JPS62115291A - インタ−フエロン誘起遺伝子及び酵素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 インターフェロン誘起の（２’−５′）オリゴＡ合成酵
素遺伝子、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、および（２′−５′）
オリゴムシンセターゼ活性を保有する諸酵素 インターフェロンの生物学的影響の多くは、ＩＦＮにさ
らされたｍａで新しく誘起されるｍＲＮＡと蛋白とに仲
介されるように見える（抄録：　Ｒｅｖｅｌ、　１９８
４　；　Ｌｃｂｌｅｕ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ、　１
９８２　；　Ｂａｇｌｌｏｎｌ　ａｎｄ　Ｎｉ１ｓｏｎ
、　１９８３　）　。これらＩＦＮ−誘起蛋白質のうち
二重が特に重要である＝１）翻訳調整路酵素（ｄｓＲＮ
△依存蛋白キナーゼおよび（２′−５′）オリゴムシン
セターゼ。

（２”５′）オリゴＡで活性化されたヌクレアーゼの２
′−フォスフＡ−ディ　エステラーゼ）及び２）Ｉｌｌ
Ｉ胞表面諸抗Ｊｊｉｉ　（＋−１１Ａ−Ａ、　Ｂ、　Ｃ
，Ｂ２−ミクログロブリン、　ＨＩへ−Ｄ　Ｒ）　、　
（ｌ！！の細胞内蛋白質や放出蛋白質−ｂ又重要な役目
を演するであろう（Ｗｅｉｌ　ａｔ　ａｌ、　１９８３
　：　Ｃｈｅｂａｔｈ　ａｔａｌ、　　１９８３　：Ｗ
ａｌｌａｃｈ　ｅｔ　ａｌ、１９８３）。

ＨＬＡ諸遺伝子を例外として（Ｈａｌｉｓｓｅｎ　ｅｔ
　ａｌ。

１９８２　：Ｓｃｈａｍｂｏｅｃｋ　ｅｔ　ａｌ、　　
１９８３）　。

ＩＦＮ−誘起の諸蛋白質の構造と場合によっては機能は
不明であり、従ってそれに依って諸ＩＦＮが特定的にこ
れら諸遺伝子を活性化する機構も不明である。これらの
疑問に答えて、幾つかのＩＦＮ−誘起遺伝子のｃＤＮＡ
が最近クローン化された（Ｃｈｅｂａｔｈ　ｅｔ　ａｔ
、　１９８３　：　Ｈｅｒｌｉｎ　ｅｔａｌ、　　１９
８３　；Ｆｒｉｅｄｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、　　１９８４
　：Ｓａｍａｎｔａ　ｅｔ　ａｌ、　１９８４　）　。

特に、人間の（２′−５′）オリゴムシンセターゼをコ
ードしたｃＤＮＡと遺伝子が研究されて、その酵素はｄ
ｓＲＮＡ−誘起のものでＡＴＰを １）ｐｐ（Ａ２　’　ｌ）△）ｎオリゴマーに転換しく
にｅｒｒ　ａｎｄ　Ｂｒｏｗｎ、　　１９７８　）　、
その代わりに潜在のＲＮａＳｅ　Ｆに結合して活性化す
る（Ｓｃｈｍｉｄｔ　ｅｔ　ａｌ、　１９７８　）　、
この（２’−５′）オリゴムシンセターゼは、これら二
型のヒトＩＦＮ総でで細胞内で強く誘起され、そしてそ
の増加は、ＩＦＮ活性の帰れた指標である（１４ａｌｌ
ａｃｈ　ｅｔ　ａｌ、　１９８２　）　、この酵素は造
血細胞の分化中に誘起され、ＩＦＮ−βのオートクリン
分泌を指示づ−る（Ｗａｒｄｅｎ　ａｔ　ａｔ、　１９
８４　）　。

この酵素は後に肝の同ｗＪ繊緒芽細胞の８期にも同様に
誘起される（ＩＪｃｌｌｓ　ａｎｄ　Ｈａｌｌｕｃｃｉ
、　１９８５）、この酵素活性は細胞生長が始まると低
下しくＥｔｉｅｎｎｅ　−Ｓｍｅｋａｎｓ　ｏｔ　ａｌ
、　１９８３　；　　Ｃｒｅａｓｅｙｅｔ　ａｌ、　　
１９８３）そして、ＩＦＮの反生長作用に関連している
ように見える（Ｋｉｍｃ旧ｃｔａｌ、１９８１）、（２
’−５’　）ＪリゴΔシンセターゼ又は（２’−５′）
オリゴム−誘起のＲＮａｓｅＦ欠乏は、これがＩＦＮの
ウィルス生長抑制の唯一の機構では多分無いが（Ｌｃｂ
ｌｃｕ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ。

１９８２）、諸ＩＮＦの抗ウィルス効采の部分消滅と関
連づけられて来た（Ｓａｌｚｂｃｒｏ　ｅｔ　ａｌ、　
　１９８３　：Ｅｐｓｔｅｉｎ　ｅｔ　ａｔ、１９８１
　）　。

この（２’−５′）オリゴΔヌクレオチドは、多くの真
核生物ｍ胞で検出され、バクテリアでさえ見出された（
Ｌａｕｒｅｎｃｅ　ｅｔ　ａｔ、　　１９８４　）　。

そして、この合成酵素は多分広範囲に分布したものであ
ろう。この酵素はマウスから（ＤＯｕＱｈｅｒｔｙ　ｅ
ｔａｔ、１９８０）及びヒト細胞から（Ｗａｎｄ　ｅｔ
　ａｌ。

１９８１　：Ｒｅｖｅｌ　ｅｔ　ａｌ、１９８１　）純
化され、大小二型の酵素が観察されているが（Ｒｅｖｅ
ｌ　ｅｔ　ａｌ。

１９８２　：Ｓｔ、　Ｌａｕｒｅｎｔ　ｅｔ　ａｌ、１
９８３＞　、構造は未解明である。

ＩＦＮにさらされた細胞内に誘起された（２′−５′）
オリゴムシンセターゼ（Ｈｏｂａｎｅｓｓｉａｎ　ｅｔ
ａｔ、１９７７　；Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ　　ｅｔ　
ａｌ、　１９７８）は種々の巽常な特性を持つ。それの
主な活性は、ＡＴＰから５′三燐酸化短オリゴＡ鎖を合
成する事である（主として２連体から５連体、最長１５
連Ａの）が、他のＲＮＡ重合酵素と違って、オリゴＡの
アデニン化物の２′ＯＨに特定的にアデニン化物又はも
う１つのヌクレオチドを添加（Ｋｅｒｒａｎｄ　Ｂｒｏ
ｗｎ、　　１９７８　；５ａＩＩｌａｎｔａ　ｅｔ　ａ
ｌ、１９８０）するか、ＮＡＤのようなフリー２′ＯＨ
のアデニン化物を持った他のくオリゴ〉又はクレオチド
（Ｂａｌｌ、　　１９８０）又は、ｔＲＮＡにさえ（Ｆ
ｅｒｂａｓ　ａｔ　ａｌ、　　１９８１　）添加する。

活性を保つためには、この酵素は、最短５０ｂｐ以」二
のＲＮＡ複鎖部分と結合しな【Ｊればならない（Ｍｉｎ
ｋｓ　ａｔ、　ａｔ、　　１９７９　）　、従って、幾
つかの結合部分を所有しなｔＪればならない：ヌクレオ
ヂド三燐酸用、２　’　ＯＩ−１アデノシン　ポリヌク
レオチド用および複鎖ＲＮＡ用。このｗｉ素は、２′。

５’ＡＤＦ−セファ、ロース（、Ｉｏｈｎｓｔｏｎ　ａ
ｔ　ａｌ、　　１９８０）、ポリ（ｒｌ）（ｒＣ）−ア
ガロース（Ｈｏｒａｎｅｓｓｉａｎ　ａｔ　ａｌ、　１
９７７　）及びＣ１ｂａｃｒｏｎブルーセフ７０−ス（
Ｒｃｖｃｌ　ａｔ　ａｌ　１９８１　）に吸着する。細
胞の違いによって、この（２’−５′）オリゴシンセタ
ーゼ活性はリイトゾル（Ｒｅｖｅｌ　ｅｔａｌ、１９８
１）中で見られたり、リポソーム塩洗出物（Ｄｏｕｇｌ
＋ｃｒｔｙ　ａｔ　ａｔ、　１９８０　）で見られたり
、検液中にあったり（Ｎｉｌｓｃｎ　ａｔ　ａｌ、　　
１９８２　ｂ　）、核膜にさえ多聞に見出されている。

細胞ＲＮＡはこの酵素の活性化に際し、ポリ（ｒｌ）（
ｒｃ）に代行し得る事はｔｌ意すべきであり（Ｒｅｖｅ
ｌ　ｅｔａｌ、１９８０）、このシンセターゼは、１−
Ｉｎ　ＲＮ　Ａの加工にさえ役割を持つかも知れない（
Ｎｉｅｌｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ、１９８２ａ）　、　　（
２’−５’　）オリゴムシンセターゼの幾らかは細胞質
膜に結合し、出芽ウィルス粒に包含される（１４ａｌｌ
ａｃｈ　ａｎｄＲｅｖｅｌ、１９８０）　、このような
複雑な相互作用は、（２’−５′）オリゴムシステムの
局所的作用を確保して（Ｎｉｌｓｅｎ　ａｎｄ　Ｂｅｇ
ｌｉｏｎｉ、　１９８３　）正常細胞、ウィルス感染細
胞で指摘される複数の役割を説明可能にする。この合成
酵素の含量は、ＴＦＮ−処理細胞の全蛋白質の０．１％
以下であり、その分子構造は直接に決定できなかった。

（２’−５′）オリゴＡシンセターゼ含量測定値をｉｎ
　ｖｉｔｒｏ又はｉｎ　ｖｉｖｏで、細胞がＩＦＮにさ
らされ、それに反応しているか否かの決定に使用できる
。この測定は、未知の溶液におけるＩＦＮの検定に、細
胞を刻溶液にさらし、（２’−５′）オリゴムシンセタ
ーゼ含量を決定する事で使用することができる（Ｒｅｖ
ｅｌ　ｅｔ　ａｌ、、米国特許４，３０２．５３３）。

この測定は人間を含む総ての生物でＩＦＮ生産量が増し
たか否かを決めるのにも又使用できる。

（２’−５’　　ＡリゴＡシンセターゼｊ−の法的反応 健康個体の末梢白液単核細胞（ＰＢＭＣ）では（２’−
５’　）オリゴΔシンセターピ含量が比較的に恒常であ
ることがわかっている（　５Ｃｈａｔｔｎｅｒｅｔ　ａ
ｌ、１９８１　ｂ）。（２’−５′）オリゴムシンセタ
ーゼの増加は、急性ウィルス感染患者（Ｓｃｈａｔｔｎ
ｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８１　ｂ　；　５ｃｈｏｅ
ｎｆｅｌｄｅｔ　ａｌ、、１９８５）　、持続性ウィル
ス感染（１４ａｌｌａｃｈ　ａｔ　ａｌ、、　　１９８
２　）　、自己免疫病及びヤコブークロイツフエルト病
のような感染病と見うレル幾ツカノ他の症候群（Ｒｅｖ
ｅｌ　ｅｔ　ａｔ、、　　１９８２）などに見られる。

（２”５′）オリゴムシンセターゼの基本含ｍｔ、を顆
粒球では低いが、ウィルス感染により大きく増はするこ
とがみられた（　５ｃｈａｔｔｎｅｒ　ｅｔａｌ、、１
９８４）、ＡＩＤＳ患者のＰＢＭＣにお（）る（２’−
５′）オリゴＡシンセターゼ酵素増加が最近報告された
（Ｒｅａｄ　ｅｔａｌ、、１９８５　）。動物の場合、
（２′−５′）オリゴＡシンセターゼ量の増加は速く、
ＩＦＮの血中出現より恒常的である（Ｓｃｈａｔｔｎｅ
ｒ　ｅｔ　ａｌ、　１９８２ａ）、（２’−５′）オリ
ゴムシンセターゼ吊は数週間高水準を保つのに対してＩ
ＦＮの最高値は短期的である。

（２’−５′）オリゴムシンセターゼの造血細胞分化中
の増加は、ＩＦＮ−βのオートクリン分泌の結果である
（Ｙａｒｄｅｎ　ｅｔ　ａｌ、　１９８４　）　、急性
白血病で多数の芽細胞と共に（２’−５′）オリゴムシ
ンセターゼ水準の低下が見られる（Ｗａｌｌａｃｈ　ｅ
ｔ　ａｌ、　１９８２　；　５ｃｈａｔｔｎｅｒ　ｅｔ
　ａｌ、　１９８２ｂ）。

（２’−５′）オリゴムシンセターゼ測定の重要な応用
分野の他の１つは、ＩＦＮ冶療患者の監視である。臨床
変化の伯に、ＰＢＭＧの（２′−５′）オリゴムシンセ
ターゼ水準を測定し、患者のＩＦＮ投与への反応を決定
することができ、この全身投与の場合、ＩＦＮ−αの投
与でもＩＦＮ−βの投与でも酵素水準は５−１０倍の増
大となる（Ｓｃｈａｔｔｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　１９
８１　ａ　、　５ｃｈｏｅｎｆｅｌｄｅｔ　ａｌ、、１
９（Ｅｌ　）　、他の、ｒＦＮ、Ｊ起の諸活性又は諸分
子の検定は、（２”５′）オリゴＡシンセターぜ酵素の
検定と同様に使用可能であることは明らかであるが、こ
の方法が最も広く用いられている（Ｒｅａｄ　ａｔ　ａ
ｔ、、　１９８５　：　Ｈｃｒｒｉｔｔ　ｅｔａｔ、、
１９８５）、これらの研究ではすべて、ＡＴＰの（２”
５’＞（Δ）ｎオリゴマーへの転換を測定する酵素的１
検定を用いている（Ｒｅｖｅｌｅｔ　ａｌ、、米国特許
４，３０２，５３３）。

（２′−５′）オリゴ△シンセターゼの検定には、抗（
２′−５′）オリゴシンセターゼペプチド抗体を用いる
ことができる。（２′−５′）オリゴＡシンセターげの
ための抗体入手には、種種の＜２’−５’＞ＡリボΔ諸
シンセターゼの全アミノ酸配列からペプチド配列を選び
、内在（２”５′）ＩリゴΔシン［ターゼ分子への抗体
誘起のための抗原に用いることができる。兎に抗体を作
らせる為に抗原ペプチドを皮下注射した。

抗体反応厚最大となる迄促進注射を繰返した。

今回の発明は、（２’−５′）オリゴＡシンセターゼ活
性のある１つの酵素をコードするヒトＤＮＡに関するも
のである。ＤＮＡの型の１つは第７Ａ図に示したヌクレ
オチド配列を持つ。他の型のＤＮＡはｒｉｇｕｒｅ７　
Ａに示し、第７Ｂ図に示す９０１−１５９０のヌクレオ
チド配列と重複する１−１３２２のヌクレオチド配列を
持つ。

（２’−５’　）オリゴＡシンセターゼ活性を持つ１つ
の酵素は、第７Ａ図に示すアミノ酸配列を持つ。＜２”
５′）オリゴンＡシンセターゼ活性をもつもう１つの酵
素は、第７Δ図に示す１−３６４のアミノ酸配列を持ち
、第７Ｂ図に示す２９０−４００のアミノ酸配列と重複
する。

第７Ａ図と第７Ｂ図のヌクレオチド配列と相補的なヌク
レオチド配列を持つ１．６にｂと１．８ＫｂのＲＮＡが
単離されている。

患者のインターフェロン投与に対する反応を監視する方
法は、（２’−５′）オリゴムシンセターゼｍＲＮＡの
細胞内又は体内濃度をそれに相補的なＤＮＡとそのｍＲ
ＮＡとをハイブリッド形成を行うことによって測定する
ことから成っている。

現発明の抗原性蛋白質は第７Ａ図と第７Ｂ図に示したア
ミノ酸配列の中に含まれるアミノ酸配列を持つ。この抗
原諸ペブヂドに対して生じた諸抗体は（２’−５′）オ
リゴΔシンヒターゼを認識し、免疫沈澱を行う。

被検体でのインターフコ−ロン活性を監視する方法は、
被検体の細胞内又は体液の（２’−５′）オリゴムシン
セターゼ含量を、既定の時間隔で測定する事、被検体の
細胞内又は体液内でのシンセターゼ含有量の相異を種々
の時間隔で決定し、そこから被検体の細胞内や体液内で
のシンセターゼの量を決定し、それによって被検体のイ
ンターフェロン活性をはかるｂのである。このシンセタ
ーゼは、シンセターゼを今回の発明による抗体と接触さ
せて複合体を作り、作られた複合体の量を決定すること
によって測定される。

更に、今回の発明は（２’−５′）オリゴムシンセター
ゼの２つの抗体に関するもので、その抗体は、＜２’−
５′）オリゴムシンセターゼのアミノ酸配列の一部を持
つ抗原を調整することにより得られるものである。その
抗−（２’−５′）オリゴシンセターゼペプチド抗体は
、その酵素を検出する為に使用できるものである。

図面の概説 第１図は（２′−５′）オリゴＡシンセターゼＥ１ｃＤ
ＮＡクローン１７４−３の構造と配列とを示す： 第１Ａ図はＥ１ｃＤＮＡクローン１７４−３の制限酵素
切断位置地図を示す。挿入の諸塩基対は、ｐＢＲ３２２
ＤＮＡと同じ順序で番号付けしである。ｐＢＲＥｃｏＲ
１位置は右にある。

挿入のどちらの鎖も（点線）、縦線で示した制限切断位
置から配列決定をした（Ｈａｘａｍ　＆Ｇ１１ｂｅｒｔ
、　１９８０　）　、コード鎖は、右から左に向って５
′から３′のものである。右ｐｓｔ１位置につづいて１
７Ｇと７２Ｔがあり、２ヌクレオチドのＧＡが続き、（
Ｂ）に示した配列であり従って尾の一部でない３Ｔと続
く。３′の末端には４５Ａと１０Ｃの尾があり左ＰＣｔ
１位置で終結する。

第１Ｂ図は細長のコード枠を持ったヌクレオチド配列を
示−！Ｊｏ！初のＴはヌクレオチド９２であり、挿入の
尾（への右端）の後に位置する。

挿入部の５ａＵ３Ａ１位置とＦＣＯＲ１位置は示した配
列の夫々１２９と／１８０に当る。

Ｆｉｇｕｒｅ２は５Ｖ８０とＮａｍａｌｖａ細胞内のＥ
１特定の諸ｍＲＮへの大きさとその誘導を示す。

第２Ａ図はクロ７ンＦ１のニツクトランスレ−ショ：ｚ
をｔｒ）／、＝　［３２Ｐ］　−ｃＤＮＡの５Ｖ８０細
胞からの変成ポリＡ＋−ＲＮＡ電気泳動諸プロットへの
交配を示す。その諸ＲＮＡはＩＦＮ−ベーター１の添加
から、示しである時間数の後に調整された。ＲＮＡの見
かけの大きさはオートラジオグラフィに示される。左レ
ーン：　ｒＲＮΔ諸マーカマ− カーＢ図は第２Ａ図ど同じ＜ＩＦＮ−アルファで示した
ある時間数の処Ｊ１１１をしたＮａｍａｌｖａ細胞より
のＲＮＡである。左レーン：　ｒＲＮ△諸マーカマ− カー図はＩＦＮ−処理したｓｖｓｏｍ胞（１）又は非処
理細胞（Ｃ）からのＩＦＮ−誘起のｍＲＮＡポリ（Ａ）
＋ＲＮＡの為のｃＤＮＡを含んだ組換プラズミドクロー
ン０５６のＲＮＡ諸プロットへの交配による特性決定を
示し、７ミクログラムがアガロースゲルで電気泳動され
、ニトロセルローズにプロットの後に、Ｃ５６クローン
、ヒトＨＬＡ　　ｃＤＮＡクローン又はラットのチュブ
リンｃＤＮＡクローンのいずれかの、ニックトランスレ
ーションを行った［３２Ｐ］−プラスミドＤＮＡと交配
した。接触時間は４８時間である。

リポソームＲＮＡマーカーの放射性１８８の位置が示し
である。

第４図はＣ５６４，５０ｂｌ）挿入部の制限酵素切断位
置地図の一部とヌクレオチド配列を示す。

Ｃ５６プラズミドはＨｉ　ｎｄ３で消化し、アルファー
［３２Ｐ］−ｄＣＴＰを用いてＤＮＡポリメラーゼ■−
大断片（フレノウ酵素、ＢＯｅｈｒｉｎ（ｌｅｒ）で標
識され、そのＨｉｎｄ３−ＰＳｔｌ断片が１％アガロー
スゲル上で分離された。相補鎖の配列を決めるため、そ
のプラスミドのし１２位置をガー　２４　＝ ンマ［３２Ｐ］−ＡＴＰを用いてＴ４−ポリヌクレオチ
ドキナーゼ（Ｂｉｏｌａｂｓ　）で５′−標識をした後
にそのＢ（Ｊ１２−ＰＳｔ１断片を分離した。配列決定
はＨａｘａｍ　ａｎｄ　Ｇ１１ｂｃｒｔ法で行った。コ
ード鎖Ａの配列（右から左へ）は下のパネルに示しであ
る。Ａ鎖配列の最初の２個のヂミヂン残基は多分上部の
図にあるＡＴ尾に対応するのであろう。

第５図はＩＦＮによるＣ５６　　ｍＲＮＡ誘起の時間経
過を示す： 第５Ａ図はポリ（Ａ）”ＲＮＡでＩＦＮ−アルファ１０
００　ＬＪ　／　ｍｅで示された時間数の処理を受けた
Ｎａｍａｌｖａ　ｔｍ胞からの７ミクログラムをアガロ
ースゲルで電気泳動し、プロットした後にニックトラン
スレーションを行った［３２Ｐ］−０５６プラズミドＤ
ＮＡと交配したものを示す。

第５Ｂ図はポリ（Ａ）＋ＲＮＡで、２００Ｕ／ｒＲＲの
ＩＦＮ−ベータで示された時間数処理した５ｖｓｏ細胞
からの７ミクログラムのものを示す。星マークは単クロ
ーン抗体のカラム（２×１０８Ｕ／η）で純化したＩＦ
Ｎ−ベーター１で処理した細胞から得たＲＮＡを示す。

第５Ｃ図はポリ（Ａ）”　ＲＮＡで、（５Ｂ）と同様に
処理した５Ｖ８０からの１マイクログラムがＣ５６ＤＮ
Ａの断片１　（Ｆｉｏ、４を見よ）の３′末端に標識し
たもとの液中交配したものを示す。交配体はＳｌ−ヌク
レアーゼで処理し、変性ゲルで分析した。ｍＲＮＡ−交
雑検針（→）は自己再結合のものく一部）より短かい。

第６図は（２’−５’　）オリゴムシンセターゼの１．
６及び１．８にｂ　　ｍＲＮＡのための諸ｃＤＮＡの制
限酵素切断地図を示す。

第６Ａ図は１．６にｂのｃＤＮＡの地図である。

Ｅｌ　ｃＤＮＡ　（Ｈｅｒｌｉｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９
８３）の位置とラムダ１Ｊｔ１０ｃＤＮＡのものが示し
である。

ｐＡはポリアゾニレ−ジョンの起る位置である。

エクソンの端は縦点線で示しである。各エクソンを持つ
ゲノムＤＮＡ諸断片の大きさは括弧内に示す。縦矢は１
．８ＫｂＲＮＡに更に存在するスプライス位置を示す。

９−２１及び５−−２１両ｃＤＮＡの配列決定法を示し
た。

３　’　ＥＣｏＲｌ位置（［）からＰｓｔ１位置（Ｐ）
の配列はＥｌ　　ｃＤＮＡの中で決定した（Ｈｅｒｌｉ
ｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８３　）　。

第６Ｂ図は１．８にｂ　　ｃＤＮＡの地図である。

ラムダｏｔ１０り１」−ン／１８−１は１．８ＫｂＲＮ
Ａのエクソン８を含むゲノム断片ｐｓｔｌ−Ｐｓｔ−１
を用いて分離した。（図９）諸エクソンは１．６に１）
のＩＥ、ｃＤＮＡの場合ど同じく番付けした。切詰めた
エクソン７は７ａとした。

第７Ａ図と第７Ｆ３図は２個の（２”５′）オリゴムシ
ンセターゼｃ　Ｉ）　Ｎ　Ａのヌクレオチド配列を示す
。１．８に１１　ｃＤＮＡクローン４８−１の諸ヌクレ
オチドは１．６Ｋｌ）ｃＤＮＡクローン９−２１に準じ
て番（＝Ｊ　ｔ）した。アミノ酸の岳イ４けは括弧内に
示す。翻訳はＡＴＧΔＴＧ配列の第１又は第２のコドン
から始まる。諸エクソンの端は縦棒で示しである。（Ｇ
ｌｙｃｏｓ、　）はＥｌ８の中にあるグリコキシレーシ
ョンの可能性位置を示す。多分対立形質の相異による単
塩基変異はクローンとゲノムＤＮＡの相異として１．６
にｂ配列の３７６番（ＴとＣ）、５２５番（ＧとＡ）、
８０７　（ＧとＣ）、８１１（ＡとＧ）：１．８Ｋｂ配
列の１０８７（ＧとＡ）、１１１５（ＧとＣ）として発
見された。

第８図はＥｌ６とＥｌ８の（２’−５′）オリゴムシン
セターゼのＣ−末端のバイトロバシープロットを示す。

にｙｔｅとＤｏｏｌｉｔｔｌｅ　　（１９８２）のコン
ピュータープログラムを用いた。疎水的部分は中央の線
の上にある。Ｅｌ８のｍ竹部位はＦｉｇｕｒｅ７のアミ
ノ酸の３５３から３５８に相当する。

第９図はヒト（２’−５′）オリゴ△シンセターゼ遺伝
子の制限酵素切断位置地図を示す。三つの重複するゲノ
ムクローンから作成した地図は１．６ＫｂＲＮＡの７つ
のエクソンと１．８にｂＲＮＡ（熱棒）に更に１つある
８番目のエクソンを示す。挿入は、ゲノムＤＮＡのサザ
ンプロットとプローブ用の４８−１　ｃＤＮＡのものを
示す。

３Ｉｏｔ１はＤａｕｄｉ　Ｄ　Ｎ　Ａ　：　５ｌｏｔ２
は２培体！ｌ雑芽細胞ＦＳ１１のＤＮＡ。

第１０図はヒト（２’−５１ＪリゴＡシンセターゼ遺伝
子のプ［１モ一タ一部分を示す。５ｐｈ１−比旦上１間
の０．８５に＋）断片で、ｒｉｇｕｒｅ９の４．２Ｋｂ
　　ＥｃｏＲ１ゲノムＤＮΔ断片に由来するものの制限
酵素切断位置地図を示す。諸ｍＲＮＡの５′末端はｃａ
ｐとマークしである。

第１１図はヒト（２’−５’　）オリゴＡシンセターゼ
プロモータ一部位を示す。Ｆｉｇｕｒｅｌ　０で示した
５ａｕ３ａ−Ｈｐａ　１断片の配列は、ヒトＩＦＮ−ベ
ーター１遺伝子のプロモータ一部位との対比のためにな
らべた（Ｄｃｇｒａｖａ　ｅｔ　ａｔ、、　　１９８１
）。番付けはｃａｐ位置と予想される部分から始まる。

ＩＦＮ−ベーター１プロモーター内で約−７５に位置す
るプリンに富んだ転写制御配列（Ｚｉｎｎ　ｅｔ　ａｔ
、、　１９８３　）で、−１０附近で繰返されるものは
、アンダーラインで示した。

ＴＡＴＡボックスは二重アンダーラインとした。

第１２図は合成ペプチドに抗Ｉ１１′Ｉ清で免疫沈澱さ
せたＩＦＮ処理のＷＩＳＨ細胞からの３５８−メチオニ
ンで標識した蛋白質の５ＤＳ−アクリルアミドゲル電気
泳動を示す。

第１３図はＥ１６ｃＤＮＡの大腸菌内発現を示す。大腸
菌の溶原菌ＡＱｔ１１−Ｅ１６で４２℃でＩ　ＰＴＧに
よって誘起されたものの抽出物はポリ（ｒｌ）（ｒＣ）
アガロース粒土で（２′−５′）オリゴムシンセターゼ
について検定した。

Ｃｏｎｔ＝　Ｉ　ａｃＺ３１１伝子の配向と逆配向のＥ
１６ｃＤＮＡを用いた大腸菌の挿出物、Ｎａｍ＝ＩＦＮ
−処理Ｎａｍａｌｖａ細胞の挿出物。アルカリフォスタ
ーゼで作用させ、３２Ｐ−ａ−ＡＴＰで標識した産物の
ｐＨ３，５による電気泳動が示しである。

第１４図はヒト末梢白血球中の（２’−５′）オリゴム
シンセターゼＲＮＡの迅速なアッセイ法を図示している
。

第１５図は、Ｆｉｇｕｒｅｌ　４の方法に従っての、ヒ
ｈ　Ｐ　Ｂ　Ｍ　Ｇの（２’−５′）オリゴムシンテタ
ーゼ、ＥＲＮＡに対するクイックセルプロットを図示し
ている。示されている番号の細胞とインターフエロン（
１６１−１処理）を用いた。

３２Ｐ−ｃＤＮＡに関してオー１〜ラジオ゛グラフイー
を行った。

第１６図は、抗−８及び抗−Ｃｌ０Ｇ−タンパク−Ａ−
セファロースに吸着されている（２′−５′）オリゴム
シンセターゼ活性が例に示されているように測定された
ことを図示している。下のスキームは、Ｂｃｎｅｃ、ｈ
ら（１９８５ｂ）によって配列が決定された２つの（２
’−５′）オリゴＡシンテターゼの型、Ｅ１６とＥ１８
におけるペプチドＢとペプチドＣの位置を示している。

黒く塗った領域は、Ｅ１６がＦ１８分子と異なっている
部分を示している。

第１７図は例２に記載のヒト細胞由来の抽出物の電気泳
動およびイムノブロッティングを示ず。

（２’−５′）オリゴΔシンヒターゼの４型の位置は各
プロットｖ　＝＝　１４　ｃ−タン自分子聞マーカーの
右側の厳により示す。ＩＦＮ処理は」−により示す。

第１８図はアンチ−（２’−５′）オリゴムシンセター
ゼ　ペプチドＢをもつヒト５ｖｓｏ細胞由来の抽出物の
電気泳動イムノプロットを示す。

左：粗細胞質抽出物（８１，５）、細胞液（８１００）
およびミクロソーム（Ｐｌｏｏ）。右：ミクロソーム（
ＤＯＣ−可溶性）のナトリウムデオキシコレ−１・１０
％抽出物、ミクロソームの高塩洗浄（ＲＷＦ）および塩
抽出後のミクロソームペレット（ミクロソーム−ＫＣＩ
　＞。

第１９図は５ｉｏｏの分画化およびＤＮＡＥ−セルロー
スとカルボキシメチルセルロースミクロソームの高塩洗
浄（ＲＷＥ）続くグリセロール勾配を示す。アンチ−Ｂ
により示した（２′−５′）オリゴムシンセターゼプロ
フィルとタン白は勾配の下に示す。電気泳動イムノプロ
ットは左のプロットに対するフラクション ＣＭ　（ＤＥＡＥ−セルロースに吸着されないＳ１００
タン自由来のＣＭ−セルロース溶離液）を示す。左側の
プロットフラクションに、 ＤＥ　（ＲＷＦのＤＥＡＥ−セルロース溶離液）とフラ
クションＧＧ（フラクションＤＥのグリセロ一ル勾配か
らの８０−１００Ｋｄのへビイ−ピーク）。

第２０図はＳＶ８０細胞からの（２’−５′）オリゴム
シンセターゼの種々の型にＲ　Ｎ　Ａ複鎖の要求される
ものを示す。諸断片はＦｉ（ｌｕｒｅｌ　９に準じて標
識した。酵素活性はポリ（ｒｌ）（ｒｃ）の示された濃
度について測定した。

第２１図は例３に述べられたＪ：うに抗−Ｂ　　ＩｇＧ
と　　１−蛋白質Δを用いて行った（２’−５′）、１
リゴンＡシンセターゼの放射線−免疫検定を示づ。Ａ−
Ｉ〜ラジオグラフィーが示しである。細胞は５　０　０
　Ｕ　／　ｔｓＱのＩＦＮ−β１で１６時間処理か又は
無処理であった。

第２２図はウィルス病患者の血液から得たリンパ球（中
段）の（２　’−５　’　）オーリゴＡシンセターゼレ
ベルの上昇を免疫蛍光顕微鏡で検知するに抗−Ｂを用い
る事を示す。右：正常ｔｈ清によるコントロール：左：
抗−８色素入りの健康献血者の血液。（リンパ球は染色
しない、マクロファージ又は顆粒白血球が不特定のバッ
クグラウンドを為す。

Ｒｍ基 現発明は、（２′−５′）オリゴムシンセターゼ活性を
持つ酵素のコードを持ったヒトＤＮＡで、第７Ａ図に示
すヌクレオチド配列を持つものに関している。このＤＮ
Ａは第７Ａ図に示した１−１３２２のヌクレオチド配列
でも、又第７Ｂ図に示したそれと重複する９０１−１５
９０のヌクレオチド配列であっても良い。現発明のＤＮ
Ａは、第９図に示した制限酵素切断位置を持つ。

（２’−５′）オリゴムシンセターゼ活性を持つ酵素は
、第７Δ図に示すアミノ酸配列を持つ。

この酵素は約３６４のアミノ酸より成り、約４１。

５００ダルトンの分子はを示す。他の酵素で（２’−５
ＭオリゴＡシンセターゼ活性を持つものは、第７Ａ図に
示す１−３６４のアミノ酸配列に加えて第７Ｂ図に示す
２９０−４００のアミノ酸配列を持つ。この酵素は約４
００のアミノ酸より成り、その分子量は約４６，０００
ダルトンである。

現発明は第７Ａ図に示したヌクレオチド配列と相補のヌ
クレオヂド配列を持った１、６にｂのＲＮＡを提供する
。第７八図に示す１−１３２２のヌクレオヂド配列に相
補的であると同時にＦｉｏｕｒｅ７　Ｂに示す９０１−
１５９０にも相補的であるヌクレオヂド配列より成る１
、１ＴｂＲＮＡも提供する。

現発明の転移ベクターは現発明のｌａｍｂｄａ　−ｇｔ
ｌｌ−Ｅ１６　　ＤＮＡと１ａｃＺ遺伝子とより成り、
そのＤＮＡはｊ！ａｃ７遺伝子ど相的に接着していて、
適当な寄主細胞中でｌ）　Ｎ　Ａ発現を可能にする。微
生物はこの転移ベクターで形質転換を受ける。大腸菌は
この形質転換に適した微生物である。

患者のインターフェロンに対する反応を監視する方法は
、患者の細胞又は体液の（２’−５′）オリゴムシンセ
ターゼｍＲＮＡの製型をこれと相補のＤＮＡで交配させ
て測定する事より成る。そのｍＲＮＡは現発明の１．６
に１）又は１．８にｂのＲＮＡであろう。

インターフェロンに対する細胞や組織の反応の評価の方
法はインターフェロンで処理した細胞又は組織にり得た
ＲＮＡをそのＲＮＡと相補のｃＤＮＡと交配し、その交
ｍｌを決定することより成る。そのＲＮＡはインターフ
ェロンにさらした細胞又は１１＃１′から抽出し、膜フ
ィルター上で固定し、インターフェロン−誘起したｍＲ
ＮＡに特定の、標識材ＣＤＮで交配する。この方法は組
織切片を標識材ｃＤＮＡで原位置交雑し、顕微鏡観察オ
ートグラフィ又は蛍光で標値する事より成る。

分析する細胞又は組織はと１・又は他の動物起原であろ
う。

細胞又は組織のインターフェロンに対する反応を評価す
る方法を実施する為のキットには、第７Ａ図又は第７Ｂ
図に示した配列に相補のｃＤＮＡ。

デオキシリボヌクレアーゼＩと［３２Ｐ］−ガンマ−ｄ
ＣＴＰで割れ自移動をする際の交雑テストを実施するに
必要な試薬類、ニトロセルローズ股上で交雑する為の試
薬類および細胞からＲＮＡを抽出するための試薬類を含
んでいる。

第７Ａ図ど第７Ｂ図に示したアミノ酸配列に含まれるア
ミノ酸配列を持った抗原雇諸ペブヂドも又提供されてい
る。

現発明による抗Ｉｌｌベブブドの１つはＣ−末端アミノ
酸の１７個を第７Ａ図に示した配列で所持し、そのアミ
ノ酸配列がΔＲ（、−ＰＲＯ−ＰＲＯ−ＡＬ人−８ＥＰ
−３ｌ’ｌで−１−Ｅ　ＬＪ−Ｐ　Ｒ０−Ｐ）−１１＝
　Ｉ　ＬＦ−ＰＲＯ−ＡＩ　／１−ＰＲＯ−Ｌ　Ｅ　Ｕ
　−ＨＩ　Ｓ−Ｇ　Ｌ　Ｕ−Ａ　Ｌ　Ａである。もう一
つの抗原性ペブヂドのアミノ酸配列は、ＧＬＵ−ＬＹＳ
−ＴＹＲ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＡＲＧ−Ｇ　Ｌ　Ｎ　−Ｌ
　Ｅ　Ｕ　−Ｔ　ＨＲ−Ｌ　Ｙ　Ｓ　−Ｐ　Ｒ０−ＡＲ
Ｇ−ＰＲＯ−ＶＡＬ−ＩＬＥ−ＬＥＬＩ−ＡＳＰ−ＰＲ
Ｏ−ＡＩ−ＡｍＡＳＰである。

現発明の抗原性両ペプヂドに対して生ずる諸抗体は（２
’−５’　）　Ｊ−リゴΔシンセターゼを識別し、免疫
沈澱する。

被験体でのインターフェロン活性を監視する方法は、（
２’−５′）オリゴΔシンセターゼの細胞又は体液中で
の濃度を既定の時間間隔で測定し、被験体の細胞又は体
液中の該シンセターゼ量の相異を、異なる時間間隔の間
で決定し、それから被験体でのシンセターゼの量を決定
し、それにより被験体でのインターフェロン活性を決め
る事より成る。シンセターゼの量はそのシンセターゼを
現発明の抗体と接触させ、そこで複合体を形成し、この
形成された複合体量決定する事から測定される。

インターフェロン活性を監視する方法は、更に（２’−
５′）オリゴムシンセターゼをインターフェロンにさら
した細胞又は体液から抽出し、この抽出シンセターゼを
識別し得るマーカーで標識材をしてラベル付シンセター
ゼを作り、このラベル付シンセターゼを現発明の抗体と
適当な条件下で接触させて、標識材のシンセターゼ−抗
体複合体を作らせ、複合体中の標識を検出し、それによ
ってシンセターゼを検出する。その標識は３５８−メチ
ンニンであるだろう。

インターフェロン活性を監視する方法を実施する為のキ
ットは、現発明の抗体を１つ、シンセタ−ゼ抽出用諸材
料、シンセターゼ標識付けの諸材料及び標識を検出し、
シンセターゼ量を決定する為の諸材料より成る。

現発明は又、インターフェロンにさらした後ヒト細胞に
現れる諸メツセンジＡ７−　ＲＮ　Ａと特定的に交雑す
るクローン化したＤＮＡを提出する。そのクローン化Ｃ
ＤＮ△は、３．６．１．８と１゜６キロベースの（２，
’−５′）オリゴムシンセターゼ両ｆｆ１ＲＮ△に特定
的であろう。現発明のクローン化ＤＮＡは５６．０００
Ｍｒ蛋白質のｍＲＮＡに特定的であり、そのｍ　ＲＮ　
Ａは２キロベースで第１図に示１Ｊ配列を持つ。

ヒト５ｖ８０細胞７１１う４５？ｋ（２’　−５’　）
オリゴＡシンレターゼｍＲＮΔのＩこめの部分ｃＤＮＡ
クローン（Ｅｌ）は、それがアフリカッメガエル卵細胞
中での翻ＦＲテ（Ｈａｒｌｉｎ　ａｔ　ａｌ、　　１９
８３　）（２’−５”）Ａリゴ△シンレターゼ活性を起
すｍＲＮＡを交配で選別する能力を通じて始めて獲得さ
れた。Ｅ、ｃＤＮＡの挿入（６７５ｂｐ）はＲＮＡの１
．６．１．８および３．６Ｋｂの三種類で、５Ｖ８０細
胞のＩＦＮに符合するものと交雑し、１２時間の蓄積で
細胞質ポリソーム分画に見出される（Ｂｅｎｅｃｈ　ｅ
ｔ　ａｔ、　　１９８５　）　、他の二種の早期転写体
（２，７および４にｂ）は、より少い分量で現れる。ヒ
ト細胞の種々の型の分析から、これら諸ＲＮＡは各細胞
の特定の方法で別個に発現される事がわかった。Ｂリン
パ芽細胞では（Ｎａｎ＋ａｌｖａ、　Ｄａｕｄｉ）　１
　、８にｂのＲＮＡが集積するが、一方、羊膜のＷＩＳ
）ｌ細胞、組織法のリンパ１ｆｆｉＵ９３７細胞、およ
び）ｌｅｌａ細胞では１．６ＫｂのＲＮＡが幾らかの３
．６にｂ　　ＲＮＡと共に主としてｒＦＮで誘起される
が１．８ＫｂＲＮＡは殆ど作られない。２缶体ｉｍｍ芽
細胞ＦＳ１１内、５Ｖ８０繊雛プラストイド細胞内およ
びＴ細胞ＣＥＮＴ系では安定ＲＮＡの二型全部が発現さ
れる（Ｂｅｎｅｃｈ　ａｔ　ａｔ、　１９８５　）。（
２’−５′）オリゴムシンセターゼの発現される型は用
いたＩＦＮの種（α、βまたはγ）の相異には依らず、
むしろ細胞内で発生的に規制されるように見える。

（２’　−５’　）オリゴムシンセターゼの異った転写
物は、１遺伝子に由来するようである（Ｂｅｎｅｃｈ　
ａｔ　ａｌ、　　１９８５　）　。制限酵素切断位置地
図に依れば、１）Ｅｌｃｌ）ＮＡは１．６にｂＲＮＡの
３′末端に相当する、２）１．８ＫｂＲＮＡは１．６に
ＩＩＲＮΔど異つＩＣ３’末端を持ち、下流エクソン１
つを余分に持つ、３）３．６にｂＲＮＡは１．８にｂ　
　ＲＮＡと共通の３′末端を持つが、不完全にスプライ
スされている。特定のゲノムＤＮＡ断片を用いた交仰−
翻訳試験は、これも１．８と１．６Ｋｂの両ＲＮ△は、
積極的に（２’−５′）オリゴムシンセターゼをコード
する事を示した（Ｂｅｎｅｃｈ　ｅｔ　ａｔ、　　１９
８５　）。

１．６と１．８に１両ＲＮＡのためのｃＤＮＡＤＮＡ−
ンは単離され配列決定が行われ、これはヒト細胞に二型
あるＩＦＮ−誘起の（２′−５′）オリゴムシンセター
ゼのアミノ酸配列の由来解明を可能にした。二種の蛋白
質はＣ−末端を異にし、１．６にｂ　　ＲＮＡ産物（Ｅ
ｌ６）では疎水性であり、１．８にｂ　　ＲＮＡの産物
（Ｅｌ８）では酸性である。（２’−５′）７１リゴＡ
シンセターゼ遺転子の完全地図では、１．６ＫｂＲＮＡ
は７つのエクソンにコードされ、１．８ＫｂＲＮＡは８
つのエクソンにコードされる。ＩＦＮ−誘起のヒト（２
’−５′）オリゴＡシンセターゼ遺伝子の転写開始位置
と仮定される位置の配列はヒトＩＦＮ−β１遺伝子のプ
ロモータ一部位と強い相同性を示す。

例　　１ 全ＲＮＡは１０９の５Ｖ８０細胞（ＳＶ４０−形質転換
ヒト繊維芽細胞）をｄ当り２００単位ＩＦＮ−ベータで
１２時間処理して調整した。そのＲＮＡは３ＭのＬｉＣ
ｌ−６Ｍ尿素で抽出し、オリゴｄＴ−セルロースの上を
通して純化した。

得たポリＡ＋−ＲＮＡの０．４１＃ｇは１．５％アガロ
ース／６Ｍ尿素２５ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ３，５
で、ゲル電気泳動装置のプレバレージョン中で分画され
た。その１７−１８ｓＲＮＡ分画がが次のようにｃＤＮ
Ａの調整に用いられた：２ミリグラムのＲＮＡを１分間
、９０℃で２ミク［１グラムのオリゴ（ｄＴ）　　−と
、６０ミクロリツトルの水中で熱した、次に０℃で冷却
、その複塩の最終濃度が５０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−！−Ｉ
ＣＩ　　ｐＨ８，３，１０ｍＭ　　ＭＯＣＩ　　、７５
ｍＭＫＣＩとなるＪ：うに補足し、５分間４２℃で保温
後に１ｍＭヂヂオトレ１イ１ヘール、各１ｍＭのｄＡＴ
ＰＳｄＴＧＰ、０．５ｍＭのｄｃｌ−Ｐ、２０ミクロ−
Ｃｉの３２．−ｄＣＴＰ　（３００（Ｃｉ　／　ｍｍｏ
ｌ））、４ｍＭのピロ燐酸すＩ〜リウムと２０単位の逆
転写酵素を最終室ｆｆ１０．１ａｔｅにして加える。こ
の混合物を４２℃で４５分間保湿し、１０ｍＭ　　ＥＤ
ＴＡで反応を止め、０．２％ナトリウム〜ドデシル硫酸
、そしてｃＤＮＡはフェノール−クロロフォルムで抽出
し、０．３ＮのＮａＯＨで２０時間５２℃の処理をし、
中性化した。そ（７）ｃＤＮＡを５ｃｐｈａｔｌｅｘ　
　Ｇ　−７５で濾過し、エタノール沈澱をし、そしてｄ
ΔＴＰと末端トランスファラーゼとで尾ｆＪＧＪをした
。第二のｃＤＮＡ鎖の合成はオリゴ（ｄＴ）でプライム
付けをし、第−鎖と同様に２時間４２℃で進行させたが
、放射性ヌクレオチドとピロ燐酸は用いなかった。末尾
の整形を確保する為にｄｓ　　ｃＤＮＡは大賜菌ポリメ
ラーゼ１大断片と共に先ず２０ｍＭＴｒｉＳ−ＨＣＩＤ
Ｈ８，７５ｍＭ　　ＫＣＩ、５ｍＭ　　ＭＩＪＣ＋　　
、１ｍＭチチオトレイトールで５分間３７℃（角切り反
応）で処理し、次にＡＴＰ存在下に充填条件に置いた。

そのｄｓｃＤＮＡは５−２０％の蔗糖傾斜で沈澱分画し
、最も重い分画にｄＣＴＰで尾付けをして、等モル量の
ｐｓｔｌ＝切断１）ＢＲ３２２プラズミドＤＮＡのｄＣ
ＴＰで尾付けしたものでアニールした。約７ｎＱのＤＮ
Ａを１００ミクロリツトルの凍結し、ｃ　ａ　ｃ　Ｉ　
２−処理した大賜菌ＭＭ２９４と混合した。０℃で３０
分と３７℃で５分の処理後、そのバクテリアは２−のＬ
Ｂ−ブロス中で３７℃で２時間の生育をさせ、ＬＢ−寒
天プレートに１０ミクログラム／　ｍ（ｌのテトラサイ
クリンで接種した。約１．４Ｘ１０５のテトラサイクリ
ン−耐性でアンピシリン−感受性のコロニーが、ミリグ
ラム当りの組換プラスミドＤＮＡから得られた。

（２’−５′）オリゴＡシンセターゼｍＲＮＡのｃＤＮ
Ａクローンを識別で−るため、総計１３．０００のプラ
スミドクローンをＩＦＮ−処理ｓｖｓｏｍｍのＲＮＡと
交雑しスクリーンし、そのＤＮＡでｍ　ｆ＆したＲＮＡ
をｘｅｎｏｐｕｓ　１ａｅｖｉｓ卵細胞に注射してテス
トし、５ｈｕｌｎ＋ａｎ　ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　　（１
９８０）の方法で（２’−５′）オリゴＡシンセターぜ
活性測定した。１２の個別のクローン〈各３ミクログラ
ムのＤＮＡ：ＥＣ０Ｒ１で分断）からのプラスミドＤ　
ＮＡの合併物は直径０．４傭のニトロセルローズ濾紙を
通し、３７℃２時間の予備交雑を５０％フォルムアミド
、２ｍＭＰｉｐｅｓ緩衝液ｐｔ１６．１１．０．７５Ｍ
　　Ｎａｃｌ、１ｍＭＥＤＴＡ　（緩衝液へ）中で行っ
た。ｐＢＲ３２２ＤＮＡによる縞紙３木、組換１）　Ｎ
Ａによる濾紙３０本を３００ミク「＝ｌグラムのポリＡ
＋−ＲＮＡと共に（仮定の（２’−５′）オリゴＡシン
セターゼｍＲＮＡ吊、０．０９ミクログラム又は０．０
３％の１０倍過剰のｃＤＮＡの添加になる目算で）、１
１ＩＲの緩衝液Ａ中で３７℃で２０時間保温した。これ
らの濾紙は３７℃の緩衝液へで２回、２０ｍＭ　　Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣＩのｐＨ７，５と０．１５Ｍ　　ＮａＣｌと
１ｍＭ　　ＥＤＴＡと０．５％ナトリウムドデシル硫酸
の混合物で４回（１痕は３７℃で、残り３度は５２℃で
）、そして１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩのｐＨ７，５
と１ｍＭ　　ＥＤＴＡの混合物（緩衝液Ｃ）で５２℃に
おいて４回の諸洗滌を行った。各濾紙は、次に個別にし
て緩衝液Ｃで５２℃の洗滌をし、次に９６℃で０．３Ｉ
！！！の緩衝液Ｃに１ｍｌ！当り４０ミクログラムの兎
肝ｔＲＮＡを加えたもの、中で２分間加熱してＲＮＡを
取り出した。そのエタノール沈澱物を急冷の後、そのＲ
ＮＡは２ミクロリツトルの水に溶解した。０．７ミクロ
リツトルのＲＮＡを１０個のアフリカッメガエル卵細胞
に注射し、１９℃１８時間の保温後、その卵細胞を酊卵
液中でホモゲナイズしくＳｈｕｌｍａｎ　ａｎｄ　Ｒｅ
ｖｅｌ、　１９８０　）、そのホモゲネート０．１５−
をポリ（ｒｌ）（ｒＣ）−アガロース粒と況合した。

その粒は３０℃で１６時間、２．５ｍＭの（３２Ｐ）−
アルファーΔＴＰ　（０，３Ｃｉ／ＩＩ１ｍｏｌ）と１
０ｍＭジヂ第１・レイＩ・−ルとの況合物中で保温し、
この１０ミクＬ１リツトルの液相部を０．３５単位のバ
クテリア　アルカリ　フォスファターゼと共に一３０ｍ
Ｍのｒｒｔｓ−ｂａｓｅ中で３７’Ｃ６０分の保温をし
、た。イの涜化物はＷａｔｍａｎ　　３ＭＭ濾紙上で＆
ｉ！ｉｌｌ気泳動に３，０ＯＯＶで４時間かけ、（２’
−５′）ΔｐΔと（２’−５′）Ａｌｌ　ＡＩ）　Ａに
相当する汚点を切り取り、シンデレージョン測定をした
。ＤＮＡ−選抜ＲＮＡから、１ミクロリツトルを取り網
赤面球分解物でＷｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ　ｅｔ　ａｌ、
　（１９７９）に述べられたようにｉｎ　ｖｉｔｒｏ翻
訳に用い、資料の全ｍＲＮＡ活性の測定を行った。

ＤＮＡ１抜ＲＮＡ資１’ｌ中（７）（２’−５’　）ｔ
リゴＡシンセターゼ活性の全ｍＲＮＡ活性に対する比は
各濾紙毎に引算した。１２の各個別プラスミドからの２
５０合（７１資料のプール１７４を持つ瀘紙は、他の合
併資料のものやｐＢＲ３２２ＤＮＡのものに比し１０倍
高い値が常に現れた。プール１７４の各個のクローンの
プラスミドを各個別の濾紙で試し、１７４−３が常に、
（２’−５′）オリゴムシンセターゼｍＲＮＡの全ｍＲ
ＮＡに対しての濃度について全ＲＮＡ又はｐＢＲ３２２
のＤＮＡ選抜ＲＮＡに比し３５−１００倍の高さを示し
た（Ｔａｂｌｅｌ）　、クローン１７４−３は、（２′
−５′）オリゴムシンセターゼｃＤＮＡと同定され、Ｅ
　−ｃＤＮＡと命名した。このｃＤＮＡの構造と配列と
を第１図に示す。このＥ　−ｃＤＮＡクローンはその酵
素のカルホキシ末端のアミノ酸を１００個塩基配列中に
保有し、ポリへの犀の前に翻訳されない１９２塩基長の
部位を持つ。

Ｔａｂｌｅ　１ 誘起ＲＮＡ　　の卵細胞注射（２）により測定したＥｍ
ＲＮＡ　　の活性 Ｂ）　　Ｅ−ｃＤＮＡの交雑による、インターフエフロ
ーン１７４−３　（Ｅ　−ｃＤＮＡ）のプラスミドＤＮ
Ａは細胞の全ＲＮＡによる電気泳動諸汚点から相補的Ｒ
Ｎ△を検出するのに使用できる。

ポリＡ＋−ＲＮ△は２０００／　ｄのインターフェロン
ビータで種々の回数処理した５Ｖ８０細胞から調整して
、その７ミクログラムのＲＮＡは５０％フォルムアミド
と６％のフォルムアルデヒド中で変性し、１．３％のア
ガロースと６％のフォルムアルデヒド中で電気泳動にか
ＧＩ　Ｔｈｏ＋ａａｓ（１９８０）とＦｅ１ｌｏｕｓ　
ａｔ　ａｌ、　（１９８２）の手順ｒニトロセルローズ
にブロワ］〜した。Ｈｃｒｌｔｎ　ａｔ　ａｌ、　　（
１９８０）に依り、（３２Ｐ）−ガンマ−（ＩＴＰを用
いて割れ目移動で構識イ・目プしたそのＥ　−ｃＤＮＡ
ブズミドは、先の二１−口セルローズの汚点と交雑した
。

５Ｖ８０細胞中で、インターフェロン処理で同時に誘起
された三種のＲＮＡ、３．６キロベースの大きいＲＮＡ
１つと１．８５．１．６５キロベースの小さいＲＮＡは
、Ｅ　−ｃＤＮＡと交雑する（第２図）。非処理の５Ｖ
８０細胞ではＦ−限定のＲＮＡは見出せない。４時間目
に視れるこの三種のＲＮＡは１２時間で最大値となり、
その後除徐に減少する。この諸ＲＮＡはインターフェロ
ン処理後２４時間でも旧位に検出される。わずか４時間
後に出現する別のＲＮＡ諸種は、更に安定痕の高い諸種
の前駆体である可能性が強い。同じ三種のＲＮＡは、イ
ンターフェロン処理を受けたヒト２倍体ＩＩ雑芽細胞に
も見られる。しかし、リンパ芽球Ｈａｍａ　ｌｖａ細胞
のような透面細胞系の細胞では、一つの主要種だけがＥ
　−ｃＤＮＡと雑種化しく第２図）それは１．８５キロ
ベースのＲＮＡ種に相当する。同様のＲＮＡパターンが
多種のリンパ芽球細胞である赤血球）（Ｌ−６０および
原モノサイトＵ９３７に見られる。

繊維芽細胞やリンパ細胞に見られる異型のＥ−限定ＲＮ
Ａパターンは、これらの細胞内の（２′−５′）オリゴ
ムシンセターゼの異型に相当する。

リンパ細胞は分子ｆｆ１３０．０００ダルトンの酵素を
持つが、繊維芽細胞では分子ｉ！８０．０００ダルトン
と３０．００ダルトンの２型をＲｅｖｅｌ　ｅｔａｌ、
（１９８２）の発表のにうに含有している。

小さい１．８５キロベ一スｍＲＮＡは３０，０００Ｍｒ
の酵素をコードするに十分の長さがあるが、大型の方に
は足りない。一方、３．６キロベースのＥ−ｍＲＮＡは
８０，０００Ｍｒの型の酵素をコードする。二型のＥ−
限定ＲＮＡ秤は全部ヒトのゲノムＤＮＡの単クローンと
交雑し、３．６キロベースのＲＮＡは１．８５二１：ロ
ベースのＲＮＡと比べてインターフェロンエクソンを一
つ余分に持っている。

白血球インターフェロン−アルファは繊維芽細胞のイン
ターフェロン−ベータと同じようにＥ。

限定ＲＮＡを誘起する。ＲＮＡに複数種がある事はＥ　
−ｃＤＮＡとの交雑から明らかとなった。インターフェ
ロンにも異同がある。それらは総て（２’−５′）オリ
ゴムシンセターゼを誘起するが、違った型のＲＮＡや酵
素も誘起するだろう事を示唆する。異ったインターフェ
ロン種は、Ｅ−ｍＲＮＡ誘起の効率に差のある事もあり
得る。

上記のＥ　−ｃＤＮＡとの交雑検定で処理されるＲＮＡ
は、種々の培養細胞ｐ’ら又はインターフェロン治療を
受けている患者から又はウィルス病の病人から或いは（
２′−５′）オリゴムシンセターゼの昂進する病気（Ｓ
ｃｈａｔｔｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８１）から調
整できる。ＲＮＡは他に白血球のような末梢血液からの
白球からも調整できる。電気泳動プロットは点−交雑法
で代行でき、それではＲＮＡの資料を、ニトロセルロー
ズの上に一定の広さで円形、矩形等で直接設置する。そ
して放射性ｃＤＮＡはニトロセルローズ布上で直接に交
雑される。各円形又は矩形は次に直接計測又はオートラ
ヂオグラフフイルムの選別後にオートラヂオグラフする
事で測定される。

代替法としては、インターフェロンにさらした組織を生
検して組織切片に原位置交雑で行う。脳のウィルス病又
は腫瘍のためインターフェロンの投与を受けた患者に対
し投薬が莢壁内注射であつたか体内注射であった時に脳
インターフェロン処理を受けているかを測るのにｌ１１
ｉ４検として優先的に応用される。この方法はインター
フェロン投与が局所的に皮膚病■の軟轡として行われた
時に皮膚生検に対して行われる。他に様々な応用ができ
る事は明白である。１′Ｉ織片は固定し、原位置で放射
性ＤＮＡと交卸し、次に感１復の良い感光剤でオートラ
ヂオグラフにｐｌ　ｌノる。このｃＤＮＡは蛍光ヌクレ
オチドで又は蛍光分子と結合するＪ：う改造したヌクレ
オチドで標識し、組織切片と交雑すれば蛍光顕微鏡で監
視できる。

Ｅ−ｃＤＮＡの交雑が増加すれば、通常のコントロール
細胞ＲＮＡ又は組織資料と比較して、その細胞や組織が
インターフェロンにさらされた事を意味する。この方法
は速断性（１−２４時間）と高感応性（−当り１〜２０
０単位のインターフェロン）のために外来のインターフ
ェロン投与又は患者の血液や組織での内生インターフェ
ロンの形成の後に非常に有用である。

例−２ インターフェロンで誘導した５６．０００Ｍｒタンパク クローニングしたｃＤＮＡを例１に記述した組み換えプ
ラスミツトのライブラリーから単離した。

１、　使用された方法の原理は、判別ハイブリッド形成
であった。ニトロセルローズロ紙上に、生育させた３、
０００のバクテリアのクローンの２つの重複セットを、
インターフェロン−β（２００Ｕ／ｄ）で処理した５Ｖ
８０細胞の１７８から１８８のポリＡ＋−ＲＮＡからの （３”Ｐ）−ｃＤＮＡか、もしくは、無処理の５Ｖ８０
細胞の全ボ’ＪＡ＋−ＲＮＡからの（３”Ｐ）−ｃＤＮ
Ａとハイブリッド形成を行なった。放射活性のｃＤＮＡ
は、例１におけるように、ｍＲＮＡから逆転写した。バ
クテリアのクローンのうち、約４０％が″インターフェ
ロン″処理″ｃＤＮＡプローブと、強くハイブリッドを
形成し、８％が、明確な判別シグナルを与え、パ無処理
゛′ｃＤＮＡとくらべて、優先的または、特別に“イン
ターフエロン処理”ｃＤＮＡとハイブリッド形成を行な
った。後者のグループのクローンを、次に、ニックトラ
ンスレーションによって放射活性ラベルをした各クロー
ンからのプラスミツドＤＮＡを、インターフェロンで処
理した５Ｖ８０細胞から、及び、無処理の細胞から、Ｒ
ＮＡの電気泳動プロットとハイブリッドを形成すること
によってスクリーニングを行なった。この基準によって
、最初の３，０００のバクテリアのクローンのうち、１
−２％が、インターフェロンによって誘導されたｍＲＮ
Ａに相当するプラスミツドｃＤＮＡクローンを含んでい
ることが見出された。

これらのプラスミツドｃＤＮＡクローンのうち、０５６
と呼んだ１つが、特別に強い判別ハイブリッド形成を示
した。このＣ５６ＤＮＡは、インターフェロンで処理し
た細胞に存在づ゛るが、コントロール細胞ＲＮΔには存
在しない１８Ｓ　　ＲＮＡとハイブリッドを形成する（
第３図）。対照的に、インターフェロン処理ににって、
５ｖａｏ細脂に、５倍に増加しているＨ　Ｌ　Ａ−Δ、
Ｂ、ＣｍＲＮＡは、Ｃ５６ｍＲＮＡよりも誘導がはるか
に少いようであり、Ｆｉｏ、３の実験条件下では、゛無
処理”ＲＮＡとも明確なシグナルを与える。

ニトロセルローズロ紙に固定化したＣ　５６ｃＤＮＡと
ハイブリッドを形成することによって選ばれたｍＲＮＡ
は、続いてフィルムから溶出され、（例１におけるよう
に）網状赤血球溶解産物のセルフリー系で翻訳し、３５
ｓ−メチオニンでラベルした翻訳産物を、Ｌｅａｍｌｅ
　（１９７０）から応用したーｅｉｓｓｅｎｂａｃｋら
（１９７９）が記述した方法に従ってＮ　ａ　−ｄｏｄ
ｅｃｙｌ　５ｕｌｆａｔｅ中でポリアクリルアミドゲル
電気泳動によって分析した。Ｃ５６のｃＤＮＡで選ばれ
たＲＮＡは、５６．０００Ｍｒタンパクに翻訳された。

Ｃ５６ＣＤ　Ｎ　Ａの塩基配列のうち、５６，０００Ｍ
ｒの、カルボキシル末端の６５のアミノ酸が、その道の
技術を持った人により、導き出された（第４図）。

インターフェロン−β（２００ＬＪ／ＩＩＩりで、時間
を種々変えて処理した５ｖｓｏから抽出したＲＮＡに対
するＣ５６ｃＤＮＡのハイブリッド形成から０５６ｍＲ
ＮＡが、インターフェロンを加えてから１時間後に現れ
始めるということがわかる（第５図）。Ｃ５６ＲＮ△は
４時間後にその極大に達するが、しかし、減少はするも
のも、２４時間後もまだ検出できる。Ｃ５ｅ”　ＲＮ　
Ａの誘導は、倍数体、線維芽細腕、及びリンパ芽球様細
胞においても示される。誘導は、インターフェロン１０
から２００単位／ａｔ！の間？濃度に比例していた。

Ｃ５６ｍＲＮＡは、後者は能率が悪かったが、インター
フェロン−α、インターフェロン−γによっても誘導さ
れた。このｒｒｌＮ八が、未処理の細胞に存在していな
いことど、インターフェロンを添加した後、急速に増加
することににす、Ｃ５６ｃＤＮＡは、細胞のインターフ
ェロンに対する反応を評価するための素晴らしいプロー
ブとなっている例１中のＥ　−ｃＤＮＡに対して、記述
された技術は、同様にＣ５６ＣＤＮ△にも適用できる。

インターフェロンにＪ：って誘導されたｍＲＮＡに相当
する多数のｃＤＮＡが手に入るということは、新しい展
望を提供している。特に、Ｅ−ｍＲＮＡやＣ５６ｍＲＮ
Ａを誘導するためよりも、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、ＣｍＲＮＡ
を誘導するために、インターフェロンは、１４００の濃
度しか必要トシない。（１’ｌａ　ｌ　１ａｃｈら、（
１９８２））：他方、α−ｄのようなインターフェロン
−αの亜種は、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、ＣｍＲＮＡを誘導する
のに必要な８ａ痕より１００倍低い濃度でＥ−ｍＲＮＡ
を誘導できる。異った、クローン化されるｃＤＮＡを同
じＲＮＡサンプルとハイブリッド結合させることにより
、どういう種類のインターフェロンが含まれるかを示す
ことができる。

かくして、唯１つのｃＤＮＡプローブを用いるよりも、
異ったｃＤＮＡの比較からもつと多くの知識が誘導でき
る。

キット このキットは、デオキシ−リボヌクレアーゼ■と（３２
Ｐ）−γ−ｄＣＴＰとのニック翻訳のための試薬ニトロ
セルローズメンプラン上のハイブリラド形成のための試
薬、及び細胞からのＲＮ　Ａ　１１１１出用の試薬と同
じ＜（２’−５′）オリゴムシンテターゼのｍＲＮＡに
対して、特異的な、そして、ここに記述した、５６．０
００ＭｒタンパクのｍＲＮＡに特異的なりローン化した
ｃＤＮＡを提供するだろう。

ヒトの細胞中のインターフェロンによる１、６にｂ（２
’−５′）７１リゴ八シンテターゼの末端であることが
わかった（　Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）部分的なＥ　
１ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａクローン（Ｈａｒｌｉｎら、１９８３
）が、５Ｖ８０細胞ＲＮＡから、ラムダ−ａｔ１０ｃＤ
ＮＡライブラリーをスクリーニングｔルノニ用イラレタ
（ＷｏｌｆとＲＯｔｔｅｒ、１９８５）。

制限酵素を用いたマツピングにより、クローンラムダ−
（Ｊｔｌｏ　　９−２はｐＢＲ（９−２１ｃＤＮＡ）中
にサブクローンニングを行った１、３２にｂＥｃｏＲ１
インサート（第６Ａ図）の３′の端に、−６〇　　− ＥｌｃＤＮＡを含むことが見出された。配列決定は、第
６Ａ図に概説したように行なわれ、似前にＥｌｃＤＮＡ
について報告されたＣ−末端と３′の翻訳されていない
配列を含むことが確認された（Ｈｅｒｌｉｎら、１９８
３）、９−２１ｃＤＮＡ配列（第７図）は、ＡＴＧＡＴ
Ｇ配列において出発する３６４アミノ酸のオーブンリー
ディングフレームを予告する。タンパクのコーディング
配列の３塩基周期性に基いたコンピュータープログラム
（Ｔｒｉｆｏｎｏｖ、　　１９８４　）により唯一の矛
盾しないリーディングフレームは、このＡＴＧＡＴＧか
ら出発するものであることがわかった。翻訳が、この場
合の２番目のＡＴＧにおいてはじまることは可能である
。何故なら、それは、−３におけるＡが前にあり、コン
センサス翻訳イニシェーション配列と相同性がある唯一
のものであるからである（にｏｚａｋ、　１９８４　）
。

このようにして、１．６Ｋｂ（２’　−５’　）オリゴ
ムシンテターゼＲＮＡによってコードされた酵素は、４
１．７００の分子量を持ち、 Ｅ１ｃＤＮ△とハイブリッド結合をしたｉｎ　ｖ目「Ｏ
翻訳産物（Ｈｅｒｔｔｎら１９８３）の５ＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動によってみられる、みかけ上
の３８．０００−Ｍｒのタンパクとにり一致する。オー
プンリーディングフレームによって予告されたＣ−末端
ヘプタデカペプチドが化学的に合成され、ラビットを免
疫するのに用いられた。

得られた抗血清（第１２図のＣ）は、未処理の細胞には
存在していないインターフェロンによって処理した細胞
の３５−Ｓメチオニンラベルの抽出物からのＳＤＳ電気
泳動中の３８．０００−Ｍｒに移動するタンパクを特巽
的に沈澱させる。２つの実験により、このタンパクは、
（２’−５′）オリゴシンテターピ活性をｂっことが確
かめられた。それは、ポリ（ｒｌ）（ｒＣ）アガロース
・カラムを通すことににって抽出物から除かれ、免疫沈
澱後残っている−にＦＣ１１ｔ、ｉ酵素活性の大部分が
なくなった。

例　　５ １．８ＫＢ（２’−５′）７１リゴシンテターゼｍＲＮ
Ａに・するｃＤＮＡの　１ １．８ＫｂＲＮへの追加のエクソン（Ｂｅｎｅｃｈら、
１９８５；第９図をみよ。）に相当する遺伝子ＤＮＡ断
片５Ｖ８０ＲＮＡの同じラムダ−ｏｔｌ。

ｃＤＮＡライブラリーからＥ１８ｃＤＮＡクローン−８
−１を単離するプローブとして用いられた。

Ｅ１８ｃＤＮＡクローンの制限マツプ（第６Ｂ図）はそ
の５′末端がＥｌ　６ｃＤＮＡの一部であるが、３′末
端は違っているということを確かめた。配列決定の結果
（第７図）結合部は、Ｅｌ６　９−２ＩｃＤＮＡクロー
ンの１０７１のヌクレオチドの位置にあり、Ｅｌ６の最
後の２４７ヌクレオチドが異なるポリアデニル化の位置
によって終っている５１５のヌクレオチドの長い配列に
よって置き換っている。この差は、ノーサンプロット上
にみられる２つのｍＲＮＡの間の大きさの差０．２にｂ
を説明する。Ｅ１８ｃＤＮＡの５′の部分は、Ｅｌ　６
ｃＤＮＡの配列から、塩基の変化がないことを示してい
るが、未完成である。下に述べられる遺伝子のマツピン
グによると、１．６と１．８にｂ　　ｍＲＮＡ５の両者
とも１ｒｆｌじ５′末端を右している。

Ｅ１６配列から分れた１８ｃＤＮＡの３′領域は、５４
のコドンの後略るオープンリーディングフレームを含ん
でいる。３５０のヌクレオチドの長さの翻訳されない領
域を残しているリーディングフレームは、タンパク−コ
ーディング配列の３塩基の周期性に基いたコンピュータ
ープログラム（Ｔｒｉｆｏｎｏｖ、　１９８４　）によ
って確かめられた。

交互のより長いオープンリーディングフレームは、Ｅ１
６ｃＤＮＡに共通な５′部分のように、同じコンビュー
ティラドフレーズの中にはないだろう。

１．６と１．８にｂ　　ｍＲＮΔタンパク産物のＣ−末
端上のハイドロパシーブロツ１−（ＫｙｔｅとＤｏｏｌ
ｉｔｔｌｃ、　１９　Ｂ　２　）ににす（２’−５′）
オリゴシンテターゼ（第８図）の２つの形の間に著しい
違いが示される。Ｅ１６タンパクのＣ末端は、非常に疎
水性であるが、Ｅ１８タンパクのＣ末端は親水性であり
、２つの酸性領域をもっている（　ＡＳＰ−ＡｓＤ−Ｇ
ｌｕ−Ｔｈｕ−＾ｓｐ−＾ｓｐ−とＧｌｕ−Ｇｌｕ−Ａ
ｓｐ　）（第７図）さらに、Ｅ１８産物のＣ末端に可能
なグリコジル化の場所が存在している。（第７図）９−
２４　　ｃＤＮＡをＩａｃ　Ｚ遺伝子と７エーズをあわ
せて融合するように、λ０１１１にサブクローンニング
を行なった。このフェーズを含んでいるＥ、　Ｃｏ１１
のリソーゲンは、ポリ（ｒｌ）（ｒＣ）アガロースに結
合した後、明らかに（２’−５′）オリゴムシンテター
ゼ活性を示した。一方、９−２１ｃＤＮＡが反対の方向
に融合した場合には、何も活性が生じなかった（第１３
図）。この　Ｅ。

ｃｏｌｉにおける発現は、ｃＤＮＡは確かにｄｓＲＮＡ
で活性化された（２’−５′）オリゴシンテターゼをコ
ードする構造遺伝子に相当しており、インターフェロン
で誘導されたＲＮＡによりコードされた約４ＱＫｄのタ
ンパクは、酵素そのものであり、制御因子ではないとい
うことを証明している。このタンパクは、酵素活性を示
すために、翻訳後の修飾は必要としないようである。

９−２１ｃＤＮＡを含むトランスフオームした細胞は、
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉラムダ−Ｑｔｌｌ−
Ｅ　１６と呼ばれ、取得番号１４９６の下にＣｏ１１Ｏ
ｃｔｉｏｎＮａｔｉｏｎ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｄａ　Ｍ
ｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｃｓ、パストール研究所、
２５　ｒｕｅ　ｄｕ　Ｄｏｃｔｃｕｒ　Ｒｅｕｘ、　７
５１２４−　Ｐａｒｉｓ−Ｃｃｄｃｘ　１５、フランス
に項番ノられている。この寄託は、パテントの手続ぎの
目的のために、微生物の寄託の国際的認識に関するブタ
ペスト条約に従って行なわれたｂのである。

イタ１　６ ヒト（２’−５′）オリゴシンデターゼ遺伝子の組織化 ３つの重なり合った遺伝子のクローンが、１つが、ヒト
血球細胞ＤＮＡ（Ｈｏｒｙら、１９８１）の部分的ＥＣ
０Ｒ１消化物のライブラリーから（Ｈａｎｉａｔｉｓら
、１９７８）ＥｌｃＤＮＡをプローブとして用いて単一
した。（Ｂｅｎｃｃｈら、１９８７）。遺伝子クローン
は、ヒＩ−Ｄ　ＮＡの約２９にｂを表しており、ライブ
ラリーをスクリーニングしても、１個のＥ遺伝子以上に
対する証拠は存在しなかった。遺伝子的ＤＮＡのサザー
ンプロットは、単一遺伝子の存在と一致していた（第９
図）。ノ一ザンプロット解析によって、遺伝子ＤＮＡ断
片をプローブとするノーザンプロット解析により、Ｓ１
ヌクレアーゼマツピングと配列決定により、Ｅ１６ｃＤ
ＮＡ９−２１は、遺伝子上の５エキソンに相当すること
が示された。（第９図）ＡＴＧＡＴＧ配列は、エクソン
３に見出されたが、停止コドンと１．６ＫｂＲＮＡのポ
リアゾニレ−ジョンの位置を持った翻訳されない領域は
、エクソン７中に見出された。別の５′エクソン１と２
の構造が下に記しである。イン１０−エキソン境界の配
列が決定され（Ｔａｂｌｅ　２　）スプライスアクセプ
ター、ドナーサイトに対するＣＡＧとＧＴ規則にしたが
う（Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ　ａｎｄ　Ｃｈａｍｂｏｎ、
　　１９８１）。最近にｅｌｌｅｒ（１９８４）によっ
て総説されたように、ＣＴＧＡＣ／Ｔは、共通してスプ
ライスアクセプターから遠くないところに見出される。

（アクセプターサイト：　Ｔａｂｌｅ　２　）　Ｋｅｌ
ｅｒ　　（１９８４）により、ラリアートモデルで役割
を演じていることが指摘されているＣＴＧＡＣ配列とイ
ントロン−ドナーの相補性に加えて、ＣＴＧＡＣ／Ｔ領
域が、イントロン／エクソンの３′境界の配列と相補性
があるということは注目ずべきことである。

１．６ＫｂのｍＲＮＡにＪ：ツて生産される（２′−５
′）オリゴΔシンテターゼのコーディング領域を含む５
エリクソンの配列は、酵素が異なるアミノ酸組成（Ｔａ
ｂｌｅ　３　）をもった領域から成立っていることを示
している。最初のエクソンのドメイン（６０アミノ酸）
は、アスパラギン酸に富んでおり、２番目では（アミノ
酸６１から１５６）アルギニンが優先しており、２番目
の次のエクソンは（アミノ酸１５１から２１８と２１９
から２９５）リジンに富み、　　　　産物（２９６から
３６４）のＣ末端はプロリンとアラニンに富んでいる。

エクソンの番号のつけ方については、第７図と第９図を
見よ。ＣＧΔＴ／Ｃまたは、ＣＴＴＡＣ，ＣＴＧＴＣ（
にａｌｌｅｒ、　１９８４　）とスプライスアクセプタ
ーＣΔＧの間の自己・補性領域に下線が引いである。

ヒト（２’−５′）オリゴＡシンテターゼ遺伝子、Ω　
　　　　　　　　Ｃ）μ−ｎ くζ　　　（）　　　　　（−−一 １．６及び１．８にｂ　　ＲＮＡ５（第７図を見よ）の
保持されたウンデカヌクレオチドをもったポリアデニレ
ーションザイトには、下に点線が記されている。カッコ
内の数は、イントロンまたはエクソン（第９図を見Ｊ：
）をになっているＥＣ０ＲＩ遺伝子断片の大きさである
。各エクソンの出発点と終点は、第７図の９−２１Ｅｃ
ＤＮＡにおけるように数字がついてい鳴る。

Ｅ１８ｃＤＮＡ４８−１は不完全であるりれども、我々
は、エクソン１−６（第９図）がノーザンプロット上の
１．６Ｋｂど同様に１．８ＫｂのｍＲＮＡとハイブリッ
ド結合することを見出した。２つのＲＮＡの構造はエク
ソン７迄は同一であることはかなり確からしい。Ｅ　Ｉ
　Ｂ　ｃ　Ｄ　ＮΔを特徴づけるエクソン７の中央から
エクソン８への追加的スプライシングは、遺伝子ｐＮΔ
クローン中のこれらのイントロン−エクソンの境界の配
列を決定することにより確かめられた（Ｔａｂｌｅ　２
　）。

Ｅ１ＢｃＤＮＡ中に存在する切りつめたエクソン７ａは
１．６ｋｂＲＮＡのポリアゾニレ−ジョンの位置を含む
１．６にｂのイントロンに続いている。

エクソン８はその遺伝子の＝に一りな３ａｍＨ１の位置
から、９８ｂｌｌ下流で始まる（Ｔａｂｌｅ２゜第９図
）ＡＡＴＡΔＡシグナルの二連の繰返しによって特徴づ
りられる１、８ＫｂＲＮＡのポリアゾニレ−ジョンυイ
トによって終る。エクソン７と８は相同性がない１ノれ
ども、その中で３番目のシチジンが、ポリアデニル化さ
れている保持されたウンデカヌクレオチドＡＣＣ＾ＴＴ
ＴＡＴＴＣが両方のエクソン（Ｔａｂｌｅ　２　）の端
に存在している。以前に指摘されたように、（Ｂｅｎｅ
ｃｈら、１９８５）ヘアピンループ構造が、両方の場合
にその保持されたウンデカヌクレオチドと、Ａ＾ＴＴＡ
ＡＡ領域の間に形成されることができる。このような構
造が、転写物の開裂と、ポリアデニル化が、エクソン７
の端でおこるか、エクソン８の端でおこるかを決定する
、細胞特有のメカニズムに関与しているかもしれない。

上記の遺伝子マツピングに基いて、１，８ＫｂｍＲＮＡ
によってコードされる酵素は、最初の３４６のアミノ酸
中のＥ１６産物と同一であるべきであり、その次にアス
パラギン酸、グルタミン酸、ヌクレオチドに富んでいる
。５４のアミノ酸の長い領域が続く。４００のアミノ酸
の長さの、Ｅ１８酵素は４６．０００の分子団を持って
いるであろう。

例　　７ 同一遺伝子を二者選−的スプライシングによって生産さ
れるヒト（２’−５′）オリゴＡシンテタ５Ｖ８０ＲＮ
Ａｓのノーザンプロット分析の結果、インターフェロン
に接触した後、１２時間迄に、ＥＩｃＤＮＡとハイブリ
ッドを作る３種の（１，６，１，８及び３．６にｂ）が
蓄積することが明らかになった（Ｈｅｒｌｉｎら、１９
８３）、更にその外に不安定な転写物もみられた。これ
らのＲＮＡ５の間の関係を遺伝的ＤＮＡクローン上の転
写マツピングによって研究した。２つのヒト遺伝的ライ
ブラリーにおいて、ＥＩｃＤＮＡは、ヒトＤＮＡ　（第
９図）の２９にＩ）を表す車なり合っている遺伝的ＤＮ
Ａのり１コーンの一系列のみを同定し、明らかにユニー
クな（２’−５′）７１リゴΔシンテターゼ遺伝子（Ｂ
ｃｎｃｃｈら、１９５５ａ）を含むことが艶出された。

Ｓ１ヌクレアーぜ分析と部分的遺伝子の配列決定ににす
、９−２１　（Ｅｌ）のｃＤＮＡが５つのエクソンに相
当することが見出された。（第９Δ図と第７図の配列に
３−７の番号がついている）このｃＤＮＡの３′未満と
ボリアデニレーションの位置は、エクソン７の端にある
ことが同定された（第９図）。しかし、５Ｖ８０ＲＮＡ
のノーザンプロットに対する、ざらに下流のジェノミッ
クＤＮＡ断片のハイブリッド形成により、１，６Ｋｂの
ＲＮＡだけが、エクソン７のポリアゾニレ−ジョンの位
置に終っており、１．８と３，６ＫｂのＲＮＡ５は１，
６Ｋｂ下流に位置しており、やはり、ポリアゾニレ−ジ
ョンの位置に終っている（エクソン８．第９図）、更に
、別のエクソンとハイブリッド形成を行なうことが明ら
かとなった。このようにして、９−２１（Ｅｌ）ｃＤＮ
Ａは、１．６にｂＲＮＡを呈しており、Ｅ１６ｃＤＮＡ
と名前をつけ直した。さらに、エクソンの３′の半分は
、１．８にｂのＲＮＡとはハイブリッド結合せず、転写
がエクソン７からエクソン８への中間からスプライシン
グイベントによって形成されるということを示している
。５′の上流のエキソンはすべて、１．６及び１．８に
ｂＲＮＡｓとハイブリッド結合し、２ＲＮＡＳは、その
３′末端においてのみ異なることを示している。このこ
とは、５Ｖ８０λ（Ｉｔ１０ｃＤＮＡライブラリーから
１．８ＫｂＲＮ八に対１６判別スプライシングを証明し
ており、エクソン８（第４図）のポリアゾニレ−ジョン
の位ＩＮで終っている、（第４図）ｃＤＮ△り［１−ン
の単鎖によって確かめられた（クローン４８−１または
、Ｅ１８ｃＤＮＡ、第７Ｂ図）。同様なｃＤＮΔクロー
ンが、５ａｕｎｄｅｒｓとＷｉｌ目ａｍｓ（１９８４−
）ににるＤａｕｄｉｃＤＮΔライブラリーにおいて見出
された。

Ｅ１８の配列は、５１５のヌクレオチドによって置きか
えられているＥ１６の最後の２４７のヌクレオチドをロ
ックしており、１．６にｂと１．８ＫｂＲＮＡＳの間の
大きさの差を説明している。

１．８にｂのＲＮＡは、したがって、Ｅ１６タンパクと
そのＣ末端が異なっている４６．０００−Ｍｒのタンパ
クをコードしている。Ｅ１６タンパクと同様に、Ｆ１８
産物は、ｄｓＲＮＡ結合を有しており、（２′−５′）
Ｅ１８固有のＤＮＡ断片へのハイブリッド形成によって
選ばれたｍＲＮＡ１７）翻訳によッテ示された（　Ｂｅ
ｎｅｃｈら、１９８５）。このことは、２種のタンパク
に共通な最初の３４６アミノ酸が触媒の場所を含んでい
ることを示唆している。エクソン組成を試験することに
より、この共通の部分は、３つの塩基性領域が続いてい
るＮ末端酸性ドメインから構成されているように思われ
る。Ｅ１６タンパクの最後の１８残基は、非常に疎水性
の領域を形成しており、それはＥ１８においては、潜在
的グリコジル化の位置を含んでいるもつと長い水溶性で
酸性の領域でおきかえられている。２つの酸素の間のこ
の差は、それらが二組化したり、または伯のタンパク類
や細胞４Ｉ４造と相互作用を行なう能力を決定するかも
しれない。例えば、Ｅ１６は膜と結合するが、Ｅ１８は
りボゾームや核の中の塩基性タンパクと相互作用を行な
うかもしれない。

（２’−５ＭオリゴＡシンテターゼの２つの形は、イン
ターフェロン処理のヒト細胞（Ｒｅｖｅｌら、１９８２
）の抽出物中ゲル口過を行なうことによって見出された
（　ＲｅＶｅｌら、１９８２）、即ち、Ｅ１６またはＥ
１８タンパクの単量形に相当するかもしれない３０−／
ｌ０Ｋｄの酵素と、今後同定しなければならない６０−
８０にｄのタンパクである。転写物のマツピングが、こ
のＲＮＡは、１．８にｂのＲＮＡから除去されるイント
ロン領域を（例えば、エクソン７ど８の間）含んでおり
、そしてオープンリーディングフレームがないことを示
したので、３．６にｂのＲＮＡは、大きい酵素をコード
しているとは思われない。我々は、接合子における翻訳
において、大きなｍＲＮＡを観察できなかった。精製ヒ
ト（＋−１８Ｌ　ａ　）合成酵素中に８０Ｋｄタンパク
が報告された（　Ｙａｎｄら、１９８１）が、その酵素
活性は証明されなかった。

ＮａｍａｌｖａととＣＭＩ−細胞から精製した（Ｒｅｖ
ｅｌら。

１９８１ｂ）酵素において、我々はＳＯ３中に、４０Ｋ
ｄのバンドを検出できた。したがって、６０−８０　Ｋ
ｄ酵素が、４０Ｋｄタンパクのダイマーである可能性が
残っている。ヒトのシンテターゼは、３０にｄｗ＃素（
主に核の）をコードしている１、５にｂＲＮＡに加えて
、８０にｄ酵素（主に細胞質の）をコードする大きな３
．８にｂのＲＮＡが、変性条件でみられるマウスの細胞
中のそれとは異なっているかもしれない（Ｓｔ、　Ｌａ
ｕｒｅｎｔら、１９８３）。

ヒトＥｃＤＮＡは、３．８　　　　Ｍｂと０．６−１．
７にｂのＲＮＡを検出し、大きなＲＮＡは、Ｅ１８に特
異的なＤＮＡとハイブリッド形成をする（　Ｈａｌｌｕ
ｃｃｉら、１９８５）、ヒトの細胞では、大きなＲＮＡ
が更に加工されて、１．８ＫｂＲＮＡとなり、それがマ
ウスの細胞にみられないという可能性がある。５ｈｕｌ
ａ＋ａｎら、１９８４）は、ヒト細胞の（２’−５′）
オリゴムシンテターゼの大きさは、ヒト細胞中でも、ヒ
ト−げっし類のハイブリッド細胞染色体へのシンテター
ゼ遺伝子をマツプするマウスの細胞中よりも、もっと小
さいタンパクとして挙動するという事実を用いた。Ｅ１
６とＥ１８に特異的な抗自消は、これからのタンパクと
２種の天然のままの酵素の２つの形の間の関係を解明す
るのに役立つであろう。

例　　８ 多数のヒトの細胞系からのＲＮＡが、ノーサンプロット
中で、ＥｃＤＮＡプローブについて試験された（Ｈｅｒ
ｌｉｎら、１９８３　；　Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）
。Ｔａｂｌｅ　４は、ヒト細胞が、インターフェロンで
誘導された重要ＥｍＲＮＡ種にしたがって、３つの細胞
にわけることができることを示している。Ｂｕｒｋｉｔ
ｔリンパ師からのリンパ芽球様Ｂ細胞系は、主として１
．８Ｋｂ　　ＲＮＡを有している。

そうではなくて、いくつかの細胞系は、１．６と３．６
にｂ　　ＲＮＡをもっているが、１．８にｂのＲＮＡは
殆どもっていない。もし３．６Ｋｌ）ＲＮＡが部分的に
スプライスを受番ノた１、８にｂＲＮＡのプリカーサ−
だとすると、これらの細胞は、３．６にｂＲＮ　Ａの加
工にＮｔ冑をしているのかもしれない。■−リンパ球系
（急性白面病からのＣＥＭＴとへアリー細胞白＋ｉｉ＋
病からのＧａ５ｈ）は、織紐芽細胞と同様に、リベての
３　Ｅ　ＲＮＡシリーズを含んでいる。だから、［１８
ポリアゾニレ−ジョンの位置は、すべての人の細胞の中
で利用され、３．６か１．８にｂＲＮＡを生産している
ように思われる。Ｅ１６ｐＡの位置は、Ｂリンパ芽球様
細胞では用いられていないようである。Ｅ１６とＥ１８
１）Ａの位置の両方において、存在している保存されて
いるウンデカヌクレオチドは（第９Ｂ図）ＡＡＴＡＡＡ
シグナルとヘアピンループを作ることができ、場所の選
択に役割を演じるかもしれなイ（Ｂｅｎｅｃｈら、１９
８５）、Ｅ１８は、ＡＡＴＡＡＡシグナル（第９Ｂ図）
の２連性繰返しを有しており、より強いｐＡの位置であ
るかもしれない。Ｅ１８のｐＡの位置で終る転写は、イ
ンターフェロン添加の後、１．６Ｋｂ　　ＲＮＡ（Ｂｅ
ｎｅｃｈら、１９８５）よりも早く蓄積する。

優先して作られるシンブタ−Ｌの型は、ヒトの細胞が異
なれば変化する。我々は、シンテターゼの細胞質または
核の高ハ■ど細胞中に存在づるＲＮＡの型との１１１１
に／にんら相開関係を妃出ざなかった。しかし、ゲルロ
カを行なったとき、Ｎａｌｌ１ａ　ｌ　ａｖａ細胞は、
１どしη、３０　　　０ＫｄＦ１９素であったが、一方
１ｌｃｌ；＋ど５Ｖ８０１Ｉｌｌ胞は、６Ｏ−８０Ｋｄ
型ももっていた（ｌｅｖｅｌら、１９８例　　９ （２’−５′）グリ］△シンデターゼの領域 Ｅ１６ｃＤＮΔ９−２１り１−１−ンのエクソン３の部
分を含んでいる４、２にｂ　　ＥＣＯＲ１ノラグメント
（Ｆｉｇ、９）から、０．８５にｂ（Ｆｉ（１，１０）
の江１−比助１が、１．６，１．８，２．７及び３．６
にｂＲＮ　Ａ　Ｓとノーザンブロックで、ハイブリッド
を形成した。しかし、上流域はハイブリッド形成をしな
かった。いくつかの実験により、その断片の転写の出発
点の位置がわかるにうにな　８４　一 つた。Ｓ１ヌクレアーゼによる分析によって、まず、エ
クソン３が、９−２１ｃＤＮＡの終りの、上流約５０ヌ
クレオチドから出発していることがわかった。９−２１
ｃＤＮＡの終りからのオリゴヌクレオチドを用いてのプ
ライマーの拡張実験にＪ、す、ｍＲＮへの５′末端は、
コ（７）　ＣＤ　Ｎ　Ａ　（７）５′の端からの、約２
３０ヌクレオチドであるということを示した。リボプロ
ーブとのＲＮＡのハイブリッド形成は　　　　　　（ｃ
ｒｅｅｎら、１９８３）及びＲＮ　ａｓｅによる分解に
よってエクソン３の前に、７０及び、１１０ヌクレオヂ
ドの２つのエクソンの存在が示された。ユニークなｌ−
１ｐａｌの位置（第９図）において、ラベルしたプロー
ブを用いてＳ１ヌクレアーゼを解析することによって、
ｍＲＮＡの５′末端は、最終的にト１ｐａｌの位置から
１７ヌクレオチド上流に位置していることがわかった。

この領域の配列は、第６図に示されている。Ｈｐａｌ　
５ｉｔｅの前の１７残塁の転写開始位置の決定は、−３
０の位置に、ＴＡＴＡＡボックスが存在することによっ
て支持されている。上流配列の著しい特徴ＬＬ、プリン
介ポか高いことであり（６９，６％）、主としてアデニ
ン（５８，９％）である。他の既知のプ［ｌエータ−の
上流配列との、相同性のマｌ〜リツクスを比較したとこ
ろ、ヒトインターフＩ　Ｏンブ［Ｉモーター、とりわけ
、インターフェロンβ１道伝子プロモーター（Ｄｅｇｒ
ａｖｅら、１９８１）の配列と著しい相同性が明らかに
なった。Ｚｉｎｎら（１９８３）によって記述された本
質的な転写シグナルを含むＩＦＮ−β１プロモーターの
−７５から−８５のプリンに富んだ領域は、ＴＡＴΔＡ
ボックス（−４０から−５０）の丁度ト流にある（２’
−５′）オリゴシンテターゼの　　　のプ［１モーター
の領域との９　％の相同性を示した（第１１図）このプ
リンに富んだシグナルは、ＴΔＴＡＡボックスとそのキ
ャップの位置の間の小片の中のＩＦＮβ１プロモーター
の中に繰返されている。やはり、制御的な機能をもって
いるか；ｂ　ｔ、れない（Ｎｉｒら、１９８４）この領
域にＪ３いて、ＩＦＮ−β１遺伝子と（２’−５′）オ
リゴシンテターゼ遺伝子は高い。

　８６一 対照的に、インターフェロンで活性化される（　Ｆｅｌ
　１ｏｕｓ　ら、１９８２　；　Ｒｏｓａら、１９８３
ｂ：ＦｒｔｅｄＩＩｌａｎら、１９８４）ＨＬＡ３！伝
子や（Ｈａ　ｌ　ｉ　５ｓｅｎら１９８２　：　Ｓｃｈ
ａｍｂｏｅｃｋら、１９８３）Ｉ３１１伝子（Ｋａｒｉ
ｎと旧ｃｈａｒｄｓ、１９８２）は、この（２’−５′
）オリゴムシンテターゼ遺伝子のプロモーターにおいて
、なんら明らかな配列関係を生じなかった。ＩＮＦ−β
１の遺伝子本体とは、やはり、有意な相同性はみられな
かった。

（２’−５′）オリゴシンテターゼｍＲＮＡ（エクソン
１，２．及びエクソン３の１部）の翻訳されないリーダ
ーは、その位置がＦｉａ、６に示されたような、８１分
析によって、仮に決定された２つの短いイン１〜Ｏンを
含んでいる。全体のヒト（２’−５′）オリゴムシンテ
ターゼ遺伝子は、約１３Ｋｂ（第９図）であり、エクソ
ンの総計はｍＲＮＡ５の観察された大きさと一致してい
る。

−ＧＴ１０ｃＤＮΔり１−１−ン ヒト５Ｖ８０細胞のポリΔＬ　ＲＮΔから調整したλ！
Ｊｔ１０ｃＤＮＡライブラリー（ＷｏＨとｎｏｔｔｅｒ
１１９８５）を、前に記述された（Ｈｅｒｌｉｎら、１
９８５）Ｅ１ｃＤＮＡプラスミツドＰｓｔｌ−ｐｓｔｌ
インサー１〜をプローブとしてスクリーニングした。１
．６ＫｂＥＲＮＡの３′の端に相当するインサート（Ｂ
ｅｎｅｃｈ６．１９８５）を、アガロースゲル電気泳動
によって精製し、ニック−トランスレーションを行なっ
た　（ＲｉＯｂＶら、１９７７）。プラークを、９　ｃ
ｍのプレート（１０５フアージ）から繰返し拾いあげ、
小量のλＤＮ／’ｗ４製物を、ルーチン法にＪ：つて（
ＨａｎｉａｔｉＳら、１９８２）制限マツピングにＪ：
つ゛Ｃ解析した。

Ｅ１ｃＤＮＡ断片をふくむ１５のλ１１０ｃＤＮＡクロ
ーンが単１ＩＩ１１され、最も長いインサートをもった
ファージ９−２と５−２を、ＥｃｏＲｌできり、インリ
−−１・をｐＢ　Ｒ３２２にリーブクローニングを行な
い、Ｆｉｇ、　１ΔのＥｌ　６ｃＤＮＡクローン９−２
１と５−２１を得た。同じライブラリーが、１．８Ｋｂ
ＲＮＡと特異的にハイブリッドを作る１断片であるファ
ージλｃｈＥ１（ｅｅｎｅｃｈら、１９８５）からのヒ
ト遺伝子的Ｐｓｔ１−Ｐｓｔ１０．９にｂ断片について
スクリーニングされた。その際、我々は、部分的にスプ
ライスを行なったＲＮＡを表している他のｃＤＮＡクロ
ーンとともに、第１Ｂ図のλｏｔｌＯｃＤＮＡクローン
４８−１を単離した。配列決定は、ＨａＸａｌとＧ１１
ｂｅｒｔ　　（１９８０）に従って行なわれた。制限酵
素は、Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓと、ｇ
ｏｅｈｒ＋ｎｇｅｒからであった。ｐｕｓｔｅ＋＋　と
Ｋａｆ’ａｔｏｓ（１９８２ａ、ｂ）の相同性マトリッ
クスと、ハイドロプロットコンピュータープログラムは
、Ｉ　ＢＭＰＣで行なった。タンパクのコーディングフ
レームの位置を決める３塩基の周期性は、Ｔｒｉｆｏｎ
ｏｖ　（１９８４）に従って計算した。

例１１ ３つの重なりのある遺伝子のクローンが、以前に記述し
たように単離された（　Ｂｅｎｅｃｈら、１９８５）。

すなわら、部分的にＥ　ｃ　ｏ　Ｒ１で切ったＤＮＡラ
イブラリーからの、λｃｈ　　Ｅｌ　（Ｈｏｒｙら、１
９８１）と部分的な、ΔＪ　ＬＪ　ｌ　／ト１ａｅ３Ｄ
ＮＡライブラリー（ＨａｎｌａＬＩＳら、１９７８）か
らのλｃｈＥ２とＥ３である。これらのファージのＥＣ
０Ｒ１遺伝子断Ｊ１が、（）　１３　Ｒ３２２サブクロ
ーニングされｌご。−１−クソン７ツビングは、１）サ
ブクローニングを行７７つだ遺伝子断片の制限酵素によ
る分解物の′ＩＪチンブ「−１ツ１〜を、種々のｃＤＮ
Ａプローブに、ハイブリッド形成を行なわＶることによ
り、２）遺伝子ＤＮＡの制限酵素断片を、記述されであ
るように（ｅａｎｏｃｈら、１９８５）ＩＦＮで処理し
たが、処理していシＴい細胞から、ポリＡ十ＲＮＡのノ
ーザンブ１−１ツ１〜どハイブリット結合させることに
にす、そして、３）ｃＤＮΔど比較して、イントロン−
■クソンの境界の配列を決めることによって行なった。

ｍＲＮＡの５′末端を含む遺伝子４．２にｂＥＣＯＲ１
断片の内部の５ｐｈ１−８ｐｈ１０．７８にｂ小片を配
決定を行なう前にｐＢＲ３２２の５ｐｈｌの位置にサブ
クローニングを行なった。ｍ　ＲＮ　Ａ　（Ｄｒ、　Ｄ
、　Ｓｅｇｅｖ、　Ｉｎｔｅｒｙｅｄａのおくりもの）
に相補的な１８−２０塩基の合成オリゴヌクレオ′チド
を用いて、以前と同様にプライマー拡張を行なった（　
Ｒａ５ｅら、１９８３ａ）　。ＳＰ６ベクター中のサブ
クローニングの後、リボプローブの合成は、Ｐｒｏｌｌ
ｌｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃの教えに従ッテ行なった。Ｄａ
ｕｄｉ　リンパ芽球様細胞と、ＦＳ１１包皮繊維芽細胞
からのＤＮＡは、Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９）に従って
調整し、サザンプロットアナリシスは、製造者（Ｎｅｗ
　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　）によって推奨さ
れているハイブリッド形成操作Ｂを用いてＧｅｎｅ　−
３ｃｒｅｅｎ　Ｐｌｕｓナイロンファイバー上で行なっ
た。

例１２ （２′−５′）オリゴムシンテターゼの測定の有用性は
、患者のインターフェロン−βに対する反応をモニター
Ｊ゛るＩこめ、ヒト末梢面甲核細胞（ＰＢＭＣ）におイ
テ（５ｃｈａｔｔｎｃｒら、１９８１ａ〉と、筋肉注射
（５ｃｈｏａｎｆｃｌｄら、１９８４）によって示され
た。正常４に個人個人にお１プるＰＢＭＧの酵素レベル
ＬＬ　、とノうらかというと一定であるからこのアッセ
イにＪ：って、ＰＢＭＣや、顆粒球の酵素の増加（５Ｃ
ｈａｔｔＯｒら、１９８１ｂ。

１９８４　：　Ｓｃｌ＋ｏｎｆｃｌｄら、１９８５）に
よって、証拠づけられるウィルスの感染の診断が可能と
なった。酵素の減少は、様々な芽細胞に関する急性白血
病をもちつづける（Ｗａｌｌａｃｈら、１９８２：５ｃ
ｈａｔｔｎｅｒら、１９８２）。この技術はまた、Ｗｉ
ｌｌｉａｍｓら（１９８１）によって開拓され、現在で
は、広く用いられている。

シンテターゼＥは、すべての３種の型のインターフェロ
ン、α、β、γにＪ−って処理された細胞で強（誘導さ
れ、その増加は、インターフェロン活性のよイマーカー
である（Ｗａｌｌａｃｈら、１９８２）。したがって、
Ｅレベルの測定を用いて、切ｖｉｔｒｏまたは、ｉｎ　
ｖｉｖｏの細胞がインターフェロンに触れ、それに反応
するかどうかを決定することが可能である。この測定は
、該溶液に細胞をさらし、Ｅレベルの増加を決定するこ
とによって、この測定をインターフェロンのアッセイに
用いることができる（ＦｅＶｅｌら、Ｕ、　Ｓ、　Ｐａ
ｔｅｎｔ　Ｎｏ、４　。

３０２．５３３）この測定は、また、インターフェロン
が人をはじめとして、全生体中に増加して生産されるか
どうかを確立するためにも用いられる。

インターフェロン−βの自動的分泌作用の結果として、
造血性細胞の分化を通じて、（２′−５′）オリゴムシ
ンテターゼは増加する（　Ｗａｒｄｅｎら、１９８４）
。もう１つのＥ測定の重要な応用は、インターフェロン
治療を行なっている患者のモニターを行なうことにある
。臨床的変化の外に、全身性のインターフェロンβ処理
と同様に、インターフェロンα処理によって５−１０倍
増加するＰＢＭＣＥレベルを測定することによって、患
者が、インターフェロンに反応していることを確立する
ことが可能である（　５ｃｈａｔｔｎｅｒら、１９８１
ａ　：　５ｃｈｏｅｎｒｃ＋ｃ＋ら、１９８／Ｉ　）　
、他のＴＦＮによって誘導された活性または分子が、Ｅ
酵素のアッセイと同様に用いられるか−ししれない。し
かし、この方法は、もつども広く用いられている（Ｗｉ
ｌｌｉａｍ’ｓら、ＢＯｒｄｅ！ｎ）。

さて、ヒトＰＢＭＣ中のＥＲＮＡのアッセイが同じ目的
に使われる。９−２１ＥｃＤＮＡをプローブとして用い
、素早いセルプロットが（Ｃｈｅｌｅｙと＾ｎｄｅｒｓ
ｏｎ、　１９８４　）　ＰＭ　Ｂ　Ｃについて開発され
た（第１４図）。ＥｃＤＮΔから誘導したオリゴヌクレ
オチドも、プローブとして使うことができる。１０Ｕ／
ｍｅのインターフェロンの効果は、この方法で容易に検
出できる（第１５図）１０７単位／１日のインターフエ
［１ンα−Ｃによって処理された患者において固層の結
果が得られた。

例１３ （２’−５′）オリゴ△シンデターゼに４する抗体の獲
得 天然の（２’−５′）７１リゴΔシンテタ一ゼ活性分子
に対する抗体の誘導のための抗原として役立てるため、
Ｅ１６及びＥ１８の全アミノ酸配列が選ばれた。

ペプチドＢ： ＧＬＵ　　ＬＹＳ　ＴＶＲＬＥＩＩ　ＡＲＧ　ＡＲＧ　
ＧＬＮ　　ＬＥＵ　ＴＨＲＬＹＳ　　ＰＲＯＡＲＧ　　
ＰＲＯＶ＾Ｌ　　ＩＬＥ　　ＬＥＤ　ＡＳＰＰＲＯＡＬ
＾＾ＳＰ は、Ｅ１８とＥ１６配列に共通なアミノ酸２８４から３
０３迄を含んでいる。

ペプチドＣ： ＡＲＧ　ＰＲＯＰＲＯＡＬＡ　ＳＥＲＳＥＲＬＥＤ　Ｐ
ＲＯＰＨＥ　ＩＬＥ　ＰＲＯＡＬＡ　ＰＲＯＬＥＤ　Ｈ
ＩＳ　ＧＬＵ　Ａｔ＾Ｅ１６（３４８から３６４迄の残
基）のＣ末端を含んでいる。両ペプチドともＢａｒａｎ
ｙとＨｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８０）の固相ペプチド
合成法によって合成された。セファデックスＧ２５カラ
ム上で２Ｍの酢酸中で精製し、ペプチドは、Ｋｅｙｈｏ
ｌｅ　ＬｉｓｐｅｔＨｅｍｏｃｙａｎｉｎ　　（Ｃａｌ
ｂｉｏｃｈｅｍ、）と結合した。ペプチドＣのアミノ末
端アルギニンのアミノ基を、Ｐ−アミノフエニール酢酸
でエステル化することによって、そのアミノ末端を通じ
て、キャリアータンパクと共軛ペプチド結合することが
できる（Ｓｐｉｒｅｒら、１９７７）、ペプチドＢは、
エチレンジアミン力ルポジイミド（ＩｌＯａｒ（！とに
ｏｓｈｌａｎｄ　。

１９６７）によって、キＡ７すＡ７−タンパクとカップ
ルさせた。

ラビットに完全なＦｒｃｕｎｄのアジュバント中に乳化
させた１Ｒｇのギ亀７すＡアーにカップしたペプチド（
０，２■の純粋なペプチドに相当づる）を皮下注射した
。ラビットは２週間ｔ１３きに２回強化注射により、不
完全アジコカ＼ンド中の０．５＃１５のキャリヤーにカ
ップルしたペプチドを！ｊえ、最大の抗体反応が出るま
で続番ノた。ラビツ１〜の面清中の抗体の力価は、キＡ
７り曳７−フリーのペプチドを用いて、エンザイムにリ
ンクした、イミュノソルベントアツセイ（ＧｒｅＯｎら
、１９８２＞において測定された。

例１１１ 繊維芽様細胞系５Ｖ８０と羊皮細胞系５ｌｉＳｈをプラ
スチックでプレートでコンフルエンモルイヤ一培養を行
なった。Ｄａｕｄ　ｉ細胞系は、サスペンションで、１
．５ｘｌＯ６１１１胞／−まで生育させた。

培養液をｒＩＦＮ−β１．５００μ／ｄ！で１６−２４
時間処理した。ヒトｒｌＦＮ−β１は、遺伝子工学にか
けたＣＨＯ細胞によって生産され、モノクロナール抗体
クロマトグラフィーによって均一になルマテ精製した（
　Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙら、１９８４）。

細胞は、４℃で、燐酸緩衝液を含んだ食塩水で２石洗い
、緩衝液、即ち２　０　ｍＭ　　ｌｌｅｐｅｓ　ｇ衝液
、ｐｌ＋７、５．５ｍＭ酢酸マグネシウム、３０ｍＭβ
ーメルカプメルクノール１００μＭフエニルメチルスル
フオニルフラロイド（ＰＭＳＦ）１０％グリセロール及
び０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ　Ｐ−４０　（ＮＤ４０）中
で冷時融解した。核と、こわれていない細胞を１５００
γで１０分間遠心分離して除いた。

上澄（Ｓｌ．５）をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ　Ｈｉｃｒｏｆ
ｕｇｅ中で、ミトコンドリアとライソゾームのない上１
（８１５）を得るため、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ　Ｈｉｃｒ
ｏｆｕｇｅ中で、１５、０００γで１０分遠心分離した
。タンパク（７）　ｍ　度ｃ．ｔ、ミクｃ＋　７　’／
レイ（　Ｂｒａｄｆｏｒｄｌ　９　７　６　）によって
測定した。

Ｂｅｃｋｍａｎｎ冷凍遠心器中で、３１５を、１００。

０００γで２時間遠心分１１１１　Ｌ，て細胞液（Ｓ１
０００）とミクロソーム（Ｐｌｏｏ）区分を調製した。

例１５ （２’−５’＞ＡリゴＡシンテターゼのアッセイ１−２
μグのタンパクを含むＳ１５の割当てかを２０ｕｌｌの
、２　５　ｍＭ　　ｌｌｐａｓ緩衝液、ｐＨ７．５、２
　０　ｍ　Ｍ　ｇＡｃｅｔａｔｅ，　１　ｍ　Ｍ　ｄｉ
ｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ。

１、５ｍＭ　　ＡＴＰ，４μＣｉの３２Ｐ−（２−ＡＴ
Ｐ．５０，ｃｚｇ／ｍｅ　ｐｏｌｙ　　（ｒｌ）（ｒＣ
）（ＰＬ−　Ｂｉｏｃｈｃｎ＋ｉｃａｌから）を含む反
応液中で３０℃２時間インキュベートした。５分間沸と
うさせた後、Ｈｉｃｒｏｆｕｇｅ遠心分離した後、バク
テリアのアルカリ性フオスファターじを２　５　０　１
／ｌｅ加え、反応物を３７℃で２時間イン４：ユベート
した。２から７１１１を一ｈａｔｍａｎｎ３　＃＋Ｉｗ
１紙にスポットし、ピリジン酢酸中ｐＨ３．５で３，０
００Ｖで電気泳動を行なって分析した。Ａ−トラジオグ
ラフィーで分析した後、（Ａ２　’　ｐ）ｎＡオリゴマ
ースポットを切出し、カウントした。

例１６ 電気泳動−トランスファーインミュノプロット粗細胞区
分の一部分（３０μプロテイン）を、Ｌａｅｍｍ　Ｉ　
ｉのナトリウム−ドデシル−サルフェート−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動ローディング緩衝液で調節しく　
Ｌａｅｍｉｌｉ，　１　９　７　０　）で１０分間沸騰
してから、７．５または、１０％ゲル上で電気泳動にか
けた。Ａｍｅｒｓｈａｍノ”Ｃ　−　）（　チル化シタ
タンパクを分子母標準物質として用いた（１０４ｃｐｗ
＋　）。ニトロセルローズベーパーへの電気泳動トラン
スファーは、（　Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ及びＳｃｈｕ　
Ｉ　ＩＥＡ８５）２５ｍＭトリスペース、１９２ｍＭグ
リシン及び２０％メタノール中で行なわれた。プロット
を０．０９Ｍ　　ＮａＣＪ！，０．０１Ｍトリス−塩酸
、ＤＨ７．５、１０％（ｖ／ｖ）の１％ファツトミルク
溶液、１０％（　Ｖ／Ｖ　）の熱で不活性化した仔牛脂
児血清、そして、０．０５％トウイーンー２０、中で３
７℃で２時間か、４℃で一夜、続いて、３７℃で３０分
子備約４ン４−コベーションを行なった。次に、プロッ
トは、ラビット１ｇＧＯ，１１ＦＩ／−の形で、アンデ
ー（２′−５′）オリゴＡシンテターげペプチドＢ抗体
と２時間３７℃でインキュベートした。プロットは、４
％仔牛血清中で１０分間５回洗い、１０６ＣｐＩｌｌ／
−のの１２５１−タンパクΔ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、　３
０　ｍＣｉ／ｍｇ）を含む完全９上記前インキユベ一ジ
］ン混合物中で、３７℃で１時間インキュベートし、プ
ロットを洗い、オートラヂオグラノイーにか１ノだ。

例１７ ５−１０μｌのアンプ−ＡリゴＡシンデタ−１ペプチド
Ｂラビツ１〜血清の最初の適量を、３％生血清アルブミ
ン（１３８Δ）とともに、ＰＢＳ中で平衡させた３■の
タンパクＡ−セファロース（ｐｈａｒｍａｃｉａ　）に
吸着さμ、３０分室温で、次にＰＢＳ−１％ＢＳ八で洗
った。（２’−５′）オリゴＡシンテターゼ酵素活性の
免疫沈澱には、２μグの３１５タンパクの適量を緩衝液
Ａ最終量２０μ（として、上のペレットにした１ｇＧ−
タンパクＡセファローズに、２時間４℃で吸着させた。

緩衝液は、バッファー八で５倍にうすめ、上澄液を別の
チューブに移した。ペレットを０．５ａｅのバッファー
八で３回洗い、次に、２５μｌの酵素反応液中でけん濁
させた（上を見よ）。活性は、結合していない上澄の一
部についても測定を行なった。

（２’−５′）オリゴムシンテターゼをラベルするため
に、Ｗｉｓｈ　　細胞をコンフルエントモルレイヤー迄
、３　ｃｍのプラスチック皿で生育させ、１２時間、５
０’０　υ／ａｔ！のｒＩＦＮ−β１で処理した。培地
は、５００μＣｉの、３５Ｓ−メチオニン（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ４００　ｍ　Ｃｉ　／ｍｍｏ＋）　ヲ含ムメチオ
ニンフリーＤＭＥＭ　（Ｇ　ＩＢＧＯ＞で置き換え、細
胞は、２時間インキュベートし、ＰＢＳで洗いバッファ
ー八でホモジナイズした。Ｓ１５を免疫沈澱に用いた。

約１０７ｃｐｍの８１５タンパクをぺレッド状にしたタ
ンパクＡ−セファロースに加え４℃で２時間混合した。

ビーズを１％Ｂ５Ａｌ１％ＮＰ４０．ＰＢＳ中の２Ｍ　
　ＫＣｊ！で洗い、そして、ＰＢＳだ【）で２回洗った
。ザンプルをす１〜リウムードデシル−１ノ゛ルノ土−
Ｉ・−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって解析し
た。

抗内情Ｂは、Ｅ１６どＥ　１８Ｍ列に共通なペプチドに
対して作り、一方、抗血清Ｃは、［１６においてのみ見
出されたベブＪドに対して作った。

我々は、これらの抗体が、（２’−５′）オリゴムシン
テターゼ活ｆ１を、特穴的に沈澱させるかどうかを確か
めるために用いた。免疫１ｇＧ−タンパクＡセファロー
ス上に吸着した合成活性と、上澄に残っている同活性は
、免疫していない１ｇＧから得られた同じ分画と比較し
た。１．６にｂＮＡ（賛ｉｓｈ　　細胞）または、１．
８にｂ　　ＲＮＡ（Ｄａｕｄｉ　ｃｅｌｌ）を、優先的
に表している２つの細胞系からの抽出物を比較した。正
常内情のバックグラウンドを差し引くことにより、抗−
Ｂ１抗Ｃに特異的に結合するものを評価できるようにな
る（第１６図）。抗Ｃは、１４ｉＳｈ　　細胞からの（
２′−５′）オリゴムシンテターゼ活性を保持していた
が、Ｄａｕｄ　ｉ細胞からの活性は保持してぃなかった
。これは、これらの細胞にＥ１６ｍＲＮＡそして、４０
Ｋｄタンパクが存在しないことと一致している（例１９
をみよ）。抗Ｂは、口ａｕｄ　ｉとＷｉｓｈの細胞抽出
物から（２’−５′）オリゴムシンテターゼ活性を吸着
した。

クローニングを行なったｃＤＮＡ５から、引き出したペ
プチドに対してつくられたアンデボディーは、従って、
特異的に異った（２”５′）オリゴムシンテターゼの形
を認識する。

例１９ ヒト細胞からの（２’　−５’　）オリゴＡシンテタ二
車ｊ」Ｕυ色久Ａ」１し色乙夫ユノ１■じとヒ分上ペプ
チドＢに対する抗体を、プ１〜リウム−ドデシルーサル
フｌ−１−−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し
、電気泳動的に、ニトロレルローズ紙にブロワ］・され
たヒ１〜細胞の抽出物中の（２’−５′）オリゴムシン
テターゼに特異的に結合する能力について調べた。イン
ミコノブロット中の抗体にＪ：って［される存在の他に
、我々は、インターフェロン処即にＪ：って誘導される
抽出物中に存在する天然の（２’−５′）オリゴＡシン
テターぜタンパクを期待している。そこで我我は、イン
ミュノタンパクにＪ：って明らかとなる誘導タンパクの
みを調べた（第１７図）。

（２’−５′）オリゴムシンテターゼｍＲＮＡ５（例１
８をみ、ｋ　）の表現のパターンの差のために、Ｄａｕ
ｄｉ、　Ｗｉｓｌ＋及び５Ｖ８０の細胞系を比較した（
例１８をみＪ、）。抗体Ｂは、期待されたＪ：うに、Ｅ
１８産物に大ぎさが類似している４５−４６にｄのタン
パクを、Ｄａｔｌｄ　ｉ細胞中に検出し、口ａｕｄ　を
細胞中に発現されていないｍ　ＲＮへのＥｌ−１０／Ｉ
　　− ６に相当すると考えられる４０にｄを検出できない。

対照的に、４０ＫｄＥ１６タンパクが、旧ｓｈ細胞には
存イ１し、これらの細胞に、１．８にｂＲＮＡが存在し
ていないことと一致して、４６ＫｄＥ１８が存在しない
。両方のタンパクとも５Ｖ８０細胞中に検出された。こ
れらの結果は、ヒトの細胞が、４０と４６Ｋｄタンパク
を生産し、そしてそれは、細胞がそれぞれ、１．６と１
．８にｂＲＮ　Ａ　ｓを表現する場合のみに起るという
ことを、この結果は示している。

抗−Ｂのインミュノプロットは、また、ヒトの細胞には
（２’−５′）オリゴムシンテターゼの２つの形のみな
らず、多分４つの形があることを明らかにしている。こ
の事実は、インターフェロンによって誘導される１００
Ｋｄと６７Ｋｄの２つの他のタンパクを、抗−日が、４
０と４６にｄのタンパクの外にはっきりと検出したとい
う事実から導き出せる。１００ＫｄはＤａｕｄ　ｉ細胞
には検出されず、抗Ｂによって検出される大きなタンパ
クも、やはり、細胞特異的なパターンで表現されるとい
うことを示した。抗−１３が、天然の（２’−５′）オ
リゴムシンテターゼの形の配列から誘導されたペプチド
に対し作られ、インターフェロンによって、２つのより
大きいタンパクが誘導されるということから、それらが
（２’−５′）オリゴ八シンテターゼシステムに属する
可能性が非常に高い。これらが（２’−５′）オリゴム
シンテターゼの形であることを確かめるために、我々は
、５Ｖ８０の異なる細胞区分から、（２’−５′）オリ
ゴムシンテターゼを精製した、ぞして平行して抗体Ｂに
よって検出されたタンパクを追跡した。

抗体Ｂによって探知された責なる２つのタンパクの分離
が、ｒａｇ。１８とｌ−１ｏ、１９に示しである４０Ｋ
ｄタンパクの大部分は、ＳＶ８０ｍ胞からのＮＰ４０細
胞質抽出物の１００．０００ｇの上澄（８１００）中に
残ッテイる。それは、低Ｆｌｌｒ！１では、ＤＥＡＥ−
Ｌ−ルローズには吸着されず、高濃痕で吸着、溶出され
る。対照的に、１００Ｋｄタンパクは、５ｉｏｏからの
ものに殆ど存在せず、ミクロゾームペレット（ＰＩ　０
０）に存在しており、それから、Ｎ　ａ　　ｄｅｏｘｙ
　ｃｈｏｌａｔｅ　　（Ｄ　ＯＣ）または０．５ＭＫＣ
Ｊ！によって溶解することができる。このタンパクは、
ＤＥＡＦ−セルローズに低塩濃度に吸着し、高塩濃度で
溶出される。６７にｄと４５−４６にｄは、１部５１０
０に残っているが、比較的ミクロゾームペレット中のη
タンパクあたりに比較的濃縮されている。それらは、ミ
クロゾームからＤＯＣまたは、ＫＣｌによって容易に抽
出されにくいようである。

グリセロールグリーデイエント沈降により、ＣＭ−セル
ローズ精製後５１００から精製した活性は、４０にｄタ
ンパクＥ１６の沈降と平行していることがわかった。Ｐ
ｌｏｏから精製し、ＤＥＡＥ−セルローズから溶出し、
１００及び４６Ｋｄタンパク類を含む分画は、グリセロ
ールグレーデイエントで２つのピークにわかれ、８０．
０００及び４５，０００Ｍｒタンパクとして沈澱した。

重いピーク中の、（２’−５′）オリゴムシンテターゼ
は、１００Ｋｄタンパクの存在と平行している。

グリセロ−ルグレーデイエントからの４０Ｋｄタンパク
は、その活性に対する至適ｐＨが６．８であり、ｐＨ７
，８では２５％しか活性がない。さらに、ＤＯＩＶ（ｒ
ｊり　　（ｒＣコの濃度が１μｇ／ａ＋ｅにり低いと、
４０にｄ（２’−５′）４リゴＡシンテターゼの活性は
全く認められず、ｌｉ長大人活性は、５０−１００μｇ
／〆を必要どり”る（第２０図）。同じ高いｄｓＲＮＡ
問求性が、ｌ−、ｃｏｌｉにお１ノる組み換えＤＮＡ技
術ににつ−Ｃ作られた。［１６ｃＤＮＡ産物について見
出された。

グリセロールグレーディ］ニン１〜のＩＵ１００Ｋｄタ
ンパクは（２’−５′）７１リゴΔシンテターゼについ
ての至適ｐｌ＋は、７．６であり、酸性では活性がより
低い。それは、極磨に低いｐｏｌｙ　（ｒ　ｊ！　）（
ｒＣ）の濃度あるいは、存在しない状態で、既に最大の
活性を有し、そして高濃度のｄｓＲＮΔで阻害さえ起る
。これは、異なる（２’−５１オリゴＡシンテターゼの
形がそれらの細胞質中の局在位置及び酵素的性質が違っ
ているため、異なる条件で使用されることを強く示唆し
ている。

多くの観察の結果、インターフェロンで誘導された（２
’−５′）オリゴムシンテターゼは、（１９８４年Ｒｅ
ｖｅｌによって総説されている）その抗ウイルス効果に
加えて２つの、みたところ反対の細胞成長のフェーズ（
セルサイクリングと成長の阻害）に関与していることが
示唆される。これは、複数の（２’−５′）オリゴムシ
ンテターゼの型の問題と関係しているがもしれない。同
調細胞培養において、我々は、（２’−５’　）オリゴ
ムシンテターゼが、セルサイクルタンパクとして作用す
ることを観察した（Ｈａｌｌｕｃｃｉら、１９８５）。

このようにして、マウス胚芽の繊維芽細胞の同調培養に
より、（２′−５′）オリゴＡシンテターゼ活性と、（
２’−５’＞ＡシンテターゼｍＲＮＡが、Ｓ−期の終り
に上昇し、細胞が０２期に進むと、そのＲＮＡと酵素活
性が急速に消えることが示された。抗マウスインターフ
ェロン抗体は、オリゴΔシンテター１誘導を減少した。

この系において、我々は、Ｓ−フェーズにおいて蓄積す
る（２”５′）ＪリゴΔシンテターゼは、外生インター
フェロンで処理したとき、同じ細胞に蓄積する１、７に
ｂＲＮΔ秤どは異った大きな４−５にｂの転写物である
こと−ｂｖＡ′ｆＸｔ、た。このことは、Ｓ−フェーズ
の（２’−５′）オリゴムシンテターゼは、外から加え
たインターフェロンによって成長を１にめられた細胞中
のシンテターゼとは異なる形であることを示唆している
。その大きなｍＲＮＡのため、それは、低いｄｓＲＮΔ
を要求する形である１００Ｋｄに近いものと思われる。

抗−８抗体は、マウス細胞中に、（２’−５′）オリゴ
ムシンテターゼの複数の型を検出している。

これらの観察は、（２’−５′）オリゴムシンテターゼ
の４つの型を別々にアッセイすることが出来ることの利
点を、わかり易く説明している。このシンテターゼは、
個々に、種々の生理的条件及び病気によって変化しつる
。

例２０ 抗−Ｂ抗体は、（２’−５′）オリゴムシンテターゼの
すべての型を認識するので、それは、培養または直接患
者から得られたヒト細胞からの分別前の抽出物中におい
ての（２’−５′）オリゴムシンテターゼのインミュノ
アッセイのために用いることができる。

固相のラジオインミュノアツセイの例が、第２１図に示
される。インターフェロンで処理しであるか、処理して
いないか、いずれのＷｉｓｈＩ！：　ＤａｕｄｉＣｅｌ
ｌをＮＰ４０を含む、ａｕｔ’ｒｅｒＡＴ”融解し、上
記の如＜　、ｍｉｃｒｏｆｕｇｅｉ心で、Ｓ１５を調整
した。

１〜１０μ９のタンパクを含む１部をとり、直接にニト
ロセルローズペーパー（もしくは、他のタンパク結合性
紙）に適用し、そのシートを、正規のインミュノプロッ
ト（例１９）に対する場合のように抗−８で処理した。

ｒｉｇ、１１のオートラジオグラフイーが示すＪ：うに
、　　　Ｉ−タンパク△は、インターフエ［１ン処ｌ！
Ｐ細胞から由来するサンプルのみと結合する。このアッ
セイは、ラベルタンパクＡを、パーオキシダーゼかβガ
ラクトシダーゼを共軛さゼた抗−ラビットＩＯＧと置き
換えることによって、：［ンザイムーリンク１−−イン
ミュノアツセイ（ＥＬＩＳＡ）の形でも使うことができ
るのは明らかである。

（２’−５′）オリゴムシンテターゼのインミュノアツ
セイは迅速であり、細胞抽出物調製に２０分、抗−Ｅと
タンパク−△吸着及び洗浄に２時間である。このアッセ
イは感度が高く、非常に少量の細胞抽出物でも、その（
２’−５ＭオリゴＡシンテターゼレベルを測るのに十分
である。それは特異性があり、インターフコニロン処即
をしていない細胞においては、全くシグナルが表れない
。

例２１ 酵素的アッセイにＪ：って、ウィルスに感染した患者の
末梢血単核細胞において、（２’−５′）オリゴＡシン
デターゼが上昇することが確立された（前の研究をみよ
）。抗−（２’−５′）オリゴムシンテターゼペプチド
抗体は、細胞一般、特に白血球中の（２’−５′）オリ
ゴムシンテターゼの上界を探知するために、抗−（２’
−５′）オリゴムシンテターゼを免疫蛍光顕微鏡法の形
で用いることができる。

健康な供面者及び急性ウィルス疾患をもった患者から血
液（２ｄ）を採血した。単核血液細胞をＦｉｃｏｌｌ−
Ｈｙｐａｑｕｅ　（ファルマシア）遠心によって分離し
、カバーグラスの上に、直接かまたはサイトスピンミク
ロフユージ（ミクロへマドクリット）を用いてひろげた
。細胞をＰＢＳで洗い、３％フォルムアルデヒド常温で
３０分間固定し、ＰＢＳですすぎ、Ｈａｎｋの塩中で０
．５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ　１００で５分間処理し、再び
ＰＢＳとＰＢＳ−２％ゼラチンですすいだ。次に、ＰＢ
Ｓゼラチンで１：５に稀釈した抗Ｂ１１ｈ清４０μｌの
小滴をパラフィルム上に加え、カバーグラスを重ね、イ
ンキュベ一トした。室温で６０分後、カバーグラスＰＢ
Ｓ−ゼラチン及び１：２０に稀釈したＦＩＩＣ共軛抗−
ラビットＩ　ａ　Ｇ　（Ｂｉｏｙｅｄａ　）中ですスキ
、パラフィルム操作に力鳴ノだ。室温で２０分たってか
ら、カバーグラスをＰ　Ｂ　Ｓ−ケラチンで２回洗い、
次に水で洗い、Ｈｉｖｉｏｌ　　４−８８　（ヘキスト
）−グリセロール（２，５ｇＮｏｖｉｏｌ、　６ｇグリ
セロール及び１２Ｉｄ！の０．２Ｍトリス塩酸ｐＨ８，
５を加えた水６１＋１１！、５０℃でイン４：ユベート
し、５，０００ｇで１５分沈澱物をのぞいたもの）とと
もに、顕微鏡スライド状にマウントする。同時に、抗−
Ｂの代りに、正常のラピツ１〜の血清を用いてカバーグ
ラスを処理した。スライドをツアイス蛍光顕微鏡で観察
し、３０秒の露出で、ポロライドフィルムに写した。

Ｆｉｇ、　２２は、リンパ球が、ウィルスの感染患者か
らの血液サンプル中においては、抗−（２′−５′）−
オリゴ−シンテターゼで染まり、健康な供血サンプルで
は染らず、マクロファージと顆粒球だけに弱い蛍光がみ
られるにすぎないことを示−１１／ｌ　　− している。正常の血清は、リンパ球を染めないが、マク
ロファージまたは顆粒球においても、低いバックグラウ
ンドを与える。従って、本杭−（２′−５′）オリゴム
シンテターゼペプチド抗体は、細胞が、インターフェロ
ンと反応して、（２′−５′）オリゴムシンテターゼを
蓄積したかどうかを評価するために、培養、血液組織片
中の細胞の顕微鏡的観察に用いることができる。

先行技術の文献基 ＲＥＦＥＲＥＮＣＥＳ −Ｂａｇｌｉｏｎｉ　ｃ、　ａｎｄ　Ｎｉ１ｓｅｎ　Ｔ
、Ｗ、　（１９８３）　Ｉｎ　ｃｒｅｓｓｅｒ、　Ｔ。

（ｅｄ）　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　５゜Ａｃａｄ、　Ｐ
ｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ　２３−４２゜
−Ｂａ１ｌ　　　Ｌ、Ａ、　　（１９８０）　　八ｎｎ
、Ｎ、Ｙ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、　　３５０．　４８６　
−　４９６゜Ｊ　（ｅｄｓ）：　”Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉ
ｄｅｓ：＾ｎａｌｙｓｉｓ、　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａ
ｎｄ　ＢｆＯＩＯ−ｇｙ”、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ａｃ
ａｄ　ｐｒａｓｓ、　２：１−２８４゜−Ｂｅｎｅｃｈ
、　ｐ’＋　ＨＯｒｌｉｎ、　Ｇ、、　ａｎｄ　Ｃｌｌ
０Ｉ）８ｔｈ、　、」、　（１９８５）　Ｎｕｃｌ。

ＡＣｉｄＳ　Ｒｅｓ、　１３．１２（Ｇ７−１２８１゜
−Ｂｒａｄｆｏｒｄ　Ｈ（１９７６）、＾ｎａｌ　Ｂｉ
ｏｃｈｃＩｌ１７２：２４８゜−Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ
、　Ｒ，ａｎｄ　Ｃｈａｍｂｏｎ、　Ｐ、　（１９８１
）＾ｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｃｍ。

５０、３４９−３８３゜ −Ｃｈｅｂａｔｈ、　Ｊ、、　Ｈｅｒｌｉｎ、　Ｇ、、
　Ｈｅｔｚ、　Ｒ，、Ｂｃｎｅｃｈ、　Ｐ、　ａｎｄ　
ＲｅｖｅｌＨ，（１９８３）　Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　
Ｒｅｓ、　１１．１２１３−１２２６゜３０８２−３０
８６゜ ＲＮＡ　　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　　ｂｙ　　ｄｏｔ−ｂ
ｌｏｔ　　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、　＾ｎａｌ　
　Ｂｉｏｃｈｅｎ＋。

１３７、　１５−１９゜ −Ｃ１１ｃｒｎａ、１ｏｖｓｋｙ　Ｙ、　Ｈｏｒｙ　Ｙ
、　Ｃｈｅｎ　Ｌ、　Ｍａｒｋｓ　Ｚ、　Ｎｏｖｉｃｋ
　Ｄ、　Ｒｕ−ｂｉｎｓｔｃｉｎ　Ｈ，Ｒｅｖｅｌ　Ｈ
（１９８４）、　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｃｏｎ５ｔｉｔ
ｕｔｉｖｅ　Ｐｒｏ−ｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｌｕｍ
ａｎ　Ｆｉｂｒｏｌａｓｔ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｂ
ｙ　Ｈａｍｓｔｅｒ　ＣｅｌｌｓＴｒａｎｓｆｏｒｍｅ
ｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＩＦＮ−βＩ　Ｇｅｎｅ　Ｆｕ
ｓｅｄ　ｔｏ　ａｎ　５Ｖ４０Ｆａｒｌｙ　ｐｒｏＩＩ
ｌｏｔｅｒ、　　ＤＮＡ　３：２９７−３０８゜−Ｃｒ
ｅａｓｃｙ　　Ａ１．　Ｅｐｐｓｔｅｉｎ　　Ｄ、Ａ、
、　Ｈａｒｓｈ　　Ｙ、Ｖｌ、にｈａｎ　　Ｚ、　ａｎ
ｄＨｅｒｉＯａｎ　　Ｔ、Ｃ，（１９８３）　Ｈｏ１．
Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、　３．　７８０−７８６、−　Ｄ
ｅｇｒａｖｅ　Ｗ、、　Ｄｅｒｙｎｃｋ　Ｒ，、Ｔａｖ
ｅｒｎｉｅｒ　Ｊ、、　Ｈａｅｇｅｍａｎ　Ｇ、　ａｎ
ｄＦｉｅｒｓ　Ｗ、　　（１９８１）　Ｇｅｎｅ　１４
．　１３７−１４３゜−Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ　Ｊ、、　
Ｓａｍａｎｔａ　Ｈ，、Ｆａｒｒｅｌｌ　Ｐ、　ａｎｄ
　Ｌｅｎｇｙｅｌ　Ｐ。

（１９８０）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５５．３
８１３−３８１６゜−Ｅｐｓｔｅｉｎ　Ｄ、＾、、　Ｃ
ｚａｒｎｉｅｃｋｉ　Ｗ、、　Ｊａｃｏｂｓｏｎ　Ｈ，
、ＦｒｉｅｄｍａｎＲ，Ｈ，ａｎｄ　Ｐａｎｃｔ＾、　
　（１９８１）　Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　１
１８．　９−１５゜−Ｅｔｉｅｎｎｅ−３ｍｅｋｅｎｓ
　　Ｈ，、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　　Ｊ、、　　Ｏｏｍｓ
　　ｔｌ、　　ａｎｄ　　ＤｕｍｏｍｔＪ、（１９８３
）　Ｅｕｒ、Ｊ、　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　１３０．２
６９−２７３゜−ｒｅｌｌｏｕｓ　Ｈ，、Ｎｉｒ　Ｕ、
、　Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、、　Ｈｅｒｌｉｎ　Ｃ，、Ｒ
ｕｂｉｎｓｔｅｉｎＨ，ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１
９８２）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ
ＳＡ　７９゜ＵＳＡ　７５．　２５６−２６０゜ −Ｆｅｒｂｕｓ　［’、＋　Ｊｕｓｔｃｓｅｎ　Ｊ、、
　　Ｂａ５ａｎｃｏｎ　ｌ’、　ａｎｄ　ｒｈａｎｇ　
Ｈ，Ｎ。

（１９８１）　ＢｉＯＣｈｅｍ、Ｂ１０ｐ１１ｙＳ、Ｒ
Ｏ３，Ｃ０ＩＩｌｌｌＩｎ、　　１００．８４７−８４
ｉＧ。

−ＦｒｆｅｄｌＲａｎ　Ｒ，Ｌ、、　Ｍａｎｌｙ　ｓ、
ｐ、、　　ＨＣＨａｌｌ（ｌｎ　Ｈ，、Ｋｅｒｒ　１．
Ｈ。

ａｎｄ　５ｔａｒｋ　Ｇ、Ｒ，（１９８４）　Ｃｅ１ｌ
　３８．　７４！＋−７５５゜−ｃｒｅｅｎ　　Ｆ”＋
　　Ｈａｎｉａｔｉｓ　　Ｔ、　　ａｎｄ　　ＨＯｌｌ
、Ｏｎ　　Ｄ、八、　　（１９８３）　　Ｃｅ１ｌ　　
３２゜６８１−６９４゜ −Ｇｒｅｅｎ　Ｎ、、　Ａｌｅｘａｎｄｅｒ　Ｉｔ、、
　０ｌｓｏｎ　Ｓ、、　Ａｌｅｘａｎｄｅｒ　Ｓ、。

５ｃｈｉｎｎｉｃｋ　Ｔ、、　５ｕｔｃｌｉｆｆｅ　Ｇ
１．　１−ａｒｎｃｒ　Ｒ，（１９８２）、　Ｃｅ１ｌ
　２８：４７７−４８７゜ −ｕｏｖａｎｅｓｓｉａｎ＾、Ｇ、、　Ｂｒｏｗｎ　Ｉ
Ｉ、［、ａｎｄ　Ｋｃｒｒ　１．Ｈ，（１９７７）Ｎａ
ｔｕｒｅ　２６８．　５３７−５４０゜Ｊｏｈｎｓｔｏ
ｎ　Ｆｌ’＋　　Ｆｒｉｅｄｍａｎ　Ｒ，Ｈ，ａｎｄ　
ＴＯｒｒＯｎＣＯＰ、Ｆ、　　（１９８０）Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ　１９．　５５８０−５５８５゜−にａ
ｒｉｎ　Ｈ，ａｎｄ　Ｒｉｃｈａｒｄｓ　Ｒ，１，、（
１９８２）　Ｎａｔｕｒｅ　２９９．　７９７−８０２
゜−にｅｌｌｅｒ　Ｗ、　　（１９８４）　Ｃａ１ｌ　
３９．　４２３−４２５、−　Ｋｅｒｒ　１．Ｈ，ａｎ
ｄ　Ｂｒｏｗｎ、　Ｒ，［、（１’Ｊ７８）　Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。

−に１ｍ１ｃｈｉ　Ａ、、　５ｈｕｒｅ　Ｈ，、Ｌａｐ
ｉｄｏｔ　Ｙ、、　Ｒａｐｏｐｏｒｔ　Ｓ、、　Ｐａｎ
ｅｔ　Ａａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８１）　ＦＥ
ＢＳ　Ｌｅｔｔ、　　１３４．２１２−２１６゜−Ｋｉ
ｔａｍｕｒａ　Ｎ、、　Ｓｅｍ１ｅｒ　Ｂ、Ｌ、、　　
Ｒｏｔｈｂｅｒｇ　Ｐ、Ｇ、、　　Ｌａｒｓｅｎ　Ｇ、
Ｒ，。

＾ｄｌｅｒ　Ｃ，Ｊｌ、　　ＤＯｒｎｅｒ＾、Ｊ、、　
　Ｅｍｉｎｉ　ＩＥ、＾、、　Ｈａｎｅｃａｋ　Ｒ，、
Ｌｅｅ゛Ｊ、Ｊ、、　ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｗｅｒｆ　Ｓ、
、　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｃ，Ｗ、　ａｎｄ　ＷｉＩＩｌ
ｌＩｌｅｒ　Ｅ。

（１９８１）、　Ｎａｔｕｒｅ　２９１：５４７−５５
３゜−にｏｚａｋ　Ｈ，（１９８４）　Ｎａｔｕｒｅ　
３０８．　２４１−２４６゜−にｙｔｅ　Ｊ、　　ａｎ
ｄ　Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ　Ｒ，Ｆ、　　（１９８２）　
Ｊ、Ｈｏ１．Ｂｉｏｌ、　　１５１゜１０５−１３２゜ −Ｌａｅｍｍｌｉ　Ｗ、に、　　（１９７０）、　　Ｎ
ａｔｕｒｅ　２２７：６８０−６８５゜−Ｌａｕｒｅｎ
ｃｅ　　Ｌ、、　　Ｈａｒｔｉ　　Ｊ、、　　Ｒｏｕｘ
　　ロ、　　ａｎｄ　　Ｃａ１ｌｌａ　　Ｈ，（１９８
４）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｔ、ＵＳＡ　
８１．　２３２２−２３２６゜−Ｌｅｂｌｅｕ　　Ｂ、
　　ａｎｄ　　Ｃｏｎｔｅｎｔ　　Ｊ、　　　（１９８
２）　　ｉｎ　　Ｇｒｅｓｓｅｒ、　　　１．　　　（
ｅｄ）Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　　４．　　Ａｃａｄ、　
　Ｐｒｅｓｓ、　　Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ、　　ｐｐ　　
４７−８４゜−Ｌｅｎｇｙｅｌ　Ｐ、　（１９８２）、
　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５１：　２
５１−２８２、−　Ｈａｌｉｓｓｅｎ　Ｈ，、Ｈａｌｉ
ｓｓｅｎ　Ｂ、　ａｎｄ　Ｊｏｒｄａｎ　Ｂ、　　（１
９８２）、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ。Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　　ＵＳ＾７９．８９
３−８９７゜−Ｈａｌｌｕｃｃｉ　Ｌ、、　Ｃｈｃｂａ
ｔｈ　Ｊ、、　　Ｉｔｃｖｃｌ　Ｈ，、Ｗａｌｌｓ　Ｖ
、、　　ＢｃｎｅｃｈＰ、　　（１９８５）、　　Ｉｎ
ｔｅｒｆｅｒｏｎ　　ａｎｄ　　２−！ｉ八　５ｙｎｔ
ｈｃｔａｓｅ　　Ｇｅｎｅ　　Ｅｘｐｒｅｓ−ｓｉｏｎ
　Ｄｕｒｉｎｇ　Ｔｈｅ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｙｃｌｅ、　Ｉ
ｎ：　Ｄｉａｎｚａｎｉ　ｒ、　ＲｏｏｓｉＧＢ　（ｅ
ｄｓ）：　１ｌＴｈｅ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｓｙｓ
ｔｅｍ”、　５ｃｒｏｎｏ　ＳｙｍｐｏｓｉａＶｏｌ　
２４．　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：　Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ
　、　　ｐｐ　１Ｇ５−１７０゜−Ｈａｎｉａｔｉｓ　
Ｔ、、　１ｌａｒｄｉｓｏｎ　Ｒ，、、１，ａｃｙ　ｃ
、＋　　Ｌａｕｅｒ　Ｊ、。

０°Ｃｏｎｎｅｌｌ　　Ｃ’＋　　Ｑｕｏｎ　　ロ、、
ＣＣ叡　にｅｃ　　Ｓ、　　ａｎｄ　　Ｅｆｓｔｒａｄ
ｉａｔｉｓ　　Ａ。

（１９７８）　Ｃｅ１ｌ　１５．６８７−７０１゜−＋
ａｎｉａｔｉｓ　Ｔ、、　　Ｆｒ１ｔｓｃｈ　ｐ、　ａ
ｎｄ　５ａｌｌｌｌ）ｒｏｏｋ　Ｊ、　　（１９８２）
　Ｈｏ１ｅ−ｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｌｎｇ：　Ａ　１ａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ　ｌ１ｌａｎＬＩａｌ、　Ｃｏ１ｄ　
ｓｐｒｉｎｇ　１ｌａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、
　　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　１ｌａｒｂｏｒ、　　Ｎ
、Ｙ、。

−Ｈａｘａｍ＾、Ｈ，ａｎｄ　Ｇ１１ｂｅｒｌ　ＩＪ、
　　（１９８０）　Ｈｃｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ、　　６
５゜４９９−５６０゜ −Ｈｅｒｌｉｎ　　Ｇ、、　　Ｃｈｅｂａｔｈ　　、ノ
、、　　Ｂｃｎｃｃｌ＋　　Ｐ、、　　Ｈｃｌ、ｚ　　
Ｐ、　　ａｎｄ　　ｒｌｅｖｅｌ　　Ｈ。

（１９８３）　Ｐｒｏｃ、、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、１ＩＳＡ　８０．４９０４−４９０８゜−Ｈｅｒｒ
ｉｔｔ　　ＪＡ、　　Ｂｏｒｄｅｎ　　ｒＣ，Ｂ旧１１
−八　（１！ｉｌｌ！＋）、　　）ｌｃａｓｕｒｃｍｃ
ｎｌ、ｓ　　ｏｆ２’−５’Ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａ
ｔｃ　　５ｙｎｔｔ＋ｃＬａｓｃ　　Ｉｎ　　Ｐａｔｉ
ｅｎｔｓ　　ＲｅｃｅｉｖｉｎｇＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
−Ａｌｐｈａ、　Ｊ　Ｔ１１ｔＯｒｆＯｒＯｎ　１１０
Ｓ５：Ｈｌｌ−１９８゜−Ｍｉｎｋｓ　　Ｈ，＾、、　
　Ｗ（３３ｔ　　ｏ、に、、　　Ｂｅｎｖｉｎ　　Ｓ、
　　ａｎｄ　　Ｂａｇｌｉｏｎｉ　　Ｃ。

（１９７９）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５４．１
０１８０−１０１８３゜−Ｈｏｒｙ　Ｙ、、　Ｃｈｅｒ
ｎａｊｏｖｓｋｙ　Ｙ、、　　Ｆｅ１ｎｓｔｅｉｎ　Ｓ
、ｌ−、、Ｃｈｅｎ　Ｌ、。

Ｎｉｒ、、　Ｕ、、　Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ　Ｊ、、
　Ｈａｌｐｉｅｃｅ　Ｙ、、　Ｔｉｏｌｌａｉｓ　Ｐ、
。

Ｍａｒｋｓ　Ｄ、、　　Ｌａｄｎｅｒ　Ｈ，、Ｃｏ１ｂ
ｙ　Ｃ，ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８１）　Ｅｕ
ｒ。

Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　１２０．　１９２−２０２゜
−Ｎｉ１ｓｅｎ　Ｔ、Ｈ，、Ｈａｒｏｎｅｙ　Ｐ、＾、
、　　Ｒｏｂｒｔｓｏｎ　Ｈ，Ｄ、　　Ａｎｄ　Ｂａｇ
ｌｉｏｎｉＣ，（１９８２ａ）　Ｈｏ１．Ｃｅ１１．Ｂ
ｉｏｌ、　２．　１５４−１６０゜−Ｎｉ１ｓｅｎ　Ｔ
、Ｈ，、Ｗｏｏｄ　Ｄ、Ｌ、　ａｎｄ　Ｂａｇｌｉｏｎ
ｉ　Ｃ，（１９８２ｂ）　Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、　２５１．　１６０２−１６０５゜−Ｎｉｒ
　Ｕ、、　Ｃｏｈｅｎ　Ｂ、、　Ｃｈｃｎ　Ｌ、　ａｎ
ｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８４）　Ｎｕｃｌ。

＾ｃｉｄｓ　Ｒｅｓ、　　１２．　６９７９−６９９３
゜−Ｐｕ５ｔｃｌｌ　Ｊ、　ａｎｄ　Ｋａｆａｔｏｓ　
Ｆ、Ｃ，（１９８２ａ）　Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒ
ｅｓ。

１０、　４７６５−４７８２゜ −Ｐｕ５ｔｃｌｌ　Ｊ、　ａｎｄ　Ｋａｆａｔｏｓ　Ｆ
、Ｃ，（１９８２ｂ）　Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ
ｓ。

１０、　５１−５９゜ −Ｒａｊ　Ｎ、Ｂ、に、　ａｎｄ　Ｐｉｔｈａ　Ｐ、Ｎ
、　　（１９８１）、　　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａ
ｃａｄ。

Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　７８：　　７４２６−７４３０゜
−Ｒｅａｄ　　ＳＥ、　　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　　ＢＲＧ
、　　Ｃｏａｔｃｓ　　Ｒ八、　　［ｖａｎｓ　　Ｈに
、　　ＦａｎｎｉｎＯ８Ｍ、　Ｇａｒｖｅｙ　ＨＢ、　
５ｈｅｐｈｅｒｄ　ＦＡ　（１９８５）、［＋ｅｖａｔ
ｅｄｌｅｖｅｌｓ　ｏｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄ
ｕｃｅｄ　２’−５’ＯＩｉｇｏａｄｃｎｙｌａｔｅ　
５ｙｎｔｈｅｔａｓｅ　１ｎＧｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ　
Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　Ｌｙｍｐｈｏａｄｃｎｏｐａｔ
ｈｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ＾ｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｕｕｎｏｄ
ｃｆｉｃｉｃｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ、　　Ｊ　Ｉｎ
ｆｅｃｔ　Ｄｉｓ３：４６６−４７２゜ −Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８４）　　ｉｎ　Ｂｅｃｋｃ
ｒ、　Ｖ、　　（ｃｄ）＾ｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｄｒｕｇ
ｓ　ａｎｄＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：　Ｔｈｅ　Ｍｏ１
ｅｃｕｌａｒ　ｂａｓｉｓ　ｏｒ　ｔｈｅｉｒ　ａｃｔ
ｉｖｉｔｙ。

Ｈａｒｔｉｎｕｓ　Ｎ１ｊｈｏｆｆ、　Ｂｏｓｔｏｎ、
　ｐｐ　３５１−４３３゜−Ｒｅｖｅｌ　　Ｈ，、にｉ
ｍｃｈｉ　　Ａ、、　　Ｓｈｕｌｍａｎ　　ｌ−、、Ｆ
ｒａｄｉｎ　　＾、、　　５ｈｕｓｔｅｒＲ，、Ｙａｋ
ｏｂｓｏｎ　　Ｅ、、　　Ｃｌｌ０ｒｎａＪＯＶＳｋｙ
　Ｙ、、　　５Ｃ１ｌｌｌｌｉｄＬ　　八、、　　５ｈ
ｕｒｅ　　ＩＩ。

ａｎｄ　Ｂｅｎｄｏｒｉ　Ｒ，（１９８０）＾ｎｎ、Ｎ
、Ｙ、Ａｃａｄ、ｓｃｉ、　３５０．４５９−４７２゜
−Ｒｅｖｅｌ　　Ｈｌ、　　Ｗａｌｌａｃｈ　　Ｄ、、
　　Ｈｃｒｌｉｎ　　Ｇ、、　　Ｓｃｌ＋ａｌｌｎｃｒ
　　Ａ、、　　ＳｃｈｍｉｄｔＡ、、　Ｗｏｌｄ口、、
　Ｓｈｕｌｍａｎ　Ｌ、　ａｎｄ　Ｋ　ｉｍｃｌ＋ｉ＾
、　　（１９８１）　Ｍａｔｈ。

Ｅｎｚｙｍｏｌ、７９．　１４９−１６１゜−Ｒｅｖｅ
ｌ　Ｈ，、にｉｍｃｈｉ　＾１．　　ｒｒｉｏｄｌｌｌ
ａｎ　Ｈｌ、　Ｗｏｌｄ　Ｄ、、　Ｈｅｒｌｉｎ　Ｇ、
。

Ｐａｎｅｔ＾、、　　Ｒａｐｏｐｏｒｔ　Ｓ、　ａｎｄ
　Ｌａｐｉｄｏｔ　Ｙ、　　（１９８２）　Ｔｅｘａｓ
　Ｒｅｐ。

Ｂｉｏｌ、Ｈｅｄ、　　４１．　４５２−４ｔ３２゜−
Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，、５ｈａｔｔｎｅｒ　Ａ、、　　Ｗａ
ｌｌａｃｔ＋　Ｄ、、　　Ｈｅｒｌｉｎ　Ｇ、、　　Ｌ
ｅｖａｖｉＨ，、Ｈａｈｎ　Ｔ、、　　Ｌｅｖｉｎ　Ｓ
、、　　（１９８２）、Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｏｆ　
ＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＴｈｅｒａｐｙ、　　Ｄｉａｇｎ
ｏｓｉｓ　　ｏｆ　　ｖｉｒａｌ　　ｄｉｓｅａｓｅｓ
　　ａｎｄ　　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ　Ｉｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎ　Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ　ｂｙ　Ａｓ５ａ
ｙ　ｏｆ　ａｎ　Ｉｎｔｅｒ４ｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅ
ｄ　ｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　Ｈｕｌａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅ
ｒａｌ　Ｗｈｉｔｅ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅ１ｌｓ。

Ｉｎにｏｎｏ　Ｒ，Ｖｉｌｃｅｋ　Ｊ　（ｅｄｓ）：　
”Ｔｈｅ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏ
ｆＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ”、　　Ｔｏｋｙｏ：　Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｏｋｙｏ　Ｐｒｅｓｓ。

ｐｐ　３５３−３６７゜ −Ｒｉｇｂｙ　Ｐ、、　　Ｄｉｅｃｔｔｍａｎ　Ｈ，、
Ｒｈｏｄｅｓ　Ｃ，ａｎｄ　Ｂｅｒｇ　Ｐ、　　（１９
７７）Ｊ、Ｈｏ１．Ｂｉｏｌ、　　１１３．　２３７−
２５１゜−Ｒｏｓａ　Ｆ、、　Ｂｅｒｉｓｓｉ　Ｈ，、
Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ　Ｊ、、　Ｈａｒｏｔｅａｕｘ
　Ｌ、。

Ｆｅ１ｌｏｕｓ　Ｈ，ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９
８３ａ）　ＥＨＢＯＪ、　　２．　２３９−２４３゜−
Ｒｏｓａ　　Ｆ、、　　Ｈａｔａｔ　　Ｄ、、　　Ａｂ
ａｄｉｅ　　Ａ、、　　Ｗａｌｌａｃｈ　　ロ、、　　
Ｒｅｖｅｌ　　Ｈ，ａｎｄＦｅｌｌｏｕｓ　Ｈ，（１９
８３ｂ）　ＥＨＢＯＪ、　　２．　１５８５−１５８９
゜−Ｓａｌｚｂｅｒｇ　Ｓ、、　Ｗｒｅｓｃｈｎｅｒ　
Ｄ、Ｈ，、Ｏｂｅｒｍａｎ　Ｆ、、　　Ｐａｎｅｔ＾、
　ａｎｄＢａｋｈａｎａｓｃｈｖｉｌｉ　Ｈｌ（１９８
３）　Ｍｏ１．　　Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、　　３．　１
７５９−１７６５、−　　Ｓａｍａｎｔａ　　Ｈ，、ロ
ｏｕｇｈｅｒｔｙ　　Ｊ、Ｐ、　　ａｎｄ　　Ｌｅｎｇ
ｙｅｌ　　Ｐ、　　（１９８０）　　Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５５．　９８０７−９８１３゜
−Ｓａｍａｎｔａ　Ｈ，、Ｐｒａｖｔｃｈｅｖａ　Ｄ、
Ｄ、、　Ｒｕｄｄｌｅ　Ｆ、Ｈ，ａｎｄ　Ｌｅｎｇｙｅ
ｌＰ、　　（１９８４）　Ｊ、　　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎ　Ｒｅｓ、　　４．２９５−３００゜−５ａｕｎｄｃ
ｒｓ　Ｈ，Ｅ、　ａｎｄ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　Ｂ、Ｒ，
Ｇ、　　（１９８４）　ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓ、　
　八Ｂ５ＴＲＮｏ　　３．　　ｐ、　　６０゜−Ｓｃｈ
ａｍｂｏｅｃｋ　　Ａ、、　　Ｋｏｒｍａｎ　　八、Ｊ
、、　　にａｍｂ　　八、　　ａｎｄ　　Ｓｔｒｏｍｉ
ｎｇｅｒ　　Ｊ。

Ｌ、　　（１９８３）　ＮＵＣｌ、　　ＡＣｉｄＳ　Ｒ
ｃｓ、　　１１．８６（ｉ３−８６７５゜−５ｃｈａｔ
ｔｎｅｒ　　／１’＋　　Ｈｃｒｌｉｎ　　ｃ’＋　　
ＷａｌｌａＣＩＩ　　Ｄ、、　　Ｒｏｓｃｎｂｃｒｇ　
　Ｉｌ、。

Ｂｉｎｏ　Ｔ、、　ｔｌａｈｎ　Ｔ、、　　１．ｃｖｉ
ｎ　Ｓ、、　　１ｌｃｖｃｌ　Ｈ，（１９８１ａ）　Ｍ
ｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｔｈ
ｅｒａｐｙ　ＩＩＶ　ａｓＦｉａｙＯｆ　２’５’　ｏ
ｌｉｇｏｉｓｏａｄｃｎｙｌａ−ｊｅ　５ｙｎｔｈｅｔ
ａｓｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｗ
ｌｌｆＩＯｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ。

Ｊ、　　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ、　　１．　５
８７−５＜１４゜−５ｃｈａｔｔｎｅｒ　Ａ６．　Ｗａ
ｌｌａｃｈ　Ｄ、、　Ｈｃｒｌｌｎ　Ｇ６．　ｌ１ａｌ
ｌｎ　Ｔ、　、　　１．ｃｖｉｎＳ、、　　Ｒｅｖｅｌ
　　Ｈ，（１９８１１））　　八５Ｓａｙ　ｏｆ　　ａ
ｌｌ　　ｆｎｌｅｒｒｏｒｏｎ−ｆｎｄｌｌｃ＋ｉ（１
ｅｎＺｙｍｅ　！ｎ　ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌ
ｌｓ　ａｓ　ａ　ｄｉａｇｎｏｓｔ’ｉｃ　ａｉｄ　１
ｎｖｉｒａｌ　ｄｉｓｅａｓｅｓ、　　Ｌａｎｃｅｔ　
２．４り７−５００゜−５ｃｈａｔｔｎｅｒ　　八、、
　　Ｈｃｒｌｉｎ　　Ｇ、、　　５ｈａｐｉｒａ　　＾
、、　　Ｒｅｖｅｌ　　Ｈ，、ＷａｌｌａｃｈＤ、　　
（１９８２ａ）　　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　　ｏｒ　　
（２°−５°）　　（ｌｌｉｇｏａｄｃｎｙｌａｔｅ　
　５ｙｎ−ｔｈｅｓｅ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
　８１００（Ｔ−１，０ＶＯＩＳ　ｉｎ　Ｎ１ｃｅ　ｅ
ａｒｌｙａｆｔｅｒ　　ｖｉｒａｌ　　Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎ、　　Ｊ　　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　　ｌ１ｅｓ　
　２：２８５−２８９゜−５ｃｈａｔｔｎｅｒ＾、、　
Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、、　Ｈｃｒｌｉｎ　Ｇ、、　ｌ１
ａｈｎ　Ｔ、、　　１．ｃｖｉｎＳ、、　　Ｒａｍｏｔ
　Ｂ、、　　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８２ｂ）、　Ｖａ
ｒｉａｔｉｏｎｓ　ｏｒ　（２°−５゛）ｏｌｉｇｏ＾
５ｙｎｔｈｅｔａｓｅ　１ｅｖｅｌ　　ｉｎ　Ｉｙｍｐ
ｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｇｒａｎｕ−ｌｏｃｙｔｅｓ
　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｖｉｔ’ａｌ　
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　１ｃｕ−ｋｅｌｌｌｆ
ａ、　　Ｊ、　　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ、　　
２．　３５５−３６１、−５ｃｈａｔｔｎｅｒ　Ａ、、
　Ｈｅｒｌｉｎ　Ｇ、、　ＢｒｅｇＩＩｌａｎ　Ｕ、、
　ｌ１ａｈｎ　Ｔ、、　Ｌｅｖｉｎ−１２／ｌ　　　− ８，、Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，、Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、　　（
１９８４）、　　（２°−５°）　ｏｌｉｇｏ　Ａｓｙ
ｎｔｈｅｔａｓｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｏｌｙｍｏｒ
ｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ　１ｎｃｒｅａｓｅ
ｄａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　１ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｔ
ｒｅａｔｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｒａｌ　１ｎｆ
ｅｃ−ｔｉｏｎｓ、　Ｃｌ１ｎ、Ｅｘｐ、Ｉｍｍｕｎｏ
！、　５１．２６５−２７０゜−５ｃｈｏｅｎｆｅｌｄ
　Ａ、、　Ｎ１ｔｋｅ　Ｓ、、　５ｃｈａｔｔｎｅｒ＾
、、　Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、。

Ｃｒｅｓｐｉ　Ｈ，、１ｌａｈｎ　Ｔ、、　　Ｌｅｖａ
ｖｉ　Ｈ，、０ｖａｄｉａ　Ｊ、、　Ｓｈｏｈａｍ　Ｊ
、。

Ｄｏｅｒｎｃｒ　　丁１．　　Ｒｅｖｅｌ　　Ｎ、　　
（１９８４）、　　Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ　　ｈ
ｕｍａｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β１ｉｎｊｅｃｔｉｏ
ｎｓ　ｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｏｎｄｙｌ
ｏｍａｔｅａｃｕｍｉｎａｔａ、　　Ｌａｎｃｅｔ　ｉ
、　　１０３８−１０４２゜−５ｃｈｏｅｎｆｅｌｄ　
Ａ、、　　０ｖａｄｉａ　Ｊ、、　　Ｌｅｖａｖｉ　Ｃ
，、Ｎ１ｔｋｅ　Ｓ、、　ＷａｌｌａｃｈＤ、、　５ｃ
ｈａｔｔｎｅｒ＾、、　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８５）
、　　Ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ　ｖｉｒａ
ｌ　　１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｐｒｅｇｎａｎｃ
ｙ　ｂｙ　ａｓｓａｙ　ｏｆ　（２’−５′）ｏｌｉｇ
ｏａｄｅｎｙｌａｔｅ　５ｙｎｔｈｅｔａｓｅ、　Ｅａ
ｒｌｙ　Ｈｕｍａｎ　Ｄｅｖｅｌｏｐ、　１０゜２７９
−２８６゜ −５Ｃｈｌｌｌｉｄｔ＾、、　Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ
　Ａ、、　Ｓｈｕｌｍａｎ　Ｌ、、　　Ｆｅｄｅｒｍａ
ｎ　Ｐ、。

Ｂｅｒｉｓｓｉ　Ｉｌ、　ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（
１９７８）　Ｆ［ＢＳ　Ｌｅｔｔ、　２５．２５１−２
６４゜−Ｓｈｕｌｍａｎ　Ｌ、Ｈ，、Ｂａｒｋｅｒ　Ｐ
、Ｅ、、　Ｄａｒｔ　Ｊ、Ｔ、、　　Ｈｅ５ｓｅｒ　Ｐ
ｅｔｅｒＰ、Ｇ、　　ａｎｄ　Ｒｕｄｄｌｅ　Ｆ、Ｈ，
（１９８４）、　　Ｓｏｍａｔｉｃ　Ｃｅ１ｌ　Ｈｏ１
．Ｇｅｎｅｔ。

１０、　２４７−２５１゜ −５ｈｕｌＩｌｌａｎ　Ｌ、　ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ
，（１９８０）、　Ｎａｔｕｒｅ　２８７：９８−１０
０゜−５ｔａｒｋ　Ｇ、、　Ｄｏｗｅｒ　Ｗ、Ｊ、、　
ＳＣｈｉｍｋｌ−Ｒ，Ｔ、、　Ｂｒｏｗｎ　Ｒ，Ｅ、ａ
ｎｄＫｅｒｒ　１．Ｈ，（１９７９）　Ｎａｔｕｒｅ　
２７４　：　　４７１−４７３゜−５ｐｉｒｅｒ　Ｚ、
、　Ｚａｋｕｔ　Ｒ，、Ｂｏｇａｉｒ　Ｎ、、　Ｆｒ１
ｄｋｉｎ　Ｈ，（１９７７）。

Ｅｕｒ　Ｊ　　Ｉｍｍｕｎｏｌ　　７：６９−７４゜−
５ｔＬａｕｒｅｎｔ　Ｇ、、　Ｙｏｓｈｉｃ　Ｏ，、Ｆ
ｌｏｙｄ−３ｍｉｔｈ　Ｇ、、　Ｓａｍａｎｔａ　Ｉｆ
、。

５ｅｈｏａｌ　Ｐ、　ａｎｄ　Ｌｃｎａｙｃｌ　Ｐ、　
　（１９８３）　Ｃｅ１ｌ　３３．９５−１０２゜−５
ｔｒａｃｈａｎ　Ｔ、、　５ｏｄｏｙｅｒ　Ｒ，、Ｄａ
ｍｏｔｔｅ　Ｈ，ａｎｄ　Ｊｏｒｄａｎ　Ｂ、Ｒ。

（１９８４）、　　ＥＨＢＯＪ、　　３：　８７７−８
９４゜−Ｔｈｏｍａｓ　（１９８０）、　ｐｒｏｃ、　
Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７７：　５
２０１−５２０５゜−Ｔｒｉｆｏｎｏｖ、　　Ｅ、Ｎ、
　　（１９８４）　Ｃｏｄａｔａ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ　
５６．２１−２６゜−Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、ａｎｄ　Ｒ
ｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８０）　Ｎａｔｕｒｅ　２８７．
　６８−７０゜−Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、、　　Ｆｅ１ｌ
ｏｕｓ　Ｈ，ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９８２）、
　Ｎａｔｕｒｅ２９９：　　８３３−８３６゜ −Ｗａｌｌａｃｈ　Ｄ、、　５ｃｈａｔｔｎｅｒ＾、、
　Ｈｃｒｌｉｎ　Ｇ、、　Ｋｉｎｃｈｉ　Ａ、。

Ｆｅ１ｌｏｕｓ　Ｈ，ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ　Ｈ，（１９
８２）　　ｉｎ　Ｈｅｒｉｇａｎ、　Ｔ、Ｃ，。

Ｆｒｉｅｄｍａｎ、　　Ｒ，Ｈ，（ｃｄｓ）　　Ｉｎｔ
ｅｒｆｅｒｏｎｓ、　　ＩＩＣＬＡ　　Ｓｙｍｐｏｓｉ
ａ　　Ｖｏｌ。

ＸＸＶ、　Ａｃａｄ、　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｗｏｒ
ｋ、　　ｐｐ　４４９−４６３゜−ＷａｌｌａＣｈ　　
ロ、、　＾ｄｅｒｋａ　　ロ、、　　Ｂｕｄｉｌｏｖｓ
ｋｙ　　Ｓ、　　ａｎｄ　　Ｈａｈｎ　　Ｔ。

（１９８３）　ｉｎ　ＤｅＨａｅｙｃｒ、　Ｅ、、　５
ｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ、　Ｈ，（ｅｄｓ）　ＴｈｅＢｉ
ｏｌｏｏｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｓ
ｙｓｔｅｍ、　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉ、Ｐｕｂｌ、
。

Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、　　ｐｐ　２９３−３０３゜−Ｗ
ｅｉｌ　Ｊ、、　Ｅｐｓｔｅｉｎ　Ｃ，Ｊ、、　Ｅｐｓ
ｔｅｉｎ　Ｌ、Ｂ、、　５ｅｄｎａｋ　Ｊｊ、。

５ａｂｒａｎ　Ｊ、Ｌ、、　Ｇｒｏｓｓｂｅｒｇ　Ｓ、
Ｅ、　　（１９８３）　Ｎａｔｕｒｅ　３０１．４３７
−４３９゜−Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ　Ｊ、、　Ｚｅｅ
ｖｉ　Ｈ，、Ｌａｎｄａｕ　Ｔ、　ａｎｄ　Ｒｅｖｅｌ
　Ｈ。

（１９７９）、　　Ｅｕｒ、　　Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　
９８：　１−８゜−Ｈｅ１ｌｓ　Ｖ、　ａｎｄ　Ｈａｌ
ｌｕｃｃｉ　Ｌ、　（１９８５）　Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｉ
ｏｌ、、　ｉｎ　ｐｒｅｓｓ。

−Ｗｉｇｌｅｒ　Ｈｌ、　Ｓｗｅｅｔ　Ｒ，、Ｓｉｍ　
Ｇ、に、、　、Ｗｏｌｄ　Ｂ、＋　Ｐｅ１ｌｉｃｅｒ＾
、。

Ｌａｃｙ　Ｅ、、　Ｈａｎｉａｔｉｓ　Ｔ、、　５ｉｌ
ｖｅｒｓｔｅｉｎ　Ｓ、　ａｎｄ　Ａｘｅｌ　Ｒ，（１
９７９）Ｃｅｌｌ　１６．　７７７−７８５゜ −Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ＢＲＧ　ａｎｄ　Ｒｅａｄ　ＳＥ
　（１９８１）、　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｌｅ
ｖａｔｅｄｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ、　２−５５
ｙｎｔｈｅｔａｓｅ。

ｉｎ　１ｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ
　ｉｎ　ｐｕｒｔｕｒｉｔｉｏｎ、　Ｉｎ　ＤｅＨａｅ
ｙｅｒＥ、、Ｇａ１ａｓｓｏ　Ｇ、、５ｃｈｅｌｌｅｋ
ｅｎｓ　Ｈ、（ｅｄｓ）：　　’ゴｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ　ｏｆｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ
−Ｅｌｓｅｖｉｅｒ／Ｎｏｒｔｈ　Ｈｏ１ｌａｎｄ　Ｂ
ｉｏｍｅ−ｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ、　　ｐｐ　１１１
−１１４゜−ｗｏ＋ｒ　　ロ、　　ａｎｄ　　Ｒｏｔｔ
ｅｒ　　Ｖ、　　（１９８５）　　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ
、Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、ｕＳ＾８２、　７９０−７９
４゜ −Ｙａｎｇに、、　Ｓａｎ＋ａｎｔａ　Ｉ＋、、　　Ｄ
ｏｕｇｈｃｒｔｙ　”１．＋　Ｖａｙａｒａｍ　Ｂ、、
　Ｂｒｏｅｚｅ　Ｒ。

ａｎｄ　Ｌｅｎｇｙｅｌ　Ｐ、　　（１９８１）　Ｊ、
Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　２５６．９３２４−９３２８
゜−Ｗａｒｄｅｎ　Ａ、、　５ｈｕｒｅ−Ｇｏｔｔｌｉ
ｅｂ　Ｉｔ　、、　Ｃ１１ｃｌ＋ａｔｈ　Ｊ、、　　Ｒ
ｅｖｅｌ　Ｈ，ａｎｄに１ｌｌｌｃｈｔ　Ａ、　（１９
８４）　ＥＨＢＯＪ、　３．９（ｉ９−９７３゜−Ｚｉ
ｌｂｅｒｓｔｅｉｎ　　Ａ、、　　にｉｍｃｈｉ、　　
Ａ、　　Ｓｃｈｍｉｄｔ　　Ａ、　　ａｎｄ　　Ｒｅｖ
ｅｌ　　Ｈ。

（１９７８）　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃ
　ｉ　、　ＬＩＳ＾７５．４７３４−４７３８゜−Ｚｉ
ｎｎ　Ｋ、、　ＤｉＨａｉｏ　Ｄ、　ａｎｄ　Ｈａｎｉ
ａｔｉｓ　Ｔ、　（１９８３）　Ｃｅ１ｌ　３４゜８６
５−８７９゜

【図面の簡単な説明】

第１図は、（２’−５′）オリゴＡ合成酵素Ｅ１ｃＤＮ
Ａクローン１７４−３の構造と配列を示す。 第２図は、５Ｖ８０及びＮａ１ａｌＶａ細胞中のＦ１特
異性ｍＲＮＡの大きざ及び誘導を示す。 第３図は、ＩＦＮ−誘導ｍＲＮＡのための保有ｃＤＮＡ
の、組換えプラスミドクローンＣ５６のＲＮＡのプロッ
トとハイブリッドを形成することによる、特性決定を示
す。 第４図は、部分的制限地図及び挿入Ｃ５６４５０ｂｐの
ヌクレオチド配列を示す。 第５図は、ＩＦＮによるＣ５６ｍＲＮＡの誘導の時間経
過を示す。 第６Ａ図及び第６Ｂ図は、それぞれ、１．６にｂ及び１
．８にｂのｃＤＮＡの地図である。 第７Ａ図及び第７Ｂ図は、それぞれ、１．６にｂｌ、８
にｂに対するｃＤＮＡの塩基配列を示す。 第８図は、２個の（２’−５′）オリゴＡ合成酵素のＣ
−末端のバイトロバシープロットを示し、ている。 第９図は、ヒト（２’−５′）オリゴ合成酵素遺伝子の
制限地図を示している。 第１０図は、ヒト（２’−５’＞Ｊリゴ合成酵素遺伝子
のプロモーター領域を示している。 第１１図は、と１〜（２’−５’　）オリゴＡシンテタ
ーゼプロモーター領域の塩基配列を示している。 第１２図は、（２’−５′）７１リゴＡ合成酵素の免疫
沈降反応を示している。 １１３図は、［、Ｃ０Ｉｉに（１３ｃ〕るＥ１６ｃＤＮ
△の発現を示している。 第１４図はヒ１へ末梢白面球中の（２′−５′）オリゴ
ＡシンテターゼＲＮＡの迅速なアッセイ法を示している
。 第１５図は、ヒトＰＢＭＣの（２’−５′）オリゴシン
テターゼＥＲＮ△に対するに苅り−るクイックセルプロ
ットを示している。 第１６図は、抗ベプヂド抗原による（２′＝５′）へ合
成酵素活性の特屓免疫沈降反応を示している。 第１７図は、ヒト細胞とサブフラクションにおける（２
’−５′）Ａ合成酵素の異型を示している。 第１８図は、５Ｖ８０細胞中の（２’−５′）へ合成酵
素の開型を示している。 第１９図は、２’−５’Ａ合成酵素の４型の分析と細胞
内の位置を示している。 第２０図は、Ｓ■８０由来の（２′−５′）オリゴＡシ
ンテターゼの開型の二重螺線ＲＮＡ要求性を示している
。 第２１図は（２’−５′）オリゴＡシンテターゼのラジ
オインミュノアツセイを示している。 第２２図は末梢血液単核細胞と抗０ＡＳＥ血清の免疫抗
体蛍光染色によるウィルス性疾患の診断を示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）オリゴＡ合成酵素活性をもつ酵素をコードするヒ
   トＤＮＡ配列。 （２）第７Ａ図に示されたアミノ酸配列をもつ酵素をコ
   ードする特許請求の範囲第１項記載のヒトＤＮＡ配列。 （３）第７Ｂ図に示されたアミノ酸配列をもつ酵素をコ
   ードする特許請求の範囲第１項記載のヒトＤＮＡ配列。 （４）特許請求の範囲第２項及び第３項記載のアミノ酸
   配列に共通するＣ末端ヘプタデカペプチドから成る酵素
   である特許請求の範囲第１項記載のヒトＤＮＡ配列。 （５）第９図に示された制限地図をを示す特許請求の範
   囲第１項記載のヒトＤＮＡ配列。 （６）１．６ｋｂのｍＲＮＡに相補的な第７Ａ図に示さ
   れた（２′−５′）オリゴＡ合成酵素 ｃＤＮＡの配列。 （７）１．８ｋｂのｍＲＮＡに相補的な第７Ｂ図に示さ
   れた（２′−５′）オリゴＡ合成酵素 ｃＤＮＡの配列。 （８）特許請求の範囲第１項から第５項のいずれかに記
   載のＤＮＡ配列のプロモーターを特徴とするＤＮＡ配列
   。 （９）第１０図に示された制限地図をもつ特許請求の範
   囲第８項に記載のＤＮＡ配列。 （１０）第１１図に示されたＤＮＡ配列をもつ特許請求
   の範囲記載のＤＮＡ配列。 （１１）第７Ａ図に示されたヌクレオチド配列に相補的
   なヌクレオチド配列をもつ１．６ｋｂのＲＮＡ。 （１２）第７Ａ図に示されたヌクレオチド１−１３２２
   及び第７Ｂ図に示されたヌクレオチド９０１−１５９０
   に相補的なヌクレオチド配列を特徴とする１．８ｋｂの
   ＲＮＡ。 （１３）特許請求の範囲第６項記載ｃＤＮＡ配列から本
   質的に成る挿入ＤＮＡ配列を特徴とするＤＮＡ転移ベク
   ター。 （１４）挿入ｃＤＮＡ配列がコード配列発現に適切なラ
   クトＺ遺伝子をもつ相に癒合されたλｇｔ１１−Ｅ１６
   である特許請求の範囲第１３項記載のＤＮＡ転移ベクタ
   ー。 （１５）本質的に特許請求の範囲第７項記載のｃＤＮＡ
   配列からなる挿入ＤＮＡ配列を特徴とするＤＮＡ転移ベ
   クター。 （１６）特許請求の範囲第１３項から第１５項のいずれ
   かに記載の発現ベクターにより形質転換された微生物。 （１７）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉである特許
   請求の範囲第１６項記載の微生物。 （１８）（２′−５′）オリゴＡ合成酵素活性及び第７
   Ａ図に示されたアミノ酸配列をもつ酵素。 （１９）第７Ａ図に示されたアミノ酸１−３６４の配列
   及び第７Ｂ図に示されたアミノ酸２９０−４００の配列
   を特徴とする（２′−５′）オリゴＡ合成酵素活性をも
   つ酵素。 （２０）約３６４のアミノ酸を特徴とし、約４１，５０
   ０ダルトンの分子量をもつ特許請求の範囲第１８項記載
   の酵素。 （２１）約４００のアミノ酸を特徴とし、約４６，００
   ０ダルトンの分子量をもつ特許請求の範囲第１９項記載
   の酵素。 （２２）相補的なＤＮＡをｍＲＮＡに交雑することによ
   り患者の細胞あるいは体液中の（２′−５′）オリゴＡ
   合成酵素ｍＲＮＡの濃度を測定することを特徴とする、
   インターフェロンへの患者の反応をモニターする方法。 （２３）ｍＲＮＡが特許請求の範囲第１１項記載の１．
   ６ｋｂのＲＮＡである、特許請求の範囲第２２項記載の
   方法。 （２４）ｍＲＮＡが特許請求の範囲第１２項記載の１．
   ８ｋｂのＲＮＡである、特許請求の範囲第２２項記載の
   方法。 （２５）ＲＮＡに相補的なｃＤＮＡをもつインターフェ
   ロンの攻撃にさらされた細胞あるいは組織から交雑され
   ているＲＮＡを特徴とするインターフェロンへの細胞及
   び組織の反応を評価する方法及び交雑の程度を決定する
   方法。 （２６）そのＲＮＡはインターフェロンの攻撃にさらさ
   れた細胞あるいは組織から抽出され、メンブランフィル
   ター上で不動にされ、インターフェロン誘起ｍＲＮＡ用
   に特に標識されたｃＤＮＡに交雑される、特許請求の範
   囲第２５項記載の方法。 （２７）組織切片へその場所での標識ｃＤＮＡの交雑と
   オートラジオグラフィの顕微鏡検査あるいは蛍光検査に
   よる評価を特徴とする、特許請求の範囲第２５項記載の
   方法。 （２８）細胞あるいは組織はヒト由来である特許請求の
   範囲第２５項記載の方法。 （２９）第７Ａ図あるいは第７Ｂ図に示された配列に相
   補的なｃＤＮＡ、デオキシリボヌクレアーゼ I 及び［
   ＾３＾２Ｐ］−γ−ｄＣＴＰとのニックトランスレーシ
   ョン用の交雑試験を実施する試薬、ニトロセルロース膜
   上での交雑用試薬及び細胞からＲＮＡ抽出用の試薬を含
   有する、特許請求の範囲第２５項記載の方法を実施する
   キット。 （３０）第７Ａ図に示されたアミノ酸配列の内部に含ま
   れているアミノ酸配列をもつ抗原性ペプチド。 （３１）第７Ａ図に示されたアミノ酸１−３６４の配列
   及び第７Ｂ図に示されたアミノ酸２９０−４００の配列
   の内部に含まれるアミノ酸配列をもつ抗原性ペプチド。 （３２）第７Ａ図に示されたアミノ酸の１７Ｃ−末端ア
   ミノ酸を特徴とするアミノ酸配列をもち、次のアミノ酸
   をもつ、特許請求の範囲第３０項記載の抗原性ペプチド
   。 【アミノ酸配列があります】 （３３）次のアミノ酸配列をもつ、特許請求の範囲第３
   ０項記載の抗原性ペプチド。 【アミノ酸配列があります】 （３４）（２′−５′）オリゴＡ合成酵素を認識し免疫
   沈降反応を起こす、特許請求の範囲第３０項記載の抗原
   性ペプチドに対して生じた抗体。 （３５）（２′−５′）オリゴＡ合成酵素を認識し免疫
   沈降反応を起こす、特許請求の範囲第３１項記載の抗原
   性ペプチドに対して生じた抗体。 （３６）（２′−５′）オリゴＡ合成酵素の４つの型、
   ４０ＫＤ、４６ＫＤ、６７ＫＤ及び１００ＫＤのすべて
   に対する特許請求の範囲第３４項あるいは第３５項記載
   のいずれかの抗体。 （３７）ペプチドＢで動物を免疫することにより得られ
   た該抗体である、特許請求の範囲第３６項記載の抗体。 （３８）その標識が蛍光体標識である、特許請求の範囲
   第３６項記載の抗体。 （３９）その標識が蛍光体標識である、特許請求の範囲
   第３８項記載の抗体。 （４０）その標識が放射活性標識である、特許請求の範
   囲第３８項記載の抗体。 （４１）その標識が酵素である、特許請求の範囲第３８
   項記載の構体。 （４２）特許請求の範囲第３８項記載の標識抗体をもつ
   細胞を培養し、該標識により、該型の（２′−５′）オ
   リゴＡ合成酵素活性をもつ細胞を検知することを特徴と
   する細胞の中の（２′−５′）オリゴＡ合成酵素の４０
   ＫＤ、４６ＫＤ、６７ＫＤ及び１００ＫＤの型の検査法
   。 （４３）その分析が蛍光免疫検査法である、特許請求の
   範囲第４２項記載の検査法。 （４４）その分析は放射線免疫検定法である、特許請求
   の範囲第４２項記載の検査法。 （４５）酵素の分析が免疫検査法でなされる、特許請求
   の範囲第４２項記載の検査法。 （４６）その細胞が単核血液細胞である、特許請求の範
   囲第４２項記載の検査法。 （４７）特許請求の範囲第３８項記載の抗体を特徴とす
   る細胞中の（２′，５′）オリゴＡ合成酵素の４つの型
   すべての検出用キット。 （４８）高純度状態の６７ＫＤ型（２′−５′）オリゴ
   Ａ合成酵素蛋白。 （４９）高純度状態の１００ＫＤ型（２′−５′）オリ
   ゴＡ合成酵素蛋白。 （５０）他の３つの型と交叉反応しない（２′−５′）
   オリゴＡ合成酵素の４０ＫＤ、４６ＫＤ、６７ＫＤ及び
   １００ＫＤのいずれかに対する抗体。 （５１）予め定められた間隔で、被験者の細胞あるいは
   体液中の（２′−５′）オリゴＡ合成酵素量を測定し、
   相異する時間間隔以内での被験者の細胞あるいは体液中
   の該合成酵素量における相異を決定し、それから被験者
   の細胞あるいは体液中の合成酵素量を、またそれによっ
   て被験者のインターフェロン活性を測定することを特徴
   とする、被験者中のインターフェロン活性をモニターす
   る方法。 （５２）その合成酵素量が、それと共に複合体を生成す
   るように、特許請求の範囲第３４項記載の抗体と合成酵
   素を接触させることにより、またそのように生成された
   複合体の量を決定することによって測定される、特許請
   求の範囲第５１項記載の方法。 （５３）さらに、インターフェロンの攻撃にさらされた
   細胞あるいは体液から（２′−５′）オリゴＡ合成酵素
   の抽出、標識合成酵素を生成するために抽出酵素を確認
   し得る標識で標識すること、標識−合成酵素−抗体複合
   体を生成するように適切な条件下で標識合成酵素を抗体
   と接触させること、複合体中の標識を検出すること及び
   それによって合成酵素を検出することを特徴とする、特
   許請求の範囲第５２項記載の方法。 （５４）その標識が＾３＾５Ｓ−メチオニンである、特
   許請求の範囲第５３項記載の方法。 （５５）特許請求の範囲第３４項あるいは第３５項記載
   の抗体、合成酵素を抽出する物質、合成酵素を標識する
   物質、及び標識を検出する物質並びに合成酵素量を測定
   することを特徴とする、特許請求の範囲第５３項記載の
   方法を実施するためのキット。 （５６）インターフェロンの攻撃にさらされた後、ヒト
   の細胞にあらわれるメッセンジャーＲＮＡに特異的に交
   雑するクローンＤＮＡ。 （５１）３．６、１．８及び１．６ｋｂの（２′−５′
   ）オリゴＡ合成酵素ｍＲＮＡに特異的な、特許請求の範
   囲第５６項記載のクローンｃＤＮＡ。 （５８）２ｋｂであり、第１図に示されたヌクレオチド
   配列をもつ、５６，０００Ｍｒ−蛋白質のｍＲＮＡに特
   異的な、特許請求の範囲第５６項記載のクローンＤＮＡ
   。