JPH0797994B2 - ホスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用 - Google Patents
ホスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用Info
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- JPH0797994B2 JPH0797994B2 JP62209123A JP20912387A JPH0797994B2 JP H0797994 B2 JPH0797994 B2 JP H0797994B2 JP 62209123 A JP62209123 A JP 62209123A JP 20912387 A JP20912387 A JP 20912387A JP H0797994 B2 JPH0797994 B2 JP H0797994B2
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- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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Description
【発明の詳細な説明】 ホスフィノトリシン（PTC、２−アミノ−４−メチルホ
スフィノ酪酸）はグルタミンシンテターゼの阻害剤であ
る。PTCは抗生物質ホスフィノトリシル−アラニル−ア
ラニンの“構造単位”である。このトリペプチド（PT
T）は、グラム陽性及びグラム陰性細菌に対し並びに真
菌ボトリチス・シネレア（Botrytis cinerea）に対して
活性である〔バイエルら、ヘルベチカ・キミカ・アク
タ、第55巻、1972年、第224頁（Bayer et al.,Helvetic
a Chimica Acta 55（1972）224）〕。PTTはストレプト
ミセス・ビリドクロモゲネス（Streptomyces viridochr
omogenes）Ｔ494株（DSM40736、DSM4112（両寄託番号
は同一の微生物に係るものであって、後者はブダペスト
条約上の寄託である））から産生される。
スフィノ酪酸）はグルタミンシンテターゼの阻害剤であ
る。PTCは抗生物質ホスフィノトリシル−アラニル−ア
ラニンの“構造単位”である。このトリペプチド（PT
T）は、グラム陽性及びグラム陰性細菌に対し並びに真
菌ボトリチス・シネレア（Botrytis cinerea）に対して
活性である〔バイエルら、ヘルベチカ・キミカ・アク
タ、第55巻、1972年、第224頁（Bayer et al.,Helvetic
a Chimica Acta 55（1972）224）〕。PTTはストレプト
ミセス・ビリドクロモゲネス（Streptomyces viridochr
omogenes）Ｔ494株（DSM40736、DSM4112（両寄託番号
は同一の微生物に係るものであって、後者はブダペスト
条約上の寄託である））から産生される。
西独特許第2,717,440号明細書は、PTCが総合的除草剤と
して作用することを開示している。公開PCT出願WO第86/
02097号明細書は、PTCに対する耐性がグルタミンシンテ
ターゼの過剰産生に起因する植物について開示する。こ
のタイプの過剰産生、例えば遺伝子増幅に基づくもの、
は不安定性というリスクを伴う。かかる不安定性はグル
タミンシンテターゼ過剰産生の低下と関係するものであ
り、PTCの競合的阻害作用が再度発現することになるで
あろう。
して作用することを開示している。公開PCT出願WO第86/
02097号明細書は、PTCに対する耐性がグルタミンシンテ
ターゼの過剰産生に起因する植物について開示する。こ
のタイプの過剰産生、例えば遺伝子増幅に基づくもの、
は不安定性というリスクを伴う。かかる不安定性はグル
タミンシンテターゼ過剰産生の低下と関係するものであ
り、PTCの競合的阻害作用が再度発現することになるで
あろう。
これに対し、特許請求の範囲で規定される本発明は、PT
C耐性遺伝子に関する。なお、この遺伝子は、PTC耐性植
物製造に使用することができる。なお、この遺伝子は耐
性マーカーとしても使用することができる。更には、こ
の遺伝子はラセミPTCのＬ型の選択的Ｎ−アセチル化に
も適している。
C耐性遺伝子に関する。なお、この遺伝子は、PTC耐性植
物製造に使用することができる。なお、この遺伝子は耐
性マーカーとしても使用することができる。更には、こ
の遺伝子はラセミPTCのＬ型の選択的Ｎ−アセチル化に
も適している。
本発明のPTC耐性遺伝子は、PTT耐性に関して選択された
ストレプトミセス・ビリドクロモゲネスDSM4112由来全D
NAをBamHIで切断し、大きさ4.0kbの断片をクローニング
し、更にPTT耐性について選別することにより得ること
ができる。制限地図（第１図）はこの4.0kb断片の特徴
を詳しく表わしている。
ストレプトミセス・ビリドクロモゲネスDSM4112由来全D
NAをBamHIで切断し、大きさ4.0kbの断片をクローニング
し、更にPTT耐性について選別することにより得ること
ができる。制限地図（第１図）はこの4.0kb断片の特徴
を詳しく表わしている。
この4kb断片部分のクローニング実験は、コード領域部
位を更に正確に局在化させるために行なわれた。これに
よって、耐性遺伝子は1.6kbSst II−Sst I断片（第１図
において0.55〜2.15位）上に位置することが明らかにな
った。Bgl IIで消化した場合に断片が得られたが、この
断片は大きさが0.8kbであって、プラスミドに組込みか
つストレプトミセス・リビダンス（Streptomyces livid
ans）を形質転換させた後にはPTT耐性を与える。この耐
性はPTCのＮ−アセチル化により生じる。
位を更に正確に局在化させるために行なわれた。これに
よって、耐性遺伝子は1.6kbSst II−Sst I断片（第１図
において0.55〜2.15位）上に位置することが明らかにな
った。Bgl IIで消化した場合に断片が得られたが、この
断片は大きさが0.8kbであって、プラスミドに組込みか
つストレプトミセス・リビダンス（Streptomyces livid
ans）を形質転換させた後にはPTT耐性を与える。この耐
性はPTCのＮ−アセチル化により生じる。
0.8kb断片のマキサム（Maxam）及びギルバート（Gilber
t）配列決定により、DNA配列Ｉ（後記）が決定される。
耐性遺伝子の位置は、この配列の開放読取り枠から決定
することができる（258位以後）。遺伝子の末端は掲示
された中で端から２番目のヌクレオチド（806位）に位
置しており、即ち最後のヌクレオチド（807位）が停止
コードンの最初のヌクレオチドとなっている。
t）配列決定により、DNA配列Ｉ（後記）が決定される。
耐性遺伝子の位置は、この配列の開放読取り枠から決定
することができる（258位以後）。遺伝子の末端は掲示
された中で端から２番目のヌクレオチド（806位）に位
置しており、即ち最後のヌクレオチド（807位）が停止
コードンの最初のヌクレオチドとなっている。
DNA配列Ｉにおけるシャイン−ダルガルノ（Shine−Dalg
arno）配列は、開始コードンとして機能するGTGと同様
に、下線によって強調されている。したがって、最初の
下線部分が究極的な読取り枠を表わす。
arno）配列は、開始コードンとして機能するGTGと同様
に、下線によって強調されている。したがって、最初の
下線部分が究極的な読取り枠を表わす。
DNA配列IIは、配列決定された遺伝子中の制限部位を示
す。７回以上配列を切断する酵素は示されていない。
す。７回以上配列を切断する酵素は示されていない。
抗生物質PTTは細菌によって取込まれ、PTCに分解され
る。後者もまた細菌中のグルタミンシンテターゼを阻害
することから、細菌はグルタミン欠乏により死滅する。
したがって、PTT産生細菌はPTTの作用から自らを保護す
るメカニズム、即ち産生されたPTTの再取込みを妨げる
か又は分解産物PTCを変化させるようなメカニズム、を
有していなければならない。しかしながら、驚くべきこ
とに、PTT産生株S.ビリドクロモゲネスDSM4112は、その
自らの抗生物質に対して感受性を有している。ところが
予想に反し、PTT耐性について選択することにより、PTT
に耐性でありかつ隣接コロニーのバックグラウンド増殖
を抑制する選択株を10-5の驚異的高率で発現させること
が可能であった。
る。後者もまた細菌中のグルタミンシンテターゼを阻害
することから、細菌はグルタミン欠乏により死滅する。
したがって、PTT産生細菌はPTTの作用から自らを保護す
るメカニズム、即ち産生されたPTTの再取込みを妨げる
か又は分解産物PTCを変化させるようなメカニズム、を
有していなければならない。しかしながら、驚くべきこ
とに、PTT産生株S.ビリドクロモゲネスDSM4112は、その
自らの抗生物質に対して感受性を有している。ところが
予想に反し、PTT耐性について選択することにより、PTT
に耐性でありかつ隣接コロニーのバックグラウンド増殖
を抑制する選択株を10-5の驚異的高率で発現させること
が可能であった。
遺伝子バンクは、DNAを単離し、それをBamHIで切断し、
かつそれをストレプトミセテスベクトーと連結すること
により、これらの選択株のDNAから製造された。連結混
合産物で市販S.リビダンスTK23株を形質転換して、連結
混合産物１μｇ当たり約１〜5kbの挿入物を有する約500
0〜10000個の形質転換株が得られた。形質転換株中にPT
T耐性S.リビダンス株が存在していた。プラスミドの単
離及びS.リビダンスの再形質転換によって、耐性がプラ
スミドにコードされていることを証明することが可能で
あった。耐性をになう遺伝子は4kbBamHI断片上に位置し
ている（第１図）。コード領域は0.8kbBg1 II断片上に
位置する。BamHI断片は酵素Cla I、EcoR I、EcoR V、Hi
nd III、Hpa I、Kpn I、Pvu I、Pvu II及びXho Iの切断
部位を有していない。
かつそれをストレプトミセテスベクトーと連結すること
により、これらの選択株のDNAから製造された。連結混
合産物で市販S.リビダンスTK23株を形質転換して、連結
混合産物１μｇ当たり約１〜5kbの挿入物を有する約500
0〜10000個の形質転換株が得られた。形質転換株中にPT
T耐性S.リビダンス株が存在していた。プラスミドの単
離及びS.リビダンスの再形質転換によって、耐性がプラ
スミドにコードされていることを証明することが可能で
あった。耐性をになう遺伝子は4kbBamHI断片上に位置し
ている（第１図）。コード領域は0.8kbBg1 II断片上に
位置する。BamHI断片は酵素Cla I、EcoR I、EcoR V、Hi
nd III、Hpa I、Kpn I、Pvu I、Pvu II及びXho Iの切断
部位を有していない。
ストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Streptomyces h
ygroscopicus）FFERM BP−130/ATCC21705（欧州特許出
願公開第0,173,327号、第７図）に関する、まだ詳細に
は特徴づけられていない耐性遺伝子の制限地図との比較
により、本発明の耐性遺伝子はPTT生合成遺伝子に関す
る研究中に見出された公知遺伝子と異なることが示され
る。
ygroscopicus）FFERM BP−130/ATCC21705（欧州特許出
願公開第0,173,327号、第７図）に関する、まだ詳細に
は特徴づけられていない耐性遺伝子の制限地図との比較
により、本発明の耐性遺伝子はPTT生合成遺伝子に関す
る研究中に見出された公知遺伝子と異なることが示され
る。
一方ではS.ビリドクロモゲネスDSM4112及びS.リビダン
スTK23の細胞抽出物と、他方ではPTT耐性S.ビリドクロ
モゲネス選択株及びプラスミド担持S.リビダンス形質転
換株と、PTC及びアセチルCoAとのインキュベーションに
より、後者の細胞がアセチル化活性を有することを明ら
かにすることができた。クロマトグラフィー試験は、ア
セチル化がアミノ基で生じることを示している。
スTK23の細胞抽出物と、他方ではPTT耐性S.ビリドクロ
モゲネス選択株及びプラスミド担持S.リビダンス形質転
換株と、PTC及びアセチルCoAとのインキュベーションに
より、後者の細胞がアセチル化活性を有することを明ら
かにすることができた。クロマトグラフィー試験は、ア
セチル化がアミノ基で生じることを示している。
PTT耐性が大腸菌（Escherichia coli）でもみられ、よ
って耐性メカニズムがグラム陰性菌でも機能しているこ
とから、輸送現象に基づく耐性を除去することができ
る。したがって、植物プロモーターに結合させた後適当
なベクターを用いて、本発明の耐性遺伝子を植物に組込
んで形質転換させることができ、もってこの方法により
PTC耐性植物を製造することができる。
って耐性メカニズムがグラム陰性菌でも機能しているこ
とから、輸送現象に基づく耐性を除去することができ
る。したがって、植物プロモーターに結合させた後適当
なベクターを用いて、本発明の耐性遺伝子を植物に組込
んで形質転換させることができ、もってこの方法により
PTC耐性植物を製造することができる。
PTCのＮ−アセチル化は、Ｌ型のみの選択的アセチル化
が生じることから、合成D,L−PTCのラセミ分割のために
も利用することができる。
が生じることから、合成D,L−PTCのラセミ分割のために
も利用することができる。
このように、本発明は、ラセミPTCのＬ型の選択的Ｎ−
アセチル化のための耐性遺伝子の使用にも関する。
アセチル化のための耐性遺伝子の使用にも関する。
本発明の耐性遺伝子によりコードされたPTCアセチルト
ランスフェラーゼは、Ｌ型のみを選択的に攻撃し、Ｄ型
は未変化のままであることから、例えば西独特許第2,71
7,440号の方法から得られるように、ラセミ体をこの酵
素のアセチル化作用に供することにより、ラセミPTCを
光学対掌体に分割するために使用することができる。か
くして得られる混合物は次いで、性質の違いに基づき自
体公知の方法で分割される。
ランスフェラーゼは、Ｌ型のみを選択的に攻撃し、Ｄ型
は未変化のままであることから、例えば西独特許第2,71
7,440号の方法から得られるように、ラセミ体をこの酵
素のアセチル化作用に供することにより、ラセミPTCを
光学対掌体に分割するために使用することができる。か
くして得られる混合物は次いで、性質の違いに基づき自
体公知の方法で分割される。
Ｎ−アシル−D,L−アミノ酸をアシラーゼ（担体に固定
しておいてもよい）と接触させてＬ−アミノ酸を選択的
に遊離させ、次いで酸性化後にＮ−アシル−Ｄ−アミノ
酸含有混合物からこのＬ−アミノ酸を水不溶性溶媒で抽
出することが、開示されている（英国特許第1,369,462
号明細書）。Ｎ−アシル−D,L−PTCの同様の分画は、例
えば西独公開第2,939,269号又は米国特許第4,226,941号
明細書に開示されている。
しておいてもよい）と接触させてＬ−アミノ酸を選択的
に遊離させ、次いで酸性化後にＮ−アシル−Ｄ−アミノ
酸含有混合物からこのＬ−アミノ酸を水不溶性溶媒で抽
出することが、開示されている（英国特許第1,369,462
号明細書）。Ｎ−アシル−D,L−PTCの同様の分画は、例
えば西独公開第2,939,269号又は米国特許第4,226,941号
明細書に開示されている。
本発明では残存するＤ−PTCは公知の方法（欧州特許出
願公開第（EP−Ａ）0,137,371号、実施例８）でラセミ
化され、次いで元のプロセスに戻される。
願公開第（EP−Ａ）0,137,371号、実施例８）でラセミ
化され、次いで元のプロセスに戻される。
必ずしも必要ではないが、酵素を単離することは可能で
あり、ここで酵素とは本分及び以下において常に酵素的
に活性な部分をも意味しているつもりである。酵素が単
離される場合、これは遊離型として又は担体に固定され
て使用することができる。適当な担体の例はEP−Ａ第0,
141,223号明細書に記載されている。しかしながら、酵
素を単離するのではなく、本発明の酵素を発現するいず
れかの望ましいPTC耐性細胞を用いることが得策であ
る。したがってS.ビリドクロモゲネスDSM4112のPTT耐性
選択株を用いることが、可能かつ得策である。更には、
本発明の遺伝子で形質転換されかつPTCアセチルトラン
スフェラーゼを発現しうるいずれかの望ましい細胞を用
いることが、可能かつ有利である。このような関係か
ら、本発明の遺伝子は、これもその活性部分を意味する
つもりであるが、プラスミドに組込まれた形で又はトラ
ンスフェクション（transfection）のような他の慣用的
遺伝子操作法により宿主細胞中に導入することができ
る。例えばEP−Ａ第0,163,249号及び第0,171,024号明細
書の公知の方法による、例えば大腸菌発現プラスミドへ
の組込み及びかかるプラスミドによる大腸菌の形質転換
が得策である。
あり、ここで酵素とは本分及び以下において常に酵素的
に活性な部分をも意味しているつもりである。酵素が単
離される場合、これは遊離型として又は担体に固定され
て使用することができる。適当な担体の例はEP−Ａ第0,
141,223号明細書に記載されている。しかしながら、酵
素を単離するのではなく、本発明の酵素を発現するいず
れかの望ましいPTC耐性細胞を用いることが得策であ
る。したがってS.ビリドクロモゲネスDSM4112のPTT耐性
選択株を用いることが、可能かつ得策である。更には、
本発明の遺伝子で形質転換されかつPTCアセチルトラン
スフェラーゼを発現しうるいずれかの望ましい細胞を用
いることが、可能かつ有利である。このような関係か
ら、本発明の遺伝子は、これもその活性部分を意味する
つもりであるが、プラスミドに組込まれた形で又はトラ
ンスフェクション（transfection）のような他の慣用的
遺伝子操作法により宿主細胞中に導入することができ
る。例えばEP−Ａ第0,163,249号及び第0,171,024号明細
書の公知の方法による、例えば大腸菌発現プラスミドへ
の組込み及びかかるプラスミドによる大腸菌の形質転換
が得策である。
ラセミ体中のＬ−PTCの本発明によるＮ−アセチル化の
場合、PTCアセチルランスフェラーゼを発現する細胞は
遊離又は固定された形で使用することができるが、固定
化としては慣用的方法が適用される（例えば西独公開第
3,237,341号明細書及びそこで引用された文献）。
場合、PTCアセチルランスフェラーゼを発現する細胞は
遊離又は固定された形で使用することができるが、固定
化としては慣用的方法が適用される（例えば西独公開第
3,237,341号明細書及びそこで引用された文献）。
Ｌ−PTCの本発明による酵素的アセチル化は、酵素反応
に関して慣用的な方法により行なわれるが、その方法の
条件は使用される生物の特徴によって定められる。原則
として、これに適した方法は上記選択的脱アシル化方法
と同様である。
に関して慣用的な方法により行なわれるが、その方法の
条件は使用される生物の特徴によって定められる。原則
として、これに適した方法は上記選択的脱アシル化方法
と同様である。
本発明は下記例によって詳細に説明されている。他に言
及のない限り、及び百分率は重量基準である。
及のない限り、及び百分率は重量基準である。
例1:PTT耐性選択株 S.ビリドクロモゲネスDSM4112株を最少培地〔ホップウ
ッドら、ストレプトミセスの遺伝子操作、実験マニュア
ル、サ・ジョン・インズ・ファンデーション、ノーリッ
ジ、イングランド、1985年、233頁（Hopwood et al.,Ge
netic Manipulation of Streptomyces,A Laboratory Ma
nual,The John lnnes Foundation,Norwich,England（19
85）,page233）〕で培養し、PTT濃度を増加させながら
加えた。濃度100μg/mlで、約105のコロニーにつき１つ
の耐性コロニーが見出された。
ッドら、ストレプトミセスの遺伝子操作、実験マニュア
ル、サ・ジョン・インズ・ファンデーション、ノーリッ
ジ、イングランド、1985年、233頁（Hopwood et al.,Ge
netic Manipulation of Streptomyces,A Laboratory Ma
nual,The John lnnes Foundation,Norwich,England（19
85）,page233）〕で培養し、PTT濃度を増加させながら
加えた。濃度100μg/mlで、約105のコロニーにつき１つ
の耐性コロニーが見出された。
例2:ベクターの調製 プラスミドpSVH1（欧州特許第0,070,522号明細書、米国
特許第4,673,642号明細書）をBgl IIで切断し、大きさ
約7.1kbの断片を分離し、チオストレプトン耐性の1.1kb
Bcl I断片と連結させる（欧州特許出願公開第0,158,201
号）。大きさが約8.15kbのプラスミドpEB2が得られる
（第２図）。
特許第4,673,642号明細書）をBgl IIで切断し、大きさ
約7.1kbの断片を分離し、チオストレプトン耐性の1.1kb
Bcl I断片と連結させる（欧州特許出願公開第0,158,201
号）。大きさが約8.15kbのプラスミドpEB2が得られる
（第２図）。
例3:耐性遺伝子の分離 全DNAを例１の選択株から分離し、これをBamHIで切断す
る。プラスミドpEB2をBamHIで同様に開環し、２つの混
合物を合わせ、連結させる。連結混合産物でS.リビダン
スTK23（ジョン・インズ・ファンデーションから入手可
能）を形質転換すると、約１〜5kbの挿入物を有する500
0〜10000個の形質転換株が連結混合産物１μｇ当たりか
ら得られる。PTT耐性について選別により２つの耐性S.
リビダンスコロニーが得られる。取込まれたプラスミド
を後者から分離し、BamHIで切断する。耐性の要因とな
る遺伝子を含む4kbBamHI断片が見出される。このプラス
ミドをpPR1（第３図）と命名した。
る。プラスミドpEB2をBamHIで同様に開環し、２つの混
合物を合わせ、連結させる。連結混合産物でS.リビダン
スTK23（ジョン・インズ・ファンデーションから入手可
能）を形質転換すると、約１〜5kbの挿入物を有する500
0〜10000個の形質転換株が連結混合産物１μｇ当たりか
ら得られる。PTT耐性について選別により２つの耐性S.
リビダンスコロニーが得られる。取込まれたプラスミド
を後者から分離し、BamHIで切断する。耐性の要因とな
る遺伝子を含む4kbBamHI断片が見出される。このプラス
ミドをpPR1（第３図）と命名した。
S.リビダンスTK23の再形質転換により形質転換株はPTT1
00μg/ml含有最少培地で増殖することから、PTT耐性が
プラスミドにコードされていることが示される。
00μg/ml含有最少培地で増殖することから、PTT耐性が
プラスミドにコードされていることが示される。
例4:N−アセチル化によるPTC不活性化の証明 クローニングした断片のアセチル化活性を証明するため
に、下記株を試験した:S.ビリドクロモゲネスDSM4112、
S.ビリドクロモゲネス（PTT耐性変異株）、S.リビダン
スTK23及びS.リビダンスTK23（pPR1）。
に、下記株を試験した:S.ビリドクロモゲネスDSM4112、
S.ビリドクロモゲネス（PTT耐性変異株）、S.リビダン
スTK23及びS.リビダンスTK23（pPR1）。
そのためには、株を溶菌培地Ａ（欧州特許出願公開第0,
158,872号、第６頁）に接種し、かつオービタルシェー
カー（orbital shaker）中30℃で２日間インキュベーシ
ョンすることが必要である。回収後、菌糸体1mgを適当
な緩衝液〔例えばRS緩衝液：シー・ジェイ・ドムソン
ら、ジャーナル・オブ・バクテリオロジー、第151巻、1
982年、第678−685頁（C.J.Thompson et al.,Journal a
f Bacteriology 151（1982）,678−685）〕中超音波で
破壊する。PTC分解を測定するための典型的実験操作法
は下記のとおりである。
158,872号、第６頁）に接種し、かつオービタルシェー
カー（orbital shaker）中30℃で２日間インキュベーシ
ョンすることが必要である。回収後、菌糸体1mgを適当
な緩衝液〔例えばRS緩衝液：シー・ジェイ・ドムソン
ら、ジャーナル・オブ・バクテリオロジー、第151巻、1
982年、第678−685頁（C.J.Thompson et al.,Journal a
f Bacteriology 151（1982）,678−685）〕中超音波で
破壊する。PTC分解を測定するための典型的実験操作法
は下記のとおりである。
PTC（250μg/ml）溶液100μ及びアセチルCoA（4mg/m
l）50μを粗抽出物250μに加え、混合物を30℃で２
時間インキュベーションする。その時点でもなお存在す
るPTC量をHPLCで測定する。この結果は以下のとおりで
ある。
l）50μを粗抽出物250μに加え、混合物を30℃で２
時間インキュベーションする。その時点でもなお存在す
るPTC量をHPLCで測定する。この結果は以下のとおりで
ある。
薄層クロマトグラフィーによる参照物質（ニンヒドリン
で染色されない）との比較は、PTCのＮ−アセチル化が
生じたことを示すものである。
で染色されない）との比較は、PTCのＮ−アセチル化が
生じたことを示すものである。
第１図は、本発明によるPTC耐性遺伝子の制限地図であ
る。 第２図は、プラスミドpEB2の制限地図である。 第３図は、プラスミドpPR1の制限地図である。
る。 第２図は、プラスミドpEB2の制限地図である。 第３図は、プラスミドpPR1の制限地図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 微生物の受託番号 ＤＳＭ ４１１２ (72)発明者 レナーテ、アリヤー ドイツ連邦共和国ビーレフェルト、ケスタ ーカムプ、14 (72)発明者 アルフレート、ピューラー ドイツ連邦共和国ビーレフェルト、アム ワルトシュレースヒェン、２ (72)発明者 ゲルハルト、ウェーナー ドイツ連邦共和国フレールスハイム、ア ム、マイン、フレールスハイマー、シュト ラーセ、27 (72)発明者 リューディガー、マルクバルト ドイツ連邦共和国フランクフルト、アム マイン、ギュンタースブルクアレー、69 (72)発明者 ズザンネ、グラープライ ドイツ連邦共和国ケーニヒシュタイン／タ ウヌス、ヘルダーリンシュトラーセ、７ (72)発明者 ディーター、ブラウアー ドイツ連邦共和国フレールスハイム、ア ム、マイン、ベルリナー、シュトラーセ、 14 (72)発明者 クラウス、バールチュ ドイツ連邦共和国ケルクハイム（タウヌ ス）メーメルシュトラーセ、２ (56)参考文献 特表 平１−503434（ＪＰ，Ａ)
Claims (4)
- 【請求項１】ホスフィノトリシル−アラニル−アラニン
（PTT）に耐性のストレプトミセス・ビリドクロモゲネ
スDSM4112を選別し、耐性株由来全DNAをBamHIで切断
し、大きさ4.0kb断片をクローニングし、更にPTT耐性に
ついて選別することにより得ることができる、ホスフィ
ノトリシン（PTC）耐性遺伝子。 - 【請求項２】下記のアミノ酸配列をコードするDNA配列
を有する、特許請求の範囲第１項記載の遺伝子。 - 【請求項３】下記の制限地図を有する、特許請求の範囲
第１項および第２項のいずれか１項に記載の遺伝子。 - 【請求項４】下記のDNA配列を有する、特許請求の範囲
第１項〜第３項のいずれか１項に記載の遺伝子。
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| DE19863628747 DE3628747A1 (de) | 1986-08-23 | 1986-08-23 | Resistenzgen gegen phosphinothricin und seine verwendung |
| DE3637307 | 1986-11-03 | ||
| DE19863642829 DE3642829A1 (de) | 1986-08-23 | 1986-12-16 | Resistenzgen gegen phosphinothricin |
| DE3637307.9 | 1987-01-08 | ||
| DE3700313.5 | 1987-01-08 | ||
| DE3642829.9 | 1987-01-08 | ||
| DE3628747.4 | 1987-01-08 | ||
| DE19873700313 DE3700313A1 (de) | 1986-08-23 | 1987-01-08 | Verwendung eines resistenzgens gegen phosphinothricin |
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| CN87100603A (zh) * | 1987-01-21 | 1988-08-10 | 昂科公司 | 抗黑素瘤疫苗 |
| DE3716309A1 (de) * | 1987-05-15 | 1988-11-24 | Hoechst Ag | Resistenzgen gegen phosphinothricin |
| DE3732972A1 (de) * | 1987-07-02 | 1989-01-12 | Hoechst Ag | Resistenzgen gegen phosphinothricin und seine verwendung |
| DE4126414A1 (de) * | 1991-08-09 | 1993-02-11 | Hoechst Ag | Deacetylasegene zur erzeugung von phosphinothricin oder phosphinothricyl-alanyl-alanin, verfahren zu ihrer isolierung und ihre verwendung |
| DE4222407C1 (de) * | 1992-07-08 | 1993-10-07 | Max Planck Gesellschaft | Modulartiges Promotor-Konstrukt |
| US6586367B2 (en) | 1996-09-05 | 2003-07-01 | Syngenta Crop Protection, Inc. | Process for the control of weeds |
| AR008158A1 (es) * | 1996-09-05 | 1999-12-09 | Syngenta Participations Ag | Proceso para el control de malas hierbas en cultivos de plantas utiles que son resistentes a un fosfo-herbicida y una composicion herbicida para dicho uso. |
| DE19836700A1 (de) | 1998-08-13 | 2000-02-17 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Getreidekulturen |
| DK1104243T3 (da) | 1998-08-13 | 2013-06-17 | Bayer Cropscience Ag | Herbicide midler til tolerante eller resistente majskulturer |
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| DE19836660A1 (de) | 1998-08-13 | 2000-02-17 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen |
| DE19836659A1 (de) | 1998-08-13 | 2000-02-17 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Baumwollkulturen |
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| KR100743611B1 (ko) * | 2006-03-28 | 2007-08-01 | 최광술 | 산업용 로봇의 케이블 조절장치 |
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| EA201290559A1 (ru) | 2009-12-23 | 2013-01-30 | Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх | Растения, устойчивые к гербицидам - ингибиторам hppd |
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