DE217102T1 - Interferon-induziertes (2'-5')-oligo-a-synthetase-gen, mrna, cdna und enzyme mit (2'-5')-oligo-a-synthetase-aktivitaet. - Google Patents
Interferon-induziertes (2'-5')-oligo-a-synthetase-gen, mrna, cdna und enzyme mit (2'-5')-oligo-a-synthetase-aktivitaet.Info
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Claims (58)
1. Humane DNA-Sequenz, die für ein Enzym mit (2'-5·) Oligo
A Synthetaseaktivität codiert.
2. Humane DNA-Sequenz nach Anspruch 1, die für ein Enzym mit der Aminosäuresequenz, die in Fig.7A gezeigt ist, codiert.
3. Humane DNA-Sequenz nach Anspruch 1, die für ein Enzym mit der Aminosäuresequenz, die in Fig.7B gezeigt ist, codiert.
4. Humane DNA-Sequenz nach Anspruch 1, wobei das Enzym aus einem C-terminalen Heptadecapeptid besteht, das den Aminosäuresequenzen
gemäß Anspruch 2 und 3 gemeinsam ist.
5. Humane DNA-Sequenz nach Anspruch 1 mit der Restrict
ionskarte, die in Fig.9 gezeigt ist.
6. Sequenz der (2'-5') Oligo A Synthetase cDNA, die in
Fig.7A gezeigt ist und einer 1,6 kb mRNA komplementär ist.
7. Sequenz der ( 2 ' - 5 ' ) Oligo A Synthetase cDNA, die in
Fig.7B gezeigt ist und einer 1,8 kb mRNAkomplementär ist.
8. DNA-Sequenz, die den Promoter der DNA-Sequenz gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 enthält.
9. DNA-Sequenz nach Anspruch 8 mit der Restriktionskarte,
die in Fig.10 gezeigt ist.
!? H)
10. DNA-Sequenz nach Anspruch 8 oder 9 mit der DNA-Sequenz, die in Fig.11 gezeigt ist.
11. 1,6 kb RNA mit einer NukLeotidsequenz, die komplementär
zu der NukLeotidsequenz ist, die in Fig.7A gezeigt
12. 1,8 kb RNA mit einer NukLeotidsequenz, die komplementär
zu der Sequenz der Nukleotide 1-1322, die in Fig.7A
gezeigt ist, und der Sequenz der Nukleotide 901-1590, die in Fig.7B gezeigt ist.
13. DNA-Transfervektor, der eine insertierte DNA-Sequenz
enthält, die im wesentlichen aus der cDNA-Sequenz gemäß Anspruch 6 besteht.
14. DNA-Transfervektor nach Anspruch 13, der %, gt 11-E16
ist, in dem die insertierte cDNA-Sequenz in Phase mit dem
lac Z Gen fusioniert ist, so daß die Expression der codierenden
Sequenz ermöglicht ist.
15. DNA-Transfervektor, der eine insertierte DNA-Sequenz
enthält, die im wesentlichen aus der cDNA-Sequenz gemäß Anspruch 7 besteht.
16. Mikroorganismus, der mit einem Expressionsvektor gemäß
einem der Ansprüche 13 bis 15 transformiert worden ist.
17. Mikroorganismus nach Anspruch 16, der Escherichia coli
ist.
18. Enzym mit C 2 *-5') Oligo A Synthetaseaktivität und der
Aminosäuresequenz, die in Fig.7A gezeigt ist.
19. Enzym mit (2' -5') Oligo A Synthetaseaktivität, das die
ü21710
Sequenz der Aminosäuren 1-364, die in Fig.7A gezeigt ist,
und die Sequenz der Aminosäuren 290-400, die in Fig.7B gezeigt ist, umfaßt.
20. Enzym nach Anspruch 18, das ungefähr 364 Aminosäuren umfaßt und ein HoLekuLargewicht von ungefähr 41.500 Dalton
hat.
21. Enzym nach Anspruch 19, das ungefähr 400 Aminosäuren umfaßt und ein HoLekuLargewicht von ungefähr 46.000 DaLton
hat.
22. Verfahren zur überwachung der Antwort eines Patienten
auf ein Interferon, das das Messen der Konzentration von
C2·-5·> OLigo A Synthetase mRNA in ZeLLen oder Körperflüssigkeiten des Patienten durch Hybridisieren der mRNA mit
dazu kompLementärer DNA umfaßt.
23. Verfahren nach Anspruch 22, in dem die mRNA die 1,6 kb RNA gemäß Anspruch 11 ist.
24. Verfahren nach Anspruch 22, in dem die mRNA die 1,8 kb
RNA gemäß Anspruch 12 ist.
25. Verfahren für die Bestimmung der Antwort von ZeLLen und Geweben auf Interferon, das das Hybridisieren von RNA
aus ZeLLen oder Geweben, die Interferon ausgesetzt worden waren, mit zur RNA kompLementärer cDNA und das Bestimmen
des Ausmaßes der Hybridisierung umfaßt.
26. Verfahren nach Anspruch 25, wobei die RNA aus ZeLLen oder Gewebe extrahiert worden ist, die Interferon ausgesetzt worden waren, an einem MembranfiLter' immobilisiert
und mit markierter cDNA, die spezifisch für
Inte rferon-induzierte mRNAs ist, hybridisiert worden ist.
27. Verfahren nach Anspruch 25, das das in s_i.tu Hybridisieren
markierter cDNA mit Gewebeschnitten und die Auswertung
durch mikroskopische Untersuchung der Autoradiographie
oder FLuoreszenz umfaßt.
28. Verfahren nach Anspruch 25, wobei die ZeLlen oder Gewebe
humanen Ursprungs sind.
29. Kit zum Durchführen eines Verfahrens gemäß Anspruch 25, das eine cDNA komplementär zu einer Sequenz, die in
Fig.7A oder 7B gezeigt ist, Reagenzien für die Nicktranslation
mit DesoxyribonucL ease I und P - Gamma-dCTP zur Durchführung der Hybridisierungstests, Reagenzien für die
Hybridisierung auf NitroceLLu Losemembranen und Reagenzien
für die RNA-Extraktion von Zellen enthält.
30. Antigenes Peptid mit einer Aminosäuresequenz, die in
der Aminosäuresequenz, die in Fig.7A gezeigt ist, enthalten
ist.
31. Antigenes Peptid mit einer Aminosäuresequenz, die in
der Sequenz der Aminosäuren 1-364, die in Fig.7A gezeigt ist,und der Sequenz der Aminosäuren 290-400, die in Fig.7B
gezeigt ist, enthalten ist.
32. Antigenes Peptid nach Anspruch 30, mit einer Aminosäuresequenz,
die die 17 C-terminalen Aminosäuren der Aminosäuresequenz,
die in Fig.7A gezeigt ist, umfaßt, und die Aminosäuresequenz hat:
ARG-PRO-PRO-ALA-SER-SER-LEU-PRO-PHE-ILE-PRO-ALA-PRO-LEU-HIS-GLU-ALA.
33. Antigenes Peptid nach Anspruch 30 mit der Aminosäuresequenz:
glu-lys-tyr-leu-arg-arg-gln-leu-thr-lys-pro-arg-pro-valile-leu-asp-pro-ala-asp.
34. Antikörper/ erzeugt gegen das antigene Peptid gemäß
Anspruch 30, der C 2f-5') Oligo A Synthetase erkennt und
immunpräzipitiert.
35. Antikörper, erzeugt gegen das antigene Peptid gemäß
Anspruch 31, der die (2' -5') oligo A Synthetase erkennt
und immunpräzipitiert.
36. Antikörper nach einem der Ansprüche 34 oder 35 gegen alle vier Formen der (2 · —5'>
Oligo A Synthetase, nämlich die 40 KD, 46 KD, 67 KD und 100 KD Formen davon.
37. Antikörper nach Anspruch 36, wobei der genannte Antikörper durch Immunisieren eines Tieres mit Peptid B erhalten worden ist.
38. Antikörper nach Anspruch 36, wobei der genannte Antikörper mit einem Marker konjugiert worden ist, um einen
markierten Antikörper zu bilden.
39. Antikörper nach Anspruch 38, wobei der Marker ein Fluoreszenzmarker ist.
40. Antikörper nach Anspruch 38, wobei der Marker ein radioaktiver Marker ist.
41. Antikörper nach Anspruch 38, wobei der Marker ein
Enzym ist.
42. Assay für die 40 KD, 46 KD, 67 KD und 100 KD Formen
der <2'-5') Oligo A Synthetase in Zellen, der das Inkubieren der Zellen mit dem markierten Antikörper gemäß An-
ü 21 7 1 U
spruch 38 und das Detektieren der (2'-S1) OLigo A Synthetaseaktivitat
tragenden Zellen in einer der genannten Formen mittels einer der genannten Markierungen umfaßt.
43. Assay nach Anspruch 42, wobei der Assay ein Fluoroszenzimmunoassay
ist.
44. Assay nach Anspruch 42, wobei der Assay ein Radioimmunoassay
ist.
45. Assay nach Anspruch 42, wobei der Assay ein Enzymimmunoassay
ist.
46. Assay nach Anspruch 42, wobei die Zellen mononukleare Blutzellen sind.
47. Kit für das Detektieren aller vier Formen der C2'—5')
Oligo A Synthetase in Zellen, der den Antikörper gemäß
&ngr; Anspruch 38 enthält.
48. Das 47 KD (2'-5·) Oligo A Synthetaseprotein in einem
Zustand erhöhter Reinheit.
49. Das 100 KD (2'-5') oligo A Synthetaseprotein in einem
Zustand erhöhter Reinheit.
50. Antikörper gegen eine der 40 KD, 46 KD, 67 KD oder 100
KD-Formen der (2'-5') Oligo A Synthetase, der nicht mit
den anderen drei Formen kreuzreagiert.
51. Ein Verfahren zum Bestimmen der Interferonaktivität in
einem Stibjekt, das die Messung der Menge von C2' — 5 ') Oligo
A Synthetase in einer Zelle oder Körperflüssigkeit des
Subjektes in vorbestimmten Zeitabständen, das Bestimmen
der Unterschiede der Menge der genannten Synthetase in der
Zelle oder'KörperfIüssigkeit des Subjektes innerhalb der
verschiedenen Zeitabstände, und daher das Bestimmen der
Menge von Synthetase in der Zelle oder KörperfLüssigkeit
des Subjektes und damit die Interferonaktivität des
Subjektes umfaßt.
52. Verfahren nach Anspruch 51, wobei die Menge der Synthetase durch Inkontaktbringen der Synthetase mit einem
Antikörper gemäß Anspruch 34 gemessen wird, um einen Komplex damit zu bilden, und die Menge des so gebildeten Komplexes bestimmt wird.
53. Verfahren nach Anspruch 52, das weiterhin die Extraktion von C2·—5 *
> Oligo A Synthetase aus einer Zelle oder Körperflüssigkeit umfaßt, die Interferon ausgesetzt worden
ist, das Markieren der extrahierten Synthetase mit einem identifizierbaren Marker, um markierte Synthetase zu bilden, das Inkontaktbringen der markierten Synthetase mit
dem Antikörper unter geeigneten Bedingungen, um so einen markierten Synthetaseantikörperkomplex zu bilden, und das
Detektieren des Markers in dem Komplex und damit das Detektieren der Synthetase umfaßt.
54. Verfahren nach Anspruch 53, wobei der Marker S-Methionin ist.
55. Ein Kit zum Durchführen des Verfahrens gemäß Anspruch 53, der den Antikörper gemäß Anspruch 34 oder 35, Materialien zum Extrahieren der Synthetase, Materialien zum
Markieren der Synthetase, und Materialien für das Detektieren der Marker und Bestimmen der Menge von Synthetase
enthäIt.
56. Klonierte DNA, die spezifisch mit mRNAs hybridisiert,
die in humanen Zellen erscheinen, nachdem sie Interferon
ausgesetzt worden sind.
57. Klonierte c D N A gemäß Anspruch 56, die für die (2 · - 5 ')
Oligo A Synthetase mRNAs von 3,6 kb, 1,8 und 1,6 kb spezifisch ist. ■
58. KLonierte DNA gemäß Anspruch 56, die für die mRNA eines 56.000 H -Protein spezifisch ist, wobei die mRNA 2
Kilobasen groß ist und die NukLeotidsequenz hat, die in
Fig.1 gezeigt ist.
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