JP3142574B2 - ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 - Google Patents
２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途Info
- Publication number
- JP3142574B2 JP3142574B2 JP08510198A JP51019896A JP3142574B2 JP 3142574 B2 JP3142574 B2 JP 3142574B2 JP 08510198 A JP08510198 A JP 08510198A JP 51019896 A JP51019896 A JP 51019896A JP 3142574 B2 JP3142574 B2 JP 3142574B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- apa
- meoh
- phosphorothioate
- benzoyl
- dimethylsilyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/605—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the macromolecule containing phosphorus in the main chain, e.g. poly-phosphazene
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Description
【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は天然産の抗ウィルス性２′,5′−オリゴアデ
ニレートの合成同族体に関し、ここでヌクレオチド間ホ
スホジエステル結合の少なくとも１つは光学活性のホス
ホロチオエート基で置換される。選択されたヌクレオチ
ド間ホスホジエステル結合を有する化合物は抗ウィルス
性および向上した代謝安定性を有する。
ニレートの合成同族体に関し、ここでヌクレオチド間ホ
スホジエステル結合の少なくとも１つは光学活性のホス
ホロチオエート基で置換される。選択されたヌクレオチ
ド間ホスホジエステル結合を有する化合物は抗ウィルス
性および向上した代謝安定性を有する。
発明の背景 本発明の主題における全名称は長い用語を含む。当業
者はオリゴアデニレート同族体および関連用語を当業界
で周知されたように簡略化するのが一般的である。これ
ら一般的かつ通常の簡略化につき以下説明し、本明細書
の全体で用いることができる。
者はオリゴアデニレート同族体および関連用語を当業界
で周知されたように簡略化するのが一般的である。これ
ら一般的かつ通常の簡略化につき以下説明し、本明細書
の全体で用いることができる。
簡略化： ２−5A、２′,5′−オリゴアデニレートもしくはp
3An:アデニル酸と２′,5′−ホスホジエステル結合およ
び５′−末端トリホスフェート基とのオリゴマー。
3An:アデニル酸と２′,5′−ホスホジエステル結合およ
び５′−末端トリホスフェート基とのオリゴマー。
A2、A3およびA4:アデニル酸と２′,5′−ホスホジエ
ステル結合との二量体、三量体および四量体。
ステル結合との二量体、三量体および四量体。
pA3、ppA3（もしくはp2A3）、pppA3（もしくはp
3A3）:A3の５′−末端モノ−、ジ−およびトリ−ホスフ
ェート。
3A3）:A3の５′−末端モノ−、ジ−およびトリ−ホスフ
ェート。
pA4、ppA4（もしくはp2A4）、pppA4（もしくはp
3A4）:A4の５′−末端モノ−、ジ−およびトリ−ホスフ
ェート。
3A4）:A4の５′−末端モノ−、ジ−およびトリ−ホスフ
ェート。
ApA:アデニル酸と２′,5′−ホスホジエステル結合と
の二量体。
の二量体。
Ap＊A:アデニル酸と２′,5′−ホスホロチオエート結
合との二量体。
合との二量体。
PR:ホスホロチオエート ヌクレオチド間結合におけ
るキラル燐原子を中心とするＲ立体配置。
るキラル燐原子を中心とするＲ立体配置。
PS:ホスホロチオエート ヌクレオチド間結合におけ
るキラル燐原子を中心とするＳ立体配置。
るキラル燐原子を中心とするＳ立体配置。
ARp ＊ApA:（PR）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
ASp ＊ApA:（PS）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
ApARp ＊A:アデニリル−（２′,5′）−（PR）−Ｐ−
チオアデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
チオアデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
ApASp ＊A:アデニリル−（２′,5′）−（PS）−Ｐ−
チオアデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
チオアデニリル−（２′,5′）−アデノシン。
pARp ＊ApA、ppARp ＊ApA、pppARp ＊ApA、pASp ＊ApA、p
pASp ＊ApA、pppASp ＊ApA、pApARp ＊Ａ、ppApARp ＊Ａ、p
ppApARp ＊Ａ、pApASp ＊Ａ、ppApASp ＊Ａ、pppApASp ＊A:
ARp ＊ApA、ASp ＊ApA、ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａの５′
−モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェ−ト。
pASp ＊ApA、pppASp ＊ApA、pApARp ＊Ａ、ppApARp ＊Ａ、p
ppApARp ＊Ａ、pApASp ＊Ａ、ppApASp ＊Ａ、pppApASp ＊A:
ARp ＊ApA、ASp ＊ApA、ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａの５′
−モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェ−ト。
ARp ＊ApApA:（PR）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
ASp ＊ApApA:（PS）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
5′）−アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
ApARp ＊ApA:アデニリル−（２′,5′）−（PR）−Ｐ
−チオアデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
−チオアデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
ApASp ＊ApA:アデニリル−（２′,5′）−（PS）−Ｐ
−チオアデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
−チオアデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
ApApARp ＊A:アデニリル−（２′,5′）−（PR）−Ｐ
−チオアデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
−チオアデニリル−（２′,5′）−アデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
ApApASp ＊A:アデニリル−（２′,5′）−アデニリル
−（２′,5′）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
−（２′,5′）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−
（２′,5′）−アデノシン。
pARp ＊ApApA、ppARp ＊ApApA、pppARp ＊ApApA、pASp ＊
ApApA、ppASp ＊ApApA、pppASp ＊ApApA、pApARp ＊ApA、p
pApARp ＊ApA、pppApARp ＊ApA、pApASp ＊ApA、ppApASp ＊
ApA、pppApASp ＊ApA、pApApARp ＊Ａ、ppApApARp ＊Ａ、p
ppApApARp ＊Ａ、pApApASp ＊Ａ、、ppApApASp ＊Ａ、pppA
pApASp ＊A:前記四量体の５′−モノ−、ジ−およびトリ
−ホスフェート。
ApApA、ppASp ＊ApApA、pppASp ＊ApApA、pApARp ＊ApA、p
pApARp ＊ApA、pppApARp ＊ApA、pApASp ＊ApA、ppApASp ＊
ApA、pppApASp ＊ApA、pApApARp ＊Ａ、ppApApARp ＊Ａ、p
ppApApARp ＊Ａ、pApApASp ＊Ａ、、ppApApASp ＊Ａ、pppA
pApASp ＊A:前記四量体の５′−モノ−、ジ−およびトリ
−ホスフェート。
bz:ベンゾイル。
ce:シアノエチル。
CFS:慢性疲労症候群。
DEAE:2−（ジエチルアミノ）エチル。
DBU:1.8−ジアザビシクロ［5.3.5］ウンデセ−７−エ
ン。
ン。
HIV:ヒト免疫不全症ウィルス。
MeOTr:モノメトキシトリチル。
M.O.I.:感染多重度。
mRNA:メッセンジャーRNA。
npe:2−（４−ニトロフェニル）エチル。
PBL:末梢血液リンパ球。
pCp:シチジン ３′,5′−ビスホスフェート。
（PS）−ATP−α−S:アデノシン５′Ｏ−（PS）−
（１−チオトリホスフェート）。
（１−チオトリホスフェート）。
RNアーゼL:2−5A−依存性エンドリボヌクレアーゼ。
rRNA:リボソームRNA。
RT:逆転写酵素。
SCP:特異切断生成物。
tbds:（ｔ−ブチル）ジメチルシリル。
トリス：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン。
tRNA:トランスファーRNA。
一般に、２−5AによるRNアーゼＬの活性化は抗ウィル
ス防御メカニズムにつき重要であると見なされる。イン
ターフェロンは、二本鎖RNAの活性化に際し２′,5′結
合オリゴアデニレートを生成する酵素２−5Aシンセター
ゼの転写を誘発する。従来２−5Aの唯一公知の生化学作
用はRNアーゼＬの活性化である。この酵素はmRNAおよび
rRNAを加水分解して、蛋白合成の抑制をもたらす。RNア
ーゼＬの活性化は、２−5Aが急速に減成するため、連続
的に合成されなければ一時的となる。したがってRNアー
ゼＬ活性化は複製の抑制、したがってウィルスによる感
染の防御に重要な役割を演ずる。
ス防御メカニズムにつき重要であると見なされる。イン
ターフェロンは、二本鎖RNAの活性化に際し２′,5′結
合オリゴアデニレートを生成する酵素２−5Aシンセター
ゼの転写を誘発する。従来２−5Aの唯一公知の生化学作
用はRNアーゼＬの活性化である。この酵素はmRNAおよび
rRNAを加水分解して、蛋白合成の抑制をもたらす。RNア
ーゼＬの活性化は、２−5Aが急速に減成するため、連続
的に合成されなければ一時的となる。したがってRNアー
ゼＬ活性化は複製の抑制、したがってウィルスによる感
染の防御に重要な役割を演ずる。
さらに２−5A代謝とHIV−１の増殖サイクルとの間に
は相関関係も確認されており、すなわち高レベルの２−
5Aおよび活性化RNアーゼＬは感染細胞がHIV−１を放出
しないことに相関する［シュレーダー等、ジャーナル・
バイオロジカル・ケミストリー、第264巻、第5669〜567
3頁（1989）］。逆に、細胞内２−5Aプールが減少する
と、RNアーゼＬは活性化されえず、HIV−１生成が増大
する。HIV−１複製の抑制剤としての２−5Aコアの役割
は、２−5A三量体および四量体コア、５′−モノホスフ
ェートおよび５′−トリホスフェートがHIV−１逆転写
酵素／プライマー複合体の形成を抑制するという報告に
より確認されている［モンテフィオリ等、プロシーディ
ング・ナショナル・アガデミー・サイエンス、USA、第8
6巻、第7191〜7194頁（1989）；ミュラー等、バイオケ
ミストリー、第30巻、第2027〜2033頁（1991）；ソボル
等、バイオケミストリー、第32巻、第1211〜1218頁（19
93）］。
は相関関係も確認されており、すなわち高レベルの２−
5Aおよび活性化RNアーゼＬは感染細胞がHIV−１を放出
しないことに相関する［シュレーダー等、ジャーナル・
バイオロジカル・ケミストリー、第264巻、第5669〜567
3頁（1989）］。逆に、細胞内２−5Aプールが減少する
と、RNアーゼＬは活性化されえず、HIV−１生成が増大
する。HIV−１複製の抑制剤としての２−5Aコアの役割
は、２−5A三量体および四量体コア、５′−モノホスフ
ェートおよび５′−トリホスフェートがHIV−１逆転写
酵素／プライマー複合体の形成を抑制するという報告に
より確認されている［モンテフィオリ等、プロシーディ
ング・ナショナル・アガデミー・サイエンス、USA、第8
6巻、第7191〜7194頁（1989）；ミュラー等、バイオケ
ミストリー、第30巻、第2027〜2033頁（1991）；ソボル
等、バイオケミストリー、第32巻、第1211〜1218頁（19
93）］。
２−5Aの２′,5′−ヌクレオチド間結合にホスホロチ
オエート基を導入すれば真正２−5Aよりも高い代謝安定
性が誘発され、RNアーゼＬを活性化させうる第１ ２−
5Aコア（すなわち５′−ホスフェート部分を欠如する２
−5A）をもたらす［カリコ等、バイオケミストリー、第
26巻、第7136〜7142頁（1987）；カラコン等、バイオケ
ミストリー、第29巻、第2550〜2556頁（1990）］。さら
にRNアーゼＬは機能上立体選択性の酵素であり、PS配置
のヌクレオチド間ホスホロチオエート２′,5′−結合の
少なくとも１つを有する２−5A三量体および四量体は極
めて向上した代謝安定性を有する。完全分割された
２′,5′−ホスホロチオエート アデニレート三量体お
よび四量体コアの化学合成も報告されている［スハドル
ニク等、米国特許第4,924,624号］。酵素的合成による
立体異性体の作成は、専らPR配置の三量体および四量体
生成物をもたらす基質（PS）−ATP−α−Ｓに関する２
−5Aシンセターゼの立体特異性に基づき可能でない。さ
らにレブロー等、米国特許第4,981,957号は２′,5′−
オリゴアデニレートのホスホロチオエート置換誘導体の
酵素的合成を開示しているが、開示された化合物は立体
特異性でない。
オエート基を導入すれば真正２−5Aよりも高い代謝安定
性が誘発され、RNアーゼＬを活性化させうる第１ ２−
5Aコア（すなわち５′−ホスフェート部分を欠如する２
−5A）をもたらす［カリコ等、バイオケミストリー、第
26巻、第7136〜7142頁（1987）；カラコン等、バイオケ
ミストリー、第29巻、第2550〜2556頁（1990）］。さら
にRNアーゼＬは機能上立体選択性の酵素であり、PS配置
のヌクレオチド間ホスホロチオエート２′,5′−結合の
少なくとも１つを有する２−5A三量体および四量体は極
めて向上した代謝安定性を有する。完全分割された
２′,5′−ホスホロチオエート アデニレート三量体お
よび四量体コアの化学合成も報告されている［スハドル
ニク等、米国特許第4,924,624号］。酵素的合成による
立体異性体の作成は、専らPR配置の三量体および四量体
生成物をもたらす基質（PS）−ATP−α−Ｓに関する２
−5Aシンセターゼの立体特異性に基づき可能でない。さ
らにレブロー等、米国特許第4,981,957号は２′,5′−
オリゴアデニレートのホスホロチオエート置換誘導体の
酵素的合成を開示しているが、開示された化合物は立体
特異性でない。
発明の要点 植物および哺乳動物におけるウィルス感染の抑制に有
用である本発明の化合物は、向上した代謝安定性および
／または抗ウィルス活性を有する。
用である本発明の化合物は、向上した代謝安定性および
／または抗ウィルス活性を有する。
これら化合物およびその水溶性塩は式 ［式中、ｍは０、１、２もしくは３であり;nおよびｑは
０および１の群から選択され、ただしｎおよびｑは両者
ともに０であってはならず;R、R1およびR2は独立して酸
素および硫黄の群から選択され、ただしＲ、R1およびR2
の全てが酸素であってはならず、さらにＲ、R1およびR2
の全てが硫黄であってもならない］ を有する。
０および１の群から選択され、ただしｎおよびｑは両者
ともに０であってはならず;R、R1およびR2は独立して酸
素および硫黄の群から選択され、ただしＲ、R1およびR2
の全てが酸素であってはならず、さらにＲ、R1およびR2
の全てが硫黄であってもならない］ を有する。
さらに本発明は哺乳動物もしくは植物におけるウィル
ス感染の抑制方法をも含み、この方法は抗ウィルス上有
効量の上記式による化合物もしくはその水溶性塩を投与
することからなり、さらにこの種の化合物をキャリヤと
共に含有する抗ウィルス組成物にも関する。
ス感染の抑制方法をも含み、この方法は抗ウィルス上有
効量の上記式による化合物もしくはその水溶性塩を投与
することからなり、さらにこの種の化合物をキャリヤと
共に含有する抗ウィルス組成物にも関する。
ｎが１であると共にｑが１である上記式による化合物
は、細胞内移動のための巨大分子キャリヤ ポリ（Ｌ−
リジン）とのオリゴアデニレート複合体を形成すべく使
用することができる。この種のポリ（Ｌ−リジン）/
2′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オ
リゴアデニレート複合体は式 ［式中、ｑは約60〜約70の整数であり、Ｒはランダムに
Ｒ′または である］ を有する。Ｒ基の約５〜約10個はＲ′で構成される。
Ｒ′は次式を有する［式中ｍは０、１、２もしくは３で
あり；各R3、R4もしくはR5は独立して酸素および硫黄の
群から選択され、ただしR3、R4およびR5の全てが酸素で
あってはならず、さらにR3、R4もしくはR5の全てが硫黄
であってもならない。
は、細胞内移動のための巨大分子キャリヤ ポリ（Ｌ−
リジン）とのオリゴアデニレート複合体を形成すべく使
用することができる。この種のポリ（Ｌ−リジン）/
2′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オ
リゴアデニレート複合体は式 ［式中、ｑは約60〜約70の整数であり、Ｒはランダムに
Ｒ′または である］ を有する。Ｒ基の約５〜約10個はＲ′で構成される。
Ｒ′は次式を有する［式中ｍは０、１、２もしくは３で
あり；各R3、R4もしくはR5は独立して酸素および硫黄の
群から選択され、ただしR3、R4およびR5の全てが酸素で
あってはならず、さらにR3、R4もしくはR5の全てが硫黄
であってもならない。
好ましくは、ポリ（Ｌ−リジン）/2′,5′−ホスホロ
チオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレート複
合体におけるヌクレオチド間ホスホロチオエート基 の少なくとも１つはPR配置を有する。
チオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレート複
合体におけるヌクレオチド間ホスホロチオエート基 の少なくとも１つはPR配置を有する。
図面の説明 第1A図は放射性結合分析の結果を示し、Ｌ−929細胞
抽出物から部分精製されたRNアーゼＬを活性化させて基
質ポリ（Ｕ）［32P］pCpを加水分解するが、ポリ（Ｃ）
を加水分解しない２′,5′−ホスホロチオエート／ホス
ホジエステル三量体コア２−5A誘導体の能力を示す。RN
アーゼＬの活性化は、ポリ（Ｉ）［32P］pCpから酸可溶
性断片への変換により決定した。100％は25,000dpmのポ
リ（Ｕ）［32P］pCpがガラス繊維フィルターに結合した
ことを示す。比較のため２−5Aオリゴマー（ホスホジエ
ステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。曲線は次
のように標識する:p3A3（●）;A3（◆）;ARp ＊ApA
（□）;ASp ＊ApA（■）;ApARp ＊Ａ（△）；およびApASp
＊Ａ（▲）。
抽出物から部分精製されたRNアーゼＬを活性化させて基
質ポリ（Ｕ）［32P］pCpを加水分解するが、ポリ（Ｃ）
を加水分解しない２′,5′−ホスホロチオエート／ホス
ホジエステル三量体コア２−5A誘導体の能力を示す。RN
アーゼＬの活性化は、ポリ（Ｉ）［32P］pCpから酸可溶
性断片への変換により決定した。100％は25,000dpmのポ
リ（Ｕ）［32P］pCpがガラス繊維フィルターに結合した
ことを示す。比較のため２−5Aオリゴマー（ホスホジエ
ステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。曲線は次
のように標識する:p3A3（●）;A3（◆）;ARp ＊ApA
（□）;ASp ＊ApA（■）;ApARp ＊Ａ（△）；およびApASp
＊Ａ（▲）。
第1B図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル三量体５′−モノホスフェート２−5A誘導体に
つき第1A図の方法により行った放射性結合分析の結果を
示す。曲線は次のように標識する:p3A3（●）;pA
3（○）;pARp ＊ApA（□）;pASp ＊ApA（■）;pApARp ＊Ａ
（△）；およびpApASp ＊Ａ（▲）。
エステル三量体５′−モノホスフェート２−5A誘導体に
つき第1A図の方法により行った放射性結合分析の結果を
示す。曲線は次のように標識する:p3A3（●）;pA
3（○）;pARp ＊ApA（□）;pASp ＊ApA（■）;pApARp ＊Ａ
（△）；およびpApASp ＊Ａ（▲）。
第1C図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル四量体コア２−5A誘導体につき第1A図の方法に
より行った放射性結合分析の結果を示す。各曲線は次の
ように標識する:p3A4（●）;ARp ＊ApApA（▽）;ASp ＊Ap
ApA（▼）;ApARp ＊ApA（□）ApASp ＊ApA（■）;ApApARp
＊Ａ（△）；およびApApASp ＊Ａ（▲）。
エステル四量体コア２−5A誘導体につき第1A図の方法に
より行った放射性結合分析の結果を示す。各曲線は次の
ように標識する:p3A4（●）;ARp ＊ApApA（▽）;ASp ＊Ap
ApA（▼）;ApARp ＊ApA（□）ApASp ＊ApA（■）;ApApARp
＊Ａ（△）；およびApApASp ＊Ａ（▲）。
第1D図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル四量体５′−モノホスフェート２−5A誘導体に
つき第1A図の方法により行った放射性結合分析の結果を
示す。各曲線は次のように標識する:p3A4（●）;pA
4（○）;pARp ＊ApApA（▽）;pASp ＊ApApA（▼）;pApARp
＊ApA（□）;pApASp ＊ApA（■）;pApApARp ＊Ａ（△）；
およびpApApASp ＊Ａ（▲）。
エステル四量体５′−モノホスフェート２−5A誘導体に
つき第1A図の方法により行った放射性結合分析の結果を
示す。各曲線は次のように標識する:p3A4（●）;pA
4（○）;pARp ＊ApApA（▽）;pASp ＊ApApA（▼）;pApARp
＊ApA（□）;pApASp ＊ApA（■）;pApApARp ＊Ａ（△）；
およびpApApASp ＊Ａ（▲）。
第2A図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル三量体コア２−5A誘導体を用いるリボソームRN
A切断分析の結果を示す。手順はカリオ等、バイオケミ
ストリー、第26巻、第7127〜7135頁（1987）の方法にし
たがって行った。比較のため２−5Aオリゴマー（ホスホ
ジエステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。L929
細胞抽出物を以下のp3A3などの不存在下（レーン１）ま
たは10-8Mにおけるp3A3（レーン２）、10-6MにおけるA
Rp ＊ApA（レーン３）、10-6MにおけるASp ＊ApA（レーン
４）、10-6MにおけるApARp ＊Ａ（レーン５）、10-6Mに
おけるApASp ＊Ａ（レーン６）もしくは10-6MにおけるA3
（レーン７）の存在下に培養した。28Sおよび18S rRNA
の各位置を示す；矢印はRNアーゼＬの明確に特性化され
た特異切断生成物（SCP）の位置を示す。
エステル三量体コア２−5A誘導体を用いるリボソームRN
A切断分析の結果を示す。手順はカリオ等、バイオケミ
ストリー、第26巻、第7127〜7135頁（1987）の方法にし
たがって行った。比較のため２−5Aオリゴマー（ホスホ
ジエステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。L929
細胞抽出物を以下のp3A3などの不存在下（レーン１）ま
たは10-8Mにおけるp3A3（レーン２）、10-6MにおけるA
Rp ＊ApA（レーン３）、10-6MにおけるASp ＊ApA（レーン
４）、10-6MにおけるApARp ＊Ａ（レーン５）、10-6Mに
おけるApASp ＊Ａ（レーン６）もしくは10-6MにおけるA3
（レーン７）の存在下に培養した。28Sおよび18S rRNA
の各位置を示す；矢印はRNアーゼＬの明確に特性化され
た特異切断生成物（SCP）の位置を示す。
第2B図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル三量体５′−モノホスフェート誘導体を用いて
第2A図の方法により行ったリボソームRNA切断分析の結
果を示す。L929細胞抽出物を以下のp3A3などの不存在下
（レーン１）または２×10-9Mにおけるp3A3（レーン
２）、10-6MにおけるpA3（レーン３）、10-7Mにおけるp
ARp ＊ApA（レーン４）、10-7MにおけるpASp ＊ApA（レー
ン５）、２×10-9MにおけるpApARp＊Ａ（レーン６）、1
0-7MにおけるpApASp ＊Ａ（レーン７）の存在下に培養し
た。
エステル三量体５′−モノホスフェート誘導体を用いて
第2A図の方法により行ったリボソームRNA切断分析の結
果を示す。L929細胞抽出物を以下のp3A3などの不存在下
（レーン１）または２×10-9Mにおけるp3A3（レーン
２）、10-6MにおけるpA3（レーン３）、10-7Mにおけるp
ARp ＊ApA（レーン４）、10-7MにおけるpASp ＊ApA（レー
ン５）、２×10-9MにおけるpApARp＊Ａ（レーン６）、1
0-7MにおけるpApASp ＊Ａ（レーン７）の存在下に培養し
た。
第3A図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル四量体コア２−5A誘導体を用いて第2A図の方法
により行ったリボソームRNA切断分析の結果を示す。比
較のため２−5Aオリゴマー（ホスホジエステル ヌクレ
オチド間結合）をも含ませる。L929細胞抽出物を以下の
p3A4などの不存在下（レーン１）または10-8Mにおけるp
3A4（レーン２）、10-5MにおけるA4（レーン３）、10-5
MにおけるARp ＊ApApA（レーン４）、10-5MにおけるASp
＊ApApA（レーン５）、10-5MにおけるApARp ＊ApA（レー
ン６）、10-5MにおけるApASp ＊ApA（レーン７）、10-5M
におけるApApARp ＊Ａ（レーン８）もしくは10-5Mにおけ
るApApASp ＊Ａ（レーン９）の存在下に培養した。
エステル四量体コア２−5A誘導体を用いて第2A図の方法
により行ったリボソームRNA切断分析の結果を示す。比
較のため２−5Aオリゴマー（ホスホジエステル ヌクレ
オチド間結合）をも含ませる。L929細胞抽出物を以下の
p3A4などの不存在下（レーン１）または10-8Mにおけるp
3A4（レーン２）、10-5MにおけるA4（レーン３）、10-5
MにおけるARp ＊ApApA（レーン４）、10-5MにおけるASp
＊ApApA（レーン５）、10-5MにおけるApARp ＊ApA（レー
ン６）、10-5MにおけるApASp ＊ApA（レーン７）、10-5M
におけるApApARp ＊Ａ（レーン８）もしくは10-5Mにおけ
るApApASp ＊Ａ（レーン９）の存在下に培養した。
第3B図は、２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジ
エステル四量体５′−モノホスフェート誘導体を用いて
第2A図の方法により行ったリボソームRNA切断分析の結
果を示す。L929細胞抽出物を以下のp3A4などの不存在下
（レーン１）または10-8Mにおけるp3A4（レーン２）、1
0-6MにおけるpA4（レーン３）、10-6MにおけるpARp ＊Ap
ApA（レーン４）、10-6MにおけるpASp ＊ApApA（レーン
５）、10-8MにおけるpApARp ＊ApA（レーン６）、10-5M
におけるpApASp ＊ApA（レーン７）、10-7MにおけるpApA
pARp ＊Ａ（レーン８）もしくは10-7MにおけるpApApASp
＊Ａ（レーン９）の存在下に培養した。
エステル四量体５′−モノホスフェート誘導体を用いて
第2A図の方法により行ったリボソームRNA切断分析の結
果を示す。L929細胞抽出物を以下のp3A4などの不存在下
（レーン１）または10-8Mにおけるp3A4（レーン２）、1
0-6MにおけるpA4（レーン３）、10-6MにおけるpARp ＊Ap
ApA（レーン４）、10-6MにおけるpASp ＊ApApA（レーン
５）、10-8MにおけるpApARp ＊ApA（レーン６）、10-5M
におけるpApASp ＊ApA（レーン７）、10-7MにおけるpApA
pARp ＊Ａ（レーン８）もしくは10-7MにおけるpApApASp
＊Ａ（レーン９）の存在下に培養した。
第4A図は第2A図の方法により行ったリボソーム切断分
析の結果を示し、これはL929細胞抽出物におけるpApASp
＊ＡによるRNアーゼＬおよび部分精製されたRNアーゼＬ
による（RNアーゼＬの）活性化の抑制を示す。L929細胞
抽出物を10-9Mにおけるp3A3（レーン１および２）、10
-8Mにおけるp3A3（レーン３および４）、10-9Mにおける
pApARp ＊Ａ（レーン５および６）、10-8MにおけるpApA
Rp ＊Ａ（レーン７および８）、並びに10-6MにおけるpAp
ASp ＊Ａ（レーン２、４、６および８）の存在下に培養
した。
析の結果を示し、これはL929細胞抽出物におけるpApASp
＊ＡによるRNアーゼＬおよび部分精製されたRNアーゼＬ
による（RNアーゼＬの）活性化の抑制を示す。L929細胞
抽出物を10-9Mにおけるp3A3（レーン１および２）、10
-8Mにおけるp3A3（レーン３および４）、10-9Mにおける
pApARp ＊Ａ（レーン５および６）、10-8MにおけるpApA
Rp ＊Ａ（レーン７および８）、並びに10-6MにおけるpAp
ASp ＊Ａ（レーン２、４、６および８）の存在下に培養
した。
第4B図は、L929細胞抽出物から部分精製されたRNアー
ゼＬの活性化を示す放射性結合分析の結果を示す。RNア
ーゼＬの活性化は、ポリ（Ｕ）［32P］pCpから酸可溶性
断片への変換により２−5A4コア−セルロース上への固
定化にて決定した。100％は25,000dpmのポリ（Ｕ）［32
P］pCpがガラス繊維フィルタに結合したことを示す。比
較のため２−5Aオリゴマー（ホスホジエステル ヌクレ
オチド間結合）をも含ませる。各曲線は次のように標識
する:p3A3（●）;10-6Mにおけるp3A3＋pApASp ＊Ａ
（○）。
ゼＬの活性化を示す放射性結合分析の結果を示す。RNア
ーゼＬの活性化は、ポリ（Ｕ）［32P］pCpから酸可溶性
断片への変換により２−5A4コア−セルロース上への固
定化にて決定した。100％は25,000dpmのポリ（Ｕ）［32
P］pCpがガラス繊維フィルタに結合したことを示す。比
較のため２−5Aオリゴマー（ホスホジエステル ヌクレ
オチド間結合）をも含ませる。各曲線は次のように標識
する:p3A3（●）;10-6Mにおけるp3A3＋pApASp ＊Ａ
（○）。
第5A図はヘンダーソン等、バイロロジー、第182巻、
第186〜198頁（1991）の方法により行った分析の結果を
示し、これはアデノシン、２−5A三量体もしくは四量体
コアまたは以下の２′,5′−ホスホロチオエート／ホス
ホジエステル三量体の各誘導体によるHIV−１（III B）
誘発の合胞体形成の抑制を示す:ARp ＊ApA、ASp ＊ApA、A
pARp ＊Ａ、ApASp ＊Ａ、ARp ＊ApApA、ASp ＊ApApA、ApARp
＊ApA、ApASp ＊ApA、ApApARp ＊Ａ、ApApASp ＊Ａ。
第186〜198頁（1991）の方法により行った分析の結果を
示し、これはアデノシン、２−5A三量体もしくは四量体
コアまたは以下の２′,5′−ホスホロチオエート／ホス
ホジエステル三量体の各誘導体によるHIV−１（III B）
誘発の合胞体形成の抑制を示す:ARp ＊ApA、ASp ＊ApA、A
pARp ＊Ａ、ApASp ＊Ａ、ARp ＊ApApA、ASp ＊ApApA、ApARp
＊ApA、ApASp ＊ApA、ApApARp ＊Ａ、ApApASp ＊Ａ。
第5B図は、２−5Aコアの２′,5′−ホスホロチオエー
ト／ホスホジエステル四量体の誘導体を用いて第5A図の
方法により行った分析の結果を示す。
ト／ホスホジエステル四量体の誘導体を用いて第5A図の
方法により行った分析の結果を示す。
発明の詳細な説明 ２′,5′−オリゴアデニレート（２−5A）の三量体お
よび四量体の各誘導体における個々のヌクレオチド結合
を、ホスホトリエステルおよびホスホルアミダイト化学
合成によるホスホロチオエート置換を介して立体化学的
に改変した。ここに説明した手法は、個々に操作しうる
下記の完全保護されたモノマー構築ブロックを用いる
（方法１および２）。保護基はオリゴヌクレオチド鎖の
化学合成に際し所定位置に残留し、β−除去により配列
の末端で除去される。
よび四量体の各誘導体における個々のヌクレオチド結合
を、ホスホトリエステルおよびホスホルアミダイト化学
合成によるホスホロチオエート置換を介して立体化学的
に改変した。ここに説明した手法は、個々に操作しうる
下記の完全保護されたモノマー構築ブロックを用いる
（方法１および２）。保護基はオリゴヌクレオチド鎖の
化学合成に際し所定位置に残留し、β−除去により配列
の末端で除去される。
ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体コアA
Rp ＊ApA 10、ASp ＊ApA 11、ApARp ＊A23およびApASp ＊
Ａ 24を化学合成すると共にシリカゲル上での調整用薄
層クロマトグラフィーにより分離し、封鎖解除し、さら
に残留物をDEAEセファデックスカラムに施して精製し
た。４種の三量体コアをホスホルアミダイト中間体４お
よび15から作成する。合成は、完全分割された保護中間
体８、９、21および22の分離に続く、個々に置換された
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量
体アデニレート コアを生成させる全封鎖基の除去に依
存する。本発明の１部でないが、二量体コア６の作成を
も完全を期するため含ませる。
Rp ＊ApA 10、ASp ＊ApA 11、ApARp ＊A23およびApASp ＊
Ａ 24を化学合成すると共にシリカゲル上での調整用薄
層クロマトグラフィーにより分離し、封鎖解除し、さら
に残留物をDEAEセファデックスカラムに施して精製し
た。４種の三量体コアをホスホルアミダイト中間体４お
よび15から作成する。合成は、完全分割された保護中間
体８、９、21および22の分離に続く、個々に置換された
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量
体アデニレート コアを生成させる全封鎖基の除去に依
存する。本発明の１部でないが、二量体コア６の作成を
も完全を期するため含ませる。
選択的に置換した四量体コア38および39、51および5
2、並びに57および58を完全保護された三量体コア30お
よび31から誘導し、次いで脱トリチル化および縮合にか
けて四量体部分を付加した。
2、並びに57および58を完全保護された三量体コア30お
よび31から誘導し、次いで脱トリチル化および縮合にか
けて四量体部分を付加した。
本発明の化合物は、（ｉ）ヌクレアーゼ耐性であり、
（ii）無毒性であり、（iii）RNアーゼＬを活性化もし
くは失活させることができ、さらに（iv）HIV−１複製
を抑制することができる２−5A誘導体からなっている。
本発明の化合物は、少なくとも１個の２′,5′−ホスホ
ジエステル結合が２′,5′−ホスホロチオエート結合に
より選択的に置換されている化学合成されたホスホロチ
オエート／ホスホジエステル三量体および四量体２−5A
誘導体である。これらホスホロチオエート／ホスホジエ
ステル誘導体の化学合成は、個々に処理しうる封鎖基に
より反応性官能基を保護するホスホトリエステルおよび
ホスホルアミダイト手法を用いる。ホスホロチオエート
／ホスホジエステル三量体および四量体２−5A誘導体は
したがってRNアーゼＬの活性化につき立体化学要件の未
知の面を示し、すなわちRNアーゼＬの活性化は２−5A分
子の５′−末端からの第二ヌクレオチド間結合にPRキラ
リティを必要とすると共に、第二ヌクレオチド間結合に
おけるPSキラリティがRNアーゼＬ活性化の拮抗剤である
２−5A誘導体をもたらす。特定の理論に拘束するもので
ないが、５′−末端からの第二ヌクレオチド間結合にお
けるPRキラルティはRNアーゼＬとアロステリック活性化
剤（ApARp ＊ＡもしくはApARp ＊ApA）とRNA基質との間の
生産性複合体の形成を容易化させてHIV−１ RNAの加水
分解を生ぜしめうるよう作用する。
（ii）無毒性であり、（iii）RNアーゼＬを活性化もし
くは失活させることができ、さらに（iv）HIV−１複製
を抑制することができる２−5A誘導体からなっている。
本発明の化合物は、少なくとも１個の２′,5′−ホスホ
ジエステル結合が２′,5′−ホスホロチオエート結合に
より選択的に置換されている化学合成されたホスホロチ
オエート／ホスホジエステル三量体および四量体２−5A
誘導体である。これらホスホロチオエート／ホスホジエ
ステル誘導体の化学合成は、個々に処理しうる封鎖基に
より反応性官能基を保護するホスホトリエステルおよび
ホスホルアミダイト手法を用いる。ホスホロチオエート
／ホスホジエステル三量体および四量体２−5A誘導体は
したがってRNアーゼＬの活性化につき立体化学要件の未
知の面を示し、すなわちRNアーゼＬの活性化は２−5A分
子の５′−末端からの第二ヌクレオチド間結合にPRキラ
リティを必要とすると共に、第二ヌクレオチド間結合に
おけるPSキラリティがRNアーゼＬ活性化の拮抗剤である
２−5A誘導体をもたらす。特定の理論に拘束するもので
ないが、５′−末端からの第二ヌクレオチド間結合にお
けるPRキラルティはRNアーゼＬとアロステリック活性化
剤（ApARp ＊ＡもしくはApARp ＊ApA）とRNA基質との間の
生産性複合体の形成を容易化させてHIV−１ RNAの加水
分解を生ぜしめうるよう作用する。
２−5A分子における個々のヌクレオチド間結合のホス
ホロチオエート置換は、HIV−１複製の抑制がホスホロ
チオエート／ホスホジエステル誘導体におけるキラル
ホスホロチオエート基の位置および立体配置により影響
を受けることを示した。４種のホスホロチオエート／ホ
スホジエステル三量体コア誘導体のうち、ApARp ＊Ａお
よびApASp ＊ＡがHIV−１誘発の合胞体形成につき最も効
率的な抑制剤であった（第4A図）。６種のホスホロチオ
エート／ホスホジエステル四量体コア誘導体のうち、Ap
ApARp ＊ＡおよびApApASp ＊Ａが最も効率的な抑制剤であ
った（第4B図）。ARp ＊Ａ、ASp ＊Ａ、３′,5′−A4、ア
デノシンおよびアデニンはHIV−１ RT活性を抑制しな
かった。ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａは両者ともホスホジ
エステラーゼ耐性であり、しかも、HIV−１ RTを抑制
するのに対し、ApARp ＊Ａエナンチオマー（ApASp ＊Ａエ
ナンチオマーでない）はRNアーゼＬを活性化することが
できる。
ホロチオエート置換は、HIV−１複製の抑制がホスホロ
チオエート／ホスホジエステル誘導体におけるキラル
ホスホロチオエート基の位置および立体配置により影響
を受けることを示した。４種のホスホロチオエート／ホ
スホジエステル三量体コア誘導体のうち、ApARp ＊Ａお
よびApASp ＊ＡがHIV−１誘発の合胞体形成につき最も効
率的な抑制剤であった（第4A図）。６種のホスホロチオ
エート／ホスホジエステル四量体コア誘導体のうち、Ap
ApARp ＊ＡおよびApApASp ＊Ａが最も効率的な抑制剤であ
った（第4B図）。ARp ＊Ａ、ASp ＊Ａ、３′,5′−A4、ア
デノシンおよびアデニンはHIV−１ RT活性を抑制しな
かった。ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａは両者ともホスホジ
エステラーゼ耐性であり、しかも、HIV−１ RTを抑制
するのに対し、ApARp ＊Ａエナンチオマー（ApASp ＊Ａエ
ナンチオマーでない）はRNアーゼＬを活性化することが
できる。
この点に関し、同じく特定の理論に拘束されるもので
ないが、ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体
および四量体コア誘導体によるHIV−１複製の抑制にお
ける相対的差は血清ホスホジエステラーゼによる加水分
解に対する耐性によって説明することができる（第１表
参照、後記）。血清含有培地にて20分間で全て加水分解
される真正A2およびA3における２′,5′−ホスホジエス
テル結合とは異なり、PRおよびPS ２′,5′−ホスホロ
チオエートの両結合はホスホジエステラーゼによる加水
分解に対し一層安定である。５′−末端にて立体化学的
に改変されたホスホロチオエート／ホスホジエステル四
量体コア誘導体（ARp ＊ApApAおよびASp ＊ApApA）は
２′,3′−末端からその各二量体ARp ＊ＡおよびASp ＊Ａ
まで急速に加水分解される。これら二量体は、その後の
加水分解に対し耐性であるが、RNアーゼＬを活性化する
ことができず、またHIV−１複製をも抑制しえない。残
余の４種のホスホロチオエート／ホスホジエステル四量
体コア誘導体（ApARp ＊ApA、ApASp ＊ApA、ApApARp ＊Ａ
およびApApASp ＊Ａ）は５′−末端から加水分解されて
各三量体コアARp ＊ApA、ASp ＊ApA、ApARp ＊ＡおよびApA
Sp ＊Ａをそれぞれ生成する。ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａ
はHIV−１複製の効率的な抑制剤であるため、この加水
分解は恐らく四量体の各誘導体ApApARp ＊ＡおよびApApA
Sp ＊Ａの抗ウィルス作用の原因となる。したがってApA
Rp ＊ApAおよびApASp ＊ApAで観察される抗HIV−１活性の
低下（ApApARp ＊ＡおよびApApASp ＊Ａと対比）は、恐ら
くHIV−１誘発の合胞体形成の極めて効率的な抑制剤で
あるApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａを生成する５′−末端か
らの加水分解に起因すると思われる（第4A図と第4B図と
の比較）。
ないが、ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体
および四量体コア誘導体によるHIV−１複製の抑制にお
ける相対的差は血清ホスホジエステラーゼによる加水分
解に対する耐性によって説明することができる（第１表
参照、後記）。血清含有培地にて20分間で全て加水分解
される真正A2およびA3における２′,5′−ホスホジエス
テル結合とは異なり、PRおよびPS ２′,5′−ホスホロ
チオエートの両結合はホスホジエステラーゼによる加水
分解に対し一層安定である。５′−末端にて立体化学的
に改変されたホスホロチオエート／ホスホジエステル四
量体コア誘導体（ARp ＊ApApAおよびASp ＊ApApA）は
２′,3′−末端からその各二量体ARp ＊ＡおよびASp ＊Ａ
まで急速に加水分解される。これら二量体は、その後の
加水分解に対し耐性であるが、RNアーゼＬを活性化する
ことができず、またHIV−１複製をも抑制しえない。残
余の４種のホスホロチオエート／ホスホジエステル四量
体コア誘導体（ApARp ＊ApA、ApASp ＊ApA、ApApARp ＊Ａ
およびApApASp ＊Ａ）は５′−末端から加水分解されて
各三量体コアARp ＊ApA、ASp ＊ApA、ApARp ＊ＡおよびApA
Sp ＊Ａをそれぞれ生成する。ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａ
はHIV−１複製の効率的な抑制剤であるため、この加水
分解は恐らく四量体の各誘導体ApApARp ＊ＡおよびApApA
Sp ＊Ａの抗ウィルス作用の原因となる。したがってApA
Rp ＊ApAおよびApASp ＊ApAで観察される抗HIV−１活性の
低下（ApApARp ＊ＡおよびApApASp ＊Ａと対比）は、恐ら
くHIV−１誘発の合胞体形成の極めて効率的な抑制剤で
あるApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａを生成する５′−末端か
らの加水分解に起因すると思われる（第4A図と第4B図と
の比較）。
予備実験において、本発明のホスホロチオエート／ホ
スホジエステル三量体および四量体２−5Aコア誘導体は
全てHIV−１ RTを抑制することが示された。抑制は22
％〜70％の範囲である。ARp ＊Ａ、ASp ＊Ａ、３′,5′−
A4、アデノシンおよびアデニンはHIV−１ RT活性を抑
制しなかった。ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａは両者ともホ
スホジエステラーゼ耐性であると共にHIV−１ RTを抑
制するのに対し、ApARp ＊Ａエナンチオマー（ApASp ＊Ａ
エナンチオマーでない）もRNアーゼＬを活性化合するこ
とができる。
スホジエステル三量体および四量体２−5Aコア誘導体は
全てHIV−１ RTを抑制することが示された。抑制は22
％〜70％の範囲である。ARp ＊Ａ、ASp ＊Ａ、３′,5′−
A4、アデノシンおよびアデニンはHIV−１ RT活性を抑
制しなかった。ApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａは両者ともホ
スホジエステラーゼ耐性であると共にHIV−１ RTを抑
制するのに対し、ApARp ＊Ａエナンチオマー（ApASp ＊Ａ
エナンチオマーでない）もRNアーゼＬを活性化合するこ
とができる。
これら３種の生物学的性質（すなわちホスホジエステ
ラーゼによる加水分解に対する耐性、逆転写酵素の抑制
およびRNアーゼＬの活性化）は、ApARp ＊Ａで観察され
るHIV−１複製の100％抑制の原因となる。
ラーゼによる加水分解に対する耐性、逆転写酵素の抑制
およびRNアーゼＬの活性化）は、ApARp ＊Ａで観察され
るHIV−１複製の100％抑制の原因となる。
本発明の化合物はナトリウム、アンモニウムもしくは
カリウムの可溶性塩として有利に作成される。作成方式
は６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチル
シリル−５′−Ｏ−モノメトキシ−トリチルアデノシン
１から開始し、フロッケルチー等、リービッヒス・アナ
ーレン・ヘミー、第1568〜1585頁（1981）の方法にした
がってアデノシンから有利に作成される。本発明による
化合物の作成を、限定はしないが以下の実施例を参照し
て詳細に説明する。
カリウムの可溶性塩として有利に作成される。作成方式
は６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−ｔ−ブチルジメチル
シリル−５′−Ｏ−モノメトキシ−トリチルアデノシン
１から開始し、フロッケルチー等、リービッヒス・アナ
ーレン・ヘミー、第1568〜1585頁（1981）の方法にした
がってアデノシンから有利に作成される。本発明による
化合物の作成を、限定はしないが以下の実施例を参照し
て詳細に説明する。
各実施例で使用した３−ニトロ−1,2,4−トリアゾー
ルおよびｐ−ニトロフェニルエタノールは公開された方
法により有利に作成することができる：チャットパジャ
ヤ等、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ、第８巻、第
2039〜2053頁（1980）；シュバルツ等、テトラヘドロン
・レタース、第5513〜5516頁（1984）；ウールマン等、
エルベチカ・ヒミカ・アンタ、第64巻、第1688〜1703頁
（1981）。これら化合物は米国にて市販入手も可能であ
る。３−ニトロ−1,2−４−トリアゾールはアルドリッ
チ・ケミカル・カンパニー、PO箱355、ミルウォーキ
ー、WI 53201から入手しうる（1986〜1987年カタログN
o.24,179.2）。ｐ−ニトロフェニルエタノールはフルカ
・ケミカル・コーポレーションから入手しうる（カタロ
グNo.73,610）。
ルおよびｐ−ニトロフェニルエタノールは公開された方
法により有利に作成することができる：チャットパジャ
ヤ等、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ、第８巻、第
2039〜2053頁（1980）；シュバルツ等、テトラヘドロン
・レタース、第5513〜5516頁（1984）；ウールマン等、
エルベチカ・ヒミカ・アンタ、第64巻、第1688〜1703頁
（1981）。これら化合物は米国にて市販入手も可能であ
る。３−ニトロ−1,2−４−トリアゾールはアルドリッ
チ・ケミカル・カンパニー、PO箱355、ミルウォーキ
ー、WI 53201から入手しうる（1986〜1987年カタログN
o.24,179.2）。ｐ−ニトロフェニルエタノールはフルカ
・ケミカル・コーポレーションから入手しうる（カタロ
グNo.73,610）。
各実施例で使用したピリジンおよびトリエチルアミン
はKOH、塩化トシルおよび水素化カルシウムでの蒸留に
より精製した。ジクロルメタンは、塩化カルシウムで蒸
留し、次いで塩基性アルミナに通過させた。純アセトニ
トリルは水素化カルシウムでの蒸留により得た。
はKOH、塩化トシルおよび水素化カルシウムでの蒸留に
より精製した。ジクロルメタンは、塩化カルシウムで蒸
留し、次いで塩基性アルミナに通過させた。純アセトニ
トリルは水素化カルシウムでの蒸留により得た。
保護ヌクレオチドの精製はシリカゲル60（0.063〜0.2
メッシュ、メルク社）での調製用カラムクロマトグラフ
ィーおよびシリカゲル60PF254（メルク社）での調製用
薄層クロマトグラフィーにより行った。薄層クロマトグ
ラフィー（「TLC」）は、シュライヒャー・アンド・シ
ョイル社からの予備被覆薄層シートF1500 LS 254およ
びセルロース薄層シートF1440にて行った。
メッシュ、メルク社）での調製用カラムクロマトグラフ
ィーおよびシリカゲル60PF254（メルク社）での調製用
薄層クロマトグラフィーにより行った。薄層クロマトグ
ラフィー（「TLC」）は、シュライヒャー・アンド・シ
ョイル社からの予備被覆薄層シートF1500 LS 254およ
びセルロース薄層シートF1440にて行った。
方式１は、保護中間体８および９からの第一ヌクレオ
チド間結合ARp ＊ApA 10およびASp ＊ApA 11のホスホロ
チオエート置換を有する完全分割された三量体を作成す
るための反応方式であり、ここで「bz」はベンゾイル基
を示し、「tbds」はｔ−ブチルジメチルシリル基を示
し、「ce」はシアノエチル基を示し、「npe」はニトロ
フェニルエトキシ基を示し、「MeOTr」はモノメトキシ
トリチル基を示す。三量体コア10および11の作成を製造
例１〜４および実施例１に示す。製造例４は完全保護さ
れた三量体コアを示す一方、実施例１は封鎖基の除去お
よび完全分割された異性体の化学精製を示す。
チド間結合ARp ＊ApA 10およびASp ＊ApA 11のホスホロ
チオエート置換を有する完全分割された三量体を作成す
るための反応方式であり、ここで「bz」はベンゾイル基
を示し、「tbds」はｔ−ブチルジメチルシリル基を示
し、「ce」はシアノエチル基を示し、「npe」はニトロ
フェニルエトキシ基を示し、「MeOTr」はモノメトキシ
トリチル基を示す。三量体コア10および11の作成を製造
例１〜４および実施例１に示す。製造例４は完全保護さ
れた三量体コアを示す一方、実施例１は封鎖基の除去お
よび完全分割された異性体の化学精製を示す。
製造例１ a. ビス−（ジイソプロピルアミノ）−（β−シアノエ
トキシ）−ホスファン3: 標記化合物の製造は、クラスゼウスキーおよびノリ
ス、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ Sump.Ser.、
第18巻、第177〜80頁（1987）の手順にしたがった。無
水CH3CN（40mL）におけるβ−シアノエタノール（7g;0.
1モル）を新たに蒸留されたPCl3（40mL;0.4モル）の溶
液に室温（「r.t.」）にて窒素雰囲気下に30分間以内で
滴下した。3.5時間撹拌した後、溶剤および過剰のPCl3
を高減圧下で除去し、残留物を450mLの無水エーテルに
溶解させ、−10℃にて窒素雰囲気下での１時間以内滴下
によりN,N−ジイソプロピルアミン（127mL;0.9モル）と
反応させた。この反応混合物を−10℃にて30分間および
r.t.にて15時間撹拌した。沈殿物を窒素下で濾過し、溶
剤を減圧除去した。黄色の粗生成物をCaH2上で分別蒸留
して14.7g（49％）の純物３（b.p.114〜118℃）を得
た。この試薬を窒素下で−20℃にて貯蔵した。1H−NMR
（CDCl3）:3.75（s,2H,CH2）;3.52（m,4H,4N−CH）;2.6
0（t,2H,β−CH2）;1.17＋1.14（2d,24H,4N−Ｃ（CH3）
２）。31P−NMR（CDCl3）:124.6ppm。
トキシ）−ホスファン3: 標記化合物の製造は、クラスゼウスキーおよびノリ
ス、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ Sump.Ser.、
第18巻、第177〜80頁（1987）の手順にしたがった。無
水CH3CN（40mL）におけるβ−シアノエタノール（7g;0.
1モル）を新たに蒸留されたPCl3（40mL;0.4モル）の溶
液に室温（「r.t.」）にて窒素雰囲気下に30分間以内で
滴下した。3.5時間撹拌した後、溶剤および過剰のPCl3
を高減圧下で除去し、残留物を450mLの無水エーテルに
溶解させ、−10℃にて窒素雰囲気下での１時間以内滴下
によりN,N−ジイソプロピルアミン（127mL;0.9モル）と
反応させた。この反応混合物を−10℃にて30分間および
r.t.にて15時間撹拌した。沈殿物を窒素下で濾過し、溶
剤を減圧除去した。黄色の粗生成物をCaH2上で分別蒸留
して14.7g（49％）の純物３（b.p.114〜118℃）を得
た。この試薬を窒素下で−20℃にて貯蔵した。1H−NMR
（CDCl3）:3.75（s,2H,CH2）;3.52（m,4H,4N−CH）;2.6
0（t,2H,β−CH2）;1.17＋1.14（2d,24H,4N−Ｃ（CH3）
２）。31P−NMR（CDCl3）:124.6ppm。
b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデノシン−２′−Ｏ−［（β−シアノエチル）
−N,N−ジイソプロピルアミノ］−ホスホルアミダイト
4: 方法Ａ 標記化合物の製造はシンハ等、ヌクレイック・アシッ
ズ・リサーチ、第12巻、第4539〜4557頁（1984）の方法
にしたがって行い、ここでは化合物１［フロッケルチー
等（1981）、上記］（3.79g;5ミリモル）およびジイソ
プロピル−エチルアミン（3.5mL）を乾燥CH2Cl2（20m
L）に溶解させ、クロル−N,N−ジイソプロピルアミノ−
シアノエトキシホスファン（2.37g;10ミリモル）を添加
した。r.t.にて窒素下で1.5時間撹拌した後、反応混合
物をEtOAc（100mL）で希釈し、有機相を飽和NaHCO3/NaC
l溶液（２×80mL）で洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水
し、濾過し、次いで蒸発乾固させた。残留物をCH2Cl
2（10mL）に溶解させ、−60℃にてｎ−ヘキサン（200m
L）に滴下した。生成物を回収し、８時間にわたり高減
圧下で蒸発乾固させて4.3g（89％）の無色非晶質固体を
得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデノシン−２′−Ｏ−［（β−シアノエチル）
−N,N−ジイソプロピルアミノ］−ホスホルアミダイト
4: 方法Ａ 標記化合物の製造はシンハ等、ヌクレイック・アシッ
ズ・リサーチ、第12巻、第4539〜4557頁（1984）の方法
にしたがって行い、ここでは化合物１［フロッケルチー
等（1981）、上記］（3.79g;5ミリモル）およびジイソ
プロピル−エチルアミン（3.5mL）を乾燥CH2Cl2（20m
L）に溶解させ、クロル−N,N−ジイソプロピルアミノ−
シアノエトキシホスファン（2.37g;10ミリモル）を添加
した。r.t.にて窒素下で1.5時間撹拌した後、反応混合
物をEtOAc（100mL）で希釈し、有機相を飽和NaHCO3/NaC
l溶液（２×80mL）で洗浄した。有機層をNa2SO4で脱水
し、濾過し、次いで蒸発乾固させた。残留物をCH2Cl
2（10mL）に溶解させ、−60℃にてｎ−ヘキサン（200m
L）に滴下した。生成物を回収し、８時間にわたり高減
圧下で蒸発乾固させて4.3g（89％）の無色非晶質固体を
得た。
方法Ｂ 代案として、標記化合物をクラスゼウスキーおよびノ
リス（1987）（上記）の方法にしたがって作成した。こ
の方法では化合物１（3.79g;5ミリモル）とテトラゾー
ル（0.175g;2.5ミリモル）とを乾燥CH2Cl2（20mL）に溶
解させ、次いでビス−（ジイソプロピルアミノ）−（β
−シアノエトキシ）ホスファン３（3g;10ミリモル）を
添加した。アルゴン下で17時間にわたりr.t.にて撹拌し
た後、反応混合物をEtOAc（100mL）で抽出し、飽和NaHC
O3/NaCl溶液（80mL）で洗浄した。これを２回反復する
と共に、方法Ａと同様に仕上処理を行って4.49g（94
％）の無色非晶質粉末を得た。
リス（1987）（上記）の方法にしたがって作成した。こ
の方法では化合物１（3.79g;5ミリモル）とテトラゾー
ル（0.175g;2.5ミリモル）とを乾燥CH2Cl2（20mL）に溶
解させ、次いでビス−（ジイソプロピルアミノ）−（β
−シアノエトキシ）ホスファン３（3g;10ミリモル）を
添加した。アルゴン下で17時間にわたりr.t.にて撹拌し
た後、反応混合物をEtOAc（100mL）で抽出し、飽和NaHC
O3/NaCl溶液（80mL）で洗浄した。これを２回反復する
と共に、方法Ａと同様に仕上処理を行って4.49g（94
％）の無色非晶質粉末を得た。
分析： C52H64N7O7PSi×2H2Oの計算値（994.2）： C 62.82、H 6.89、N 9.86 実測値:C 62.52、H 7.08、N 10.35。
UV（MeOH）：λmax（logε）279nm（4.33）;229nm（4.4
3）。トルオール/EtOAc（1/1、v/v）によるシリカゲル
上でのRf:0.64、0.61（ジアステレオマー）。31P−NMR
（CDCl3）150.98、151.34。
3）。トルオール/EtOAc（1/1、v/v）によるシリカゲル
上でのRf:0.64、0.61（ジアステレオマー）。31P−NMR
（CDCl3）150.98、151.34。
製造例２ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−
アデニリル−２′−［OP−（２−シアノエチル）−５′
−］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル）−アデノシン6: ホスホルアミダイト４（2.88g;3ミリモル）と６−Ｎ
−ベンゾイル−２′,3′ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデノシン５［フロッケルチー等（198
1）、上記］（1.2g;2ミリモル）とを24時間にわたり高
減圧下でr.t.にて乾燥させ、乾燥CH2Cl2（30mL）に溶解
させた。テトラゾール（0.5g;8ミリモル）を添加し、ア
ルゴン下でr.t.にて３時間撹拌した後、I2の溶液［0.5g
H2O/ピリジン/CH2Cl2（1/3/1、v/v/v/）］を褐色が消失
しなくなるまで滴下した。混合物を15分間撹拌し、次い
でCHCl3（300mL）で希釈した。有機相をNa2S2O3/NaCl
（３×80mL）で飽和させ、Na2SO4て脱水し、次いで蒸発
乾固させた。最終的な同時蒸発をトルエン（３×20mL）
で行った。粗生成物を、CHCl3（100mL）とCHCl3/MeOH
（100/0.5、v/v;1.5L）とCHCl3/MeOH（100/1、v/v）と
を用いるシリカゲルカラム クロマトグラフィー（15×
2.5cm）により精製して生成物を溶出させた。生成物フ
ラクションを集め、次いで蒸発乾固させて2.33g（79
％）の二量体６を固体フォームとして得た。
チルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−
アデニリル−２′−［OP−（２−シアノエチル）−５′
−］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル）−アデノシン6: ホスホルアミダイト４（2.88g;3ミリモル）と６−Ｎ
−ベンゾイル−２′,3′ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデノシン５［フロッケルチー等（198
1）、上記］（1.2g;2ミリモル）とを24時間にわたり高
減圧下でr.t.にて乾燥させ、乾燥CH2Cl2（30mL）に溶解
させた。テトラゾール（0.5g;8ミリモル）を添加し、ア
ルゴン下でr.t.にて３時間撹拌した後、I2の溶液［0.5g
H2O/ピリジン/CH2Cl2（1/3/1、v/v/v/）］を褐色が消失
しなくなるまで滴下した。混合物を15分間撹拌し、次い
でCHCl3（300mL）で希釈した。有機相をNa2S2O3/NaCl
（３×80mL）で飽和させ、Na2SO4て脱水し、次いで蒸発
乾固させた。最終的な同時蒸発をトルエン（３×20mL）
で行った。粗生成物を、CHCl3（100mL）とCHCl3/MeOH
（100/0.5、v/v;1.5L）とCHCl3/MeOH（100/1、v/v）と
を用いるシリカゲルカラム クロマトグラフィー（15×
2.5cm）により精製して生成物を溶出させた。生成物フ
ラクションを集め、次いで蒸発乾固させて2.33g（79
％）の二量体６を固体フォームとして得た。
分析： C75H94N11O13PSi3の計算値（1490.9）： C 60.42、H 6.49、N 10.33 実測値:C 60.50、H 6.49、N 10.22。
UV（MeOH）：λmax（logε）278nm（4.62）;230nm（4.6
2）。CHCl3/MeOH（95/5、v/v）によるシリカゲルでのRf
＝0.56。31P−NMR（CDCl3）：−074および−1.07ppm
（ジアステレオマー）。
2）。CHCl3/MeOH（95/5、v/v）によるシリカゲルでのRf
＝0.56。31P−NMR（CDCl3）：−074および−1.07ppm
（ジアステレオマー）。
製造例３ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル）−アデニリル−２′−［OP−（２−シアノ
エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン
7: 化合物６（2.22g;1.51ミリモル）をCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v;30mL）中で室温にて30分間にわたり２％ｐ−TsO
Hと共に撹拌した。この反応混合物をCH2Cl2（300mL）で
希釈し、燐酸塩緩衝液（pH7.0）（２×100mL）で洗浄
し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。残留物を
シリカゲルカラム（９×4.5cm）に施し、CHCl3（0.7L）
およびCHCl3/MeOH（100/1、v/v;300mL）で洗浄した。生
成物をCHCl3/MeOH（50/1、v/v;300mLおよび100/3、v/v;
300mL）で溶出させた。生成物フラクションを合して高
減圧下で蒸発乾固させて、11.65g（90％）の５′−ヒド
ロキシ二量体７を非晶質固体として得た。
チルシリル）−アデニリル−２′−［OP−（２−シアノ
エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン
7: 化合物６（2.22g;1.51ミリモル）をCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v;30mL）中で室温にて30分間にわたり２％ｐ−TsO
Hと共に撹拌した。この反応混合物をCH2Cl2（300mL）で
希釈し、燐酸塩緩衝液（pH7.0）（２×100mL）で洗浄
し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。残留物を
シリカゲルカラム（９×4.5cm）に施し、CHCl3（0.7L）
およびCHCl3/MeOH（100/1、v/v;300mL）で洗浄した。生
成物をCHCl3/MeOH（50/1、v/v;300mLおよび100/3、v/v;
300mL）で溶出させた。生成物フラクションを合して高
減圧下で蒸発乾固させて、11.65g（90％）の５′−ヒド
ロキシ二量体７を非晶質固体として得た。
分析： C55H78N11O12PSi3×H2Oの計算値（1218.5）： C 54.21、H 6.62、N 12.64 実測値:C 54.53、H 6.58、N 12.62。
UV（MeOH）：λmax（logε）278nm（4.60）;232nm（4.4
2）。CHCl3/MeOH（95/5、v/v）によるシリカゲルでのRf
＝0.36。31P−NMR（CDCl3）：−0.77および−1.30ppm
（ジアステレオマー）。
2）。CHCl3/MeOH（95/5、v/v）によるシリカゲルでのRf
＝0.36。31P−NMR（CDCl3）：−0.77および−1.30ppm
（ジアステレオマー）。
製造例４ a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PR）−チオアデニリル−２′−［OP−（２−シ
アノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−アデニリル−
２′−［OP−（２−シアノエチル）−５′］−６−Ｎ−
ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデノシンARp ＊ApA 8: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PS）−チオアデニリル−２′−［OP−（２−シ
アノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−アデニリル−
２′−［OP−（２−シアノエチル）−５′］−６−Ｎ−
ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデノシンASp ＊ApA 9: ホスホルアミダイト４（2.79g;2.92ミリモル）と５′
−ヒドロキシ二量体７（1.94g;1.62ミリモル）とテトラ
ゾール（0.567g;8.1ミリモル）とを乾燥CH3CN（8.1mL）
に溶解させ、室温にて窒素下に撹拌した。３時間の後、
S8（1.66g;6.48ミリモル）とピリジン（7.8mL）とを添
加し、さらにr.t.にて20時間撹拌した。次いで反応混合
物をCH2Cl2（300mL）で希釈し、飽和NaCl（２×200mL）
で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最
終的な同時蒸発をトルエン（３×20mL）で行った。粗製
ジアステレオマー混合物（ARp ＊ApA ８＋ASp ＊ApA
９）をCH2Cl2に溶解させ、シリカゲルカラム（21×3.5c
m）に施した。このカラムをCH2Cl2（450mL）およびCH2C
l2/MeOH（99/1、v/v;200mL）で洗浄し、生成物をCH2Cl2
/MeOH（97/3、v/v;400mL）で溶出させた。生成物フラク
ションを集め、次いで蒸発乾固させて3.16g（93％）のA
Rp ＊ApA ８とASp ＊ApA ９との異性体混合物を得た。
純ジアステレオアイソマーへの分離は上記したようなメ
ジアム圧力クロマトグラフィーによりCHCl3/MeOH（99/
1、v/v;800mL;20mL/フラクション；フラクション１〜4
0）での溶出に続くCHCl3/MeOH（95/5、v/v;800mL;20mL/
フラクション；フラクション41〜80）での溶出にて行っ
た。完全保護されたARp ＊ApA異性体８（0.287g）にてフ
ラクション21〜56（20mL/フラクション）で溶出した。
フラクション57〜61は異性体混合物（0.07g）を与え、
完全保護されたASp ＊ApA異性体９（0.123g）がフラクシ
ョン62〜64が溶出した。クロマトグラフ分離をそれぞれ
0.5gの粗製混合物につき反復して、1.62g（51％）のARp
＊ApA ８および0.94g（30％）のASp ＊ApA ９を得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PR）−チオアデニリル−２′−［OP−（２−シ
アノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−アデニリル−
２′−［OP−（２−シアノエチル）−５′］−６−Ｎ−
ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデノシンARp ＊ApA 8: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PS）−チオアデニリル−２′−［OP−（２−シ
アノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−アデニリル−
２′−［OP−（２−シアノエチル）−５′］−６−Ｎ−
ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデノシンASp ＊ApA 9: ホスホルアミダイト４（2.79g;2.92ミリモル）と５′
−ヒドロキシ二量体７（1.94g;1.62ミリモル）とテトラ
ゾール（0.567g;8.1ミリモル）とを乾燥CH3CN（8.1mL）
に溶解させ、室温にて窒素下に撹拌した。３時間の後、
S8（1.66g;6.48ミリモル）とピリジン（7.8mL）とを添
加し、さらにr.t.にて20時間撹拌した。次いで反応混合
物をCH2Cl2（300mL）で希釈し、飽和NaCl（２×200mL）
で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最
終的な同時蒸発をトルエン（３×20mL）で行った。粗製
ジアステレオマー混合物（ARp ＊ApA ８＋ASp ＊ApA
９）をCH2Cl2に溶解させ、シリカゲルカラム（21×3.5c
m）に施した。このカラムをCH2Cl2（450mL）およびCH2C
l2/MeOH（99/1、v/v;200mL）で洗浄し、生成物をCH2Cl2
/MeOH（97/3、v/v;400mL）で溶出させた。生成物フラク
ションを集め、次いで蒸発乾固させて3.16g（93％）のA
Rp ＊ApA ８とASp ＊ApA ９との異性体混合物を得た。
純ジアステレオアイソマーへの分離は上記したようなメ
ジアム圧力クロマトグラフィーによりCHCl3/MeOH（99/
1、v/v;800mL;20mL/フラクション；フラクション１〜4
0）での溶出に続くCHCl3/MeOH（95/5、v/v;800mL;20mL/
フラクション；フラクション41〜80）での溶出にて行っ
た。完全保護されたARp ＊ApA異性体８（0.287g）にてフ
ラクション21〜56（20mL/フラクション）で溶出した。
フラクション57〜61は異性体混合物（0.07g）を与え、
完全保護されたASp ＊ApA異性体９（0.123g）がフラクシ
ョン62〜64が溶出した。クロマトグラフ分離をそれぞれ
0.5gの粗製混合物につき反復して、1.62g（51％）のARp
＊ApA ８および0.94g（30％）のASp ＊ApA ９を得た。
分析： ARp ＊ApA−C101H127N17O19P2SSi4の計算値（2089.6）： C 58.05、H 6.13、N 11.40 実測値:C 58.65、H 6.24、N 11.50。
UV（MeOH）：λmax（logε）279nm（4.76）、260nm（4.
56）、236nm（4.73）。CHCl3/MeOH（97/3、v/v）による
シリカゲルでのRf＝0.35。31P−NMR（CDCl3）:69.35お
よび−1.10ppm。
56）、236nm（4.73）。CHCl3/MeOH（97/3、v/v）による
シリカゲルでのRf＝0.35。31P−NMR（CDCl3）:69.35お
よび−1.10ppm。
分析： ASp ＊ApA−C101H127N17O19P2SSi4の計算値（2089.6）： C 58.05、H 6.13、N 11.25 実測値:C 57.03、H 6.33、N 11.14。
UV（MeOH）：λmax（logε）279nm（4.77）、260nm（4.
57）、236nm（4.73）。31P−NMR（CDCl3）:68.33および
−0.84ppm。
57）、236nm（4.73）。31P−NMR（CDCl3）:68.33および
−0.84ppm。
実施例１ a. （PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′,5′−アデニリ
ル−２′,5′−アデノシンARp ＊ApA 10: b. （PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′,5′−アデニリ
ル−２′,5′−アデノシンASp ＊ApA 11: それぞれ対応の完全保護された三量体８および９を別
々に封鎖解除し、その際三量体（0.06g;0.029ミリモ
ル）をCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v;1.2mL）中でr.t.にて1.5
3時間にわたり２％ｐ−TsOHと共に撹拌した。反応混合
物をCHCl3（50mL）で希釈し、H2O（２×25mL）で洗浄
し、脱水し、次いで蒸発乾固させた。粗生成物をCHCl3/
MeOH（8/2、v/v）における調製用シリカゲル プレート
（20×20×0.2cm）で精製した。生成物バンドをCHCl3/M
eOH（4/1、v/v）で溶出させると共にフォームまで蒸発
させて、0.04g（84％）のARp ＊ApA異性体10および0.034
g（73％）のASp ＊ApA異性体11を得た。次いで５′−ヒ
ドロキシ三量体（0.034g;0.08ミリモル）を0.5MのDBUと
共にピリジン（5.0mL）中で撹拌し、室温にて20時間に
わたり撹拌した後、溶液を乾燥ピリジン（2.5mL）中に
て1M酢酸で中和し、次いで蒸発乾固させた。残留物をメ
タノール性アンモニア（5mL）で処理し、48時間撹拌し
た後に溶剤を減圧除去した。脱シリル化をTHF（2mL）中
にて1M弗化テトラブチルアンモニウムで行った。48時間
撹拌した後、溶剤を減圧除去し、残留物をH2O（10mL）
に溶解させ、DEAEセファデックスＡ−25カラム（60×1c
m）に施した。純生成物を0.14〜0.17MのTEAB緩衝液（pH
7.5）の直線濃度勾配で溶出させた。蒸発および水との
同時蒸発を数回行った後、三量体を４枚の紙シート（35
×50cm）に施し、ｉ−PrOH/濃アンモニア/H2O（6/1/3、
v/v/v）で展開させた。生成物バンドを切除し、H2Oで溶
出させ、蒸発させ、次いで凍結乾燥して500 O.D.260nm
単位（79％）のARp ＊ApA異性体10および410 O.D.260nm
単位（65％）のASp ＊ApA異性体11を得た。両者の場合に
おけるUV λmaxはH2Oにて258nmであった。ARp ＊ApA 1
0:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセ
ルロース上でのRf＝0.33。1H−NMR（D2O）:8.20;8.19;
8.14（3s,3H,H−Ｃ（８））;7.97（1s,2H,2H−Ｃ
（２））および7.76（1s,1H,1H−Ｃ（２））;6.08;5.9
3;5.82（3d,3H,3H−Ｃ（１′））。
ル−２′,5′−アデノシンARp ＊ApA 10: b. （PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′,5′−アデニリ
ル−２′,5′−アデノシンASp ＊ApA 11: それぞれ対応の完全保護された三量体８および９を別
々に封鎖解除し、その際三量体（0.06g;0.029ミリモ
ル）をCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v;1.2mL）中でr.t.にて1.5
3時間にわたり２％ｐ−TsOHと共に撹拌した。反応混合
物をCHCl3（50mL）で希釈し、H2O（２×25mL）で洗浄
し、脱水し、次いで蒸発乾固させた。粗生成物をCHCl3/
MeOH（8/2、v/v）における調製用シリカゲル プレート
（20×20×0.2cm）で精製した。生成物バンドをCHCl3/M
eOH（4/1、v/v）で溶出させると共にフォームまで蒸発
させて、0.04g（84％）のARp ＊ApA異性体10および0.034
g（73％）のASp ＊ApA異性体11を得た。次いで５′−ヒ
ドロキシ三量体（0.034g;0.08ミリモル）を0.5MのDBUと
共にピリジン（5.0mL）中で撹拌し、室温にて20時間に
わたり撹拌した後、溶液を乾燥ピリジン（2.5mL）中に
て1M酢酸で中和し、次いで蒸発乾固させた。残留物をメ
タノール性アンモニア（5mL）で処理し、48時間撹拌し
た後に溶剤を減圧除去した。脱シリル化をTHF（2mL）中
にて1M弗化テトラブチルアンモニウムで行った。48時間
撹拌した後、溶剤を減圧除去し、残留物をH2O（10mL）
に溶解させ、DEAEセファデックスＡ−25カラム（60×1c
m）に施した。純生成物を0.14〜0.17MのTEAB緩衝液（pH
7.5）の直線濃度勾配で溶出させた。蒸発および水との
同時蒸発を数回行った後、三量体を４枚の紙シート（35
×50cm）に施し、ｉ−PrOH/濃アンモニア/H2O（6/1/3、
v/v/v）で展開させた。生成物バンドを切除し、H2Oで溶
出させ、蒸発させ、次いで凍結乾燥して500 O.D.260nm
単位（79％）のARp ＊ApA異性体10および410 O.D.260nm
単位（65％）のASp ＊ApA異性体11を得た。両者の場合に
おけるUV λmaxはH2Oにて258nmであった。ARp ＊ApA 1
0:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセ
ルロース上でのRf＝0.33。1H−NMR（D2O）:8.20;8.19;
8.14（3s,3H,H−Ｃ（８））;7.97（1s,2H,2H−Ｃ
（２））および7.76（1s,1H,1H−Ｃ（２））;6.08;5.9
3;5.82（3d,3H,3H−Ｃ（１′））。
逆相HPLCにおける保持時間は5.60minであった。ASp ＊Ap
A 11:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけ
るセルロース上でのRf＝0.33。1H−NMR（D2O）:8.14;8.
09;8.02（3s,3H,H−Ｃ（８））;7.94;7.89;7.80（3s,3
H,2H−Ｃ（２））;6.03;5.92;5.80（3d,3H,3H−Ｃ
（１′））。
A 11:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけ
るセルロース上でのRf＝0.33。1H−NMR（D2O）:8.14;8.
09;8.02（3s,3H,H−Ｃ（８））;7.94;7.89;7.80（3s,3
H,2H−Ｃ（２））;6.03;5.92;5.80（3d,3H,3H−Ｃ
（１′））。
逆相HPLCにおける保持時間は6.51minであった。
方式２は、保護中間体21および22から三量体コアApA
Rp ＊Ａ 23およびApASp ＊Ａ 24の残余の対を作成する
ための反応方式であり、製造例５および６並びに後記実
施例２に詳細に要約する。
Rp ＊Ａ 23およびApASp ＊Ａ 24の残余の対を作成する
ための反応方式であり、製造例５および６並びに後記実
施例２に詳細に要約する。
製造例５ a. N,N−ジイソプロピル−トリメチルシリルアミン： 標記化合物の製造はノスおよびスタウジグル、ケミッ
シェル・ベリヒテ、第115巻、第3011〜3024頁（1982）
の方法にしたがった。無水エーテル（50mL）における沃
化メチル（37.6mL;0.6モル）を、無水エーテル（100m
L）における14.6g（0.6モル）のマグネシウムおよび数
個の沃素結晶の懸濁物に90分間かけて滴下した。次いで
反応物を全マグネシウムが溶解するまで30分間撹拌し
た。次いでN,N−ジイソプロピルアミン（78mL;0.55モ
ル）を10〜15分間で添加し、反応物を１時間にわたり還
流させた。０℃まで冷却した後、塩化トリメチルシリル
（76mL;0.6モル）を滴下し、反応混合物を再び油浴中で
激しく撹拌しながら80℃まで20時間加熱した。上澄液を
デカントし、残留物をエーテル（４×50mL）で抽出し
た。上澄液およびエーテル抽出物を合した。溶剤と過剰
の塩化トリメチルシリルと未反応のN,N−ジイソプロピ
ルアミンとを蒸留により除去した。次いで生成物を60℃
の油浴温度で減圧下に蒸留して単離することにより73g
（80％）を得た。Kp18＝36〜39℃。1H−NMR（CDCl3）:
0.08（s,9H,SiCH3）;1.04〜1.07（d,12H,N−Ｃ−CH3）,
3.2（m,2H,N−CH）。
シェル・ベリヒテ、第115巻、第3011〜3024頁（1982）
の方法にしたがった。無水エーテル（50mL）における沃
化メチル（37.6mL;0.6モル）を、無水エーテル（100m
L）における14.6g（0.6モル）のマグネシウムおよび数
個の沃素結晶の懸濁物に90分間かけて滴下した。次いで
反応物を全マグネシウムが溶解するまで30分間撹拌し
た。次いでN,N−ジイソプロピルアミン（78mL;0.55モ
ル）を10〜15分間で添加し、反応物を１時間にわたり還
流させた。０℃まで冷却した後、塩化トリメチルシリル
（76mL;0.6モル）を滴下し、反応混合物を再び油浴中で
激しく撹拌しながら80℃まで20時間加熱した。上澄液を
デカントし、残留物をエーテル（４×50mL）で抽出し
た。上澄液およびエーテル抽出物を合した。溶剤と過剰
の塩化トリメチルシリルと未反応のN,N−ジイソプロピ
ルアミンとを蒸留により除去した。次いで生成物を60℃
の油浴温度で減圧下に蒸留して単離することにより73g
（80％）を得た。Kp18＝36〜39℃。1H−NMR（CDCl3）:
0.08（s,9H,SiCH3）;1.04〜1.07（d,12H,N−Ｃ−CH3）,
3.2（m,2H,N−CH）。
b. クロル−N,N−ジイソプロピルアミノ−２−（４−
ニトロフェニル）エトキシ−ホスファン14: ｐ−ニトロフェニルエタノール（4.16g;25ミリモル）
を無水エーテル（40mL）における新たに蒸留されたPCl3
（14mL;0.16モル）の溶液に−30℃にて窒素雰囲気下に4
5分間以内で少しづつ添加した。反応混合物をr.t.にて
1.5時間撹拌し、次いで溶剤と過剰のPCl3とを０℃にて
減圧除去した。残留物をN,N−ジイソプロピル−トリメ
チルシリル−アミン（製造例5a）（4.33g;25ミリモル）
により０℃にて窒素雰囲気下に30分間処理し、次いで室
温にて20時間処理した。得られた塩化トリメチルシリル
を高減圧下にr.t.で除去してシロップ状の淡黄色生成物
（7.1g;85％）を得、これは−20℃で貯蔵すると結晶化
した。次いで、この物質を次のホスフィチル化反応に用
いた。1H−NMR（CDCl3）:8.1〜8.2（m,2H,NO2に対し
ｏ）;7.39〜7.43（m,2H,NO2に対しｍ）;4.04〜4.18（m,
2H,P−Ｏ−CH2）;3.63〜3.79（m,2H,N−CH）;3.07〜3.1
3（t,2H,P−Ｏ−Ｃ−CH2）;1.14〜1.27（2d,12H,N−Ｃ
−CH3）。31P−NMR（CDCl3）:181.60ppm。
ニトロフェニル）エトキシ−ホスファン14: ｐ−ニトロフェニルエタノール（4.16g;25ミリモル）
を無水エーテル（40mL）における新たに蒸留されたPCl3
（14mL;0.16モル）の溶液に−30℃にて窒素雰囲気下に4
5分間以内で少しづつ添加した。反応混合物をr.t.にて
1.5時間撹拌し、次いで溶剤と過剰のPCl3とを０℃にて
減圧除去した。残留物をN,N−ジイソプロピル−トリメ
チルシリル−アミン（製造例5a）（4.33g;25ミリモル）
により０℃にて窒素雰囲気下に30分間処理し、次いで室
温にて20時間処理した。得られた塩化トリメチルシリル
を高減圧下にr.t.で除去してシロップ状の淡黄色生成物
（7.1g;85％）を得、これは−20℃で貯蔵すると結晶化
した。次いで、この物質を次のホスフィチル化反応に用
いた。1H−NMR（CDCl3）:8.1〜8.2（m,2H,NO2に対し
ｏ）;7.39〜7.43（m,2H,NO2に対しｍ）;4.04〜4.18（m,
2H,P−Ｏ−CH2）;3.63〜3.79（m,2H,N−CH）;3.07〜3.1
3（t,2H,P−Ｏ−Ｃ−CH2）;1.14〜1.27（2d,12H,N−Ｃ
−CH3）。31P−NMR（CDCl3）:181.60ppm。
c. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデノシン−２′−Ｏ−［（４−ニトロフェニ
ル）エチル）−N,N−ジイソプロピルアミノ］−ホスホ
ルアミダイト15: 方法Ａ 化合物１（3.79g;5ミリモル）とジイソプロピルエチ
ルアミン（3.5mL）とを乾燥CH2Cl2（20mL）に溶解さ
せ、次いでクロル−N,N−ジイソプロピルアミノ−２−
（４−ニトロフェニル）−エトキシホスファン14（2.37
g;10ミリモル）を窒素雰囲気下で滴下した。r.t.にて２
時間にわたり撹拌した後、反応混合物をEtOAc（200mL）
で希釈し、有機相を飽和NaHCO3/NaCl溶液（３×80mL）
で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。粗
生成物をトルエン/EtOAc（7/3、v/v）に溶解させ、EtOA
c/NEt3（95/5、v/v）で平衡化されたシリカゲルカラム
（12×2cm）でクロマトグラフ処理した。生成物フラク
ションをEtOAc/NEt3（95/5、v/v）で溶出させ、回収
し、次いで蒸発乾固させて化合物15（5.28g;79％）を無
色固体フォームとして得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデノシン−２′−Ｏ−［（４−ニトロフェニ
ル）エチル）−N,N−ジイソプロピルアミノ］−ホスホ
ルアミダイト15: 方法Ａ 化合物１（3.79g;5ミリモル）とジイソプロピルエチ
ルアミン（3.5mL）とを乾燥CH2Cl2（20mL）に溶解さ
せ、次いでクロル−N,N−ジイソプロピルアミノ−２−
（４−ニトロフェニル）−エトキシホスファン14（2.37
g;10ミリモル）を窒素雰囲気下で滴下した。r.t.にて２
時間にわたり撹拌した後、反応混合物をEtOAc（200mL）
で希釈し、有機相を飽和NaHCO3/NaCl溶液（３×80mL）
で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。粗
生成物をトルエン/EtOAc（7/3、v/v）に溶解させ、EtOA
c/NEt3（95/5、v/v）で平衡化されたシリカゲルカラム
（12×2cm）でクロマトグラフ処理した。生成物フラク
ションをEtOAc/NEt3（95/5、v/v）で溶出させ、回収
し、次いで蒸発乾固させて化合物15（5.28g;79％）を無
色固体フォームとして得た。
分析： C57H68N7O9PSiの計算値（1054.3）： C 64.94、H 6.50、N 9.30 実測値:C 64.81、H 6.51、N 9.01。
UV（MeOH）：λmax（logε）277nm（4.50）;229nm（4.4
8）。31P−NMR（CDCl3）:150.27、150.01ppm。トルエン
/EtoAC（1/1、v/v）によるシリカゲルでのRf＝0.62およ
び0.68（ジアステレオマー）。
8）。31P−NMR（CDCl3）:150.27、150.01ppm。トルエン
/EtoAC（1/1、v/v）によるシリカゲルでのRf＝0.62およ
び0.68（ジアステレオマー）。
方法Ｂ 代案として、化合物15をビス−（ジイソプロピルアミ
ノ）−［２−（４−ニトロフェニル）エトキシ］−ホス
ファン27（下記）を用いて合成した。無水CH3CN（10m
L）における1.52g（２ミリモル）の化合物１の溶液にビ
ス−（ジイソプロピルアミノ）−［２−（４−ニトロフ
ェニル）エトキシ］−ホスファン27（1.59g;4ミリモ
ル）とテトラゾール（0.07g;1ミリモル）とを窒素雰囲
気下で添加し、反応混合物をr.t.にて17時間撹拌した。
この反応混合物をEtOAc（120mL）で希釈し、飽和NaHCO3
/NaCl溶液（60mL）で２回洗浄し、Na2SO4で脱水し、次
いで蒸発乾固させた。粗製の固体フォームをフラッシュ
シリカゲルカラム（20×2.5cm）に施し、トルエン/EtOA
c（1/1、v/v;250mL）でクロマトグラフ処理した。生成
物フラクション（90mL）を蒸発させて化合物15（1.9g;9
0％）を無色固体フォームとして得た。
ノ）−［２−（４−ニトロフェニル）エトキシ］−ホス
ファン27（下記）を用いて合成した。無水CH3CN（10m
L）における1.52g（２ミリモル）の化合物１の溶液にビ
ス−（ジイソプロピルアミノ）−［２−（４−ニトロフ
ェニル）エトキシ］−ホスファン27（1.59g;4ミリモ
ル）とテトラゾール（0.07g;1ミリモル）とを窒素雰囲
気下で添加し、反応混合物をr.t.にて17時間撹拌した。
この反応混合物をEtOAc（120mL）で希釈し、飽和NaHCO3
/NaCl溶液（60mL）で２回洗浄し、Na2SO4で脱水し、次
いで蒸発乾固させた。粗製の固体フォームをフラッシュ
シリカゲルカラム（20×2.5cm）に施し、トルエン/EtOA
c（1/1、v/v;250mL）でクロマトグラフ処理した。生成
物フラクション（90mL）を蒸発させて化合物15（1.9g;9
0％）を無色固体フォームとして得た。
c. ビス−（ジイソプロピルアミノ）−［２−（４−ニ
トロフェニル）エトキシ］−ホスファン27: ２−（４−ニトロフェニル）エタノール（8.35g;50ミ
リモル）を少しづつ30分間かけて無水エーテル（80mL）
における蒸留PCl3（28mL;280ミリモル）の溶液に−５℃
にて窒素雰囲気下で添加した。−５℃にて15分間および
r.t.にて1.5時間にわたり撹拌した後、溶剤と過剰のPCl
3とを高減圧下に除去した。次いで黄色シロップ状残留
物を200mLの無水エーテルに溶解させ、−10℃にてN,N−
ジイソプロピルアミン（64mL;450ミリモル）と窒素雰囲
気下で30分間かけて滴下することにより反応させた。反
応混合物を−10℃にて15分間およびr.t.にて16時間撹拌
した。N,N−ジイソプロピルアミン塩酸塩の多量の沈殿
物を窒素下で濾過し、溶剤を減圧除去した。黄色シロッ
プ状生成物（17.6g;89％）が−20℃で貯蔵すると結晶化
し、これはホスフィチル化反応に使用するのに充分な純
度であった。1H−NMR（CDCl3）:8.10〜8.13（d,2H,NO2
に対しｏ）;7.36〜7.40（d,2H,NO2に対しｍ）;3.75〜3.
82（q,2H,P−Ｏ−CH2）;3.36〜3.51（m,2H,N−CH）;3.9
5〜3.00（t,2H,P−Ｏ−Ｃ−CH2）;1.05〜1.12（2d,12H,
N−Ｃ−CH3）。31P−NMR（CDCl3）:123.53ppm。
トロフェニル）エトキシ］−ホスファン27: ２−（４−ニトロフェニル）エタノール（8.35g;50ミ
リモル）を少しづつ30分間かけて無水エーテル（80mL）
における蒸留PCl3（28mL;280ミリモル）の溶液に−５℃
にて窒素雰囲気下で添加した。−５℃にて15分間および
r.t.にて1.5時間にわたり撹拌した後、溶剤と過剰のPCl
3とを高減圧下に除去した。次いで黄色シロップ状残留
物を200mLの無水エーテルに溶解させ、−10℃にてN,N−
ジイソプロピルアミン（64mL;450ミリモル）と窒素雰囲
気下で30分間かけて滴下することにより反応させた。反
応混合物を−10℃にて15分間およびr.t.にて16時間撹拌
した。N,N−ジイソプロピルアミン塩酸塩の多量の沈殿
物を窒素下で濾過し、溶剤を減圧除去した。黄色シロッ
プ状生成物（17.6g;89％）が−20℃で貯蔵すると結晶化
し、これはホスフィチル化反応に使用するのに充分な純
度であった。1H−NMR（CDCl3）:8.10〜8.13（d,2H,NO2
に対しｏ）;7.36〜7.40（d,2H,NO2に対しｍ）;3.75〜3.
82（q,2H,P−Ｏ−CH2）;3.36〜3.51（m,2H,N−CH）;3.9
5〜3.00（t,2H,P−Ｏ−Ｃ−CH2）;1.05〜1.12（2d,12H,
N−Ｃ−CH3）。31P−NMR（CDCl3）:123.53ppm。
製造例６ a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［（OP−２−（４−ニトロフ
ェニル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ
−チオアデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′
−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノ
シンApARp ＊Ａ 21: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシリトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チ
オアデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−
ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシ
ンApASp ＊Ａ 22: トリエチルアルミニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシリトリチル）−アデノシン−２′−［２
−（４−ニトロフェニル）エチル］−ホスフェート20
（0.10g;0.1ミリモル）［チャルバラ等、リービッヒス
・アナーレン・ヘミー、第2392〜2406頁（1981）］と、
それぞれ５′−ヒドロキシ二量体PR18およびPS19（0.06
6g;0.05ミリモル）［チャルバラおよびプファイデラー
（1992）（上記）］とを乾燥ピリジン（３×5mL）と共
に蒸発させ1mLの乾燥ピリジンに溶解させ、塩化（2,4,6
−トリイソプロピル）ベンゼンスルホニル（0.062g;0.2
ミリモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.068
g;0.6ミリモル）［クロガーおよびミートヒェヘン、ツ
ァイトシュリフト・ヘミー、第９巻、第378〜379頁（19
69）；ジョーンズ等、テトラヘドロン、第36巻、第3075
〜3085頁（1980）］とを添加した。r.t.にて20時間撹拌
した後、反応混合物をCHCl3（100mL）で希釈し、H2O
（２×50mL）で洗浄し、脱水し、次いで蒸発させた。最
終的蒸発をトルエン（２×100mL）で行ってピリジンを
除去した。それぞれ粗製の三量体21および22を最初にCH
Cl3、次いでCHCl3/MeOH（100/1、v/v）を溶出剤として
用いるシリカゲルカラム クロマトグラフィー（15×2c
m）により精製した。生成物フラクションを集め、固体
フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて0.
08g（70％）の化合物21を得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［（OP−２−（４−ニトロフ
ェニル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ
−チオアデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′
−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノ
シンApARp ＊Ａ 21: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシリトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チ
オアデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−
ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシ
ンApASp ＊Ａ 22: トリエチルアルミニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシリトリチル）−アデノシン−２′−［２
−（４−ニトロフェニル）エチル］−ホスフェート20
（0.10g;0.1ミリモル）［チャルバラ等、リービッヒス
・アナーレン・ヘミー、第2392〜2406頁（1981）］と、
それぞれ５′−ヒドロキシ二量体PR18およびPS19（0.06
6g;0.05ミリモル）［チャルバラおよびプファイデラー
（1992）（上記）］とを乾燥ピリジン（３×5mL）と共
に蒸発させ1mLの乾燥ピリジンに溶解させ、塩化（2,4,6
−トリイソプロピル）ベンゼンスルホニル（0.062g;0.2
ミリモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.068
g;0.6ミリモル）［クロガーおよびミートヒェヘン、ツ
ァイトシュリフト・ヘミー、第９巻、第378〜379頁（19
69）；ジョーンズ等、テトラヘドロン、第36巻、第3075
〜3085頁（1980）］とを添加した。r.t.にて20時間撹拌
した後、反応混合物をCHCl3（100mL）で希釈し、H2O
（２×50mL）で洗浄し、脱水し、次いで蒸発させた。最
終的蒸発をトルエン（２×100mL）で行ってピリジンを
除去した。それぞれ粗製の三量体21および22を最初にCH
Cl3、次いでCHCl3/MeOH（100/1、v/v）を溶出剤として
用いるシリカゲルカラム クロマトグラフィー（15×2c
m）により精製した。生成物フラクションを集め、固体
フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて0.
08g（70％）の化合物21を得た。
分析： C111H135N17O23P2SSi4×2H2Oの計算値（2317.8）： C 57.52、H 5.95、N 10.27 実測値:C 57.15、H 6.13、N 10.72。
UV（MeOH）：λmax（logε）276nm（4.87）、227nm（4.
83）。CH2Cl2/EtOAc（1/1）によるシリカゲルでのRf＝
0.63。31P−NMR（CDCl3）:69.88および−1.0ppm。
83）。CH2Cl2/EtOAc（1/1）によるシリカゲルでのRf＝
0.63。31P−NMR（CDCl3）:69.88および−1.0ppm。
実施例２ a. アデニリル−（２′,5′）−（PR）−Ｐ−チオアデ
ニリル−（２′,5′）−アデノシンApARp ＊Ａ 23: b. アデニリル−（２′,5′）−（PS）−Ｐ−チオアデ
ニリル−（２′,5′）−アデノシンApASp ＊Ａ 24: 完全保護された三量体ApARp ＊Ａ 21およびApASp ＊Ａ
22を、対応の三量体（0.088g;0.037ミリモル）を２％
Ｐ−TsOHと共にCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v;0.8mL）中で撹
拌することにより別々に封鎖解除した。室温にて30分間
撹拌した後、反応混合物をCHCl3（50mL）で希釈し、H2O
（２×25mL）で洗浄した。有機相をNa2SO4で脱水し、次
いで蒸発乾固させた。粗生成物をシリカゲルカラム（５
×2cm）で精製し、生成物をCHCl3/MeOH（100/1、v/v）
で溶出させ、蒸発させ、次いで高減圧下に乾燥させて0.
073g（94％）の５′−ヒドロキシ三量体ApARp ＊Ａ 21
および0.061g（84％）の５′−ヒドロキシ三量体ApASp
＊Ａ 22を得た。次いで、得られた５′−ヒドロキシ三
量体（0.04g;0.02ミリモル）を10mLの0.5M DBUと共に
ピリジン中で撹拌した。24時間の後、溶液をピリジン
（10mL）中にて1M酢酸で中和し、蒸発乾固させた。残留
物を飽和メタノール性アンモニア（6mL）で処理し、r.
t.にて48時間にわたり撹拌した後、溶剤を減圧除去し、
残留物を1MのBu4NFによりTHF（5mL）中で48時間にわた
り脱シリル化した。次いで溶剤を減圧除去し、残留物を
水（10mL）に溶解させ、DEAEセファデックスＡ−25カラ
ム（60×1cm）に施した。生成物を0.14〜0.17MのTEAB緩
衝液（pH7.5）の直線濃度勾配で溶出させた。蒸発およ
び水との同時蒸発を数回行った後、三量体を４枚の紙シ
ート（35×50cm）に施し、ｉ−PrOH/濃アンモニア/H2O
（6/1/3、v/v/v）で展開させた。生成物バンドを切除
し、H2Oで溶出させ、蒸発させ、次いで凍結乾燥して354
O.D.260nm単位（79％）のApARp ＊Ａ異性体23および41
0 O.D.260nm単位（58％）のApASp ＊Ａ異性体24を得
た。両者の場合におけるUV λmaxはH2Oにて258nmであ
った。ApARp ＊Ａ 23:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/
3、v/v/v）におけるセルロース上でのRf＝0.34。1H−NM
R（D2O）:8.17;8.16;8.09（3s,3H,H−Ｃ（８））;7.90,
7.78（2s,3H,3xH−Ｃ（２））;6.04;5.96;5.80（3d,3H,
3H−Ｃ（１′））。
ニリル−（２′,5′）−アデノシンApARp ＊Ａ 23: b. アデニリル−（２′,5′）−（PS）−Ｐ−チオアデ
ニリル−（２′,5′）−アデノシンApASp ＊Ａ 24: 完全保護された三量体ApARp ＊Ａ 21およびApASp ＊Ａ
22を、対応の三量体（0.088g;0.037ミリモル）を２％
Ｐ−TsOHと共にCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v;0.8mL）中で撹
拌することにより別々に封鎖解除した。室温にて30分間
撹拌した後、反応混合物をCHCl3（50mL）で希釈し、H2O
（２×25mL）で洗浄した。有機相をNa2SO4で脱水し、次
いで蒸発乾固させた。粗生成物をシリカゲルカラム（５
×2cm）で精製し、生成物をCHCl3/MeOH（100/1、v/v）
で溶出させ、蒸発させ、次いで高減圧下に乾燥させて0.
073g（94％）の５′−ヒドロキシ三量体ApARp ＊Ａ 21
および0.061g（84％）の５′−ヒドロキシ三量体ApASp
＊Ａ 22を得た。次いで、得られた５′−ヒドロキシ三
量体（0.04g;0.02ミリモル）を10mLの0.5M DBUと共に
ピリジン中で撹拌した。24時間の後、溶液をピリジン
（10mL）中にて1M酢酸で中和し、蒸発乾固させた。残留
物を飽和メタノール性アンモニア（6mL）で処理し、r.
t.にて48時間にわたり撹拌した後、溶剤を減圧除去し、
残留物を1MのBu4NFによりTHF（5mL）中で48時間にわた
り脱シリル化した。次いで溶剤を減圧除去し、残留物を
水（10mL）に溶解させ、DEAEセファデックスＡ−25カラ
ム（60×1cm）に施した。生成物を0.14〜0.17MのTEAB緩
衝液（pH7.5）の直線濃度勾配で溶出させた。蒸発およ
び水との同時蒸発を数回行った後、三量体を４枚の紙シ
ート（35×50cm）に施し、ｉ−PrOH/濃アンモニア/H2O
（6/1/3、v/v/v）で展開させた。生成物バンドを切除
し、H2Oで溶出させ、蒸発させ、次いで凍結乾燥して354
O.D.260nm単位（79％）のApARp ＊Ａ異性体23および41
0 O.D.260nm単位（58％）のApASp ＊Ａ異性体24を得
た。両者の場合におけるUV λmaxはH2Oにて258nmであ
った。ApARp ＊Ａ 23:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/
3、v/v/v）におけるセルロース上でのRf＝0.34。1H−NM
R（D2O）:8.17;8.16;8.09（3s,3H,H−Ｃ（８））;7.90,
7.78（2s,3H,3xH−Ｃ（２））;6.04;5.96;5.80（3d,3H,
3H−Ｃ（１′））。
逆相HPLCにおける保持時間は5.98minであった。ApASp
＊Ａ 24:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）に
おけるセルロース上でのRf＝0.33。1H−NMR（D2O）:8.1
7;8.07;8.04（3s,3H,3xH−Ｃ（８））;8.01;7.92;7.72
（3s,3H,23xH−Ｃ（２））;6.04;5.92;5.82（3d,3H,3xH
−Ｃ（１′））。
＊Ａ 24:i−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）に
おけるセルロース上でのRf＝0.33。1H−NMR（D2O）:8.1
7;8.07;8.04（3s,3H,3xH−Ｃ（８））;8.01;7.92;7.72
（3s,3H,23xH−Ｃ（２））;6.04;5.92;5.82（3d,3H,3xH
−Ｃ（１′））。
逆相HPLCにおける保持時間は7.23minであった。
製造例７および８は、対応する二量体28から完全分割
四量体ApARp ＊ApA 38およびApASp ＊ApA 39につき製造
を開始した（方式１）。反応方式を製造例９および10に
て三量体部分の付加と共に持続した（方式２）。
四量体ApARp ＊ApA 38およびApASp ＊ApA 39につき製造
を開始した（方式１）。反応方式を製造例９および10に
て三量体部分の付加と共に持続した（方式２）。
製造例７ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏー［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−５′−（モノメトキシトリチル）−アデ
ニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシンApA
（Rp,Sp） ＊Ａ 28: ホスホルアミダイト15（1.41g;1.34ミリモル）と６−
Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル）−アデノシン５（0.36g;0.93ミリモ
ル）とテトラゾール（0.188g;2.68ミリモル）とを室温
にて無水CH3CN（9mL）中で窒素雰囲気下に撹拌した。４
時間の後、I2の溶液［CH2Cl2/H2O/ピリジン（1/1/3、v/
v/v）における0.5g］を褐色が消失しなくなるまで滴下
した。混合物をさらに15分間撹拌し、次いでCH2Cl2（３
×60mL）および飽和Na2S2O3/NaCl溶液（２×60mL）で抽
出した。H2Cl2相を集め、Na2SO4で脱水し、蒸発させ、
次いでトルエン（２×20mL）と共に蒸発させてピリジン
を除去した。粗製の二量体（1.85g）をCH2Cl2に溶解さ
せ、フラッシュシリカゲルカラム（12×2.5cm）に施
し、CH2Cl2/1％MeOH（400mL）と２％MeOH（200mL）と３
％MeOH（200mL）とを用いてクロマトグラフ処理して生
成物（600mL）を溶出させた。このフラクションを蒸発
乾固させて1.45g（定量的収率）の二量体28を無色非晶
質固体として得た。単離された二量体28の同定は、分光
光度法比較により真正物質と対比して証明した。真正物
質はホスホトリエステル法によって合成した。
チルシリル］−５′−（モノメトキシトリチル）−アデ
ニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシンApA
（Rp,Sp） ＊Ａ 28: ホスホルアミダイト15（1.41g;1.34ミリモル）と６−
Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル）−アデノシン５（0.36g;0.93ミリモ
ル）とテトラゾール（0.188g;2.68ミリモル）とを室温
にて無水CH3CN（9mL）中で窒素雰囲気下に撹拌した。４
時間の後、I2の溶液［CH2Cl2/H2O/ピリジン（1/1/3、v/
v/v）における0.5g］を褐色が消失しなくなるまで滴下
した。混合物をさらに15分間撹拌し、次いでCH2Cl2（３
×60mL）および飽和Na2S2O3/NaCl溶液（２×60mL）で抽
出した。H2Cl2相を集め、Na2SO4で脱水し、蒸発させ、
次いでトルエン（２×20mL）と共に蒸発させてピリジン
を除去した。粗製の二量体（1.85g）をCH2Cl2に溶解さ
せ、フラッシュシリカゲルカラム（12×2.5cm）に施
し、CH2Cl2/1％MeOH（400mL）と２％MeOH（200mL）と３
％MeOH（200mL）とを用いてクロマトグラフ処理して生
成物（600mL）を溶出させた。このフラクションを蒸発
乾固させて1.45g（定量的収率）の二量体28を無色非晶
質固体として得た。単離された二量体28の同定は、分光
光度法比較により真正物質と対比して証明した。真正物
質はホスホトリエステル法によって合成した。
分析： ApA 28＝C80H98N11O15PSi3の計算値（1569.0）： C 61.24、H 6.30、N 9.82 実測値:C 61.24、H 6.24、N 9.65。
UV（MeOH）：λmax（logε）277nm（4.69）；［260（4.
54）］；［231（4.66）］。CHCl3/MeOH（49/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.37。
54）］；［231（4.66）］。CHCl3/MeOH（49/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.37。
製造例８ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−（ｔ−ブチル）ジメチ
ルシリル−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロ
フェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−
２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン−５′−OH−Ａ（Rp,Sp） ＊Ａ 29: 粗製の二量体混合物28（2.24g;1.43ミリモル）を２％
ｐ−TsOHと共にCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v、20mL）中で室
温にて30分間撹拌した。反応混合物をCH2Cl2（200mL）
で希釈し、H2O（２×80mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水
し、次いで蒸発乾固させた。無色非晶質の残留物（2.0
g）をフラッシュシリカゲルカラム（21×2.5cm）に施
し、CH2Cl2（200mL）とCH2Cl2/2％MeOH（400mL）とでク
ロマトグラフ処理し、生成物をCH2Cl2/2％MeOH（500m
L）で溶出させた。生成物フラクションを蒸発させ、高
減圧下で乾燥させて1.2（２工程にわたり化合物５に対
し計算して75％）の５′−OH二量体29を非晶質固体とし
て得た。この単離された二量体29の真正物質と比較した
同定はクロマトグラフおよび分光光度法によって行っ
た。
ルシリル−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロ
フェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−
２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン−５′−OH−Ａ（Rp,Sp） ＊Ａ 29: 粗製の二量体混合物28（2.24g;1.43ミリモル）を２％
ｐ−TsOHと共にCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v、20mL）中で室
温にて30分間撹拌した。反応混合物をCH2Cl2（200mL）
で希釈し、H2O（２×80mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水
し、次いで蒸発乾固させた。無色非晶質の残留物（2.0
g）をフラッシュシリカゲルカラム（21×2.5cm）に施
し、CH2Cl2（200mL）とCH2Cl2/2％MeOH（400mL）とでク
ロマトグラフ処理し、生成物をCH2Cl2/2％MeOH（500m
L）で溶出させた。生成物フラクションを蒸発させ、高
減圧下で乾燥させて1.2（２工程にわたり化合物５に対
し計算して75％）の５′−OH二量体29を非晶質固体とし
て得た。この単離された二量体29の真正物質と比較した
同定はクロマトグラフおよび分光光度法によって行っ
た。
分析： ５′−OH−ApA 29＝C60H82N11O14PSi3の計算値（1296.
6）： C 55.58、H 6.37、N 11.88 実測値:C 55.33、H 6.38、N 11.78 UV（MeOH）：λmax（logε）278（4.68）；［259（4.5
1）］;233（4.46）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:4:1）
におけるシリカゲル上でのRf＝0.53。31P＝NMR（CDC
l3）：−3.36および−0.73ppm。
6）： C 55.58、H 6.37、N 11.88 実測値:C 55.33、H 6.38、N 11.78 UV（MeOH）：λmax（logε）278（4.68）；［259（4.5
1）］;233（4.46）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:4:1）
におけるシリカゲル上でのRf＝0.53。31P＝NMR（CDC
l3）：−3.36および−0.73ppm。
製造例９ a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−
ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシ
ン ARp ＊ApA 30: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−
ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシ
ン ASp ＊ApA 31: ホスホルアミダイト15（0.59g;0.56ミリモル）と５′
−ヒドロキシApA二量体29（0.52g;0.40ミリモル）とテ
トラゾール（0.079g;1.12ミリモル）とを乾燥CH3CN（4m
L）に溶解させ、r.t.にて窒素雰囲気下で撹拌した。３
時間の後、ホスホルアミダイト15（0.464g;0.44ミリモ
ル）とテトラゾール（0.062g;0.88ミリモル）とを再び
添加し、混合物をさらに３時間撹拌した。次いでS8（0.
257g;1ミリモル）およびピリジン（2.6mL）での酸化を
r.t.にて16時間以内に行った。この反応混合物をCH2Cl2
（200mL）で室温にて希釈した。反応混合物をCH2Cl2（2
00mL）で希釈し、飽和NaCl溶液（２×80mL）で洗浄し、
Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最終的な同時
蒸発をトルエン（３×20mL）で行ってピリジンを除去し
た。粗製ジアステレオアイソマー混合物Ａ（Rp,Sp）＊A
pA 30＋31をCH2Cl2（20mL）に溶解させ、フラッシュシ
リカゲルカラム（11×2.5cm）に施し、CH2Cl2（400mL）
とCH2Cl2/0.5％MeOH（200mL）と１％MeOH（200mL）とで
クロマトグラフ処理し、生成物をCH2Cl2/1.5％MeOH（20
0mL）で溶出させた。生成物フラクションを蒸発乾固さ
せて0.713g（78％）の異性体混合物30＋31を得た。純ジ
アステレオマーへの分離は、トルエン/EtOAc（1/1、v/
v、４回の展開）にて調製用シリカゲル プレート（40
×20×0.2cm、８枚のプレート）に施して行った。異性
体生成物バンドを別々にCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v）で溶
出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ、これを高減
圧下で乾燥させて0.311g（34％）の完全保護されたARp
＊ApA異性体30および0.245g（27％）の完全保護されたA
Sp ＊ApA異性体31を得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−
ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシ
ン ARp ＊ApA 30: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−
ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシ
ン ASp ＊ApA 31: ホスホルアミダイト15（0.59g;0.56ミリモル）と５′
−ヒドロキシApA二量体29（0.52g;0.40ミリモル）とテ
トラゾール（0.079g;1.12ミリモル）とを乾燥CH3CN（4m
L）に溶解させ、r.t.にて窒素雰囲気下で撹拌した。３
時間の後、ホスホルアミダイト15（0.464g;0.44ミリモ
ル）とテトラゾール（0.062g;0.88ミリモル）とを再び
添加し、混合物をさらに３時間撹拌した。次いでS8（0.
257g;1ミリモル）およびピリジン（2.6mL）での酸化を
r.t.にて16時間以内に行った。この反応混合物をCH2Cl2
（200mL）で室温にて希釈した。反応混合物をCH2Cl2（2
00mL）で希釈し、飽和NaCl溶液（２×80mL）で洗浄し、
Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最終的な同時
蒸発をトルエン（３×20mL）で行ってピリジンを除去し
た。粗製ジアステレオアイソマー混合物Ａ（Rp,Sp）＊A
pA 30＋31をCH2Cl2（20mL）に溶解させ、フラッシュシ
リカゲルカラム（11×2.5cm）に施し、CH2Cl2（400mL）
とCH2Cl2/0.5％MeOH（200mL）と１％MeOH（200mL）とで
クロマトグラフ処理し、生成物をCH2Cl2/1.5％MeOH（20
0mL）で溶出させた。生成物フラクションを蒸発乾固さ
せて0.713g（78％）の異性体混合物30＋31を得た。純ジ
アステレオマーへの分離は、トルエン/EtOAc（1/1、v/
v、４回の展開）にて調製用シリカゲル プレート（40
×20×0.2cm、８枚のプレート）に施して行った。異性
体生成物バンドを別々にCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v）で溶
出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ、これを高減
圧下で乾燥させて0.311g（34％）の完全保護されたARp
＊ApA異性体30および0.245g（27％）の完全保護されたA
Sp ＊ApA異性体31を得た。
分析： ARp ＊ApA 30＝C111H135N17O23P2SSi4×H2Oの計算値（2
299.8）： C 57.97、H 6.00、N 10.35 実測値:C 57.63、H 6.11、N 10.39 UV（MeOH）：λmax（logε）278（4.87）；［260（4.7
2）］；［231（4.75）］。トルエン/EtOAc/MeOH（1/1、
v/v、２回の展開）およびトルエン/EtOAc/MeOH（1/2、v
/v、１回の展開）によるシリカゲル上でのRf＝0.37。
299.8）： C 57.97、H 6.00、N 10.35 実測値:C 57.63、H 6.11、N 10.39 UV（MeOH）：λmax（logε）278（4.87）；［260（4.7
2）］；［231（4.75）］。トルエン/EtOAc/MeOH（1/1、
v/v、２回の展開）およびトルエン/EtOAc/MeOH（1/2、v
/v、１回の展開）によるシリカゲル上でのRf＝0.37。
分析： ASp ＊ApA 31＝C111H135N17O23P2SSi4×2H2Oの計算値
（2317.8）： C 57.52、H 6.05、N 10.27 実測値:C 57.44、H 6.19、N 10.41 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.86）：［260（4.7
2）］；［231（4.75）］。トルエン/EtOAc/MeOH（1/1、
２回の展開）およびトルエン/EtOAc/MeOH（1:2、v/v、
１回の展開）によるシリカゲル上でのRf＝0.27。
（2317.8）： C 57.52、H 6.05、N 10.27 実測値:C 57.44、H 6.19、N 10.41 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.86）：［260（4.7
2）］；［231（4.75）］。トルエン/EtOAc/MeOH（1/1、
２回の展開）およびトルエン/EtOAc/MeOH（1:2、v/v、
１回の展開）によるシリカゲル上でのRf＝0.27。
製造例10 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニ
トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−
２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン ５′−ヒドロキシ ARp ＊ApA32: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニ
トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−
２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン ５′−ヒドロキシ ASp ＊ApA33: それぞれ対応の完全保護された三量体30および31を、
三量体（ARp ＊ApA 30:0.263g、0.115ミリモル;ASp ＊Ap
A 31:0.21g、0.92ミリモル）を２％ｐ−TsOHと共にCH2
Cl2/MeOH（4/1、v/v、30につき3.2mL;31につき:2.6mL）
中で室温にて75分間にわたり撹拌することにより別々に
脱トリチル化した。反応混合物をCH2Cl2（120mL）で希
釈し、H2O（２×40mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次
いで蒸発乾固させた。粗生成物をトルエン/EtOAc（3/
7、v/v）における調製用シリカゲル プレート（40×20
×0.2cm）で精製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ
て0.2g（86％）の５′−ヒドロキシ ARp ＊ApA 32およ
び0.121g（66％）の５′−ヒドロキシ ASp ＊ApA 33を
それぞれ得た。
ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニ
トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−
２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン ５′−ヒドロキシ ARp ＊ApA32: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ
チルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニ
トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−
２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン ５′−ヒドロキシ ASp ＊ApA33: それぞれ対応の完全保護された三量体30および31を、
三量体（ARp ＊ApA 30:0.263g、0.115ミリモル;ASp ＊Ap
A 31:0.21g、0.92ミリモル）を２％ｐ−TsOHと共にCH2
Cl2/MeOH（4/1、v/v、30につき3.2mL;31につき:2.6mL）
中で室温にて75分間にわたり撹拌することにより別々に
脱トリチル化した。反応混合物をCH2Cl2（120mL）で希
釈し、H2O（２×40mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次
いで蒸発乾固させた。粗生成物をトルエン/EtOAc（3/
7、v/v）における調製用シリカゲル プレート（40×20
×0.2cm）で精製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ
て0.2g（86％）の５′−ヒドロキシ ARp ＊ApA 32およ
び0.121g（66％）の５′−ヒドロキシ ASp ＊ApA 33を
それぞれ得た。
分析： ５′−OH−ARp ＊ApA 32＝C91H119N17O22SSI4の計算値
（2009.4）： C 54.39、H 5.97、N 11.85 実測値:C 54.12、H 6.13、N 11.74 UV（MeOH）：λmax（logε）278（4.86）；［260（4.7
1）］；［233（4.64）］。トルエン/EtOAc（3:7、２回
の展開）におけるシリカゲル上でのRf＝0.35（ジアステ
レオマー）。31P−NMR:69.60、68.91、−0.36および−
0.56ppm（ジアステレオマー）。
（2009.4）： C 54.39、H 5.97、N 11.85 実測値:C 54.12、H 6.13、N 11.74 UV（MeOH）：λmax（logε）278（4.86）；［260（4.7
1）］；［233（4.64）］。トルエン/EtOAc（3:7、２回
の展開）におけるシリカゲル上でのRf＝0.35（ジアステ
レオマー）。31P−NMR:69.60、68.91、−0.36および−
0.56ppm（ジアステレオマー）。
分析： ５′−OH−ASp ＊ApA 33＝C91H119N17O22P2SSi4の計算
値（2009.4）： C 54.39、H 5.97、N 11.85 実測値:C 54.29、H 6.23、N 11.51 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.85）；［260（4.7
1）］；［233（4.63）］。トルエン/EtOAc（3:7、２回
の展開）におけるシリカゲル上でのRf＝0.42（ジアステ
レオマー）。31P−NMR:69.28、68.09、−0.33および−
0.56ppm（ジアステレオマー）。
値（2009.4）： C 54.39、H 5.97、N 11.85 実測値:C 54.29、H 6.23、N 11.51 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.85）；［260（4.7
1）］；［233（4.63）］。トルエン/EtOAc（3:7、２回
の展開）におけるシリカゲル上でのRf＝0.42（ジアステ
レオマー）。31P−NMR:69.28、68.09、−0.33および−
0.56ppm（ジアステレオマー）。
方式３は、完全分割された四量体ApARp ＊ApA 38およ
びApASp ＊ApA 39を保護中間体34および35から製造する
ための反応方式である。これら化合物の製造を製造例11
および12並びに実施例３に要約する。
びApASp ＊ApA 39を保護中間体34および35から製造する
ための反応方式である。これら化合物の製造を製造例11
および12並びに実施例３に要約する。
製造例11 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チ
オアデニリル−２′−［OP−（２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル−アデノシン ApARp ＊ApA
34: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チ
オアデニリル−２′−［OP−（２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル−アデノシン ApASp ＊ApA
35: それぞれ完全保護された四量体34および35の縮合を、
トリエチルアンモニウム−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−
Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシトリチル）アデノシン−２′−［２−
（４−ニトロフェニル）エチル］−ホスフェート20（0.
108g、0.1ミリモル）および５′−ヒドロキシPR三量体3
2もしくはPS三量体33（0.1g、0.05ミリモル）をそれぞ
れ乾燥ピリジン（３×2mL）と一緒に蒸発させて別々に
実現し、乾燥ピリジン（0.5mL）に溶解させ、次いで塩
化（2,4,6−トリイソプロピル）ベンゼンスルホニル
（0.061g、0.02ミリモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリ
アゾール（0.068g、0.6ミリモル）とを添加した。溶液
をr.t.にて21時間撹拌し、次いでCH2Cl2（２×20mL）お
よびH2O（３×20mL）で抽出した。有機相を集め、Na2SO
4で脱水し、蒸発させ、次いでトルエン（３×20mL）と
一緒に蒸発させてピリジンを除去した。粗製の四量体34
および35をそれぞれトルエン/EtOAc/MeOH（5/4/0.5、v/
v/v）による調製用シリカゲル プレート（40×20×0.2
cm）で別々に精製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発さ
せ、これを高減圧下で乾燥させて0.116g（78％）のApA
Rp ＊ApA 34および0.12g（81％）のApASp ＊ApA 35を得
た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チ
オアデニリル−２′−［OP−（２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル−アデノシン ApARp ＊ApA
34: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チ
オアデニリル−２′−［OP−（２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル−アデノシン ApASp ＊ApA
35: それぞれ完全保護された四量体34および35の縮合を、
トリエチルアンモニウム−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−
Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシトリチル）アデノシン−２′−［２−
（４−ニトロフェニル）エチル］−ホスフェート20（0.
108g、0.1ミリモル）および５′−ヒドロキシPR三量体3
2もしくはPS三量体33（0.1g、0.05ミリモル）をそれぞ
れ乾燥ピリジン（３×2mL）と一緒に蒸発させて別々に
実現し、乾燥ピリジン（0.5mL）に溶解させ、次いで塩
化（2,4,6−トリイソプロピル）ベンゼンスルホニル
（0.061g、0.02ミリモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリ
アゾール（0.068g、0.6ミリモル）とを添加した。溶液
をr.t.にて21時間撹拌し、次いでCH2Cl2（２×20mL）お
よびH2O（３×20mL）で抽出した。有機相を集め、Na2SO
4で脱水し、蒸発させ、次いでトルエン（３×20mL）と
一緒に蒸発させてピリジンを除去した。粗製の四量体34
および35をそれぞれトルエン/EtOAc/MeOH（5/4/0.5、v/
v/v）による調製用シリカゲル プレート（40×20×0.2
cm）で別々に精製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発さ
せ、これを高減圧下で乾燥させて0.116g（78％）のApA
Rp ＊ApA 34および0.12g（81％）のApASp ＊ApA 35を得
た。
分析： ApARp ＊ApA 34＝C142H172N23O32P3SSi5×2H2Oの計算値
（3014.5）： C 56.58、H 5.89、N 10.69 実測値:C 56.22、H 6.07、N 10.57 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.99）；［260（4.8
5）］；［231（4.85）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:4:
0.5）におけるシリカゲル上でのRf＝0.63（ジアステレ
オマー）。
（3014.5）： C 56.58、H 5.89、N 10.69 実測値:C 56.22、H 6.07、N 10.57 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.99）；［260（4.8
5）］；［231（4.85）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:4:
0.5）におけるシリカゲル上でのRf＝0.63（ジアステレ
オマー）。
分析： ApASp ＊ApA 35＝C142H172N23O32P3SSi5×H2Oの計算値
（2996.5）： C 56.92、H 5.85、N 10.75 実測値:C 56.40、H 5.89、N 10.61 UV（MeOH）：λmax（logε）277（5.01）；［260（4.8
8）］；［232（4.89）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
0.5、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.62（ジア
ステレオマー）。
（2996.5）： C 56.92、H 5.85、N 10.75 実測値:C 56.40、H 5.89、N 10.61 UV（MeOH）：λmax（logε）277（5.01）；［260（4.8
8）］；［232（4.89）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
0.5、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.62（ジア
ステレオマー）。
製造例12 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−
（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−（４−
ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル
−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデ
ニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′
−OH−ApARp ＊ApA 36: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−
（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−（４−
ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル
−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデ
ニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′
−OH−ApASp ＊ApA 37: それぞれ完全保護された四量体（0.105g、0.035ミリ
モル）34および35をCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v、1.2mL）中
で室温にて１時間にわたり２％ｐ−TsOHで処理して別々
に脱トリチル化した。反応混合物をCH2Cl2（３×40mL）
で抽出し、H2O（３×30mL）で洗浄した。有機相を集
め、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。得られた
残留物をトルエン/EtOAc/MeOH（5/4/0.5、v/v/v）にお
ける調製用シリカゲル プレート（20×20×0.2cm）に
て精製した。生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/1）で溶出
させ、次いで固体フォームまで蒸発させ、これを高減圧
下で乾燥させて0.064（67％）の５′−ヒドロキシ ApA
Rp ＊ApA 36および0.057g（60％）の対応のPS四量体37
を得た。
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−
（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−（４−
ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル
−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデ
ニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′
−OH−ApARp ＊ApA 36: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−
（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−（４−
ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル
−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデ
ニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチ
ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′
−OH−ApASp ＊ApA 37: それぞれ完全保護された四量体（0.105g、0.035ミリ
モル）34および35をCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v、1.2mL）中
で室温にて１時間にわたり２％ｐ−TsOHで処理して別々
に脱トリチル化した。反応混合物をCH2Cl2（３×40mL）
で抽出し、H2O（３×30mL）で洗浄した。有機相を集
め、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。得られた
残留物をトルエン/EtOAc/MeOH（5/4/0.5、v/v/v）にお
ける調製用シリカゲル プレート（20×20×0.2cm）に
て精製した。生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/1）で溶出
させ、次いで固体フォームまで蒸発させ、これを高減圧
下で乾燥させて0.064（67％）の５′−ヒドロキシ ApA
Rp ＊ApA 36および0.057g（60％）の対応のPS四量体37
を得た。
分析： ５′−OH−ApARp ＊ApA 36＝C122H156N23O31P3SSi5×H2
Oの計算値（2724.1）： C 53.79、H 5.85、N 11.83 実測値:C 53.62、H 5.87、N 11.51 UV（MeOH）：λmax（logε）277（5.00）；［260（4.8
7）］；［92.35（4.81）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:
4:0.5）におけるシリカゲル上でのRf＝0.41。
Oの計算値（2724.1）： C 53.79、H 5.85、N 11.83 実測値:C 53.62、H 5.87、N 11.51 UV（MeOH）：λmax（logε）277（5.00）；［260（4.8
7）］；［92.35（4.81）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:
4:0.5）におけるシリカゲル上でのRf＝0.41。
分析： ５′−OH−ApASp ＊ApA 37＝C122H156N23O31P3SSi5×H2
Oの計算値（2724.1）： C 53.69、H 5.85、N 11.83 実測値:C 53.58、H 5.97、N 11.32 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.96）；［260（4.8
2）］；［234（4.74）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
0.5、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.39。
Oの計算値（2724.1）： C 53.69、H 5.85、N 11.83 実測値:C 53.58、H 5.97、N 11.32 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.96）；［260（4.8
2）］；［234（4.74）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
0.5、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.39。
実施例３ a. アデニリル（２′,5′）−（PR）−Ｐ−チオアデニ
リル−（２′,5′）−アデニリル−２（２′,5′）−ア
デノシン ApARp ＊ApA 38: b. アデニリル（２′,5′）−（PS）−Ｐ−チオアデニ
リル−（２′,5′）−アデニリル−２−（２′,5′）−
アデノシン ApASp ＊ApA 39: それぞれ対応の５′−ヒドロキシ四量体36および37
を、各５′−ヒドロキシ四量体（0.056g;0.021ミリモ
ル）を0.5MのDBUと共に無水CH3CN（2.5mL）中でr.t.に
て撹拌することにより別々に封鎖解除し、22時間の後に
溶液を無水CH3CN（1.25mL）中で1M AcOHにより中和
し、次いで蒸発乾固させた。次いで残留混合物をメタノ
ール性アンモニアで処理し、r.t.にて60時間にわたり撹
拌した後に溶剤を減圧除去し、最後に残留物を1MのBu4N
FによりTHF（5mL）中で３日間にわたり脱シリル化し
た。溶剤を次いで除去し、残留物をH2O（10mL）に溶解
し、DEAEセファデックスカラムＡ−25（30×2cm）に施
し、最初にH2O（200mL）、次いで０〜0.04MのTEAB緩衝
液（pH7.5）の直線濃度勾配（3000mL以内、流速2mL/mi
n）にてクロマトグラフ処理した。この条件下でApARp ＊
ApA 四量体38を0.23〜0.28MのTEAD緩衝液で溶出させる
と共にApASp ＊ApA 四量体39を0.245〜0.305MのTEAB緩
衝液でそれぞれ溶出させた。生成物フラクションを集
め、蒸発させ、次いでMeOHと一緒に数回蒸発させた。さ
らに精製するため、ペーパー クロマトグラフィーをｉ
−PrOH/アンモニア/H2O（55/10/35、v/v/v）の系により
行った。生成物バンドを切除し、H2Oで溶出させ、小容
量まで濃縮し、最後に凍結乾燥して728 O.D.260nm単位
（73％）のApARp ＊ApA 異性体38および686 O.D.260nm
単位（69％）のApASp ＊ApA 異性体39をそれぞれ得た。
ApARp ＊ApA 38:i−PrOH/アンモニア/H2O（55:10:35）
におけるセルロース上でのRf＝0.36。UV（H2O）：λmax
257nm。1H−NMR（D2O）:8.15、8.07、8.06、7.93、（4
s、4H、4xH−Ｃ（８））;7.92（ｓ、2H、2xH−Ｃ
（２））;6.03、5.89、5.86、5.79（4d、4xH−Ｃ
（１′））。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2PO4（pH7.2
4。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）；勾配:0〜1min、80％Ａ、2
0％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:9.55min。ApA
Sp ＊ApA 39:i−PrOH/アンモニア/H2O（55/10/35、v/v/
v）におけるセルロース上でのRf＝0.40。UV（H2O）：λ
max257nm。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2PO4（pH7.2
4）。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1min、80％
Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:10.37mi
n。
リル−（２′,5′）−アデニリル−２（２′,5′）−ア
デノシン ApARp ＊ApA 38: b. アデニリル（２′,5′）−（PS）−Ｐ−チオアデニ
リル−（２′,5′）−アデニリル−２−（２′,5′）−
アデノシン ApASp ＊ApA 39: それぞれ対応の５′−ヒドロキシ四量体36および37
を、各５′−ヒドロキシ四量体（0.056g;0.021ミリモ
ル）を0.5MのDBUと共に無水CH3CN（2.5mL）中でr.t.に
て撹拌することにより別々に封鎖解除し、22時間の後に
溶液を無水CH3CN（1.25mL）中で1M AcOHにより中和
し、次いで蒸発乾固させた。次いで残留混合物をメタノ
ール性アンモニアで処理し、r.t.にて60時間にわたり撹
拌した後に溶剤を減圧除去し、最後に残留物を1MのBu4N
FによりTHF（5mL）中で３日間にわたり脱シリル化し
た。溶剤を次いで除去し、残留物をH2O（10mL）に溶解
し、DEAEセファデックスカラムＡ−25（30×2cm）に施
し、最初にH2O（200mL）、次いで０〜0.04MのTEAB緩衝
液（pH7.5）の直線濃度勾配（3000mL以内、流速2mL/mi
n）にてクロマトグラフ処理した。この条件下でApARp ＊
ApA 四量体38を0.23〜0.28MのTEAD緩衝液で溶出させる
と共にApASp ＊ApA 四量体39を0.245〜0.305MのTEAB緩
衝液でそれぞれ溶出させた。生成物フラクションを集
め、蒸発させ、次いでMeOHと一緒に数回蒸発させた。さ
らに精製するため、ペーパー クロマトグラフィーをｉ
−PrOH/アンモニア/H2O（55/10/35、v/v/v）の系により
行った。生成物バンドを切除し、H2Oで溶出させ、小容
量まで濃縮し、最後に凍結乾燥して728 O.D.260nm単位
（73％）のApARp ＊ApA 異性体38および686 O.D.260nm
単位（69％）のApASp ＊ApA 異性体39をそれぞれ得た。
ApARp ＊ApA 38:i−PrOH/アンモニア/H2O（55:10:35）
におけるセルロース上でのRf＝0.36。UV（H2O）：λmax
257nm。1H−NMR（D2O）:8.15、8.07、8.06、7.93、（4
s、4H、4xH−Ｃ（８））;7.92（ｓ、2H、2xH−Ｃ
（２））;6.03、5.89、5.86、5.79（4d、4xH−Ｃ
（１′））。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2PO4（pH7.2
4。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）；勾配:0〜1min、80％Ａ、2
0％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:9.55min。ApA
Sp ＊ApA 39:i−PrOH/アンモニア/H2O（55/10/35、v/v/
v）におけるセルロース上でのRf＝0.40。UV（H2O）：λ
max257nm。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2PO4（pH7.2
4）。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1min、80％
Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:10.37mi
n。
方式４は、残余の四量体をその中間体ARp ＊Ap ジエ
ステル45およびASp ＊ApA ジエステル46（所定位置に封
鎖基を有する）から作成するための反応方式の開始部で
ある。ジエステルの製造を製造例13および14に要約す
る。
ステル45およびASp ＊ApA ジエステル46（所定位置に封
鎖基を有する）から作成するための反応方式の開始部で
ある。ジエステルの製造を製造例13および14に要約す
る。
製造例13 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−（モノメトキシリトリチル）
−アデニリル−２′−［（OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′
−［2,5−ジクロルフェニル−２−（４−ニトロフェニ
ル）−エチルホスフェート］ApAp 三量体41および41a: ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジ
メチルシリル］−アデノシン−２′−［2,5−ジクロル
フェニル−２−（４−ニトロフェニル）−エチル−ホス
フェート］５′−OH−Ap−トリエステル 40（0.43g、
0.5ミリモル）とホスホルアミダイト 15（0.735g、0.7
ミリモル）とを無水CH3CN（5mL）中にテトラゾール（0.
098g、1.5ミリモル）の存在下で窒素雰囲気下に溶解さ
せた。r.t.にて3.5時間にわたり撹拌した後、ホスホル
アミダイト（0.2g、0.19ミリモル）とテトラゾール（0.
026g、0.37ミリモル）とを再び添加し、反応混合物をさ
らに30分間撹拌した。I2の溶液［CH2Cl2/H2O/ピリジン
（1/1/3、v/v/vにおける0.5g）を褐色が消失しなくなる
まで滴下した。混合物をさらに10分間撹拌し、CH2Cl
2（20mL）で希釈し、飽和Na2S2O3 NaCl溶液（２×80m
L）で洗浄した。有機相を集め、Na2SO4で脱水し、蒸発
させ、次いでトルエン（３×30mL）と一緒に蒸発させて
ピリジンを除去した。粗生成物をトルエン/EtOAc（1/
1、v/v）とEtOAcとEtOAc/2〜４％MeOHとを溶出剤として
用いるフラッシュシリカゲル クロマトグラフィー（15
×2cm）により精製した。生成物フラクションを固体フ
ォームまで蒸発させ、これを30℃で高減圧下に乾燥させ
て0.610g（67％）のApAp−トリエステル41および41aを
得た。真正物質での単離化合物の同定を分光光度法比較
により行った。真正物質はAp−ジエステル20［チャルバ
ラ等（1981）］と５′−ヒドロキシ Ｐ−トリエステル
40とからホスホトリエステル法により合成した。
ジメチルシリル］−５′−（モノメトキシリトリチル）
−アデニリル−２′−［（OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′
−［2,5−ジクロルフェニル−２−（４−ニトロフェニ
ル）−エチルホスフェート］ApAp 三量体41および41a: ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジ
メチルシリル］−アデノシン−２′−［2,5−ジクロル
フェニル−２−（４−ニトロフェニル）−エチル−ホス
フェート］５′−OH−Ap−トリエステル 40（0.43g、
0.5ミリモル）とホスホルアミダイト 15（0.735g、0.7
ミリモル）とを無水CH3CN（5mL）中にテトラゾール（0.
098g、1.5ミリモル）の存在下で窒素雰囲気下に溶解さ
せた。r.t.にて3.5時間にわたり撹拌した後、ホスホル
アミダイト（0.2g、0.19ミリモル）とテトラゾール（0.
026g、0.37ミリモル）とを再び添加し、反応混合物をさ
らに30分間撹拌した。I2の溶液［CH2Cl2/H2O/ピリジン
（1/1/3、v/v/vにおける0.5g）を褐色が消失しなくなる
まで滴下した。混合物をさらに10分間撹拌し、CH2Cl
2（20mL）で希釈し、飽和Na2S2O3 NaCl溶液（２×80m
L）で洗浄した。有機相を集め、Na2SO4で脱水し、蒸発
させ、次いでトルエン（３×30mL）と一緒に蒸発させて
ピリジンを除去した。粗生成物をトルエン/EtOAc（1/
1、v/v）とEtOAcとEtOAc/2〜４％MeOHとを溶出剤として
用いるフラッシュシリカゲル クロマトグラフィー（15
×2cm）により精製した。生成物フラクションを固体フ
ォームまで蒸発させ、これを30℃で高減圧下に乾燥させ
て0.610g（67％）のApAp−トリエステル41および41aを
得た。真正物質での単離化合物の同定を分光光度法比較
により行った。真正物質はAp−ジエステル20［チャルバ
ラ等（1981）］と５′−ヒドロキシ Ｐ−トリエステル
40とからホスホトリエステル法により合成した。
分析： ApAp−トリエステル＝C88H94N12O20Cl2P2SSi2の計算値
（1828.8）： C 57.80、H 5.18、N 9.9 実測値:C 57.77、H 5.20、N 9.02 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.75）；［260（4.6
2）］；［228（4.72）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
1、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.78。
（1828.8）： C 57.80、H 5.18、N 9.9 実測値:C 57.77、H 5.20、N 9.02 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.75）；［260（4.6
2）］；［228（4.72）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
1、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.78。
b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−（モノメトキシトリチル）−
（PR,PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン−２′−［2,5−ジクロルフェニル−２−
（４−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］Ａ（
Rp,Sp）＊Ap−トリエステル 43＋44 ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジ
メチルシリル］−アデノシン−２′−［2,5−ジクロル
フェニル−２−（４−ニトロフェニル）−エチルホスフ
ェート］５′−OH−Ap−トリエステル40（0.52g、0.6ミ
リモル）とホスホルアミダイト15（0.95g、0.9ミリモ
ル）とを無水CH3CN（6.5mL）中にテトラゾール（0.126
g、1.8ミリモル）の存在下で窒素雰囲気下に溶解させ
た。r.t.にて３時間撹拌した後、S8（0.39g、1.51ミリ
モル）と無水ピリジン（3.9mL）とを添加し、反応混合
物をさらに20時間撹拌し、次いでCH2Cl2（２×80mL）お
よびH2O（２×80mL）で抽出した。有機相を集め、Na2SO
4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最終的な同時蒸発
をトルエン（４×20mL）で行ってピリジンを除去した。
粗製ジアステレオマー混合物Ａ（Rp,Sp）＊Ap−トリエ
ステル43＋44を、200mLのCH2Cl2とCH2Cl2/1％MeOHと２
％MeOHと最後に200mLのCH2Cl2/1％MeOHと２％MeOHと最
後にCH2Cl2/3％MeOHとを溶出剤として用いるフラッシュ
シリカゲルカラム クロマトグラフィー（14×2.5cm）
により精製した。生成物フラクション（150mL）を固体
フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて0.
975g（88％）の化合物43および44をジアステレオマー混
合物として得た。
ジメチルシリル］−５′−（モノメトキシトリチル）−
（PR,PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデノシン−２′−［2,5−ジクロルフェニル−２−
（４−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］Ａ（
Rp,Sp）＊Ap−トリエステル 43＋44 ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジ
メチルシリル］−アデノシン−２′−［2,5−ジクロル
フェニル−２−（４−ニトロフェニル）−エチルホスフ
ェート］５′−OH−Ap−トリエステル40（0.52g、0.6ミ
リモル）とホスホルアミダイト15（0.95g、0.9ミリモ
ル）とを無水CH3CN（6.5mL）中にテトラゾール（0.126
g、1.8ミリモル）の存在下で窒素雰囲気下に溶解させ
た。r.t.にて３時間撹拌した後、S8（0.39g、1.51ミリ
モル）と無水ピリジン（3.9mL）とを添加し、反応混合
物をさらに20時間撹拌し、次いでCH2Cl2（２×80mL）お
よびH2O（２×80mL）で抽出した。有機相を集め、Na2SO
4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最終的な同時蒸発
をトルエン（４×20mL）で行ってピリジンを除去した。
粗製ジアステレオマー混合物Ａ（Rp,Sp）＊Ap−トリエ
ステル43＋44を、200mLのCH2Cl2とCH2Cl2/1％MeOHと２
％MeOHと最後に200mLのCH2Cl2/1％MeOHと２％MeOHと最
後にCH2Cl2/3％MeOHとを溶出剤として用いるフラッシュ
シリカゲルカラム クロマトグラフィー（14×2.5cm）
により精製した。生成物フラクション（150mL）を固体
フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて0.
975g（88％）の化合物43および44をジアステレオマー混
合物として得た。
分析： Ａ（Rp,Sp）＊Ap−トリエステル 43＋44＝C88H94N12O
19Cl2P2SSi2の計算値（1844.9）： C 57.29、H 5.14、N 9.11 実測値:C 56.96、H 5.16、N 9.09 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.75）；［228（4.7
2）］。トルエン/EtOAc/CHCl3（1/1/1、v/v/v）におけ
るシリカゲル上でのRf＝0.21。31P−NMR（CDCl3）69.8
7、69.25、−6.89、−7.22および−7.31ppm。
19Cl2P2SSi2の計算値（1844.9）： C 57.29、H 5.14、N 9.11 実測値:C 56.96、H 5.16、N 9.09 UV（MeOH）：λmax（logε）277（4.75）；［228（4.7
2）］。トルエン/EtOAc/CHCl3（1/1/1、v/v/v）におけ
るシリカゲル上でのRf＝0.21。31P−NMR（CDCl3）69.8
7、69.25、−6.89、−7.22および−7.31ppm。
製造例14 a. トリエチルアンモニウム−Ｎ−６−ベンゾイル−
３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−５′−
（モノメトキシトリチル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリ
ル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−Ｎ−６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２−（４
−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ARp ＊Apジ
エステル45: b. トリエチルアンモニウム−Ｎ−６−ベンゾイル−
３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−
（モノメトキシトリチル）−（PS）−Ｐ−チオアデニリ
ル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−Ｎ−６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２−（４
−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ASp ＊Apジ
エステル46: 15mLのH2O/ジオキサン/Et3（1:1:1）における0.558g
（3.36ミリモル）の４−ニトロベンズアルデヒド オキ
シムの溶液を室温にて30分間撹拌した。次いで0.62g
（0.336ミリモル）のＡ（Rp,Sp）＊Ap−トリエステル43
＋44のジアステレオマー混合物を添加し、r.t.にて2.5
時間撹拌した。混合物を蒸発させ、次いでピリジン（３
×15mL）、トルエン（３×15mL）および最後にCH2Cl
2（３×15mL）と一緒に蒸発させた。残留物を少量のCHC
l3に溶解させ、CHCl3（150mL）とCHCl3/2％MeOH（200m
L）と４％MeOH（100mL）と６％MeOH（200mL）とCHCl3/6
％MeOH/0.5％Et3N（300mL）とCHCl3/6％MeOH/2％Et3N
（250mL）とを用いるフラッシュシリカゲルカラム（15
×2.5cm）でクロマトグラフ処理した。生成物フラクシ
ョン（600mL）を固体フォームまで蒸発させ、これを高
減圧下で乾燥させて0.55g（91％）の異性体混合物45＋4
6を得た。純ジアステレオマーへの分離は調製用シリカ
ゲル プレート（７枚のプレート、40×20×0.2cm）お
よびCHCl3/MeOH（9/1、v/v）における３回の展開でクロ
マトグラフィーにより行った。生成物バンドを１％Et3N
を含有するCHCl3/MeOH（4/1、v/v）で溶出させ、次いで
固体フォームまで蒸発させて0.262g（43％）のARp ＊Ap
−ジエステル45と0.144g（24％）のASp ＊Ap−ジエステ
ル46と0.045g（７％）のＡ（Rp,Sp）＊Ap−ジエステル4
5＋46とを得た。
３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル）−５′−
（モノメトキシトリチル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリ
ル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−Ｎ−６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２−（４
−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ARp ＊Apジ
エステル45: b. トリエチルアンモニウム−Ｎ−６−ベンゾイル−
３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−
（モノメトキシトリチル）−（PS）−Ｐ−チオアデニリ
ル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−Ｎ−６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２−（４
−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ASp ＊Apジ
エステル46: 15mLのH2O/ジオキサン/Et3（1:1:1）における0.558g
（3.36ミリモル）の４−ニトロベンズアルデヒド オキ
シムの溶液を室温にて30分間撹拌した。次いで0.62g
（0.336ミリモル）のＡ（Rp,Sp）＊Ap−トリエステル43
＋44のジアステレオマー混合物を添加し、r.t.にて2.5
時間撹拌した。混合物を蒸発させ、次いでピリジン（３
×15mL）、トルエン（３×15mL）および最後にCH2Cl
2（３×15mL）と一緒に蒸発させた。残留物を少量のCHC
l3に溶解させ、CHCl3（150mL）とCHCl3/2％MeOH（200m
L）と４％MeOH（100mL）と６％MeOH（200mL）とCHCl3/6
％MeOH/0.5％Et3N（300mL）とCHCl3/6％MeOH/2％Et3N
（250mL）とを用いるフラッシュシリカゲルカラム（15
×2.5cm）でクロマトグラフ処理した。生成物フラクシ
ョン（600mL）を固体フォームまで蒸発させ、これを高
減圧下で乾燥させて0.55g（91％）の異性体混合物45＋4
6を得た。純ジアステレオマーへの分離は調製用シリカ
ゲル プレート（７枚のプレート、40×20×0.2cm）お
よびCHCl3/MeOH（9/1、v/v）における３回の展開でクロ
マトグラフィーにより行った。生成物バンドを１％Et3N
を含有するCHCl3/MeOH（4/1、v/v）で溶出させ、次いで
固体フォームまで蒸発させて0.262g（43％）のARp ＊Ap
−ジエステル45と0.144g（24％）のASp ＊Ap−ジエステ
ル46と0.045g（７％）のＡ（Rp,Sp）＊Ap−ジエステル4
5＋46とを得た。
分析： ARp ＊Ap−ジエステル45＝C88H107N13O19P2SSi2×2H2Oの
計算値（1837.1）： C 57.53、H 6.09、N 9.91 実測値:C 57.30、H 6.70、N 9.75 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（4.69）；［260（4.5
6）］；［231（4.61）］。CHCl3/MeOH（9/1、v/v）にお
けるシリカゲル上でのRf＝0.37。31P−NMR（CDCl3）:6
9.66および−0.09ppm。分析： ASp ＊Ap−ジエステル46＝C88H107N13O19P2SSi2×2H2Oの
計算値（1837.1）： C 57.53、H 6.09、N 9.91 実測値:C 56.44、H 7.15、N 8.61 UV（MeOH）：λmax（logε）;276（4.60）；［260（4.4
9）］；［232（4.52）］。CHCl3/MeOH（9/1、v/v）にお
けるシリカゲル上でのRf＝0.28。31P−NMR（CDCl3）:6
8.96および−0.06ppm。
計算値（1837.1）： C 57.53、H 6.09、N 9.91 実測値:C 57.30、H 6.70、N 9.75 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（4.69）；［260（4.5
6）］；［231（4.61）］。CHCl3/MeOH（9/1、v/v）にお
けるシリカゲル上でのRf＝0.37。31P−NMR（CDCl3）:6
9.66および−0.09ppm。分析： ASp ＊Ap−ジエステル46＝C88H107N13O19P2SSi2×2H2Oの
計算値（1837.1）： C 57.53、H 6.09、N 9.91 実測値:C 56.44、H 7.15、N 8.61 UV（MeOH）：λmax（logε）;276（4.60）；［260（4.4
9）］；［232（4.52）］。CHCl3/MeOH（9/1、v/v）にお
けるシリカゲル上でのRf＝0.28。31P−NMR（CDCl3）:6
8.96および−0.06ppm。
方式５は、残余の完全分割された四量体ApApARp ＊Ａ
51、ApApASp ＊Ａ 52、ARp ＊ApApA 57およびASp ＊Ap
ApA 58をその各保護中間体47、48、53および54から製
造するための反応方式である。対応する製造を製造例1
5、16および17、並びに実施例４および５に要約する。
51、ApApASp ＊Ａ 52、ARp ＊ApApA 57およびASp ＊Ap
ApA 58をその各保護中間体47、48、53および54から製
造するための反応方式である。対応する製造を製造例1
5、16および17、並びに実施例４および５に要約する。
製造例15 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシンApAp
ARp ＊Ａ 47: トリエチルアンモニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［OP−
２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−
ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリ
ル］−アデノシン−２′−［２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−ホスフェート42（0.14g;0.078ミリモル）
と５′−ヒドロキシPR二量体18（0.08g;0.06モル）と乾
燥ピリジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリ
ジン（0.6mL）に溶解させ、次いで塩化（2,4,6−トリイ
ソプロピル）−ベンゼンスルホニル（0.047mg、0.156ミ
リモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.053m
g、0.47ミリモル）とを添加した。溶液をr.t.にて22時
間撹拌し、CH2Cl2（２×30mL）で抽出し、H2O（２×20m
L）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させ
た。ピリジンをトルエン（３×20mL）との同時蒸発によ
り除去した。粗製の四量体47をフラッシュシリカゲルカ
ラム クロマトグラフィー（15×1cm）により精製し、
最初にCH2Cl2（50mL）、次いでCH2Cl2/1％MeOH（100m
L）、２％MeOH（50mL）および最後にCH2Cl2/3％MeOH（1
00mL）で溶出させた。生成物フラクション（80mL）を蒸
発乾固させて0.11g（62％）の完全保護された四量体ApA
pARp ＊Ａ 47を35℃での高減圧下における乾燥の後に無
色フォームとして得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシンApAp
ARp ＊Ａ 47: トリエチルアンモニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［OP−
２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−
ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリ
ル］−アデノシン−２′−［２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−ホスフェート42（0.14g;0.078ミリモル）
と５′−ヒドロキシPR二量体18（0.08g;0.06モル）と乾
燥ピリジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリ
ジン（0.6mL）に溶解させ、次いで塩化（2,4,6−トリイ
ソプロピル）−ベンゼンスルホニル（0.047mg、0.156ミ
リモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.053m
g、0.47ミリモル）とを添加した。溶液をr.t.にて22時
間撹拌し、CH2Cl2（２×30mL）で抽出し、H2O（２×20m
L）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させ
た。ピリジンをトルエン（３×20mL）との同時蒸発によ
り除去した。粗製の四量体47をフラッシュシリカゲルカ
ラム クロマトグラフィー（15×1cm）により精製し、
最初にCH2Cl2（50mL）、次いでCH2Cl2/1％MeOH（100m
L）、２％MeOH（50mL）および最後にCH2Cl2/3％MeOH（1
00mL）で溶出させた。生成物フラクション（80mL）を蒸
発乾固させて0.11g（62％）の完全保護された四量体ApA
pARp ＊Ａ 47を35℃での高減圧下における乾燥の後に無
色フォームとして得た。
分析： C142H172N23O32P3SSi5×H2Oの計算値（2996.5）： C 56.92、H 5.85、N 10.75 実測値:C 56.51、H 5.91、N 10.37 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（4.99）；［259（4.8
4）］；［233（4.85）］。CHCl3/MeOH（19/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.46。
4）］；［233（4.85）］。CHCl3/MeOH（19/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.46。
b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）−エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシンApAp
ASp ＊Ａ 48: ApAp−ジエステル41（0.14g;0.078ミリモル）と５′
−ヒドロキシPS二量体19（0.08g;0.06ミリモル）とを乾
燥ピリジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリ
ジン（0.6mL）に溶解し、次いで塩化（2,4,6−トリイソ
プロピル）−ベンゼンスルホニル（0.47mg、0.156ミリ
モル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.053mg、
0.46ミリモル）とを添加した。r.t.にて4.5時間撹拌し
た後、塩化（2,4,6−トリイソプロピル）−ベンゼンス
ルホニル（0.024g、0.078ミリモル）と３−ニトロ−1,
2,4−トリアゾール（0.027g、0.234ミリモル）とを再び
添加した。溶液をr.t.にて16.5時間にわたり撹拌し、次
いで、CH2Cl2（４×20mL）で抽出し、H2O（３×20mL）
を添加し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発させた。最終的
な同時蒸発をトルエン（４×15mL）で行ってピリジンを
除去した。粗製の四量体48をフラッシュシリカゲルカラ
ム クロマトグラフィー（15×1cm）で精製し、四量体4
7と同様にCH2Cl2およびCH2Cl2/1〜３％MeOHで溶出して
0.107g（60％）の完全保護された四量体ApApASp ＊Ａ 4
8を35℃での高減圧下における乾燥の後に無色フォーム
として得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェ
ニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ
−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）−エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−
２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシンApAp
ASp ＊Ａ 48: ApAp−ジエステル41（0.14g;0.078ミリモル）と５′
−ヒドロキシPS二量体19（0.08g;0.06ミリモル）とを乾
燥ピリジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリ
ジン（0.6mL）に溶解し、次いで塩化（2,4,6−トリイソ
プロピル）−ベンゼンスルホニル（0.47mg、0.156ミリ
モル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.053mg、
0.46ミリモル）とを添加した。r.t.にて4.5時間撹拌し
た後、塩化（2,4,6−トリイソプロピル）−ベンゼンス
ルホニル（0.024g、0.078ミリモル）と３−ニトロ−1,
2,4−トリアゾール（0.027g、0.234ミリモル）とを再び
添加した。溶液をr.t.にて16.5時間にわたり撹拌し、次
いで、CH2Cl2（４×20mL）で抽出し、H2O（３×20mL）
を添加し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発させた。最終的
な同時蒸発をトルエン（４×15mL）で行ってピリジンを
除去した。粗製の四量体48をフラッシュシリカゲルカラ
ム クロマトグラフィー（15×1cm）で精製し、四量体4
7と同様にCH2Cl2およびCH2Cl2/1〜３％MeOHで溶出して
0.107g（60％）の完全保護された四量体ApApASp ＊Ａ 4
8を35℃での高減圧下における乾燥の後に無色フォーム
として得た。
分析： C142H172N23O32P3SSi5×H2Oの計算値（2996.5）： C 56.92、H 5.85、N 10.75 実測値:C 56.51、H 5.91、N 10.85 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（4.99）；［259（4.8
5）］；（231（4.86）］。CHCl3/MeOH（19/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.46。
5）］；（231（4.86）］。CHCl3/MeOH（19/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.46。
製造例16 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア
デニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エ
チル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チオアデニ
リル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル
−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシン
５′−OH−ApApARp ＊Ａ 49: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア
デニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エ
チル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チオアデニ
リル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル
−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシン
５′−OH−ApApASp ＊Ａ 50: 完全保護された四量体ApApARp ＊Ａ 47（0.104g、0.0
35ミリモル）を２％ｐ−TsOHと共にCH2Cl2/MeOH（4/1、
v/v、1.4mL）中でr.t.にて撹拌した。1.5時間の後、反
応混合物をCH2Cl2（３×40mL）およびH2O（２×40mL）
で抽出した。有機相を合してNa2SO4で脱水し、次いで蒸
発乾固させた。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム
（11×1cm）で精製し、生成物を20mLのCH2Cl2および50m
LのCH2Cl2/1〜５％MeOHで溶出させた。生成物フラクシ
ョン（100mL）を蒸発させ、高減圧下で乾燥させて0.075
g（80％）のヒドロキシ四量体ApApARp ＊Ａ 49を得た。
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア
デニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エ
チル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル］−（PR）−Ｐ−チオアデニ
リル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル
−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシン
５′−OH−ApApARp ＊Ａ 49: b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［OP−２−（４
−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイ
ル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア
デニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エ
チル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ
−ブチル）ジメチルシリル］−（PS）−Ｐ−チオアデニ
リル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル
−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシン
５′−OH−ApApASp ＊Ａ 50: 完全保護された四量体ApApARp ＊Ａ 47（0.104g、0.0
35ミリモル）を２％ｐ−TsOHと共にCH2Cl2/MeOH（4/1、
v/v、1.4mL）中でr.t.にて撹拌した。1.5時間の後、反
応混合物をCH2Cl2（３×40mL）およびH2O（２×40mL）
で抽出した。有機相を合してNa2SO4で脱水し、次いで蒸
発乾固させた。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム
（11×1cm）で精製し、生成物を20mLのCH2Cl2および50m
LのCH2Cl2/1〜５％MeOHで溶出させた。生成物フラクシ
ョン（100mL）を蒸発させ、高減圧下で乾燥させて0.075
g（80％）のヒドロキシ四量体ApApARp ＊Ａ 49を得た。
分析： C122H156N23O31P3SSi5×H2Oの計算値（2706.5）： C 54.15、H 5.81、N 11.90 実測値:C 53.97、H 6.02、N 11.65 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（5.00）；［260（4.8
5）］；［234（4.77）］。CHCl3/MeOH（19/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.43。
5）］；［234（4.77）］。CHCl3/MeOH（19/1、v/v）に
おけるシリカゲル上でのRf＝0.43。
完全保護された四量体ApApASp ＊Ａ 48を精製工程に
より同様に処理した。粗生成物50を２枚の調製用シリカ
ゲル プレート（20×20×0.2cm）でCHCl3/MeOH（19/
1、v/v）にて精製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、固体フォームまで蒸発させて0.06
8g（72％）の５′−ヒドロキシ四量体 ApApASp ＊Ａ 5
0を得た。
より同様に処理した。粗生成物50を２枚の調製用シリカ
ゲル プレート（20×20×0.2cm）でCHCl3/MeOH（19/
1、v/v）にて精製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、固体フォームまで蒸発させて0.06
8g（72％）の５′−ヒドロキシ四量体 ApApASp ＊Ａ 5
0を得た。
実施例４ a. アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,
5′）−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−
アデノシン ApApARp ＊Ａ 51: b. アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,
5′）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−
アデノシン ApApASp ＊Ａ 52: それぞれ対応の５′−ヒドロキシ四量体49および50を
別々に、５′−ヒドロキシ四量体（0.067g;0.025ミリモ
ル）を0.5MのDBUと無水CH3CN（3mL）中で室温にて20時
間撹拌することにより封鎖解除し、溶液を無水CH3CN
（1.5mL）中で1M AcOHにより中和し、次いで蒸発乾固
させた。［EtOAc/i−PrOH/アンモニア/H2O、7/1/2、v/v
/v）、7/3、v/vによるシリカゲル上でのRf:ApApARp ＊Ａ
＝0.58;ApApASp ＊Ａ＝0.66］。次いで残留物をメタノー
ル性アンモニア（10mL）で処理し、３日間の反応時間の
後、溶剤を減圧除去した。［EtOAc/i−PrOH/アンモニア
/H2O、7/1/2、v/v/v）、1/1、v/vによるシリカゲル上で
のRf:ApApARp ＊Ａ＝0.38;ApApASp ＊Ａ＝0.36］。脱シリ
ル化をTHF（5mL）中で1MのBu4NFにて行った。反応混合
物を室温にて48時間撹拌し、次いで溶剤を減圧蒸発させ
た。残留物をH2O（10mL）に溶解させ、DEAEセファデッ
クスＡ−25カラム（30×2cm）に施した。2mL/minの流速
にて純四量体ApApARp ＊Ａを0.15〜0.20MのTEAB緩衝液
（pH7.5）により溶出させ、四量体ApApASp ＊Ａの場合に
は0.24〜0.32MのTEAB緩衝液（pH7.5）で溶出させた。蒸
発およびMeOHとの数回の同時蒸発の後、四量体を８枚の
紙シート（25×50cm）に施し、ｉ−PrOH/アンモニア/H2
O（6/1/3、v/v/v）にて展開させた。生成物バンドを切
除し、H2Oで溶出させ、小容量まで濃縮し、最後に凍結
乾燥して675 O.D.260nm単位（57％）のApApARp ＊Ａ異
性体51と753 O.D.260nm単位（65％）のApApASp ＊Ａ異
性体52とを得た。ApApARp ＊Ａ 51:i−PrOH/アンモニア
/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセルロース上でのRf＝0.
33。UV（H2O）：λmax258nm。HPLC:PR−18、A:50mM NH
4H2PO4、pH7.2。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1mi
n、80％Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:
9.70min。ApApASp ＊Ａ 52:i−PrOH/アンモニア/H2O（6
/1/3、v/v/v）におけるセルロース上でのRf＝0.21。UV
（H2O）：λmax258nm。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2P
O4、pH7.2。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1min、8
0％Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:13.4
9min。
5′）−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−
アデノシン ApApARp ＊Ａ 51: b. アデニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,
5′）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−
アデノシン ApApASp ＊Ａ 52: それぞれ対応の５′−ヒドロキシ四量体49および50を
別々に、５′−ヒドロキシ四量体（0.067g;0.025ミリモ
ル）を0.5MのDBUと無水CH3CN（3mL）中で室温にて20時
間撹拌することにより封鎖解除し、溶液を無水CH3CN
（1.5mL）中で1M AcOHにより中和し、次いで蒸発乾固
させた。［EtOAc/i−PrOH/アンモニア/H2O、7/1/2、v/v
/v）、7/3、v/vによるシリカゲル上でのRf:ApApARp ＊Ａ
＝0.58;ApApASp ＊Ａ＝0.66］。次いで残留物をメタノー
ル性アンモニア（10mL）で処理し、３日間の反応時間の
後、溶剤を減圧除去した。［EtOAc/i−PrOH/アンモニア
/H2O、7/1/2、v/v/v）、1/1、v/vによるシリカゲル上で
のRf:ApApARp ＊Ａ＝0.38;ApApASp ＊Ａ＝0.36］。脱シリ
ル化をTHF（5mL）中で1MのBu4NFにて行った。反応混合
物を室温にて48時間撹拌し、次いで溶剤を減圧蒸発させ
た。残留物をH2O（10mL）に溶解させ、DEAEセファデッ
クスＡ−25カラム（30×2cm）に施した。2mL/minの流速
にて純四量体ApApARp ＊Ａを0.15〜0.20MのTEAB緩衝液
（pH7.5）により溶出させ、四量体ApApASp ＊Ａの場合に
は0.24〜0.32MのTEAB緩衝液（pH7.5）で溶出させた。蒸
発およびMeOHとの数回の同時蒸発の後、四量体を８枚の
紙シート（25×50cm）に施し、ｉ−PrOH/アンモニア/H2
O（6/1/3、v/v/v）にて展開させた。生成物バンドを切
除し、H2Oで溶出させ、小容量まで濃縮し、最後に凍結
乾燥して675 O.D.260nm単位（57％）のApApARp ＊Ａ異
性体51と753 O.D.260nm単位（65％）のApApASp ＊Ａ異
性体52とを得た。ApApARp ＊Ａ 51:i−PrOH/アンモニア
/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセルロース上でのRf＝0.
33。UV（H2O）：λmax258nm。HPLC:PR−18、A:50mM NH
4H2PO4、pH7.2。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1mi
n、80％Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:
9.70min。ApApASp ＊Ａ 52:i−PrOH/アンモニア/H2O（6
/1/3、v/v/v）におけるセルロース上でのRf＝0.21。UV
（H2O）：λmax258nm。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2P
O4、pH7.2。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1min、8
0％Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:13.4
9min。
製造例17 a. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）−ジメチルシリル］−アデノシン ARp ＊ApApA 5
3: トリエチルアンモニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシトリチル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリ
ル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−ホスフェート］ARp ＊A
p−ジエステル45（0.141g、0.078ミリモル）と５′−ヒ
ドロキシ二量体29（0.078g、0.06ミリモル）とを乾燥ピ
リジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、最後に乾燥ピ
リジン（0.6mL）に溶解させた。次いで塩化（2,4,6−ト
リイソプロピル）−ベンゼンスルホニル（0.047mg、0.1
56ミリモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.0
53mg、0.47ミリモル）とを添加し、r.t.にて21時間撹拌
した。反応混合物をCH2Cl2（60mL）で希釈し、H2O（２
×30mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固さ
せた。ピリジンをトルエン（３×20mL）との同時蒸発に
より除去した。粗製の四量体53をフラッシュシリカゲル
カラム クロマトグラフィー（11×1cm）により精製
し、最初にCH2Cl2（50mL）、次いでCH2Cl2/1％MeOH（10
0mL）、２％MeOH（200mL）、３％MeOH（50mL）および最
後にCH2Cl2/5％MeOH（50mL）により溶出させた。生成物
フラクション（200mL）を蒸発乾固させた。残留物を再
びトルエン/EtOAc/MeOH（5/4/0.5、v/v/v）における２
枚の調製用シリカゲル プレート（20×20×0.2cm）で
クロマトグラフ処理して少量の５′−ヒドロキシ二量体
を除去した。四量体の生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ
て0.053g（30％）の四量体ARp ＊ApApA 53を35℃におけ
る高減圧下での乾燥の後に得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）−ジメチルシリル］−アデノシン ARp ＊ApApA 5
3: トリエチルアンモニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′
−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ−
（モノメトキシトリチル）−（PR）−Ｐ−チオアデニリ
ル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−
５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−ホスフェート］ARp ＊A
p−ジエステル45（0.141g、0.078ミリモル）と５′−ヒ
ドロキシ二量体29（0.078g、0.06ミリモル）とを乾燥ピ
リジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、最後に乾燥ピ
リジン（0.6mL）に溶解させた。次いで塩化（2,4,6−ト
リイソプロピル）−ベンゼンスルホニル（0.047mg、0.1
56ミリモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.0
53mg、0.47ミリモル）とを添加し、r.t.にて21時間撹拌
した。反応混合物をCH2Cl2（60mL）で希釈し、H2O（２
×30mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固さ
せた。ピリジンをトルエン（３×20mL）との同時蒸発に
より除去した。粗製の四量体53をフラッシュシリカゲル
カラム クロマトグラフィー（11×1cm）により精製
し、最初にCH2Cl2（50mL）、次いでCH2Cl2/1％MeOH（10
0mL）、２％MeOH（200mL）、３％MeOH（50mL）および最
後にCH2Cl2/5％MeOH（50mL）により溶出させた。生成物
フラクション（200mL）を蒸発乾固させた。残留物を再
びトルエン/EtOAc/MeOH（5/4/0.5、v/v/v）における２
枚の調製用シリカゲル プレート（20×20×0.2cm）で
クロマトグラフ処理して少量の５′−ヒドロキシ二量体
を除去した。四量体の生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/
1、v/v）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ
て0.053g（30％）の四量体ARp ＊ApApA 53を35℃におけ
る高減圧下での乾燥の後に得た。
分析： C142H172N23O32P3SSi5×3H2Oの計算値（3032.5）： C 56.24、H 5.92、N 10.62 実測値:C 55.75、H 5.71、N 9.83 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（4.96）；［260（4.8
2）］；［232（4.82）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:4:
1）におけるシリカゲル上でのRf＝0.78。
2）］；［232（4.82）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5:4:
1）におけるシリカゲル上でのRf＝0.78。
b. ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）−ジメチルシリル］−アデノシン ASp ＊ApApA 5
4: ASp ＊Ap−ジエステル46（0.141g、0.078ミリモル）と
５′−ヒドロキシ二量体29（0.078g、0.06ミリモル）と
を乾燥ピリジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、乾燥
ピリジン（0.6mL）に溶解させた。塩化（2,4,6−トリイ
ソプロピル）−ベンゼンスルホニル（0.047mg、0.156ミ
リモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.053m
g、0.47ミリモル）とを添加し、混合物を室温にて撹拌
した。21時間の後、塩化（2,4,6−トリイソプロピル）
−ベンゼンスルホニル（0.024mg、0.079ミリモル）と３
−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.027mg、0.24ミリモ
ル）とを再び添加した。混合物をさらに数時間撹拌し、
次いでCH2Cl2（60mL）で希釈し、H2O（２×30mL）で洗
浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。さらに
仕上処理を四量体53につき説明したと同様に行って43mg
（24％）のASp ＊ApApA 54を固体フォームとして得た。
ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチ
ル）−（PS）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［OP−２−
（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン
ゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］
−アデニリル−２′−［OP−２−（４−ニトロフェニ
ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−
［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′
−［OP−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−
６−Ｎ−ベンゾイル−２′,3′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチ
ル）−ジメチルシリル］−アデノシン ASp ＊ApApA 5
4: ASp ＊Ap−ジエステル46（0.141g、0.078ミリモル）と
５′−ヒドロキシ二量体29（0.078g、0.06ミリモル）と
を乾燥ピリジン（４×0.5mL）と一緒に蒸発させ、乾燥
ピリジン（0.6mL）に溶解させた。塩化（2,4,6−トリイ
ソプロピル）−ベンゼンスルホニル（0.047mg、0.156ミ
リモル）と３−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.053m
g、0.47ミリモル）とを添加し、混合物を室温にて撹拌
した。21時間の後、塩化（2,4,6−トリイソプロピル）
−ベンゼンスルホニル（0.024mg、0.079ミリモル）と３
−ニトロ−1,2,4−トリアゾール（0.027mg、0.24ミリモ
ル）とを再び添加した。混合物をさらに数時間撹拌し、
次いでCH2Cl2（60mL）で希釈し、H2O（２×30mL）で洗
浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾固させた。さらに
仕上処理を四量体53につき説明したと同様に行って43mg
（24％）のASp ＊ApApA 54を固体フォームとして得た。
分析： C142H172N23O32P3SSi5×H2Oの計算値（2996.5）： C 56.92、H 5.85、N 10.75 実測値:C 56.63、H 6.08、N 10.18 UV（MeOH）：λmax（logε）;277（4.98）；［260（4.8
4）］；［232（4.85）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
1、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.78。
4）］；［232（4.85）］。トルエン/EtOAc/MeOH（5/4/
1、v/v/v）におけるシリカゲル上でのRf＝0.78。
実施例５ a. （PR）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−アデ
ニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,5′）−ア
デノシン ARp ＊ApApA 57: b. （PS）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−アデ
ニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,5′）−ア
デノシン ASp ＊ApApA 58: 対応の完全保護された四量体53および54を、２％ｐ−
TsOHにおける0.047g（0.016ミリモル）のPR四量体53（P
S四量体54:0.032g;0.012ミリモル）の溶液をCH2Cl2/MeO
H（4/1/、v/v;PRについては0.5mL;PSについては0.38m
L）中で室温にて１時間撹拌することにより封鎖解除し
た。この反応混合物をCH2Cl2（60mL）で希釈し、H2O
（２×30mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾
固させた。粗生成物をCHCl3/MeOH（19/1、v/v）におけ
る調製用シリカゲル プレート（20×20×0.2cm）で精
製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v）で溶出
させ、次いで固体フォームまで蒸発させて0.034g（80
％）の５′−ヒドロキシ ARp ＊ApApA異性体55および0.
02g（68％）の５′−ヒドロキシ ASp ＊ApApA異性体56
を得た。それぞれ５′−ヒドロキシ四量体55（0.034g、
0.013ミリモル）および56（0.02g、0.007ミリモル）の
溶液を別々に0.5MのDBUと共に無水CH3CN［（55:1.5mL;5
6:0.9mL）］と共にr.t.にて18時間にわたり撹拌し、次
いで1M AcOH［（55:0.75mL;56:0.54mL）］の添加によ
り中和し、次いで蒸発させた。残留物を10mLの飽和メタ
ノール性アンモニアで処理し、室温にて60時間にわたり
撹拌した後の溶液を蒸発乾固させた。脱シリル化を1Mの
Bu4NFによりTHF（2.5mL）中で処理して行った。室温に
て60時間撹拌した後、溶剤を減圧除去した。或る程度の
H2O（10mL）を得られた残留物に添加し、DEAEセファデ
ックスカラムＡ−25（32×2cm）に施し、０〜0.5MのTEA
B緩衝液（pH7.5）で溶出させた。主たるピークのフラク
ションを集め、蒸発させ、次いでMeOHと一緒に数回蒸発
させた。ペーパー クロマトグラフィー（ｉ−PrOH/ア
ンモニア/H2O、55/10/35、v/v/v）による精製は凍結乾
燥の後に347 O.D.260nm単位（58％）のARp ＊ApApA 57
および111 O.D.260nm単位（31％）のASp ＊ApApA 58を
それぞれ与えた。ARp ＊ApApA 57:UV（H2O）＝257nm。
ｉ−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセ
ルロース上でのRf＝0.21。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2
PO4（pH7.2）。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1mi
n、80％Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％；保持時間:
7.47min。ASp ＊ApApA 58:UV（H2O）＝257nm。ｉ−PrOH
/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセルロース
上でのRf＝0.32。HPLC:PR−18、A:50mMNH4H2PO4、pH7.
2。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1min、80％Ａ、2
0％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:9.84min。
ニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,5′）−ア
デノシン ARp ＊ApApA 57: b. （PS）−Ｐ−チオアデニリル−（２′,5′）−アデ
ニリル−（２′,5′）−アデニリル−（２′,5′）−ア
デノシン ASp ＊ApApA 58: 対応の完全保護された四量体53および54を、２％ｐ−
TsOHにおける0.047g（0.016ミリモル）のPR四量体53（P
S四量体54:0.032g;0.012ミリモル）の溶液をCH2Cl2/MeO
H（4/1/、v/v;PRについては0.5mL;PSについては0.38m
L）中で室温にて１時間撹拌することにより封鎖解除し
た。この反応混合物をCH2Cl2（60mL）で希釈し、H2O
（２×30mL）で洗浄し、Na2SO4で脱水し、次いで蒸発乾
固させた。粗生成物をCHCl3/MeOH（19/1、v/v）におけ
る調製用シリカゲル プレート（20×20×0.2cm）で精
製し、生成物バンドをCH2Cl2/MeOH（4/1、v/v）で溶出
させ、次いで固体フォームまで蒸発させて0.034g（80
％）の５′−ヒドロキシ ARp ＊ApApA異性体55および0.
02g（68％）の５′−ヒドロキシ ASp ＊ApApA異性体56
を得た。それぞれ５′−ヒドロキシ四量体55（0.034g、
0.013ミリモル）および56（0.02g、0.007ミリモル）の
溶液を別々に0.5MのDBUと共に無水CH3CN［（55:1.5mL;5
6:0.9mL）］と共にr.t.にて18時間にわたり撹拌し、次
いで1M AcOH［（55:0.75mL;56:0.54mL）］の添加によ
り中和し、次いで蒸発させた。残留物を10mLの飽和メタ
ノール性アンモニアで処理し、室温にて60時間にわたり
撹拌した後の溶液を蒸発乾固させた。脱シリル化を1Mの
Bu4NFによりTHF（2.5mL）中で処理して行った。室温に
て60時間撹拌した後、溶剤を減圧除去した。或る程度の
H2O（10mL）を得られた残留物に添加し、DEAEセファデ
ックスカラムＡ−25（32×2cm）に施し、０〜0.5MのTEA
B緩衝液（pH7.5）で溶出させた。主たるピークのフラク
ションを集め、蒸発させ、次いでMeOHと一緒に数回蒸発
させた。ペーパー クロマトグラフィー（ｉ−PrOH/ア
ンモニア/H2O、55/10/35、v/v/v）による精製は凍結乾
燥の後に347 O.D.260nm単位（58％）のARp ＊ApApA 57
および111 O.D.260nm単位（31％）のASp ＊ApApA 58を
それぞれ与えた。ARp ＊ApApA 57:UV（H2O）＝257nm。
ｉ−PrOH/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセ
ルロース上でのRf＝0.21。HPLC:PR−18、A:50mM NH4H2
PO4（pH7.2）。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1mi
n、80％Ａ、20％B;1〜31min、30％Ａ、70％；保持時間:
7.47min。ASp ＊ApApA 58:UV（H2O）＝257nm。ｉ−PrOH
/アンモニア/H2O（6/1/3、v/v/v）におけるセルロース
上でのRf＝0.32。HPLC:PR−18、A:50mMNH4H2PO4、pH7.
2。B:MeOH/H2O（1/1、v/v）、勾配:0〜1min、80％Ａ、2
0％B;1〜31min、30％Ａ、70％B;保持時間:9.84min。
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリ
ゴアデニレート ５′−モノホスェートの製造 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および
四量体コアを実施例１、２、３、４および５に上記した
ように合成した。三量体および四量体５′−モノホスフ
ェートはサムブルック等、モレキュラ・クローニング；
ラボラトリー・マニュアル、第２版、コールド・スプリ
ング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、第5.67〜5.71
頁（1989）の方法にしたがい対応のコアおよびATPからT
4ポリヌクレオチド キナーゼにより酵素的に合成し
た。５′−モノホスホリル化を逆相HPLC分析により決定
すると共に、その後の各５′−モノホスフェート誘導体
の５′−ヌクレオチダーゼによる加水分解で確認した
（データ示さず）。ホスホリル化の収率は15〜68％の範
囲であった。
ゴアデニレート ５′−モノホスェートの製造 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および
四量体コアを実施例１、２、３、４および５に上記した
ように合成した。三量体および四量体５′−モノホスフ
ェートはサムブルック等、モレキュラ・クローニング；
ラボラトリー・マニュアル、第２版、コールド・スプリ
ング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、第5.67〜5.71
頁（1989）の方法にしたがい対応のコアおよびATPからT
4ポリヌクレオチド キナーゼにより酵素的に合成し
た。５′−モノホスホリル化を逆相HPLC分析により決定
すると共に、その後の各５′−モノホスフェート誘導体
の５′−ヌクレオチダーゼによる加水分解で確認した
（データ示さず）。ホスホリル化の収率は15〜68％の範
囲であった。
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリ
ゴアデニレート ５′−ジホスフェートおよび５′−ト
リホスフェートの製造 ２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオ
リゴアデニレートの５′−ジホスフェートおよび５′−
トリホスフェートは、実施例６の手順にしたがって５′
−モノホスフェートから作成することができる。
ゴアデニレート ５′−ジホスフェートおよび５′−ト
リホスフェートの製造 ２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオ
リゴアデニレートの５′−ジホスフェートおよび５′−
トリホスフェートは、実施例６の手順にしたがって５′
−モノホスフェートから作成することができる。
実施例６ 反応は全て、125℃、18〜24時間でオーブン乾燥され
たガラス器で行った。２′,5′−ホスホロチオエート／
ホスホジエステル オリガアデニレート立体異性体（三
量体もしくは四量体、260nmにて400 O.D.単位）を400
μＬの乾燥ジメチルホルムアミド（「DMF」）に溶解さ
せ、10mLの三角フラスコ内で35℃にて減圧乾燥させた。
この過程を３回反復した。乾燥残留物に50μモルのトリ
フェニルホスィンと100μモルのイミダゾールと50μモ
ルのジピリジニルジスルフィドとを添加した。この温合
物を500μＬの乾燥DMF＋50μＬの乾燥ジメチルスルホキ
シドに溶解させた。溶液を撹拌棒により室温にて２時間
撹拌した。２時間の後、溶液は均質となった（30分間の
後、溶液は黄色に変化し始める）。この溶液を10mLの１
％NaI/乾燥アセトン（w/v）溶液に滴親した。透明な無
色沈殿物が生成し、これは５′−ホスホロイミダゾリデ
ートのナトリウム塩である。沈殿物を室温にて遠心分離
し、上澄液をデカントし、次いで沈殿物を10mLの乾燥ア
セトンで３回洗浄した。遠心分離を反復した。沈殿物を
P2O5で減圧下に２時間乾燥させた。沈殿物を、乾燥DMF
における新たに作成された0.5Mのピロ燐酸トリブチルア
ンモニウムの200μＬに溶解させた。溶液を室温にて18
時間維持し、次いでDMFを減圧除去した。残留物を0.25M
の重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（「TEAB」）
（pH7.5）に溶解させた。５′−ジ−および５′−トリ
−ホスフェート生成物を0.25M〜0.75M TEABの直線濃度
勾配によるDEAE−セファデックスＡ−25カラム（HCO
3型;1×20cm）を用いて分離した。各フラクション（10m
L）を集めた。生成物を254nmにおける紫外線分光光度法
により観察した。５′−ジ−および５′−トリ−ホスフ
ェートを含有するフラクションを別々に集め、次いで減
圧乾燥させた。TEABを水の反復添加に続く凍結乾燥によ
り除去した。５′−ジホスフェートの収率は約５％であ
り、５′−トリホスフェートの収率は約60％であった。
たガラス器で行った。２′,5′−ホスホロチオエート／
ホスホジエステル オリガアデニレート立体異性体（三
量体もしくは四量体、260nmにて400 O.D.単位）を400
μＬの乾燥ジメチルホルムアミド（「DMF」）に溶解さ
せ、10mLの三角フラスコ内で35℃にて減圧乾燥させた。
この過程を３回反復した。乾燥残留物に50μモルのトリ
フェニルホスィンと100μモルのイミダゾールと50μモ
ルのジピリジニルジスルフィドとを添加した。この温合
物を500μＬの乾燥DMF＋50μＬの乾燥ジメチルスルホキ
シドに溶解させた。溶液を撹拌棒により室温にて２時間
撹拌した。２時間の後、溶液は均質となった（30分間の
後、溶液は黄色に変化し始める）。この溶液を10mLの１
％NaI/乾燥アセトン（w/v）溶液に滴親した。透明な無
色沈殿物が生成し、これは５′−ホスホロイミダゾリデ
ートのナトリウム塩である。沈殿物を室温にて遠心分離
し、上澄液をデカントし、次いで沈殿物を10mLの乾燥ア
セトンで３回洗浄した。遠心分離を反復した。沈殿物を
P2O5で減圧下に２時間乾燥させた。沈殿物を、乾燥DMF
における新たに作成された0.5Mのピロ燐酸トリブチルア
ンモニウムの200μＬに溶解させた。溶液を室温にて18
時間維持し、次いでDMFを減圧除去した。残留物を0.25M
の重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（「TEAB」）
（pH7.5）に溶解させた。５′−ジ−および５′−トリ
−ホスフェート生成物を0.25M〜0.75M TEABの直線濃度
勾配によるDEAE−セファデックスＡ−25カラム（HCO
3型;1×20cm）を用いて分離した。各フラクション（10m
L）を集めた。生成物を254nmにおける紫外線分光光度法
により観察した。５′−ジ−および５′−トリ−ホスフ
ェートを含有するフラクションを別々に集め、次いで減
圧乾燥させた。TEABを水の反復添加に続く凍結乾燥によ
り除去した。５′−ジホスフェートの収率は約５％であ
り、５′−トリホスフェートの収率は約60％であった。
血清ホスホジエステラーゼに対するホスホロチオエート
／ホスホジエステル三量体および四量体コア誘導体の安
定性 真正２−5Aおよびホスホロチオエート／ホスホジエス
テル三量体および四量体コア誘導体（300μＭ）の安定
性を、10％胎児牛血清が補充された200μＬのRPMI−164
0培地にて５％CO2（空気中）下に37℃にて培養すること
により決定した。所定量（30μＬ）をゼロ時点および６
時間後に取出した。加水分解生成物をカリコ等、バイオ
ケミストリー、第26巻、第7127〜7135頁（1987）に記載
されたHPLCにより同定した。ここに記載した条件下で、
真正A2およびA3はイノシンおよびヒポキサンチンまで20
分間で完全に加水分解され（第１表）る一方、ARp ＊Ａ
およびASp ＊Ａは加水分解されなかった。
／ホスホジエステル三量体および四量体コア誘導体の安
定性 真正２−5Aおよびホスホロチオエート／ホスホジエス
テル三量体および四量体コア誘導体（300μＭ）の安定
性を、10％胎児牛血清が補充された200μＬのRPMI−164
0培地にて５％CO2（空気中）下に37℃にて培養すること
により決定した。所定量（30μＬ）をゼロ時点および６
時間後に取出した。加水分解生成物をカリコ等、バイオ
ケミストリー、第26巻、第7127〜7135頁（1987）に記載
されたHPLCにより同定した。ここに記載した条件下で、
真正A2およびA3はイノシンおよびヒポキサンチンまで20
分間で完全に加水分解され（第１表）る一方、ARp ＊Ａ
およびASp ＊Ａは加水分解されなかった。
ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体コア誘
導体の加水分解は観察されなかった。しかしながら、ホ
スホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア誘導体
は５′−もしくは２′,3′−末端から加水分解され、こ
れはホスホロチオエート置換のヌクレオチド間結合の位
置に依存した。たとえばARp ＊ApApAおよびASp ＊ApApAは
その各二量体コアARp ＊ＡおよびASp ＊Ａまで50％減成し
たのに対し、ApARp ＊ApAおよびApASp ＊ApAは２′,3′−
末端から減成して三量体コアApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａ
を生成した。ApApARp ＊ＡおよびApApASp ＊Ａは５′−末
端から減成して、それぞれApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａを
生成した。
導体の加水分解は観察されなかった。しかしながら、ホ
スホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア誘導体
は５′−もしくは２′,3′−末端から加水分解され、こ
れはホスホロチオエート置換のヌクレオチド間結合の位
置に依存した。たとえばARp ＊ApApAおよびASp ＊ApApAは
その各二量体コアARp ＊ＡおよびASp ＊Ａまで50％減成し
たのに対し、ApARp ＊ApAおよびApASp ＊ApAは２′,3′−
末端から減成して三量体コアApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａ
を生成した。ApApARp ＊ＡおよびApApASp ＊Ａは５′−末
端から減成して、それぞれApARp ＊ＡおよびApASp ＊Ａを
生成した。
RNアーゼＬに対する２′,5′ホスホロチオエート／ホス
ホジエステル オリゴアデニレートの結合 RNアーゼＬに対するホスホロチオエート／ホスホジエ
ステル２−5A誘導体の親和性をナイト等、メソッズ・エ
ンチモロジー、第79巻、第216〜227頁（1981）の方法に
よる放射性結合分析で測定した。真正A3、pA3およびp3A
3はそれぞれ１×10-6M、１×10-9Mおよび１×1-9MのIC
50値にてRNアーゼＬに結合する。本発明によれば、RNア
ーゼＬに対するホスホロチオエート／ホスホジエステル
コアおよびその５′−モノホスフェートの結合は、コ
アについては８×10-7〜８×10-6Mおよび５′−モノホ
スフェートについては１×10-8〜１×10-9MのIC50値に
て対応の真正２−5Aコアおよび５′−モノホスフェート
と同等またはそれより若干良好であった。５′−末端か
らの第一ヌクレオチド間結合にホスホロチオエート置換
を有する三量体および四量体２−5Aコア誘導体は、第二
もしくは第三ヌクレオチド間結合にホスホロチオエート
置換を有するものと比較して低い親和性を示した。
ホジエステル オリゴアデニレートの結合 RNアーゼＬに対するホスホロチオエート／ホスホジエ
ステル２−5A誘導体の親和性をナイト等、メソッズ・エ
ンチモロジー、第79巻、第216〜227頁（1981）の方法に
よる放射性結合分析で測定した。真正A3、pA3およびp3A
3はそれぞれ１×10-6M、１×10-9Mおよび１×1-9MのIC
50値にてRNアーゼＬに結合する。本発明によれば、RNア
ーゼＬに対するホスホロチオエート／ホスホジエステル
コアおよびその５′−モノホスフェートの結合は、コ
アについては８×10-7〜８×10-6Mおよび５′−モノホ
スフェートについては１×10-8〜１×10-9MのIC50値に
て対応の真正２−5Aコアおよび５′−モノホスフェート
と同等またはそれより若干良好であった。５′−末端か
らの第一ヌクレオチド間結合にホスホロチオエート置換
を有する三量体および四量体２−5Aコア誘導体は、第二
もしくは第三ヌクレオチド間結合にホスホロチオエート
置換を有するものと比較して低い親和性を示した。
２−5Aのホスホロチオエート／ホスホジエステル誘導体
によるRNアーゼＬの活性化 生物学的性質と絶対配置との相関関係は、完全分割さ
れた２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル
アデニレート三量体コアの作成についてのみ可能であ
った。しかしながら、三量体コア化合物は極く僅かRNア
ーゼＬを結合および／または活性化することが判明し
た。２′,5′−ホスホロチオエート コア分子によるRN
アーゼＬの活性化は５′−ホスホリル化により顕著に向
上する。
によるRNアーゼＬの活性化 生物学的性質と絶対配置との相関関係は、完全分割さ
れた２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル
アデニレート三量体コアの作成についてのみ可能であ
った。しかしながら、三量体コア化合物は極く僅かRNア
ーゼＬを結合および／または活性化することが判明し
た。２′,5′−ホスホロチオエート コア分子によるRN
アーゼＬの活性化は５′−ホスホリル化により顕著に向
上する。
コア−セルロース分析をシルバーマン、アナリチカル
・バイオケミストリー、第144巻、第450〜460頁（198
5）およびカリコ等（1987）（上記）の方法により行
い、RNアーゼＬを２〜5A4コア−セルロースへの固定化
によりL929細胞抽出物から部分精製した。RNアーゼＬの
活性化をポリ（Ｕ）［32P］pCpから酸可溶性断片への変
換により測定した。その結果は真正p3A3、p3A4、pA3お
よびpA4がそれぞれ５×10-10M、５×10-10M、２×10-7M
および２×10-8MのIC50値を有する一方、驚くことにホ
スホロチオエート／ホスホジエステル三量体コア誘導体
のうちApARp ＊ＡのみがRNアーゼＬを活性化しうる（５
×10-7MのIC50）ことを示す（第1A図、△）。ホスホロ
チオエート／ホスホジエステル三量体５′−モノホスフ
ェートの３種がRNアーゼＬを活性化することができ、pA
pARp ＊ＡがRNアーゼＬの最も強力な活性化剤である（１
×10-9MのIC50）（第1B図、△）。pARp ＊ApA（□）およ
びpASp ＊ApA（■）はRNアーゼＬの100倍低い能力の活性
化剤である。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス
テル四量体コア誘導体のうち、ApARp ＊ApA（□）および
ApApARp ＊Ａ（△）のみがRNアーゼＬを活性化すること
ができる（それぞれ５×10-7Mおよび５×10-7MのIC50）
（第1C図）。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス
テル四量体５′−モノホスフェートのうち５種がRNアー
ゼＬを活性化する（IC50値＞６×10-7M〜８×10
-10M）。pApASp ＊ApAエナンチオマーは、１×10-5Mの程
度の高い濃度でさえRNアーゼＬを活性化しなかった（第
1D図、■）。
・バイオケミストリー、第144巻、第450〜460頁（198
5）およびカリコ等（1987）（上記）の方法により行
い、RNアーゼＬを２〜5A4コア−セルロースへの固定化
によりL929細胞抽出物から部分精製した。RNアーゼＬの
活性化をポリ（Ｕ）［32P］pCpから酸可溶性断片への変
換により測定した。その結果は真正p3A3、p3A4、pA3お
よびpA4がそれぞれ５×10-10M、５×10-10M、２×10-7M
および２×10-8MのIC50値を有する一方、驚くことにホ
スホロチオエート／ホスホジエステル三量体コア誘導体
のうちApARp ＊ＡのみがRNアーゼＬを活性化しうる（５
×10-7MのIC50）ことを示す（第1A図、△）。ホスホロ
チオエート／ホスホジエステル三量体５′−モノホスフ
ェートの３種がRNアーゼＬを活性化することができ、pA
pARp ＊ＡがRNアーゼＬの最も強力な活性化剤である（１
×10-9MのIC50）（第1B図、△）。pARp ＊ApA（□）およ
びpASp ＊ApA（■）はRNアーゼＬの100倍低い能力の活性
化剤である。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス
テル四量体コア誘導体のうち、ApARp ＊ApA（□）および
ApApARp ＊Ａ（△）のみがRNアーゼＬを活性化すること
ができる（それぞれ５×10-7Mおよび５×10-7MのIC50）
（第1C図）。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス
テル四量体５′−モノホスフェートのうち５種がRNアー
ゼＬを活性化する（IC50値＞６×10-7M〜８×10
-10M）。pApASp ＊ApAエナンチオマーは、１×10-5Mの程
度の高い濃度でさえRNアーゼＬを活性化しなかった（第
1D図、■）。
ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および
四量体２−5A誘導体によるRNアーゼＬの活性化をもrRNA
切断分析にてカリコ等（1987）（上記）の方法によりL9
29細胞抽出物を用いて測定し、その際L929細胞の抽出物
を２−5Aもしくは２−5A誘導体の存在下または不存在下
で30℃にて１時間培養した。コア−セルロース分析から
の結果（第1A図）と一致して、ApARp ＊Ａ（１×10-6M）
のみがRNアーゼＬを活性化してγRNAをRNアーゼＬの良
好に特性化された特異切断生成物（SCP）まで切断しう
る唯一の三量体コアであった（第2A図、レーン５）。A
Rp ＊ApA、ASp ＊ApAおよびApASp ＊Ａ、並びに真正A3は１
×10-6M程度の高い濃度でもRNアーゼＬを活性化しなか
った（第2A図、レーン３、４、６、７）。真正p3A3は１
×10-8Mにて活性であった（第2A図、レーン２）。対応
の５′−モノホスフェート、すなわちpARp ＊ApA、pASp
＊ApAおよびpApARp ＊Ａはそれぞれ１×10-7M、１×10-7
Mおよび２×10-9Mに活性化した（第2B図、レーン４〜
６）のに対し、pA3は１×10-6Mにて活性であった（レー
ン３）。５×10-6M程度に高い濃度でさえpApASp ＊Ａと
の培養は検出可能なrRNA減成を与えなかった（データ示
さず）。
四量体２−5A誘導体によるRNアーゼＬの活性化をもrRNA
切断分析にてカリコ等（1987）（上記）の方法によりL9
29細胞抽出物を用いて測定し、その際L929細胞の抽出物
を２−5Aもしくは２−5A誘導体の存在下または不存在下
で30℃にて１時間培養した。コア−セルロース分析から
の結果（第1A図）と一致して、ApARp ＊Ａ（１×10-6M）
のみがRNアーゼＬを活性化してγRNAをRNアーゼＬの良
好に特性化された特異切断生成物（SCP）まで切断しう
る唯一の三量体コアであった（第2A図、レーン５）。A
Rp ＊ApA、ASp ＊ApAおよびApASp ＊Ａ、並びに真正A3は１
×10-6M程度の高い濃度でもRNアーゼＬを活性化しなか
った（第2A図、レーン３、４、６、７）。真正p3A3は１
×10-8Mにて活性であった（第2A図、レーン２）。対応
の５′−モノホスフェート、すなわちpARp ＊ApA、pASp
＊ApAおよびpApARp ＊Ａはそれぞれ１×10-7M、１×10-7
Mおよび２×10-9Mに活性化した（第2B図、レーン４〜
６）のに対し、pA3は１×10-6Mにて活性であった（レー
ン３）。５×10-6M程度に高い濃度でさえpApASp ＊Ａと
の培養は検出可能なrRNA減成を与えなかった（データ示
さず）。
rRNAの匹敵する減成が真正p3A3比較と対比して６種の
ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア誘導
体のうち２種につき観察された。ApARp ＊ApAおよびApAp
ARp ＊はRNアーゼＬを１×10-5Mにて活性化した（第3A
図、レーン６および８）。コア−セルロース分析で観察
されたように（第1D図）、６種のホスホロチオエート／
ホスホジエステル四量体５′−モノホスフェートのうち
５種がRNアーゼＬを活性化することができた（pARp ＊Ap
ApA、pASp ＊ApApA、pApARp ＊ApA、pApApARp ＊Ａおよびp
ApApASp ＊Ａ）（第3B図、それぞれレーン４、５、６、
８、９）。RNアーゼＬの最も効率的な活性化剤はpApARp
＊ApA（１×10-8M）（第3B図、レーン６）であったのに
対し、pApASp ＊ApAはRNアーゼＬ活性化の拮抗剤であっ
てRNアーゼＬを１×10-5M程度の高い濃度でさえ活性化
しえなかった（第3B図、レーン７）。
ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア誘導
体のうち２種につき観察された。ApARp ＊ApAおよびApAp
ARp ＊はRNアーゼＬを１×10-5Mにて活性化した（第3A
図、レーン６および８）。コア−セルロース分析で観察
されたように（第1D図）、６種のホスホロチオエート／
ホスホジエステル四量体５′−モノホスフェートのうち
５種がRNアーゼＬを活性化することができた（pARp ＊Ap
ApA、pASp ＊ApApA、pApARp ＊ApA、pApApARp ＊Ａおよびp
ApApASp ＊Ａ）（第3B図、それぞれレーン４、５、６、
８、９）。RNアーゼＬの最も効率的な活性化剤はpApARp
＊ApA（１×10-8M）（第3B図、レーン６）であったのに
対し、pApASp ＊ApAはRNアーゼＬ活性化の拮抗剤であっ
てRNアーゼＬを１×10-5M程度の高い濃度でさえ活性化
しえなかった（第3B図、レーン７）。
pApASp ＊ＡによるRNアーゼＬ活性化の抑制 RNアーゼＬに対するpApASp ＊Ａの高い親和性およびpA
pASp ＊ＡがRNアーゼＬを活性化しないという観察は、恐
らくRNアーゼＬの特異的抑制剤であることを示唆する。
事実、pApASp ＊Ａはp3A3もしくはpApARp ＊ＡによるRNア
ーゼＬの活性化を抑制する（第4A図）。真正p3A3はRNア
ーゼＬを活性化して28Sおよび18S rRNAを10-9Mもしく
は10-8MにてSCPまで加水分解する（レーン１および
３）、しかしながら、pApASp ＊Ａの添加（10-6M）はRN
アーゼＬ触媒によるrRNAの加水分解を抑制する（レーン
２および４）。同様に、pApARp ＊ＡはRNアーゼＬを10-9
Mもしくは10-8Mに活性化する（レーン５および７）のに
対し、pApASp ＊Ａの添加（10-6M）はこの活性化を抑制
する（レーン６および８）。pApASp ＊Ａの抑制活性が部
分精製RNアーゼＬについても観察された（第4B図）。p3
A3は５×10-10MのIC50値にてRNアーゼＬを活性化する
（●）。しかしながらpApASp ＊Ａの添加（１×10-6M）
に際し、観察されるIC50値は１×10-8Mまで移動し
（○）、これはpApASp ＊ＡによるRNアーゼＬのp3A3媒介
活性化の特異的抑制を示す。
pASp ＊ＡがRNアーゼＬを活性化しないという観察は、恐
らくRNアーゼＬの特異的抑制剤であることを示唆する。
事実、pApASp ＊Ａはp3A3もしくはpApARp ＊ＡによるRNア
ーゼＬの活性化を抑制する（第4A図）。真正p3A3はRNア
ーゼＬを活性化して28Sおよび18S rRNAを10-9Mもしく
は10-8MにてSCPまで加水分解する（レーン１および
３）、しかしながら、pApASp ＊Ａの添加（10-6M）はRN
アーゼＬ触媒によるrRNAの加水分解を抑制する（レーン
２および４）。同様に、pApARp ＊ＡはRNアーゼＬを10-9
Mもしくは10-8Mに活性化する（レーン５および７）のに
対し、pApASp ＊Ａの添加（10-6M）はこの活性化を抑制
する（レーン６および８）。pApASp ＊Ａの抑制活性が部
分精製RNアーゼＬについても観察された（第4B図）。p3
A3は５×10-10MのIC50値にてRNアーゼＬを活性化する
（●）。しかしながらpApASp ＊Ａの添加（１×10-6M）
に際し、観察されるIC50値は１×10-8Mまで移動し
（○）、これはpApASp ＊ＡによるRNアーゼＬのp3A3媒介
活性化の特異的抑制を示す。
しかしながら、pApASp ＊Ａはインターフェロン誘発の
生物学的カスケードにてRNアーゼＬの役割を評価する際
のプローブとして有用である。最も重要なことに、pApA
Sp ＊Ａは生理学的濃度にてRNアーゼＬの活性化を選択的
に抑制し、特異的および非特異的ホスホジエステラーゼ
に対し代謝物に安定である。この分子は、RNアーゼＬ活
性化を選択的に抑制する手段を与える。
生物学的カスケードにてRNアーゼＬの役割を評価する際
のプローブとして有用である。最も重要なことに、pApA
Sp ＊Ａは生理学的濃度にてRNアーゼＬの活性化を選択的
に抑制し、特異的および非特異的ホスホジエステラーゼ
に対し代謝物に安定である。この分子は、RNアーゼＬ活
性化を選択的に抑制する手段を与える。
さらにpApASp ＊Ａは治療活性を有することも予想され
る。慢性骨髄白血病（「CML」）に罹患した個人は、新
規なrRNA CML−特異切断生成物により証明されるよう
に、極めて高いRNアーゼＬ活性を示す。したがって、RN
アーゼＬの代謝上安定な抑制剤であるpApASp ＊Ａは慢性
骨髄白血病の処置に有力な用途を有する。
る。慢性骨髄白血病（「CML」）に罹患した個人は、新
規なrRNA CML−特異切断生成物により証明されるよう
に、極めて高いRNアーゼＬ活性を示す。したがって、RN
アーゼＬの代謝上安定な抑制剤であるpApASp ＊Ａは慢性
骨髄白血病の処置に有力な用途を有する。
さらに、慢性疲労症候群（「CFS」）（筋痛性脳脊髄
炎（ME）または低天然キラー（「NK」）細胞病としても
知られる）および他のHHV−６関連障害に罹患した個人
も、比較と対比して極めて高いRNアーゼＬ活性を示す
（平均基礎レベル＝466±23、これに対し比較では123±
12;p＜0.0001）［スハドルニク等、クリニカル・インフ
ェクシャス・ディジーズ、第18巻（補遺１）、第96〜10
4頁（1994）］。生物学的応答改変剤、すなわちポリ
（Ｉ）−ポリ（C12U）（ミスマッチdsRNS、アンプリゲ
ン（商標））による治療の前および治療の間にCFSを有
する個人からの末梢血液単核細胞（「PBMC」）の抽出物
を用いて行った実験では、健康な個人と比較してPBMC抽
出物における平均的な基礎潜在的２−5Aシンセターゼレ
ベルは治療後に顕著に減少した（610±220ピコモル２−
5A/mg蛋白/hr）。これは比較（2035±325ピコモル２−5
A/mg蛋白/hr、Ｐ＜0.0001）と対比的である（上記）。
さらに、試験した全てのプレテラピーPBMC抽出物はヒト
ヘルペス ウィルス−６（HHV−６）複製につき陽性
であった。治療はHHV−６活性における有意の低下（ｐ
＜0.01）、並びに臨床的および神経心理学的改善との一
時的関連における２−5Aシンセターゼ/RNアーゼＬ経路
の調整低下をもたらした。特定の理論に拘束されるもの
でないが、CFSプレテラピーで観察された２−5A経路の
調整向上は活性化免疫状態および一貫したウィルス感染
がCFSの病因を示しうるという仮説に一致すると思われ
る。したがって上記したように、RNアーゼＬの代謝上安
定な抑制剤であるpApASp ＊ＡはCFSの処置にも有力な用
途を有する。
炎（ME）または低天然キラー（「NK」）細胞病としても
知られる）および他のHHV−６関連障害に罹患した個人
も、比較と対比して極めて高いRNアーゼＬ活性を示す
（平均基礎レベル＝466±23、これに対し比較では123±
12;p＜0.0001）［スハドルニク等、クリニカル・インフ
ェクシャス・ディジーズ、第18巻（補遺１）、第96〜10
4頁（1994）］。生物学的応答改変剤、すなわちポリ
（Ｉ）−ポリ（C12U）（ミスマッチdsRNS、アンプリゲ
ン（商標））による治療の前および治療の間にCFSを有
する個人からの末梢血液単核細胞（「PBMC」）の抽出物
を用いて行った実験では、健康な個人と比較してPBMC抽
出物における平均的な基礎潜在的２−5Aシンセターゼレ
ベルは治療後に顕著に減少した（610±220ピコモル２−
5A/mg蛋白/hr）。これは比較（2035±325ピコモル２−5
A/mg蛋白/hr、Ｐ＜0.0001）と対比的である（上記）。
さらに、試験した全てのプレテラピーPBMC抽出物はヒト
ヘルペス ウィルス−６（HHV−６）複製につき陽性
であった。治療はHHV−６活性における有意の低下（ｐ
＜0.01）、並びに臨床的および神経心理学的改善との一
時的関連における２−5Aシンセターゼ/RNアーゼＬ経路
の調整低下をもたらした。特定の理論に拘束されるもの
でないが、CFSプレテラピーで観察された２−5A経路の
調整向上は活性化免疫状態および一貫したウィルス感染
がCFSの病因を示しうるという仮説に一致すると思われ
る。したがって上記したように、RNアーゼＬの代謝上安
定な抑制剤であるpApASp ＊ＡはCFSの処置にも有力な用
途を有する。
ホスホロチオエート／ホスホジエステル ２−5Aコア誘
導体による細胞成長の抑制 細胞生存率をトリパン・ブルー排除により測定した。
処理後のコロニー形成能力をクレマー等、ミューテーシ
ョン・リサーチ、第72巻、第285〜292頁（1980）の方法
に要約されたマイクロタイター・ウェルにおける増殖に
より測定した。その結果は、マイクロタイター板におけ
るSup T1細胞増殖の復活もしくは抑制における低下が
二量体、三量体もしくは四量体ホスホロチオエート／ホ
スホジエステル２−5Aコア誘導体のいずれでも観察され
なかったことを示す。細胞毒性の欠如および２−5Aのコ
ルジセピン誘導体に関する予備報告［スハドルニク等、
ヌクレオシド・アンド・ヌクレオチド、第２巻、第351
〜366頁（1983）］における推定１％の吸収に基づき、
抗−HIV−１活性につきホスホロチオエート／ホスホジ
エスル誘導体をスクリーニングする濃度とし３×10-4M
を選択した。
導体による細胞成長の抑制 細胞生存率をトリパン・ブルー排除により測定した。
処理後のコロニー形成能力をクレマー等、ミューテーシ
ョン・リサーチ、第72巻、第285〜292頁（1980）の方法
に要約されたマイクロタイター・ウェルにおける増殖に
より測定した。その結果は、マイクロタイター板におけ
るSup T1細胞増殖の復活もしくは抑制における低下が
二量体、三量体もしくは四量体ホスホロチオエート／ホ
スホジエステル２−5Aコア誘導体のいずれでも観察され
なかったことを示す。細胞毒性の欠如および２−5Aのコ
ルジセピン誘導体に関する予備報告［スハドルニク等、
ヌクレオシド・アンド・ヌクレオチド、第２巻、第351
〜366頁（1983）］における推定１％の吸収に基づき、
抗−HIV−１活性につきホスホロチオエート／ホスホジ
エスル誘導体をスクリーニングする濃度とし３×10-4M
を選択した。
HIV−１−誘発の合胞体形成の抑制に対する２′,5′−
ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアニレ
ートの作用 ヘンダーソン等、バイロロジー、第182巻、第186〜19
8頁（1991）に記載されたような感染センター分析を用
いて、２−5A三量体および四量体コアのホスホロチオエ
ート／ホスホジエステル誘導体がHIV−１誘発の合胞体
形成を抑制する能力、すなわちＴ細胞におけるHIV−１
複製の指標を測定した。新たに分離した末梢血液リンパ
球（PBL）を２−5Aもしくは誘導体により２時間処理す
ると共に、HIV−１菌株III Bを約0.1のm.o.i.にて感染
させた。感染したPBLを10％（v/v）の熱失活胎児牛血清
が補充されたRPMI−1640培地に37℃にて空気雰囲気中の
湿潤５％CO2に維持した。48時間の後、細胞をハンクス
バランス塩溶液で２回洗浄し、シリーズ希釈し、次い
で96−穴マイクロタイター板の複数ウェルに接種した。
直ちに、２×105対数増殖Sup T1細胞を各ウェルに添加
した。Sup T1細胞は、HIV−１が産生的に感染された細
胞との合胞体を容易に形成する。各ウェルを、組織培養
顕微鏡を用いて合胞体の存在につき毎日検査した。合胞
４体形成の第１の徴候が12時間で見られ、ほぼ完全な合
胞体が24時間で発生した。最終的結果を72時間で読取っ
た。各合胞体を単一の感染細胞としてカウントした。接
種細胞１個当たりの合胞体の個数を測定すると共に、感
染細胞１個当たりの感染センターとして現す。比較（２
−5A誘導体を添加せず）において、100％合胞体形成は2
00個のHIV−１感染細胞につき12±３合胞体に同等であ
った。
ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアニレ
ートの作用 ヘンダーソン等、バイロロジー、第182巻、第186〜19
8頁（1991）に記載されたような感染センター分析を用
いて、２−5A三量体および四量体コアのホスホロチオエ
ート／ホスホジエステル誘導体がHIV−１誘発の合胞体
形成を抑制する能力、すなわちＴ細胞におけるHIV−１
複製の指標を測定した。新たに分離した末梢血液リンパ
球（PBL）を２−5Aもしくは誘導体により２時間処理す
ると共に、HIV−１菌株III Bを約0.1のm.o.i.にて感染
させた。感染したPBLを10％（v/v）の熱失活胎児牛血清
が補充されたRPMI−1640培地に37℃にて空気雰囲気中の
湿潤５％CO2に維持した。48時間の後、細胞をハンクス
バランス塩溶液で２回洗浄し、シリーズ希釈し、次い
で96−穴マイクロタイター板の複数ウェルに接種した。
直ちに、２×105対数増殖Sup T1細胞を各ウェルに添加
した。Sup T1細胞は、HIV−１が産生的に感染された細
胞との合胞体を容易に形成する。各ウェルを、組織培養
顕微鏡を用いて合胞体の存在につき毎日検査した。合胞
４体形成の第１の徴候が12時間で見られ、ほぼ完全な合
胞体が24時間で発生した。最終的結果を72時間で読取っ
た。各合胞体を単一の感染細胞としてカウントした。接
種細胞１個当たりの合胞体の個数を測定すると共に、感
染細胞１個当たりの感染センターとして現す。比較（２
−5A誘導体を添加せず）において、100％合胞体形成は2
00個のHIV−１感染細胞につき12±３合胞体に同等であ
った。
データを第5Aおよび5B図に示す。第5A図に示したよう
に、ApARp ＊Ａは合胞体形成の極めて効率的な抑制剤で
あって、100％抑制が３×10-4Mにて観察された。そのPS
エナンチオマー ApASp ＊Ａは合胞体形成を78％抑制し
た。ARp ＊ApAおよびASp ＊ApAはそれぞれ合胞体形成を僅
か10％および15％抑制した。真正A3およびA4（３×10-4
M）は合胞体形成をそれぞれ21％および15％抑制したの
に対し、アデノシン（９×10-4M）は合胞体形成を抑制
しなかった。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス
テル四量体コア誘導体のうち、ApApARp ＊ＡおよびApApA
Sp ＊Ａが最も抑制的であった（おれぞれ90％および76％
の抑制）（第5B図）。ApARp ＊ApA、ApASp ＊ApA、ARp ＊A
pApAおよびASp ＊ApApAは合胞体形成をそれぞれ26％、32
％、16％および18％抑制した。アデノシンおよびA4（第
5B図）、並びにARp ＊ＡよびASp ＊Ａ二量体、アデニンま
たは３′,5′,A4（データ示さず）は合胞体形成を抑制
することができなかった。
に、ApARp ＊Ａは合胞体形成の極めて効率的な抑制剤で
あって、100％抑制が３×10-4Mにて観察された。そのPS
エナンチオマー ApASp ＊Ａは合胞体形成を78％抑制し
た。ARp ＊ApAおよびASp ＊ApAはそれぞれ合胞体形成を僅
か10％および15％抑制した。真正A3およびA4（３×10-4
M）は合胞体形成をそれぞれ21％および15％抑制したの
に対し、アデノシン（９×10-4M）は合胞体形成を抑制
しなかった。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス
テル四量体コア誘導体のうち、ApApARp ＊ＡおよびApApA
Sp ＊Ａが最も抑制的であった（おれぞれ90％および76％
の抑制）（第5B図）。ApARp ＊ApA、ApASp ＊ApA、ARp ＊A
pApAおよびASp ＊ApApAは合胞体形成をそれぞれ26％、32
％、16％および18％抑制した。アデノシンおよびA4（第
5B図）、並びにARp ＊ＡよびASp ＊Ａ二量体、アデニンま
たは３′,5′,A4（データ示さず）は合胞体形成を抑制
することができなかった。
HIV−１逆転写酵素活性に対する２′,5′−ホスホロチ
オエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの作
用 Sup T1細胞を２−5Aもしくはホスホロチオエート／
ホスホジエステル誘導体により300μＭにて６時間処理
し、次いでHIV−１を約0.1の感染多重度（M.O.I.）にて
感染させた。アデノシンおよびアデニンを900μＭにて
試験した。感染後の96時間にて培養上澄液を取出し、HI
V−１ RT活性をヘンダーソン等、バイロロジー、第182
巻、第186〜198頁（1991）に記載されたように３反復で
分析した。この方法を要約すれば、25μＬの培養上澄液
を50mMのトリス（pH8.0）と20mMのジチオスレイトール
と10mMのMgCl2と60mMのNaClと0.05のノニデットｐ−40
と５μg/mLのオリゴデオキシチミジル酸と10μg/mLのポ
リリボアデニル酸と10μＭのデオキシチミジン三燐酸と
1mCiの［32P］チミジン ５′−トリホスフェートとを
含有する50μＬのカクテルに添加した。この混合物を37
℃にて２時間培養した。50μＬのカクテルを次いでジエ
チルアミノエチル（DEAE）紙にスポットし、乾燥させ、
２×SSC溶液で洗浄し（それぞれ10分間にわたり３
回）、および95％エタノールで洗浄し（それぞれ５分間
にわたり２回）、乾燥させ、次いで放射線写真フィルム
に−80℃にて18〜24時間にわたり露出させた。各フィル
タを切断し、最終的定量をシンチレーション分光光度法
により行った。
オエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの作
用 Sup T1細胞を２−5Aもしくはホスホロチオエート／
ホスホジエステル誘導体により300μＭにて６時間処理
し、次いでHIV−１を約0.1の感染多重度（M.O.I.）にて
感染させた。アデノシンおよびアデニンを900μＭにて
試験した。感染後の96時間にて培養上澄液を取出し、HI
V−１ RT活性をヘンダーソン等、バイロロジー、第182
巻、第186〜198頁（1991）に記載されたように３反復で
分析した。この方法を要約すれば、25μＬの培養上澄液
を50mMのトリス（pH8.0）と20mMのジチオスレイトール
と10mMのMgCl2と60mMのNaClと0.05のノニデットｐ−40
と５μg/mLのオリゴデオキシチミジル酸と10μg/mLのポ
リリボアデニル酸と10μＭのデオキシチミジン三燐酸と
1mCiの［32P］チミジン ５′−トリホスフェートとを
含有する50μＬのカクテルに添加した。この混合物を37
℃にて２時間培養した。50μＬのカクテルを次いでジエ
チルアミノエチル（DEAE）紙にスポットし、乾燥させ、
２×SSC溶液で洗浄し（それぞれ10分間にわたり３
回）、および95％エタノールで洗浄し（それぞれ５分間
にわたり２回）、乾燥させ、次いで放射線写真フィルム
に−80℃にて18〜24時間にわたり露出させた。各フィル
タを切断し、最終的定量をシンチレーション分光光度法
により行った。
HIV−１ RT活性に関するデータを第２表に示す。示
したように、三量体 ApASp ＊ＡがHIV−１ RT活性の最
も効率的な抑制剤であった（78％）。これに対し、その
PRエナンチオマー、すなわちApARp ＊ＡはHIV−１逆転写
を31％抑制した。同様に、２′−末端結合に隣接してPS
ホスホロチオエート／ホスホジエステル結合を有する
四量体、すなわちApApASp ＊ＡもRT活性を62％抑制する
ことができたのに対し、そのPR対応物は僅か38％しかこ
の活性を抑制する効果がなかった。
したように、三量体 ApASp ＊ＡがHIV−１ RT活性の最
も効率的な抑制剤であった（78％）。これに対し、その
PRエナンチオマー、すなわちApARp ＊ＡはHIV−１逆転写
を31％抑制した。同様に、２′−末端結合に隣接してPS
ホスホロチオエート／ホスホジエステル結合を有する
四量体、すなわちApApASp ＊ＡもRT活性を62％抑制する
ことができたのに対し、そのPR対応物は僅か38％しかこ
の活性を抑制する効果がなかった。
本発明の化合物は、適する医薬用もしくは農業用キャ
リヤと組合せて抗ウィルス組成物を形成することができ
る。
リヤと組合せて抗ウィルス組成物を形成することができ
る。
医薬用途につき本発明の化合物はたとえば溶液、懸濁
液、錠剤、カプセル、軟膏、エリキシルおよび注射用組
成物など医薬上許容しうるキャリヤに吸収させることが
できる。これらはウィルス感染に罹患した患者に投与す
ることができる。投与量は感染の種類および程度、病気
段階および全身投与する場合は感染患者の体格および体
重に依存する。
液、錠剤、カプセル、軟膏、エリキシルおよび注射用組
成物など医薬上許容しうるキャリヤに吸収させることが
できる。これらはウィルス感染に罹患した患者に投与す
ることができる。投与量は感染の種類および程度、病気
段階および全身投与する場合は感染患者の体格および体
重に依存する。
化合物は一般に水溶性塩として投与される。医薬上許
容しうる水溶性塩はたとえば活性化合物のナトリウム
塩、カリウム塩もしくはアンモニウム塩を包含する。こ
れらは水または塩水溶液に容易に溶解する。たとえば病
理学的用途の好適処方物は、塩型における所望化合物の
塩水溶液からなっている。さらに処方物はたとえば砂糖
もしくは蛋白質のような物質をも含有して浸透圧バラン
スを維持することができる。化合物の塩型が、酸型の化
合物の比較的高い酸度（約pH3）のため好適である。
容しうる水溶性塩はたとえば活性化合物のナトリウム
塩、カリウム塩もしくはアンモニウム塩を包含する。こ
れらは水または塩水溶液に容易に溶解する。たとえば病
理学的用途の好適処方物は、塩型における所望化合物の
塩水溶液からなっている。さらに処方物はたとえば砂糖
もしくは蛋白質のような物質をも含有して浸透圧バラン
スを維持することができる。化合物の塩型が、酸型の化
合物の比較的高い酸度（約pH3）のため好適である。
本発明の化合物はたとえば単純ヘルペス、リノウィル
ス、肝炎および他の肝炎ウィルス族の感染、エプスタイ
ン・バール ウィルス、麻疹ウィルス、多発性硬化症
（ウィルス作用物質により生じうる）のようなウィルス
感染、並びにたとえば皮膚Ｔ細胞リンパ腫を引起すHIV
−１、セザリー リンパ腫を引起すHIV−２および後天
的免疫不全症候群（「AIDS」）を引起すHIV−３のよう
な各種のヒト免疫不全症ウィルス（「HIV」）からヒト
および動物を処置または予防するために使用することが
できる。本発明の化合物はHIV−１誘発の合胞体形成を
抑制する。
ス、肝炎および他の肝炎ウィルス族の感染、エプスタイ
ン・バール ウィルス、麻疹ウィルス、多発性硬化症
（ウィルス作用物質により生じうる）のようなウィルス
感染、並びにたとえば皮膚Ｔ細胞リンパ腫を引起すHIV
−１、セザリー リンパ腫を引起すHIV−２および後天
的免疫不全症候群（「AIDS」）を引起すHIV−３のよう
な各種のヒト免疫不全症ウィルス（「HIV」）からヒト
および動物を処置または予防するために使用することが
できる。本発明の化合物はHIV−１誘発の合胞体形成を
抑制する。
これら化合物は放射線、発癌性物質もしくはウィルス
性物質により引起される皮膚癌を処置すべく局部投与す
ることができる。この種の皮膚癌は皮膚Ｔ細胞リンパ
腫、セザリー リンパ腫、キセロデルマ・ピグメントシ
ウム、アタクシア・テラジエクタシアおよびブルーム症
候群を包含する。本発明の化合物を含有する充分量の製
剤を病巣もしくは感染領域を覆うよう施す。活性物質の
有効濃度は約10-3〜10-5Mの範囲であり、10-4Mが好適で
ある。
性物質により引起される皮膚癌を処置すべく局部投与す
ることができる。この種の皮膚癌は皮膚Ｔ細胞リンパ
腫、セザリー リンパ腫、キセロデルマ・ピグメントシ
ウム、アタクシア・テラジエクタシアおよびブルーム症
候群を包含する。本発明の化合物を含有する充分量の製
剤を病巣もしくは感染領域を覆うよう施す。活性物質の
有効濃度は約10-3〜10-5Mの範囲であり、10-4Mが好適で
ある。
本発明の化合物は植物感染性ウィルス（特にタバコ
モザイク ウィルス）並びにカブ、キウリ、ランおよび
他の植物に壊死をもたらす他のウィルスを処理すべく使
用することもできる。この種のウィルスは限定はしない
がタバコ脈管斑点ウィルス、水泡性口内炎ウィルス、ワ
クチン ウィルス、カブ壊死ウィルスおよびシンビジウ
ム ラン ウィルスを包含する。
モザイク ウィルス）並びにカブ、キウリ、ランおよび
他の植物に壊死をもたらす他のウィルスを処理すべく使
用することもできる。この種のウィルスは限定はしない
がタバコ脈管斑点ウィルス、水泡性口内炎ウィルス、ワ
クチン ウィルス、カブ壊死ウィルスおよびシンビジウ
ム ラン ウィルスを包含する。
これら化合物は葉表面の剥脱、アロゾルスプレー、土
壌の処理、噴霧もしくは散布など局部施用により植物に
有効に投与することができる。
壌の処理、噴霧もしくは散布など局部施用により植物に
有効に投与することができる。
効果的な抗ウィルス組成物は、本発明による化合物の
１種もしくはそれ以上を農業用途に適するキャリヤ物質
と組合せて形成することができる。個々の立体異性体も
医薬用途に好適であるが、１種もしくはそれ以上の立体
異性体の混合物を農業用途に使用することができる。さ
らに活性化合物はたとえばアブラムシ、アザミウマおよ
びシロバエなどウィルスを植物に運ぶ昆虫ベクターに噴
霧して投与することもできる。投与量は感染の程度に依
存する。
１種もしくはそれ以上を農業用途に適するキャリヤ物質
と組合せて形成することができる。個々の立体異性体も
医薬用途に好適であるが、１種もしくはそれ以上の立体
異性体の混合物を農業用途に使用することができる。さ
らに活性化合物はたとえばアブラムシ、アザミウマおよ
びシロバエなどウィルスを植物に運ぶ昆虫ベクターに噴
霧して投与することもできる。投与量は感染の程度に依
存する。
本発明の化合物は発芽前の植物種子に施して、生殖質
に含まれるウィルスを抑制することもできる。種子は化
合物の１種もしくはそれ以上を含有するポリエチレング
リコール（「PEG」）の溶液に浸漬させることができ
る。PEGは種子を生理学上活性および停止状態にする。P
EGに対する活性化合物の相対的濃度は処理する種子の種
類に依存する。
に含まれるウィルスを抑制することもできる。種子は化
合物の１種もしくはそれ以上を含有するポリエチレング
リコール（「PEG」）の溶液に浸漬させることができ
る。PEGは種子を生理学上活性および停止状態にする。P
EGに対する活性化合物の相対的濃度は処理する種子の種
類に依存する。
植物は、約10-1〜約10-2M濃度の活性成分を含有する
水性処方物によって効果的に処理することができる。本
発明の化合物は極めて低濃度で施すことができる。植物
表面に対する活性成分の有効量は植物表面積1cm2当たり
約10-8〜約10-12モルであり、1cm2当たり約10-10〜約10
-12モルが好適である。1,000cm2の典型的タバコ植物に
つき、10-5Mの化合物が効果的である。この割合にて、
１ポンドの活性成分で２×108のタバコ植物を処理する
のに充分である。
水性処方物によって効果的に処理することができる。本
発明の化合物は極めて低濃度で施すことができる。植物
表面に対する活性成分の有効量は植物表面積1cm2当たり
約10-8〜約10-12モルであり、1cm2当たり約10-10〜約10
-12モルが好適である。1,000cm2の典型的タバコ植物に
つき、10-5Mの化合物が効果的である。この割合にて、
１ポンドの活性成分で２×108のタバコ植物を処理する
のに充分である。
農業用途につき、化合物はは水溶性塩（たとえばアン
モニウム塩もしくはカリウム塩）として有利に投与され
る。ナトリウム塩は食用植物を処置する際に一般に回避
される。
モニウム塩もしくはカリウム塩）として有利に投与され
る。ナトリウム塩は食用植物を処置する際に一般に回避
される。
本発明の化合物は水に対し特にこのような低濃度にて
容易に溶解する。農業用の水性処方物は必要に応じ粘着
剤および／またはUV安定剤を含有することができる。こ
の種の作用物質は当業者に周知されている。脂肪酸（１
％）が展延粘着剤として有用である。効果的UV安定剤は
たとえばｐ−アミノ安息香酸を包含する。
容易に溶解する。農業用の水性処方物は必要に応じ粘着
剤および／またはUV安定剤を含有することができる。こ
の種の作用物質は当業者に周知されている。脂肪酸（１
％）が展延粘着剤として有用である。効果的UV安定剤は
たとえばｐ−アミノ安息香酸を包含する。
哺乳動物における抗ウィルス用途につき、本発明の化
合物はたとえば静脈内、動脈内、筋肉内、皮下のように
非経口的に或いは抗癌剤として投与する場合は腫瘍内に
投与される。抗ウィルス療法につき好適な投与ルートは
静脈内注射である。本発明の化合物は極めて低濃度にて
哺乳動物に投与することができる。実際の投与量は、処
置の種類が予防または治療のいずれであるかに応じ患者
の体格および体重、患者の年令、健康および性別、投与
ルート、病気の種類および段階、並びに他の因子を考慮
することができる。他の２−5A同族体を含めインビボの
試験に基づき活性成分の毎日の有効量は体重70kg（約15
2ポンド）当たり約0.25g〜体重70kg当たり約2.5gの範囲
である。好適な１日投与量は体重70kg当たり約0.5gであ
る。当業者は適する投与量および特定の状況や患者のニ
ーズに適する投与方式を容易に得ることができる。
合物はたとえば静脈内、動脈内、筋肉内、皮下のように
非経口的に或いは抗癌剤として投与する場合は腫瘍内に
投与される。抗ウィルス療法につき好適な投与ルートは
静脈内注射である。本発明の化合物は極めて低濃度にて
哺乳動物に投与することができる。実際の投与量は、処
置の種類が予防または治療のいずれであるかに応じ患者
の体格および体重、患者の年令、健康および性別、投与
ルート、病気の種類および段階、並びに他の因子を考慮
することができる。他の２−5A同族体を含めインビボの
試験に基づき活性成分の毎日の有効量は体重70kg（約15
2ポンド）当たり約0.25g〜体重70kg当たり約2.5gの範囲
である。好適な１日投与量は体重70kg当たり約0.5gであ
る。当業者は適する投与量および特定の状況や患者のニ
ーズに適する投与方式を容易に得ることができる。
効果的処置方式は２日間にわたる毎日の投与を含むと
予想される。処置は、病状が実質的に克服されるまで少
なくとも継続される。
予想される。処置は、病状が実質的に克服されるまで少
なくとも継続される。
好ましくは治療の終末点は、ウィルスDNAの持続的存
在を試験して決定される。この種の試験はポリメラーゼ
連鎖反応（PCR）により行うことができ、ウィルスDNAの
存在を慣用のPCRにより分析する。ウィルスDNAの増幅に
適するヌクレオチド配列のPCRプライマーを公知のウィ
ルス ヌクレオチド配列から作成することができる。試
験のためのDNAを得るには、患者の末梢血液単核細胞を
適する溶解剤（たとえばNP−40）で溶解させる。
在を試験して決定される。この種の試験はポリメラーゼ
連鎖反応（PCR）により行うことができ、ウィルスDNAの
存在を慣用のPCRにより分析する。ウィルスDNAの増幅に
適するヌクレオチド配列のPCRプライマーを公知のウィ
ルス ヌクレオチド配列から作成することができる。試
験のためのDNAを得るには、患者の末梢血液単核細胞を
適する溶解剤（たとえばNP−40）で溶解させる。
或いは、ウィルスの持続的存在に関する試験は標的ウ
ィルス蛋白コートの蛋白抗原に対する公知モノクローナ
ルもしくはポリクローナル抗体を用いる抗原−抗体分析
により行うことができる。たとえば抗原−抗体分析を用
いて、抗原HIV蛋白コートにおける任意の蛋白抗原（た
とえばgp120、p17もしくはp24）を検出することができ
る。さらに、標的抗原はコート蛋白抗原に限定されな
い。抗血清は、適する非コート蛋白抗原（たとえばHIV
逆転写酵素（RT）分子）を標的とすることができる。HI
V RTに対するモノクローナル抗体は公知である［ソボ
ル等、バイオケミストリー、第30巻、第10623〜10631頁
（1991）］。
ィルス蛋白コートの蛋白抗原に対する公知モノクローナ
ルもしくはポリクローナル抗体を用いる抗原−抗体分析
により行うことができる。たとえば抗原−抗体分析を用
いて、抗原HIV蛋白コートにおける任意の蛋白抗原（た
とえばgp120、p17もしくはp24）を検出することができ
る。さらに、標的抗原はコート蛋白抗原に限定されな
い。抗血清は、適する非コート蛋白抗原（たとえばHIV
逆転写酵素（RT）分子）を標的とすることができる。HI
V RTに対するモノクローナル抗体は公知である［ソボ
ル等、バイオケミストリー、第30巻、第10623〜10631頁
（1991）］。
さらに、処置中または処置後の感染性ウィルスの存在
に関する試験は、患者の血流におけるウィルス負荷を評
価する分析により行うこともできる。これは合胞体形成
のレベルを決定することにより、すなわちウィルス粒子
の形成を測定して行うことができる［ヘンダーソン等、
バイロロジー、第182巻、第186〜198頁（1994）に要約
された方法参照］。
に関する試験は、患者の血流におけるウィルス負荷を評
価する分析により行うこともできる。これは合胞体形成
のレベルを決定することにより、すなわちウィルス粒子
の形成を測定して行うことができる［ヘンダーソン等、
バイロロジー、第182巻、第186〜198頁（1994）に要約
された方法参照］。
慣用のキャリヤと共に投与する他、本発明の化合物は
各種の特定オリゴヌクレオチドもしくは核酸供給技術に
よって投与することもできる。２−5Aおよびその同族体
はたとえばユニラメラ リポソームのような各種の包封
状態に好適に包封され、モノクローナル抗体により細胞
に供給されている［ベイヤード等、ヨーロピアン・ジャ
ーナル・バイオケミストリー、第151巻、第319〜325頁
（1985）］。再構成されたセンダイ・ウィルス・エンベ
ロプがRNAおよびDNAを細胞に供給すべく好適に使用され
ている［アラド等、バイオケミカル・バイオフィジカル
・アクタ、第859巻、第88〜94頁（1986）］。さらに、
ウィルス エンペロプはセンダイ ウィルスにのみ限定
されず、任意のレトロウィルス アンフォトロフィック
粒子における包封を包含する。たとえばHIV エンベロ
プは、非感染性HIV粒子の外側蛋白質コートの任意の部
分または全部から形成させることができる。gp120のよ
うな粒子を公知の組換技術によりクローン化することが
できる。これら技術を、本発明の２′,5′−ホスホロチ
オエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートを細
胞中へ導入すべく用いることができる。さらに本発明の
化合物をプロドラグとして投与することも考えられ、親
油性基をたとえばコア化合物の５′−末端ヒドキシル基
に結合させる。
各種の特定オリゴヌクレオチドもしくは核酸供給技術に
よって投与することもできる。２−5Aおよびその同族体
はたとえばユニラメラ リポソームのような各種の包封
状態に好適に包封され、モノクローナル抗体により細胞
に供給されている［ベイヤード等、ヨーロピアン・ジャ
ーナル・バイオケミストリー、第151巻、第319〜325頁
（1985）］。再構成されたセンダイ・ウィルス・エンベ
ロプがRNAおよびDNAを細胞に供給すべく好適に使用され
ている［アラド等、バイオケミカル・バイオフィジカル
・アクタ、第859巻、第88〜94頁（1986）］。さらに、
ウィルス エンペロプはセンダイ ウィルスにのみ限定
されず、任意のレトロウィルス アンフォトロフィック
粒子における包封を包含する。たとえばHIV エンベロ
プは、非感染性HIV粒子の外側蛋白質コートの任意の部
分または全部から形成させることができる。gp120のよ
うな粒子を公知の組換技術によりクローン化することが
できる。これら技術を、本発明の２′,5′−ホスホロチ
オエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートを細
胞中へ導入すべく用いることができる。さらに本発明の
化合物をプロドラグとして投与することも考えられ、親
油性基をたとえばコア化合物の５′−末端ヒドキシル基
に結合させる。
２′,5′−ホスホロチオエート 四量体アデニレートの
接合 本発明の２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエ
ステル 四量体はキャリヤ（ポリ）Ｌ−リジンと接合す
ることができる。（ポリ）Ｌ−リジンは、２′,5′オリ
ゴアデニレートおよび同族体を無傷細胞に導入するため
の有効なベクターであることが示されている［ベイヤー
ド等、バイオケミストリー、第25巻、第3730〜3736頁
（1986）］。三量体分子に対するポリ（Ｌ−リジン）の
接合は、２′−末端リボシル部分の破壊およびそれに続
く分子の失活により可能でない。ポリ（Ｌ−リジン）に
対する接合は、本発明による２′,5′−ホスホロチオエ
ート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの効率的
な細胞内輸送を可能にすると共に、複合体内に良好な生
物学的活性に必要と思われる三量体部分を無傷で保持す
ることができる。
接合 本発明の２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエ
ステル 四量体はキャリヤ（ポリ）Ｌ−リジンと接合す
ることができる。（ポリ）Ｌ−リジンは、２′,5′オリ
ゴアデニレートおよび同族体を無傷細胞に導入するため
の有効なベクターであることが示されている［ベイヤー
ド等、バイオケミストリー、第25巻、第3730〜3736頁
（1986）］。三量体分子に対するポリ（Ｌ−リジン）の
接合は、２′−末端リボシル部分の破壊およびそれに続
く分子の失活により可能でない。ポリ（Ｌ−リジン）に
対する接合は、本発明による２′,5′−ホスホロチオエ
ート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの効率的
な細胞内輸送を可能にすると共に、複合体内に良好な生
物学的活性に必要と思われる三量体部分を無傷で保持す
ることができる。
複合体は、２つのアルデヒド基を四量体の２′−末端
にリボース残基のα−グルコール基の周期的酸化により
導入して形成される。次いで、得られたアルデヒド基は
ランダムにポリ（Ｌ−リジン）のリジン残基におけるε
−アミノ基にシッフ塩基形成によりランダム結合され、
次いでシアノ硼水素化ナトリウムによりpH8.0にて還元
される。この手順は２′,3′−末端リボース環をモルホ
リン構造に変換させる。ポリ（Ｌ−リジン）ペプチドは
好ましくは約60〜約70個のリジン残基を有する。約５〜
約10個のリジン残基がこのようにして四量体部分にカッ
プリングする。得られる２′,5′−ホスホロチオエート
／ホスホジエステル／（ポリ）−Ｌ−リジン複合体を次
いでセファデックスＧ−50カラムにおけるゲル透過クロ
マトグラフィーにより単離することができる。
にリボース残基のα−グルコール基の周期的酸化により
導入して形成される。次いで、得られたアルデヒド基は
ランダムにポリ（Ｌ−リジン）のリジン残基におけるε
−アミノ基にシッフ塩基形成によりランダム結合され、
次いでシアノ硼水素化ナトリウムによりpH8.0にて還元
される。この手順は２′,3′−末端リボース環をモルホ
リン構造に変換させる。ポリ（Ｌ−リジン）ペプチドは
好ましくは約60〜約70個のリジン残基を有する。約５〜
約10個のリジン残基がこのようにして四量体部分にカッ
プリングする。得られる２′,5′−ホスホロチオエート
／ホスホジエステル／（ポリ）−Ｌ−リジン複合体を次
いでセファデックスＧ−50カラムにおけるゲル透過クロ
マトグラフィーにより単離することができる。
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオ
リゴアデニレート／ポリ（Ｌ−リジン）複合体は次式を
有する： ［式中、ｑは約60〜約70の整数であり、各Ｒは独立して
Ｒ′または である］。
リゴアデニレート／ポリ（Ｌ−リジン）複合体は次式を
有する： ［式中、ｑは約60〜約70の整数であり、各Ｒは独立して
Ｒ′または である］。
Ｒ基の約５〜10個はＲ′で構成される。Ｒ′基は次式 ［式中、ｍは０、１、２もしくは３であり;R3、R4およ
びR5は独立して酸素および硫黄の群から選択され、ただ
しR3、R4およびR5の全部が酸素であってはならず、さら
にR3、R4およびR5の全部が硫黄であってもならない］ を有する。
びR5は独立して酸素および硫黄の群から選択され、ただ
しR3、R4およびR5の全部が酸素であってはならず、さら
にR3、R4およびR5の全部が硫黄であってもならない］ を有する。
複合体はベイヤード等、バイオケミストリー、第25
巻、第3730〜3736頁（1986）の方法により有利に作成す
ることができる。
巻、第3730〜3736頁（1986）の方法により有利に作成す
ることができる。
実施例７ ポリ（Ｌ−リジン）/2′,5′−ホスホロチオエート／ホ
スホジエステル オリゴアデニレート複合体の作成 ４−μＬのメタ過沃素酸ナトリウム（0.1M酢酸ナトリ
ウム緩衝液（pH4.75）における0.6μモル）を400μＬの
蒸留水における２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホ
ジエステル四量体アデニレートの氷冷溶液に添加した。
この反応混合物を氷上で30分間撹拌し、400μＬのポリ
（Ｌ−リジン）（0.2M燐酸塩緩衝液（pH8.0）における
0.14μモル）および200μＬのシアノ硼水素化ナトレウ
ム（0.2M燐酸塩緩衝液（pH8.0）における20μモル）を
添加した。混合物を室温にて２時間温置し、次いで0.1M
酢酸ナトリウム緩衝液（pH4.75）で平衡化されたセファ
デックスＧ−50カラムに充填した。各フラクションをそ
のホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデ
ニレート／ポリ（Ｌ−リジン）含有量につきラウリー
等、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第19
3巻、第265〜275頁（1951）に記載された方法で260nmに
おける吸収により分析した。
スホジエステル オリゴアデニレート複合体の作成 ４−μＬのメタ過沃素酸ナトリウム（0.1M酢酸ナトリ
ウム緩衝液（pH4.75）における0.6μモル）を400μＬの
蒸留水における２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホ
ジエステル四量体アデニレートの氷冷溶液に添加した。
この反応混合物を氷上で30分間撹拌し、400μＬのポリ
（Ｌ−リジン）（0.2M燐酸塩緩衝液（pH8.0）における
0.14μモル）および200μＬのシアノ硼水素化ナトレウ
ム（0.2M燐酸塩緩衝液（pH8.0）における20μモル）を
添加した。混合物を室温にて２時間温置し、次いで0.1M
酢酸ナトリウム緩衝液（pH4.75）で平衡化されたセファ
デックスＧ−50カラムに充填した。各フラクションをそ
のホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデ
ニレート／ポリ（Ｌ−リジン）含有量につきラウリー
等、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第19
3巻、第265〜275頁（1951）に記載された方法で260nmに
おける吸収により分析した。
ポリ（Ｌ−リジン）に対する２′,5′−ホスホロチオ
エート／ホスホジエステル 四量体の接合は残余の３個
の２′,5′−結合ホスホロチオエート／ホスホジエステ
ル アデニル酸残基を最適のRNアーゼＬ結合および活性
化につき無傷に残す。
エート／ホスホジエステル 四量体の接合は残余の３個
の２′,5′−結合ホスホロチオエート／ホスホジエステ
ル アデニル酸残基を最適のRNアーゼＬ結合および活性
化につき無傷に残す。
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリ
ゴアデニレートのリポソーム包封 本発明による化合物の包封は、細胞中へ導入するため
の他の魅力的な非破壊的技術である。リポソーム包封は
コンドロシ等、FEBSレタース、第120巻、第37〜40頁（1
980）に記載された技術にしたがって有利に行うことが
できる。
ゴアデニレートのリポソーム包封 本発明による化合物の包封は、細胞中へ導入するため
の他の魅力的な非破壊的技術である。リポソーム包封は
コンドロシ等、FEBSレタース、第120巻、第37〜40頁（1
980）に記載された技術にしたがって有利に行うことが
できる。
実施例８ ２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリ
ゴアデニレートが充填された大型ユニラメラ液胞（リポ
ソーム）の作成 要約して、牛脳からの燐脂質混合物（シグマ・ケミカ
ル・カンパニー社、80〜85％のホスファチジルセリンと
残余の15％の他の脳脂質で構成されたフォルヒ フラク
ションIII:35mg）を5mLの緩衝液Ａ［0.1M NaCl 2mMヒ
スチジン、2mM Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メタ
ル−２−アミノエタンスルホン酸（「TES」）、0.4mM
EDTA（pH7.4）］に回動によって懸濁させた。懸濁物を
０℃にて10分間にわたり窒素下で音波処理した。懸濁物
をさらに、125μＬの800mM CaCl2の添加により20mMま
でCa++の最終的濃度を調節した後に37℃にて１時間温置
した。得られた沈殿物を遠心分離（2500×ｇ、10分間）
により沈降させ、回動させ、さらに100μＬの１×10-4M
の２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル
オリゴアデニレートと混合し、これを燐酸塩緩衝塩水に
溶解させた。次いでEDTAの最終濃度を400μＬの緩衝液
Ｂ［150mM EDTA（pH7.4）、0.1M NaCl、2mMヒスチジ
ン、2mM TES］の添加により120mMに調整した。この混
合物を37℃で30分間温置した後、リポソームが生成し
た。過剰のEDTAと非包封成分とを除去し、これにはリポ
ソームを燐酸塩緩衝塩水で平衡化されたセファデックス
Ｇ−25カラムに通過させた。２′,5′−ホスホロチオエ
ート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの約10％
がこの方法によりリポソーム中に包封された。リポソー
ム懸濁物は作成後の１週間にわたり４℃にて安定であ
る。
ゴアデニレートが充填された大型ユニラメラ液胞（リポ
ソーム）の作成 要約して、牛脳からの燐脂質混合物（シグマ・ケミカ
ル・カンパニー社、80〜85％のホスファチジルセリンと
残余の15％の他の脳脂質で構成されたフォルヒ フラク
ションIII:35mg）を5mLの緩衝液Ａ［0.1M NaCl 2mMヒ
スチジン、2mM Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メタ
ル−２−アミノエタンスルホン酸（「TES」）、0.4mM
EDTA（pH7.4）］に回動によって懸濁させた。懸濁物を
０℃にて10分間にわたり窒素下で音波処理した。懸濁物
をさらに、125μＬの800mM CaCl2の添加により20mMま
でCa++の最終的濃度を調節した後に37℃にて１時間温置
した。得られた沈殿物を遠心分離（2500×ｇ、10分間）
により沈降させ、回動させ、さらに100μＬの１×10-4M
の２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル
オリゴアデニレートと混合し、これを燐酸塩緩衝塩水に
溶解させた。次いでEDTAの最終濃度を400μＬの緩衝液
Ｂ［150mM EDTA（pH7.4）、0.1M NaCl、2mMヒスチジ
ン、2mM TES］の添加により120mMに調整した。この混
合物を37℃で30分間温置した後、リポソームが生成し
た。過剰のEDTAと非包封成分とを除去し、これにはリポ
ソームを燐酸塩緩衝塩水で平衡化されたセファデックス
Ｇ−25カラムに通過させた。２′,5′−ホスホロチオエ
ート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの約10％
がこの方法によりリポソーム中に包封された。リポソー
ム懸濁物は作成後の１週間にわたり４℃にて安定であ
る。
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリ
ゴアデニレートを含有する再構成センダイ ウィルス
エンベロプの作成 再構成されたセンダイ ウィルス エンベロプをポリ
ヌクレオチドを細胞中へ導入するための効率的ベヒクル
として使用することができる。アラド等、バイオヒミカ
・エ・バイフィジカ・アクタ、第859巻、第88〜94頁（1
986）は再構成されたセンダイ ウィルスエンベロプを
用いてポリ（Ｉ）・ポリ（Ｃ）を培養細胞中へ導入する
ことを開示している。前記再構成センダイウィルス エ
ンベロプの融合は、受容体細胞質中への包封巨大分子の
導入をもたらす。再構成センダイ ウィルス エンベロ
プは、無傷センダイ ウィルス粒子の洗剤可溶化によっ
て得ることができる。再構成エンベロプはウィルス エ
ンベロプの燐脂質とそのグリコ蛋白とよりなる融合性小
胞であって、ウィルス ゲノムRNAを欠如する。
ゴアデニレートを含有する再構成センダイ ウィルス
エンベロプの作成 再構成されたセンダイ ウィルス エンベロプをポリ
ヌクレオチドを細胞中へ導入するための効率的ベヒクル
として使用することができる。アラド等、バイオヒミカ
・エ・バイフィジカ・アクタ、第859巻、第88〜94頁（1
986）は再構成されたセンダイ ウィルスエンベロプを
用いてポリ（Ｉ）・ポリ（Ｃ）を培養細胞中へ導入する
ことを開示している。前記再構成センダイウィルス エ
ンベロプの融合は、受容体細胞質中への包封巨大分子の
導入をもたらす。再構成センダイ ウィルス エンベロ
プは、無傷センダイ ウィルス粒子の洗剤可溶化によっ
て得ることができる。再構成エンベロプはウィルス エ
ンベロプの燐脂質とそのグリコ蛋白とよりなる融合性小
胞であって、ウィルス ゲノムRNAを欠如する。
融合媒介の微小注入に関する再構成センダイ ウィル
ス エンベロプ中への本発明による化合物の混入はアラ
ド等、バイオヒミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ、第
859巻、第88〜94頁（1986）の方法にしたがって行うこ
とができる。要するに、センダイ ウィルス粒子（1.5m
g蛋白質）のペレットを、10％トリトンＸ−100と100mM
のNaClと50mMのトリス−HCl（pH7.4）と0.1mMの弗化フ
ェニルメチルスルホニルとを含有する30μＬの溶液（ト
リトンＸ−100:蛋白質の比、2:1、w/w）に溶解させた。
遠心分離の後に得られた透明な上澄液に溶液Ａ（160mM
NaCl、20mMトリス−HCl（pH7.4））に溶解された
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オ
リゴアデニレートを添加して、５−20mg/mLの活性成分
の最終濃度および150μＬの最終容積を与えた。トリト
ンＸ−100を40mgのSM−２バイオビーズの直接的添加に
より上澄液から除去した。得られる濁った懸濁物（再構
成センダイウィルスエンベロプを含有）を100,000×ｇ
にて１時間にわたり遠心分離した。初期ウィルス 蛋白
質の約10％を含有するペレットを次いで溶液Ａに懸濁さ
せて25μg/mLの最終蛋白質濃度を与えた。
ス エンベロプ中への本発明による化合物の混入はアラ
ド等、バイオヒミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ、第
859巻、第88〜94頁（1986）の方法にしたがって行うこ
とができる。要するに、センダイ ウィルス粒子（1.5m
g蛋白質）のペレットを、10％トリトンＸ−100と100mM
のNaClと50mMのトリス−HCl（pH7.4）と0.1mMの弗化フ
ェニルメチルスルホニルとを含有する30μＬの溶液（ト
リトンＸ−100:蛋白質の比、2:1、w/w）に溶解させた。
遠心分離の後に得られた透明な上澄液に溶液Ａ（160mM
NaCl、20mMトリス−HCl（pH7.4））に溶解された
２′,5′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オ
リゴアデニレートを添加して、５−20mg/mLの活性成分
の最終濃度および150μＬの最終容積を与えた。トリト
ンＸ−100を40mgのSM−２バイオビーズの直接的添加に
より上澄液から除去した。得られる濁った懸濁物（再構
成センダイウィルスエンベロプを含有）を100,000×ｇ
にて１時間にわたり遠心分離した。初期ウィルス 蛋白
質の約10％を含有するペレットを次いで溶液Ａに懸濁さ
せて25μg/mLの最終蛋白質濃度を与えた。
合成法、調製法および分析法に関し引用した引例を全
てここに参考のため引用する。
てここに参考のため引用する。
以上、本発明を説明したが、本発明の思想および範囲
を逸脱することなく多くの改変をなしうることが当業者
には了解されよう。
を逸脱することなく多くの改変をなしうることが当業者
には了解されよう。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 フライデラー，ボルフガング ドイツ国 デイ−7750 コンスタンツ リンダウアー ストラッセ 47 (56)参考文献 特表 平４−500795（ＪＰ，Ａ) Ｃｈｅｍｉｃａ Ｓｃｒｉｐｔａ，Ｖ ｏｌ．26，Ｎｏ．１（1986）ｐ．141− 145 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．15，Ｎｏ．23 （1987）ｐ．9933−9943 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ｅａｒｃｈ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅ ｒｉｅｓ，Ｎｏ．24（1991）ｐ．67−70 Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．，Ｖｏｌ. 16，Ｎｏ．11（1990）ｐ．1537−1544 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07H 21/00 - 21/04 A61K 31/7125 A61K 9/127 A61K 38/00 C07K 14/47 ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】式、 【化１】 ［式中、ｍは０、１、２若しくは３であり;nは０及び１
の群から選択され;R及びR1は独立して酸素及び硫黄の群
から選択され、但し、 （ｉ）ｎが０のとき、Ｒは酸素でなければならず、及び （ii）ｎが１のとき、Ｒ及びR1は両者ともに硫黄であっ
てはならない］ の化合物又はその水溶性塩。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US30627394A | 1994-09-14 | 1994-09-14 | |
| US306,273 | 1994-09-14 | ||
| PCT/US1995/010683 WO1996008256A1 (en) | 1994-09-14 | 1995-08-22 | 2',5' phosphorothioate/phosphodiester oligoadenylates and antiviral uses thereof |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000314512A Division JP2001172185A (ja) | 1994-09-14 | 2000-10-13 | ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10502666A JPH10502666A (ja) | 1998-03-10 |
| JP3142574B2 true JP3142574B2 (ja) | 2001-03-07 |
Family
ID=23184567
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP08510198A Expired - Fee Related JP3142574B2 (ja) | 1994-09-14 | 1995-08-22 | ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 |
| JP2000314512A Pending JP2001172185A (ja) | 1994-09-14 | 2000-10-13 | ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000314512A Pending JP2001172185A (ja) | 1994-09-14 | 2000-10-13 | ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5863905A (ja) |
| EP (1) | EP0777485B1 (ja) |
| JP (2) | JP3142574B2 (ja) |
| AT (1) | ATE232732T1 (ja) |
| AU (1) | AU686005B2 (ja) |
| CA (1) | CA2199747C (ja) |
| DE (1) | DE69529680T2 (ja) |
| ES (1) | ES2188667T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ291713A (ja) |
| WO (1) | WO1996008256A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040127446A1 (en) * | 1992-05-14 | 2004-07-01 | Lawrence Blatt | Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis B virus and hepatitis C virus replication |
| US5587514A (en) * | 1993-11-08 | 1996-12-24 | Emory University | Diastereoselective synthesis of hydroxyethylene dipeptide isosteres |
| US6281201B1 (en) | 1997-06-12 | 2001-08-28 | Temple University- Of The Commonwealth System Of Higher Education | Base-modified derivatives of 2′,5′-oligoadenylate and antiviral uses thereof |
| US6362171B1 (en) | 1997-06-12 | 2002-03-26 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Aminoaklanoyl-linked conjugates of 2′,5′-oligoadenylate and antiviral uses thereof |
| US7186797B2 (en) * | 2001-08-10 | 2007-03-06 | Epix Pharmaceuticals, Inc. | Polypeptide conjugates with extended circulating half-lives |
| US7057062B2 (en) * | 2002-04-11 | 2006-06-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for manufacturing purified phosphorodiamidite |
| JP2005529957A (ja) * | 2002-06-13 | 2005-10-06 | ローディア インク． | リン・ジアミダイト合成物を生成する工程 |
| WO2004011481A1 (ja) * | 2002-07-30 | 2004-02-05 | Sankyo Co | ホスミドシン誘導体及びその製造方法 |
| AU2014219019B2 (en) | 2013-02-22 | 2020-04-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | Short interfering nucleic acid (siNA) molecules containing a 2' internucleoside linkage |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL58421A (en) * | 1979-10-09 | 1984-01-31 | Yeda Res & Dev | Production of(2'-5')oligoisoadenylate and pharmaceutical compositions containing it |
| US4464359A (en) * | 1981-04-10 | 1984-08-07 | Research Corporation | (2'-5')-Oligo (3'-deoxyadenylate) and derivatives thereof |
| GB2136435A (en) * | 1983-03-10 | 1984-09-19 | Julian Gordon | Specific anti-oligo (a) antibodies |
| US4824941A (en) * | 1983-03-10 | 1989-04-25 | Julian Gordon | Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems |
| US5550111A (en) * | 1984-07-11 | 1996-08-27 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof |
| US4859768A (en) * | 1984-07-11 | 1989-08-22 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Derivatives of 2', 5'-oligoadenylate and antiviral uses thereof |
| FR2567892B1 (fr) * | 1984-07-19 | 1989-02-17 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons |
| IL76233A (en) * | 1985-08-28 | 1994-05-30 | Yeda Res & Dev | DNA molecules coding for an enyzme having (2'-5') oligo a synthetase activity, expression vectors comprising them, microorganisms transfected by thevectors, and amino acid sequences corresponding to the DNA molecules |
| EP0217102B1 (en) * | 1985-08-28 | 1992-01-08 | Yeda Research And Development Company, Ltd. | Interferon-induced (2'-5') oligo a synthetase gene, mrna, cdna and enzymes having (2'-5') oligo a synthetase activity |
| US5188897A (en) * | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
| US4924624A (en) * | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
| US5532130A (en) * | 1993-07-20 | 1996-07-02 | Dyad Pharmaceutical Corporation | Methods and compositions for sequence-specific hybridization of RNA by 2'-5' oligonucleotides |
-
1995
- 1995-08-22 AU AU33329/95A patent/AU686005B2/en not_active Ceased
- 1995-08-22 EP EP95929637A patent/EP0777485B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-22 AT AT95929637T patent/ATE232732T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-08-22 ES ES95929637T patent/ES2188667T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-22 CA CA002199747A patent/CA2199747C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-22 JP JP08510198A patent/JP3142574B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-22 WO PCT/US1995/010683 patent/WO1996008256A1/en active IP Right Grant
- 1995-08-22 DE DE69529680T patent/DE69529680T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-22 NZ NZ291713A patent/NZ291713A/en unknown
-
1997
- 1997-01-08 US US08/780,244 patent/US5863905A/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-10-13 JP JP2000314512A patent/JP2001172185A/ja active Pending
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１１（１９９０）ｐ．１５３７−１５４４ |
| Ｃｈｅｍｉｃａ Ｓｃｒｉｐｔａ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．１（１９８６）ｐ．１４１−１４５ |
| Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ．２４（１９９１）ｐ．６７−７０ |
| Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．２３（１９８７）ｐ．９９３３−９９４３ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2199747C (en) | 2003-05-27 |
| WO1996008256A1 (en) | 1996-03-21 |
| AU686005B2 (en) | 1998-01-29 |
| EP0777485A4 (en) | 1998-12-02 |
| DE69529680T2 (de) | 2003-08-14 |
| JP2001172185A (ja) | 2001-06-26 |
| NZ291713A (en) | 1998-01-26 |
| CA2199747A1 (en) | 1996-03-21 |
| EP0777485A1 (en) | 1997-06-11 |
| JPH10502666A (ja) | 1998-03-10 |
| EP0777485B1 (en) | 2003-02-19 |
| ATE232732T1 (de) | 2003-03-15 |
| AU3332995A (en) | 1996-03-29 |
| ES2188667T3 (es) | 2003-07-01 |
| DE69529680D1 (de) | 2003-03-27 |
| US5863905A (en) | 1999-01-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2733777B2 (ja) | ２′，５′―ホスホロチオエ―トオリゴアデニレ―トおよびその抗ウィルス用途 | |
| US5643889A (en) | Cholesterol conjugates of 2'5'-oligoadenylate derivatives and antiviral uses thereof | |
| US5188897A (en) | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates | |
| US5550111A (en) | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof | |
| JP3142574B2 (ja) | ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 | |
| US6281201B1 (en) | Base-modified derivatives of 2′,5′-oligoadenylate and antiviral uses thereof | |
| US5700785A (en) | 3'-deoxy or 3'-O-substituted-2',5'-oligoadenylates as antiviral agents | |
| AU637975B2 (en) | Therapeutic uses of 2',5'-oligoadenylate derivatives | |
| KR100272326B1 (ko) | 이중 작용을 하는 2',5'-올리고아데닐레이트 항비루스성 유도체와 그의 용도 | |
| US6362171B1 (en) | Aminoaklanoyl-linked conjugates of 2′,5′-oligoadenylate and antiviral uses thereof | |
| NZ240169A (en) | The use of 2',5'-olioadenylates to treat virus infections |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |