉｖ
ｉｔｙ， Ｍａｒｔｉｎｕｓ Ｎｉｊｈｏｆｆ，Ｂｏｓ
ｔｏｎ， ｐｐ３５７−４３３． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｋｉｍｃｈｉ Ａ．，Ｓｈｕｌｍ
ａｎ Ｌ．，Ｆｒａｄｉｎ Ａ．，Ｓｈｕｓｔｅｒ
Ｒ．，Ｙａｋｏｂｓｏｎ Ｅ．，Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓ
ｋｙ Ｙ．，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａ．，Ｓｈｕｒｅ Ｈ．
ａｎｄ Ｂｅｎｄｏｒｉ Ｒ．（１９８０） Ａｎ
ｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ３５０，４５９−４
７２． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｍｅｒｌ
ｉｎ Ｇ．，Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｓｃｈｍｉｄ
ｔ Ａ．，Ｗｏｌｄ Ｄ．，ＳｈｕｌｍａｎＬ． ａｎ
ｄ Ｋｉｍｃｈｉ Ａ．（１９８１） Ｍｅｔｈ．Ｅｎ
ｚｙｍｏｌ７９，１４９−１６１． −Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｋｉｍｃｈｉ Ａ．，Ｆｒｉｅｄ
ｍａｎ Ｍ．，ＷｏｌｄＤ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｐ
ａｎｅｔ Ａ．，Ｒａｐｏｐｏｒｔ Ｓ． ａｎｄ Ｌ
ａｐｉｄｏｔ Ｙ．（１９８２） Ｔｅｘａｓ Ｒｅ
ｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ． ４１，４５２−４６２．
【０１０８】−Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｓｈａｔｔｎｅｒ
Ａ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｌ
ｅｖａｖｉ Ｈ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖｉｎ
Ｓ．，（１９８２）．Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ Ｉ
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｄｉａｇｎｏｓ
ｉｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄｄ
ｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｄｅ
ｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｂｙ Ａｓｓａｙ ｏｆ ａｎ
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｎｚｙｍ
ｅ ｉｎ Ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｗｈｉ
ｔｅＢｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ．Ｉｎ Ｋｏｎｏ Ｒ，Ｖ
ｉｌｃｅｋ Ｊ（ｅｄｓ）：“Ｔｈｅ Ｃｌｉｎｉｃａ
ｌ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｓ”． Ｔｏｋｙｏ：Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔ
ｏｋｙｏ Ｐｒｅｓｓ， ｐｐ３５３−３６７． −Ｒｉｇｂｙ Ｐ．，Ｄｉｅｃｋｍａｎ Ｍ．，Ｒｈｏ
ｄｅｓ Ｃ，ａｎｄ Ｂｅｒｇ Ｐ．（１９７７）Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １１３，２３７−２５１ −Ｒｏｓａ Ｆ．，Ｂｅｒｉｓｓｉ Ｈ．，Ｗｅｉｓｓ
ｅｎｂａｃｈ Ｊ．，Ｍａｒｏｔｅａｕｘ Ｌ．，Ｆｅ
ｌｌｏｕｓ Ｍ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８
３ａ） ＥＭＢＯ Ｊ． ２，２３９−２４３． −Ｒｏｓａ Ｆ．，Ｈａｔａｔ Ｄ．，Ａｂａｄｉｅ
Ａ．，ＷａｌｌａｃｈＤ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ． ａｎｄ
Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ．（１９８３ｂ） ＥＭＢＯ
Ｊ． ２，１５８５−１５８９． −Ｓａｌｚｂｅｒｇ Ｓ．，Ｗｒｅｓｃｈｎｅｒ Ｄ．
Ｈ．，ＯｂｅｒｍａｎＦ．，Ｐａｎｅｔ Ａ． ａｎｄ
Ｂａｋｈａｎａｓｃｈｖｉ１ｉ Ｍ．（１９８３）Ｍ
ｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ． ３，１７５９−１７６
５． −Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ Ｊ．
Ｐ． ａｎｄ Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８０）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２５５，９８０７−９８１３．
Ａ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｌ
ｅｖａｖｉ Ｈ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖｉｎ
Ｓ．，（１９８２）．Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ Ｉ
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｄｉａｇｎｏｓ
ｉｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄｄ
ｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｄｅ
ｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｂｙ Ａｓｓａｙ ｏｆ ａｎ
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｎｚｙｍ
ｅ ｉｎ Ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｗｈｉ
ｔｅＢｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ．Ｉｎ Ｋｏｎｏ Ｒ，Ｖ
ｉｌｃｅｋ Ｊ（ｅｄｓ）：“Ｔｈｅ Ｃｌｉｎｉｃａ
ｌ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｓ”． Ｔｏｋｙｏ：Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔ
ｏｋｙｏ Ｐｒｅｓｓ， ｐｐ３５３−３６７． −Ｒｉｇｂｙ Ｐ．，Ｄｉｅｃｋｍａｎ Ｍ．，Ｒｈｏ
ｄｅｓ Ｃ，ａｎｄ Ｂｅｒｇ Ｐ．（１９７７）Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １１３，２３７−２５１ −Ｒｏｓａ Ｆ．，Ｂｅｒｉｓｓｉ Ｈ．，Ｗｅｉｓｓ
ｅｎｂａｃｈ Ｊ．，Ｍａｒｏｔｅａｕｘ Ｌ．，Ｆｅ
ｌｌｏｕｓ Ｍ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８
３ａ） ＥＭＢＯ Ｊ． ２，２３９−２４３． −Ｒｏｓａ Ｆ．，Ｈａｔａｔ Ｄ．，Ａｂａｄｉｅ
Ａ．，ＷａｌｌａｃｈＤ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ． ａｎｄ
Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ．（１９８３ｂ） ＥＭＢＯ
Ｊ． ２，１５８５−１５８９． −Ｓａｌｚｂｅｒｇ Ｓ．，Ｗｒｅｓｃｈｎｅｒ Ｄ．
Ｈ．，ＯｂｅｒｍａｎＦ．，Ｐａｎｅｔ Ａ． ａｎｄ
Ｂａｋｈａｎａｓｃｈｖｉ１ｉ Ｍ．（１９８３）Ｍ
ｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ． ３，１７５９−１７６
５． −Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ Ｊ．
Ｐ． ａｎｄ Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８０）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２５５，９８０７−９８１３．
【０１０９】−Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｐｒａｖｔｃｈ
ｅｖａ Ｄ．Ｄ．，Ｒｕｄｄｌｅ Ｆ．Ｈ． ａｎｄ
Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８４） Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎ Ｒｅｓ． ４，２９５−３００． −Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｍ．Ｅ． ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓ Ｂ．Ｒ．Ｇ．（１９８４） Ａｎｔｉｖｉｒａｌ
Ｒｅｓ． ＡＢＳＴＲ Ｎｏ ３， ｐ．６０． −Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ Ａ．，Ｋｏｒｍａｎ Ａ．
Ｊ．，Ｋａｍｂ Ａ． ａｎｄ Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ
Ｊ．Ｌ．（１９８３）Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．
１１，８６６３−８６７５． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｗ
ａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｈ．，Ｂｉ
ｎｏ Ｔ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，ＬｅｖｉｎＳ．，Ｒｅｖ
ｅｌ Ｍ．（１９８１ａ） Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏ
ｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ ａ
ｓｓａｙ ｏｆ ２′５′ｏｌｉｇｏｉｓｏａｄｅｎｙ
ｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎｐ
ｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌ
ｌｓ， Ｊ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ． １，
５８７−５９４． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，
Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖｉｎ
Ｓ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８１ｂ）Ａｓｓａｙ ｏ
ｆ ａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅ
ｎｚｙｍｅｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ
ａｓ ａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｉｄ ｉｎ ｖ
ｉｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｌａｎｃｅｔ ２，４
９７−５００． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｓ
ｈａｐｉｒａ Ａ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗａｌｌａｃ
ｈ Ｄ．（１９８２ａ）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ
（２′−５′）Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｓｙｎ
ｔｈｅｓｅａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｂｌｏｏｄ
−Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｍｉｃｅｅａｒｌｙ ａｆｔｅ
ｒ ｖｉｒａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ ２：２８５−２８９．
ｅｖａ Ｄ．Ｄ．，Ｒｕｄｄｌｅ Ｆ．Ｈ． ａｎｄ
Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８４） Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎ Ｒｅｓ． ４，２９５−３００． −Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｍ．Ｅ． ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓ Ｂ．Ｒ．Ｇ．（１９８４） Ａｎｔｉｖｉｒａｌ
Ｒｅｓ． ＡＢＳＴＲ Ｎｏ ３， ｐ．６０． −Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ Ａ．，Ｋｏｒｍａｎ Ａ．
Ｊ．，Ｋａｍｂ Ａ． ａｎｄ Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ
Ｊ．Ｌ．（１９８３）Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．
１１，８６６３−８６７５． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｗ
ａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｈ．，Ｂｉ
ｎｏ Ｔ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，ＬｅｖｉｎＳ．，Ｒｅｖ
ｅｌ Ｍ．（１９８１ａ） Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏ
ｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ ａ
ｓｓａｙ ｏｆ ２′５′ｏｌｉｇｏｉｓｏａｄｅｎｙ
ｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎｐ
ｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌ
ｌｓ， Ｊ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ． １，
５８７−５９４． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，
Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖｉｎ
Ｓ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８１ｂ）Ａｓｓａｙ ｏ
ｆ ａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅ
ｎｚｙｍｅｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ
ａｓ ａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｉｄ ｉｎ ｖ
ｉｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ｌａｎｃｅｔ ２，４
９７−５００． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｓ
ｈａｐｉｒａ Ａ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗａｌｌａｃ
ｈ Ｄ．（１９８２ａ）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ
（２′−５′）Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ Ｓｙｎ
ｔｈｅｓｅａｎｄ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｂｌｏｏｄ
−Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｍｉｃｅｅａｒｌｙ ａｆｔｅ
ｒ ｖｉｒａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ ２：２８５−２８９．
【０１１０】−Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｗａｌｌａ
ｃｈ Ｄ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌ
ｅｖｉｎ Ｓ．，Ｒａｍｏｔ Ｂ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９８２ｂ）．Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ （２′
−５′）ｏｌｉｇｏ ＡＳｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｌｅｖ
ｅｌ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｇｒａ
ｎｕｌｏｃｙｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔ
ｈ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｌｅ
ｕｋｅｍｉａ． Ｊ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅ
ｓ． ２，３５５−３６１． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｂ
ｒｅｇｍａｎ Ｕ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖｉｎ
Ｓ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．（１９
８４）．（２′−５′）ｏｌｉｇｏ Ａ Ｓｙｎｔｈｅ
ｔａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎ
ｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｃ
ｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｔｒｅａ
ｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔ
ｉｏｎｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５
７，２６５−２７０． −Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄ Ａ．，Ｎｉｔｋｅ Ｓ．，Ｓ
ｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｃｒ
ｅｓｐｉ Ｍ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖａｖｉ
Ｈ．，Ｏｖａｄｉａ Ｊ．，Ｓｈｏｈａｍ Ｊ．，Ｄｏ
ｅｒｎｅｒ Ｔ．， Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８４）．
Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ−β１ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔ
ｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｎｄｙｌｏｍａｔｅ ａ
ｃｕｍｉｎａｔａ， Ｌａｎｃｅｔ ｉ， １０３８−
１０４２． −Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄ Ａ．，Ｏｖａｄｉａ Ｊ．，
Ｌｅｖａｖｉ Ｃ．，Ｎｉｔｋｅ Ｓ．，Ｗａｌｌａｃ
ｈ Ｄ．，Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｒｅｖｅｌ
Ｍ．（１９８５）．Ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｒ
ｅｇｎａｎｃｙ ｂｙ ａｓｓａｙｏｆ（２′−５′）
ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓ
ｅ． Ｅａｒｌｙ Ｈｕｍａｎ Ｄｅｖｅｌｏｐ． １
０，２７９−２８６． −Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａ．，Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ
Ａ．，Ｓｈｕ１ｍａｎ Ｌ．，Ｆｅｄｅｒｍａｎ
Ｐ．，Ｂｅｒｉｓｓｉ Ｈ． ａｎｄ ＲｅｖｅｌＭ．
（１９７８） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ２５，２５７−
２６４．
ｃｈ Ｄ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌ
ｅｖｉｎ Ｓ．，Ｒａｍｏｔ Ｂ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９８２ｂ）．Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ （２′
−５′）ｏｌｉｇｏ ＡＳｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｌｅｖ
ｅｌ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｇｒａ
ｎｕｌｏｃｙｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔ
ｈ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｌｅ
ｕｋｅｍｉａ． Ｊ． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅ
ｓ． ２，３５５−３６１． −Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｂ
ｒｅｇｍａｎ Ｕ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖｉｎ
Ｓ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．（１９
８４）．（２′−５′）ｏｌｉｇｏ Ａ Ｓｙｎｔｈｅ
ｔａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎ
ｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｃ
ｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｔｒｅａ
ｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔ
ｉｏｎｓ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５
７，２６５−２７０． −Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄ Ａ．，Ｎｉｔｋｅ Ｓ．，Ｓ
ｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｃｒ
ｅｓｐｉ Ｍ．，Ｈａｈｎ Ｔ．，Ｌｅｖａｖｉ
Ｈ．，Ｏｖａｄｉａ Ｊ．，Ｓｈｏｈａｍ Ｊ．，Ｄｏ
ｅｒｎｅｒ Ｔ．， Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８４）．
Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ−β１ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔ
ｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｎｄｙｌｏｍａｔｅ ａ
ｃｕｍｉｎａｔａ， Ｌａｎｃｅｔ ｉ， １０３８−
１０４２． −Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄ Ａ．，Ｏｖａｄｉａ Ｊ．，
Ｌｅｖａｖｉ Ｃ．，Ｎｉｔｋｅ Ｓ．，Ｗａｌｌａｃ
ｈ Ｄ．，Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ Ａ．，Ｒｅｖｅｌ
Ｍ．（１９８５）．Ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｒ
ｅｇｎａｎｃｙ ｂｙ ａｓｓａｙｏｆ（２′−５′）
ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓ
ｅ． Ｅａｒｌｙ Ｈｕｍａｎ Ｄｅｖｅｌｏｐ． １
０，２７９−２８６． −Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａ．，Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ
Ａ．，Ｓｈｕ１ｍａｎ Ｌ．，Ｆｅｄｅｒｍａｎ
Ｐ．，Ｂｅｒｉｓｓｉ Ｈ． ａｎｄ ＲｅｖｅｌＭ．
（１９７８） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ２５，２５７−
２６４．
【０１１１】−Ｓｈｕｌｍａｎ Ｌ．Ｍ．，Ｂａｒｋｅ
ｒ Ｐ．Ｅ．，Ｈａｒｔ Ｊ．Ｔ．，Ｍｅｓｓｅｒ Ｐ
ｅｔｅｒ Ｐ．Ｇ． ａｎｄ Ｒｕｄｄｌｅ Ｆ．Ｈ．
（１９８４）．Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｇ
ｅｎｅｔ． １０，２４７−２５７． −Ｓｈｕｌｍａｎ Ｌ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９８０），Ｎａｔｕｒｅ ２８７：９８−１００． −Ｓｔａｒｋ Ｇ．，Ｄｏｗｅｒ Ｗ．Ｊ．，Ｓｃｈｉ
ｍｋｅ Ｒ．Ｔ．，Ｂｒｏｗｎ Ｒ．Ｅ． ａｎｄ Ｋ
ｅｒｒ Ｉ．Ｍ．（１９７９）Ｎａｔｕｒｅ２７６：４
７１−４７３． −Ｓｐｉｒｅｒ Ｚ．，Ｚａｋｕｔ Ｒ．，Ｂｏｇａｉ
ｒ Ｎ．，Ｆｒｉｄｋｉｎ Ｍ．（１９７７）． Ｅｕ
ｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：６９−７４． −ＳｔＬａｕｒｅｎｔ Ｇ．，Ｙｏｓｉｅ Ｏ．，Ｆｌ
ｏｙｄ−Ｓｍｉｔｈ Ｇ．，Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｓ
ｅｈｇａｌ Ｐ． ａｎｄ ＬｅｎｇｙｅｌＰ．（１９
８３）Ｃｅｌｌ ３３，９５−１０２． −Ｓｔｒａｃｈａｎ Ｔ．，Ｓｏｄｏｙｅｒ Ｒ．，Ｄ
ａｍｏｔｔｅ Ｍ． ａｎｄ Ｊｏｒｄａｎ Ｂ．Ｒ．
（１９８４），ＥＭＢＯ Ｊ． ３：８７７−８９４． −Ｔｈｏｍａｓ（１９８０），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７；５２０１−５２０
５． −Ｔｒｉｆｏｎｏｖ，Ｅ．Ｎ．（１９８４） Ｃｏｄａ
ｔａ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ５６，２１−２６． −Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９８０）Ｎａｔｕｒｅ２８７，６８−７０． −Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ． ａｎ
ｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８２）， Ｎａｔｕｒｅ
２９９：８３３−８３６．
ｒ Ｐ．Ｅ．，Ｈａｒｔ Ｊ．Ｔ．，Ｍｅｓｓｅｒ Ｐ
ｅｔｅｒ Ｐ．Ｇ． ａｎｄ Ｒｕｄｄｌｅ Ｆ．Ｈ．
（１９８４）．Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｇ
ｅｎｅｔ． １０，２４７−２５７． −Ｓｈｕｌｍａｎ Ｌ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９８０），Ｎａｔｕｒｅ ２８７：９８−１００． −Ｓｔａｒｋ Ｇ．，Ｄｏｗｅｒ Ｗ．Ｊ．，Ｓｃｈｉ
ｍｋｅ Ｒ．Ｔ．，Ｂｒｏｗｎ Ｒ．Ｅ． ａｎｄ Ｋ
ｅｒｒ Ｉ．Ｍ．（１９７９）Ｎａｔｕｒｅ２７６：４
７１−４７３． −Ｓｐｉｒｅｒ Ｚ．，Ｚａｋｕｔ Ｒ．，Ｂｏｇａｉ
ｒ Ｎ．，Ｆｒｉｄｋｉｎ Ｍ．（１９７７）． Ｅｕ
ｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：６９−７４． −ＳｔＬａｕｒｅｎｔ Ｇ．，Ｙｏｓｉｅ Ｏ．，Ｆｌ
ｏｙｄ−Ｓｍｉｔｈ Ｇ．，Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｓ
ｅｈｇａｌ Ｐ． ａｎｄ ＬｅｎｇｙｅｌＰ．（１９
８３）Ｃｅｌｌ ３３，９５−１０２． −Ｓｔｒａｃｈａｎ Ｔ．，Ｓｏｄｏｙｅｒ Ｒ．，Ｄ
ａｍｏｔｔｅ Ｍ． ａｎｄ Ｊｏｒｄａｎ Ｂ．Ｒ．
（１９８４），ＥＭＢＯ Ｊ． ３：８７７−８９４． −Ｔｈｏｍａｓ（１９８０），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７；５２０１−５２０
５． −Ｔｒｉｆｏｎｏｖ，Ｅ．Ｎ．（１９８４） Ｃｏｄａ
ｔａ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ５６，２１−２６． −Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９８０）Ｎａｔｕｒｅ２８７，６８−７０． −Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ． ａｎ
ｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９８２）， Ｎａｔｕｒｅ
２９９：８３３−８３６．
【０１１２】−Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ｓｃｈａｔｔｎ
ｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｋｉｍｃｈｉ
Ａ．，Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ
Ｍ．（１９８２） ｉｎ Ｍｅｒｉｇａｎ， Ｔ．
Ｃ．，Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｒ．Ｍ．（ｅｄｓ）Ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎｓ， ＵＣＬＡ Ｓｙｍｐｏｓｉａ Ｖｏ
ｌ． ＸＸＶ，Ａｃａｄ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ， ｐｐ４４９−４６３． −Ｗａｌｌａｃｈ Ｄ．，Ａｄｅｒｋａ Ｄ．，Ｂｕｄ
ｉｌｏｖｓｋｙ Ｓ．ａｎｄ Ｈａｈｎ Ｔ．（１９８
３） ｉｎ ＤｅＭａｅｙｅｒ，Ｅ．，Ｓｃｈｅｌｌｅ
ｋｅｎｓ，Ｈ．（ｅｄｓ） Ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ
ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，
Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ．Ｐｕｂｌ．，Ａｍｓｔｅ
ｒｄａｍ， ｐｐ２９３−３０３． −Ｗｅｉｌ Ｊ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｃ．Ｊ．，Ｅｐｓ
ｔｅｉｎ Ｌ．Ｂ．，Ｓｅｄｎａｋ Ｊ．Ｊ．，Ｓａｂ
ｒａｎ Ｊ．Ｌ．，Ｇｒｏｓｓｂｅｒｇ Ｓ．Ｅ．（１
９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０１， ４３７−４３９． −Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ Ｊ．，Ｚｅｅｖｉ Ｍ．，
Ｌａｎｄａｕ Ｔ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．（１９
７９），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ ９８：１−８． −Ｗｅｌｌｓ Ｖ． ａｎｄ Ｍａｌｌｕｃｃｉ Ｌ．
（１９８５）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，ｉｎ ｐｒｅ
ｓｓ． −Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ．，Ｓｗｅｅｔ Ｒ．，Ｓｉｍ
Ｇ．Ｋ．，Ｗｏｌｄ Ｂ．，Ｐｅｌｌｉｃｅｒ Ａ．，
Ｌａｃｙ Ｅ．，Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，Ｓｉｌｖｅ
ｒｓｔｅｉｎ Ｓ． ａｎｄ Ａｘｅｌ Ｒ． （１９
７９）Ｃｅｌｌ１６，７７７−７８５． −Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＢＲＧ ａｎｄ Ｒｅａｄ ＳＥ
（１９８１）．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｅｖａ
ｔｅｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅ
ｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｎｚｙｍｅ， ２−５ ｓ
ｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄ
ｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｎ ｐｕｒｔｕｒｉｔｉｏ
ｎ． Ｉｎ ＤｅＭａｅｙｅｒ Ｅ．，Ｇａｌａｓｓｏ
Ｇ．，Ｓｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ Ｈ． （ｅｄｓ）：
“Ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｙｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ”， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏ
ｒｔｈ Ｈｏｌｌａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒ
ｅｓｓ．ｐｐｌ１１−１１４．
ｅｒ Ａ．，Ｍｅｒｌｉｎ Ｇ．，Ｋｉｍｃｈｉ
Ａ．，Ｆｅｌｌｏｕｓ Ｍ． ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ
Ｍ．（１９８２） ｉｎ Ｍｅｒｉｇａｎ， Ｔ．
Ｃ．，Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｒ．Ｍ．（ｅｄｓ）Ｉｎｔｅ
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（１９８５）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，ｉｎ ｐｒｅ
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Ｌａｃｙ Ｅ．，Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ．，Ｓｉｌｖｅ
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７９）Ｃｅｌｌ１６，７７７−７８５． −Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＢＲＧ ａｎｄ Ｒｅａｄ ＳＥ
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ｔｅｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅ
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ｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄ
ｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｎ ｐｕｒｔｕｒｉｔｉｏ
ｎ． Ｉｎ ＤｅＭａｅｙｅｒ Ｅ．，Ｇａｌａｓｓｏ
Ｇ．，Ｓｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ Ｈ． （ｅｄｓ）：
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【０１１３】−Ｗｏｌｆ Ｄ． ａｎｄ Ｒｏｔｔｅｒ
Ｖ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ ８２，７９０−７９４． −Ｙａｎｇ Ｋ．，Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｄｏｕｇｈ
ｅｒｔｙ Ｊ．，Ｙａｙａｒａｍ Ｂ．，Ｂｒｏｅｚｅ
Ｒ． ａｎｄ Ｌｅｎｇｙｅｌ Ｐ．（１９８１）
Ｊ．Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ． ２５６，９３２４−９３２
８． −Ｙａｒｄｅｎ Ａ．，Ｓｈｕｒｅ−Ｇｏｔｔｌｉｅｂ
Ｈ．，ＣｈｅｂａｔｈＪ．，Ｒｅｖｅｌ Ｍ． ａｎ
ｄ Ｋｉｍｃｈｉ Ａ． （１９８４）ＥＭＢＯ Ｊ．
３，９６９−９７３． −Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ Ａ．，Ｋｉｍｃｈｉ
Ａ．，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａ．ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ７５，４７３４−４７３８． −Ｚｉｎｎ Ｋ．，ＤｉＭａｉｏ Ｄ． ａｎｄ Ｍａ
ｎｉａｔｉｓ Ｔ．（１９８３）Ｃｅｌｌ ３４，８６
５−８７９．
Ｖ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． ＵＳＡ ８２，７９０−７９４． −Ｙａｎｇ Ｋ．，Ｓａｍａｎｔａ Ｈ．，Ｄｏｕｇｈ
ｅｒｔｙ Ｊ．，Ｙａｙａｒａｍ Ｂ．，Ｂｒｏｅｚｅ
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８． −Ｙａｒｄｅｎ Ａ．，Ｓｈｕｒｅ−Ｇｏｔｔｌｉｅｂ
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３，９６９−９７３． −Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ Ａ．，Ｋｉｍｃｈｉ
Ａ．，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａ．ａｎｄ Ｒｅｖｅｌ Ｍ．
（１９７８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ７５，４７３４−４７３８． −Ｚｉｎｎ Ｋ．，ＤｉＭａｉｏ Ｄ． ａｎｄ Ｍａ
ｎｉａｔｉｓ Ｔ．（１９８３）Ｃｅｌｌ ３４，８６
５−８７９．
【図１】図１は、（２′−５′）オリゴＡ合成酵素Ｅ１
ｃＤＮＡクローン１７４−３の構造と配列を示す。
ｃＤＮＡクローン１７４−３の構造と配列を示す。
【図２】図２は、ＳＶ８０及びＮａｍａｌｖａ細胞中の
Ｅ１特異性ｍＲＮＡの大きさ及び誘導を示す。
Ｅ１特異性ｍＲＮＡの大きさ及び誘導を示す。
【図３】図３は、ＩＦＮ−誘導ｍＲＮＡのための保有ｃ
ＤＮＡの、組換えプラスミドクローンＣ５６のＲＮＡの
ブロットとハイブリッドを形成することによる、特性決
定を示す。
ＤＮＡの、組換えプラスミドクローンＣ５６のＲＮＡの
ブロットとハイブリッドを形成することによる、特性決
定を示す。
【図４】図４は、部分的制限地図及び挿入Ｃ５６４５０
ｂｐのヌクレオチド配列を示す。
ｂｐのヌクレオチド配列を示す。
【図５】図５は、ＩＦＮによるＣ５６ｍＲＮＡの誘導の
時間経過を示す。
時間経過を示す。
【図６Ａ】図６Ａは、１．６ＫｂのｃＤＮＡの地図であ
る。
る。
【図６Ｂ】図６Ｂは、１．８ＫｂのｃＤＮＡの地図であ
る。
る。
【図７Ａ】図７Ａは、１．６Ｋｂに対するｃＤＮＡの塩
基配列を示す。
基配列を示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、１．８Ｋｂに対するｃＤＮＡの塩
基配列を示す。
基配列を示す。
【図８】図８は、２個の（２′−５′）オリゴＡ合成酵
素のＣ−末端のハイドロパシープロットを示している。
素のＣ−末端のハイドロパシープロットを示している。
【図９】図９は、ヒト（２′−５′）オリゴ合成酵素遺
伝子の制限地図を示している。
伝子の制限地図を示している。
【図１０】図１０は、ヒト（２′−５′）オリゴ合成酵
素遺伝子のプロモーター領域を示している。
素遺伝子のプロモーター領域を示している。
【図１１】図１１は、ヒト（２′−５′）オリゴＡシン
テターゼプロモーター領域の塩基配列を示している。
テターゼプロモーター領域の塩基配列を示している。
【図１２】図１２は、（２′−５′）オリゴＡ合成酵素
の免疫沈降反応を示している。
の免疫沈降反応を示している。
【図１３】図１３は、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＥ１６ｃＤ
ＮＡの発現を示している。
ＮＡの発現を示している。
【図１４】図１４はヒト末梢白血球中の（２′−５′）
オリゴＡシンテターゼＲＮＡの迅速なアッセイ法を示し
ている。
オリゴＡシンテターゼＲＮＡの迅速なアッセイ法を示し
ている。
【図１５】図１５は、ヒトＰＢＭＣの（２′−５′）オ
リゴシンテターゼＥＲＮＡに対するクイックセルブロッ
トを示している。
リゴシンテターゼＥＲＮＡに対するクイックセルブロッ
トを示している。
【図１６】図１６は、抗ぺプチド抗原による（２′−
５′）Ａ合成酵素活性の特異免疫沈降反応を示してい
る。
５′）Ａ合成酵素活性の特異免疫沈降反応を示してい
る。
【図１７】図１７は、ヒト細胞とサブフラクションにお
ける（２′−５′）Ａ合成酵素の異型を示している。
ける（２′−５′）Ａ合成酵素の異型を示している。
【図１８】図１８は、ＳＶ８０細胞中の（２′−５′）
Ａ合成酵素の諸型を示している。
Ａ合成酵素の諸型を示している。
【図１９】図１９は、２′−５′Ａ合成酵素の４型の分
析と細胞内の位置を示している。
析と細胞内の位置を示している。
【図２０】図２０は、ＳＶ８０由来の（２′−５′）オ
リゴＡシンテターゼの諸型の二重螺線ＲＮＡ要求性を示
している。
リゴＡシンテターゼの諸型の二重螺線ＲＮＡ要求性を示
している。
【図２１】図２１は（２′−５′）オリゴＡシンテター
ゼのラジオインミュノアッセイを示している。
ゼのラジオインミュノアッセイを示している。
【図２２】図２２は末梢血液単核細胞と抗ＯＡＳＥ血清
の免疫抗体蛍光染色によるウイルス性疾患の診断を示し
ている。
の免疫抗体蛍光染色によるウイルス性疾患の診断を示し
ている。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/573 Ａ 33/573 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (Ｃ１２Ｎ 9/12 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (2)
- 【請求項１】 （２′−５′）オリゴＡ合成酵素活性を
有し、以下のアミノ酸配列を有するポリペプチド。 【化１】 - 【請求項２】 （２′−５′）オリゴＡ合成酵素活性を
有し、以下のＡに示すアミノ酸１−３６４の配列及び以
下のＢに示すアミノ酸３４７−４００の配列を有するポ
リペプチド。 【化２】 【化３】
Applications Claiming Priority (4)
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|---|---|---|---|
| IL7623385A IL76233A (en) | 1985-08-28 | 1985-08-28 | DNA molecules coding for an enyzme having (2'-5') oligo a synthetase activity, expression vectors comprising them, microorganisms transfected by thevectors, and amino acid sequences corresponding to the DNA molecules |
| IL76233 | 1986-04-08 | ||
| IL78445 | 1986-04-08 | ||
| IL7844586A IL78445A (en) | 1986-04-08 | 1986-04-08 | Antibodies to subtypes of (2'-5') oligo-a-synthetase, an assay for said subtypes, and a method and kit for monitoring interferon activity |
Related Parent Applications (1)
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| JP61202614A Division JP2653653B2 (ja) | 1985-08-28 | 1986-08-28 | インターフエロン誘起遺伝子及び酵素 |
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|---|---|
| JPH09121852A true JPH09121852A (ja) | 1997-05-13 |
Family
ID=26321471
Family Applications (4)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| JP7045586A Expired - Lifetime JP2798240B2 (ja) | 1985-08-28 | 1995-03-06 | インターフェロン誘起遺伝子及び酵素 |
| JP8225793A Pending JPH09121852A (ja) | 1985-08-28 | 1996-07-24 | インターフェロン誘起酵素 |
| JP9225181A Pending JPH1084962A (ja) | 1985-08-28 | 1997-08-21 | インターフェロン誘起遺伝子及び酵素 |
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| JP7045586A Expired - Lifetime JP2798240B2 (ja) | 1985-08-28 | 1995-03-06 | インターフェロン誘起遺伝子及び酵素 |
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|---|---|---|---|
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| JPS62115291A (ja) | 1987-05-26 |
| JPH1084962A (ja) | 1998-04-07 |
| DE3683335D1 (de) | 1992-02-20 |
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