JP2002543761A

JP2002543761A - 結核症抗原およびそのための使用の方法

Info

Publication number: JP2002543761A
Application number: JP2000605620A
Authority: JP
Inventors: ロナルドシー．ヘンドリックソン，; マイケルジェイ．ロデス，; レイモンドエル．ホートン，
Original assignee: コリクサコーポレイション
Priority date: 1999-03-18
Filing date: 2000-03-17
Publication date: 2002-12-24
Also published as: US20030027774A1; WO2000055194A2; BR0009077A; CA2364670A1; EP1169342A2; ZA200107602B; MXPA01009383A; AU4014700A; WO2000055194A9; WO2000055194A3

Abstract

(57)【要約】結核の診断および処置のための化合物および方法が開示される。化合物としては、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原Ｍｔｂ−８１およびＭｔｂ−６７．２、その免疫原性部分およびそのような部分をコードするポリヌクレオチドが挙げられる。そのような組成物は、例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の免疫治療および血清診断のために使用され得る。本発明は、Ｍｔｂ−８１の免疫原性部分、またはその改変体を含む、単離されたポリペプチドであって、その改変体は、Ｍｔｂ−８１特異的抗血清またはＴ細胞と反応する改変体の能力が実質的に減少されるような、一つ以上の置換、付加、挿入および／または欠失において異なる、ポリペプチドを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、一般に、結核の検出および処置に関する。本発明は、より詳細には
、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、またはその部
分もしくは他の改変体の少なくとも一部を含むポリペプチド、およびＭ．ｔｕｂ
ｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の血清診断および免疫治療のためのこのようなポリペプ
チドの使用に関する。

【０００２】（発明の背景）結核は、慢性の、感染性疾患であり、一般にＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔ
ｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの感染により生じる。結核は発展途上国で主要な疾患で
あり、そして世界中の先進地域で問題が増大しており、毎年約８百万人が新たに
発病し、そして３百万人が死亡する。感染はかなりの期間無症候性であり得るが
、この疾患は、最も一般的には、発熱および痰を伴わない咳を生じる肺の急性炎
症として発現する。処置しないでおくと、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染は
、一般には、重篤な合併症および死をもたらす。

【０００３】結核の蔓延を防止するためには、疾患の正確な初期診断が必要である。最も一
般的な診断方法は、皮膚テストである。皮膚テストは、ツベルクリンＰＰＤ（精
製されたタンパク質の誘導体）に対する皮内曝露を含む。抗原特異的Ｔ細胞応答
は、注射後４８〜７２時間で注射部位に測定可能な硬結（ｉｎｄｕｂａｔｉｏｎ
）を生じ、これはマイコバクテリア抗原への曝露を示す。しかし、このツベルク
リンテストは、世界中で用いられているが、その感受性および特異性については
問題がある。例えば、カルメット‐ゲラン杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＣａｌｍｅ
ｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）でワクチン接種された個体は感染した個体と区
別され得ない。さらに、結核は、ＡＩＤＳ患者がしばしば発症するが、結核皮膚
テストの感受性は、ＨＩＶ感染の間低下する。

【０００４】従って、当該分野において結核感染、特にＨＩＶ感染個体における結核感染を
検出するための改善された診断方法についての必要性が存在する。本発明は、こ
れらの必要性を満たし、そしてさらに他の関連する利点を提供する。

【０００５】（発明の要旨）簡潔に述べると、本発明は結核を診断および治療するための組成物および方法
を提供する。特定の局面において、単離されたポリぺプチドが開示され、このポ
リぺプチドは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原（本明細書中でＭｔｂ−８１
またはＭｔｂ−６７．２と呼ばれる）の一方または両方の免疫原性部分を含む。
あるいは、このようなポリぺプチドは、抗原特異的抗血清と反応する改変体の能
力を実質的に減少しないような、１つ以上の置換、欠失、付加および／または挿
入において異なるいずれかの抗原の改変体を含み得る。特定の実施形態において
、ポリぺプチドは、図１Ａ〜１Ｆ（配列番号２）または図５（配列番号５）に記
載されるアミノ酸配列を含む。公知のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原と組合
せてこのようなポリぺプチドを含む融合タンパク質がまた、提供される。

【０００６】Ｍｔｂ−８１ポリぺプチドまたはＭｔｂ−６７．２ポリぺプチドの全てまたは
一部をコードするポリヌクレオチドもまた提供され、図１Ａ〜１Ｆ（配列番号１
）または図４（配列番号４）に記載される配列に相補的な少なくとも１５の連続
したヌクレオチドを含むアンチセンスポリヌクレオチドも提供される。このよう
なポリヌクレオチドを含む組換え発現ベクター、およびこのようなポリヌクレオ
チドで形質転換されたかまたはトランスフェクトされた宿主細胞もまた、提供さ
れる。

【０００７】さらなる局面では、本発明は、抗体、およびその抗原結合フラグメント（これ
らはＭｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に特異的に結合する）を提供する。こ
のような抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。

【０００８】特定の局面において、本発明は、生物学的サンプル中のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌ
ｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決定するための方法を提供する。特定のこの
ような方法は、以下の工程：（ａ）生物学的サンプルを上記ポリペプチドまたは
このようなポリぺプチドを発現する抗原提示細胞と接触させる工程；（ｂ）この
サンプルにおいて、生物学的サンプル中のポリぺプチドと抗体との間に形成され
る免疫複合体の量を検出する工程；および（ｃ）ポリぺプチドの量をカットオフ
値と比較する工程、を包含する。生物学的サンプルとしては、全血、血清、痰、
血漿、唾液、脳脊髄液および尿が挙げられるが、これらに限定されない。

【０００９】他の方法は、以下の工程：（ａ）Ｔ細胞を含む生物学的サンプルを、上記のよ
うな単離されたポリぺプチドと接触させる工程；（ｂ）このサンプルにおいて、
ポリぺプチドと特異的に反応するＴ細胞の量を検出する工程；および（ｃ）検出
されたＴ細胞の量をカットオフ値と比較する工程、を包含する。

【００１０】なおさらなる方法は、以下の工程：（ａ）生物学的サンプルにおいて、上記の
ようなポリぺプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出する工程；および（ｂ）検
出されたポリヌクレオチドの量をカットオフ値と比較する工程、を包含する。特
定の実施形態では、ｍＲＮＡの量は、例えば、上記のポリぺプチドをコードする
ポリヌクレオチドにハイブリダイズする少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプ
ライマー、またはこのようなポリヌクレオチドの相補体を使用して、ポリメラー
ゼ連鎖反応を介して検出される。他の実施形態では、ｍＲＮＡの量は、ハイブリ
ダイゼーション技術を用いて検出され、この技術は、上記のようなポリぺプチド
をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプロー
ブ、またはこのようなポリヌクレオチドの相補体を利用する。

【００１１】他のこのような方法は、以下の工程：（ａ）生物学的サンプルを、上記のよう
な抗体または抗原結合フラグメントと接触させる工程；および（ｂ）サンプル中
において、抗体またはその抗原結合フラグメントと生物学的サンプル中のタンパ
ク質との間で形成される免疫複合体の量を検出する工程、を包含する。このよう
な免疫複合体は、例えば、ＥＬＩＳＡまたは競合アッセイを使用して検出され得
る。

【００１２】関連する局面では、本発明は、患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感
染の存在または非存在を決定するための方法を提供する。このような方法は、一
般的に、患者から得られた生物学的サンプルを用いて、生物学的サンプル中のＭ
．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決定するための上記で提
供される方法のいずれかを使用して実施され得る。

【００１３】関連する局面では、患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染について
の治療をモニタリングする方法が提供される。特定の方法は、以下の工程：（ａ
）第１の時点で、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染した患者から得られた生
物学的サンプルを、上記のような単離されたポリぺプチドまたは抗原提示細胞と
接触させる工程；（ｂ）このポリぺプチドと、このポリぺプチドに特異的に結合
する、生物学的サンプル中の抗体との間で形成される免疫複合体の量を検出する
工程；（ｃ）第２の時点で得られた生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）お
よび（ｂ）を繰り返す工程であって、ここでこの第２の時点は、Ｍ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓ感染の治療の少なくとも一部の後である、工程；ならびに（ｄ）
工程（ａ）において検出された免疫複合体の量を、工程（ｃ）において検出され
た量と比較する工程、を包含する。

【００１４】他の局面では、患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの治療をモニタリ
ングするための方法は、以下の工程：（ａ）第１の時点でＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌ
ｏｓｉｓに感染した患者から得られた生物学的サンプルにおいて、上記のような
ポリぺプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出する工程；（ｂ）第２の時点でこ
の患者から得られた生物学的サンプル中のこのようなｍＲＮＡの量を検出する工
程であって、ここでこの第２の時点は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の治
療の少なくとも一部の後である、工程；ならびに（ｃ）工程（ａ）において検出
されたｍＲＮＡの量を工程（ｂ）において検出された量と比較する工程、を包含
する。

【００１５】他のこのような方法は、（ａ）第１の時点でＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに
感染した患者から得られた生物学的サンプルを、上記のような抗体または抗原結
合フラグメントと接触させる工程；（ｂ）このサンプルにおいて、抗体または抗
原結合フラグメントと生物学的サンプル中のタンパク質との間で形成される免疫
複合体の量を検出する工程；（ｃ）第２の時点で得られた生物学的サンプルを使
用して、工程（ａ）および（ｂ）を繰り返す工程であって、ここでこの第２の時
点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の治療の少なくとも一部の後である、
工程；ならびに（ｄ）工程（ａ）において検出された免疫複合体の量を工程（ｃ
）において検出された量と比較する工程、を包含する。

【００１６】上記の任意の方法のいずれかにおいて、患者は、ＨＩＶに感染していてもよい
。

【００１７】さらなる局面では、診断キットが提供される。このようなキットは、一般的に
、上記のようなポリぺプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体を含む。さらに、こ
のようなキットは、本明細書中に提供されるアッセイでの使用のための、検出試
薬または固体支持体材料を含み得る。

【００１８】本発明はさらに、他の局面において、薬学的組成物を提供し、この薬学的組成
物は、（ａ）上記のようなＭｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２ポリぺプチド；
このようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチド；このようなポリぺプチ
ドを発現する、抗原提示細胞；またはＭｔｂ−８１（配列番号２）もしくはＭｔ
ｂ−６７．２（配列番号５）に特異的に結合する、抗体もしくはその抗原結合フ
ラグメント；ならびに（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む。

【００１９】さらなる局面では、本発明は、ワクチンを提供し、このワクチンは、以下：（
ａ）上記のようなＭｔｂ−８１ポリぺプチドまたはＭｔｂ−６７．２ポリぺプチ
ド；このようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチド；またはこのような
ポリぺプチドを発現する抗原提示細胞；ならびに（ｂ）非特異的免疫応答エンハ
ンサー、を含む。

【００２０】他の局面において、患者における結核の発症を阻害するための方法がさらに提
供され、この方法は、患者に有効量の、以下：（ａ）上記のポリぺプチド、（ｂ
）このようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチド、（ｃ）ポリぺプチド
を発現する、抗原提示細胞、または（ｄ）Ｍｔｂ−８１（配列番号２）もしくは
Ｍｔｂ−６７．２（配列番号５）に特異的に結合する、抗体もしくはその抗原結
合フラグメント、を投与する工程を包含し、これにより患者において結核の発症
を阻害する。

【００２１】本発明はさらに、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に特異的なＴ細胞を刺
激および／または増殖させるための方法を提供し、この方法は、Ｔ細胞を１つ以
上の以下：（ｉ）上記のポリぺプチド；（ｉｉ）このようなポリぺプチドをコー
ドするポリヌクレオチド；および／または（ｉｉｉ）このようなポリぺプチドを
発現する抗原提示細胞と、Ｔ細胞の刺激および／または増殖を可能にするのに充
分な条件下でかつＴ細胞の刺激および／または増殖を可能にするのに充分な時間
、接触させる工程を包含する。このような方法により調製された単離されたＴ細
胞集団もまた提供され、患者における結核の発症を阻害するための方法もまた提
供され、この方法は、患者に有効量のこのようなＴ細胞集団を投与する工程を包
含する。

【００２２】関連する局面において、本発明は、患者における結核の発症を阻害するための
方法を提供し、この方法は、以下の工程：（ａ）１つ以上の以下：（ｉ）上記の
ようなポリぺプチド；（ｉｉ）このようなポリぺプチドをコードするポリヌクレ
オチド；または（ｉｉｉ）このようなポリぺプチドを発現する抗原提示細胞、を
用いて患者から単離されるＣＤ４⁺細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｔ細
胞が増殖するようにインキュベートする工程；ならびに（ｂ）患者に有効量の増
殖したＴ細胞を投与する工程であって、それにより患者における結核の発症を阻
害する工程を包含する。

【００２３】さらなる局面において、患者における結核の発症を阻害するための方法が提供
され、この方法は、以下：（ａ）１つ以上の以下：（ｉ）上記のようなポリぺプ
チド；（ｉｉ）このようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチド；または
（ｉｉｉ）このようなポリぺプチドを発現する抗原提示細胞を用いて患者から単
離されたＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｔ細胞が増殖するよ
うに、インキュベートする工程；（ｂ）増殖されたＴ細胞をクローニングする工
程；ならびに（ｃ）患者に有効量の増殖されたＴ細胞を投与し、そしてそれによ
り患者における結核の発症を阻害する工程を包含する。

【００２４】本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照
うして明らかになる。本明細書中に開示される全ての参考文献は、各々が個別に
援用されるように、その全体が参考として援用される。

【００２５】（発明の詳細な説明）上記のように、本発明は概して、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の診断お
よび治療のための化合物および方法に関する。本発明は、部分的に２つのＭ．ｔ
ｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原（Ｍｔｂ−８１およびＭｔｂ−６７．２）の発見に
基づく。本明細書中に提供される化合物は、Ｍｔｂ−８１ポリぺプチド（これは
、少なくともＭｔｂ−８１の免疫原性部分またはその改変体を含む）、およびＭ
ｔｂ−６７．２ポリぺプチド（これは、Ｍｔｂ−６７．２の少なくとも免疫原性
部分またはその改変体を含む）を含む。Ｍｔｂ−８１は、配列番号２および図２
に記載される配列を有する８１ｋＤのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原である
。Ｍｔｂ−６７．２は、配列番号５および図５に記載される配列を有する。この
ようなポリぺプチドの少なくとも一部をコードする核酸配列（またはこのような
核酸配列の相補体）もまた，提供される。本明細書中に提供される化合物はまた
、抗体のような結合剤（すなわち、免疫系タンパク質、またはその抗原結合フラ
グメント）を含む。Ｍｔｂ−８１およびＭｔ６７．２のポリぺプチド、ポリヌク
レオチドおよび抗体は、結核検出のための種々の血清診断方法において使用され
得、そしてＨＩＶに感染した患者において増大した感受性を提供し得る。このよ
うな化合物はまた、結核の免疫治療に使用され得る。

【００２６】（Ｍｔｂ−８１およびＭｔｂ−６７．２ポリヌクレオチド）本明細書中に記載されるような、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２ポリぺ
プチドをコードする任意のポリヌクレオチドは、本発明に含まれる。好ましいポ
リヌクレオチドは、少なくとも１０個の連続したヌクレオチド、好ましくは少な
くとも１５個の連続したヌクレオチド、そしてより好ましくは少なくとも３０個
の連続したヌクレオチドを含み、これは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２
の一部をコードする。特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、Ｍｔｂ−
８１またはＭｔｂ−６７．２の免疫原性部分をコードし得る。任意のこのような
配列に相補的な少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むポリヌクレオチ
ドはまた、本発明に含まれる。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアン
チセンス）または２本鎖であり得、そしてＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成
）分子またはＲＮＡ分子であり得る。さらなるコード配列または非コード配列は
、本発明のポリヌクレオチド内に存在し得るが、存在する必要はなく、そしてポ
リヌクレオチドは、他の分子および／または支持物質に連結され得るが、連結さ
れる必要はない。

【００２７】ポリヌクレオチドは、ネイティブの配列（すなわち、Ｍｔｂ−８１、Ｍｔｂ−
６７．２またはその部分をコードする内因性Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ配列
を含み得るか、またはこのような配列の改変体を含み得る。特定のポリヌクレオ
チド改変体は、コードされるポリぺプチドの免疫原性が、ネイティブのＭｔｂ−
８１またはＭｔｂ−６７．２と比較して低減されないような、１つ以上の置換、
付加、欠失および／または挿入を含み得る。コードされるポリぺプチドの免疫原
性に対する影響が、本明細書中に記載されるように一般的に評価され得る。改変
体は、Ｍｔｂ−８１、Ｍｔｂ−６７．２またはその部分をコードするネイティブ
ポリヌクレオチド配列に対して、好ましくは少なくとも約７０％の同一性、より
好ましくは少なくとも約８０％の同一性、そして最も好ましくは、少なくとも約
９０％の同一性を示す。同一性パーセントは、当業者に周知のコンピューターア
ルゴリズム（例えば、Ｍｅｇａｌｉｇｎ）を使用してデフォルトのパラメーター
を用いて、配列を比較することにより容易に決定され得る。特定の改変体は、ネ
イティブ遺伝子またはその部分もしくは相補体に実質的に相同である。このよう
なポリヌクレオチド改変体は、穏やかなストリンジェント条件下で、天然に存在
するＤＮＡ配列にハイブリダイズし得る。適切な穏やかなストリンジェント条件
は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液
での前洗浄工程；５０℃〜６５℃で、５×ＳＳＣ、一晩ハイブリダイズする工程
；次いで６５℃で２０分間、０．１％ＳＤＳを含有する２×ＳＳＣ、０．５×Ｓ
ＳＣおよび０．２×ＳＳＣの各々で２回洗浄する工程を含む。

【００２８】遺伝的コードの縮重の結果として、本明細書中に記載されるようなＭｔｂ−８
１ポリぺプチドまたはＭｔｂ−６７．２ポリぺプチドをコードする多くのヌクレ
オチド配列が存在するということは、当業者に理解される。これらのポリヌクレ
オチドのいくつかは、任意のネイティブ遺伝子のヌクレオチド配列に対して最低
限の相同性を保有する。それにもかかわらず、コドンの使用（ｕｓａｇｅ）にお
ける差異に起因して変化するポリヌクレオチドは、特に本発明に含まれる。

【００２９】ポリヌクレオチドは、任意の種々の技術を使用して調製され得る。例えば、ポ
リヌクレオチドは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓから調製されたｃＤＮＡまた
はゲノムＤＮＡからのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を介して増幅され得る。
このアプローチのために、配列特異的プライマーは、本明細書中に提供される配
列に基づいて設計され得、そして購入され得るか、または合成され得る。

【００３０】増幅された部分は、周知技術を使用して適切なライブラリー（例えば、Ｍ．ｔ
ｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリー）から
、全長遺伝子を単離するために使用され得る。このような技術において、ライブ
ラリーは、増幅に適切な１以上のポリヌクレオチドプローブまたはポリヌクレオ
チドプライマーを使用してスクリーニングされる。好ましくは、ライブラリーは
、より大きい分子を含むようにサイズ選択される。ランダムプライムライブラリ
ーもまた、遺伝子の５’領域および上流領域を同定するために使用され得る。

【００３１】ハイブリダイゼーション技術のために、部分配列が、周知技術を使用して標識
され得る（例えば、³²Ｐを用いるニックトランスレーションまたは末端標識によ
って）。次いで、細菌ライブラリーまたはバクテリオファージライブラリーを、
変性させた細菌コロニーを含むフィルター（またはファージプラークを含む菌叢
）にその標識プローブをハイブリダイズさせることによってスクリーニングする
（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ，１
９８９を参照のこと）。ハイブリダイズしたコロニーまたはプラークを、選択お
よび拡大し、そのＤＮＡをさらなる分析のために単離する。ｃＤＮＡクローンを
、例えば、その部分配列由来のプライマーおよびベクター由来のプライマーを使
用するＰＣＲによって分析し、付加配列の量を決定し得る。制限地図および部分
配列を作製し、１以上の重複クローンを同定し得る。次いで、完全配列を、標準
的技術（これは、一連の欠失クローンを作製する工程を包含し得る）を使用して
決定し得る。次いで、得られた重複配列を、単一の連続する配列にアセンブルす
る。全長ｃＤＮＡ分子を、周知技術を使用して、適切なフラグメントを連結する
ことによって作製する。

【００３２】あるいは、部分ｃＤＮＡ配列から全長コード配列を得るための、多くの増幅技
術が存在する。このような技術において、増幅は、一般に、ＰＣＲを介して行わ
れる。任意の種々の市販のキットを使用して、この増幅工程を行い得る。プライ
マーは、例えば、当該分野で周知のソフトウェアを使用して設計され得る。プラ
イマーは、好ましくは、２２〜３８ヌクレオチド長であり、少なくとも５０％の
ＧＣ含量を有し、そして約５６℃〜７２℃の温度で標的配列にアニールする。こ
の増幅された領域を、上記のように配列決定し得、そして重複配列を、連続する
配列にアセンブルし得る。

【００３３】１つのこのような増幅技術は、逆ＰＣＲである（例えば、Ｔｒｉｇｌｉａら、
Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１６：８１８６，１９８８）。逆ＰＣＲは、制
限酵素を使用して、遺伝子の既知の領域におけるフラグメントを作製する。次い
で、このフラグメントを、分子内連結によって環状化し、そしてこのフラグメン
トを、その既知領域由来の異なるプライマーを用いるＰＣＲのテンプレートとし
て使用する。代替的アプローチにおいて、部分配列に隣接する配列を、リンカー
配列に対するプライマーおよび既知領域に特異的なプライマーを用いる増幅によ
って、回収し得る。この増幅された配列を、代表的には、同じリンカープライマ
ーおよび既知領域に特異的な第２のプライマーを用いる。２回目の増幅に供する
。この手順の変形型（これは、その既知配列から反対方向への伸長を開始する２
つのプライマーを使用する）が、ＷＯ９６／３８５９１に記載される。別のこの
ような技術は、「ｃＤＮＡ末端の迅速増幅」すなわちＲＡＣＥとして公知である
。この技術は、ポリＡ領域またはベクター配列にハイブリダイズする、内部プラ
イマーおよび外部プライマーの使用を包含し、既知配列の５’側および３’側の
配列を同定する。さらなる技術としては、捕捉ＰＣＲ（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｍら
、ＰＣＲＭｅｔｈｏｄｓＡｐｐｌｉｃ．１：１１１−１９，１９９１）およ
びウォーキングＰＣＲ（Ｐａｒｋｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１９
：３０５５−６０，１９９１）が挙げられる。増幅を使用する他の方法もまた、
全長ｃＤＮＡ配列を得るために使用され得る。

【００３４】コード領域Ｍｔｂ−８１を含む、ゲノムＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＤＮ
Ａ配列を、図１（配列番号３）に示す。この図において、コードされるアミノ酸
残基もまた示し（配列番号２）、Ｍｔｂ−８１のコード領域（配列番号１）を、
黒色実線によって示す。Ｍｔｂ−６７．２をコードするＤＮＡ配列（配列番号４
）を図４に示し、そしてそのコードされるアミノ酸残基を図５（配列番号５）に
示す。これらのコード領域およびそれらの部分、ならびにそれらの全てまたは部
分に相補的な配列は、具体的に本発明に包含される。

【００３５】ポリヌクレオチド改変体は、当該分野で公知の任意の方法（化学合成（例えば
、固相ホスホラミダイト化学合成による）を含む）によって一般的に調製され得
る。ポリヌクレオチド配列における改変は、標準的な変異誘発技術（例えば、オ
リゴヌクレオチド指向性部位特異的変異誘発（Ａｄｅｌｍａｎら、ＤＮＡ２：
１８３，１９８３を参照のこと）を使用して導入され得る。特定の部分を使用し
て、本明細書中に記載されるような、コードされるポリペプチドを調製し得る。
コード配列または相補配列の部分はまた、遺伝子発現を検出するためのプローブ
またはプライマーとして設計され得る。プローブは、種々のレポーター基（例え
ば、放射性核種および酵素）によって標識され得、そして好ましくは、少なくと
も１５ヌクレオチド長、より好ましくは、少なくとも３０ヌクレオチド長、そし
てなおより好ましくは、少なくとも５０ヌクレオチド長である。上記のように、
プライマーは、好ましくは、２２〜３８ヌクレオチド長である。

【００３６】任意のポリヌクレオチドをさらに改変して、インビボでの安定性を増加し得る
。可能な改変としては、５’末端および／または３’末端での隣接配列の付加；
骨格中のホスホジエステラーゼ結合に代わる、ホスホロチオエートまたは２’Ｏ
メチルの使用；ならびに／または、非通常塩基（例えば、イノシン、クエオシン
およびワイブトシン、ならびにアデニン、シチジン、グアニン、チミンおよびウ
リジンの、アセチル形態、メチル形態、チオ形態、および他の改変形態）の含有
が、挙げられるが、これらに限定されない。

【００３７】本明細書中で使用される場合、ヌクレオチド配列は、確立された組換えＤＮＡ
技術を使用して、種々の他のヌクレオチド配列に結合され得る。例えば、ポリヌ
クレオチドは、種々のクローニングベクター（プラスミド、ファージミド、λフ
ァージ誘導体およびコスミドを含む）のいずれかにクローニングされ得る。特定
の目的のベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクタ
ーおよび配列決定ベクターが挙げられる。一般的に、ベクターは、少なくとも１
つの生物において機能的な複製起点、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位および
１以上の選択マーカーを含む。他のエレメントは、所望される用途に依存し、当
業者に明らかである。

【００３８】特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、哺乳動物の細胞内への侵入、
およびその細胞内での発現を可能にするように処方され得る。このようなシィ尾
方は、以下に記載のような、治療目的に特に有用である。当業者は、標的細胞に
おけるポリヌクレオチドの発現を達成するための多くの方法が存在し、そして任
意の適切な方法が使用され得ることを認識する。例えば、ポリヌクレオチドは、
ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイ
ルス、あるいはワクシニアウイルスまたは他のポックスウイルス（例えば、トリ
ポックスウイルス）が挙げられるが、限定されない）に組み込まれ得る。ＤＮＡ
をこのようなベクターに組み込むための技術は、当業者に周知である。レトロウ
イルスベクターはさらに、選択マーカーの遺伝子（形質導入された細胞の同定ま
たは選択を補助する）および／または標的部分（特定の標的細胞上のレセプター
に対するリガンドをコードする遺伝子）を、移入するか、または組み込んで、ベ
クターを標的特異的にし得る。標的化はまた、当業者に公知の方法によって、抗
体を使用して達成され得る。

【００３９】治療目的のための他の処方物としては、コロイド分散系（例えば、高分子複合
体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズおよび脂質ベース系（水中油エマル
ジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソーム））が挙げられる。インビトロ
およびインビボにおける送達小胞としての使用のために好ましいコロイド系は、
リポソーム（すなわち、人工膜小胞）である。このような系の調製および使用は
、当該分野で周知である。

【００４０】（ＭＴＢ−８１ポリペプチドおよびＭＴＢ−６７．２ポリペプチド）本発明の状況において、Ｍｔｂ−８１ポリペプチドは、本明細書中に記載され
るような、Ｍｔｂ−８１（図１Ａ〜１Ｆ；配列番号２）の少なくとも免疫原性部
分、またはそれらの改変体を含む。Ｍｔｂ−６７．２ポリペプチドは、Ｍｔｂ−
６７．２（図５；配列番号５）の少なくとも免疫原性部分、またはそれらの改変
体を含む。本明細書中に記載されるポリペプチドは、任意の長さであり得る。ネ
イティブタンパク質由来のさらなる配列および／または異種配列が、存在し得、
そしてこのような配列は、免疫原性部分または抗原性部分をさらに含み得る（し
かし、必ずしも含む必要はない）。

【００４１】本明細書中で使用される場合、「免疫原性部分」は、Ｂ細胞表面抗原レセプタ
ーおよび／またはＴ細胞表面抗原レセプターによって認識される（すなわち、特
異的に結合される）抗原の部分である。このような免疫原性部分は、一般に、Ｍ
ｔｂ−８１、Ｍｔｂ−６７．２またはいずれかの抗原の改変体の、少なくとも５
アミノ酸残基、好ましくは、少なくとも９アミノ酸残基、より好ましくは、少な
くとも１５アミノ酸残基、さらにより好ましくは、少なくとも５０アミノ酸残基
を含む。免疫原性部分は、Ｐａｕｌ，ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，第３版、２４３−２４７（ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，１９９３）および
そこに引用される参考文献に要約されるような周知技術を使用して、同定され得
る。このような技術は、抗原特異的な抗体、抗血清および／あるいはＴ細胞株ま
たはＴ細胞クローンと反応する能力についてポリペプチドをスクリーニングする
工程を含む。本明細書中で使用される場合、抗血清および抗体は、それらが抗原
に特異的に結合する（すなわち、これらが、ＥＬＩＳＡまたは他の免疫アッセイ
においてその抗原と特異的に反応し、無関係なタンパク質とは検出可能に反応し
ない）場合、「抗原特異的」である。このような抗血清および抗体は、本明細書
中に記載されるように、そして周知技術を使用して調製され得る。Ｍｔｂ−８１
またはＭｔｂ−６７．２の免疫原性部分は、（例えば、ＥＬＩＳＡおよび／また
はＴ細胞反応性アッセイにおいて）その全長ポリペプチドの反応性よりも実質的
に小さくないレベルで、このような抗血清および／またはＴ細胞と反応する部分
である。免疫原性部分は、このようなアッセイにおいて、その全長ポリペプチド
の反応性と類似またはそれより大きいレベルで反応し得る。このようなスクリー
ニングは、一般的に、当業者に周知の方法（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎ
ｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｃｏｌ
ｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８に記載のよ
うな技術）を使用して行われる。例えば、ポリペプチドを固体支持体に固定し、
そして患者の血清を接触させて、その血清中の抗体をその固定されたポリペプチ
ドに結合させ得る。次いで、結合されなかった血清を除去し、結合された抗体を
、検出試薬（例えば、¹²⁵Ｉ標識化プロテインＡ）を使用して検出し得る。

【００４２】上記のように、ポリペプチドは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２の改変
体であり得る。本明細書中で使用される場合、ポリペプチド「改変体」は、ネイ
ティブＭｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２と、１以上の置換、欠失、付加およ
び／または挿入において異なるポリペプチドであり、その結果、そのポリペプチ
ドの免疫原性が、実質的に消失される。言い換えると、抗原特異的な抗血清また
はＴ細胞と反応する改変体の能力は、そのネイティブ抗原と比較して、増強され
ても、または変化されなくてもよく、あるいは、そのネイティブ抗原と比較して
、５０％未満、そしてより好ましくは、２０％未満に減少されてもよい。このよ
うな改変体は、一般に、本明細書中に記載のように、上記ポリペプチド配列の１
つを改変し、この改変ポリペプチドの抗原特異的な抗体または抗血清との反応性
を評価することによって同定され得る。ポリペプチド改変体は、好ましくは、少
なくとも７０％、より好ましくは、少なくとも９０％、そして最も好ましくは少
なくとも９５％の、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に対する同一性を示す
。

【００４３】好ましくは、改変体は、保存的置換を含む。「保存的置換」は、あるアミノ酸
が、類似の特性を有する別のアミノ酸と置換されている置換であり、その結果、
ポリペプチド化学の当業者は、そのポリペプチドの二次構造および疎水性親水性
性質が、実質的に変化されないことを予測する。アミノ酸置換は、一般に、残基
の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性および／または両親媒性性質の類似性に
基づいて作製され得る。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン
酸およびグルタミン酸；正に荷電したアミノ酸としては、リジンおよびアルギニ
ンおよび類似の親水性を有する非荷電の極性頭部を有するアミノ酸のグループと
しては、ロイシン、イソロイシンおよびバリン；グリシンおよびアラニン；アス
パラギンおよびグルタミン；ならびにセリン、トレオニン、フェニルアラニンお
よびチロシンが挙げられる。保存的変化を示し得るアミノ酸の他のグループとし
ては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈ
ｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、
ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ
、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。改変体はまた、またはあるいは、非保
存的変化を有し得る。改変体はまた（またはあるいは）、例えば、ポリペプチド
の免疫原性、二次構造および疎水性親水性性質に最小限の影響しか有さないアミ
ノ酸の欠失または付加によって、改変され得る。

【００４４】上記のように、ポリペプチドは、タンパク質のＮ末端にシグナル（または、リ
ーダー）配列を含み得、これは、翻訳と同時に、または翻訳後に、そのタンパク
質の転移を指向する。このポリペプチドはまた、このポリペプチドの合成、精製
または同定を容易にするために、またはこのポリペプチドの固体支持体への結合
を増強するために、リンカー配列または他の配列（例えば、ポリＨｉｓ）に結合
体化され得る。例えば、ポリペプチドは、免疫グロブリンＦｃ領域に結合体化さ
れ得る。

【００４５】ポリペプチドは、任意の種々の周知技術を使用して調製され得る。上記のＤＮ
Ａ配列によってコードされる組換えポリペプチドは、当業者に公知の任意の種々
の発現ベクターを使用して、ＤＮＡ配列から容易に調製され得る。発現は、組換
えポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む発現ベクターで形質転換またはト
ランスフェクトされた、任意の適切な宿主細胞において達成され得る。適切な宿
主細胞としては、原核生物、酵母および高等真核生物の細胞が挙げられる。好ま
しくは、使用される宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ、酵母または哺乳動物細胞株（例
えば、ＣＯＳまたはＣＨＯ）である。組換えタンパク質または組換えポリペプチ
ドを培養培地中に分泌する適切な宿主／ベクター系からの上清は、市販のフィル
ターを使用して、最初に濃縮され得る。濃縮後、この濃縮物を、適切な精製基質
（例えば、アフィニティー基質またはイオン交換樹脂）に適用され得る。最終的
に、１以上の逆相ＨＰＬＣ工程を使用して、組換えポリペプチドをさらに精製し
得る。

【００４６】約１００アミノ酸未満、そして一般に、約５０アミノ酸未満のアミノ酸を有す
る部分および他の改変体もまた、当業者に周知の技術を使用して、合成手段によ
って生成され得る。例えば、このようなポリペプチドは、任意の市販の固相技術
（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成法（ここでは、アミノ酸が連続的に付
加されて、アミノ酸鎖を成長させる））を使用して、合成され得る。Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１４６，１９６
３を参照のこと。ポリペプチドの自動合成のための装置は、ＡｐｐｌｉｅｄＢ
ｉｏＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）のような供給
者から市販され、そして製造業者の説明書に従って操作され得る。

【００４７】ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、本明細書中に記載のポリペプ
チドを含む融合タンパク質であり得る。例えば、このような融合タンパク質は、
１以上の公知のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、またはこのような抗原の改
変体をさらに含み得る。代表的な公知のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原とし
ては、ＡｎｄｅｒｓｅｎおよびＨａｎｓｅｎ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５７
：２４８１−２４８８，１９８９に記載の３８ｋＤ抗原（ＧｅｎＢａｎｋ登録番
号Ｍ３００４６）およびＥＳＡＴ−６（Ｓｏｒｅｎｓｅｎら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉ
ｍｍｕｎ．６３：１７１０−１７１７，１９９５）が挙げられる。融合タンパク
質は、一般に、標準的な技術を使用して調製され得る。例えば、融合タンパク質
は、組換え調製され得る。手短に言うと、このポリペプチド成分をコードするＤ
ＮＡ配列を、別々にアセンブルし得、そして適切な発現ベクターに連結し得る。
１つのポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の３’末端は、ペプチドリンカ
ーを用いてまたは用いずに、第２のポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の
５’末端に、これらの配列のリーディングフレームが同じ相にあるように連結さ
れる。このことが、両方の成分ポリペプチドの生物学的活性を保持する単一の融
合タンパク質への翻訳を可能にする。

【００４８】ペプチドリンカー配列を使用して、この第１ポリペプチド成分および第２ポリ
ペプチド成分を、各ポリペプチドがその二次構造および三次構造にフォールディ
ングすることを確実にするのに十分な距離で引き離し得る。このようなペプチド
リンカー配列は、当該分野で周知の標準的な技術を使用して、その融合タンパク
質に組み込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、以下の因子に基づいて選択
され得る：（１）可撓性の伸長された構造を採る、それらの能力；（２）それら
が、第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用
し得る二次構造をとることができないこと；および（３）そのポリペプチド機能
的エピトープと反応し得る、疎水性残基または荷電残基の欠失。好ましいペプチ
ドリンカー配列は、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒ残基を含む。他のほぼ中性のア
ミノ酸（例えば、ＴｈｒおよびＡｌａ）もまた、リンカー配列に使用され得る。
リンカーとして有用に使用され得るアミノ酸配列は、Ｍａｒａｔｅａら、Ｇｅｎ
ｅ４０：３９−４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：８２５８−８２６２，１９８６；米国特許第４，
９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されるアミノ酸
配列が挙げられる。リンカー配列は、一般に、１〜約５０アミノ酸長であり得る
。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、機能的ドメインを引き離し
、そして立体障害を防ぐために使用され得る、非必須Ｎ末端アミノ酸領域を有す
る場合、リンカー配列は必要とされない。

【００４９】この連結されたＤＮＡ配列は、適切な転写または翻訳調節エレメントに作動可
能に連結される。ＤＮＡの発現を担う調節エレメントは、第１のポリペプチドを
コードするＤＮＡ配列のほんの５’側に位置される。同様に、翻訳を終結するた
めに必要とされる終止コドンおよび転写終結シグナルは、第２のポリペプチドを
コードするＤＮＡ配列のほんの３’側に存在する。

【００５０】本発明のポリペプチドを無関係な免疫原性タンパク質と共に含む融合タンパク
質もまた、提供される。好ましくは、この免疫原性タンパク質は、リコール応答
を誘発し得る。このようなタンパク質の例としては、破傷風タンパク質、結核タ
ンパク質および肝炎タンパク質が挙げられる（例えば、Ｓｔｏｕｔｅら、Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６：８６−９１，１９９７を参照のこと）。

【００５１】一般に、本明細書中に記載されるポリペプチド（融合タンパク質を含む）およ
びポリヌクレオチドが、単離される。「単離された」ポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドは、その元の環境から取り出されたものである。例えば、天然に存在
するタンパク質は、それが、天然系における既存の物質のいくらかまたは全てか
ら分離される場合に、単離されている。好ましくは、このようなポリペプチドは
、少なくとも約９０％純粋、より好ましくは、少なくとも約９５％純粋、そして
最も好ましくは、少なくとも約９９％純粋である。ポリヌクレオチドは、例えば
、天然環境の一部でないベクター中にクローニングされている場合、単離されて
いるとみなされる。

【００５２】（結合剤）本発明は、さらにＭｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に特異的に結合する薬
剤（例えば、抗体およびその抗原結合フラグメント）を提供する。本明細書中で
使用される場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、それが、Ｍｔｂ−８
１またはＭｔｂ−６７．２と検出可能なレベルで反応し（例えば、ＥＬＩＳＡに
おいて）、類似の条件下で無関係なタンパク質と検出可能に反応しない場合に、
Ｍｔｔｂ−８１またはＭｔｂ６７．２に「特異的に結合する」といわれる。本明
細書中で使用される場合、「結合（する）」とは、「複合体」が形成されるよう
な、２つの別々の分子間（それらの各分子は、溶液中にあり得るか、あるいは細
胞表面または固体支持体上に存在し得る）の非共有結合をいう。結合する能力は
、例えば、その複合体形成いついての結合定数を決定することによって評価され
得る。結合定数は、その複合体の濃度を、その成分濃度の積で除算した場合に得
られる値である。一般に、本発明の文脈において、複合体形成についての結合定
数が、約１０³Ｌ／ｍｏｌを超える場合に、２つの分子は、「結合する」といわ
れる。結合定数は、当該分野で周知の方法を使用して決定され得る。

【００５３】結合剤はさらに、本明細書中に提供される代表的なアッセイを使用して、Ｍ．
ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を有する患者および有さない患者間を区別し得る
。言い換えれば、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に結合する抗体または他
の結合剤は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｉ感染を有する少なくとも約２０％
の患者において、このような感染の存在を示すシグナルを生成し、そして未感染
個体の少なくとも約９０％において、このような感染の非存在を示すネガティブ
なシグナルを生成する。一般に、シグナルは、それが、未感染サンプルから得ら
れる平均シグナル＋３標準偏差より大きい場合に、陽性であるとみなされる。結
合剤がこの要件を満たすか否かを決定するために、（標準的な診断試験を使用し
て決定されるような）Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を有する患者および有
さない患者由来の生物学的サンプル（例えば、血液、血清、血漿、唾液、脳脊髄
液または尿）を、その結合剤に結合するポリペプチドの存在について、本明細書
中に記載のようにアッセイし得る。統計的に有意な数の、感染を有するサンプル
および有さないサンプルがアッセイされるべきであることは、明らかである。各
結合剤は、上記の基準を満足すべきであるが；当業者は、感度を改善するために
結合剤を組み合わせて使用し得ることを認識する。

【００５４】上記の要件を満足する任意の薬剤は、結合剤であり得る。例えば、結合剤は、
リボソーム（ペプチド成分を有するか、または有さない）、ＲＮＡ分子、あるい
はポリペプチドであり得る。好ましい実施形態において、結合剤は、抗体または
その抗原結合フラグメントである。このような抗体は、ポリクローナルまたはモ
ノクローナルであり得る。さらに、これらの抗体は、単鎖抗体、キメラ抗体、Ｃ
ＤＲ移植化（ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｅｄ）抗体、またはヒト化抗体であり得る。

【００５５】結合剤は、レポーター基にさらに連結されて、診断アッセイを容易にし得る。
適切なレポーター基は、当業者に明らかであり、これらには、酵素（例えば、西
洋ワサビペルオキシダーゼ）、基質、補因子、インヒビター、色素、コロイド（
例えば、金コロイド）、放射線核種、発光基、蛍光基およびビオチンが挙げられ
る。抗体のレポーター基に対する結合体化は、当業者に公知の標準的な方法を使
用して達成され得る。

【００５６】抗体は、当業者に公知の任意の種々の方法で調製され得る。例えば、Ｈａｒｌ
ｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａ
ｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１
９８８を参照のこと。一般に、抗体は、組換え抗体の産生を可能にするための細
胞培養技術（本明細書中に記載されるか、あるいは適切な細菌宿主または哺乳動
物細胞宿主への抗体遺伝子のトランスフェクションを介する、モノクローナル抗
体の生成を含む）によって、産生され得る。抗体を生成するために、ポリペプチ
ド免疫原は、全長Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２であり得るか、またはい
ずれかの抗原の免疫原性部分であり得る。免疫原性部分が使用される場合、得ら
れる抗体は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染が、全長抗原に対して惹起され
た抗体を使用して示される実質的に全て（すなわち、少なくとも約８０％、好ま
しくは少なくとも約９０％）の患者において、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感
染の存在を示す。抗体はまた、全長抗原に対して惹起された抗体を用いて試験し
た場合に陰性であるサンプルの実質的に全てにおいて、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ
ｓｉｓ感染の非存在を示す。本明細書中に提供される代表的なアッセイ（例えば
、２抗体サンドイッチアッセイ（ｔｗｏ−ａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈ
ａｓｓａｙ））は、一般的に、結核を検出する抗体の能力を評価するために用
いられ得る。

【００５７】１つの技術において、このポリペプチドを含む免疫原を、任意の広範な種々の
哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジおよびヤギ）に最初に注射
し得る。この工程において、本発明のポリペプチドは、改変することなく、免疫
原として作用し得る。あるいは、特に比較的短いポリペプチドに関して、このポ
リペプチドがキャリアタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミンまたはキーホー
ルリンペットヘモシアニン）に連結される場合に、優れた免疫応答が誘導され得
る。好ましくは、１つ以上のブースター免疫化を組み込む予め決定された計画に
従って、この免疫原が動物の宿主内に注射され、そしてこの動物を定期的に採血
する。次いで、このポリペプチドに特異的なポリクローナル抗体は、例えば、適
切な固体支持体に結合されたポリペプチドを使用するアフィニティークロマトグ
ラフィーによって、このような抗血清から精製される。

【００５８】目的の抗原性ポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈ
ｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１〜５
１９、１９７６ならびにそれに対する改良の技術を使用して調製され得る。簡潔
に言えば、これらの方法は、所望の特異性（すなわち、目的のポリペプチドとの
反応性）を有する抗体を産生する能力を有する不死細胞株の調製を包含する。こ
のような細胞株は、例えば、上記のような免疫化された動物から得られる脾細胞
から産生され得る。次いで、この脾細胞を、例えば、ミエローマ細胞融合パート
ナーとの融合、好ましくは、免疫化された動物と同系であるパートナーとの融合
によって不死化する。種々の融合技術を使用し得る。例えば、この脾細胞および
ミエローマ細胞は、数分間、非イオン性界面活性剤と合わせられ、次いで、ハイ
ブリッド細胞の増殖を支持するがミエローマ細胞の増殖を支持しない選択培地上
に低密度で播種され得る。好ましい選択技術は、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミ
ノプテリン、チミジン）選択を使用する。十分な時間、通常は約１〜２週間の後
、ハイブリッドのコロニーが観察される。単一のコロニーを選択し、そしてこの
ポリペプチドに対する結合活性について試験する。高い反応性および特異性を有
するハイブリドーマが、好ましい。

【００５９】モノクローナル抗体は、増殖するハイブリドーマコロニーの上清から単離され
得る。さらに、種々の技術（例えば、適切な脊椎動物宿主（例えば、マウス）の
腹膜腔へのハイブリドーマ細胞株の注射）が、収量を増大するために使用され得
る。次いで、モノクローナル抗体は、腹水または血液から採取され得る。夾雑物
は、クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈殿、および抽出のような従来技術によっ
て抗体から除去され得る。本発明のポリペプチドは、例えば、アフィニティーク
ロマトグラフィー工程における精製プロセスにおいて使用され得る。

【００６０】特定の実施形態において、抗体の抗原結合フラグメントの使用が、好ましい。
このようなフラグメントとしては、Ｆａｂフラグメントが挙げられ、これは、標
準的な技術を使用して調製され得る。手短に言えば、免疫グロブリンを、プロテ
インＡビーズカラム（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏ
ｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８）上でのアフィニティークロマトグラフィ
ーによってウサギ血清から精製し、そしてパパインで消化してＦａｂフラグメン
トおよびＦｃフラグメントを生じ得る。このＦａｂフラグメントおよびＦｃフラ
グメントは、プロテインＡビーズカラム上でのアフィニティークロマトグラフィ
ーによって分離され得る。

【００６１】本発明のモノクローナル抗体は、本明細書中に提供される治療方法における使
用のための１以上の治療剤に結合され得る。これに関して、適切な薬剤としては
、放射性核種、分化インデューサー、薬物、毒素、およびそれらの誘導体が挙げ
られる。好ましい放射性核種としては、⁹⁰Ｙ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、¹⁸⁶Ｒｅ、 ¹⁸⁸ Ｒｅ、²¹¹Ａｔ、および²¹²Ｂｉが挙げられる。好ましい薬物としては、メト
トレキサート、ならびにピリミジンアナログおよびプリンアナログが挙げられる
。好ましい分化インデューサーとしては、ホルボールエステルおよび酪酸が挙げ
られる。好ましい毒素としては、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、コレラ毒
素、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、Ｓｈｉｇｅ
ｌｌａ毒素、およびヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられる。

【００６２】治療剤は、適切なモノクローナル抗体に対して直接的かまたは間接的（例えば
、リンカー基を介して）のいずれかで結合（例えば、共有結合）され得る。薬剤
と抗体との間の直接的な反応は、各々が他方と反応する能力を有する置換基を有
する場合に可能である。例えば、一方における求核基（アミノ基またはスルフヒ
ドリル基）は、他方におけるカルボニル含有基（例えば、無水物もしくはハロゲ
ン酸）または良好な脱離基（例えば、ハロゲン）を含むアルキル基と反応する能
力を有し得る。

【００６３】あるいは、リンカー基を介して治療剤と抗体とを結合させることが所望され得
る。リンカー基は、結合能を妨害することを避けるために、抗体を薬剤から離す
ためのスペーサーとして機能し得る。リンカー基はまた、薬剤または抗体の置換
基の化学的反応性を増大するように作用し、結合効率を増大し得る。化学的反応
性における増大はまた、そうでなければ、可能でない薬剤、または薬剤の官能基
の使用を容易にし得る。

【００６４】種々の二官能性または多官能性試薬（ホモ−およびヘテロ−官能性の両方（例
えば、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬのカ
タログに記載される試薬））がリンカー基として使用され得ることは、当業者に
明らかである。結合は、例えば、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基
、または酸化された炭水化物残基によって影響され得る。このような方法論を記
載する、多くの参考文献（例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌらに対する米国特許第４，６
７１，９５８号）が存在する。

【００６５】治療剤が、本発明の免疫結合体の抗体部分を有さない場合に、より強力である
場合、細胞への内在化の間または細胞への内在化に際して切断され得るリンカー
基を使用することが所望され得る。多くの異なる切断され得るリンカー基が、記
載されている。これらのリンカー基からの薬剤の細胞内放出に関する機構として
は、ジスルフィド結合の還元（例えば、Ｓｐｉｔｌｅｒに対する米国特許第４，
４８９，７１０号）、感光性結合の照射（例えば、Ｓｅｎｔｅｒらに対する米国
特許第４，６２５，０１４号）、誘導体化されたアミノ酸側鎖の加水分解（例え
ば、Ｋｏｈｎらに対する米国特許第４，６３８，０４５号）、血清補体媒介加水
分解（例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌらに対する米国特許第４，６７１，９５８号）、
および酸触媒化加水分解（例えば、Ｂｌａｔｔｌｅｒらによる米国特許４，５６
９，７８９）による切断が挙げられる。

【００６６】抗体に１つ以上の薬剤を結合することが、所望される。１つの実施形態におい
て、薬剤の複数分子が、１つの抗体分子に結合される。別の実施形態において、
１より多い型の薬剤が、１つの抗体に結合され得る。特定の実施形態に関わらず
、１より多い薬剤を有する免疫結合体は、種々の方法において調製され得る。例
えば、１より多い薬剤は、抗体分子に直接結合され得るか、または複数の結合部
位を提供するリンカーが、使用され得る。あるいは、キャリアが使用され得る。

【００６７】キャリアは、直接的かまたはリンカー基を介してのいずれかの共有結合を含む
、種々の方法において薬剤を保有し得る。適切なキャリアとしては、アルブミン
のようなタンパク質（例えば、Ｋａｔｏらに対する米国特許第４，５０７，２３
４号）、ペプチド、およびアミノデキストランのようなポリサッカリド（例えば
、Ｓｈｉｈらに対する米国特許第４，６９９，７８４号）が挙げられる。キャリ
アはまた、非共有結合によってか、またはリポソーム小胞内へのような封入によ
って薬剤を保有し得る（例えば、米国特許第４，４２９，００８号および同第４
，８７３，０８８号）。放射性核種薬剤に特異的なキャリアとしては、放射性ハ
ロゲン化低分子およびキレート化合物が挙げられる。例えば、米国特許４，７３
５，７９２号は、代表的な放射性ハロゲン化低分子およびそれらの合成を開示す
る。放射性核種のキレートは、金属、または金属酸化物、放射性核種を結合する
ためのドナー原子として窒素原子および硫黄原子を含む化合物を含む、キレート
化合物から形成され得る。例えば、Ｄａｖｉｓｏｎらに対する米国特許第４，６
７３，５６２号は、代表的なキレート化合物及びそれらの合成を開示する。

【００６８】抗体および免疫結合体に対する種々の投与経路が、使用され得る。代表的には
、投与は、静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与である。抗体／免疫結合体の
正確な用量が、使用される抗体、腫瘍上の抗原の密度、および抗体のクリアラン
ス速度に依存して変化することは明白である。

【００６９】（結核を検出するための方法）一般に、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染は、患者から得られた生物学的サ
ンプルにおける、以下の１以上の存在に基づいて患者において検出され得る：（
ａ）Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に特異的に結合する抗体；（ｂ）Ｍｔ
ｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２と特異的に反応するＴ細胞；（ｃ）Ｍｔｂ−８
１抗原またはＭｔｂ−６７．２抗原、あるいは（ｄ）Ｍｔｂ−８１抗原またはＭ
ｔｂ−６７．２抗原をコードするｍＲＮＡ。言い換えると、Ｍｔｂ−８１および
／またはＭｔｂ−６７．２は、患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染
の存在または非存在を示すためのマーカーとして使用され得る。Ｍｔｂ−８１ポ
リペプチドまたはＭｔｂ−６７．２ポリペプチド、ならびにこのようなポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドおよびこのようなポリペプチドを発現する抗
原提示細胞が、特異的抗体またはＴ細胞の存在を検出するために使用され得る。
本明細書中に提供される結合剤は、一般に、生物学的サンプル中のＭｔｂ−８１
抗原またはＭｔｂ−６７．２抗原のレベルの検出を可能にする。ポリヌクレオチ
ドプライマーおよびプローブは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２をコード
するｍＲＮＡのレベルを検出するために使用され得る。

【００７０】本明細書中に提供される診断方法は、感度において既存の方法を超える利点を
有する。特に、本明細書中に提供される方法は、ＡＩＤＳ患者におけるＭ．ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を検出するために使用され得る。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓおよびＨＩＶの同時感染は、このような患者において一般的であるが
、結核は、以前の診断方法を使用して検出することは困難であった。さらに、Ｍ
ｔｂ−８１は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染についての早期段階のマーカ
ーであるようであり、この疾患の早期検出を可能にする。

【００７１】生物学的サンプルは、感染個体における標的物質を含むことが予想される、１
以上のヒトまたは非ヒト動物から得られた任意のサンプルであり得る。例えば、
Ｍｔｂ−８１特異的抗体またはＭｔｂ−６７．２特異的抗体の存在に基づいてＭ
．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を検出するために、任意の抗体含有サンプルが
、使用され得る。このサンプルは、全血、痰、血清、血漿、唾液、脳脊髄液、ま
たは尿である。より好ましくは、そのサンプルは、患者または血液供給から得ら
れる、血液、血清、または血漿サンプルである。

【００７２】本明細書中に提供される方法において、Ｍｔｂ−８１および／またはＭｔｂ−
６７．２は、１以上の公知のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原と組み合わせて
使用され得るが、必ずしもそうする必要はない。このような実施形態において、
使用される抗体は、好ましくは、相補的である（すなわち、ある成分ポリペプチ
ドは、別の成分ポリペプチドにより検出されなかった感染が存在する、サンプル
におけるその感染を検出する傾向にある）。相補的抗原は、一般に各々のポリペ
プチドを個々に使用して、Ｍ．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓで感染された既知の一
連の患者から得られた血清サンプルを評価することにより、同定され得る。各々
のポリペプチドで（以下に記載のように）どのサンプルが陽性と試験されるかを
決定した後、２以上のポリペプチドの組み合わせが処方され得、これは、その試
験されたサンプルのほとんどまたは全てにおいて感染を検出し得る。そのような
ポリペプチドは相補的である。

【００７３】サンプル中の抗体を検出するために１以上のポリペプチドを使用するための、
当業者に公知の種々のアッセイ型式が存在する。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬ
ａｎｅ、Ａｎｔｉｖｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｒｕａｌ，
ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８（参
考として本明細書に援用される）を参照のこと。好ましい実施形態において、こ
のアッセイは、サンプル由来の抗体に結合し（ポリペプチドとの免疫複合体の形
態で）、そしてサンプルから抗体を取り出すための、固体支持体上に固定された
ポリペプチドの使用を含む。この免疫複合体は、次いで、レポーター基を含む検
出試薬を使用して検出される。適切な検出試薬としては、この複合体に結合し、
そしてレポーター基で標識されたポリペプチドを遊離する（例えば、準競合アッ
セイにおいて）抗体が挙げられる。あるいは、競合アッセイが、使用され得、こ
こで、ポリペプチドに結合する抗体は、レポーター基で標識され、そしてサンプ
ルと固定化抗原のインキュベーション後にその固定化抗原に結合し得る。サンプ
ルの成分が、標識抗体のポリペプチドへの結合を阻害する程度は、サンプルの固
定化ポリペプチドとの反応性を示す。

【００７４】固体支持体は、抗原が付着され得る当業者に公知の任意の固体物質であり得る
。例えば、固体支持体は、マイクロタイタープレートにおける試験ウェルあるい
はニトロセルロースまたは他の適切な膜であり得る。あるいは、その支持体は、
ビーズまたはディスク（例えば、ガラス）、ファイバーグラス、ラテックス、ま
たはプラスチック物質（例えば、ポリスチレン、またはポリ塩化ビニル）であり
得る。その支持体はまた、磁気粒子または光ファイバーセンサー（例えば、米国
特許第５，３５９，６８１号に記載のような）であり得る。

【００７５】ポリペプチドは、当業者に公知の種々の技術（これらは、特許および科学文献
に十分に記載されている）を使用して固体支持体に結合され得る。本発明の状況
において、用語「結合される」とは、非共有結合的な会合（例えば、吸着）、お
よび共有結合的接着（これは、支持体上での抗原と官能基との間の直接的な連結
であり得るか、または架橋剤による連結であり得る）の両方をいう。マイクロタ
イタープレート中のウェルへの吸着、または膜への吸着による結合が、好ましい
。このような場合、吸着は、適切な緩衝液中で、ポリペプチドと固体支持体との
適切な時間の間の接触により達成され得る。接触時間は、温度により変化するが
、代表的には、約１時間〜１日の間である。一般に、プラスチックマイクロタイ
タープレート（ポリスチレンまたはポリ塩化ビニル）のウェルを、約１０ｎｇ〜
約１μｇの範囲、そして好ましくは約１００ｎｇである、ポリペプチドの量と接
触することが、適切な量の抗原と結合するのに十分である。

【００７６】ポリペプチドの固体支持体への共有結合的接着は、一般に、ポリペプチド上で
支持体と官能基（例えば、ヒドロキシル基またはアミノ基）の両方と反応する二
機能性の試薬をその支持体に最初に反応することにより達成され得る。例えば、
ポリペプチドは、ベンゾキノンを使用して、または支持体のアルデヒド基のポリ
ペプチド上のアミンおよび活性水素のとの縮合によって、適切なポリマーコーテ
ィングを有する支持体に結合され得る（例えば、ＰｉｅｒｃｅＩｍｍｕｎｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣａｔａｌｏｇａｎｄＨａｎｄｂｏｏｋ，１９９１，
Ａ１２−Ａ１３を参照のこと）。

【００７７】特定の実施形態において、アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳ
Ａ）である。このアッセイは、固体支持体（通常、マイクロタイタープレートの
ウェル）に固定化されたポリペプチド抗原をサンプルと最初に接触させ、その結
果、サンプル中のそのポリペプチドに対する抗体を、固定化されたポリペプチド
に結合させることにより実施され得る。次いで、結合していないサンプルを、固
定化されたポリペプチドから除去し、そして固定化された免疫複合体に結合し得
る検出試薬を添加する。次いで、固体支持体に結合したままの検出試薬の量を、
特定の検出試薬に適切な方法を使用して決定する。

【００７８】より詳細には、一旦、ポリペプチドを上記のように支持体に固定化すると、支
持体上の残りのタンパク質結合部位は代表的に、ブロックされる。当業者に公知
の任意の適切なブロッキング剤（例えば、ウシ血清アルブミンまたはＴｗｅｅｎ
２０^TM（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）
）が使用され得る。次いで、固定されたポリペプチドを、サンプルとインキュベ
ートし、そして抗体を抗原に結合させる。サンプルは、適切な希釈剤（例えばリ
ン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ））でインキュベーション前に希釈され得る。一
般に、適切な接触時間（すなわち、インキュベーション時間）は、Ｍ．ｔｕｂｅ
ｒｃｕｌｏｓｉｓ感染サンプル内で抗体の存在を検出するのに十分な時間である
。好ましくは、接触時間は、結合した抗体と結合していない抗体との間の平衡状
態で達成されるレベルの、少なくとも９５％である結合レベルを達成するのに十
分である。当業者は、平衡状態を達成するのに必要な時間が、経時的に生じる結
合レベルをアッセイすることにより容易に決定され得ることを理解する。室温に
おいて、約３０分間のインキュベーション時間が一般に十分である。

【００７９】次いで、結合していないサンプルは、適切な緩衝液（例えば、０．１％Ｔｗ
ｅｅｎ２０^TMを含むＰＢＳ）で固体支持体を洗浄することにより除去され得る
。次いで、検出試薬は、固体支持体に添加され得る。適切な検出試薬は、固定化
抗体−ポリペプチド複合体に結合し、当業者に公知の任意の種々の方法で検出さ
れ得る、任意の化合物である。好ましくは、検出試薬は、レポーター基に結合体
化された結合剤（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、免疫グロブリン、レク
チン、または遊離の抗原など）を含む。好ましいレポーター基としては、酵素（
例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、基質、補因子、インヒビター、色素、
コロイド、放射性核種、発光基、蛍光基およびビオチンが挙げられる。レポータ
ー基に対する結合剤の結合体化は、当業者に公知の標準的な方法を使用して達成
され得る。通常の結合剤はまた、多くの商業的供給源（例えば、ＺｙｍｅｄＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡおよびＰｉｅｒｃ
ｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）からの種々のレポーター基に結合体化されて、購
入され得る。

【００８０】次いで、検出試薬を、結合した抗体を検出するのに十分な時間にわたって、固
定化抗体−ポリペプチド複合体と共にインキュベートする。適切な時間量は、一
般に、製造業者の説明書から決定され得るか、または経時的に生じる結合レベル
をアッセイすることにより決定され得る。次いで、結合していない検出試薬を除
去し、そして結合した検出試薬を、レポーター基を使用して検出する。レポータ
ー基を検出するために使用される方法は、レポーター基の性質に依存する。放射
性基については、シンチレーションカウンティングまたはオートラジオグラフィ
ー方法が一般に適切である。分光学的方法は、色素、発光基および蛍光基を検出
するために使用され得る。ビオチンは、異なるレポーター基（通常、放射性基も
しくは蛍光基または酵素）に結合されるアビジンを使用して検出され得る。酵素
レポーター基は、一般に、基質の添加（一般に、特定の時間にわたる）、続いて
その反応産物の分光学的分析または他の分析により検出され得る。

【００８１】サンプル中の抗Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗体の存在または非存在を決定
するために、固体支持体に結合したままであるレポーター基から検出されるシグ
ナルは一般に、カットオフ値に対応するシグナルに対して比較される。１つの好
ましい実施形態において、カットオフ値は、固定化抗原を、感染していない患者
由来のサンプルとともにインキュベートした場合に得られる平均シグナル＋３標
準偏差である。一般に、カットオフ値を超えるシグナルを生じるサンプルが、結
核について陽性であるとみなされる。代替の好ましい実施形態において、カット
オフ値は、Ｓａｃｋｅｔｔら、ＣｌｉｎｉｃａｌＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ：
ＡＢａｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎ
ｅ，ＬｉｔｔｌｅＢｒｏｗｎａｎｄＣｏ．，１９８５、１０６〜１０７頁
の方法に従って、ＲｅｃｅｉｖｅｒＯｐｅｒａｔｏｒＣｕｒｖｅを使用して
決定される。手短に言うと、この実施形態において、カットオフ値は、診断試験
の結果についての各々の可能なカットオフ値に対応する、真の陽性割合（すなわ
ち、感度）および偽陽性の割合（１００％−特異性）の対のプロットから決定さ
れ得る。左上隅に最も近いプロットのカットオフ値（すなわち、最大の領域を囲
む値）は、最も正確なカットオフ値であり、そしてこの方法によって決定された
カットオフ値よりも高いシグナルを生じるサンプルは、陽性であるとみなされ得
る。あるいは、カットオフ値は、プロットに沿って左に移動されて偽陽性の割合
を最小化し得るか、または右に移動されて偽陰性の割合を最小化し得る。一般に
、この方法によって決定されたカットオフ値よりも高いシグナルを生じるサンプ
ルは、結核について陽性であるとみなされる。

【００８２】関連する実施形態において、アッセイは、迅速な素通り（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏ
ｕｇｈ）試験形式またはストリップ（ｓｔｒｉｐ）試験形式で行われ、ここで、
抗原は、膜（例えば、ニトロセルロース）に固定化される。素通り試験において
、サンプル中の抗体は、サンプルが膜を通過するときに固定化ポリペプチドに結
合する。次いで、検出試薬（例えば、プロテインＡ−コロイド状金）は、その検
出試薬を含む溶液が膜を流れるときに抗体−ポリペプチド複合体に結合する。次
いで、結合した検出試薬の検出は、上記のように行われ得る。ストリップ試験形
式において、ポリペプチドが結合した膜の一端を、サンプルを含む溶液中に浸す
。そのサンプルは、膜に沿って、検出試薬を含む領域を通って、そして固定化ポ
リペプチドの領域へと移動する。そのポリペプチドにおける検出試薬の濃縮は、
そのサンプル中の抗Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗体の存在を示す。代表的に
、その部位での検出試薬の濃縮は、視覚的に読取られ得るパターン（例えば、線
）を生じる。このようなパターンが存在しないことは、陰性の結果を示す。一般
に、膜上に固定化されるポリペプチドの量は、生物学的サンプルが、上記のよう
にＥＬＩＳＡにおける陽性シグナルを生じるのに十分であるレベルの抗体を含む
場合に視覚的に識別可能なパターンを生じるよう選択される。好ましくは、膜に
固定化されるポリペプチドの量は、約２５ｎｇ〜約１μｇ、より好ましくは約５
０ｎｇ〜約５００ｎｇの範囲である。このような試験は代表的に、ごく少量（例
えば、１滴）の患者の血清または血液を用いて行われ得る。

【００８３】もちろん、本発明のポリペプチドでの使用に適切な、多くの他のアッセイプロ
トコールが存在する。上記の説明は、例示のみであることが意図される。例えば
、上記のプロトコールが、抗体（またはその抗原結合フラグメント）を使用して
生物学的サンプル中のＭｔｂ−８１および／またはＭｔｂ−６７．２を検出する
ために容易に改変され得ることは当業者に明らかである。

【００８４】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染はまた、あるいは、生物学的サンプル中の
Ｍｔｂ−８１と特異的に反応するＴ細胞の存在に基づいて検出され得る。特定の
方法では、患者から単離されたＣＤ４⁺Ｔ細胞および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞を含
む生物学的サンプルは、Ｍｔｂ−８１ポリペプチドもしくはＭｔｂ−６７．２ポ
リペプチド、このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび／ま
たはこのようなａ１ポリペプチドを発現するＡＰＣとともにインキュベートされ
、そしてＴ細胞の特異的活性化の存在または非存在が検出される。適切な生物学
的サンプルとしては、単離されたＴ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
例えば、Ｔ細胞は、慣用技術によって（例えば、末梢血リンパ球のＦｉｃｏｌｌ
／Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離法によって）患者から単離され得る。Ｔ細胞
は、２〜９日間（代表的に４日間）、３７℃にてＭｔｂ−８１ポリペプチドまた
はＭｔｂ−６７．２ポリペプチド（例えば、５〜２５μｇ／ｍｌ）とともにイン
ビトロでインキュベートされ得る。別のアリコートのＴ細胞サンプルを、コント
ロールとして役立てるために、Ｍｔｂ−８１ポリペプチドまたはＭｔｂ−６７．
２ポリペプチドの非存在下でインキュベートすることが所望され得る。ＣＤ４⁺
Ｔ細胞に関して、活性化は好ましくは、Ｔ細胞の増殖を評価することによって検
出される。ＣＤ８⁺Ｔ細胞に関しては、活性化は好ましくは、細胞溶解活性を評
価することによって検出される。疾患のない患者におけるよりも少なくとも２倍
高い増殖レベルおよび／または少なくとも２０％高い細胞溶解活性レベルは、Ｍ
．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在を示す。

【００８５】上記のように、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染はまた、あるいは、生物学
的サンプル中のＭｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２をコードするｍＲＮＡレベ
ルに基づいて検出され得る。例えば、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプラ
イマーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくアッセイにおいて用いて、生
物学的サンプルに由来するＭｔｂ−８１ｃＤＮＡまたはＭｔｂ−６７．２ｃ
ＤＮＡの一部を増幅し得、ここで、オリゴヌクレオチドプライマーのうちの少な
くとも１つは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２をコードするポリヌクレオ
チドに特異的である（すなわち、ハイブリダイズする）。次いで、増幅されたｃ
ＤＮＡが、当該分野で周知の技術（例えば、ゲル電気泳動）を用いて分離され、
そして検出される。同様に、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２をコードする
ポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを
ハイブリダイゼーションアッセイにおいて用いて、生物学的サンプル中でこの抗
原をコードするポリヌクレオチドの存在を検出し得る。

【００８６】アッセイ条件下でのハイブリダイゼーションを可能にするために、オリゴヌク
レオチドのプライマーおよびプローブは、少なくとも１０ヌクレオチド、そして
好ましくは少なくとも２０ヌクレオチドの長さの、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−
６７．２をコードするポリヌクレオチドの一部に対して少なくとも約６０％、好
ましくは少なくとも約７５％、そしてより好ましくは少なくとも約９０％の同一
性を有するオリゴヌクレオチド配列を含むべきである。本明細書中に記載される
診断方法において通常用いられ得るオリゴヌクレオチドのプライマーおよび／ま
たはプローブは好ましくは、少なくとも１０〜４０ヌクレオチドの長さである。
ＰＣＲに基づくアッセイおよびハイブリダイゼーションアッセイの両方について
の技術は、当該分野で周知である（例えば、Ｍｕｌｌｉｓら，ＣｏｌｄＳｐｒ
ｉｎｇＨａｒｂｏｒＳｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５１：２６３，１
９８７；Ｅｒｌｉｃｈ編，ＰＣＲＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８９を参照のこと）。

【００８７】１つの好ましいアッセイは、ＲＴ−ＰＣＲを用い、ここでは、ＰＣＲは、逆転
写に関連して適用される。代表的に、ＲＮＡはサンプル組織から抽出され、そし
て逆転写されてｃＤＮＡ分子を生成する。少なくとも１つの特異的プライマーを
用いるＰＣＲ増幅は、ｃＤＮＡ分子を生成し、このｃＤＮＡ分子は、例えば、ゲ
ル電気泳動を用いて分離および可視化され得る。増幅は、試験患者およびＭ．ｔ
ｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染していない個体から採取された生物学的サンプル
から得られたサンプルについて行われ得る。増幅反応は、２桁の大きさにおよぶ
いくつかのｃＤＮＡ希釈物について行われ得る。感染していないサンプルのいく
つかの希釈物と比較して２倍以上の、試験患者サンプルの同じ希釈物における発
現増加は代表的に、陽性とみなされる。

【００８８】上記のように、感度を改善するために、複数のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
マーカーは、所定のサンプル内でアッセイされ得る。複数の抗原が単一のアッセ
イにおいて組み合わされ得ること、または複数のプライマーまたはプローブが同
時に用いられ得ることは明らかである。抗原マーカーの選択は、最適な感度をも
たらす組み合わせを決定する慣用実験に基づき得る。

【００８９】上記で提供される診断方法を用いて、患者における結核治療をモニタリングし
得る。手短には、このようなモニタリングは、上記のようなアッセイを、第１の
時点（治療の少なくとも一部を行う前）で得られた生物学的サンプルを用いて行
い、そして得られた結果を、第２の生物学的サンプル（治療の少なくとも一部の
後に得られる）を用いて行われた類似のアッセイの結果と比較することにより達
成され得る。シグナルの減少をもたらす治療は一般に、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ
ｓｉｓ感染のレベルを減少させる際に有効であるとみなされる。

【００９０】（診断キット）本発明はさらに、上記の診断方法のうちのいずれかにおいて使用するためのキ
ットを提供する。このようなキットは代表的に、診断アッセイを行うに適切な２
以上の構成要素を備える。構成要素は、化合物、試薬、容器および／または器具
であり得る。例えば、キット内の１つの容器は、Ｍｔｂ−８１ポリペプチドまた
はＭｔｂ−６７．２ポリペプチドを含み得る。このようなポリペプチドは、上記
のように支持体材料に付着されて提供され得る。１以上のさらなる容器は、アッ
セイにおいて使用される要素（例えば、試薬または緩衝液）を封入し得る。この
ようなキットはまた、あるいは、免疫複合体形成の直接的または間接的な検出に
適切なレポーター基を含む上記のような検出試薬を備え得る。

【００９１】あるいは、キットは、生物学的サンプル中のＭｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７
．２をコードするｍＲＮＡレベルを検出するように設計され得る。このようなキ
ットは一般に、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２をコードするポリヌクレオ
チドにハイブリダイズする、上記のような、少なくとも１つのオリゴヌクレオチ
ドのプローブまたはプライマーを備える。このようなオリゴヌクレオチドは、例
えば、ＰＣＲまたはハイブリダイゼーションアッセイにおいて用いられ得る。こ
のようなキット内に存在し得るさらなる構成要素としては、Ｍｔｂ−８１または
Ｍｔｂ−６７．２をコードするポリヌクレオチドの検出を容易にする、第２のオ
リゴヌクレオチドおよび／または診断試薬もしくは容器が挙げられる。

【００９２】なおさらなるキットは、サンプル中の抗原の存在を検出し得る。このようなキ
ットは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に特異的に結合する１以上のモノ
クローナル抗体またはポリクローナル抗体を備え得る。

【００９３】（Ｔ細胞）本発明はさらに、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に特異的なＴ細胞を提
供する。このような細胞は一般に、インビトロまたはエキソビボで、標準的な手
順を用いて調製され得る。例えば、Ｔ細胞は、市販の細胞分離システム（例えば
、ＣｅｌｌＰｒｏＩｎｃ．，ＢｏｔｈｅｌｌＷＡから入手可能なＣＥＰＲＡ
ＴＥ^TMシステム）を用いて、哺乳動物（例えば、患者）の骨髄、末梢血または骨
髄もしくは末梢血の画分中に存在し得る（またはこれらから単離され得る）（米
国特許第５，２４０，８５６号；米国特許第５，２１５，９２６号；ＷＯ８９
／０６２８０；ＷＯ９１／１６１１６およびＷＯ９２／０７２４３もまた参
照のこと）。あるいは、Ｔ細胞は、関連するまたは関連しないヒト、非ヒト動物
、細胞株または培養物に由来し得る。

【００９４】Ｔ細胞は、Ｍｔｂ−８１ポリペプチドもしくはＭｔｂ−６７．２ポリペプチド
、このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび／またはこのよ
うなポリペプチドを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）で刺激され得る。刺激は、
このポリペプチドに特異的であるＴ細胞の生成を可能にするに充分な条件下で、
かつ充分な時間にわたって行われる。好ましくは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−
６７．２のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、送達ビヒクル（例えば、マ
イクロスフェア）内に存在して、特異的Ｔ細胞の生成を容易にする。

【００９５】Ｔ細胞は、このＴ細胞が、Ｍｔｂ−８１でコーティングされたかまたはＭｔｂ
−８１（もしくはＭｔｂ−６７．２）をコードする遺伝子を発現する標的細胞を
殺傷する場合、Ｍｔｂ−８１（またはＭｔｂ−６７．２）に特異的であるとみな
される。Ｔ細胞特異性は、種々の標準的な技術のいずれかを使用して評価され得
る。例えば、クロム放出アッセイまたは増殖アッセイでは、陰性コントロールと
比較して２倍を超える、溶解および／または増殖の増加の刺激指数は、Ｔ細胞特
異性を示す。このようなアッセイは、例えば、Ｃｈｅｎら，ＣａｎｃｅｒＲｅ
ｓ．５４：１０６５−１０７０，１９９４に記載されるように行われ得る。ある
いは、Ｔ細胞の増殖の検出は、種々の公知の技術によって達成され得る。例えば
、Ｔ細胞増殖は、ＤＮＡ合成速度の増加を測定することによって（例えば、Ｔ細
胞の培養物をトリチウムチミジンでパルス標識し、そしてＤＮＡに取り込まれた
トリチウムチミジンの量を測定することによって）検出され得る。Ｍｔｂ−８１
またはＭｔｂ−６７．２（２００ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ、好ましくは、
１００ｎｇ／ｍｌ〜２５μｇ／ｍｌ）との３〜７日間の接触は、Ｔ細胞の増殖の
少なくとも２倍の増加をもたらすはずであり、そして／または２〜３時間の上記
のような接触は、標準的なサイトカインアッセイ（ここでは、サイトカイン（例
えば、ＴＮＦまたはＩＦＮ−γ）放出レベルの２倍の増加は、Ｔ細胞活性化を示
す））を用いて測定した場合、Ｔ細胞の活性化をもたらすはずである（Ｃｏｌｉ
ｇａｎら，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
，第１巻，ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｇｒｅｅｎｅ１９９８）
を参照のこと）。Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２のポリペプチド、ポリヌ
クレオチドまたはポリペプチド発現ＡＰＣに応答して活性化されたＴ細胞は、Ｃ
Ｄ４⁺および／またはＣＤ８⁺であり得る。Ｍｔｂ−８１特異的Ｔ細胞またはＭｔ
ｂ−６７．２特異的Ｔ細胞は、標準的な技術を用いて増殖され得る。好ましい実
施形態では、Ｔ細胞は、患者または関連するもしくは関連しないドナーに由来し
、そして刺激および増殖後に患者に投与される。

【００９６】治療目的のために、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．２に応答して増殖する
ＣＤ４⁺Ｔ細胞またはＣＤ８⁺Ｔ細胞は、インビトロまたはインビボのいずれかで
数が増え得る。このようなＴ細胞のインビトロでの増殖は、種々の方法で達成さ
れ得る。例えば、Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖因子（例えば、インターロイキン−２）
の添加を伴ってもしくは伴わずにＭｔｂ−８１もしくはＭｔｂ−６７．２に、お
よび／またはＭｔｂ−８１ポリペプチドもしくはＭｔｂ−６７．２ポリペプチド
を合成する刺激細胞に再曝露され得る。あるいは、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−
６７．２の存在下で増殖する１以上のＴ細胞は、クローニングによって数が増え
得る。細胞をクローニングするための方法は当該分野で周知であり、そして限界
希釈を含む。

【００９７】（薬学的組成物およびワクチン）特定の局面では、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、結合剤および／または細
胞は、薬学的組成物またはワクチンに取り込まれ得る。薬学的組成物は、１以上
のこのような化合物および生理学的に受容可能なキャリアを含む。ワクチンは、
１以上のこのような化合物および非特異的免疫応答エンハンサーを含み得る。非
特異的免疫応答エンハンサーは、外因性抗原に対する免疫応答を増強する任意の
物質であり得る。非特異的免疫応答エンハンサーの例としては、アジュバント、
生分解性マイクロスフェア（例えば、ポリ乳酸ガラクチド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉ
ｃｇａｌａｃｔｉｄｅ））およびリポソーム（この中に化合物が取り込まれる
）が挙げられる。本発明の範囲内の薬学的組成物およびワクチンはまた、生物学
的に活性であっても不活性であってもよい、他の化合物を含み得る。例えば、他
のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原の１以上の免疫原性部分は、融合ポリペプ
チドに取り込まれて、または別個の化合物としてのいずれかで、組成物またはワ
クチン内に存在し得る。

【００９８】薬学的組成物またはワクチンは、上記のように、１つ以上のポリペプチドをコ
ードするＤＮＡを含み得、その結果このポリペプチドは、インサイチュで生成さ
れる。ＤＮＡは、当業者に公知の任意の種々の送達系内に存在し得る。この送達
系としては、核酸発現系、細菌およびウイルスの発現系が挙げられる。多くの遺
伝子送達技術、例えば、Ｒｏｌｌａｎｄ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｄ
ｒｕｇＣａｒｒｉｅｒＳｙｓｔｅｍｓ１５：１４３〜１９８，１９９８、
およびそこに引用される参考文献により記載される技術が当該分野で周知である
。適切な核酸発現系は、患者における発現のために必要なＤＮＡ配列（例えば、
適切なプロモーターおよび停止シグナル）を含む。細菌の送達系は、細胞表面で
ポリペプチドの免疫原性部分を発現する細菌（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ−Ｃａ
ｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｒｉｎ）の投与を包含する。好ましい実施形態において
、ＤＮＡは、ウイルス発現系（例えば、ワクシニアもしくは他のポックスウイル
ス、レトロウイルス、またはアデノウイルス）を用いて誘導され得る。これは、
非病原性（欠損）、複製コンピテントなウイルスの使用を含み得る。適切な系が
例えば、以下において開示されている：Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：３１７〜３２１、１９８９；Ｆｌ
ｅｘｎｅｒら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５６９：８６〜１０３，１
９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ８：１７〜２１，１９９０；米国
特許第４，６０３，１１２号、同第４，７６９，３３０号および同第５，０１７
，４８７号；ＷＯ８９／０１９７３；米国特許第４，７７７，１２７号；ＧＢ
２，２００，６５１；ＥＰ０，３４５，２４２号；ＷＯ９１／０２８０５
；Ｂｅｒｋｎｅｒ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６：６１６〜６２７，１９８
８；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５２：４３１〜４３４，１９９
１；Ｋｏｌｌｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：２
１５〜２１９，１９９４；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１１４９８〜１１５０２，１９９３；Ｇｕｚｍ
ａｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８８：２８３８〜２８４８，１９９３；なら
びにＧｕｚｍａｎら、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．７３：１２０２〜１２０７，１９９３。
このような発現系にＤＮＡを組み込むための技術は、当業者に周知である。ＤＮ
Ａはまた、例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：１７４５〜１７４
９，１９９３およびＣｏｈｅｎによる総説、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：１６９１
〜１６９２，１９９３に記載されているように「裸（ｎａｋｅｄ）」であっても
よい。裸のＤＮＡの取りこみは、細胞に効率的に移動される生分解性ビーズへの
ＤＮＡコーティングにより増大され得る。

【００９９】当業者に公知の任意の適切なキャリアが本発明の薬学的組成物において使用さ
れ得るが、キャリアの型は、投与の様態に依存して変化する。本発明の組成物は
、例えば、局所投与、経口投与、経鼻投与、静脈投与、頭蓋内投与、腹腔内投与
、皮下投与、または筋肉内投与を含む、投与の任意の適切な様式のために処方さ
れ得る。非経口投与（例えば、皮下注射）のために、キャリアは、好ましくは水
、生理食塩水、アルコール、脂肪、ワックスまたは緩衝液を含む。経口投与のた
めには、任意の上記のキャリアまたは固体キャリア（例えば、マンニトール、ラ
クトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タル
カム（滑石粉）、セルロース、グルコース、スクロースおよび炭酸マグネシウム
）が用いられ得る。生分解性ミクロスフェア（微粒子）（例えば、ポリラクテー
トポリグリコレート）がまた、本発明の薬学的組成物のためのキャリアとして
使用され得る。適切な生分解性ミクロスフェアは、例えば、米国特許第４，８９
７，２６８号および同第５，０７５，１０９号において開示されている。

【０１００】このような組成物はまた、緩衝液（例えば、中性の緩衝化生理食塩水またはリ
ン酸緩衝化生理食塩水）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロ
ースまたはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはア
ミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたは
グルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）および／または
保存剤（防腐剤）を含み得る。あるいは、本発明の組成物は、凍結乾燥剤として
処方され得る。化合物はまた、周知の技術を用いてリポソーム内にカプセル化さ
れ得る。

【０１０１】任意の種々の非特異的免疫応答エンハンサーが、本発明のワクチンに使用され
得る。例えば、アジュバントが含まれ得る。ほとんどのアジュバントは、抗原を
迅速な異化から防御するように設計された物質（例えば、水酸化アルミニウムま
たは鉱油）および免疫応答の刺激因子（例えば、ｌｉｐｉｄＡ（脂質Ａ）、Ｂ
ｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓまたはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のタンパク質）を含む。適切なアジュバントは、
例えば、フロイント不完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓＩｎｃｏｍｐｌｅ
ｔｅＡｄｊｕｖａｎｔ）およびフロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’
ｓＣｏｍｐｌｅｔｅＡｄｊｕｖａｎｔ）（ＤｉｆｃｏＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ），ＭｅｒｃｋＡｄｊｕｖａｎｔ６５（Ｍｅ
ｒｃｋａｎｄＣｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ），ミョウバ
ン，生分解性ミクロスフェア，モノホスホリルリピッドＡ（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐ
ｈｏｒｙｌｌｉｐｉｄＡ）およびｑｕｉｌＡとして市販されている。サイ
トカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦまたはインターロイキン−２、インターロイキ
ン−７もしくはインターロイキン−１２）がまた、アジュバントとして使用され
得る。

【０１０２】本明細書において記載される組成物は、徐放性処方物（すなわち、投与後、化
合物の緩徐な放出をもたらすカプセルまたはスポンジのような処方物）の一部と
して投与され得る。このような処方物は一般に、周知の技術を用いて調製され得
、そして例えば、経口、直腸または皮下移植により、または所望の標的部位への
移植により投与され得る。徐放性処方物は、キャリアマトリックスに分散される
か、および／または速度制御膜に囲まれるレザーバ内に含まれる、ポリペプチド
、ポリヌクレオチドまたは抗体を含み得る。このような処方物内での使用のため
のキャリアは、生体適合性であり、そしてまた生分解性であり得る；好ましくは
、この処方物は比較的一定レベルの活性成分の放出を提供する。徐放性処方物内
に含まれる活性な化合物の量は、移植の部位、放出の速度および予期される期間
、ならびに処置または予防されるべき状態の性質に依存する。

【０１０３】任意の種々の送達ビヒクルは、薬学的組成物およびワクチン内で使用され免疫
応答の生成を容易にし得る。送達ビヒクルは、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞
およびマクロファージ）を含む。このような細胞は、Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ
−６７．２をコードするポリヌクレオチド（またはそれらの部分もしくは他の改
変体）でトランスフェクトされ得、その結果Ｍｔｂ−８１またはＭｔｂ−６７．
２ポリペプチドが、この細胞表面で発現される。このようなトランスフェクショ
ンは、エクスビボで生じ得、次いでこのようなトランスフェクトされた細胞を含
む組成物またはワクチンが、本明細書において開示されるように治療目的で用い
られ得る。あるいは、樹状細胞または他の抗原提示細胞を標的する遺伝子送達ビ
ヒクルは、患者に投与され得、その結果インビボで生じるトランスフェクション
を生じる。樹状細胞のインビボトランスフェクションおよびエキソビボトランス
フェクションは、一般に、当該分野で公知の任意の方法（例えば、ＷＯ９７／
２４４４７に記載される方法、またはＭａｈｖｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙａ
ｎｄｃｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ７５：４５６〜４６０，１９９７に記載され
る遺伝子銃アプローチ）を用いて実施され得る。

【０１０４】（結核治療）本発明のさらなる局面において、本明細書において記載される組成物は、結核
の免疫治療に用いられ得る。このような方法において、薬学的組成物およびワク
チンが、代表的に患者に投与される。本明細書において用いられる場合、「患者
」とは、任意の温血動物、好ましくはヒトをいう。患者は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓで感染され得るか、または感染され得ない。従って、上記の薬学的組
成物およびワクチンは、結核の発生を予防するために、または結核に罹患した患
者を処置するために用いられ得る。薬学的組成物およびワクチンは、他の治療剤
での処置の前に、それと同時に、またはその後に投与され得る。

【０１０５】特定の実施形態において、免疫療法は、能動的免疫療法であり得る。ここでは
、処置は、免疫応答改善剤（例えば、腫瘍ワクチン、細菌性アジュバントおよび
／またはサイトカイン）の投与でＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対して反応す
る内因性宿主免疫系のインビボ刺激に依存する。

【０１０６】他の実施形態において、免疫療法は、受動的免疫療法であり得る。ここでは、
処置は、確立された免疫応答性（インタクトな宿主免疫系に依存する必要はない
）を有する因子（例えば、効果細胞または抗体）の送達を含む。効果細胞の例と
しては、本明細書に提供されるポリペプチドを発現する、Ｔリンパ球（例えば、
ＣＤ８⁺細胞傷害性Ｔリンパ球およびＣＤ４⁺Ｔヘルパー腫瘍浸潤性リンパ球）、
キラー細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞およびリンホカイン活性化キラー細
胞）、Ｂ細胞および抗原提示細胞（例えば、樹状細胞およびマクロファージ）が
挙げられる。本明細書に列挙されるポリペプチドに特異的なＴ細胞レセプターお
よび抗体レセプターは、養子免疫療法のために他のベクターまたは効果細胞中に
クローニングされ、発現され、そして移入され得る。本明細書に提供されるポリ
ペプチドはまた、受動免疫療法のための抗体または抗イディオタイプ抗体（上記
および米国特許第４，９１８，１６４号に記載される）を生成するために用いら
れ得る。

【０１０７】効果細胞は、本明細書において記載されるように、インビトロでの増殖により
養子免疫治療のために十分な量が得られ得る。単一の抗原特異的効果細胞を、イ
ンビボでの抗原認識の保持のための数十億まで増殖させるための培養条件は当該
分野で周知である。このようなインビトロの培養条件は代表的に、しばしばサイ
トカイン（例えば、ＩＬ−２）および分裂しない支持細胞の存在下で、抗原での
間欠的刺激を用いる。上で述べたように、本明細書において提供される免疫反応
性ポリペプチドは、抗原特異的Ｔ細胞培養を急速に増殖するために用いられ、免
疫治療に十分な数の細胞を生成し得る。詳細には、抗原提示細胞（例えば、樹状
細胞、マクロファージまたはＢ細胞）は、当該分野で周知の標準的技術を用いて
、免疫反応性ポリペプチドでパルスされるか、または１つ以上のポリヌクレオチ
ドでトランスフェクトされ得る。例えば、抗原提示細胞は、組換えウイルスまた
は他の発現系における発現を増大するのに適切なプロモーターを有するポリヌク
レオチドでトランスフェクトされ得る。治療において使用するための培養された
効果細胞は、増殖されそして広範に流通され、そしてインビボで長期間生存され
得なければならない。培養された効果細胞がインビボで増殖されそしてＩＬ−２
を補充された抗原での反復刺激により、長期間、かなり多数生存するように導入
され得ることが研究で示されている（例えば、Ｃｈｅｅｖｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ１５７：１７７、１９９７を参照のこと）。

【０１０８】本明細書において提供されるポリペプチドはまた、Ｍｔｂ−８１反応性Ｔ細胞
またはＭｔｂ−６７．２反応性Ｔ細胞を生成および／または単離するために用い
られ得る。次いで、これらは患者に投与され得る。このような技術の１つにおい
て、抗原特異的Ｔ細胞株は、開示されたポリペプチドの免疫原性部分に対応する
短いペプチドでのインビボ免疫により生成され得る。得られた抗原特異的ＣＤ８ ⁺ ＣＴＬクローンは、患者から単離され、標準的な組織培養技術を用いて増殖さ
れ、そして患者に戻され得る。

【０１０９】ポリペプチドはまた、結核のエキソビボ処置のために用いられ得る。例えば、
免疫系の細胞（例えば、Ｔ細胞）は、市販の細胞分離システム（例えば、Ｃｅｌ
ｌＰｒｏＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ’ｓ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）ＣＥＰＲＡ
ＴＥ^TMシステム）を用いて、患者の末梢血から単離され得る（米国特許第５，２
４０，８５６号；米国特許第５，２１５，９２６号；ＷＯ８９／０６２８０；
ＷＯ９１／１６１１６およびＷＯ９２／０７２４３を参照のこと）。分離し
た細胞は、抗原特異的Ｔ細胞を提供するために、送達ビヒクル（例えば、マイク
ロスフェア）内に含まれる１つ以上の免疫反応性Ｍｔｂ−８１ポリペプチドで刺
激される。次いで、抗原特異的Ｔ細胞の集団は標準的技術を用いて増殖され、そ
してこの細胞は、例えば、Ｃｈａｎｇら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅ
ｍａｔｏｌ．２２；２１３，１９９６により記載されるように患者に戻し投与さ
れ得る。

【０１１０】別の実施形態において、同系または異系の樹状細胞は、Ｍｔｂ−８１またはＭ
ｔｂ−６７．２の少なくとも免疫原性部分に対応するペプチドでパルスされ得る
。得られた抗原特異的樹状細胞は、患者に移入され得るか、またはＴ細胞を刺激
して抗原特異的Ｔ細胞（次にこれは患者に投与され得る）を提供するのに使用さ
れるかのいずれかであり得る。あるいは、本明細書において列挙されるポリペプ
チドを発現するベクターは、患者から得られた抗原提示細胞に導入され得、そし
て同じ患者への戻し移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｂａｃｋ）のためにエキソビ
ボでクローン的に増殖され得る。トランスフェクトされた細胞は、当該分野で公
知の任意の手段（好ましくは、静脈投与、腔内投与または腹腔内投与による滅菌
形態）を用いて患者に再導入され得る。

【０１１１】投与の経路および頻度、ならびに投薬量は、患者間で異なり、そして標準的技
術を用いて容易に確立され得る。概して、薬学的組成物およびワクチンは、注射
（例えば、皮内、筋肉内、静脈内、または皮下）により、経鼻的に（例えば、吸
引により）または経口的に、投与され得る。好ましくは、５２週間にわたって１
〜１０用量の間が投与され得る。好ましくは、１ヶ月の間隔で６用量が投与され
、そしてブースター（追加）ワクチン接種がその後定期的に投与され得る。交互
のプロトコールが個々の患者に適切であり得る。適切な用量は、上記のように投
与された場合、ワクチン接種されていない患者に比較して、ワクチン接種された
患者で、改善された臨床的結果（例えば、症状の軽減または生存の延長）を導く
免疫応答を生じ得る化合物の量である。一般に、１つ以上のポリペプチドを含む
薬学的組成物およびワクチンについて、用量中に存在する各ポリペプチドの量は
、宿主の体重（ｋｇ）あたり、約１００μｇ〜５ｍｇにわたる。適切な用量サイ
ズは、患者の大きさで変化するが、代表的には約０．１ｍＬ〜約５ｍＬにわたる
。

【０１１２】以下の実施例は、例示の目的で提供されるものであり、限定の目的ではない。

【０１１３】（実施例）（実施例１）（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓタンパク質の調製）この実施例は、ＨＩＶ陽性個体に存在する抗体を認識するＭ．ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓタンパク質の主な特徴を示す。

【０１１４】診断方法に適切なＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原を同定するため、Ｍ．ｔ
ｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ株Ｈ₃₇Ｒｖ由来の可溶性粗タンパク質（ＣＳＰ；Ｃｏｌ
ｏｒａｄｏＳｔａｔｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙから入手）の高分子量領域を２
次元ゲル電気泳動および２次元ウエスタン分析を用いて試験した。この分析のた
めのプローブは、モノクローナル抗体ＩＴ５７（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ６０：３９２５〜３９２７，１９９２に概説される）であっ
た。これは、ＵＮＰＤ／ＷｏｒｌｄＢａｎｋ／ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯ
ｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎＳｐｅｃｉａｌＰｒｏｇｒａｍｍｅｆｏｒＲｅ
ｓｅａｒｃｈａｎｄＴｒａｉｎｉｎｇｉｎＴｒｏｐｉｃａｌＤｉｓｅ
ａｓｅｓから入手した。この抗体は、この高分子量領域における８２ｋＤａのＭ
．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原と反応することが公知であったが、タンパク質
抗原の同定は、以前には解明されていなかった（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ５６：１９９４〜１９９８，１９８８；Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６０：３９２５〜３９２７，１９９２を参照のこ
と）。

【０１１５】ＣＳＰを、Ｃ１８カラム上の逆相クロマトグラフィーにより分離した。ＣＳＰ
のほぼ７５ｍｇを、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む水に溶解し、Ｐ
ｒｅｐＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を用いてＣ１８逆相カラ
ム（２２×２５０ｍｍ、ＴｈｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓＧｒｏｕｐ，Ｈｅｓ
ｐｅｒｉａ，ＣＡ）に注入し、そして１０ｍｌ／分の流速で０．１％ＴＦＡ含有
水（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）の二元勾配で溶出した。Ｂの勾配
を６０分で０〜１００％に増加させた。画分を１分間隔で収集した。

【０１１６】各画分をイムノブロット分析により個々に試験し、ＩＴ５７抗体に対する反応
性を有する画分を同定した。個々のＨＰＬＣ画分を、製造業者の指示どおり、４
〜２０％勾配ゲル（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）上でＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥにより分離し、その後ニトロセルロースに転写した。タンパク質をニトロセ
ルロースメンブレン（ＨｙｂｏｎｄＣＥｘｔｒａ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒ
ｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）に転写し、そして０．５ＭＮａＣｌ
を含有するリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有
）（ＰＢＳＴ）でブロックした。ブロットをＰＢＳで洗浄し、そしてそれぞれ、
１Ｄおよび２Ｄゲルについて０．５ＭＮａＣｌ含有ＰＢＳＴでの１：５０稀釈
または１：７０稀釈の培養上清でＩＴ−５７抗体を用いてプローブした。一晩の
インキュベーション後、ブロットを洗浄し、そしてＩｇＧ特異的ロバ抗マウス二
次抗体ＥＣＬ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ
Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を用いてプローブした。ＰｉｅｒｃｅＥＣＬプロトコール
（ＰｉｅｒｃｅＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）に従っ
てウエスタンを発色させた。

【０１１７】抗体ＩＴ−５７に対する反応性を有する画分３８を、上記のようにウエスタン
分析により同定し、そして２Ｄ−ＰＡＧＥおよびウエスタン分析によりさらに評
価した。２Ｄ−ＰＡＧＥ分析に関して、画分３８を約４００μｌに濃縮し、そし
て４０μｌを４００μｌの再水和溶液（８Ｍ尿素、０．５％ＣＨＡＰＳ（ｗ
／ｗ）、１５ｍＭＤＴＴおよび０．２％（ｗ／ｗ）ＰａｒｍａｌｙｔｅｐＨ
３〜１０を含む）に添加した。この溶液を、再水和カセットに置き、そして１８
ｃｍのｐＨ３〜１０のＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＤｒｙｓｔｒｉｐｓ（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を一晩水和させた
。この水和したストリップをリンスして、そして以下の勾配：０〜３００ボルト
／５分、３００〜３５００ボルト／６時間および３５００の後８０，０００ボル
ト／時間に従いＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＤｒｙＳｔｒｉｐキットとともにマルチ
ホル（ｍｕｌｔｉｐｈｏｒ）ＩＩ電気泳動システムおよびＰｈａｒｍａｃｉａ
ＢｉｏｔｅｃｈのＥＰＳ３５００ＸＬ電源を使用して集束させた。

【０１１８】１Ｄコントロールレーンのチューブゲルを、１０μｌの各画分を１０μｌのＴ
ｒｉｓ酢酸平衡緩衝液に添加することによって２％（ｗ／ｖ）ＤＴＴおよび２％
（ｗ／ｖ）アガロースを含むＥＳＡ（Ｃｈｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＭＡ）から作製し
た。この溶液を１００℃で５分間熱した。分子量標準物のチューブゲルを、２μ
ｌのＢｉｏｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）の低範囲銀標準を８μｌの水およ
び２％（ｗ／ｖ）ＤＴＴおよび２％（ｗ／ｖ）アガロースを含む１０μｌのＴｒ
ｉｓ酢酸平衡緩衝液に添加して、そして５分間煮沸することによって作製した。

【０１１９】集束させたＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＤｒｙｓｔｒｉｐを、６Ｍ尿素、２％（
ｗ／ｖ）ＳＤＳおよび２％（ｗ／ｖ）ＤＴＴを含む１０ｍｌ／ストリップの平衡
緩衝液において平衡化し、そして１５分間緩やかに揺れ動かした。この緩衝液を
、デカントし、次いでＤｒｙｓｔｒｉｐを、６Ｍ尿素および２．５％ヨード
アセトアミドを含む１０ｍｌ／ストリップのＴｒｉｓ酢酸平衡緩衝液において平
衡化し、そして１５分間緩やかに揺れ動かした。ストリップを、ＤｒｙＳｔｒｉ
ｐと同一のＨＰＬＣ画分を含む１ｃｍチューブゲルおよびＢｉｏｒａｄの低範囲
銀標準物を含む１ｃｍチューブゲルの側面に沿ってＥＳＡのＩｎｖｅｓｔｉｇａ
ｔｏｒ１０％均質二重ゲルの上部に置いた。このゲルを、下部（アノード）タ
ンクにおいてＴｒｉｓ酢酸泳動緩衝液および上部（カソード）タンクにおいてＴ
ｒｉｓトリシンＳＤＳ緩衝液を含む（両方ともＥＳＡにより供給された）ＥＳＡ
Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ２Ｄ電気泳動システムで２０ｍＡ／ゲルで一晩泳
動した。

【０１２０】１つのゲルを、ニトロセルロースに転写し、そしてＩＴ５７抗体を使用して免
疫ブロットした。他のゲルを銀染色した。２Ｄ−ＰＡＧＥ免疫ブロット分析に関
して、このタンパク質を、ニトロセルロース膜（ＨｙｂｏｎｄＣＥｘｔｒａ
，Ａｍｅｒｓｈａｍ，ＡｒｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）に転写し、
そして０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（
ＰＢＳＴ）中の０．５ＭＮａＣｌでブロックした。ブロットを、ＰＢＳで洗浄
し、そしてＰＢＳＴ中０．５ＭＮａＣｌ中の培養上清で７０倍希釈したＩＴ−
５７抗体を用いてプローブした。一晩インキュベート後、ブロットを洗浄し、そ
してＩｇＧ特異的ロバ抗マウス二次抗体ＥＣＬ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，ＰＡ）でプローブした。ウエスタ
ンをＰｉｅｒｃｅＥＣＬプロトコル（ＰｉｅｒｃｅＳｕｐｅｒＳｉｇｎａ
ｌ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）に従い現像した。銀染色したゲルに関して、この
ゲルを１０％酢酸を含む４０％メタノール溶液において１時間より長く、一般的
には一晩固定化した。次いで、このゲルを３０％エタノール溶液で３回リンスし
て、その後ナノ純水（ｎａｎｏｐｕｒｅｗａｔｅｒ）中０．０２％チオ硫酸
ナトリウムにおいて１分間還元した。還元後、このゲルを、ナノ純水で３回洗浄
（各洗浄につき２０秒間）し、その後このゲルをナノ純水中０．２％硝酸銀お
よび０．０２％ホルムアルデヒドにおいて２０分間インキュベートした。この
ゲルを、３回洗浄（各洗浄につき２０秒間）し、その後ナノ純水中０．０５％
ホルムアルデヒドおよび０．０００５％チオ硫酸ナトリウムを含む３％炭酸
ナトリウムにおいて発色させた。このゲルを十分に発色させた後、この化学プロ
セスを、５％酢酸の添加により停止させた。このゲルをナノ純水でリンスし、そ
して０．１％酢酸溶液中で４℃で保存した。

【０１２１】免疫ブロット分析を、ニトロセルロース膜をＡｕｒｏｄｙｅＦｏｒｔｅ（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍＣｏｒｏ．，ＡｒｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉｇｈｔ，ＩＬ）総タン
パク質染料で染色することにより銀染色と相関させた。簡潔には、ＥＣＬによる
免疫ブロットの現像後、この膜をＰＢＳ＋０．３％Ｔｗｅｅｎにおいて５分間
ずつ３回洗浄し、ナノ純水においてリンスし、次いで４０ｍｌのＡｕｒｏｄｙｅ
Ｆｏｒｔｅ色素において室温で所望のタンパク質が可視化されるまで緩やかに揺
れ動かしながらインキュベートした。

【０１２２】ＩＴ−５７反応性タンパク質を、ゲルから切り出し、そして１００μｌのアセ
トニトリルの添加により脱水した。この溶媒を除き、そして１μｌの１ＭＤＴ
Ｔを含む１００μｌの５０ｍＭ重炭酸アンモニウムで置換し、再水和させ、次い
で５７℃で１時間インキュベートした。この溶媒を除去し、このゲルを１００μ
ｌのアセトニトリルの添加により脱水した。この溶媒を、室温に平衡化した後、
５０ｍＭ重炭酸アンモニウム中の５５ｍＭヨードアセトアミドで置換し、そし
て時々ボルテックスしながら室温で４５分間暗所でインキュベートした。このゲ
ルを５０ｍＭ重炭酸アンモニウム、アセトニトリル、５０ｍＭ重炭酸アンモニウ
ム、およびアセトニトリルで順次洗浄し、その後、スピードバック（ｓｐｅｅｄ
ｖａｃ）コンセントレータにおいて完全に脱水した。６μｌの還元的にアルカリ
化したトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を、１００μｌの
５０ｍＭ重炭酸アンモニウムに添加して、生じた懸濁液を３７℃で一晩インキ
ュベートした。この上清を取り出し、そしてトリプシン分解ペプチドを１００ｍ
Ｍ重炭酸アンモニウムでの１回の洗浄、続いて５％蟻酸を含有する５０％アセ
トニトリルの３回の順次の洗浄によって抽出した。この抽出物をプールし、スピ
ードバックで３０μｌ容量に濃縮し、そして質量分析まで−２０℃で保存した。

【０１２３】トリプシン分解ペプチドのアリコートをＣ１８マイクロキャピラリーカラム（
７５μｍｉ．ｄ．×１２ｃｍ）にロードし、そして１２分間かけてアセトニト
リルの濃度を０％から８０％まで上昇させながらアセトニトリルおよび０．１Ｍ
酢酸を使用してエレクトロスプレーイオン化源を備えた三重四重極質量分析機
（ｔｒｉｐｌｅｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
）（ＴＳＱ７０００；ＦｉｎｎｉｇａｎＭＡＴ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ）中
へと溶出した。質量スペクトルを、３００〜１４００の原子質量単位の質量範囲
にわたって１．５秒毎に得た。候補ペプチド質量を、トリプシン消化物をコント
ロール消化物と比較することによって同定した。

【０１２４】タンパク質抗原を配列決定するために、タンパク質のさらなるアリコートをジ
フェニル分別によって生成した。約５ｍｇのＣＳＰを０．５％トリフルオロ酢酸
（ＴＦＡ）を含む水に溶解した。このサンプルをＶｙｄａｃジフェニル逆層カラ
ム（カタログ番号２１９ＴＰ５４１５：ＴｈｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓＧｒ
ｏｕｐ，Ｈｅｓｐｅｒｉａ，ＣＡ）に注入し、ＡＫＴＡｅｘｐｌｏｒｅｒ１
００分離システム（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ
ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）において水中０．５％ＴＦＡ（緩衝液
Ａ）およびアセトニトリル（緩衝液Ｂ）の二元勾配で溶出した。このカラムを３
０％Ｂにおいて平衡化し、そして直線的勾配を３０分の経過にわたって２ｍｌ／
分で３０％〜６５％緩衝液Ｂで行った。画分を１．５ｍｌ間隔で収集し、そして
上記のようにＩＴ５７抗体を使用してウエスタンブロットによって分析した。こ
の抗体によって認識されるタンパク質を含む画分は、約５０％Ｂで溶出し、そし
てプールし、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。このゲルを、銀染色し
、そして上記のようにインサイチュで消化した。

【０１２５】衝突活性化解離（ＣＡＤ）分子スペクトルをｍ／ｚ４４４および５３１で（Ｍ
＋２Ｈ）２＋イオンで記録した。このＣＡＤスペクトルを、新たにか、またはペ
プチド配列タグによって解釈した（ＡｎａｌＣｈｅｍ．６６（２４）：４３９
０−９９，１９９４）。４４４２＋の配列は、ＣａｔＧタンパク質に対応し
、５３１２＋の配列は、Ｍｔｂ−８１抗原に対応した。使用されたＭ．ｔｕｂ
ｅｒｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列は、刊行された文献（Ｎａｔｕｒｅ３９３（６
６８５）：５３７−４４，１９９８）由来であった。

【０１２６】（実施例２）（Ｍｔｂ−６７．２の調製）本実施例は、Ｍｔｂ−６７．２の同定および調製を例証する。

【０１２７】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のＣＳＰの高分子量領域を、２次元ゲル電
気泳動を使用して試験した。高分子量領域において５つのタンパク質スポットを
同定し、これらを個々に切りだし、酵素的に分解し、そして質量分析に供した（
実施例１に記載のように）。同定したタンパク質のうち１つの配列を決定した。
そしてこれを、本明細書中でＭｔｂ−８１として規定する。この高分子量領域中
を移動するバンドにおいてＭｔｂ−８１と共に存在することが明らかである別の
タンパク質が、Ｍｔｂ−６７．２（図５；配列番号５）であることを見出した。

【０１２８】（実施例３）（Ｍｔｂ−８１ポリヌクレオチドの調製）本実施例は、Ｍｔｂ−８１をコードするＤＮＡ分子、およびその発現産物の調
製を例証する。

【０１２９】Ｅ．ｃｏｌｉにおける発現のためのＭｔｂ−８１配列を得るために、ＰＣＲ分
析を、以下のプライマー（配列番号＿および＿）でゲノムＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌ
ｏｓｉｓＤＮＡを用いて行った：ＰＤＭ−２６８５’ＣＴＡＡＧＴＡＧＴＡＣＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＴＣＧＧ
ＴＧＧＧＣ３’ Ｔｍ＝６６℃ ＰＤＭ−２６９５’ＣＡＧＴＧＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＡＧＣＧＧＧＣＣＧＣ
ＡＴＣＧＴＣＡＣ３’ Ｔｍ＝６８℃。

【０１３０】ＰＣＲ反応系は以下を含んでいた：１０μＬ１０×Ｐｆｕ緩衝液１μＬ１０ｍＭｄＮＴＰ２μＬ各１０μＭオリゴヌクレオチド８３μＬ滅菌水１．５μＬＰｆｕＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）５０ｎｇＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓゲノムＤＮＡ。

【０１３１】反応系は、９６℃で２分間加熱した；９６℃（２０秒間）、６７℃（１５秒間
）、および７２℃（５分間）を４０回繰り返し；次いで、７２℃で５分間インキ
ュベートした。このＰＣＲ産物を、ＳｃａＩおよびＥｃｏＲＩで消化し、そし
てＥｃｏ７２ＩおよびＥｃｏＲＩで消化したｐＰＤＭＨｉｓ（Ｎｏｖａｇ
ｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩの改変ｐＥＴ２８ベクター）にクローン化した。配
列を確認し、そしてＰＣＲ産物をＢＬ２１ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍ
ａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）に形質転換した。単一コロニーを、カナマイシン（３０μ
ｇ／ｍＬ）およびクロラムフェニコール（３４μｇ／ｍＬ）を含有するＬＢ培地
に植菌した。２４ｍＬの一晩培養物を使用し、バフル付きフラスコ（ｂａｆｆｌ
ｅｄｆｌａｓｋ）において同一の抗生物質を含有する１リットルの２×ＹＴ培
地に植菌した。４リットルを一度に増殖させた。０．３５と０．５５との間のＯ
Ｄ₅₆₀で、フラスコを最終濃度１ｍＭＩＰＴＧで誘導した。この細菌を、さら
に４時間増殖させ、その後収集した。このペレットを、遠心分離し、そして１×
ＰＢＳで洗浄し、次いで再び遠心分離した。ペレットを、溶解緩衝液（２０ｍＭ
Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭＮａＣｌおよび０．１％ＤＯＣ）中
に再懸濁し、−２０℃で一晩凍結した。

【０１３２】次いで、このペレットを解凍しかつ超音波処理し、そして高速遠心分離を使用
して、封入体ペレットおよび可溶性上清に分離した。このＭｔｂ−８１タンパク
質を、封入体ペレットにおいて見出し、そしてこのタンパク質を２０ｍＭＴｒ
ｉｓ（ｐＨ８．０）、３００ｍＭＮａＣｌ中０．５％ＣＨＡＰＳで２回洗浄
し、次いで結合緩衝液（２０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１００ｍＭＮａＣ
ｌ、８Ｍ尿素）において可溶化した。次いで、このペレットをＮｉｃｋｅｌＮ
ＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）にバッチ結合し、次いでＫｏｎｔｅｓ（ＶＷＲ）重力
フローカラムに通した。最初の洗浄液は、２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）、
３５０ｍＭＮａＣｌ、１．０％ＤＯＣ、１０ｍＭイミダゾール、８Ｍ尿素
であった。第２の洗浄液は、最初と同じであるが、ＤＯＣは除いた。溶出を、段
階的な様式（最初は２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭＮａＣｌ
、５０ｍＭイミダゾール、８ｍＭ尿素である）において行った。第２は、イミ
ダゾール濃度を１００ｍＭに上昇させた。第３の溶出は、イミダゾールを５００
ｍＭに上昇させた。１／２未満の封入体は、Ｎｉｃｋｅｌに結合したままではな
く、最初のフロースルーにおいて解離した。このタンパク質は、最も低い濃度の
イミダゾールで溶出し始め、そしてイミダゾール濃度が上昇するにつれてカラム
から徐々に解離した。目的のタンパク質を含む溶出液をプールし、次いで１０ｍ
ＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）に対して透析した。いくつかの透析の変化の後、こ
のタンパク質をＶｉｖａｓｐｉｎ（ＩＭＳ）３０ｋＤ分画コンセントレータにお
いて濃縮し、次いで濾過滅菌した。

【０１３３】全タンパク質組成分析およびタンパク質の推定の構造的なクラス（ＤＮＡＳＴ
ＡＲ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）でのタンパク質不定形適用プログラム）の結果を
以下の表Ｉおよび表ＩＩに示す。

【０１３４】

【表１】

【０１３５】

【表２】発現されたＭｔｂ−８１は、ウエスタン分析によりマウスモノクロナール抗体
ＩＴ−５７によって認識されなかった。この反応性の欠如は、Ｅ．ｃｏｌｉ発現
系における限界に起因し得る（例えば、このタンパク質が翻訳後修飾されなかっ
たかもしれず、または不適切に折り畳まれたかもしれない）。あるいは、ＩＴ−
５７と反応する別のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓタンパク質が未だ同定されて
いないかもしれない。Ｍｔｂ−８１タンパク質は、ＨＩＶ陽性血清およびＭ．ｔ
ｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性血清に対して反応性であった。

【０１３６】（実施例４）（Ｍｔｂ−８１を使用する結核の検出）本実施例は、ＨＩＶ同時感染を患うかまたは患わない患者におけるＭ．ｔｕｂ
ｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の血清診断についてのＭｔｂ−８１の使用を例証する。

【０１３７】Ｍｔｂ−８１の反応性を、４７人の正常な（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに
感染していない）個体、ＨＩＶ陽性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性の２
７人の患者、ならびにＨＩＶ陰性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性の６７
人の患者に由来する血清を用いて決定した。正常な個体の血清から得られる平均
シグナル＋３標準偏差により定義されるカットオフ（ｃｕｔｏｆｆ）値を超える
場合に、サンプルを、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性であると定義した。

【０１３８】ＥＬＩＳＡをＭｔｂ−８１（２００ｎｇ／ウェル）でコーティングした９６
ウェルマイクロタイタープレート（ＣｏｒｎｉｎｇＥａｓｉｗａｓｈ）におい
て行った。コーティングは、４℃で一晩であった。次いで、プレートを吸引して
、そして１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で室温
で２時間ブロックして、続いて０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ
Ｔ）で洗浄した。血清（ＰＢＳＴに１／２５に希釈）をウェルに添加して、そし
て室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後に、ウェルをＰＢ
ＳＴで６回洗浄して、続いて１／２０，０００希釈のプロテインＡＨＲＰ結合
体とともに３０分間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳＴで６回
洗浄して、そしてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質とともにさらに１５分
間インキュベートした。この反応を、１Ｎ硫酸の添加によって停止させ、そして
プレートを、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで読み取った。
このアッセイのカットオフは、陰性集団の平均＋この平均の３標準偏差であった
。

【０１３９】結果を図２に示す。ＨＩＶ陽性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性であっ
た２７人の患者のうち２５人に由来する血清は、カットオフ値を超えるＯＤ₄₅₀
を有した。正常な血清のいずれもが、このカットオフを超えず、そしてＨＩＶ陰
性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性の６７人の患者のうち３７人の患者由
来の血清サンプルは、このカットオフ値を超えた。これらの結果は、Ｍ．ｔｕｂ
ｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の血清診断についてのＭｔｂ−８１の使用を実証する。

【０１４０】（実施例５）（Ｍｔｂ−６７．２ポリヌクレオチドの調製）本実施例は、Ｍｔｂ−６７．２をコードするＤＮＡ分子の調製、およびその発
現産物を例証する。

【０１４１】Ｅ．ｃｏｌｉでの発現についてＭｔｂ−６７．２配列を得るために、以下のプ
ライマー（配列番号および）を用いてゲノムＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
ＤＮＡを使用してＰＣＲ分析を行った：

【０１４２】

【化１】含まれるＰＣＲ反応物：１０μＬ１０×Ｐｆｕ緩衝液１μＬ１０ｍＭｄＮＴＰ２μＬ各１０μＭオリゴヌクレオチド８３μＬ滅菌水１．５μＬＰｆｕＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）５０ｎｇＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓゲノムＤＮＡ反応物を、９４℃に２分間加熱して；９４℃（３０秒間）、５０℃（１４５秒
間）、および７２℃（３分間）を３５回サイクル化して；次いで、７２℃で５分
間インキュベートした。ＰＣＲ産物を、ＮｄｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し
て、そしてＮｄｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化したｐＥＴ１７ｂ（Ｎｏｖａｇ
ｅｎ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）中にクローニングした。配列を確認して、そして
ＰＣＲ産物を、ＢＬ２１ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗ
Ｉ）に形質転換した。１つのコロニーを、アンピシリン（１００μｇ／ｍＬ）お
よびクロラムフェニコール（３４μｇ／ｍＬ）を含むＬＢ培地に接種した。２４
ｍＬの一晩の培養物を使用して、バフル（ｂａｆｆｌｅｄ）フラスコにおいて、
同じ抗生物質を含む１リットルの２×ＹＴブロスに接種した。４リットルを一度
に増殖させた。０．３５と０．５５との間のＯＤ₅₆₀で、フラスコを、１ｍＭの
最終濃度のＩＰＴＧで誘導した。細菌をさらに４時間増殖させ、その後に回収し
た。プレートを遠心分離して、そして１×ＰＢＳで洗浄し、次いで再度遠心分離
した。プレートを溶解緩衝液（２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）．１００ｍＭ
ＮａＣｌおよび０．１％ＤＯＣ）中に再懸濁して、そして−２０℃で一晩凍結
した。

【０１４３】次いで、ペレットを融解して、そして超音波処理して、そして高速遠心分離を
使用して、封入体ペレットおよび可溶性上清を分離した。Ｍｔｂ−６７．２タン
パク質は、可溶性上清中にあることが見出され、そして結合緩衝液（２０ｍＭ
Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０），１００ｍＭＮａＣｌ，８Ｍ尿素）中に可溶化した。
次いで、ペレットをＮｉｃｋｅｌＮＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）にバッチ結合さ
せ、次いでＫｏｎｔｅｓ（ＶＷＲ）比重フローカラム（ｇｒａｖｉｔｙｆｌｏ
ｗｃｏｌｕｍｎ）に通した。第１の洗浄は、２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０
）、３５０ｍＭＮａＣｌ、１．０％ＤＯＣ、１０ｍＭイミダゾール、８Ｍ尿素
であった。第２の洗浄は、第１と同じであったが、ＤＯＣを含まなかった。溶出
を、段階的（ｓｔｅｐｗｉｓｅ）様式で行い、第１は、２０ｍＭＴｒｉｓ（
ｐＨ８．０）、１００ｍＭＮａＣｌ、５０ｍＭイミダゾール、８ｍＭ尿素であ
った。第２は、イミダゾール濃度を１００ｍＭまで増大させた。第３の溶出は、
イミダゾールを５００ｍＭまで増大させた。目的のタンパク質を含む溶出液をプ
ールして、次いで１０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）に対して透析した。数回の
透析の交換の後に、タンパク質を滅菌濾過した。

【０１４４】タンパク質全体の組成分析およびタンパク質の推定構造クラス（ＤＮＡＳＴＡ
Ｒ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）におけるＰｒｏｔｅａｎ適用プログラム）の結果を
、以下の表ＩＩＩおよび表ＩＶに示す。

【０１４５】

【表３】

【０１４６】

【表４】発現されたＭｔｂ−６７．２は、ウエスタン分析によって、マウスモノクロー
ナル抗体ＩＴ−５７により認識されなかった。この反応性の欠落は、Ｅ．ｃｏｌ
ｉ発現系における限界に起因し得る（例えば、このタンパク質は、翻訳後修飾さ
れ得ないか、または不適切に折りたたまれ得る）。あるいは、ＩＴ−５７と反応
する別のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓタンパク質は、不明であり得る。Ｍｔｂ
−６７．２タンパク質は、ＨＩＶ陽性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性の
血清に対して反応性であった。

【０１４７】（実施例６）（Ｍｔｂ−６７．２を使用する結核の検出）本実施例は、ＨＩＶ同時感染を患うかまたは患わない患者におけるＭ．ｔｕｂ
ｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の血清診断についてのＭｔｂ−６７．２の使用を例証す
る。

【０１４８】Ｍｔｂ−６７．２の反応性を、４７人の正常な（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓｉに感染していない）個体、ＨＩＶ陽性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽
性の２７人の患者、ならびにＨＩＶ陰性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性
の６７人の患者に由来する血清を用いて決定した。サンプルを、上記のようにＭ
．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性として定義した。

【０１４９】ＥＬＩＳＡをＭｔｂ−６７．２（２００ｎｇ／ウェル）でコーティングした
９６ウェルマイクロタイタープレート（ＣｏｒｎｉｎｇＥａｓｉｗａｓｈ）に
おいて行った。コーティングは、４℃で一晩であった。次いで、プレートを吸引
して、そして１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で
室温で２時間ブロックして、続いて０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（Ｐ
ＢＳＴ）で洗浄した。血清（ＰＢＳＴに１／１００に希釈）をウェルに添加して
、そして室温で３０分間インキュベートした。インキュベーション後に、ウェル
をＰＢＳＴで６回洗浄して、次いで１／２０，０００希釈のプロテインＡＨＲ
Ｐ結合体とともに３０分間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳＴ
で６回洗浄して、そしてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質とともにさらに
１５分間インキュベートした。この反応を、１Ｎ硫酸の添加によって停止させ、
そしてプレートを、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで読み取
った。このアッセイのカットオフは、陰性集団の平均＋この平均の３標準偏差で
あった。

【０１５０】結果を図３に示す。ＨＩＶ陽性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性であっ
た２７人の患者のうち１１人に由来する血清は、カットオフ値を超えるＯＤ₄₅₀
を有した。４７人のうち２人の正常な血清が、このカットオフを超え、そしてＨ
ＩＶ陰性かつＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ陽性の６７人の患者のうち２３人の
患者に由来する血清サンプルは、このカットオフ値を超えた。これらの結果は、
Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の血清診断についてのＭｔｂ−６７．２の使
用を実証する。

【０１５１】前述から、本発明の特定の実施形態が、例示の目的のために本明細書中に記載
されているが、種々の改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなくな
され得ることが理解される。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲以外によ
って制限されない。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】図１Ａは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｂ】図１Ｂは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｃ】図１Ｃは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｄ】図１Ｄは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｅ】図１Ｅは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｆ】図１Ｆは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｇ】図１Ｇは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｈ】図１Ｈは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｊ】図１Ｊは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｋ】図１Ｋは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｌ】図１Ｌは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｍ】図１Ｍは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｎ】図１Ｎは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｐ】図１Ｐは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図１Ｑ】図１Ｑは、Ｍｔｂ−８１をコードするヌクレオチド配列を含むＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓゲノム配列を示す。Ｍｔｂ−８１の推定アミノ酸配列をヌクレオ
チド配列の下に示し、黒の実線で示す。

【図２】図２は、ＨＩＶに感染した患者におけるＭｔｂ−８１の血清反応性を図示する
グラフである。Ｍｔｂ−８１を用いて、示されるように、正常（Ｍ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓに感染していない）患者；ＨＩＶポジティブかつＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓポジティブの患者；またはＨＩＶネガティブかつＭ．ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓポジティブの患者由来の血清における反応性抗体を検出した。Ｏ
Ｄ４５０は、抗体結合を示した。（線で示される）カットオフ値上の値を、Ｍ．
ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染についてポジティブとみなした。

【図３】図３は、ＨＩＶに同時感染した結核患者におけるＭｔｂ−６７．２の血清反応
性を図示するグラフである。Ｍｔｂ−６７．２を用いて、示されるように、正常
（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染していない）患者；ＨＩＶポジティブか
つＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓポジティブの患者；またはＨＩＶネガティブか
つＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓポジティブの患者由来の血清における反応性抗
体を検出した。ＯＤ４５０は、抗体結合を示した。（線で示される）カットオフ
値上の値を、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染についてポジティブとみなした
。

【図４】図４は、Ｍｔｂ−６７．２をコードするＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＤＮ
Ａ配列を示す。

【図５】図５は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＭｔｂ−６７．２のアミノ酸配列を
示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０８５Ａ６１Ｐ 31/06 ４Ｃ０８６ 48/00 31/20 ４Ｃ０８７Ａ６１Ｐ 31/06 37/00 ４Ｈ０４５ 31/20 43/00 １２１ 37/00 Ｃ０７Ｋ 14/35 43/00 １２１ 16/12 Ｃ０７Ｋ 14/35 19/00 16/12 Ｃ１２Ｎ 1/15 19/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/21 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/569 ＦＣ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:32 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ // Ｃ１２Ｐ 21/08 5/00 Ａ (Ｃ１２Ｑ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｒ 1:32） (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:32） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ホートン，レイモンドエル．アメリカ合衆国ワシントン 98021，ボゼル， 242エヌディープレイスサウスイースト−2636 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA13 BA31 BA41 CA01 CA03 CA04 CA12 DA02 EA04 HA11 HA12 HA15 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ06 QQ53 QR36 QR48 QR51 QR56 QR77 QS25 QS34 QX07 4B064 AG01 AG27 AG31 CA02 CA10 CA19 CC24 DA01 DA13 DA15 4B065 AA26X AA36Y AA72X AA90X AA91X AA93X AB01 BA02 CA25 CA44 CA45 CA46 4C084 AA02 AA07 BA01 BA02 BA08 BA22 BA23 CA04 DC50 MA01 NA05 NA14 ZB011 ZB351 ZC412 ZC552 ZC752 4C085 AA03 AA13 AA14 AA18 AA19 BA09 CC07 DD61 DD62 DD72 EE05 4C086 AA01 AA02 AA03 EA16 MA01 MA04 NA05 NA14 ZB01 ZB35 ZC41 ZC55 ZC75 4C087 AA01 AA02 AA03 BB43 BB65 CA04 CA12 MA01 NA05 NA14 ZB01 ZB35 ZC41 ZC55 ZC75 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 BA41 CA11 DA76 DA86 EA20 EA31 EA50 EA52

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｍｔｂ−８１（図１Ａ−１Ｆ；配列番号２）の免疫原性部分
、またはその改変体を含む、単離されたポリペプチドであって、該改変体は、Ｍ
ｔｂ−８１特異的抗血清またはＴ細胞と反応する該改変体の能力が実質的に減少
されるような、一つ以上の置換、付加、挿入および／または欠失において異なる
、ポリペプチド。
【請求項２】前記ポリペプチドが、Ｍｔｂ−８１（図１Ａ−１Ｆ；配列番
号２）の少なくとも９個の連続するアミノ酸残基を含む、請求項１に記載のポリ
ペプチド。
【請求項３】前記ポリペプチドが、Ｍｔｂ−８１（図１Ａ−１Ｆ；配列番
号２）の少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基を含む、請求項１に記載のポ
リペプチド。
【請求項４】前記ポリペプチドが、Ｍｔｂ−８１（図１Ａ−１Ｆ；配列番
号２）の少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基を含む、請求項１に記載のポ
リペプチド。
【請求項５】図１Ａ−１Ｆ（配列番号２）に列挙されたアミノ酸配列を含
む、ポリペプチド。
【請求項６】請求項１に記載のポリペプチドをコードする、単離されたポ
リヌクレオチド。
【請求項７】前記ポリヌクレオチドが、図１Ａ−１Ｆ（配列番号１）に列
挙されたヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、
請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】前記ポリヌクレオチドが、図１Ａ−１Ｆ（配列番号１）に列
挙されたヌクレオチド配列の少なくとも３０個の連続するヌクレオチドを含む、
請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】配列番号１に列挙されたヌクレオチド配列を含む、ポリヌク
レオチド。
【請求項１０】請求項９に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター
。
【請求項１１】請求項１０に記載の発現ベクターで形質転換されたか、ま
たはトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項１２】図１Ａ−１Ｆ（配列番号１）に列挙されるヌクレオチド配
列と相補的である、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、アンチセ
ンスポリヌクレオチド。
【請求項１３】請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクタ
ー。
【請求項１４】請求項１３に記載の発現べクターで形質転換されたか、ま
たはトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項１５】生物学的サンプルにおいてＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
の存在または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該生物学的サンプルを以下と接触させる工程：（ｉ）請求項１に記載の単離されたポリペプチド；または（ｉｉ）請求項１に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；（ｂ）該生物学的サンプルにおける該ポリペプチドと該ポリペプチドに特異的
に結合する抗体との間で形成される量の免疫複合体を検出する工程；および（ｃ）検出された免疫複合体の量をカットオフ値と比較して、そしてそれから
、該生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの存在または非存
在を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１６】前記ポリペプチドが、固体支持体と連結される、請求項１
５に記載の方法。
【請求項１７】前記支持体がニトロセルロース、ラテックスまたはプラス
チック材料を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】請求項１５に記載の方法であって、ここで前記検出工程が
、（ａ）前記免疫複合体と結合し得る検出試薬とともに該免疫複合体をインキュ
ベートし、ここで該検出試薬がレポーター基を含む、工程、（ｂ）非結合の該検
出試薬を除去する工程、および（ｃ）該レポーター基の存在または非存在を検出
する工程を包含する、方法。
【請求項１９】請求項１８に記載の方法であって、ここで前記検出試薬が
、抗体または、前記ポリペプチドと特異的に結合する抗体と結合し得る、その抗
原結合フラグメントを含む、方法。
【請求項２０】請求項１８に記載の方法であって、前記レポーター基が、
放射性同位元素、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、コロイドおよび色素粒子か
らなる群から選択される、方法。
【請求項２１】請求項１５に記載の方法であって、ここでレポーター基が
、前記ポリペプチドと結合されて、そしてここで前記検出工程が、非結合のポリ
ペプチドを除去する工程、および引き続いて該レポーター基の存在または非存在
を検出する工程を包含する、方法。
【請求項２２】請求項１５に記載の方法であって、ここで前記生物学的サ
ンプルが、全血、血清、痰、血漿、唾液、脳脊髄液および尿からなる群から選択
される、方法。
【請求項２３】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在ま
たは非存在を検出するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該患者から得られた生物学的サンプルを以下；（ｉ）請求項１に記載の単離されたポリペプチド；または（ｉｉ）請求項１に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；と接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおいて、該ポリペプチドと該ポリペプチドに特異
的に結合する抗体との間で形成される量の免疫複合体を検出する工程；ならびに（ｃ）検出された免疫複合体の量をカットオフ値と比較して、そしてそれから
、該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決定
する工程、を包含する、方法。
【請求項２４】前記患者がＨＩＶに感染している、請求項２３に記載の方
法。
【請求項２５】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在ま
たは非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）Ｔ細胞を含み、そして該患者から得られた生物学的サンプルを、請求項
１に記載の単離されたポリペプチドと接触させる工程；（ｂ）該ポリペプチドと特異的に反応するＴ細胞の量を、該サンプルにおいて
検出する工程；および（ｃ）検出されたＴ細胞の量を、カットオフ値と比較して、そしてそれから、
該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの存在または非存在を決定する工
程、を包含する、方法。
【請求項２６】前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿および脳脊髄
液からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】生物学的サンプルにおいて、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓ感染の存在または非存在を決定するための方法であって、該方法は、以下の工
程：（ａ）請求項１に記載のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの量を、生物学的
サンプルにおいて検出する工程；および（ｂ）検出されたｍＲＮＡの量をカットオフ値と比較して、そしてそれから、
該生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非
存在を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項２８】前記検出工程が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して実施さ
れる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】前記検出工程が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用
して実施される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在ま
たは非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該患者から得られた生物学的サンプルにおいて、請求項１に記載のポリ
ペプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出する工程；および（ｂ）検出されたｍＲＮＡの量をカットオフ値と比較して、そしてそれから、
該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決定す
る工程、を包含する、方法。
【請求項３１】前記検出工程が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して実施さ
れる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】前記検出工程が、ハイブリダイゼーションアッセイを使用
して実施される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって感染された患者に
おける治療をモニタリングするための方法であって、該方法が、以下の工程：（ａ）Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者から得られた生物学的サンプル
を、遅れずに第１の時点で以下：（ｉ）請求項１に記載の単離されたポリペプチド；または（ｉｉ）請求項１に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；を接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおいて、該ポリペプチドと該ポリペプチドと特異
的に結合する抗体との間で形成される免疫複合体の量を検出する工程；（ｃ）第２の時点において得られた生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）
および（ｂ）を反復し、ここで、該第２の時点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓ感染に対する治療の少なくとも一部に従う、工程；および（ｄ）工程（ａ）において検出された該免疫複合体の量を、工程（ｃ）にて検
出された該量と比較して、そしてそれから、該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏｓｉｓ感染に対する治療をモニタリングする工程、を包含する、方法。
【請求項３４】前記患者が、ＨＩＶに感染している、請求項３３に記載の
方法。
【請求項３５】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染している患者の治療
をモニタリングするための方法であって、該方法は、以下の工程：（ａ）該Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者から得られた生物学的サンプ
ルにおいて、遅れずに第１の時点で、請求項１に記載のポリペプチドをコードす
るｍＲＮＡの量を検出する工程；（ｂ）第２の時点において該患者から得られた生物学的サンプルにおいて、請
求項１に記載のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出する工程であって
、ここで、該第２の時点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に対する治療の
少なくとも一部に従う、工程；および（ｃ）工程（ａ）において検出されたｍＲＮＡの量を、工程（ｂ）にて検出さ
れた量と比較して、そしてそれから該患者のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染
に対する治療をモニタリングする、工程、を包含する、方法。
【請求項３６】Ｍｔｂ−８１（配列番号２）と特異的に結合する、単離さ
れた抗体、またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３７】前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項３６に記
載の抗体。
【請求項３８】生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
の存在または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該生物学的サンプルを、請求項３６に記載の抗体またはその抗原結合フ
ラグメントと接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおける、該抗体またはその抗原結合フラグメント
と、該抗体または該その抗原結合フラグメントによって特異的に結合されるタン
パク質との間で形成されている免疫複合体の量を検出する工程；および（ｃ）検出された該免疫複合体の量を、カットオフ値と比較して、そしてそれ
から、該生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの存在または
非存在を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項３９】前記抗体、またはその抗原結合フラグメントが、固体支持
体と連結されている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】前記支持体が、ニトロセルロース、ラテックスまたはプラ
スチック材料を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】請求項３８に記載の方法であって、ここで前記検出工程が
、以下の工程：（ａ）前記免疫複合体と結合し得る検出試薬と共に、該免疫複合体をインキュ
ベートする工程、ここで該検出試薬が、レポーター基を含む、工程；（ｂ）非結合検出試薬を除去する工程；および（ｃ）該レポーター基の存在または非存在を検出する工程、を包含する、方法。
【請求項４２】前記検出試薬が、前記タンパク質と結合し得る、抗体また
はその抗原結合フラグメントを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】請求項４１に記載の方法であって、ここで前記レポーター
基が、放射性同位元素、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、コロイドおよび色素
粒子からなる群から選択される、方法。
【請求項４４】請求項３８に記載の方法であって、ここで前記検出工程が
、以下の工程：（ａ）前記サンプルを、請求項１に記載のＭｔｂ−８１ポリペプチドと接触さ
せる工程；および（ｂ）前記抗体またはその抗原結合フラグメントと結合する該Ｍｔｂ−８１ポ
リペプチドの阻害のレベルを決定する工程、を包含する、方法。
【請求項４５】前記Ｍｔｂ−８１ポリペプチドが、レポーター基を含む、
請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】請求項４５に記載の方法であって、ここで前記レポーター
基が、放射性同位元素、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、コロイドおよび色素
粒子からなる群から選択される、方法。
【請求項４７】請求項３８に記載の方法であって、ここで前記生物学的サ
ンプルが、全血、血清、痰、血漿、唾液、脳脊髄液および尿からなる群から選択
される、方法。
【請求項４８】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在ま
たは非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該患者より得られた生物学的サンプルを、請求項３６に記載の抗体また
はその抗原結合フラグメントと接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおける、該抗体、またはその抗原結合フラグメン
トとタンパク質との間で形成されている免疫複合体の量を検出する工程；および（ｃ）検出された免疫複合体の量を、カットオフ値と比較して、そしてそれか
ら、該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決
定する工程、を包含する、方法。
【請求項４９】請求項４８に記載の方法であって、ここで前記生物学的サ
ンプルが、全血、血清、血漿および脳脊髄液からなる群から選択される、方法。
【請求項５０】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって感染された患者に
おける治療をモニタリングするための方法であって、該方法が、以下の工程：（ａ）該Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者から得られた生物学的サンプ
ルを、第１の時点において、請求項３６に記載の抗体または抗原結合フラグメン
トと接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおいて、該抗体または抗原結合フラグメントとタ
ンパク質との間で形成される免疫複合体の量を該サンプルにおいて検出する工程
；（ｃ）第２の時点において得られた生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）
および（ｂ）を反復し、ここで、該第２の時点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓ感染に対する治療の少なくとも一部に従う、工程；および（ｄ）工程（ａ）において検出された該免疫複合体の量を、工程（ｃ）におい
て検出された量と比較して、そしてそれから、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに
よって感染された患者における治療をモニタリングする工程、を包含する、方法。
【請求項５１】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチド；および（ｂ）固体支持体、を含む、診断キット。
【請求項５２】前記ポリペプチドが、前記固体支持体上に固定されている
、請求項５１に記載のキット。
【請求項５３】前記固体支持体が、ニトロセルロース、ラテックスまたは
プラスチック材料を含む、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチド；および（ｂ）検出試薬、を含む、診断キット。
【請求項５５】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項１１に記載のポリヌクレオチド；および（ｂ）検出試薬、を含む、診断キット。
【請求項５６】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項３６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント；および（ｂ）請求項１に記載のＭｔｂ−８１ポリペプチド、を含む、診断キット。
【請求項５７】請求項１に記載のポリペプチドおよび公知のＭ．ｔｕｂｅ
ｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原を含む、融合タンパク質。
【請求項５８】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチド；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項５９】ワクチンであって、該ワクチンは以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチド；および（ｂ）非特異的免疫応答エンハンサー、を含む、ワクチン。
【請求項６０】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；およ
び（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項６１】ワクチンであって、該ワクチンは以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および（ｂ）非特異的免疫応答エンハンサー、を含む、ワクチン。
【請求項６２】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）Ｍｔｂ−８１（配列番号２）と特異的に結合する、抗体またはその抗原
結合フラグメント；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項６３】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチドを発現する、抗原提示細胞；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項６４】前記抗原提示細胞が、樹状細胞またはマクロファージであ
る、請求項６３に記載の薬学的組成物。
【請求項６５】ワクチンであって、該ワクチンは以下：（ａ）請求項１に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；および（ｂ）非特異的免疫応答エンハンサー、を含む、ワクチン。
【請求項６６】前記抗原提示細胞が、樹状細胞またはマクロファージであ
る、請求項６５に記載のワクチン。
【請求項６７】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造にお
ける使用のための、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６８】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造にお
ける使用のための、請求項１に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ド。
【請求項６９】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造にお
ける使用のための、Ｍｔｂ−８１（配列番号２）に特異的に結合する抗体または
その抗原結合フラグメント。
【請求項７０】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造にお
ける使用のための、請求項１に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞。
【請求項７１】前記抗原提示細胞が、樹状細胞またはマクロファージであ
る、請求項７０に記載の抗原提示細胞。
【請求項７２】Ｍｔｂ−８１に対して特異的なＴ細胞を刺激および／また
は増殖させるための方法であって、該方法は、該Ｔ細胞の刺激および／または増
殖を可能にするような条件下および充分な一定期間の間、該Ｔ細胞と一つ以上の
以下：（ｉ）請求項１に記載のポリペプチド（ｉｉ）そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および／ま
たは（ｉｉｉ）そのようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞；を接触させる工程を包含する、方法。
【請求項７３】請求項７２に記載の方法に従って調製されたＴ細胞を含む
、単離されたＴ細胞集団。
【請求項７４】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造にお
ける使用のための、請求項７３に記載のＴ細胞集団。
【請求項７５】患者より単離されて、そして一つ以上の以下：（ｉ）請求項１に記載のポリペプチド；（ｉｉ）そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）そのようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞；と共にインキュベートされるＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞であって、そ
の結果、Ｔ細胞が増殖する；該患者における結核の発症を抑制するための医薬の
製造における使用のための、ＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞。
【請求項７６】患者における結核の発症を抑制するための方法であって、
該方法は、以下の工程：（ａ）該患者より単離されて、そして一つ以上の以下：（ｉ）請求項１に記載のポリペプチド；（ｉｉ）そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）そのようなポリペプチドを発現する、抗原提示細胞；と共にインキュベートされているＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞であって
、その結果、Ｔ細胞が増殖し、そしてここで、該患者における結核の発症を抑制
するための医薬の製造における使用のために該Ｔ細胞がクローン化される、工程
を包含する、方法。
【請求項７７】Ｍｔｂ−６７．２（図５；配列番号５）の免疫原性部分を
含む単離されたポリペプチド、あるいはＭｔｂ−６７．２特異的抗血清またはＴ
細胞と反応する改変体の能力が実質的に減少しないような、一つ以上の置換、付
加、挿入および／または欠失において異なるその該改変体。
【請求項７８】前記ポリペプチドが、Ｍｔｂ−６７．２（図５；配列番号
５）の少なくとも９個の連続するアミノ酸残基を含む、請求項７７に記載のポリ
ペプチド。
【請求項７９】前記ポリペプチドが、Ｍｔｂ−６７．２（図５；配列番号
５）の少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基を含む、請求項７７に記載のポ
リペプチド。
【請求項８０】前記ポリペプチドが、Ｍｔｂ−６７．２（図５；配列番号
５）の少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基を含む、請求項７７に記載のポ
リペプチド。
【請求項８１】図５（配列番号５）に列挙されているＭｔｂ−６７．２配
列を含む、ポリペプチド。
【請求項８２】請求項７７に記載のポリペプチドをコードする、単離され
たポリヌクレオチド。
【請求項８３】前記ポリヌクレオチドが、図４（配列番号４）に列挙され
るＭｔｂ−６７．２配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む、請
求項８２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８４】図４（配列番号４）に列挙されているヌクレオチド配列を
含む、ポリヌクレオチド。
【請求項８５】請求項８４に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクタ
ー。
【請求項８６】請求項８５に記載の発現ベクターで形質転換されているか
、またはトランスフェクトされている、宿主細胞。
【請求項８７】図４（配列番号４）に列挙されているＭｔｂ−６７．２配
列と相補的な、少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、アンチセンス
ポリヌクレオチド。
【請求項８８】請求項８７に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクタ
ー。
【請求項８９】請求項８８に記載の発現ベクターで、形質転換されている
か、またはトランスフェクトされている、宿主細胞。
【請求項９０】生物学的サンプルにおいてＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ
の存在または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該生物学的サンプルを以下と接触させる工程：（ｉ）請求項７７に記載の単離されたポリペプチド；または（ｉｉ）請求項７７に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；（ｂ）該生物学的サンプルにおける該ポリペプチドと該ポリペプチドに特異的
に結合する抗体との間で形成される免疫複合体の量を検出する工程；および（ｃ）検出された該免疫複合体の量をカットオフ値と比較して、そしてそれか
ら、該生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの存在または非
存在を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項９１】前記ポリペプチドが、固体支持体と連結されている、請求
項９０に記載の方法。
【請求項９２】前記支持体が、ニトロセルロース、ラテックスまたはプラ
スチック材料を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】請求項９０に記載の方法であって、ここで前記検出工程が
、（ａ）前記免疫複合体と結合し得る検出試薬とともに該免疫複合体をインキュ
ベートし、ここで該検出試薬がレポーター基を含む、工程、（ｂ）非結合の検出試薬を除去する工程、および（ｃ）該レポーター基の存在または非存在を検出する工程を包含する、方法。
【請求項９４】請求項９３に記載の方法であって、ここで前記検出試薬が
、抗体または、前記ポリペプチドと特異的に結合する抗体と結合し得る、その抗
原結合フラグメントを含む、方法。
【請求項９５】請求項９３に記載の方法であって、ここで前記レポーター
基が、放射性同位元素、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、コロイドおよび色素
粒子からなる群から選択される、方法。
【請求項９６】請求項９０に記載の方法であって、ここでレポーター基が
、前記ポリペプチドと結合されて、そしてここで前記検出工程が、非結合のポリ
ペプチドを除去して、そして引き続いて該レポーター基の存在または非存在を検
出する工程を包含する、方法。
【請求項９７】請求項９０に記載の方法であって、ここで前記生物学的サ
ンプルが、全血、血清、痰、血漿、唾液、脳脊髄液および尿からなる群から選択
される、方法。
【請求項９８】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在ま
たは非存在を検出するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該患者から得られた生物学的サンプルを以下；（ｉ）請求項７７に記載の単離されたポリペプチド；または（ｉｉ）請求項７７に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；と接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおいて、該ポリペプチドと該ポリペプチドと特異
的に結合する抗体との間で形成される免疫複合体の量を検出する工程；ならびに（ｃ）検出された免疫複合体の量をカットオフ値と比較して、そしてそれから
、該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決定
する工程、を包含する、方法。
【請求項９９】前記患者がＨＩＶに感染している、請求項９８に記載の方
法。
【請求項１００】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在
または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）Ｔ細胞を含み、そして該患者から得られた生物学的サンプルを、請求項
７７に記載の単離されたポリペプチドと接触させる工程；（ｂ）該ポリペプチドと特異的に反応するＴ細胞の量を、該サンプルにおいて
検出する工程；および（ｃ）検出されたＴ細胞の量を、カットオフ値と比較して、そしてそれから、
該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの存在または非存在を決定する工
程、を包含する、方法。
【請求項１０１】前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿および脳脊
髄液からなる群から選択される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】生物学的サンプルにおいて、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ感染の存在または非存在を決定するための方法であって、該方法は、以下の
工程：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの量を、生物学
的サンプルにおいて検出する工程；および（ｂ）検出された該ｍＲＮＡの量をカットオフ値と比較して、そしてそれから
、該生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または
非存在を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１０３】前記検出工程が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して実施
される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】前記検出工程が、ハイブリダイゼーションアッセイを使
用して実施される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在
または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該患者から得られた生物学的サンプルにおいて、請求項７７に記載のポ
リペプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出する工程；および（ｂ）検出された該ｍＲＮＡの量をカットオフ値と比較して、そしてそれから
、該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を決定
する工程、を包含する、方法。
【請求項１０６】前記検出工程が、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して実施
される、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】前記検出工程が、ハイブリダイゼーションアッセイを使
用して実施される、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０８】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染した患者における
治療をモニタリングするための方法であって、該方法が、以下の工程：（ａ）Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者から得られた生物学的サンプル
を、遅れずに第１の時点で以下：（ｉ）請求項７７に記載の単離されたポリペプチド；または（ｉｉ）請求項７７に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；を接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおいて、該ポリペプチドと該ポリペプチドに特異
的に結合する抗体との間で形成される免疫複合体の量を検出する工程；（ｃ）第２の時点において得られた生物学的サンプルを使用して、工程（ａ）
および（ｂ）を反復し、ここで、該第２の時点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓ感染に対する治療の少なくとも一部に従う、工程；および（ｄ）工程（ａ）において検出された該免疫複合体の量を、工程（ｃ）にて検
出された免疫複合体の量と比較して、そしてそれから、該患者におけるＭ．ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に対する治療をモニタリングする工程、を包含する、方法。
【請求項１０９】前記患者が、ＨＩＶに感染している、請求項１０８に記
載の方法。
【請求項１１０】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染している患者の治
療をモニタリングするための方法であって、該方法は、以下の工程：（ａ）Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者から得られた生物学的サンプル
において、遅れずに第１の時点で、請求項７７に記載のポリペプチドをコードす
るｍＲＮＡの量を検出する工程；（ｂ）第２の時点において該患者から得られた生物学的サンプルにおいて、請
求項７７に記載のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出する工程であっ
て、ここで、該第２の時点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に対する治療
の少なくとも一部に従う、工程；および（ｃ）工程（ａ）において検出されたｍＲＮＡの量を、工程（ｂ）にて検出さ
れた量と比較して、そしてそれから該患者のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染
に対する治療をモニタリングする、工程、を包含する、方法。
【請求項１１１】Ｍｔｂ−６７．２（配列番号５）と特異的に結合する、
単離された抗体、またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１２】前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１１１
に記載の抗体。
【請求項１１３】生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ
ｓの存在または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該生物学的サンプルを、請求項１１１に記載の抗体またはその抗原結合
フラグメントと接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおける、該抗体、またはその抗原結合フラグメン
トと、該抗体またはその抗原結合フラグメントによって特異的に結合されるタン
パク質との間で形成されている免疫複合体の量を検出する工程；および（ｃ）検出された該免疫複合体の量を、カットオフ値と比較して、そしてそれ
から、該生物学的サンプルにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの存在または
非存在を決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１１４】前記抗体、またはその抗原結合フラグメントが、固体支
持体と連結されている、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】前記支持体が、ニトロセルロース、ラテックスまたはプ
ラスチック材料を含む、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】請求項１１３に記載の方法であって、ここで前記検出工
程が、以下の工程：（ａ）前記免疫複合体と結合し得る検出試薬と共に、免疫複合体をインキュベ
ートする工程、ここで該検出試薬が、レポーター基を含む、工程；（ｂ）非結合検出試薬を除去する工程；および（ｃ）該レポーター基の存在または非存在を検出する工程、を包含する、方法。
【請求項１１７】前記検出試薬が、前記タンパク質と結合し得る、抗体ま
たはその抗原結合フラグメントを含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】請求項１１６に記載の方法であって、ここで前記レポー
ター基が、放射性同位元素、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、コロイドおよび
色素粒子からなる群から選択される、方法。
【請求項１１９】請求項１１３に記載の方法であって、ここで前記検出工
程が、以下の工程：（ａ）前記サンプルを、請求項７７に記載のＭｔｂ−６７．２ポリペプチドと
接触させる工程；および（ｂ）前記抗体またはその抗原結合フラグメントと結合するＭｔｂ−６７．２
ポリペプチドの阻害のレベルを決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１２０】前記Ｍｔｂ−６７．２ポリペプチドが、レポーター基を
含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】請求項１２０に記載の方法であって、ここで前記レポー
ター基が、放射性同位元素、蛍光基、発光基、酵素、ビオチン、コロイドおよび
色素粒子からなる群から選択される、方法。
【請求項１２２】請求項１１３に記載の方法であって、ここで前記生物学
的サンプルが、全血、血清、痰、血漿、唾液、脳脊髄液および尿からなる群から
選択される、方法。
【請求項１２３】患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在
または非存在を決定するための方法であって、該方法は以下の工程：（ａ）該患者より得られた生物学的サンプルを、請求項１１１に記載の抗体ま
たはその抗原結合フラグメントと接触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおける、該抗体またはその抗原結合フラグメント
と、タンパク質との間で形成されている免疫複合体の量を検出する工程；および（ｃ）検出された該免疫複合体の量を、カットオフ値と比較して、そしてそれ
から、該患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の存在または非存在を
決定する工程、を包含する、方法。
【請求項１２４】請求項１２３に記載の方法であって、ここで前記生物学
的サンプルが、全血、血清、血漿、および脳脊髄液からなる群から選択される、
方法。
【請求項１２５】Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって感染された患者
における治療をモニタリングするための方法であって、該方法が、以下の工程：（ａ）Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染患者から得られた生物学的サンプル
を、第１の時点で、請求項１１１に記載の抗体または抗原結合フラグメントと接
触させる工程；（ｂ）該生物学的サンプルにおいて、該抗体または抗原結合フラグメントと、
タンパク質との間で形成される免疫複合体の量を該サンプルにおいて検出する工
程；（ｃ）第２の時点において得られた該生物学的サンプルを使用して、工程（ａ
）および（ｂ）を反復し、ここで、該第２の時点が、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ
ｉｓ感染に対する治療の少なくとも一部に従う、工程；および（ｄ）工程（ａ）において検出された免疫複合体の量を、工程（ｃ）にて検出
された該量と比較して、そしてそれから、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによっ
て感染された患者における治療をモニタリングする工程、を包含する、方法。
【請求項１２６】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチド；および（ｂ）固体支持体、を含む、診断キット。
【請求項１２７】前記ポリペプチドが、前記固体支持体上に固定される、
請求項１２６に記載のキット。
【請求項１２８】前記固体支持体が、ニトロセルロース、ラテックスまた
はプラスチック材料を含む、請求項１２７に記載のキット。
【請求項１２９】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチド；および（ｂ）検出試薬、を含む、診断キット。
【請求項１３０】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項８７に記載のポリヌクレオチド；および（ｂ）検出試薬、を含む、診断キット。
【請求項１３１】診断キットであって、該キットは以下：（ａ）請求項１１１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント；および（ｂ）請求項７７に記載のＭｔｂ−６７．２ポリペプチド、を含む、診断キット。
【請求項１３２】請求項７７に記載のポリペプチドおよび公知のＭ．ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原を含む、融合タンパク質。
【請求項１３３】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチド；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項１３４】ワクチンであって、該ワクチンは以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチド；および（ｂ）非特異的免疫応答エンハンサー、を含む、ワクチン。
【請求項１３５】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド；お
よび（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項１３６】ワクチンであって、該ワクチンは以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；およ
び（ｂ）非特異的免疫応答エンハンサー、を含む、ワクチン。
【請求項１３７】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）Ｍｔｂ−６７．２（配列番号５）と特異的に結合する、抗体またはその
抗原結合フラグメント；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項１３８】薬学的組成物であって、該薬学的組成物は以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチドを発現する、抗原提示細胞；および（ｂ）生理学的に受容可能なキャリア、を含む、薬学的組成物。
【請求項１３９】前記抗原提示細胞が、樹状細胞またはマクロファージで
ある、請求項１３８に記載の薬学的組成物。
【請求項１４０】ワクチンであって、該ワクチンは以下：（ａ）請求項７７に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞；および（ｂ）非特異的免疫応答エンハンサー、を含む、ワクチン。
【請求項１４１】前記抗原提示細胞が、樹状細胞またはマクロファージで
ある、請求項１４０に記載のワクチン。
【請求項１４２】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造に
おける使用のための、請求項７７に記載のポリペプチド。
【請求項１４３】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造に
おける使用のための、請求項７７に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド。
【請求項１４４】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造に
おける使用のための、Ｍｔｂ−６７．２（配列番号５）に特異的に結合する抗体
またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４５】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造に
おける使用のための、請求項７７に記載のポリペプチドを発現する抗原提示細胞
。
【請求項１４６】前記抗原提示細胞が、樹状細胞またはマクロファージで
ある、請求項１４５に記載の抗原提示細胞。
【請求項１４７】Ｍｔｂ−６７．２に対して特異的なＴ細胞を刺激および
／または増殖させるための方法であって、該方法は、Ｔ細胞の刺激および／また
は増殖を可能にするような条件下および充分な時間の間、Ｔ細胞と一つ以上の以
下：（ｉ）請求項７７に記載のポリペプチド（ｉｉ）そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；および／ま
たは（ｉｉｉ）そのようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞；を接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１４８】請求項１４７に記載の方法に従って調製されたＴ細胞を
含む、単離されたＴ細胞集団。
【請求項１４９】患者における結核の発症を抑制するための医薬の製造に
おける使用のための、請求項１４８に記載のＴ細胞集団。
【請求項１５０】患者より単離されて、そして一つ以上の以下：（ｉ）請求項７７に記載のポリペプチド；（ｉｉ）そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）そのようなポリペプチドを発現する抗原提示細胞；と共にインキュベートされるＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞であって、そ
の結果、Ｔ細胞が増殖する；該患者における結核の発症を抑制するための医薬の
製造における使用のための、ＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞。
【請求項１５１】患者における結核の発症を抑制するための方法であって
、該方法は、以下の工程：患者より単離されて、そして一つ以上の以下：（ｉ）請求項７７に記載のポリペプチド；（ｉｉ）そのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）そのようなポリペプチドを発現する、抗原提示細胞；と共にインキュベートされているＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺Ｔ細胞であって
、その結果、該Ｔ細胞が増殖し、そしてここで、該患者における結核の発症を抑
制するための医薬の製造における使用のために該Ｔ細胞がクローン化される、工
程を包含する、方法。