JPH10502666A - ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）［式中、ｍは０、１、２もしくは３であり；ｎおよびｑは０および１の群から選択され、ただしｎおよびｑは両者ともに０であってはならず；Ｒ、Ｒ₁およびＲ₂は独立して互いに酸素および硫黄よりなる群から選択され、ただしＲ、Ｒ₁およびＲ₂の全部が酸素であってはならず、さらにＲ、Ｒ₁およびＲ₂の全部が硫黄であってもならない］を有する光学活性の抗ウィルス化合物につき開示する。これら化合物は向上した抗ウィルス活性および／または代謝安定性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】 ２′，５′ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートおよびその抗ウィルス用途 発明の分野 本発明は天然産の抗ウィルス性２′，５′−オリゴアデニレートの合成同族体 に関し、ここでヌクレオチド間ホスホジエステル結合の少なくとも１つは光学活 性のホスホロチオエート基で置換される。選択されたヌクレオチド間ホスホジエ ステル結合を有する化合物は抗ウィルス性および向上した代謝安定性を有する。 発明の背景 本発明の主題における全名称は長い用語を含む。当業者はオリゴアデニレート 同族体および関連用語を当業界で周知されたように簡略化するのが一般的である 。これら一般的かつ通常の簡略化につき以下説明し、本明細書の全体で用いるこ とができる。簡略化 ： ２−５Ａ、２′，５′−オリゴアデニレートもしくはｐ₃Ａ_n：アデニル酸と２ ′，５′−ホスホジエステル結合および５′−末端トリホスフェート基とのオリ ゴマー。 Ａ₂、Ａ₃およびＡ₄：アデニル酸と２′，５′−ホスホジエステル結合との二 量体、三量体および四量体。 ｐＡ₃、ｐｐＡ₃（もしくはｐ₂Ａ₃）、ｐｐｐＡ₃（もしくはｐ₃Ａ₃）：Ａ₃の５ ′−末端モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート。 ｐＡ₄、ｐｐＡ₄（もしくはｐ₂Ａ₄）、ｐｐｐＡ₄（もしくはｐ₃Ａ₄）：Ａ₄の５ ′−末端モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート。 ＡｐＡ：アデニル酸と２′，５′−ホスホジエステル結合との二量体。 Ａｐ^*Ａ：アデニル酸と２′，５′−ホスホロチオエート結合との二量体。 ＰＲ：ホスホロチオエート ヌクレオチド間結合におけるキラル燐原子を中心 とするＲ立体配置。 ＰＳ：ホスホロチオエート ヌクレオチド間結合におけるキラル燐原子を中心 とするＳ立体配置。 Ａ_Rp ^*ＡｐＡ：（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデニリル −（２′，５′）−アデノシン。 Ａ_Sp ^*ＡｐＡ：（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデニリル −（２′，５′）−アデノシン。 ＡｐＡ_Rp ^*Ａ：アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル −（２′，５′）−アデノシン。 ＡｐＡ_Sp ^*Ａ：アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル −（２′，５′）−アデノシン。 ｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐｐｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、ｐｐ Ａ_Sp ^*ＡｐＡ、ｐｐｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、ｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ、ｐｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ、ｐｐｐ ＡｐＡ_Rp ^*Ａ、ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ、ｐｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ、ｐｐｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ：Ａ_Rp ^*Ａ ｐＡ、Ａ_Sp ^*ＡｐＡ、ＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*Ａの５′−モノ−、ジ−およ びトリ−ホスフェート。 Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ：（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデニ リル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン。 Ａ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ：（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデニ リル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン。 ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ：アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニ リル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン。 ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ：アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニ リル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン。 ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ：アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニ リル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン。 ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ：アデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′ ）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデノシン。 ｐＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ、ｐｐＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ、ｐｐｐＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ、ｐＡ_Sp ^* ＡｐＡｐＡ、ｐｐＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ、ｐｐｐＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ、ｐＡｐＡ_Rp ^*Ａｐ Ａ、ｐｐＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐｐｐＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、ｐｐ ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、ｐｐｐＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、ｐＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ、ｐｐＡｐＡｐ Ａ_Rp ^*Ａ、ｐｐｐＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ、ｐＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ、、ｐｐＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ 、ｐｐｐＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ：前記四量体の５′−モノ−、ジ−およびトリ−ホス フェート。 ｂｚ：ベンゾイル。 ｃｅ：シアノエチル。 ＣＦＳ：慢性疲労症候群。 ＤＥＡＥ：２−（ジエチルアミノ）エチル。 ＤＢＵ：１．８−ジアザビシクロ［５．３．０］ウンデセ−７−エン。 ＨＩＶ：ヒト免疫不全症ウィルス。 ＭｅＯＴｒ：モノメトキシトリチル。 Ｍ．Ｏ．Ｉ．：感染多重度。 ｍＲＮＡ：メッセンジャーＲＮＡ。 ｎｐｅ：２−（４−ニリトフェニル）エチル。 ＰＢＬ：末梢血液リンパ球。 ｐＣｐ：シチジン ３′，５′−ビスホスフェート。 （ＰＳ）−ＡＴＰ−α−Ｓ：アデノシン５′Ｏ−（ＰＳ）−（１−チオトリホ スフェート）。 ＲＮアーゼＬ：２−５Ａ−依存性エンドリボヌクレアーゼ。 ｒＲＮＡ：リボソームＲＮＡ。 ＲＴ：逆転写酵素。 ＳＣＰ：特異切断生成物。 ｔｂｄｓ：（ｔ−ブチル）ジメチルシリル。 トリス：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン。 ｔＲＮＡ：トランスファーＲＮＡ。 一般に、２−５ＡによるＲＮアーゼＬの活性化は抗ウィルス防御メカニズムに つき重要であると見なされる。インターフェロンは、二本鎖ＲＮＡの活性化に際 し２′，５′結合オリゴアデニレートを生成する酵素２−５Ａシンセターゼの転 写を誘発する。従来２−５Ａの唯一公知の生化学作用はＲＮアーゼＬの活性化で ある。この酵素はｍＲＮＡおよびｒＲＮＡを加水分解して、蛋白合成の抑制をも たらす。ＲＮアーゼＬの活性化は、２−５Ａが急速に減成するため、連続的に合 成されなければ一時的となる。したがってＲＮアーゼＬ活性化は複製の抑制、し たがってウィルスによる感染の防御に重要な役割を演ずる。 さらに２−５Ａ代謝とＨＩＶ−１の増殖サイクルとの間には相関関係も確認さ れており、すなわち高レベルの２−５Ａおよび活性化ＲＮアーゼＬは感染細胞が ＨＩＶ−１を放出しないことに相関する［シュレーダー等、ジャーナル・バイオ ロジカル・ケミストリー、第２６４巻、第５６６９〜５６７３頁（１９８９）］ 。逆に、細胞内２−５Ａプールが減少すると、ＲＮアーゼＬは活性化さ れえず、ＨＩＶ−１生成が増大する。ＨＩＶ−１複製の抑制剤としての２−５Ａ コアの役割は、２−５Ａ三量体および四量体コア、５′−モノホスフェートおよ び５′−トリホスフェートがＨＩＶ−１逆転写酵素／プライマー複合体の形成を 抑制するという報告により確認されている［モンテフィオリ等、プロシーディン グ・ナショナル・アカデミー・サイエンス、ＵＳＡ、第８６巻、第７１９１〜７ １９４頁（１９８９）；ミュラー等、バイオケミストリー、第３０巻、第２０２ ７〜２０３３頁（１９９１）；ソボル等、バイオケミストリー、第３２巻、第１ ２１１〜１２１８頁（１９９３）］。 ２−５Ａの２′，５′−ヌクレオチド間結合にホスホロチオエート基を導入す れば真正２--５Ａよりも高い代謝安定性が誘発され、ＲＮアーゼＬを活性化させ うる第１ ２−５Ａコア（すなわち５′−ホスフェート部分を欠如する２−５Ａ ）をもたらす［カリコ等、バイオケミストリー、第２６巻、第７１３６〜７１４ ２頁（１９８７）；カラコン等、バイオケミストリー、第２９巻、第２５５０〜 ２５５６頁（１９９０）］。さらにＲＮアーゼＬは機能上立体選択性の酵素であ り、ＰＳ配置のヌクレオチド間ホスホロチオエート２′，５′−結合の少なくと も１つを有する２−５Ａ三量体および四量体は極めて向上した代謝安定性を有す る。完全分割された２′，５′−ホスホロチオエート アデニレート三量体およ び四量体コアの化学合成も報告されている［スハドルニク 等、米国特許第４，９２４，６２４号］。酵素的合成による立体異性体の作成は 、専らＰＲ配置の三量体および四量体生成物をもたらす基質（ＰＳ）−ＡＴＰ− α−Ｓに関する２−５Ａシンセターゼの立体特異性に基づき可能でない。さらに レブロー等、米国特許第４，９８１，９５７号は２′，５′−オリゴアデニレー トのホスホロチオエート置換誘導体の酵素的合成を開示しているが、開示された 化合物は立体特異性でない。 発明の要点 植物および哺乳動物におけるウィルス感染の抑制に有用である本発明の化合物 は、向上した代謝安定性および／または抗ウィルス活性を有する。 これら化合物およびその水溶性塩は式 ［式中、ｍは０、１、２もしくは３であり；ｎおよびｑは０および１の群から選 択され、ただしｎおよびｑは両者ともに０であってはならず；Ｒ、Ｒ₁およびＲ₂ は独立して酸素および硫黄の群から選択され、ただしＲ、Ｒ₁およびＲ₂の全てが 酸素であってはならず、さらにＲ、Ｒ₁およびＲ₂の全てが硫黄であってもならな い］ を有する。 さらに本発明は哺乳動物もしくは植物におけるウィルス感染の抑制方法をも含 み、この方法は抗ウィルス上有 効量の上記式による化合物もしくはその水溶性塩を投与することからなり、さら にこの種の化合物をキャリヤと共に含有する抗ウィルス組成物にも関する。 ｎが１であると共にｑが１である上記式による化合物は、細胞内移動のための 巨大分子キャリヤ ポリ（Ｌ−リジン）とのオリゴアデニレート複合体を形成す べく使用することができる。この種のポリ（Ｌ−リジン）／２′，５′−ホスホ ロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレート複合体は式 ［式中、ｑは約６０〜約７０の整数であり、ＲはランダムにＲ′または である］ を有する。Ｒ基の約５〜約１０個はＲ′で構成される。Ｒ′は次式を有する［式 中ｍは０、１、２もしくは３であり；各Ｒ₃、Ｒ₄もしくはＲ₅は独立して酸素お よび硫黄の群から選択され、ただしＲ₃、Ｒ₄およびＲ₅の全てが酸素であっては ならず、さらにＲ₃、Ｒ₄もしくはＲ₅の全てが硫黄であってもならない。 好ましくは、ポリ（Ｌ−リジン）／２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホ ジエステル オリゴアデニレート複合体におけるヌクレオチド間ホスホロチオエ ート基 の少なくとも１つはＰＲ配置を有する。 図面の説明 第１Ａ図は放射性結合分析の結果を示し、Ｌ−９２９細胞抽出物から部分精製 されたＲＮアーゼＬを活性化させて基質ポリ（Ｕ）［³²Ｐ］ｐＣｐを加水分解す るが、ポリ（Ｃ）を加水分解しない２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジ エステル三量体コア２−５Ａ誘導体の能力を示す。ＲＮアーゼＬの活性化は、ポ リ（Ｉ）［³²Ｐ］ｐＣｐから酸可溶性断片への変換により決定した。１００％は ２５，０００ｄｐｍのポリ（Ｕ）［³²Ｐ］ｐＣｐがガラス繊維フィルターに結合 したことを示す。比較のため２−５Ａオリゴマー（ホスホジエステル ヌクレオ チド間結合）をも含ませる。曲線は次のように標識する：ｐ₃Ａ₃（●）；Ａ₃（ ◆）；Ａ_Rp ^*ＡｐＡ（□）；Ａ_Sp ^*ＡｐＡ（■）；ＡｐＡ_Rp ^*Ａ（△）；およびＡ ｐＡ_Sp ^*Ａ（▲）。 第１Ｂ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホス ホジエステル三量体５′−モノホスフェート２−５Ａ誘導体につき第１Ａ図の方 法により行った放射性結合分析の結果を示す。曲線は次のように標識する：ｐ₃ Ａ₃（●）；ｐＡ₃（○）；ｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（□）；ｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ（■）；ｐＡｐ Ａ_Rp ^*Ａ（△）；およびｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ（▲）。 第１Ｃ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア ２−５Ａ誘導体につき第１Ａ図の方法により行った放射性結合分析の結果を示す 。各曲線は次のように標識する：ｐ₃Ａ₄（●）；Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ（▽）；Ａ_Sp ^* ＡｐＡｐＡ（▼）；ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（□）；ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ（■）；ＡｐＡｐ Ａ_Rp ^*Ａ（△）；およびＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ（▲）。 第１Ｄ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体５′ −モノホスフェート２−５Ａ誘導体につき第１Ａ図の方法により行った放射性結 合分析の結果を示す。各曲線は次のように標識する：ｐ₃Ａ₄（●）；ｐＡ₄（○ ）；ｐＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ（▽）；ｐＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ（▼）；ｐＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ （□）；ｐＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ（■）；ｐＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（△）；およびｐＡｐＡ ｐＡ_Sp ^*Ａ（▲）。 第２Ａ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体コア ２−５Ａ誘導体を用いるリボソームＲＮＡ切断分析の結果を示す。手順はカリオ 等、バイオケミストリー、第２６巻、第７１２７〜７１３５頁 （１９８７）の方法にしたがって行った。比較のため２−５Ａオリゴマー（ホス ホジエステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。Ｌ９２９細胞抽出物を以下 のｐ₃Ａ₃などの不存在下（レーン１）または１０^-8Ｍにおけるｐ₃Ａ₃（レーン２ ）、１０^-6ＭにおけるＡ_Rp ^*ＡｐＡ（レーン３）、１０^-6ＭにおけるＡ_Sp ^*ＡｐＡ （レーン４）、１０^-6ＭにおけるＡｐＡ_Rp ^*Ａ（レーン５）、１０^-6Ｍにおける ＡｐＡ_Sp ^*Ａ（レーン６）もしくは１０^-6ＭにおけるＡ₃（レーン７）の存在下に 培養した。２８Ｓおよび１８Ｓ ｒＲＮＡの各位置を示す；矢印はＲＮアーゼＬ の明確に特性化された特異切断生成物（ＳＣＰ）の位置を示す。 第２Ｂ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体５′ −モノホスフェート誘導体を用いて第２Ａ図の方法により行ったリボソームＲＮ Ａ切断分析の結果を示す。Ｌ９２９細胞抽出物を以下のｐ₃Ａ₃などの不存在下（ レーン１）または２×１０^-9Ｍにおけるｐ₃Ａ₃（レーン２）、１０^-6Ｍにおける ｐＡ₃（レーン３）、１０^-7ＭにおけるｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（レーン４）、１０^-7Ｍに おけるｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ（レーン５）、２×１０^-9ＭにおけるｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（レー ン６）、１０^-7ＭにおけるｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ（レーン７）の存在下に培養した。 第３Ａ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア ２−５Ａ誘導体を用いて第２Ａ 図の方法により行ったリボソームＲＮＡ切断分析の結果を示す。比較のため２− ５Ａオリゴマー（ホスホジエステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。Ｌ９ ２９細胞抽出物を以下のｐ₃Ａ₄などの不存在下（レーン１）または１０^-8Ｍにお けるｐ₃Ａ₄（レーン２）、１０^-5ＭにおけるＡ₄（レーン３）、１０^-5Ｍにおけ るＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ（レーン４）、１０^-5ＭにおけるＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ（レーン５ ）、１０^-5ＭにおけるＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（レーン６）、１０^-5ＭにおけるＡｐＡ_{S p} ^* ＡｐＡ（レーン７）、１０^-5ＭにおけるＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（レーン８）もしく は１０^-5ＭにおけるＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ（レーン９）の存在下に培養した。 第３Ｂ図は、２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体５′ −モノホスフェート誘導体を用いて第２Ａ図の方法により行ったリボソームＲＮ Ａ切断分析の結果を示す。Ｌ９２９細胞抽出物を以下のｐ₃Ａ₄などの不存在下（ レーン１）または１０^-8Ｍにおけるｐ₃Ａ₄（レーン２）、１０^-6ＭにおけるｐＡ₄ （レーン３）、１０^-6ＭにおけるｐＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ（レーン４）、１０^-6Ｍに おけるｐＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ（レーン５）、１０^-8ＭにおけるｐＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（ レーン６）、１０^-5ＭにおけるｐＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ（レーン７）、１０Ｍ^-7にお けるｐＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（レーン８）もしくは１０^-7ＭにおけるｐＡｐＡｐＡ_Sp ^* Ａ（レーン９）の存在下に培養した。 第４Ａ図は第２Ａ図の方法により行ったリボソーム切断分析の結果を示し、こ れはＬ９２９細胞抽出物におけるｐＡｐＡ_Sp ^*ＡによるＲＮアーゼＬおよび部分 精製されたＲＮアーゼＬによるＲＮアーゼＬの活性化の抑制を示す。Ｌ９２９細 胞抽出物を１０^-9Ｍにおけるｐ₃Ａ₃（レーン１および２）、１０^-8Ｍにおけるｐ₃ Ａ₃（レーン３および４）、１０^-9ＭにおけるｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（レーン５および ６）、１０^-8ＭにおけるｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（レーン７および８）、並びに１０^-6Ｍ におけるｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ（レーン２、４、６および８）の存在下に培養した。 第４Ｂ図は、Ｌ９２９細胞抽出物から部分精製されたＲＮアーゼＬの活性化を 示す放射性結合分析の結果を示す。ＲＮアーゼＬの活性化は、ポリ（Ｕ）［³²Ｐ ］ｐＣｐから酸可溶性断片への変換により２−５Ａ₄コアーセルロース上への固 定化にて決定した。１００％は２５，０００ｄｐｍのポリ（Ｕ）［³²Ｐ］ｐＣｐ がガラス繊維フィルタに結合したことを示す。比較のため２−５Ａオノゴマー（ ホスホジエステル ヌクレオチド間結合）をも含ませる。各曲線は次のように標 識する：ｐ₃Ａ₃（●）；１０^-6Ｍにおけるｐ₃Ａ₃＋ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ（○）。 第５Ａ図はヘンダーソン等、バイロロジー、第１８２巻、第１８６〜１９８頁 （１９９１）の方法により行った分析の結果を示し、これはアデノシン、２−５ Ａ三量体もしくは四量体コアまたは以下の２′，５′−ホスホ ロチオエート／ホスホジエステル三量体の各誘導体によるＨＩＶ−１（ＩＩＩＢ ）誘発の合胞体形成の抑制を示す：Ａ_Rp ^*ＡｐＡ、Ａ_Sp ^*ＡｐＡ、ＡｐＡ_Rp ^*Ａ、 ＡｐＡ_Sp ^*Ａ、Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ、Ａ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ、ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ＡｐＡ_Sp ^* ＡｐＡ、ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ、ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ。 第５Ｂ図は、２−５Ａコアの２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエス テル四量体の誘導体を用いて第５Ａ図の方法により行った分析の結果を示す。 発明の詳細な説明 ２′，５′−オリゴアデニレート（２−５Ａ）の三量体および四量体の各誘導 体における個々のヌクレオチド結合を、ホスホトリエステルおよびホスホルアミ ダイト化学合成によるホスホロチオエート置換を介して立体化学的に改変した。 ここに説明した手法は、個々に操作しうる下記の完全保護されたモノマー構築ブ ロックを用いる（方式１および２）。保護基はオリゴヌクレオチド鎖の化学合成 に際し所定位置に残留し、β−除去により配列の末端で除去される。 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体コアＡ_Rp ^*ＡｐＡ １０、Ａ_Sp ^* ＡｐＡ １１、ＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２３およびＡｐＡ_Sp ^*Ａ ２４を化学合成すると共 にシリカゲル上での調整用薄層クロマトグラフィーにより分離し、封鎖解除し、 さらに残留物をＤＥＡＥセファデックスカラムに施して精製した。４種の三量体 コアをホス ホルアミダイト中間体４および１５から作成する。合成は、完全分割された保護 中間体８、９、２１および２２の分離に続く、個々に置換された２′，５′−ホ スホロチオエート／ホスホジエステル三量体アデニレート コアを生成させる全 封鎖基の除去に依存する。本発明の１部でないが、二量体コア６の作成をも完全 を期するため含ませる。 選択的に置換した四量体コア３８および３９、５１および５２、並びに５７お よび５８を完全保護された三量体コア３０および３１から誘導し、次いで脱トリ チル化および縮合にかけて四量体部分を付加した。 本発明の化合物は、（ｉ）ヌクレアーゼ耐性であり、（ｉｉ）無毒性であり、 （ｉｉｉ）ＲＮアーゼＬを活性化もしくは失活させることができ、さらに（ｉｖ ）ＨＩＶ−１複製を抑制することができる２−５Ａ誘導体からなっている。本発 明の化合物は、少なくとも１個の２′，５′−ホスホジエステル結合が２′，５ ′−ホスホロチオエート結合により選択的に置換されている化学合成されたホス ホロチオエート／ホスホジエステル三量体および四量体２−５Ａ誘導体である。 これらホスホロチオエート／ホスホジエステル誘導体の化学合成は、個々に処理 しうる封鎖基により反応性官能基を保護するホスホトリエステルおよびホスホル アミダイト手法を用いる。ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および 四量体２−５Ａ誘導体はしたがってＲＮアーゼＬの活性化に つき立体化学要件の未知の面を示し、すなわちＲＮアーゼＬの活性化は２−５Ａ 分子の５′−末端からの第二ヌクレオチド間結合にＰＲキラリティを必要とする と共に、第二ヌクレオチド間結合におけるＰＳキラリティがＲＮアーゼＬ活性化 の拮抗剤である２−５Ａ誘導体をもたらす。特定の理論に拘束するものでないが 、５′−末端からの第二ヌクレオチド間結合におけるＰＲキラルティはＲＮアー ゼＬとアロステリック活性化剤（ＡｐＡ_Rp ^*ＡもしくはＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ）とＲＮ Ａ基質との間の生産性複合体の形成を容易化させてＨＩＶ−１ ＲＮＡの加水分 解を生ぜしめうるよう作用する。 ２−５Ａ分子における個々のヌクレオチド間結合のホスホロチオエート置換は 、ＨＩＶ−１複製の抑制がホスホロチオエート／ホスホジエステル誘導体におけ るキラル ホスホロチオエート基の位置および立体配置により影響を受けること を示した。４種のホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体コア誘導体のう ち、ＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*ＡがＨＩＶ−１誘発の合胞体形成につき最も効 率的な抑制剤であった（第４Ａ図）。６種のホスホロチオエート／ホスホジエス テル四量体コア誘導体のうち、ＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａが最も効 率的な抑制剤であった（第４Ｂ図）。Ａ_Rp ^*Ａ、Ａ_Sp ^*Ａ、３′，５′−Ａ₄、ア デノシンおよびアデニンはＨＩＶ−１ ＲＴ活性を抑制しなかった。ＡｐＡ_Rp ^* ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*Ａは両者ともホスホジエステラー ゼ耐性であり、しかも、ＨＩＶ−１ ＲＴを抑制するのに対し、ＡｐＡ_Rp ^*Ａエ ナンチオマー（ＡｐＡ_Sp ^*Ａエナンチオマーでない）はＲＮアーゼＬを活性化す ることができる。 この点に関し、同じく特定の理論に拘束されるものでないが、ホスホロチオエ ート／ホスホジエステル三量体および四量体コア誘導体によるＨＩＶ−１複製の 抑制における相対的差は血清ホスホジエステラーゼによる加水分解に対する耐性 によって説明することができる（第１表参照、後記）。血清含有培地にて２０分 間で全て加水分解される真正Ａ₂およびＡ₃における２′，５′−ホスホジエステ ル結合とは異なり、ＰＲおよびＰＳ ２′，５′−ホスホロチオエートの両結合 はホスホジエステラーゼによる加水分解に対し一層安定である。５′−末端にて 立体化学的に改変されたホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア誘導 体（Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡおよびＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ）は２′，３′−末端からその各二 量体Ａ_Rp ^*ＡおよびＡ_Sp ^*Ａまで急速に加水分解される。これら二量体は、その後 の加水分解に対し耐性であるが、ＲＮアーゼＬを活性化することができず、また ＨＩＶ−１複製をも抑制しえない。残余の４種のホスホロチオエート／ホスホジ エステル四量体コア誘導体（ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、ＡｐＡｐＡ_Rp ^* ＡおよびＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ）は５′−末端から加水分解されて各三量体コアＡ_Rp ^* ＡｐＡ、Ａ_Sp ^*ＡｐＡ、ＡｐＡ_Rp ^*Ａお よびＡｐＡ_Sp ^*Ａをそれぞれ生成する。ＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*ＡはＨＩＶ −１複製の効率的な抑制剤であるため、この加水分解は恐らく四量体の各誘導体 ＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａの抗ウィルス作用の原因となる。したが ってＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡおよびＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡで観察される抗ＨＩＶ−１活性の低 下（ＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａと対比）は、恐らくＨＩＶ−１誘発 の合胞体形成の極めて効率的な抑制剤であるＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*Ａを生 成する５′−末端からの加水分解に起因すると思われる（第４Ａ図と第４Ｂ図と の比較）。 予備実験において、本発明のホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体お よび四量体２−５Ａコア誘導体は全てＨＩＶ−１ ＲＴを抑制することが示され た。抑制は２２％〜７０％の範囲である。Ａ_Rp ^*Ａ、Ａ_Sp ^*Ａ、３′，５′−Ａ₄ 、アデノシンおよびアデニンはＨＩＶ−１ ＲＴ活性を抑制しなかった。ＡｐＡ_Rp ^* ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*Ａは両者ともホスホジエステラーゼ耐性であると共にＨＩ Ｖ−１ ＲＴを抑制するのに対し、ＡｐＡ_Rp ^*Ａエナンチオマー（ＡｐＡ_Sp ^*Ａエ ナンチオマーでない）もＲＮアーゼＬを活性化することができる。 これら３種の生物学的性質（すなわちホスホジエステラーゼによる加水分解に 対する耐性、逆転写酵素の抑制およびＲＮアーゼＬの活性化）は、ＡｐＡ_Rp ^*Ａ で観察されるＨＩＶ−１複製の１００％抑制の原因となる。 本発明の化合物はナトリウム、アンモニウムもしくはカリウムの可溶性塩とし て有利に作成される。作成方式は６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−ｔ−ブチルジ メチルシリル−５′−Ｏ−モノメトキシ−トリチルアデノシン１から開始し、フ ロッケルチー等、リービッヒス・アナーレン・ヘミー、第１５６８〜１５８５頁 （１９８１）の方法にしたがってアデノシンから有利に作成される。本発明によ る化合物の作成を、限定はしないが以下の実施例を参照して詳細に説明する。 各実施例で使用した３−ニトロ−１，２，４−トリアゾールおよびｐ−ニトロ フェニルエタノールは公開された方法により有利に作成することができる：チャ ットパジャヤ等、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ、第８巻、第２０３９〜２ ０５３頁（１９８０）；シュバルツ等、テトラヘドロン・レタース、第５５１３ 〜５５１６頁（１９８４）；ウールマン等、エルベチカ・ヒミカ・アンタ、第６ ４巻、第１６８８〜１７０３頁（１９８１）。これら化合物は米国にて市販入手 も可能である。３−ニトロ−１，２，４−トリアゾールはアルドリッチ・ケミカ ル・カンパニー、ＰＯ箱３５５、ミルウォーキー、ＷＩ ５３２０１から入手し うる（１９８６〜１９８７年カタログＮｏ．２４，１７９．２）。ｐ−ニトロフ ェニルエタノールはフルカ・ケミカル・コーポレーションから入手しうる（カタ ログＮｏ．７３，６１０）。 各実施例で使用したピリジンおよびトリエチルア ミンはＫＯＨ、塩化トシルおよび水素化カルシウムでの蒸留により精製した。ジ クロルメタンは、塩化カルシウムで蒸留し、次いで塩基性アルミナに通過させた 。純アセトニトリルは水素化カルシウムでの蒸留により得た。 保護ヌクレオチドの精製はシリカゲル６０（０．０６３〜０．２メッシュ、メ ルク社）での調製用カラムクロマトグラフィーおよびシリカゲル６０ＰＦ₂₅₄（ メルク社）での調製用薄層クロマトグラフィーにより行った。薄層クロマトグラ フィー（「ＴＬＣ」）は、シュライヒャー・アンド・ショイル社からの予備被覆 薄層シートＦ１５００ ＬＳ ２５４およびセルロース薄層シートＦ１４４０に て行った。 方式１は、保護中間体８および９からの第一ヌクレオチド間結合Ａ_Rp ^*ＡｐＡ １０およびＡ_Sp ^*ＡｐＡ １１のホスホロチオエート置換を有する完全分割さ れた三量体を作成するための反応方式であり、ここで「ｂｚ」はベンゾイル基を 示し、「ｔｂｄｓ」はｔ−ブチルジメチルシリル基を示し、「ｃｅ」はシアノエ チル基を示し、「ｎｐｅ」はニトロフェニルエトキシ基を示し、「ＭｅＯＴｒ」 はモノメトキシトリチル基を示す。三量体コア１０および１１の作成を製造例１ 〜４および実施例１に示す。製造例４は完全保護された三量体コアを示す一方、 実施例１は封鎖基の除去および完全分割された異性体の化学精製を示す。 製造例１ ａ． ビス−（ジイソプロピルアミノ）−（β−シアノエトキシ）−ホスファン３ ： 標記化合物の製造は、クラスゼウスキーおよびノリス、ヌクレイック・アシッ ズ・リサーチ Ｓｕｍｐ．Ｓｅｒ．、第１８巻、第１７７〜８０頁（１９８７） の手順にしたがった。無水ＣＨ₃ＣＮ（４０ｍＬ）におけるβ−シアノエタノー ル（７ｇ：０．１モル）を新たに蒸留されたＰＣｌ₃（４０ｍＬ；０．４モル） の溶液に室温（「ｒ．ｔ．」）にて窒素雰囲気下に３０分間以内で滴下した。３ ．５時間撹拌した後、溶剤および過剰のＰＣｌ₃を高減圧下で除去し、残留物を ４５０ｍＬの無水エーテルに溶解させ、−１０℃にて窒素雰囲気下での１時間以 内滴下によりＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１２７ｍＬ；０．９モル）と反応 させた。この反応混合物を−１０℃にて３０分間およびｒ．ｔ．にて１５時間撹 拌した。沈殿物を窒素下で濾過し、溶剤を減圧除去した。黄色の粗生成物をＣａ Ｈ₂上で分別蒸留して１４．７ｇ（４９％）の純物３（ｂ．ｐ．１１４〜１１８ ℃）を得た。この試薬を窒素下で−２０℃にて貯蔵した。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ ｌ₃）：３．７５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ₂）；３．５２（ｍ，４Ｈ，４Ｎ−ＣＨ）；２ ．６０（ｔ，２Ｈ，β−ＣＨ₂）；１．１７＋１．１４（２ｄ，２４ Ｈ，４Ｎ−Ｃ（ＣＨ₃）₂）。³¹Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：１２４．６ｐｐｍ。 ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデノシン−２′−Ｏ−［（β−シアノエ チル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ］−ホスホルアミダイト４：方法Ａ 標記化合物の製造はシンハ等、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ、第１２巻 、第４５３９〜４５５７頁（１９８４）の方法にしたがって行い、ここでは化合 物１［フロッケルチー等（１９８１）、上記］（３．７９ｇ；５ミリモル）およ びジイソプロピル−エチルアミン（３．５ｍＬ）を乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ） に溶解させ、クロル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−シアノエトキシホスファ ン（２．３７ｇ；１０ミリモル）を添加した。ｒ．ｔ．にて窒素下で１．５時間 撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、有機相を飽和Ｎ ａＨＣＯ₃／ＮａＣｌ溶液（２×８０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で 脱水し、濾過し、次いで蒸発乾固させた。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）に溶 解させ、−６０℃にてｎ−ヘキサン（２００ｍＬ）に滴下した。生成物を回収し 、８時間にわたり高減圧下で蒸発乾固させて４．３ｇ（８９％）の無色非晶質固 体を得た。方法Ｂ 代案として、標記化合物をクラスゼウスキーおよびノリス（１９８７）（上記 ）の方法にしたがって作成した。この方法では化合物１（３．７９ｇ；５ミリモ ル）とテトラゾール（０．１７５ｇ；２．５ミリモル）とを乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ ０ｍＬ）に溶解させ、次いでビス−（ジイソプロピルアミノ）−（β−シアノエ トキシ）ホスファン３（３ｇ；１０ミリモル）を添加した。アルゴン下で１７時 間にわたりｒ．ｔ．にで撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で 抽出し、飽和ＮａＨＣＯ₃／ＮａＣｌ溶液（８０ｍＬ）で洗浄した。これを２回 反復すると共に、方法Ａと同様に仕上処理を行って４．４９ｇ（９４％）の無色 非晶質粉末を得た。 分析： Ｃ₅₂Ｈ₆₄Ｎ₇Ｏ₇ＰＳｉ×２Ｈ₂Ｏの計算値（994.2）： Ｃ62.82、Ｈ6.89、Ｎ 9.86 実測値：Ｃ62.52、Ｈ7.08、Ｎ10.35。 UV(MeOH)：λ_max(logε)279nm(433),229nm(443)。トルオール／EtOAc(1/1、v/v) によるシリカゲル上でのRf:0.64、0.61（ジアステレオマー）。³¹P-NMR(CDCl₃): 150:98、151.34。 製造例２ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−Ｏ −（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［Ｏ^P−（２−シアノエチル ）−５ ′−］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチル シリル］−アデノシン６： ホスホルアミダイト４（２．８８ｇ；３ミリモル）と６−Ｎ−ベンゾイル−２ ′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン５［フロッ ケルチー等（１９８１）、上記］（１．２ｇ；２ミリモル）とを２４時間にわた り高減圧下でｒ．ｔ．にて乾燥させ、乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）に溶解させた 。テトラゾール（０．５ｇ；８ミリモル）を添加し、アルゴン下でｒ．ｔ．にて ３時間撹拌した後、Ｉ₂の溶液［０．５ｇＨ₂Ｏ／ピリジン／ＣＨ₂Ｃｌ₂（１／３ ／１、ｖ／ｖ／ｖ／）］を褐色が消失しなくなるまで滴下した。混合物を１５分 間撹拌し、次いでＣＨＣｌ₃（３００ｍＬ）で希釈した。有機相をＮａ₂Ｓ₂Ｏ₃／ ＮａＣｌ（３×８０ｍＬ）で飽和させ、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固さ せた。最終的な同時蒸発をトルエン（３×２０ｍＬ）で行った。粗生成物を、Ｃ ＨＣｌ₃（１００ｍＬ）とＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（１００／０．５、ｖ／ｖ；１． ５Ｌ）とＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（１００／１、ｖ／ｖ）とを用いるシリカゲルカ ラム クロマトグラフィー（１５×２．５ｃｍ）により精製して生成物を溶出さ せた。生成物フラクションを集め、次いで蒸発乾固させて２．３３ｇ（７９％） の二量体６を固体フォームとして得た。 分析： Ｃ₇₅Ｈ₉₄Ｎ₁₁Ｏ₁₃ＰＳｉ₃の計算値(1490.9): Ｃ60.42、Ｈ6.49、Ｎ10.33 実測値：Ｃ60.50、Ｈ6.49、Ｎ10.22。 UV(MeOH)：λ_max(logε)278nm(4.62);230nm(4.62)。CHCl₃/MeOH(95/5、v/v)によ るシリカゲルでのRf=0.56。³¹P-NMR(CDCl₃):-074および-1.07ppm（ジアステレオ マー）。 製造例３ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリ ル−２′−［Ｏ^P−（２−シアノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′ ，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン７： 化合物６（２．２２ｇ；１．５１ミリモル）をＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１ 、ｖ／ｖ；３０ｍＬ）中で室温にて３０分間にわたり２％ｐ−ＴｓＯＨと共に撹 拌した。この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３００ｍＬ）で希釈し、燐酸塩緩衝液（ ｐＨ７．０）（２×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾 固させた。残留物をシリカゲルカラム（９×４．５ｃｍ）に施し、ＣＨＣｌ₃（ ０．７Ｌ）およびＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（１００／１、ｖ／ｖ；３００ｍＬ）で 洗浄した。生成物をＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（５０／１、ｖ／ｖ；３ ００ｍＬおよび１００／３、ｖ／ｖ；３００ｍＬ）で溶出させた。生成物フラク ションを合して高減圧下で蒸発乾固させて、１１．６５ｇ（９０％）の５′−ヒ ドロキシ二量体７を非晶質固体として得た。 分析： Ｃ₅₅Ｈ₇₈Ｎ₁₁Ｏ₁₂ＰＳｉ₃×Ｈ₂Ｏの計算値(1218.5): Ｃ54.21、Ｈ6.62、Ｎ12.64 実測値：Ｃ54.53、Ｈ6.58、Ｎ12.62。 UV(MeOH)：λ_max(logε)278nm(4.60);232nm(4.42)。CHCl₃/MeOH(95/5、v/v)によ るシリカゲルでのRf=0.36。³¹P-NMR(CDCl₃):-0.77および-1.30ppm（ジアステレ オマー）。 製造例４ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＲ）−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P −（２−シアノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブ チル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−（２−シアノエチル）− ５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチル シリル］−アデノシンＡ_Rp ^*ＡｐＡ ８： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＳ）−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P −（２−シ アノエチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメ チルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−（２−シアノエチル）−５′］−６ −Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］− アデノシンＡ_Sp ^*ＡｐＡ ９： ホスホルアミダイト４（２．７９ｇ；２．９２ミリモル）と５′−ヒドロキシ 二量体７（１．９４ｇ；１．６２ミリモル）とテトラゾール（０．５６７ｇ；８ ．１ミリモル）とを乾燥ＣＨ₃ＣＮ（８．１ｍＬ）に溶解させ、室温にて窒素下 に撹拌した。３時間の後、Ｓ₈（１．６６ｇ；６．４８ミリモル）とピリジン（ ７．８ｍＬ）とを添加し、さらにｒ．ｔ．にて２０時間撹拌した。次いで反応混 合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＣｌ（２×２００ｍＬ）で 洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最終的な同時蒸発をトル エン（３×２０ｍＬ）で行った。粗製ジアステレオマー混合物（Ａ_Rp ^*ＡｐＡ ８ ＋Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ９）をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解させ、シリカゲルカラム（２１×３ ．５ｃｍ）に施した。このカラムをＣＨ₂Ｃｌ₂（４５０ｍＬ）およびＣＨ₂Ｃｌ₂ ／ＭｅＯＨ（９９／１、ｖ／ｖ；２００ｍＬ）で洗浄し、生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂／ ＭｅＯＨ（９７／３、ｖ／ｖ；４００ｍＬ）で溶出させた。生成物フラクション を集め、次いで蒸発乾固させて３．１６ｇ（９３％）のＡ_Rp ^*ＡｐＡ ８とＡ_Sp ^* Ａ ｐＡ ９との異性体混合物を得た。純ジアステレオアイソマーへの分離は上記し たようなメジアム圧力クロマトグラフィーによりＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（９９／ １、ｖ／ｖ；８００ｍＬ；２０ｍＬ／フラクション；フラクション１〜４０）で の溶出に続くＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（９５／５、ｖ／ｖ；８００ｍＬ；２０ｍＬ ／フラクション；フラクション４１〜８０）での溶出にて行った。完全保護され たＡ_Rp ^*ＡｐＡ異性体８（０．２８７ｇ）にてフラクション２１〜５６（２０ｍ Ｌ／フラクション）で溶出した。フラクション５７〜６１は異性体混合物（０． ０７ｇ）を与え、完全保護されたＡ_Sp ^*ＡｐＡ異性体９（０．１２３ｇ）がフラ クション６２〜６４が溶出した。クロマトグラフ分離をそれぞれ０．５ｇの粗製 混合物につき反復して、１．６２ｇ（５１％）のＡ_Rp ^*ＡｐＡ ８および０．９ ４ｇ（３０％）のＡ_Sp ^*ＡｐＡ ９を得た。 分析： Ａ_Rp ^*ＡｐＡ−Ｃ₁₀₁Ｈ₁₂₇Ｎ₁₇Ｏ₁₉Ｐ₂ＳＳｉ₄の計算値（2089.6） Ｃ58.05、Ｈ6.13、Ｎ11.40 実測値：Ｃ58.65、Ｈ6.24、Ｎ11.50。 UV(MeOH）：λ_max(logε)279nm(4.76)、260nm(4.56)、236nm(4.73)。CHCl₃/MeOH (97/3、v/v)によるシリカゲルでのRf=0.35。³¹P-NMR(CDCl₃)69.35および-1.10pp m。 分析： Ａ_Sp ^*ＡｐＡ−Ｃ₁₀₁Ｈ₁₂₇Ｎ₁₇Ｏ₁₉Ｐ₂ＳＳｉ₄の計算値（2089.6） Ｃ58.05、Ｈ6.13、Ｎ11.25 実測値：Ｃ57.03、Ｈ6.33、Ｎ11.14。 UV(MeOH)：λ_max(logε)279nm(4.77)、260nm(4.57)、236nm(4.73)。³¹P-NMR(CDC l₃):68.33および-0.84ppm。 実施例１ ａ． （ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′，５′−アデニリル−２′，５′− アデノシンＡ_Rp ^*ＡｐＡ １０： ｂ． （ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′，５′−アデニリル−２′，５′− アデノシンＡ_Sp ^*ＡｐＡ １１： それぞれ対応の完全保護された三量体８および９を別々に封鎖解除し、その際 三量体（０．０６ｇ；０．０２９ミリモル）をＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、 ｖ／ｖ；１．２ｍＬ）中でｒ．ｔ．にて１．５時間にわたり２％ｐ−ＴｓＯＨと 共に撹拌した。反応混合物をＣＨＣｌ₃（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２×２５ ｍＬ）で洗浄し、脱水し、次いで蒸発乾固させた。粗生成物をＣＨＣｌ₃／Ｍｅ ＯＨ（８／２、ｖ／ｖ）における調製用シリカゲル プレート（２０×２０×０ ．２ｃｍ）で精製した。生成物バンドをＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ ）で溶出させると共にフォームまで蒸発させて、 ０．０４ｇ（８４％）のＡ_Rp ^*ＡｐＡ異性体１０および０．０３４ｇ（７３％） のＡ_Sp ^*ＡｐＡ異性体１１を得た。次いで５′−ヒドロキシ三量体（０．０３４ ｇ；０．０８ミリモル）を０．５ＭのＤＢＵと共にピリジン（５．０ｍＬ）中で 撹拌し、室温にて２０時間にわたり撹拌した後、溶液を乾燥ピリジン（２．５ｍ Ｌ）中にて１Ｍ酢酸で中和し、次いで蒸発乾固させた。残留物をメタノール性ア ンモニア（５ｍＬ）で処理し、４８時間撹拌した後に溶剤を減圧除去した。脱シ リル化をＴＨＦ（２ｍＬ）中にて１Ｍ弗化テトラブチルアンモニウムで行った。 ４８時間撹拌した後、溶剤を減圧除去し、残留物をＨ₂Ｏ（１０ｍＬ）に溶解さ せ、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５カラム（６０×１ｃｍ）に施した。純生成 物を０．１４〜０．１７ＭのＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ７．５）の直線濃度勾配で溶 出させた。蒸発および水との同時蒸発を数回行った後、三量体を４枚の紙シート （３５×５０ｃｍ）に施し、ｉ−ＰｒＯＨ／濃アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３ 、ｖ／ｖ／ｖ）で展開させた。生成物バンドを切除し、Ｈ₂Ｏで溶出させ、蒸発 させ、次いで凍結乾燥して５００ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（７９％）のＡ_Rp ^*ＡｐＡ 異性体１０および４１０ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（６５％）のＡ_Sp ^*ＡｐＡ異性体１ １ を得た。両者の場合におけるＵＶ λ_maxはＨ₂Ｏにて２５８ｎｍであった。Ａ_Rp ^* ＡｐＡ １０：ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ ）におけるセルロース上で のＲｆ＝０．３３。¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）：８．２０；８．１９；８．１４（３ ｓ，３Ｈ，Ｈ−Ｃ（８））；７．９７（１ｓ，２Ｈ，２Ｈ−Ｃ（２））および７ ．７６（１ｓ，１Ｈ，１Ｈ−Ｃ（２））；６．０８；５．９３；５．８２（３ｄ ，３Ｈ，３Ｈ−Ｃ（１′））。逆相ＨＰＬＣにおける保持時間は５．６０ｍｉｎ であった。Ａ_Sp ^*ＡｐＡ １１：ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３ 、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセルロース上でのＲｆ＝０．３３。¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ ）：８．１４；８．０９；８．０２（３ｓ，３Ｈ，Ｈ−Ｃ（８））；７．９４； ７．８９：７．８０（３ｓ，３Ｈ，２Ｈ−Ｃ（２））；６．０３；５．９２；５ ．８０（３ｄ，３Ｈ，３Ｈ−Ｃ（１′））。 逆相ＨＰＬＣにおける保持時間は６．５１ｍｉｎであった。 方式２は、保護中間体２１および２２から三量体コアＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２３およ びＡｐＡ_Sp ^*Ａ ２４の残余の対を作成するための反応方式であり、製造例５お よび６並びに後記実施例２に詳細に要約する。 製造例５ ａ． Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−トリメチルシリルアミン： 標記化合物の製造はノスおよびスタウジグル、ケミッシェル．ベリヒテ、第１ １５巻、第３０１１〜３０２４頁（１９８２）の方法にしたがった。無水エーテ ル（５０ｍＬ）における沃化メチル（３７．６ｍＬ；０．６モル）を、無水エー テル（１００ｍＬ）における１４．６ｇ（０．６モル）のマグネシウムおよび数 個の沃素結晶の懸濁物に９０分間かけて滴下した。次いで反応物を全マグネシウ ムが溶解するまで３０分間撹拌した。次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（７ ８ｍＬ：０．５５モル）を１０〜１５分間で添加し、反応物を１時間にわたり還 流させた。０℃まで冷却した後、塩化トリメチルシリル（７６ｍＬ；０．６モル ）を滴下し、反応混合物を再び油浴中で激しく撹拌しながら８０℃まで２０時間 加熱した。上澄液をデカントし、残留物をエーテル（４×５０ｍＬ）で抽出した 。上澄液およびエーテル抽出物を合した。溶剤と過剰の塩化トリメチルシリルと 未反応のＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミンとを蒸留により除去した。次いで生成物 を６０℃の油浴温度で減圧下に蒸留して単離するごとにより７３ｇ（８０％）を 得た。Ｋｐ₁₈＝３６〜３９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：０．０８（ｓ，９Ｈ ，ＳｉＣＨ₃）；１．０４〜１．０７（ｄ，１２Ｈ，Ｎ−Ｃ−ＣＨ₃），３．２（ ｍ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ）。 ｂ． クロル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−２−（４−ニトロフェニル）エ トキシ−ホスファン１４： ｐ−ニトロフェニルエタノール（４．１６ｇ；２５ミリモル）を無水エーテル （４０ｍＬ）における新たに蒸留されたＰＣｌ₃（１４ｍＬ；０．１６モル）の 溶液に−３０℃にて窒素雰囲気下に４５分間以内で少しづつ添加した。反応混合 物をｒ．ｔ．にて１．５時間撹拌し、次いで溶剤と過剰のＰＣｌ₃とを０℃にて 減圧除去した。残留物をＮ，Ｎ−ジイソプロピル−トリメチルシリル−アミン（ 製造例５ａ）（４．３３ｇ；２５ミリモル）により０℃にて窒素雰囲気下に３０ 分間処理し、次いで室温にて２０時間処理した。得られた塩化トリメチルシリル を高減圧下にｒ．ｔ．で除去してシロップ状の淡黄色生成物（７．１ｇ；８５％ ）を得、これは−２０℃で貯蔵すると結晶化した。次いで、この物質を次のホス フィチル化反応に用いた。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：８．１〜８．２（ｍ，２ Ｈ，ＮＯ₂に対しｏ）；７．３９〜７．４３（ｍ，２Ｈ，ＮＯ₂に対しｍ）；４． ０４〜４．１８（ｍ，２Ｈ，Ｐ−Ｏ−ＣＨ₂）；３．６３〜３．７９（ｍ，２Ｈ ，Ｎ−ＣＨ）；３．０７〜３．１３（ｔ，２Ｈ，Ｐ−Ｏ−Ｃ−ＣＨ₂）；１．１ ４〜１．２７（２ｄ，１２Ｈ，Ｎ−Ｃ−ＣＨ₃）。³¹Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）： １８１．６０ｐｐｍ。 ｃ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデノシン−２′−Ｏ−［（４−ニトロフ ェニル）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ］−ホスホルアミダイト１５ ：方法Ａ 化合物１（３．７９ｇ；５ミリモル）とジイソプロピ ルエチルアミン（３．５ｍＬ）とを乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）に溶解させ、次 いでクロル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−２−（４−ニトロフェニル）−エ トキシホスファン１４（２．３７ｇ；１０ミリモル）を窒素雰囲気下で滴下した 。ｒ．ｔ．にて２時間にわたり撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍ Ｌ）で希釈し、有機相を飽和ＮａＨＣＯ₃／ＮａＣｌ溶液（３×８０ｍＬ）で洗 浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。粗生成物をトルエン／Ｅｔ ＯＡｃ（７／３、ｖ／ｖ）に溶解させ、ＥｔＯＡｃ／ＮＥｔ₃（９５／５、ｖ／ ｖ）で平衡化されたシリカゲルカラム（１２×２ｃｍ）でクロマトグラフ処理し た。生成物フラクションをＥｔＯＡｃ／ＮＥｔ₃（９５／５、ｖ／ｖ）で溶出さ せ、回収し、次いで蒸発乾固させて化合物１５（５．２８ｇ；７９％）を無色固 体フォームとして得た。 分析： Ｃ₅₇Ｈ₆₈Ｎ₇Ｏ₉ＰＳｉの計算値(1054.3): Ｃ64.94、Ｈ6.50、Ｎ9.30 実測値：Ｃ64.81、Ｈ6.51、Ｎ9.01。 UV(MeOH)：λ_max(logε)277nm(4.50);229nm(4.48)。³¹P-NMR(CDCl₃):150.27、15 0.01ppm。トルエン/EtoAC(1/1、v/v)によるシリカゲルでのRf=0.62および0.68（ ジアステレオマー）。方法Ｂ 代案として、化合物１５をビス−（ジイソプロピルア ミノ）−［２−（４−ニトロフェニル）エトキシ］−ホスファン２７（下記）を 用いて合成した。無水ＣＨ₃ＣＮ（１０ｍＬ）における１．５２ｇ（２ミリモル ）の化合物１の溶液にビス−（ジイソプロピルアミノ）−［２−（４−ニトロフ ェニル）エトキシ］−ホスファン２７（１．５９ｇ；４ミリモル）とテトラゾー ル（０．０７ｇ；１ミリモル）とを窒素雰囲気下で添加し、反応混合物をｒ．ｔ ．にて１７時間撹拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で希釈し 、飽和ＮａＨＣＯ₃／ＮａＣｌ溶液（６０ｍＬ）で２回洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱 水し、次いで蒸発乾固させた。粗製の固体フォームをフラッシュシリカゲルカラ ム（２０×２．５ｃｍ）に施し、トルエン／ＥｔＯＡｃ（１／１、ｖ／ｖ；２５ ０ｍＬ）でクロマトグラフ処理した。生成物フラクション（９０ｍＬ）を蒸発さ せて化合物１５（１．９ｇ；９０％）を無色固体フォームとして得た。 ｃ． ビス−（ジイソプロピルアミノ）−［２−（４−ニトロフェニル）エトキ シ］−ホスファン２７： ２−（４−ニトロフェニル）エタノール（８．３５ｇ；５０ミリモル）を少し づつ３０分間かけて無水エーテル（８０ｍＬ）における蒸留ＰＣｌ₃（２８ｍＬ ；２８０ミリモル）の溶液に−５℃にて窒素雰囲気下で添加した。−５℃にて１ ５分間およびｒ．ｔ．にて１．５時間にわたり撹拌した後、溶剤と過剰のＰＣｌ₃ とを高減圧下に 除去した。次いで黄色シロップ状残留物を２００ｍＬの無水エーテルに溶解させ 、−１０℃にてＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（６４ｍＬ；４５０ミリモル）と 窒素雰囲気下で３０分間かけて滴下することにより反応させた。反応混合物を− １０℃にて１５分間およびｒ．ｔ．にて１６時間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロ ピルアミン塩酸塩の多量の沈殿物を窒素下で濾過し、溶剤を減圧除去した。黄色 シロップ状生成物（１７．６ｇ；８９％）が−２０℃で貯蔵すると結晶化し、こ れはホスフィチル化反応に使用するのに充分な純度であった。¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ ＤＣｌ₃）：８．１０〜８．１３（ｄ，２Ｈ，ＮＯ₂に対しｏ）；７．３６〜７． ４０（ｄ，２Ｈ，ＮＯ₂に対しｍ）；３．７５〜３．８２（ｑ，２Ｈ，Ｐ−Ｏ− ＣＨ₂）；３．３６〜３．５１（ｍ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ）；３．９５〜３．００（ ｔ，２Ｈ，Ｐ−Ｏ−Ｃ−ＣＨ₂）；１．０５〜１．１２（２ｄ，１２Ｈ，Ｎ−Ｃ −ＣＨ₃）。³¹Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：１２３．５３ｐｐｍ。 製造例６ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′-［（Ｏ^P−２−（４−ニ トロフェニル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブ チル）ジメチルシリル］−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２− （４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ −Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシンＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２１： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル） ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシリトリチル）−アデニリル−２′ −［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル− ３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル −２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾ イル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシンＡ ｐＡ_Sp ^*Ａ ２２ トリエチルアルミニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル） ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシリトリチル）−アデノシン−２′ −［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−ホスフェート２０（０．１０ｇ；０ ．１ミリモル）［チャルバラ等、リービッヒス・アナーレン・ヘミー、第２３９ ２〜２４０６頁（１９８１）］と、それぞれ５′−ヒドロキシ二量体ＰＲ１８お よびＰＳ１９（０．０６６ｇ；０．０５ミリモル）［チャルバラおよびプファイ デラー（１９９２）（上記）］とを乾燥ピリジン（３×５ｍＬ）と共に蒸発させ １ｍＬの乾燥ピリジンに溶解させ、塩化（２，４，６−トリイソプロピル）ベン ゼンスルホニル（０．０６２ｇ；０．２ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４− トリアゾール（０．０６８ｇ；０．６ミリモル）［クロガーおよびミートヒェヘ ン、ツァイトシュリフト・ヘミー、第９巻、第３７８〜３７９頁（１９６９）； ジョーンズ 等、テトラヘドロン、第３６巻、第３０７５〜３０８５頁（１９８０）］とを添 加した。ｒ．ｔ．にて２０時間撹拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ₃（１００ｍ Ｌ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し、次いで蒸発させた。 最終的蒸発をトルエン（２×１００ｍＬ）で行ってピリジンを除去した。それぞ れ粗製の三量体２１および２２を最初にＣＨＣｌ₃、次いでＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ （１００／１、ｖ／ｖ）を溶出剤として用いるシリカゲルカラム クロマトグラ フィー（１５×２ｃｍ）により精製した。生成物フラクションを集め、固体フォ ームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて０．０８ｇ（７０％）の化合物２１ を得た。 分析： Ｃ₁₁₁Ｈ₁₃₅Ｎ₁₇Ｏ₂₃Ｐ₂ＳＳｉ₄×２Ｈ₂Ｏの計算値(231.78) Ｃ57.52、Ｈ5.95、Ｎ10.27 実測値：Ｃ57.15、Ｈ6.13、Ｎ10.72。 UV(MeOH)：λ_max(logε)276nm(4.87)、227nm(4.83)。CH₂Cl₂/EtOAc(1/1)による シリカゲルでのRf=0.63。³¹P-NMR(CDCl₃):69.88および-1.0ppm。 実施例２ ａ． アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′， ５′）−アデノシンＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２３： ｂ． アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′， ５′）−アデノシンＡｐＡ_Sp ^*Ａ ２４： 完全保護された三量体ＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２１およびＡｐＡ_Sp ^*Ａ ２２を、対応の 三量体（０．０８８ｇ；０．０３７ミリモル）を２％Ｐ−ＴｓＯＨと共にＣＨ₂ Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ；０．８ｍＬ）中で撹拌することにより別々 に封鎖解除した。室温にて３０分間撹拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ₃（５０ ｍＬ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２×２５ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄で脱 水し、次いで蒸発乾固させた。粗生成物をシリカゲルカラム（５×２ｃｍ）で精 製し、生成物をＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（１００／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、蒸発 させ、次いで高減圧下に乾燥させて０．０７３ｇ（９４％）の５′−ヒドロキシ 三量体ＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２１および０．０６１ｇ（８４％）の５′−ヒドロキシ三 量体ＡｐＡ_Sp ^*Ａ ２２を得た。次いで、得られた５′−ヒドロキシ三量体（０ ．０４ｇ；０．０２ミリモル）を１０ｍＬの０．５Ｍ ＤＢＵと共にピリジン中 で撹拌した。２４時間の後、溶液をピリジン（１０ｍＬ）中にて１Ｍ酢酸で中和 し、蒸発乾固させた。残留物を飽和メタノール性アンモニア（６ｍＬ）で処理し 、ｒ．ｔ．にて４８時間にわたり撹拌した後、溶剤を減圧除去し、残留物を１Ｍ のＢｕ₄ＮＦによりＴＨＦ（５ｍＬ）中で４ ８時間にわたり脱シリル化した。次いで溶剤を減圧除去し、残留物を水（１０ｍ Ｌ）に溶解させ、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５カラム（６０×１ｃｍ）に施 した。生成物を０．１４〜０．１７ＭのＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ７．５）の直線濃 度勾配で溶出させた。蒸発および水との同時蒸発を数回行った後、三量体を４枚 の紙シート（３５×５０ｃｍ）に施し、ｉ−ＰｒＯＨ／濃アンモニア／Ｈ₂Ｏ（ ６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ）で展開させた。生成物バンドを切除し、Ｈ₂Ｏで溶出 させ、蒸発させ、次いで凍結乾燥して３５４ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（７９％）の ＡｐＡ_Rp ^*Ａ異性体２３および４１０ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（５８％）のＡｐＡ_Sp ^* Ａ異性体２４を得た。両者の場合におけるＵＶ λ_maxはＨ₂Ｏにて２５８ｎｍ であった。ＡｐＡ_Rp ^*Ａ ２３：ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３ 、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセルロース上でのＲｆ＝０．３４。¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ ）：８．１７；８．１６；８．０９（３ｓ，３Ｈ，Ｈ−Ｃ（８））；７．９０， ７．７８（２ｓ，３Ｈ，３ｘＨ−Ｃ（２））；６．０４；５．９６；５．８０（ ３ｄ，３Ｈ，３Ｈ−Ｃ（１′））。 逆相ＨＰＬＣにおける保持時間は５．９８ｍｉｎであった。ＡｐＡ_Sp ^*Ａ ２４ ：ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセル ロース上でのＲｆ＝０．３３。¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）：８．１７；８．０７；８ ．０４（３ｓ，３Ｈ，３ｘＨ−Ｃ（８））；８．０１；７．９２：７．７２（３ ｓ，３Ｈ，２３ｘＨ−Ｃ（２））；６．０４；５．９２；５．８２（３ｄ，３Ｈ ，３ｘＨ−Ｃ（１′））。 逆相ＨＰＬＣにおける保持時間は７．２３ｍｉｎであった。 製造例７および８は、対応する二量体２８から完全分割四量体ＡｐＡ_Rp ^*Ａｐ Ａ ３８およびＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３９につき製造を開始した（方式１）。反応 方式を製造例９および１０にて三量体部分の付加と共に持続した（方式２）。 製造例７ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５′−（ モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニ ル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−アデノシンＡｐＡ_(Rp,Sp) ^*Ａ ２８： ホスホルアミダイト１５（１．４１ｇ；１．３４ミリモル）と６−Ｎ−ベンゾ イル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン５ （０．３６ｇ；０．９３ミリモル）とテトラゾール（０．１８８ｇ；２．６８ミ リモル）とを室温にて無水ＣＨ₃ＣＮ（９ｍＬ）中で窒素雰囲気下に撹拌した。 ４時間の後、Ｉ₂の溶液［ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｈ₂Ｏ／ピリジン（１／１／３、ｖ／ｖ／ ｖ）における０．５ｇ］を褐色が消失しなくなるまで滴下した。混合物をさらに １５分間撹拌し、 次いでＣＨ₂Ｃｌ₂（３×６０ｍＬ）および飽和Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃／ＮａＣｌ溶液（２ ×６０ｍＬ）で抽出した。Ｈ₂Ｃｌ₂相を集め、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、蒸発させ、 次いでトルエン（２×２０ｍＬ）と共に蒸発させてピリジンを除去した。粗製の 二量体（１．８５ｇ）をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解させ、フラッシュシリカゲルカラム（ １２×２．５ｃｍ）に施し、ＣＨ₂Ｃｌ₂／１％ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）と２％Ｍ ｅＯＨ（２００ｍＬ）と３％ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）とを用いてクロマトグラフ 処理して生成物（６００ｍＬ）を溶出させた。このフラクションを蒸発乾固させ て１．４５ｇ（定量的収率）の二量体２８を無色非晶質固体として得た。単離さ れた二量体２８の同定は、分光光度法比較により真正物質と対比して証明した。 真正物質はホスホトリエステル法によって合成した。 分析： ＡｐＡ ２８＝Ｃ₈₀Ｈ₉₈Ｎ₁₁Ｏ₁₅ＰＳｉ₃の計算値(1569.0): Ｃ61.24、Ｈ6.30、Ｎ9.82 実測値：Ｃ61.24、Ｈ6.24、Ｎ9.65。 UV(MeOH)：λ_max(logε)277nm(4.69);[260(454)];[231(4.66)]。CHCl₃/MeOH(49/ 1、v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.37。 製造例８ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−（ｔ−ブチル）ジメチ ルシリル−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５ ′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシ リル］−アデノシン−５′−ＯＨ−Ａ_(RP,Sp) ^*Ａ ２９： 粗製の二量体混合物２８（２．２４ｇ；１．４３ミリモル）を２％ｐ−ＴｓＯ Ｈと共にＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ、２０ｍＬ）中で室温にて３０ 分間撹拌した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍＬ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２× ８０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。無色非晶質 の残留物（２．０ｇ）をフラッシュシリカゲルカラム（２１×２．５ｃｍ）に施 し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍＬ）とＣＨ₂Ｃｌ₂／２％ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）とで クロマトグラフ処理し、生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂／２％ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で溶 出させた。生成物フラクションを蒸発させ、高減圧下で乾燥させて１．２（２工 程にわたり化合物５に対し計算して７５％）の５′−ＯＨ二量体２９を非晶質固 体として得た。この単離された二量体２９の真正物質と比較した同定はクロマト グラフおよび分光光度法によって行った。 分析： ５′−ＯＨ−ＡｐＡ ２９＝Ｃ₆₀Ｈ₈₂Ｎ₁₁Ｏ₁₄ＰＳｉ₃の計算値(1296.6): Ｃ55.58、Ｈ6.37、Ｎ11.88 実測値：Ｃ55.33、Ｈ6.38、Ｎ11.78 UV(MeOH)：λ_max(logε)278(4.68);[259(4.51)];233(446)]。トルエン/EtOAc/Me OH(5:4:1)におけるシリカゲル上でのRf=0.53。³¹P=NMR(CDCl₃):-0.36および-0.7 3ppm。 製造例９ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′-［ Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′ −Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（ ４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ− Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン Ａ_Rp ^*ＡｐＡ ３０： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［ Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′ −Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（ ４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ− Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ３１： ホスホルアミダイト１５（０．５９ｇ；０．５６ミリモル）と５′−ヒドロキ シＡｐＡ二量体２９（０．５２ｇ；０．４０ミリモル）とテトラゾール（０．０ ７９ｇ；１．１２ミリモル）とを乾燥ＣＨ₃ＣＮ（４ｍＬ）に溶解させ、ｒ．ｔ ．にて窒素雰囲気下で撹拌した。３時間の後、ホスホルアミダイト１５（０．４ ６４ｇ；０．４４ミリモル）とテトラゾール（０．０６２ｇ；０．８８ミリモル ）とを再び添加し、混合物をさらに３時間撹拌した。次いでＳ₈（０．２５７ｇ ；１ミリモル）およびピリジン（２．６ｍＬ）での酸化をｒ．ｔ．にて１６時間 以内に行った。この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍＬ）で室温にて希釈した 。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＣｌ溶液（２×８ ０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。最終的な同時 蒸発をトルエン（３×２０ｍＬ）で行ってピリジンを除去した。粗製ジアステレ オアイソマー混合物Ａ（_Rp,Sp）^*ＡｐＡ ３０＋３１をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ） に溶解させ、フラッシュシリカゲルカラム（１１×２．５ｃｍ）に施し、ＣＨ₂ Ｃｌ₂（４００ｍＬ）とＣＨ₂Ｃｌ₂／０．５％ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）と１％Ｍ ｅＯＨ（２００ｍＬ）とでクロマトグラフ処理し、生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂／１．５ ％ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）で溶出させた。生成物フラクションを蒸発乾固させて ０．７１３ｇ（７８％）の異性体混合物３０＋３１ を得た。純ジアステレオマーへの分離は、トルエン／ＥｔＯＡｃ（１／１、 ｖ／ｖ、４回の展開）にて調製用シリカゲル プレート（４０×２０×０．２ｃ ｍ、８枚のプレート）に施して行った。異性体生成物バンドを別々にＣＨ₂Ｃｌ₂ ／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発させ、 これを高減圧下で乾燥させて０．３１１ｇ（３４％）の完全保護されたＡ_Rp ^*Ａ ｐＡ異性体３０および０．２４５ｇ（２７％）の完全保護されたＡ_Sp ^*ＡｐＡ異 性体３１を得た。 分析： Ａ_Rp ^*ＡｐＡ ３０＝Ｃ₁₁₁Ｈ₁₃₅Ｎ₁₇Ｏ₂₃Ｐ₂ＳＳｉ₄×Ｈ₂Ｏの計算値(2299.8): Ｃ57.97、Ｈ6.00、Ｎ10.35 実測値：Ｃ57.63、Ｈ6.11、Ｎ10.39 UV(MeOH)：λ_max(logε)278(4.87);[260(4.72)];[231(4.75)]。トルエン/EtOAc/ MeOH(1/1、v/v、２回の展開)およびトルエン/EtOAc/MeOH(1/2、v/v、１回の展開 )によるシリカゲル上でのRf=0.37。 分析： Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ３１＝Ｃ₁₁₁Ｈ₁₃₅Ｎ₁₇Ｏ₂₃Ｐ₂ＳＳｉ₄×２Ｈ₂Ｏの計算値(2317.8) : Ｃ57.52、Ｈ6.05、Ｎ10.27 実測値：Ｃ57.44、Ｈ6.19、Ｎ10.41 UV(MeOH)：λ_max(logε)277(4.86);[260(4.72)];[231(4.75)]。トルエン/EtOAc/ MeOH(1/1、２回の展開)およ びトルエン/EtOAc/MeOH(1:2、v/v、１回の展開)によるシリカゲル上でのRf=0.27 。 製造例１０ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチ ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル ］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］− ６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］ −アデノシン５′−ヒドロキシ Ａ_Rp ^*ＡｐＡ ３２： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′-［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル −５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］ −アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６ −Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］− アデノシン ５′−ヒドロキシ Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ３３： それぞれ対応の完全保護された三量体３０および３１を、三量体（Ａ_Rp ^*Ａｐ Ａ ３０：０．２６３ｇ、０． １１５ミリモル；Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ３１：０．２１ｇ、０．９２ミリモル）を２％ ｐ−ＴｓＯＨと共にＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ、３０につき３．２ ｍＬ；３１につき：２．６ｍＬ）中で室温にて７５分間にわたり撹拌することに より別々に脱トリチル化した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１２０ｍＬ）で希釈し 、Ｈ₂Ｏ（２×４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させ た。粗生成物をトルエン／ＥｔＯＡｃ（３／７、ｖ／ｖ）における調製用シリカ ゲル プレート（４０×２０×０．２ｃｍ）で精製し、生成物バンドをＣＨ₂Ｃ ｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸発さ せて０．２ｇ（８６％）の５′−ヒドロキシ Ａ_Rp ^*ＡｐＡ ３２および０．１ ２１ｇ（６６％）の５′−ヒドロキシ Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ３３をそれぞれ得た。 分析： ５’−ＯＨ−Ａ_Rp ^*ＡｐＡ ３２＝Ｃ₉₁Ｈ₁₁₉Ｎ₁₇Ｏ₂₂ＳＳＩ₄の計算値(2009.4): Ｃ54.39、Ｈ5.97、Ｎ11.85 実測値：Ｃ54 12、Ｈ6.13、Ｎ11.74 UV(MeOH)：λ_max(logε)278(4.86);[260(4.71)];[233(4.64)]。トルエン/EtOAc( 3:7、２回の展開)におけるシリカゲル上でのRf=0.35（ジアステレオマー）。³¹P -NMR:69.60、68.91、-0.36および-0.56ppm(ジアステレオマー)。 分析： ５′−ＯＨ−Ａ_Sp ^*ＡｐＡ ３３＝Ｃ₉₁Ｈ₁₁₉Ｎ₁₇Ｏ₂₂Ｐ₂ＳＳｉ₄の計算値(2009. 4): Ｃ54.39、Ｈ5.97、Ｎ11.85 実測値：Ｃ54.29、Ｈ6.23、Ｎ11.51 UV(MeOH)：λ_max(logε)277(4.85);[260(4.71)];[233(4.63)]。トルエン/EtOAc( 3:7、２回の展開)におけるシリカゲル上でのRf=0.42（ジアステレオマー）。³¹P -NMR:69 28、68.09、-0.33および-0.56ppm(ジアステレオマー)。 方式３は、完全分割された四量体ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３８およびＡｐＡ_Sp ^*Ａｐ Ａ ３９を保護中間体３４および３５から製造するための反応方式である。これ ら化合物の製造を製造例１１および１２並びに実施例３に要約する。 製造例１１ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニ トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−（２− （４−ニトロフェ ニル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジ メチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチ ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−（ｔ−ブチル）ジメチ ルシリル−アデノシン ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３４： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニ トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P-（２−（ ４−ニトロフェニル）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′Ｏ−［（ｔ −ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフ ェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−（ｔ−ブ チル）ジメチルシリル−アデノシン ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３５： それぞれ完全保護された四量体３４および３５の縮合を、トリエチルアンモニ ウム−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）アデノシン−２′−［２−（４−ニトロフェ ニル）エチル］−ホスフェート２０ （０．１０８ｇ、０．１ミリモル）および５′−ヒドロキシＰＲ三量体３２もし くはＰＳ三量体３３（０．１ｇ、０．０５ミリモル）をそれぞれ乾燥ピリジン（ ３×２ｍＬ）と一緒に蒸発させて別々に実現し、乾燥ピリジン（０．５ｍＬ）に 溶解させ、次いで塩化（２，４，６−トリイソプロピル）ベンゼンスルホニル（ ０．０６１ｇ、０．２ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（０ ．０６８ｇ、０．６ミリモル）とを添加した。溶液をｒ．ｔ．にて２１時間撹拌 し、次いでＣＨ₂Ｃｌ₂（２×２０ｍＬ）およびＨ₂Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出し た。有機相を集め、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、蒸発させ、次いでトルエン（３×２０ ｍＬ）と一緒に蒸発させてピリジンを除去した。粗製の四量体３４および３５を それぞれトルエン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（５／４／０．５、ｖ／ｖ／ｖ）によ る調製用シリカゲル プレート（４０×２０×０．２ｃｍ）で別々に精製し、生 成物バンドをＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、次いで固体 フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて０．１１６ｇ（７８％）の ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３４および０．１２ｇ（８１％）のＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３５を 得た。 分析： ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３４＝Ｃ₁₄₂Ｈ₁₇₂Ｎ₂₃Ｏ₃₂Ｐ₃ＳＳｉ₅×２Ｈ₂Ｏの計算値(301 4.5): Ｃ56.58、Ｈ5.89、Ｎ10.69 実測値：Ｃ56.22、Ｈ6.07、Ｎ10.57 UV(MeOH): λ_max(logε)277(4.99);[260(4.85)];[231(4.85)]。トルエン/EtOAc/ MeOH(5:4:0.5)におけるシリカゲル上でのRf=0.63（ジアステレオマー）。 分析： ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３５＝Ｃ₁₄₂Ｈ₁₇₂Ｎ₂₃Ｏ₃₂Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの計算値(2996. 5): Ｃ56.92、Ｈ5.85、Ｎ10.75 実測値：Ｃ56.40、Ｈ5.89、Ｎ10.61 UV(MeOH)：λ_max(logε)277(5.01);[260(4.88)];[232(4.89)]。トルエン/EtOAc/ MeOH(5/4/0.5、v/v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.62（ジアステレオマー） 。 製造例１２ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア デニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ −ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ＰＲ）−Ｐ− チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］− ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリ ル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン ゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′−ＯＨ−ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３６： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア デニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ −ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ＰＳ）−Ｐ− チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］− ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリ ル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン ゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′−ＯＨ−ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３７： それぞれ完全保護された四量体（０．１０５ｇ、０．０３５ミリモル）３４お よび３５をＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ、１．２ｍＬ）中で室温にて １時間にわたり２％ｐ−ＴｓＯＨで処理して別々に脱トリチル化した。反応混合 物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３×４０ｍＬ）で抽出し、Ｈ₂Ｏ（３×３０ｍＬ）で洗浄した 。有機相を集め、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。得られた残留物 をトルエン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（５／４／０．５、ｖ／ｖ／ｖ）における調 製用シリカゲル プレート（２０×２０×０．２ｃｍ）にて精製した。生成物バ ンドをＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１）で溶出させ、次いで固体フォームまで蒸 発させ、これを高減圧下で乾燥させて０．０６４ｇ（６７％）の５′−ヒド ロキシ ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３６および０．０５７ｇ（６０％）の対応のＰＳ四 量体３７を得た。 分析： ５′−ＯＨ−ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３６＝Ｃ₁₂₂Ｈ₁₅₆Ｎ₂₃Ｏ₃₁Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの 計算値(2724.1): Ｃ53.79、Ｈ5.85、Ｎ11.83 実測値：Ｃ53 62、Ｈ5.87、Ｎ11.51 UV(MeOH): λ_max(logε)277(5.00);[260(4.87)];92.35(4.81)]。トルエン/EtOAc /MeOH(5:4:0.5)におけるシリカゲル上でのRf=0.41。 分析： ５′−ＯＨ−ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３７＝Ｃ₁₂₂Ｈ₁₅₆Ｎ₂₃Ｏ₃₁Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの 計算値(2724.1): Ｃ53.69、Ｈ5.85、Ｎ11.83 実測値：Ｃ53.58、Ｈ5.97、Ｎ11.32 UV(MeOH): λ_max(logε)277(4.96);[260(4.82)];234(4.74)]。トルエン/EtOAc/M eOH(5/4/0.5、v/v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.39。 実施例３ ａ． アデニリル （２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′， ５′）−アデニリル−２（２′，５′）−アデノシン ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３８ ： ｂ． アデニリル （２′，５′）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′， ５′）−アデニリル−２（２′， ５′）−アデノシン ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３９： それぞれ対応の５′−ヒドロキシ四量体３６および３７を、各５′−ヒドロキ シ四量体（０．０５６ｇ；０．０２１ミリモル）を０．５ＭのＤＢＵと共に無水 ＣＨ₃ＣＮ（２．５ｍＬ）中でｒ．ｔ．にて撹拌することにより別々に封鎖解除 し、２２時間の後に溶液を無水ＣＨ₃ＣＮ（１．２５ｍＬ）中で１Ｍ ＡｃＯＨ により中和し、次いで蒸発乾固させた。次いで残留混合物をメタノール性アンモ ニアで処理し、ｒ．ｔ．にて６０時間にわたり撹拌した後に溶剤を減圧除去し、 最後に残留物を１ＭのＢｕ₄ＮＦによりＴＨＦ（５ｍＬ）中で３日間にわたり脱 シリル化した。溶剤を次いで除去し、残留物をＨ₂Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、Ｄ ＥＡＥセファデックスカラムＡ−２５（３０×２ｃｍ）に施し、最初にＨ₂Ｏ（ ２００ｍＬ）、次いで０〜０．０４ＭのＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ７．５）の直線濃 度勾配（３０００ｍＬ以内、流速２ｍＬ／ｍｉｎ）にてクロマトグラフ処理した 。この条件下でＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ 四量体３８を０．２３〜０．２８ＭのＴＥＡ Ｄ緩衝液で溶出させると共にＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ 四量体３９を０．２４５〜０． ３０５ＭのＴＥＡＢ緩衝液でそれぞれ溶出させた。生成物フラクションを集め、 蒸発させ、次いでＭｅＯＨと一緒に数回蒸発させた。さらに精製するため、ペー パー クロマトグラフィーをｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（５５／１０／ ３５、ｖ／ｖ／ｖ）の系により行った。生成物バンドを切除し、Ｈ₂Ｏで溶出さ せ、小容量まで濃縮し、最後に凍結乾燥して７２８ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（７３ ％）のＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ 異性体３８および６８６ Ｏ．Ｄ_260nm単位（６９％） のＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ 異性体３９をそれぞれ得た。ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ３８：ｉ− ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（５５：１０：３５）におけるセルロース上での Ｒｆ＝０．３６。ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）：λ_max２５７ｎｍ。¹Ｈ-NMR(D₂O):8.15、8.07 、8.06、793、(4s、4H、4xH-C(8))；7.92(s、2H、2xH-C(2))；6.03、5.89、5.86 、5.79(4d、4xH-C(1′))。ＨＰＬＣ：ＰＲ−１８、Ａ：５０ｍＭ ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄ （ｐＨ７．２４。Ｂ：ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ（１／１、ｖ／ｖ）；勾配：０〜１ｍｉ ｎ、８０％Ａ、２０％Ｂ；１〜３１ｍｉｎ、３０％Ａ、７０％Ｂ；保持時間：９ ．５５ｍｉｎ。ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ ３９：ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（５ ５／１０／３５、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセルロース上でのＲｆ＝０．４０。ＵＶ （Ｈ₂Ｏ）：λ_max２５７ｎｍ。ＨＰＬＣ：ＰＲ−１８、Ａ：５０ｍＭ ＮＨ₄Ｈ₂ ＰＯ₄（ｐＨ７．２４）。Ｂ：ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ（１／１、ｖ／ｖ）、勾配：０〜 １ｍｉｎ、８０％Ａ、２０％Ｂ；１〜３１ｍｉｎ、３０％Ａ、７０％Ｂ；保持時 間：１０．３７ｍｉｎ。 方式４は、残余の四量体をその中間体Ａ_Rp ^*Ａｐ ジエステル４５およびＡ_Sp ^* ＡｐＡ ジエステル４６（所 定位置に封鎖基を有する）から作成するための反応方式の開始部である。ジエス テルの製造を製造例１３および１４に要約する。 製造例１３ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−（モノメトキシリトリチル）−アデニリル−２′−［（Ｏ^P−２−（４−ニ トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２，５−ジクロルフェニル−２− （４−ニトロフェニル）−エチルホスフェート］ＡｐＡｐ 三量体４１および４ １ａ ： ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノ シン−２′−［２，５−ジクロルフェニル−２−（４−ニトロフェニル）−エチ ル−ホスフェート］５′−ＯＨ−Ａｐ−トリエステル ４０（０．４３ｇ、０． ５ミリモル）とホスホルアミダイト １５（０．７３５ｇ、０．７ミリモル）と を無水ＣＨ₃ＣＮ（５ｍＬ）中にテトラゾール（０．０９８ｇ、１．５ミリモル ）の存在下で窒素雰囲気下に溶解させた。ｒ．ｔ．にて３．５時間にわたり撹拌 した後、ホスホルアミダイト（０．２ｇ、０．１９ミリモル）とテトラゾール（ ０．０２６ｇ、０．３７ミリモル）とを再び添加し、反応混合物をさらに３０分 間撹拌した。Ｉ₂の溶液［ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｈ₂Ｏ／ピリジン(１／１／３、ｖ／ｖ／ ｖにおける０．５ｇ)を褐色が消失しなくなるまで滴下した。混合物をさらに１ ０分間撹拌し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃ ＮａＣｌ 溶液（２×８０ｍＬ）で洗浄した。有機相を集め、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、蒸発さ せ、次いでトルエン（３×３０ｍＬ）と一緒に蒸発させてピリジンを除去した。 粗生成物をトルエン／ＥｔＯＡｃ（１／１、ｖ／ｖ）とＥｔＯＡｃとＥｔＯＡｃ ／２〜４％ＭｅＯＨとを溶出剤として用いるフラッシュシリカゲル クロマトグ ラフィー（１５×２ｃｍ）により精製した。生成物フラクションを固体フォーム まで蒸発させ、これを３０℃で高減圧下に乾燥させて０．６１０ｇ（６７％）の ＡｐＡｐ−トリエステル４１および４１ ａ を得た。真正物質での単離化合物の同定を分光光度法比較により行った。真正 物質はＡｐ−ジエステル２０［チャルバラ等（１９８１）］と５′−ヒドロキシ Ｐ−トリエステル４０とからホスホトリエステル法により合成した。 分析： ＡｐＡｐ−トリエステル＝Ｃ₈₈Ｈ₉₄Ｎ₁₂Ｏ₂₀Ｃｌ₂Ｐ₂ＳＳｉ₂の計算値(1828.8): Ｃ57.80、Ｈ5.18、Ｎ9.9 実測値：Ｃ57.77、Ｈ5.20、Ｎ9.02 UV(MeOH): λ_max(logε)277(4.75);[260(4.62)];[228(4.72)]。トルエン／EtOAc /MeOH(5/4/1、v/v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.78。 ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−（モノメトキシトリチル）−（ＰＲ，ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′- ［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３ ′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２，５−ジ クロルフェニル−２−（４−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ Ａ（_{Rp ,Sp} ）^*Ａｐ−トリエステル ４３＋４４ ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノ シン−２′−［２，５−ジクロルフェニル−２−（４−ニトロフェニル）−エチ ルホス フェート］ ５′−ＯＨ−Ａｐ−トリエステル４０（０．５２ｇ、０．６ミリモ ル）とホスホルアミダイト１５（０．９５ｇ、０．９ミリモル）とを無水ＣＨ₃ ＣＮ（６．５ｍＬ）中にテトラゾール（０．１２６ｇ、１．８ミリモル）の存在 下で窒素雰囲気下に溶解させた。ｒ．ｔ．にて３時間撹拌した後、Ｓ₈（０．３ ９ｇ、１．５１ミリモル）と無水ピリジン（３．９ｍＬ）とを添加し、反応混合 物をさらに２０時間撹拌し、次いでＣＨ₂Ｃｌ₂（２×８０ｍＬ）およびＨ₂Ｏ（ ２×８０ｍＬ）で抽出した。有機相を集め、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾 固させた。最終的な同時蒸発をトルエン（４×２０ｍＬ）で行ってピリジンを除 去した。粗製ジアステレオマー混合物Ａ（_Rp,Sp）^*Ａｐ−トリエステル４３＋４ ４ を、２００ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂とＣＨ₂Ｃｌ₂／１％ＭｅＯＨと２％ＭｅＯＨと最 後に２００ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂／１％ＭｅＯＨと２％ＭｅＯＨと最後にＣＨ₂Ｃｌ₂ ／３％ＭｅＯＨとを溶出剤として用いるフラッシュシリカゲルカラム クロマト グラフィー（１４×２．５ｃｍ）により精製した。生成物フラクション（１５０ ｍＬ）を固体フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾燥させて０．９７５ｇ （８８％）の化合物４３および４４をジアステレオマー混合物として得た。 分析： Ａ（_Rp,Sp）^*Ａｐ−トリエステル ４３＋４４＝Ｃ₈₈Ｈ₉₄Ｎ₁₂Ｏ₁₉Ｃｌ₂Ｐ₂ＳＳ ｉ₂の計算値(1844.9): Ｃ57.29、Ｈ5.14、Ｎ9.11 実測値：Ｃ56.96、Ｈ5.16、Ｎ9.09 UV(MeOH): λ_max(logε):277(4.75);[228(4.72)]。トルエン／EtOAc/CHCl₃(1/1/ 1、v/v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.21。³¹P-NMR(CDCl₃)69.87、69.25、-6 .89、-7.22および-7.31ppm。 製造例１４ ａ． トリエチルアンモニウム−Ｎ−６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−５′−（モノメトキシトリチル）−（ＰＲ）−Ｐ−チオ アデニリル−２′-［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−Ｎ−６ −ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン−２ ′−［２−（４−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ Ａ_Rp ^*Ａｐジエス テル４５： ｂ． トリエチルアンモニウム−Ｎ−６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−５′−（モノメトキシトリチル）−（ＰＳ）−Ｐ−チオ アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−Ｎ− ６−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン− ２′−［２−（４−ニトロフェニルエチル）−ホスフェート］ Ａ_Sp ^*Ａｐジエ ステル４６： １５ｍＬのＨ₂Ｏ／ジオキサン／Ｅｔ₃Ｎ（１：１：１）における０．５５８ｇ （３．３６ミリモル）の４−ニトロベンズアルデヒド オキシムの溶液を室温に て３０分間撹拌した。次いで０．６２ｇ（０．３３６ミリモル）のＡ（_Rp,Sp）^* Ａｐ−トリエステル４３＋４４のジアステレオマー混合物を添加し、ｒ．ｔ．に て２．５時間撹拌した。混合物を蒸発させ、次いでピリジン（３×１５ｍＬ）、 トルエン（３×１５ｍＬ）および最後にＣＨ₂Ｃｌ₂（３×１５ｍＬ）と一緒に蒸 発させた。残留物を少量のＣＨＣｌ₃に溶解させ、ＣＨＣｌ₃（１５０ｍＬ）とＣ ＨＣｌ₃／２％ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）と４％ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）と６％Ｍ ｅＯＨ（２００ｍＬ）とＣＨＣｌ₃／６％ＭｅＯＨ／０．５％Ｅｔ₃Ｎ（３００ｍ Ｌ）とＣＨＣｌ₃／６％ＭｅＯＨ／２％Ｅｔ₃Ｎ（２５０ｍＬ）とを用いるフラッ シュシリカゲルカラム（１５×２．５ｃｍ）でクロマトグラフ処理した。生成物 フラクション（６００ｍＬ）を固体フォームまで蒸発させ、これを高減圧下で乾 燥させて０．５５ｇ（９１％）の異性体混合物４５＋４６を得た。純ジアステレ オマーへの分離は調製用シリカゲル プレート（７枚のプレート、４０×２０× ０．２ｃｍ）およびＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（９／１、ｖ／ｖ）における３回の展 開でクロマトグラフィーにより行った。生成物バンドを１％Ｅｔ₃Ｎを含有する ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、次いで固体フォームまで 蒸発させて０． ２６２ｇ（４３％）のＡ_Rp ^*Ａｐ−ジエステル４５と０．１４４ｇ（２４％）の Ａ_Sp ^*Ａｐ−ジエステル４６と０．０４５ｇ（７％）のＡ（_Rp,Sp）^*Ａｐ−ジエ ステル４５＋４６とを得た。 分析： Ａ_Rp ^*ＡＰ−ジエステル４５＝Ｃ₈₈Ｈ₁₀₇Ｎ₁₃Ｏ₁₉Ｐ₂ＳＳｉ₂×２Ｈ₂Ｏの計算値( 1837.1): Ｃ57.53、Ｈ6.09、Ｎ9.91 実測値：Ｃ57 30、Ｈ6.70、Ｎ9.75 UV(MeOH): λ_max(logε);277(4.69);[260(4.56)];[231(4.61)]。CHCl₃/MeOH(9/1 、v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.37。³¹P-NMR(CDCl₃):69.66および-0.09pp m。分析： Ａ_Sp ^*Ａｐ−ジエステル４６＝Ｃ₈₈Ｈ₁₀₇Ｎ₁₃Ｏ₁₉Ｐ₂ＳＳｉ₂×２Ｈ₂Ｏの計算値( 1837.1): Ｃ57.53、Ｈ6.09、Ｎ9.91 実測値：Ｃ56.44、Ｈ7.15、Ｎ8.61 UV(MeOH): λ_max(logε);276(4.60);[260(4.49)];[232(4.52)]。CHCl₃/MeOH(9/1 、v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.28。³¹P-NMR(CDCl₃):68 96および-0 06pp m。 方式５は、残余の完全分割された四量体ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ５１、ＡｐＡｐＡ_{S p} ^* Ａ ５２、Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ ５７およびＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ ５８をその各保護 中間体４７、４８、５３および５４から製造するための反 応方式である。対応する製造を製造例１５、１６および１７、並びに実施例４お よび５に要約する。 製造例１５ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニ トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル ）エチル）−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチ ルシリル］−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロ フェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ −ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシンＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ４７： トリエチルアンモニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル） ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′− ［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３ ′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン−２′−［２−（４− ニトロフェニ ル）エチル−ホスフェート４２（０．１４ｇ；０．０７８ミリモル）と５′−ヒ ドロキシＰＲ二量体１８（０．０８ｇ；０．０６モル）とを乾燥ピリジン（４× ０．５ｍＬ）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリジン（０．６ｍＬ）に溶解させ、次い で塩化（２，４，６−トリイソプロピル）−ベンゼンスルホニル（０．０４７ｍ ｇ、０．１５６ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（０．０５ ３ｍｇ、０．４７ミリモル）とを添加した。溶液をｒ．ｔ．にて２２時間撹拌し 、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×３０ｍＬ）で抽出し、Ｈ₂Ｏ（２×２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎ ａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。ピリジンをトルエン（３×２０ｍＬ ）との同時蒸発により除去した。粗製の四量体４７をフラッシュシリカゲルカラ ム クロマトグラフィー（１５×１ｃｍ）により精製し、最初にＣＨ₂Ｃｌ₂（５ ０ｍＬ）、次いでＣＨ₂Ｃｌ₂／１％ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、２％ＭｅＯＨ（５ ０ｍＬ）および最後にＣＨ₂Ｃｌ₂／３％ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で溶出させた。 生成物フラクション（８０ｍＬ）を蒸発乾固させて０．１１ｇ（６２％）の完全 保護された四量体ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ４７を３５℃での高減圧下における乾燥の 後に無色フォームとして得た。 分析： Ｃ₁₄₂Ｈ₁₇₂Ｎ₂₃Ｏ₃₂Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの計算値(2996.5): Ｃ56.92、Ｈ5.85、Ｎ10.75 実測値：Ｃ56.51、Ｈ5.91、Ｎ10.37 UV(MeOH): λ_max(logε);277(4.99);[259(4.84)];[233(4.85)]。CHCl₃/MeOH(19/ 1、v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.46。 ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニ トロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチ ル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル ）−エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチ ルシリル］−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロ フェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ −ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシンＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ ４８： ＡｐＡｐ−ジエステル４１（０．１４ｇ；０．０７８ミリモル）と５′−ヒド ロキシＰＳ二量体１９（０．０８ｇ；０．０６ミリモル）とを乾燥ピリジン（４ ×０．５ｍＬ）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリジン（０．６ｍＬ）に溶解し、次い で塩化（２，４，６−トリイソプロピル）−ベンゼンスルホニル（０．４７ｍｇ 、０．１５６ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（０．０５３ ｍｇ、０．４６ミリモル）とを添加した。ｒ．ｔ． にて４．５時間撹拌した後、塩化（２，４，６−トリイソプロピル）−ベンゼン スルホニル（０．０２４ｇ、０．０７８ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４− トリアゾール（０．０２７ｇ、０．２３４ミリモル）とを再び添加した。溶液を ｒ．ｔ．にて１６．５時間にわたり撹拌し、次いで、ＣＨ₂Ｃｌ₂（４×２０ｍＬ ）で抽出し、Ｈ₂Ｏ（３×２０ｍＬ）を添加し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸 発させた。最終的な同時蒸発をトルエン（４×１５ｍＬ）で行ってピリジンを除 去した。粗製の四量体４８をフラッシュシリカゲルカラム クロマトグラフィー （１５×１ｃｍ）て精製し、四量体４７と同様にＣＨ₂Ｃｌ₂およびＣＨ₂Ｃｌ₂／ １〜３％ＭｅＯＨで溶出して０．１０７ｇ（６０％）の完全保護された四量体Ａ ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ ４８を３５℃での高減圧下における乾燥の後に無色フォームと して得た。 分析： Ｃ₁₄₂Ｈ₁₇₂Ｎ₂₃Ｏ₃₂Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの計算値(2996.5): Ｃ56.92、Ｈ5.85、Ｎ10.75 実測値：Ｃ56.51、Ｈ5.91、Ｎ10.85 UV(MeOH)：λ_max(logε);277(4.99);[259(4.85)];[231(4.86)]。CHCl₃/MeOH(19/ 1、v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.46。 製造例１６ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル） ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エ チル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリ ル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］ −６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ＰＲ ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル− ５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチル シリル］−アデノシン ５′−ＯＨ−ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ４９： ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−ア デニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ −ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２ ′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル −３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリ ル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベン ゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデノシン ５′−ＯＨ−ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ ５０： 完全保護された四量体ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ４７（０．１０４ｇ、０．０３５ミ リモル）を２％ｐ−ＴｓＯＨと 共にＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、Ｖ／Ｖ、１．４ｍＬ）中でｒ．ｔ．にて撹 拌した。１．５時間の後、反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３×４０ｍＬ）およびＨ₂ Ｏ（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機相を合してＮａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸 発乾固させた。粗生成物をフラッシュシリカゲルカラム（１１×１ｃｍ）で精製 し、生成物を２０ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂および５０ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂／１〜５％Ｍｅ ＯＨで溶出させた。生成物フラクション（１００ｍＬ）を蒸発させ、高減圧下で 乾燥させて０．０７５ｇ（８０％）のヒドロキシ四量体ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ４９ を得た。 分析： Ｃ₁₂₂Ｈ₁₅₆Ｎ₂₃Ｏ₃₁Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの計算値(2706.5): Ｃ54.15、Ｈ5.81、Ｎ11.90 実測値：Ｃ53.97、Ｈ6.02、Ｎ11.65 UV(MeOH): λ_max(logε);277(5.00);[260(4.85)];[234(4.77)]。CHCl₃/MeOH(19/ 1、v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.43。 完全保護された四量体ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ ４８を精製工程により同様に処理し た。粗生成物５０を２枚の調製用シリカゲル プレート（２０×２０×０．２ｃ ｍ）でＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（１９／１、ｖ／ｖ）にて精製し、生成物バンドを ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、固体フォームまで蒸発さ せて０．０６ ８ｇ（７２％）の５′−ヒドロキシ四量体 ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ ５０を得た。 実施例４ ａ． アデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）− Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデノシン ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ ５１： ｂ． アデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ）− Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデノシン ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ ５２： それぞれ対応の５′−ヒドロキシ四量体４９および５０を別々に、５′−ヒド ロキシ四量体（０．０６７ｇ；０．０２５ミリモル）を０．５ＭのＤＢＵと無水 ＣＨ₃ＣＮ（３ｍＬ）中で室温にて２０時間撹拌することにより封鎖解除し、溶 液を無水ＣＨ₃ＣＮ（１．５ｍＬ）中で１Ｍ ＡｃＯＨにより中和し、次いで蒸 発乾固させた。［ＥｔＯＡｃ／ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ、７／１／２ 、ｖ／ｖ／ｖ）、７／３、ｖ／ｖによるシリカゲル上でのＲｆ：ＡｐＡｐＡ_Rp ^* Ａ＝０．５８；ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ＝０．６６］。次いで残留物をメタノール性ア ンモニア（１０ｍＬ）で処理し、３日間の反応時間の後、溶剤を減圧除去した。 ［ＥｔＯＡｃ／ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ、７／１／２、ｖ／ｖ／ｖ） 、１／１、ｖ／ｖによるシリカゲル上でのＲｆ：ＡｐＡｐＡ_Rp ^* Ａ＝０．３８；ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ＝０．３６］。脱シリル化をＴＨＦ（５ｍＬ ）中で１ＭのＢｕ₄ＮＦにて行った。反応混合物を室温にて４８時間撹拌し、次 いで溶剤を減圧蒸発させた。残留物をＨ₂Ｏ（１０ｍＬ）に溶解させ、ＤＥＡＥ セファデックスＡ−２５カラム（３０×２ｃｍ）に施した。２ｍＬ／ｍｉｎの流 速にて純四量体ＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａを０．１５〜０．２０ＭのＴＥＡＢ緩衝液（ｐ Ｈ７．５）により溶出させ、四量体ＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａの場合には０．２４〜０． ３２ＭのＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ７．５）で溶出させた。蒸発およびＭｅＯＨとの 数回の同時蒸発の後、四量体を８枚の紙シート（２５×５０ｃｍ）に施し、ｉ− ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ）にて展開させた。生 成物バンドを切除し、Ｈ₂Ｏで溶出させ、小容量まで濃縮し、最後に凍結乾燥し て６７５ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（５７％）のＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ異性体５１と７５３ Ｏ．Ｄ．_260nm単位（６５％）のＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ異性体５２とを得た。ＡｐＡｐ Ａ_Rp ^*Ａ ５１：ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ） におけるセルロース上でのＲｆ＝０．３３。ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）：λ_max２５８ｎｍ。 ＨＰＬＣ：ＰＲ−１８、Ａ：５０ｍＭ ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．２。Ｂ：Ｍｅ ＯＨ／Ｈ₂Ｏ（１／１、ｖ／ｖ）、勾配：０〜１ｍｉｎ、８０％Ａ、２０％Ｂ； １〜３１ｍｉｎ、３０％Ａ、７０％Ｂ；保持時間：９．７０ｍｉｎ。ＡｐＡｐＡ_Sp ^* Ａ ５２： ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセルロ ース上でのＲｆ＝０．２１。ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）：λ_max２５８ｎｍ。ＨＰＬＣ：ＰＲ −１８、Ａ：５０ｍＭ ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄、ＰＨ７．２。Ｂ：ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ（１ ／１、ｖ／ｖ）、勾配：０〜１ｍｉｎ、８０％Ａ、２０％Ｂ；１〜３１ｍｉｎ、 ３０％Ａ、７０％Ｂ；保持時間：１３．４９ｍｉｎ。 製造例１７ ａ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［ Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′ −Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（ ４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ −ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフ ェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ− ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシン Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ ５３： トリエチルアンモニウム ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル） ジメチルシリル］−５′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＲ）−Ｐ−チオ アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチ ル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル ］−アデノシン−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−ホスフェ ート］Ａ_Rp ^*Ａｐ−ジエステル４５（０．１４１ｇ、０．０７８ミリモル）と５ ′−ヒドロキシ二量体２９（０．０７８ｇ、０．０６ミリモル）とを乾燥ピリジ ン（４×０．５ｍＬ）と一緒に蒸発させ、最後に乾燥ピリジン（０．６ｍＬ）に 溶解させた。次いで塩化（２，４，６−トリイソプロピル）−ベンゼンスルホニ ル（０．０４７ｍｇ、０．１５６ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４−トリア ゾール（０．０５３ｍｇ、０．４７ミリモル）とを添加し、ｒ．ｔ．にて２１時 間撹拌した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（６０ｍＬ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２×３０ ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。ピリジンをトル エン（３×２０ｍＬ）との同時蒸発により除去した。粗製の四量体５３をフラッ シュシリカゲルカラム クロマトグラフィー（１１×１ｃｍ）により精製し、最 初にＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）、次いでＣＨ₂Ｃｌ₂／１％ＭｅＯＨ（１００ｍＬ） 、２％ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）、３％ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）および最後にＣＨ₂ Ｃｌ₂／５％ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）により溶出させた。生成物フラクション（２ ００ｍＬ）を蒸発乾固させた。残留物を再びトルエン／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（ ５／４／０．５、ｖ／ｖ／ｖ）における２枚の調製用シリカゲル プレート（２ ０×２０×０．２ｃｍ） でクロマトグラフ処理して少量の５′−ヒドロキシ二量体を除去した。四量体の 生成物バンドをＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、次いで固 体フォームまで蒸発させて０．０５３ｇ（３０％）の四量体Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ ５３ を３５℃における高減圧下での乾燥の後に得た。 分析： Ｃ₁₄₂Ｈ₁₇₂Ｎ₂₃Ｏ₃₂Ｐ₃ＳＳｉ₅×３Ｈ₂Ｏの計算値(3032.5): Ｃ56.24、Ｈ5.92、Ｎ10.62 実測値：Ｃ55.75、Ｈ5.71、Ｎ 9.83 UV(MeOH): λ_max(logε);277(4.96);[260(4.82)];[232(4.82)]。トルエン/EtOAc /MeOH(5:4:1)におけるシリカゲル上でのRf=0.78。 ｂ． ６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−５ ′−Ｏ−（モノメトキシトリチル）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−２′−［ Ｏ^P−２−（４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′ −Ｏ−［（ｔ−ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（ ４−ニトロフェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−３′−Ｏ−［（ｔ −ブチル）ジメチルシリル］−アデニリル−２′−［Ｏ^P−２−（４−ニトロフ ェニル）エチル−５′］−６−Ｎ−ベンゾイル−２′，３′−ジ−Ｏ−［（ｔ− ブチル）−ジメチルシリル］−アデノシン Ａ_Sp ^*Ａｐ ＡｐＡ ５４： Ａ_Sp ^*Ａｐ−ジエステル４６（０．１４１ｇ、０．０７８ミリモル）と５′− ヒドロキシ二量体２９（０．０７８ｇ、０．０６ミリモル）とを乾燥ピリジン（ ４×０．５ｍＬ）と一緒に蒸発させ、乾燥ピリジン（０．６ｍＬ）に溶解させた 。塩化（２，４，６−トリイソプロピル）−ベンゼンスルホニル（０．０４７ｍ ｇ、０．１５６ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（０．０５ ３ｍｇ、０．４７ミリモル）とを添加し、混合物を室温にて撹拌した。２１時間 の後、塩化（２，４，６−トリイソプロピル）−ベンゼンスルホニル（０．０２ ４ｍｇ、０．０７９ミリモル）と３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（０． ０２７ｍｇ、０．２４ミリモル）とを再び添加した。混合物をさらに数時間撹拌 し、次いでＣＨ₂Ｃｌ₂（６０ｍＬ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２×３０ｍＬ）で洗浄し 、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸発乾固させた。さらに仕上処理を四量体５３に つき説明したと同様に行って４３ｍｇ（２４％）のＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ ５４を固 体フォームとして得た。 分析： Ｃ₁₄₂Ｈ₁₇₂Ｎ₂₃Ｏ₃₂Ｐ₃ＳＳｉ₅×Ｈ₂Ｏの計算値(2996.5): Ｃ56.92、Ｈ5.85、Ｎ10.75 実測値：Ｃ56.63、Ｈ6.08、Ｎ10.18 UV(MeOH): λ_max(logε);277(4.98);[260(4.84)];[232(4 85)]。トルエン/EtOAc /MeOH(5/4/1、v/v/v)におけるシリカゲル上でのRf=0.78。 実施例５ ａ． （ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′， ５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ ５７： ｂ． （ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′， ５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン Ａ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ ５８： 対応の完全保護された四量体５３および５４を、２％ｐ−ＴｓＯＨにおける０ ．０４７ｇ（０．０１６ミリモル）のＰＲ四量体５３（ＰＳ四量体５４：０．０ ３２ｇ；０．０１２ミリモル）の溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１／、ｖ／ ｖ；ＰＲについては０．５ｍＬ；ＰＳについては０．３８ｍＬ）中で室温にて１ 時間撹拌することにより封鎖解除した。この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（６０ｍＬ ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（２×３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で脱水し、次いで蒸 発乾固させた。粗生成物をＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（１９／１、ｖ／ｖ）における 調製用シリカゲル プレート（２０×２０×０．２ｃｍ）で精製し、生成物バン ドをＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ（４／１、ｖ／ｖ）で溶出させ、次いで固体フォー ムまで蒸発させて０．０３４ｇ（８０％）の５′−ヒドロキシ Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐ Ａ異性体５５および０．０２ｇ（６８％）の５′−ヒドロキシ Ａ_Sp ^*ＡｐＡｐ Ａ異性体５６を得た。それぞれ５′−ヒドロキシ四量体５５（０．０３４ｇ、０ ．０１３ミリモル）および５６（０．０２ｇ、０．００７ミリモル）の溶液を別 々に０．５ＭのＤＢＵと共に無水ＣＨ₃ＣＮ［（５５：１．５ｍＬ；５６：０． ９ｍＬ）］と共にｒ．ｔ．にて１８時間にわたり撹拌し、次いで１Ｍ ＡｃＯＨ ［（５５：０．７５ｍＬ；５６：０．５４ｍＬ）］の添加により中和し、次いで 蒸発させた。残留物を１０ｍＬの飽和メタノール性アンモニアで処理し、室温に て６０時間にわたり撹拌した後の溶液を蒸発乾固させた。脱シリル化を１ＭのＢ ｕ室温にて６０時間撹拌した後、溶剤を減圧除去した。或る程度のＨ₂Ｏ（１０ ｍＬ）を得られた残留物に添加し、ＤＥＡＥセファデックスカラムＡ−２５（３ ２×２ｃｍ）に施し、０〜０．５ＭのＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ７．５）で溶出させ た。主たるピークのフラクションを集め、蒸発させ、次いでＭｅＯＨと一緒に数 回蒸発させた。ペーパー クロマトグラフィー（ｉ−ＰｒＯＨ／アンモニア／Ｈ₂ Ｏ、５５／１０／３５、ｖ／ｖ／ｖ）による精製は凍結乾燥の後に３４７ Ｏ ．Ｄ．_260nm単位（５８％）のＡ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ ５７および１１１ Ｏ．Ｄ．_{26 0nm} 単位（３１％）のＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ ５８をそれぞれ 与えた。Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡ ５７：ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）＝２５７ｎｍ。ｉ−ＰｒＯＨ／ アンモニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセルロース上でのＲｆ ＝０．２１。ＨＰＬＣ：ＰＲ−１８、Ａ：５０ｍＭ ＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄（ＰＨ７． ２）。Ｂ：ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ（１／１、ｖ／ｖ）、勾配：０〜１ｍｉｎ、８０％ Ａ、２０％Ｂ；１〜３１ｍｉｎ、３０％Ａ、７０％Ｂ；保持時間：７．４７ｍｉ ｎ。Ａ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ ５８：ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）＝２５７ｎｍ。ｉ−ＰｒＯＨ／アン モニア／Ｈ₂Ｏ（６／１／３、ｖ／ｖ／ｖ）におけるセルロース上でのＲｆ＝０ ．３２。ＨＰＬＣ：ＰＲ−１８、Ａ：５０ｍＭＮＨ₄Ｈ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．２。Ｂ ：ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ（１／１、ｖ／ｖ）、勾配：０〜１ｍｉｎ、８０％Ａ、２０ ％Ｂ；１〜３１ｍｉｎ、３０％Ａ、７０％Ｂ；保持時間：９．８４ｍｉｎ。 ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレート ５ ′−モノホスフェートの製造 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および四量体コアを実施例１、 ２、３、４および５に上記したように合成した。三量体および四量体５′−モノ ホスフェートはサムブルック等、モレキュラ・クローニング；ラボラトリー・マ ニュアル、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、 第５．６７〜５．７１頁（１９８９）の方法にしたがい対応のコアお よびＡＴＰからＴ４ポリヌクレオチド キナーゼにより酵素的に合成した。５′ −モノホスホリル化を逆相ＨＰＬＣ分析により決定すると共に、その後の各５′ −モノホスフェート誘導体の５′−ヌクレオチダーゼによる加水分解で確認した （データ示さず）。ホスホリル化の収率は１５〜６８％の範囲であった。 ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレート ５ ′−ジホスフェートおよび５′−トリホスフェートの製造 ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの ５′−ジホスフェートおよび５′−トリホスフェートは、実施例６の手順にした がって５′−モノホスフェートから作成することができる。 実施例６ 反応は全て、１２５℃、１８〜２４時間でオーブン乾燥されたガラス器で行っ た。２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレート 立体異性体（三量体もしくは四量体、２６０ｎｍにて４００ Ｏ．Ｄ．単位）を ５００μＬの乾燥ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）に溶解させ、１０ｍＬの 三角フラスコ内で３５℃にて減圧乾燥させた。この過程を３回反復した。乾燥残 留物に５０μモルのトリフェニルホスィンと１００μモルのイミダゾールと５０ μモルのジピリジニルジスルフィドとを添加した。この混合物を５００μＬ の乾燥ＤＭＦ＋５０μＬの乾燥ジメチルスルホキシドに溶解させた。溶液を撹拌 棒により室温にて２時間撹拌した。２時間の後、溶液は均質となった（３０分間 の後、溶液は黄色に変化し始める）。この溶液を１０ｍＬの１％Ｎａｌ／乾燥ア セトン（ｗ／ｖ）溶液に滴下した。透明な無色沈殿物が生成し、これは５′−ホ スホロイミダゾリデートのナトリウム塩である。沈殿物を室温にて遠心分離し、 上澄液をデカントし、次いで沈殿物を１０ｍＬの乾燥アセトンで３回洗浄した。 遠心分離を反復した。沈殿物をＰ₂Ｏ₅で減圧下に２時間乾燥させた。沈殿物を、 乾燥ＤＭＦにおける新たに作成された０．５Ｍのピロ燐酸トリブチルアンモニウ ムの２００μＬに溶解させた。溶液を室温にて１８時間維持し、次いでＤＭＦを 減圧除去した。残留物を０．２５Ｍの重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（「 ＴＥＡＢ」）（ｐＨ７．５）に溶解させた。５′−ジ−および５′−トリ−ホス フェート生成物を０．２５Ｍ〜０．７５Ｍ ＴＥＡＢの直線濃度勾配によるＤＥ ＡＥ−セファデックスＡ−２５カラム（ＨＣＯ₃型；１×２０ｃｍ）を用いて分 離した。各フラクション（１０ｍＬ）を集めた。生成物を２５４ｎｍにおける紫 外線分光光度法により観察した。５′−ジ−および５′−トリ−ホスフェートを 含有するフラクションを別々に集め、次いで減圧乾燥させた。ＴＥＡＢを水の反 復添加に続く凍結乾燥により除去した。５′−ジホスフェートの収率は約５％で あり、５′−トリホスフェートの収率は約６ ０％であった。 血清ホスホジエステラーゼに対するホスホロチオエート／ホスホジエステル三量 体および四量体コア誘導体の安定性 真正２−５Ａおよびホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および四量 体コア誘導体（３００μＭ）の安定性を、１０％胎児牛血清が補充された２００ μＬのＲＰＭＩ−１６４０培地にて５％ＣＯ₂（空気中）下に３７℃にて培養す ることにより決定した。所定量（３０μＬ）をゼロ時点および６時間後に取出し た。加水分解生成物をカリコ等、バイオケミストリー、第２６巻、第７１２７〜 ７１３５頁（１９８７）に記載されたＨＰＬＣにより同定した。ここに記載した 条件下で、真正Ａ₂およびＡ₃はイノシンおよびヒポキサンチンまで２０分間で完 全に加水分解され（第１表）る一方、Ａ_Rp ^*ＡおよびＡ_Sp ^*Ａは加水分解されなか った。 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体コア誘導体の加水分解は観察さ れなかった。しかしながら、ホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア 誘導体は５′−もしくは２′，３′−末端から加水分解され、これはホスホロチ オエート置換のヌクレオチド間結合の位置に依存した。たとえばＡ_Rp ^*ＡｐＡｐ ＡおよびＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡはその各二量体コアＡ_Rp ^*ＡおよびＡ_Sp ^*Ａまで５０％ 減成したのに対し、ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡおよ びＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡは２′，３′−末端から減成して三量体コアＡｐＡ_Rp ^*Ａおよ びＡｐＡ_Sp ^*Ａを生成した。ＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａは５′−末 端から減成して、それぞれＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡ_Sp ^*Ａを生成した。 ＲＮアーゼＬに対する２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オ リゴアデニレートの結合 ＲＮアーゼＬに対するホスホロチオエート／ホスホジエステル２−５Ａ誘導体 の親和性をナイト等、メソッズ・エンチモロジー、第７９巻、第２１６〜２２７ 頁（１９８１）の方法による放射性結合分析で測定した。真正Ａ₃、ｐＡ₃および ｐ₃Ａ₃はそれぞれ１×１０^-6Ｍ、１×１０^-9Ｍおよび１×１０^-9ＭのＩＣ₅₀値に てＲＮアーゼＬに結合する。本発明によれば、ＲＮアーゼＬに対するホスホロチ オエート／ホスホジエステル コアおよびその５′−モノホスフェートの結合は 、コアについては８×１０^-7〜８×１０^-6Ｍおよび５′−モノホスフェートにつ いては１×１０^-8〜１×１０^-9ＭのＩＣ₅₀値にて対応の真正２−５Ａコアおよび ５′−モノホスフェートと同等またはそれより若干良好であった。５′−末端か らの第一ヌクレオチド間結合にホスホロチオエート置換を有する三量体および四 量体２−５Ａコア誘導体は、第二もしくは第三ヌクレオチド間結合にホスホロチ オエート置換を有するものと比較して低い親和性を示した。 ２−５Ａのホスホロチオエート／ホスホジエステル誘導体によるＲＮアーゼＬの 活性化 生物学的性質と絶対配置との相関関係は、完全分割された２′，５′−ホスホ ロチオエート／ホスホジエステル アデニレート三量体コアの作成についてのみ 可能で あった。しかしながら、三量体コア化合物は極く僅かＲＮアーゼＬを結合および ／または活性化することが判明した。２′，５′−ホスホロチオエート コア分 子によるＲＮアーゼＬの活性化は５′−ホスホリル化により顕著に向上する。 コア−セルロース分析をシルバーマン、アナリチカル・バイオケミストリー、 第１４４巻、第４５０〜４６０頁（１９８５）およびカリコ等（１９８７）（上 記）の方法により行い、ＲＮアーゼＬを２−５Ａ₄コア−セルロースへの固定化 によりＬ９２９細胞抽出物から部分精製した。ＲＮアーゼＬの活性化をポリ（Ｕ ）［³²Ｐ］ｐＣｐから酸可溶性断片への変換により測定した。その結果は真正ｐ₃ Ａ₃、ｐ₃Ａ₄、ｐＡ₃およびｐＡ₄がそれぞれ５×１０^-10Ｍ、５×１０^-10Ｍ、２ ×１０^-7Ｍおよび２×１０^-8ＭのＩＣ₅₀値を有する一方、驚くことにホスホロチ オエート／ホスホジエステル三量体コア誘導体のうちＡｐＡ_Rp ^*ＡのみがＲＮア ーゼＬを活性化しうる（５×１０^-7ＭのＩＣ₅₀）ことを示す（第１Ａ図、△）。 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体５′−モノホスフェートの３種が ＲＮアーゼＬを活性化することができ、ｐＡｐＡ_Rp ^*ＡがＲＮアーゼＬの最も強 力な活性化剤である（１×１０^-9ＭのＩＣ₅₀）（第１Ｂ図、△）。ｐＡ_Rp ^*Ａｐ Ａ（□）およびｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ（■）はＲＮアーゼＬの１００倍低い能力の活性 化剤である。６種のホスホロチオエート／ホスホジエステル四量 体コア誘導体のうち、ＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（□）およびＡｐＡｐＡ_Rp ^*Ａ（△）のみ がＲＮアーゼＬを活性化することができる（それぞれ５×１０^-7Ｍおよび５×１ ０^-7ＭのＩＣ₅₀）（第１Ｃ図）。６種のホスホロチオエート／ホスホジエステル 四量体５′−モノホスフェートのうち５種がＲＮアーゼＬを活性化する（ＩＣ₅₀ 値＞６×１０^-7Ｍ〜８×１０^-10Ｍ）。ｐＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡエナンチオマーは、１ ×１０^-5Ｍの程度の高い濃度でさえＲＮアーゼＬを活性化しなかった（第１Ｄ図 、■）。 ホスホロチオエート／ホスホジエステル三量体および四量体２−５Ａ誘導体に よるＲＮアーゼＬの活性化をもｒＲＮＡ切断分析にてカリコ等（１９８７）（上 記）の方法によりＬ９２９細胞抽出物を用いて測定し、その際Ｌ９２９細胞の抽 出物を２−５Ａもしくは２−５Ａ誘導体の存在下または不存在下で３０℃にて１ 時間培養した。コア−セルロース分析からの結果（第１Ａ図）と一致して、Ａｐ Ａ_Rp ^*Ａ（１×１０^-6Ｍ）のみがＲＮアーゼＬを活性化してγＲＮＡをＲＮアー ゼＬの良好に特性化された特異切断生成物（ＳＣＰ）まで切断しうる唯一の三量 体コアであった（第２Ａ図、レーン５）。Ａ_Rp ^*ＡｐＡ、Ａ_Sp ^*ＡｐＡおよびＡｐ Ａ_Sp ^*Ａ、並びに真正Ａ₃は１×１０^-6Ｍ程度の高い濃度でもＲＮアーゼＬを活性 化しなかった（第２Ａ図、レーン３、４、６、７）。真正ｐ₃Ａ₃は１×１０^-8Ｍ にて活性であった（第２Ａ図、レーン２）。対応の５′−モノホスフェート、す なわち ｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐＡ_Sp ^*ＡｐＡおよびｐＡｐＡ_Rp ^*Ａはそれぞれ１×１０^-7Ｍ、 １×１０^-7Ｍおよび２×１０^-9Ｍにて活性化した（第２Ｂ図、レーン４〜６）の に対し、ｐＡ₃は１×１０^-6Ｍにて活性であった（レーン３）。５×１０^-6Ｍ程 度に高い濃度でさえｐＡｐＡ_Sp ^*Ａとの培養は検出可能なｒＲＮＡ減成を与えな かった（データ示さず）。 ｒＲＮＡの匹敵する減成が真正ｐ₃Ａ₃比較と対比して６種のホスホロチオエー ト／ホスホジエステル四量体コア誘導体のうち２種につき観察された。ＡｐＡ_Rp ^* ＡｐＡおよびＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡはＲＮアーゼＬを１×１０^-5Ｍにて活性化した（ 第３Ａ図、レーン６および８）。コア−セルロース分析で観察されたように（第 １Ｄ図）、６種のホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体５′−モノホス フェートのうち５種がＲＮアーゼＬを活性化することができた（ｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ ｐＡ、ｐＡ_Sp ^*ＡｐＡｐＡ、ｐＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ、ｐＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびｐＡ ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａ）（第３Ｂ図、それぞれレーン４、５、６、８、９）。ＲＮアー ゼＬの最も効率的な活性化剤はｐＡｐＡ_Rp ^*ＡｐＡ（１×１０^-8Ｍ）（第３Ｂ図 、レーン６）であったのに対し、ｐＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡはＲＮアーゼＬ活性化の拮 抗剤であってＲＮアーゼＬを１×１０^-5Ｍ程度の高い濃度でさえ活性化しえなか った（第３Ｂ図、レーン７）。 ｐＡｐＡ _Sp ^* ＡによるＲＮアーゼＬ活性化の抑制 ＲＮアーゼＬに対するｐＡｐＡ_Sp ^*Ａの高い親和性およびｐＡｐＡ_Sp ^*ＡがＲＮ アーゼＬを活性化しないという観察は、恐らくＲＮアーゼＬの特異的抑制剤であ ることを示唆する。事実、ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａはｐ₃Ａ₃もしくはｐＡｐＡ_Rp ^*Ａによる ＲＮアーゼＬの活性化を抑制する（第４Ａ図）。真正ｐ₃Ａ₃はＲＮアーゼＬを活 性化して２８Ｓおよび１８Ｓ ｒＲＮＡを１０^-9Ｍもしくは１０^-8ＭにてＳＣＰ まで加水分解する（レーン１および３）。しかしながら、ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａの添加 （１０^-6Ｍ）はＲＮアーゼＬ触媒によるｒＲＮＡの加水分解を抑制する（レーン ２および４）。同様に、ｐＡｐＡ_Rp ^*ＡはＲＮアーゼＬを１０^-9Ｍもしくは１０^{- 8} Ｍにて活性化する（レーン５および７）のに対し、ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａの添加（１０^-6 Ｍ）はこの活性化を抑制する（レーン６および８）。ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａの抑制活 性が部分精製ＲＮアーゼＬについても観察された（第４Ｂ図）。ｐ₃Ａ₃は５×１ ０^-10ＭのＩＣ₅₀値にてＲＮアーゼＬを活性化する（●）。しかしながらｐＡｐ Ａ_Sp ^*Ａの添加（１×１０^-6Ｍ）に際し、観察されるＩＣ₅₀値は１×１０^-8Ｍま で移動し（○）、これはｐＡｐＡ_Sp ^*ＡによるＲＮアーゼＬのｐ₃Ａ₃媒介活性化 の特異的抑制を示す。 しかしながら、ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａはインターフェロン誘発の生物学的カスケード にてＲＮアーゼＬの役割を評価する際のプローブとして有用である。最も重要な ことに、 ｐＡｐＡ_Sp ^*Ａは生理学的濃度にてＲＮアーゼＬの活性化を選択的に抑制し、特 異的および非特異的ホスホジェステラーゼに対し代謝的に安定である。この分子 は、ＲＮアーゼＬ活性化を選択的に抑制する手段を与える。 さらにｐＡｐＡ_Sp ^*Ａは治療活性を有することも予想される。慢性骨髄白血病 （「ＣＭＬ」）に罹患した個人は、新規なｒＲＮＡ ＣＭＬ−特異切断生成物に より証明されるように、極めて高いＲＮアーゼＬ活性を示す。したがって、ＲＮ アーゼＬの代謝上安定な抑制剤であるｐＡｐＡ_Sp ^*Ａは慢性骨髄白血病の処置に 有力な用途を有する。 さらに、慢性疲労症候群（「ＣＦＳ」）（筋痛性脳脊髄炎（ＭＥ）または低天 然キラー（「ＮＫ」）細胞病としても知られる）および他のＨＨＶ−６関連障害 に罹患した個人も、比較と対比して極めて高いＲＮアーゼＬ活性を示す（平均基 礎レベル＝４６６±２３、これに対し比較ては１２３±１２；ｐ＜０．０００１ ）［スハドルニク等、クリニカル・インフェクシャス・ディジーズ、第１８巻（ 補遺１）、第９６〜１０４頁（１９９４）］。生物学的応答改変剤、すなわちポ リ（Ｉ）−ポリ（Ｃ₁₂Ｕ）（ミスマッチｄｓＲＮＳ、アンプリゲン（商標））に よる治療の前および治療の間にＣＦＳを有する個人からの末梢血液単核細胞（「 ＰＢＭＣ」）の抽出物を用いて行った実験では、健康な個人と比較してＰＢＭＣ 抽出物における平均的な基礎潜在的２−５Ａシンセターゼ レベルは治療後に顕著に減少した（６１０±２２０ピコモル２−５Ａ／ｍｇ蛋白 ／ｈｒ）。これは比較（２０３５±３２５ピコモル２−５Ａ／ｍｇ蛋白／ｈｒ、 Ｐ＜０．０００１）と対比的である（上記）。さらに、試験した全てのプレテラ ピーＰＢＭＣ抽出物はヒト ヘルペスウィルス−６（ＨＨＶ−６）複製につき陽 性であった。治療はＨＨＶ−６活性における有意の低下（ｐ＜０．０１）、並び に臨床的および神経心理学的改善との一時的関連における２−５Ａシンセターゼ ／ＲＮアーゼＬ経路の調整低下をもたらした。特定の理論に拘束されるものでな いが、ＣＦＳプレテラピーで観察された２−５Ａ経路の調整向上は活性化免疫状 態および一貫したウィルス感染がＣＦＳの病因を示しうるという仮説に一致する と思われる。したがって上記したように、ＲＮアーゼＬの代謝上安定な抑制剤で あるｐＡｐＡ_Sp ^*ＡはＣＦＳの処置にも有力な用途を有する。 ホスホロチオエート／ホスホジエステル ２−５Ａコア誘導体による細胞成長 の抑制 細胞生存率をトリパン・ブルー排除により測定した。処理後のコロニー形成能 力をクレマー等、ミューテーション・リサーチ、第７２巻、第２８５〜２９２頁 （１９８０）の方法に要約されたマイクロタイター・ウェルにおける増殖により 測定した。その結果は、マイクロタイター板におけるＳｕｐ Ｔ１細胞増殖の復 活もしくは抑 制における低下が二量体、三量体もしくは四量体ホスホロチオエート／ホスホジ エステル２−５Ａコア誘導体のいずれでも観察されなかったことを示す。細胞毒 性の欠如および２−５Ａのコルジセピン誘導体に関する予備報告［スハドルニク 等、ヌクレオシド・アンド・ヌクレオチド、第２巻、第３５１〜３６６頁（１９ ８３）］における推定１％の吸収に基づき、抗−ＨＩＶ−１活性につきホスホロ チオエート／ホスホジエステル誘導体をスクリーニングする濃度として３×１０^-4 Ｍを選択した。 ＨＩＶ−１−誘発の合胞体形成の抑制に対する２′，５′−ホスホロチオエート ／ホスホジエステル オリゴアデニレートの作用 ヘンダーソン等、バイロロジー、第１８２巻、第１８６〜１９８頁（１９９１ ）に記載されたような感染センター分析を用いて、２−５Ａ三量体および四量体 コアのホスホロチオエート／ホスホジエステル誘導体がＨＩＶ−１誘発の合胞体 形成を抑制する能力、すなわちＴ細胞におけるＨＩＶ−１複製の指標を測定した 。新たに分離した末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）を２−５Ａもしくは誘導体により ２時間処理すると共に、ＨＩＶ−１菌株ＩＩＩＢを約０．１のｍ．ｏ．ｉ．にて 感染させた。感染したＰＢＬを１０％（ｖ／ｖ）の熱失活胎児牛血清が補充され たＲＰＭＩ−１６４０培地に３７℃にて空気雰囲気中の湿潤５％ＣＯ₂に維持し た。４８時間の後、細胞を ハンクス バランス塩溶液で２回洗浄し、シリーズ希釈し、次いで９６−穴マイ クロタイター板の複数ウェルに接種した。直ちに、２×１０⁵対数増殖Ｓｕｐ Ｔ１細胞を各ウェルに添加した。Ｓｕｐ Ｔ１細胞は、ＨＩＶ−１が産生的に感 染された細胞との合胞体を容易に形成する。各ウェルを、組織培養顕微鏡を用い て合胞体の存在につき毎日検査した。合胞体形成の第１の徴候が１２時間で見ら れ、ほぼ完全な合胞体が２４時間で発生した。最終的結果を７２時間で読取った 。各合胞体を単一の感染細胞としてカウントした。接種細胞１個当たりの合胞体 の個数を測定すると共に、感染細胞１個当たりの感染センターとして現す。比較 （２−５Ａ誘導体を添加せず）において、１００％合胞体形成は２００個のＨＩ Ｖ−１感染細胞につき１２±３合胞体に同等であった。 データを第５Ａおよび５Ｂ図に示す。第５Ａ図に示したように、ＡｐＡ_Rp ^*Ａ は合胞体形成の極めて効率的な抑制剤であって、１００％抑制が３×１０^-4Ｍに て観察された。そのＰＳエナンチオマー ＡｐＡ_Sp ^*Ａは合胞体形成を７８％抑 制した。Ａ_Rp ^*ＡｐＡおよびＡ_Sp ^*ＡｐＡはそれぞれ合胞体形成を僅か１０％およ び１５％抑制した。真正Ａ₃およびＡ₄（３×１０^-4Ｍ）は合胞体形成をそれぞれ ２１％および１５％抑制したのに対し、アデノシン（９×１０^-4Ｍ）は合胞体形 成を抑制しなかった。６種のホスホロチオエート／ホスホジエステル四量体コア 誘導体のうち、ＡｐＡｐＡ_Rp ^*ＡおよびＡｐＡ ｐＡ_Sp ^*Ａが最も抑制的であった（それぞれ９０％および７６％の抑制）（第５ Ｂ図）。ＡｐＡ_R ^*ＡｐＡ、ＡｐＡ_Sp ^*ＡｐＡ、Ａ_Rp ^*ＡｐＡｐＡおよびＡ_Sp ^*Ａｐ ＡｐＡは合胞体形成をそれぞれ２６％、３２％、１６％および１８％抑制した。 アデノシンおよびＡ₄（第５Ｂ図）、並びにＡ_Rp ^*ＡよびＡ_Sp ^*Ａ 二量体、アデ ニンまたは３′，５′−Ａ₄（データ示さず）は合胞体形成を抑制することがで きなかった。 ＨＩＶ−１逆転写酵素活性に対する２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジ エステル オリゴアデニレートの作用 Ｓｕｐ Ｔ１細胞を２−５Ａもしくはホスホロチオエート／ホスホジエステル 誘導体により３００μＭにて６時間処理し、次いでＨＩＶ−１を約０．１の感染 多重度（Ｍ．Ｏ．Ｉ．）にて感染させた。アデノシンおよびアデニンを９００μ Ｍにて試験した。感染後の９６時間にて培養上澄液を取出し、ＨＩＶ−１ ＲＴ 活性をヘンダーソン等、バイロロジー、第１８２巻、第１８６〜１９８頁（１９ ９１）に記載されたように３反復で分析した。この方法を要約すれば、２５μＬ の培養上澄液を５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）と２０ｍＭのジチオスレイトー ルと１０ｍＭのＭｇＣｌ₂と６０ｍＭのＮａＣｌと０．０５のノニデットｐ−４ ０と５μｇ／ｍＬのオリゴデオキシチミジル酸と１０μｇ／ｍＬのポリリボアデ ニル酸 と１０μＭのデオキシチミジン三燐酸と１ｍＣｉの［³²Ｐ］チミジン ５′−ト リホスフェートとを含有する５０μＬのカクテルに添加した。この混合物を３７ ℃にて２時間培養した。５０μＬのカクテルを次いでジエチルアミノエチル（Ｄ ＥＡＥ）紙にスポットし、乾燥させ、２×ＳＳＣ溶液で洗浄し（それぞれ１０分 間にわたり３回）、および９５％エタノールで洗浄し（それぞれ５分間にわたり ２回）、乾燥させ、次いで放射線写真フィルムに−８０℃にて１８〜２４時間に わたり露出させた。各フィルタを切断し、最終的定量をシンチレーション分光光 度法により行った。 ＨＩＶ−１ ＲＴ活性に関するデータを第２表に示す。示したように、三量体 ＡｐＡ_Sp ^*ＡがＨＩＶ−１ ＲＴ活性の最も効率的な抑制剤であった（７８％ ）。これに対し、そのＰＲエナンチオマー、すなわちＡｐＡ_Rp ^*ＡはＨＩＶ−１ 逆転写を３１％抑制した。同様に、２′−末端結合に隣接してＰＳ ホスホロチ オエート／ホスホジエステル結合を有する四量体、すなわちＡｐＡｐＡ_Sp ^*Ａも ＲＴ活性を６２％抑制することができたのに対し、そのＰＲ対応物は僅か３８％ しかこの活性を抑制する効果がなかった。 本発明の化合物は、適する医薬用もしくは農業用キャリヤと組合せて抗ウィル ス組成物を形成することができる。 医薬用途につき本発明の化合物はたとえば溶液、懸濁液、錠剤、カプセル、軟 膏、エリキシルおよび注射用組成物など医薬上許容しうるキャリヤに吸収させる ことができる。これらはウィルス感染に罹患した患者に投与することができる。 投与量は感染の種類および程度、病気段階および全身投与する場合は感染患者の 体格および体重に依存する。 化合物は一般に水溶性塩として投与される。医薬上許容しうる水溶性塩はたと えば活性化合物のナトリウム塩、カリウム塩もしくはアンモニウム塩を包含する 。これらは水または塩水溶液に容易に溶解する。たとえば薬理学的用途の好適処 方物は、塩型における所望化合物の塩水溶液からなっている。さらに処方物はた とえば砂糖もしくは蛋白質のような物質をも含有して浸透圧バランスを維持する ことができる。化合物の塩型が、酸型の化合物の比較的高い酸度（約ｐＨ３）の ため好適である。 本発明の化合物はたとえば単純ヘルペス、リノウィルス、肝炎および他の肝炎 ウィルス族の感染、エプスタイン・バール ウィルス、麻疹ウィルス、多発性硬 化症（ウィルス作用物質により生じうる）のようなウィルス感染、並びにたとえ ば皮膚Ｔ細胞リンパ腫を引起すＨＩＶ−１、セザリー リンパ腫を引起すＨＩＶ −２および後天的免疫不全症候群（「ＡＩＤＳ」）を引起すＨＩＶ−３のような 各種のヒト免疫不全症ウィルス（「ＨＩＶ」）からヒトおよび動物を処置または 予防するために使用 することができる。本発明の化合物はＨＩＶ−１誘発の合胞体形成を抑制する。 これら化合物は放射線、発癌性物質もしくはウィルス性物質により引起される 皮膚癌を処置すべく局部投与することができる。この種の皮膚癌は皮膚Ｔ細胞リ ンパ腫、セザリー リンパ腫、キセロデルマ・ピグメントシウム、アタクシア・ テラジエクタシアおよびブルーム症候群を包含する。本発明の化合物を含有する 充分量の製剤を病巣もしくは感染領域を覆うよう施す。活性物質の有効濃度は約 １０^-3〜１０^-5Ｍの範囲であり、１０^-4Ｍが好適である。 本発明の化合物は植物感染性ウィルス（特にタバコモザイク ウィルス）並び にカブ、キウリ、ランおよび他の植物に壊死をもたらす他のウィルスを処理すべ く使用することもできる。この種のウィルスは限定はしないがタバコ脈管斑点ウ ィルス、水泡性口内炎ウィルス、ワクチン ウィルス、カブ壊死ウィルスおよび シンビジウム ラン ウィルスを包含する。 これら化合物は葉表面の剥脱、アロゾルスプレー、土壌の処理、噴霧もしくは 散布など局部施用により植物に有効に投与することができる。 効果的な抗ウィルス組成物は、本発明による化合物の１種もしくはそれ以上を 農業用途に適するキャリヤ物質と組合せて形成することができる。個々の立体異 性体も医薬用途に好適であるが、１種もしくはそれ以上の立体 異性体の混合物を農業用途に使用することができる。さらに活性化合物はたとえ ばアブラムシ、アザミウマおよびシロバエなどウィルスを植物に運ぶ昆虫ベクタ ーに噴霧して投与することもできる。投与量は感染の程度に依存する。 本発明の化合物は発芽前の植物種子に施して、生殖質に含まれるウィルスを抑 制することもできる。種子は化合物の１種もしくはそれ以上を含有するポリエチ レングリコール（「ＰＥＧ」）の溶液に浸漬させることができる。ＰＥＧは種子 を生理学上活性および停止状態にする。ＰＥＧに対する活性化合物の相対的濃度 は処理する種子の種類に依存する。 植物は、約１０^-1〜約１０^-2Ｍ濃度の活性成分を含有する水性処方物によって 効果的に処理することができる。本発明の化合物は極めて低濃度で施すことがで きる。植物表面に対する活性成分の有効量は植物表面積１ｃｍ²当たり約１０^-8 〜約１０^-12モルであり、１ｃｍ²当たり約１０^-10〜約１０^-12モルが好適である 。１，０００ｃｍ²の典型的タバコ植物につき、１０^-5Ｍの化合物が効果的であ る。この割合にて、１ポンドの活性成分で２×１０⁸のタバコ植物を処理するの に充分である。 農業用途につき、化合物はは水溶性塩（たとえばアンモニウム塩もしくはカリ ウム塩）として有利に投与される。ナトリウム塩は食用植物を処置する際に一般 に回避される。 本発明の化合物は水に対し特にこのような低濃度にて容易に溶解する。農業用 の水性処方物は必要に応じ粘着剤および／またはＵＶ安定剤を含有することがで きる。この種の作用物質は当業者に周知されている。脂肪酸（１％）が展延粘着 剤として有用である。効果的ＵＶ安定剤はたとえばｐ−アミノ安息香酸を包含す る。 哺乳動物における抗ウィルス用途につき、本発明の化合物はたとえば静脈内、 動脈内、筋肉内、皮下のように非経口的に或いは抗癌剤として投与する場合は腫 瘍内に投与される。抗ウィルス療法につき好適な投与ルートは静脈内注射である 。本発明の化合物は極めて低濃度にて哺乳動物に投与することができる。実際の 投与量は、処置の種類が予防または治療のいずれであるかに応じ患者の体格およ び体重、患者の年令、健康および性別、投与ルート、病気の種類および段階、並 びに他の因子を考慮することができる。他の２−５Ａ同族体を含めインビボの試 験に基づき活性成分の毎日の有効量は体重７０ｋｇ（約１５２ポンド）当たり約 ０．２５ｇ〜体重７０ｋｇ当たり約２．５ｇの範囲である。好適な１日投与量は 体重７０ｋｇ当たり約０．５ｇである。当業者は適する投与量および特定の状況 や患者のニーズに適する投与方式を容易に得ることができる。 効果的処置方式は２日間にわたる毎日の投与を含むと予想される。処置は、病 状が実質的に克服されるまで少なくとも継続される。 好ましくは治療の終末点は、ウィルスＤＮＡの持続的存在を試験して決定され る。この種の試験はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により行うことができ、ウ ィルスＤＮＡの存在を慣用のＰＣＲにより分析する。ウィルスＤＮＡの増幅に適 するヌクレオチド配列のＰＣＲプライマーを公知のウィルス ヌクレオチド配列 から作成することができる。試験のためのＤＮＡを得るには、患者の末梢血液単 核細胞を適する溶解剤（たとえばＮＰ−４０）で溶解させる。 或いは、ウィルスの持続的存在に関する試験は標的ウィルス蛋白コートの蛋白 抗原に対する公知モノクローナルもしくはポリクローナル抗体を用いる抗原−抗 体分析により行うことができる。たとえば抗原−抗体分析を用いて、抗原ＨＩＶ 蛋白コートにおける任意の蛋白抗原（たとえばｇｐ１２０、ｐ１７もしくはｐ２ ４）を検出することができる。さらに、標的抗原はコート蛋白抗原に限定されな い。抗血清は、適する非コート蛋白抗原（たとえばＨＩＶ逆転写酵素（ＲＴ）分 子）を標的とすることができる。ＨＩＶ ＲＴに対するモノクローナル抗体は公 知である［ソボル等、バイオケミストリー、第３０巻、第１０６２３〜１０６３ １頁（１９９１）］。 さらに、処置中または処置後の感染性ウィルスの存在に関する試験は、患者の 血流におけるウィルス負荷を評価する分析により行うこともできる。これは合胞 体形成のレベルを決定することにより、すなわちウィルス粒子 の形成を測定して行うことができる［ヘンダーソン等、バイロロジー、第１８２ 巻、第１８６〜１９８頁（１９９４）に要約された方法参照］。 慣用のキャリヤと共に投与する他、本発明の化合物は各種の特定オリゴヌクレ オチドもしくは核酸供給技術によって投与することもできる。２−５Ａおよびそ の同族体はたとえばユニラメラ リポソームのような各種の包封材料に好適に包 封され、モノクローナル抗体により細胞に供給されている［ベイヤード等、ヨー ロピアン・ジャーナル・バイオケミストリー、第１５１巻、第３１９〜３２５頁 （１９８５）］。再構成されたセンダイ・ウィルス・エンベロプがＲＮＡおよび ＤＮＡを細胞に供給すべく好適に使用されている［アラド等、バイオケミカル・ バイオフィジカル・アクタ、第８５９巻、第８８〜９４頁（１９８６）］。さら に、ウィルス エンペロプはセンダイ ウィルスにのみ限定されず、任意のレト ロウィルス アンフォトロフィック粒子における包封を包含する。たとえばＨＩ Ｖ エンベロプは、非感染性ＨＩＶ粒子の外側蛋白質コートの任意の部分または 全部から形成させることができる。ｇｐ１２０のような粒子を公知の組換技術に よりクローン化することができる。これら技術を、本発明の２′，５′−ホスホ ロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートを細胞中へ導入すべく用 いることができる。さらに本発明の化合物をプロドラグとして投与することも考 えられ、親油性基をた とえばコア化合物の５′−末端ヒドキシル基に結合させる。 ２′，５′−ホスホロチオエート 四量体アデニレートの接合 本発明の２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル 四量体はキャ リヤ（ポリ）Ｌ−リジンと接合することができる。（ポリ）Ｌ−リジンは、２′ ，５′オリゴアデニレートおよび同族体を無傷細胞に導入するための有効なベク ターであることが示されている［ベイヤード等、バイオケミストリー、第２５巻 、第３７３０〜３７３６頁（１９８６）］。三量体分子に対するポリ（Ｌ−リジ ン）の接合は、２′−末端リボシル部分の破壊およびそれに続く分子の失活によ り可能でない。ポリ（Ｌ−リジン）に対する接合は、本発明による２′，５′− ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの効率的な細胞内 輸送を可能にすると共に、複合体内に良好な生物学的活性に必要と思われる三量 体部分を無傷で保持することができる。 複合体は、２つのアルデビト基を四量体の２′−末端にリボース残基のα−グ リコール基の周期的酸化により導入して形成される。次いで、得られたアルデヒ ド基はランダムにポリ（Ｌ−リジン）のリジン残基におけるε−アミノ基にシッ フ塩基形成によりランダム結合され、次いでシアノ硼水素化ナトリウムによりｐ Ｈ８．０にて 還元される。この手順は２′，３′−末端リボース環をモルホリン構造に変換さ せる。ポリ（Ｌ−リジン）ペプチドは好ましくは約６０〜約７０個のリジン残基 を有する。約５〜約１０個のリジン残基がこのようにして四量体部分にカップリ ングする。得られる２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル／（ポ リ）−Ｌ−リジン複合体を次いでセファデックスＧ−５０カラムにおけるゲル透 過クロマトグラフィーにより単離することができる。 ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステルオリゴアデニレート／ポ リ（Ｌ−リジン）複合体は次式を有する： ［式中、ｑは約６０〜約７０の整数であり、各Ｒは独立してＲ′または である］。 Ｒ基の約５〜１０個はＲ′で構成される。Ｒ′基は次式 ［式中、ｍは０、１、２もしくは３であり；Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は独立して酸素 および硫黄の群から選択され、ただしＲ₃、Ｒ₄およびＲ₅の全部が酸素であって はならず、さらにＲ₃、Ｒ₄およびＲ₅の全部が硫黄であってもならない］ を有する。 複合体はベイヤード等、バイオケミストリー、第２５巻、第３７３０〜３７３ ６頁（１９８６）の方法によい有利に作成することができる。 実施例７ ポリ（Ｌ−リジン）／２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オ リゴアデニレート複合体の作成 ４−μＬのメタ過沃素酸ナトリウム（０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４ ．７５）における０．６μモル）を４００μＬの蒸留水における２′，５′−ホ スホロチオエート／ホスホジエステル四量体アデニレートの氷冷溶液に添加した 。この反応混合物を氷上で３０分間撹拌し、４００μＬのポリ（Ｌ−リジン）（ ０．２Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ８．０）における０．１４μモル）および２６０μ Ｌのシアノ硼水素化ナトレウム（０．２Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ８．０）における ２０μモル）を添加した。混合物を室温にて２時間温置し、次いで０．１Ｍ酢酸 ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．７５）で平衡化されたセファデックスＧ−５０カラ ムに充填した。各フラクションをそのホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴア デニレート／ポリ（Ｌ−リジン）含有量につきラウリー等、ジャーナル・バイオ ロジカル・ケミストリー、第１９３巻、第２６５〜２７５頁（１９５１）に記載 された方法で２６０ｎｍにおける吸収により分析した。 ポリ（Ｌ−リジン）に対する２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエス テル 四量体の接合は残余の３個の２′，５′−結合ホスホロチオエート／ホス ホジエステル アデニル酸残基を最適のＲＮアーゼＬ結合および活性化につき無 傷に残す。 ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートのリ ポソーム包封 本発明による化合物の包封は、細胞中へ導入するための他の魅力的な非破壊的 技術である。リポソーム包封はコンドロシ等、ＦＥＢＳレタース、第１２０巻、 第３７〜４０頁（１９８０）に記載された技術にしたがって有利に行うことがで きる。 実施例８ ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートが充 填された大型ユニラメラ液胞（リポソーム）の作成 要約して、牛脳からの燐脂質混合物（シグマ・ケミカル・カンパニー社、８０ 〜８５％のホスファチジルセリンと残余の１５％の他の脳脂質で構成されたフォ ルヒフラクションＩＩＩ：３５ｍｇ）を５ｍＬの緩衝液Ａ ［０．１Ｍ ＮａＣｌ、２ｍＭヒスチジン、２ｍＭ Ｎ−トリス（ヒドロキシメ チル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（「ＴＥＳ」）、０．４ｍＭ ＥＤ ＴＡ（ｐＨ７．４）］に回動によって懸濁させた。懸濁物を０℃にて１０分間に わたり窒素下で音波処理した。懸濁物をさらに、１２５μＬの８００ｍＭ Ｃａ Ｃｌ₂の添加により２０ｍＭまでＣａ⁺⁺の最終的濃度を調節した後に３７℃にて １時間温置した。得られた沈殿物を遠心分離（２５００×ｇ、１０分間）により 沈降させ、回動させ、さらに１００μＬの１×１０^-4Ｍの２′，５′−ホスホロ チオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートと混合し、これを燐酸塩緩 衝塩水に溶解させた。次いでＥＤＴＡの最終濃度を４００μＬの緩衝液Ｂ［１５ ０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）、０．１Ｍ ＮａＣｌ、２ｍＭヒスチジン、２ ｍＭ ＴＥＳ］の添加により１２０ｍＭに調整した。この混合物を３７℃で３０ 分間温置した後、リポソームが生成した。過剰のＥＤＴＡと非包封成分とを除去 し、これにはリポソームを燐酸塩緩衝塩水で平衡化されたセファデックスＧ−２ ５カラムに通過させた。２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートの約１０％がこの方法によりリポソーム中に包封された。リ ポソーム懸濁物は作成後の１週間にわたり４℃にて安定である。 ２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートを含有する再構成センダイ ウィルス エンベロプの作成 再構成されたセンダイ ウィルス エンベロプをポリヌクレオチドを細胞中へ 導入するための効率的ベヒクルとして使用することができる。アラド等、バイオ ヒミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ、第８５９巻、第８８〜９４頁（１９８６ ）は再構成されたセンダイ ウィルスエンベロプを用いてポリ（Ｉ）・ポリ（Ｃ ）を培養細胞中へ導入することを開示している。前記再構成センダイウィルス エンベロプの融合は、受容体細胞質中への包封巨大分子の導入をもたらす。再構 成センダイ ウィルス エンベロプは、無傷センダイ ウィルス粒子の洗剤可溶 化によって得ることができる。再構成エンベロプはウィルス エンベロプの燐脂 質とそのグリコ蛋白とよりなる融合性小胞であって、ウィルス ゲノムＲＮＡを 欠如する。 融合媒介の微小注入に関する再構成センダイ ウィルス エンベロプ中への本 発明による化合物の混入はアラド等、バイオヒミカ・エ・バイオフィジカ・アク タ、第８５９巻、第８８〜９４頁（１９８６）の方法にしたがって行うことがで きる。要するに、センダイ ウィルス粒子（１．５ｍｇ蛋白質）のペレットを、 １０％トリトンＸ−１００と１００ｍＭのＮａＣｌと５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ （ｐＨ７．４）と０．１ｍＭの弗化フェニルメチルスルホニルとを含有する３０ μＬの溶液（トリ トンＸ−１００：蛋白質の比、２：１、ｗ／ｗ）に溶解させた。遠心分離の後に 得られた透明な上澄液に溶液Ａ（１６０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭトリス−ＨＣ ｌ（ｐＨ７．４））に溶解された２′，５′−ホスホロチオエート／ホスホジエ ステル オリゴアデニレートを添加して、５-２０ｍｇ／ｍＬの活性成分の最終 濃度および１５０μＬの最終容積を与えた。トリトンＸ−１００を４０ｍｇのＳ Ｍ−２バイオビーズの直接的添加により上澄液から除去した。得られる濁った懸 濁物（再構成センダイウィルスエンベロプを含有）を１００，０００×ｇにて１ 時間にわたり遠心分離した。初期ウィルス 蛋白質の約１０％を含有するペレッ トを次いで溶液Ａに懸濁させて２５μｇ／ｍＬの最終蛋白質濃度を与えた。 合成法、調製法および分析法に関し引用した引例を全てここに参考のため引用 する。 以上、本発明を説明したが、本発明の思想および範囲を逸脱することなく多く の改変をなしうることが当業者には了解されよう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ， ＶＮ (72)発明者 フライデラー，ボルフガング ドイツ国 デイ−7750 コンスタンツ リ ンダウアー ストラッセ 47

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 式： ［式中、ｍは０、１、２もしくは３であり；ｎおよびｑは０および１の群から選 択され、ただしｎおよびｑは両者ともに０であってはならず；さらにＲ、Ｒ₁お よびＲ₂は独立して酸素および硫黄の群から選択され、ただしＲ、Ｒ₁およびＲ₂ の全てが酸素であってはならず、またＲ、Ｒ₁およびＲ₂の全てが硫黄であっても ならない］ の化合物またはその水溶性塩。 ２． ｍが１である請求の範囲第１項に記載の化合物。 ３． ｍが０である請求の範囲第１項に記載の化合物。 ４． ｎが１であり、ｑが０である請求の範囲第１〜３項のいずれか一項に記載 の化合物。 ５． ｎが１であり、ｑが１である請求の範囲第１〜３項のいずれか一項に記載 の化合物。 ６． アデニリル−（２′，５′）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−ア デノシン、その５′−モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート、並びにそれらの 水溶性塩類よりなる群から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。 ７． アデニリル−（２′，５′）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−ア デニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ−およびトリ− ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択される請求の範囲 第１項に記載の化合物。 ８． アデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−Ｐ−チオア デニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ−およびトリ− ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択される請求の範囲 第１項に記載の化合物。 ９． アデニリル−（２′，５′）−Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−Ｐ −チオアデニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ−およ びトリ−ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる群 から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。 １０． 医薬キャリヤと請求の範囲第１〜９項のいずれか一項に記載の化合物と からなる医薬組成物。 １１． ｍが１である請求の範囲第１０項に記載の医薬組成物。 １２． キャリヤが再構成センダイ ウィルス エンベロプおよびリポソームよ りなる群から選択される請求の範囲第１０項に記載の医薬組成物。 １３． 植物または哺乳動物におけるウィルス感染を処置するに際し、抗ウィル ス上有効量の請求の範囲第１〜９項のいずれか一項に記載の化合物を投与するこ とを特徴とするウィルス感染の処置方法。 １４． ｍが１である請求の範囲第１３項に記載の方法。 １５． 請求の範囲第１〜９項のいずれか一項に記載の単離された光学異性体ま たは前記単離された異性体の水溶性塩。 １６． １個もしくは２個のヌクレオチド間ホスホロチオエート基 を有し、その少なくとも一方がＰＲ配置である請求の範囲第１５項に記載の異性 体。 １７． アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′ ，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート、並 びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択される請求の範囲第１６項に記載の 異性体。 １８． アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′ ，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ−およびトリ−ホスフェート、並 びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択される請求の範囲第１６項に記載の 異性体。 １９． アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′ ，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ− およびトリ−ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる 群から選択される請求の範囲第１６項に記載の異性体。 ２０． アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ）−Ｐ−チオアデニリル−（２′ ，５′）−アデニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ− およびトリ−ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択され る請求の範囲第１６項に記載の異性体。 ２１． アデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−（ＰＲ） −Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ− およびトリ−ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択され る請求の範囲第１６項に記載の異性体。 ２２． アデニリル−（２′，５′）−アデニリル−（２′，５′）−（ＰＳ） −Ｐ−チオアデニリル−（２′，５′）−アデノシン、その５′−モノ−、ジ− およびトリ−ホスフェート、並びにそれらの水溶性塩類よりなる群から選択され る請求の範囲第１６項に記載の異性体。 ２３． 植物または哺乳動物におけるウィルス感染を処置するに際し、抗ウィル ス上有効量の請求の範囲第１５項に記載の単離された光学異性体を投与すること を特徴とするウィルス感染の処置方法。 ２４． 医薬キャリヤと請求の範囲第１５項に記載の単離された光学異性体とか らなる医薬組成物。 ２５． ポリ（Ｌ−リジン）と２′，５′−ホスホロチ オエート／ホスホジエステル オリゴアデニレートとの複合体であって、この複 合体が式 ［式中、ｑは約６０〜約７０の整数であり、各Ｒは独立してＲ′または であり、ただしＲ基の約５〜約１０個はＲ′であり、このＲ′は次式 を有し、ここでｍは０、１、２もしくは３であり；Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は独立し て酸素および硫黄の群から選択され、ただしＲ₃、Ｒ₄およびＲ₅の全てが酸素で あってはならず、さらにＲ₃、Ｒ₄およびＲ₅の全部が硫黄であってもならない］ を有することを特徴とする複合体。