FI100251B - Fosfinotrisiiniresistenssigeeni ja sen käyttö - Google Patents

Fosfinotrisiiniresistenssigeeni ja sen käyttö Download PDF

Info

Publication number
FI100251B
FI100251B FI873610A FI873610A FI100251B FI 100251 B FI100251 B FI 100251B FI 873610 A FI873610 A FI 873610A FI 873610 A FI873610 A FI 873610A FI 100251 B FI100251 B FI 100251B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
ptc
ptt
resistance
gene
fragment
Prior art date
Application number
FI873610A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI873610A (fi
FI873610A0 (fi
Inventor
Gerhard Woehner
Ruediger Marquardt
Dieter Brauer
Susanne Grabley
Wolfgang Wohlleben
Alfred Puehler
Klaus Bartsch
Eckhard Strauch
Walter Arnold
Renate Alijah
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19863628747 external-priority patent/DE3628747A1/de
Priority claimed from DE19863642829 external-priority patent/DE3642829A1/de
Priority claimed from DE19873700313 external-priority patent/DE3700313A1/de
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of FI873610A0 publication Critical patent/FI873610A0/fi
Publication of FI873610A publication Critical patent/FI873610A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI100251B publication Critical patent/FI100251B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
    • C12P41/007—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving acyl derivatives of racemic amines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8277—Phosphinotricin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
    • C12N9/1029—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Catalysts (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Compounds Of Alkaline-Earth Elements, Aluminum Or Rare-Earth Metals (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

100251
Fosfinotrisiiniresistenssigeeni ja sen käyttö
Fosfinotrisiini (PTC, 2-amino-4-metyylifosfinovoi-happo) on glutamiinisyntetaasi-inhibiittori. PTC on fosfi-5 notrisyylialahyylialaniiniantibiootin eräs "rakenneosa". Tämä tripeptidi (PTT) vaikuttaa gram-positiivisia ja -negatiivisia bakteereja sekä myös Botrytis cinerea -sientä vastaan [Bayer et ai., Helv. Chim. Acta 55 (1972) 224], PTT:tä tuottaa Streptomyces viridochromogenes -kanta Tii 10 494 (DSN 40736, DSM 4112) .
DE-patenttijulkaisun 2 717 440 mukaan PTC toimii yleisherbisidinä. Julkaistussa PCT-hakemuksessa WO 86/ 02 097 kuvataan kasveja, joiden PTC-resistenssin voidaan katsoa johtuvan glutamiinisyntetaasin ylituotannosta. Täl- 15 laisissa ylituotannoissa, esimerkiksi geenien amplifikoi- tumisesta johtuvissa, piilee kuitenkin sinänsä epästabii-lisuusvaara. Tällaisen epästabiilisuuden ollessa kyseessä loppuisi siis glutamiinisyntetaasin ylituotanto ja PTC:n kompetitiivinen inhibiittorivaikutus tulisi uudelleen 20 esiin.
Keksintö, joka määritellään patenttivaatimuksissa, koskee PTC-resistenssigeeniä ja sen käyttöä resistenssi-markkerina. Lisäksi tämä geeni soveltuu PTC-resistenttien kasvien valmistukseen ja raseemisen PTC:n L-muodon selek-25 tiiviseen N-asetylointiin.
«
Keksinnön mukaiselle PTC-resistenssigeenille on tunnusomaista, että se on saatavissa PTT-resistenssin pe-rusteella valikoidun Streptomyces viridochromogenes DSM
• * 4112:n kokonais-DNA:sta pilkkomalla BamHI:llä, kloonaamal-30 la 4,0 ke:n pituinen fragmentti ja tekemällä valikointi PTT-resistenssin perusteella. Restriktiokartta (kuvio 1) .. karakterisoi tarkemmin tätä 4,0 ke:n fragmenttia.
' "... Kloonaamalla tämän 4 ke:n fragmentti osa-alueita *’ ’ tarkennettiin koodausalueen sijaintia. Tällöin kävi ilmi, 35 että resistenssigeeni sijaitsee 1,6 ke:n Sstll - Sstl- : : 2 100251 fragmentissa (asemat 0,55 - 2,15 kuviossa 1). Pilkkomalla Bglllrlla otetaan talteen 0,8 ke:n fragmentti, joka plas-midiin sijoittamisen ja S. lividansin transformoinnin jälkeen saa aikaan PTT-resistenssin. Tämä resistenssi edel-5 lyttää PTC:n N-asetylointia.
Sekventoimalla 0,8 ke:n fragmentti Maxamin ja Gilbertin menetelmällä saadaan DNA-sekvenssi I (liite). Tämän sekvenssin avoimesta lukukehyksestä voidaan määrittää re-sistenssigeenin sijainti (asemasta 258 alkaen). Geenin 10 loppupää on viimeistä edellinen annetuista nukleotideistä (asema 806), ts. viimeinen nukleotidi (asema 807) on lope-tuskodonin alku.
DNA-sekvenssissä I osoitetaan "Shine-Dalgarno-sek-venssi" alleviivauksella, samoin aloituskodonina toimiva 15 GTG. Merkitsevä lukukehys on siten painettu ylimmälle riville .
DNA-sekvenssi II osoittaa sekventoidun geenin sisältämät restriktiokohdat. Entsyymejä, jotka katkaisevat sekvenssin useammasta kuin kuudesta kohdasta, ei ilmoite-20 ta.
Antibiootti PTT otetaan talteen bakteereista ja hajotetaan PTC:ksi. Myös tämä inhiboi bakteereissa gluta-miinisyntetaasia, niin että bakteerit kuolevat glutamiinin puutteeseen. PTT:tä tuottavilla bakteereilla pitäisi siksi • * 25 olla järjestelmä, joka suojaa niitä PTT:n vaikutukselta, siis joko estää tuotetun PTT:n takaisinoton tai mahdollis-::: taa hajoamistuotteen, PTC:n, muuntumisen. PTT:tä tuottava S. viridochromogenes DSM 4112 on yllättävästi kuitenkin • # j*.ee herkkä omalle antibiootilleen. Odottamattomasti onnistut- 30 tiin kuitenkin valikoimalla PTT-resistenssin avulla löytä- « · · mään yllättävän suuressa suhteessa, noin 10'5, valikoitu-.. neita klooneja, selektantteja, jotka ovat PTT-resistentte- jä ja tukahduttavat myös läheisistä pesäkkeistä koostuvan '[ ’ taustakasvuston.
i" : 4 * · 3 100251 Näiden selektanttien DNArsta muodostettiin geeni-kirjasto eristämällä DNA, pilkkomalla se BamHI:llä ja li-gatoimalla streptomykeettivektoriin. Ligaatioseoksella transformoitiin kaupallisesti saatavissa oleva kanta S.
5 lividans TK 23, jolloin 1 pg kohden ligaatioseosta saatiin noin 5 000 - 10 000 transformanttia, joissa oli noin 1-5 ke:n insertti. Transformanttien joukossa on PTTresistent-tejä S. lividans -kantoja. Eristämällä plasmidi ja uudel-leentransformoimalla S. lividans voitiin osoittaa, että 10 resistenssi on plasmidin koodaama. Resistenssin aikaansaava geeni on 4 ke:n BamHI-fragmentissa (kuvio 1). Koodaus-alue sijaitsee 0,8 ke:n BglII-fragmentissa. BamHIfragment-ti ei sisällä Clal-, EcoRI-, EcoRV-, Hindlll-, Hpal-, Kpnl-, PvuI-, PvuII- eikä Xhol-pilkkoutumiskohtia.
15 Vertaaminen erään tarkemmin karakterisoimattoman, kannasta S. hygroscopicus FERM BP-130/ATCC 21705 peräisin olevan resistenttigeenin restriktiokarttaan (EP-hakemus-julkaisu 0 173 327, kuvio 7) osoittaa, että keksinnön mukainen resistenssigeeni eroaa tunnetusta geenistä, joka 20 löydettiin etsittäessä PTT-biosynteesigeenejä.
Inkuboimalla PTC:n ja asetyylikoentsyymi A:n kanssa toisaalta S. viridochromogenes DSM 4112:n ja S. lividans TK 23:n ja toisaalta PTT-resistentin S. viridochromogenes -selektantin ja erään plasmidin sisältävän S. lividans 25 -transformantin solu-uutteita voitiin osoittaa, että vii- meksi mainituilla soluilla on asetyloiva vaikutus. Kroma- : tografiset havainnot osoittavat, että asetyloituminen ta- :1·1: pahtuu aminoryhmälle.
• ·
Koska myös E. colissa pystyttiin havaitsemaan PTT- ·. 30 resistenssi ja resistenssimekanismi toimii siten myös II· gram-negatiivisissa bakteereissa, voidaan kuljetusilmiöi-.. hin perustuva resistenssi sulkea pois. Keksinnön mukainen resistenssigeeni voidaan siten siirtää kasveihin kasvipe-'·] ' räisiin promoottoreihin kytkettynä transformoimalla kasvit ,:.· 35 sopivien vektorien avulla ja siten voidaan valmistaa i'”: PTC-resistenttejä kasveja.
4 100251 PTC:n N-asetylaatiota voidaan käyttää myös synteettisen raseemisen D,L-PTC:n isomeerien erottamiseen, koska L-muoto asetyloituu selektiviisesti.
Keksinnön mukaisen resistenssigeenin koodaamaa PTC-5 asetyylitransferaasia voidaan siis käyttää raseemisen PTC:n, jota voidaan valmistaa esimerkiksi DE-patenttijulkaisun 2 717 440 mukaisesti, erottamiseen optisiksi iso-meereikseen saattamalla rasemaatti tämän entsyymin asety-loivan vaikutuksen alaiseksi, jolloin L-muoto reagoi se-10 lektiivisesti D-muodon jäädessä muuttumattomaksi. Siten saadulle seokselle voidaan tehdä erotus sinänsä tunnetulla tavalla komponenttien erilaisten ominaisuuksien perusteella .
On tunnettua saattaa N-asyyli-D,L-aminohapot koske-15 tukseen mahdollisesti kantajalle kiinnitettyjen asylaasien kanssa, jolloin vapautuu selektiivisesti L-aminohappo, joka voidaan erottaa seoksestaan N-asyyli-D-aminohapon kanssa hapottamisen jälkeen uuttamalla veteen sekoittumat-tomilla liuottimilla (GB-patenttijulkaisu 1 369 462) . Vas-20 taavaa N-asyyli-D,L-PTC:lle tehtävää erotusta kuvataan DE-hakemusjulkaisussa 2 939 269 ja US-patenttijulkaisussa 4 226 941.
Jäljelle jäävä D-PTC voidaan rasemisoida tunnetulla tavalla (EP-hakemusjulkaisu 0 137 371, esimerkki 8) ja pa-25 lauttaa sitten takaisin prosessiin.
Entsyymin, jonka sanan piiriin tulee tässä ja jäl-; :*t jempänä lukea kuuluvaksi aina myös entsymaattisesti vai- :*·*: kuttava osa, eristäminen on mahdollista, mutta ei välttä- j*.<e mätöntä. Jos entsyymi erotetaan, sitä voidaan käyttää va- 30 paana tai kantajalle sidotussa muodossa. Soveltuvia kan- tajia kuvataan esimerkiksi EP-hakemusjulkaisussa .. 0 141 223. On kuitenkin tarkoituksenmukaista olla eristä mättä entsyymiä ja käyttää sen sijaan haluttuja PTC-resis-' ' tenttejä soluja, jotka tuottavat keksinnön mukaista ent- ';· 35 syymiä. Siten on tarkoituksenmukaista käyttää PTT-resis- i : 5 100251 tenttejä S. viridochromogenes DSM 4112 -selektantteja. Edullisesti voidaan käyttää myös haluttuja, keksinnön mukaisella geenillä transformoituja soluja, jotka kykenevät tuottamaan PTC-asetyylitransferaasia. Keksinnön mukainen 5 geeni, joksi tässä yhteydessä katsotaan myös geenin aktiivinen osa, voidaan tällöin viedä isäntään plasmidiin integroidussa muodossa tai käyttämällä muita tavanomaisia geeniteknisiä menetelmiä, esimerkiksi transfektiota. Eräs tarkoituksenmukainen menetelmä on esimerkiksi sisällyttä-10 minen E. coli -ilmentymisplasmidiin ja E. colin transfor-mointi tällaisella plasmidilla, esimerkiksi EP-hakemusjulkaisujen 0 163 249 ja 0 171 024 mukaisilla menetelmillä.
Rasemaatin sisältämän L-PTC:n N-asetylointiin voidaan käyttää soluja, jotka tuottavat PTC-asetyylitransfe-15 raasia, joko vapaina tai immobilisoituina, jolloin voidaan käyttää tavanomaisia immobilisointimenetelmiä (esimerkiksi DE-hakemusjulkaisu 3 237 341 ja siinä mainittu kirjallisuus) .
L-PTC:n entsymaattinen asetylointi tehdään entsyy-20 mireaktioiden yhteydessä tunnetulla tavalla, jolloin menettelyissä käytettävät olosuhteet määräytyvät käytetyn organismin mukaan. Periaatteessa tulevat kyseeseen samat menetelmät kuin edellä mainitussa selektiivisessä deasety-loinnissa.
\..: 25 Keksintöä valaistaan tarkemmin seuraavissa esimer- keissä. Osuudet ja prosenttiosuudet ovat paino-osia ja : : : -prosentteja ellei toisin mainita.
Esimerkki 1 • · PTT-resistentit selektantit 30 Kantaa S. viridochromogenes DSM 4112 kasvatettiin • « · minimialustalla (Hopwood et ai., Genetic Manipulation of .. Streptomyces, A Laboratory Manual, The John Innes Founda tion, Norwich, Englanti 1985, s. 233) ja lisättiin kasva-' via PTT-pitoisuuksia. Pitoisuuden ollessa 100 μg/ml löy- • i 35 dettiin noin 10s pesäkettä kohden yksi resistentti pesäke.
) : 6 100251
Esimerkki 2
Vektorin valmistus
Plasmidi pSVHl (EP-julkaisu 0 070 522) pilkotaan BglII:lla, eristetään noin 7,1 ke:n pituinen fragmentti 5 ja ligatoidaan se noin 1,1 ke:n BclI-fragmentin kanssa, joka sisältää tiostreptoniresistenssigeenin (EP-hakemus-julkaisu 0 158 201). Saadaan 8,15 ke:n pituinen plasmidi pEB2 (kuvio 2).
Esimerkki 3 10 Resistenssigeenin eristäminen
Esimerkin 1 mukaisista selektanteista eristetään kokonais-DNA ja pilkotaan se BamHI:llä. Plasmidi pEB2 avataan käyttämällä samoin BamHI, yhdistetään nämä tuotteet ja tehdään ligatointi. Ligaatioseoksella transformoidaan 15 S. lividans TK 23 (saatavana John Innes Foundationista) , jolloin 1 pg kohden ligaatioseosta saadaan 5 000 - 10 000 transformanttia, joissa on noin 1 - 5 ke:n pituinen in-sertti. PTT-resistenssivalikoinnilla saadaan kaksi resistenttiä S. lividans -pesäkettä. Näistä eristetään plasmidi 20 ja pilkotaan se BamHI:llä. Löydetään yksi 4 ke:n BamHI-fragmentti, joka sisältää resistenssin aikaansaavan geenin. Tämä plasmidi nimetään pPRl:ksi (kuvio 3).
Transformoimalla uudelleen S. lividans TK 23 voidaan osoittaa, että PTT-resistenssi on plasmidin koodaama, 25 sillä transformantit kasvavat minimialustalla, joka sisäl-tää 100 pg/ml PTT:tä.
: : Esimerkki 4 • ♦ _ N-asetyloinnin vaikutuksesta tapahtuvan PTC:n ini'... aktivoitumisen osoittaminen 30 Kloonatun fragmentin asetyloivan aktiivisuuden osoittamiseksi tutkittiin seuraavia kantoja: S. viridoj .. chromogenes DSM 40736, S. viridochromogenes (PTT-resis- tentti mutantti), S. lividans TK 23 ja S. lividans TK 23 :·; (pPRl) .
i : 7 100251
Kannat siirrostetaan lysemedium A -alustaan (EP-ha-kemusjulkaisu 0 158 872, s. 6) ja inkuboidaan kaksi vuorokautta 30 °C:ssa pyöröravistimessa. Talteenoton jälkeen hajotetaan 1 mg myseeliä sopivassa puskurissa [esimerkiksi 5 RS-puskuri; C.J. Thompson et ai., J. Bacteriol. 151 (1982) 678 - 685] ultraäänikäsittelyllä. Tyypillinen koe PTC:n hajoamisen mittaamiseksi tehdään seuraavasti:
Raakauutteeseen (250 μΐ) lisätään 100 μΐ PTC-liuos-ta (250 pg/ml) ja 50 μΐ asetyyli-CoA-liuosta (4 mg/ml) ja 10 inkuboidaan kaksi tuntia lämpötilassa 30 °C. Jäljellä olevat PTC-määrät mitattiin HPLC:llä. Tällöin saatiin seuraa-va tulos:
Kanta reagoimaton PTC/
käytetty PTC
15 S. lividans TK 23 100 % S. viridochromogenes 72 % (DSM 40736) S. viridochromogenes- 7 % selektantti 20 S. lividans TK 23 (pPRl) 31 %
Se, että on kyse PTC:n N-asetylaatiosta, voidaan osoittaa vertaamalla ohutlevykromatografiassa referenssi-aineisiin (ei värjäydy ninhydriinillä).
« · · « · · • · • · • · · • · i ·..
iY: i : „ 100251
O
DNA-sekvenssi I
IleTrpSerAspValLeuGlyAlaGlyProValLeuProGlyAspA5pPhePheSerLeu61yGlyThrSerIle A9pLeuGluArgArgProGlyGlyArgSerGlyAlaAlaArgGlyArgLeuLeuLeuPPoArgApgHisLeuHi9 ArgSerGlyAlaThrSerTrpGlyProUalArgCysCysProGlyThrThrSerSerPpoSerAlaÄlaPpoPro AGATCT6GAGCGACGTCCT6GGGGCCGGTCCG6TGCT6CCC666GACGACTTCTTCTCCCTCGGC6GCACCTCCA 75 TCTA6ACCTCGCTGCAGGACCCCC6GCCAGGCCACGACGGGCCCCT6CTGAA6AAGA666AGCCGCCGTG6A6GT 5 SepArgSepArgArgG1yProProArgAspProAlaAlaApgPpoApgSerArgArgGlyApgArgCysArgTrp A5pPpoAlaValAsp61nPpoGlyThrArgHisGlnGlyProValValGluGluGlyGluAlaAlaGlyGlyAsp IleGlnLeuSerThrArgProAlaProGlyThpSerGlyProSerSerLyaLysGluArgPpoProValGluMet
SepAlaLeuArgValValSerArglleArgLysGluLeuGlyValPpoLeuApgLeuAlaValIlePheGluThp LeuGlyValAlaGlyGlyLeuAlaHisProGln61yThrArgArgAlaThrPppAlaApgArgA9pl-euApgA9p SepArgApgCysGlyTppSepArgAlaSerAlaApgAsnSepAlaCysHisSepGlySepProOP SerSepArg TCTCGGCGTTGCGGGTGGTCTCGCGCATCCGCAAGGAACTCGGCGTGCCACTCCGGCTCGCCGTGATCTTCGAGA 150 A6AGCCGCAACGCCCACCAGAGCGC6TAGGCGTTCCTTGAGCCGCACGGTGAGGCCSAGCGGCACTAGAAGCTCT 10 ArgProThrAlaProPpoApgAlaCysGlyCyaPpoValArgApgAlaValGlyAlaArgApgSerArgArgSer
ArgArg61nPpoHi9AspApgAlaAspAlaLeuPheGluAlaHisTppGluPpoGlu61yHisAspGluLeuArg GluAl aAsnArgThpThpGluArgllet ArgLeuSepSerProThrGlySerArgSerAlaThrI leLyaSerVal
ProSerLeuGluAlaValAlaGluSerValLeuApgGluLeuLysGlyThrAtt OC ArgGlyAlaArgHiaPro AlaValProGlySepGlyGlyArglleArgThpPpoApgThrGluGlyAspValValLysApgCysPpoPpoPpo ApgArgProTrpLy9ApgTppProAsnProTypSepAlaAsnOP ApgGlyArgSerLysGluValPpoAlaThp CGCCGTCCCTGGAAGCGGTGGCCGAATCCGTACTCCGCGAACTGAA6GGGAC6TAGTAAAGAGGTGCCCGCCACC 225 GCGGCAGGGACCTTCGCCACCGGCTTAGGCATGAGGCGCTTGACTTCCCCT6CATCATTTCTCCACGGGCGGTGG ]_ 5 AlaThpGlyProLeuPpoProArgIleArgValGlyArgValSerPPoSepThrThrPheLeuHi961yGlyGly
ApgGlyGlnPheArgHl 9GlyPheGlyTyrGluAlaPhe61nLeuProArgLeiiLeu5erThpGlyAlaValArg GlyAapApgSerAiaThpAiaSerAapThrSerArgSerSerPhePPoValTypTypLeuProAlaApgTppGly
LeuSep61nAsnThrGlu61yArgProHisVaiSerPPoGluArgArgProValGluIleApgPPoAlaThrAla AlaPheAlaGluHiaArgApgLysThrThrArgGluProApgThrThpProGlyApgAapPpoSerArgHisArg ApgPheArgArgThrPpoLyaGluAspHiaThrOP AlaGlnAsnA9pAlaArgSePArgSerValProPpoPro ; ‘ ' CGCTTTCGCAGAACACCGAAGGAAGACCACACGTGA6CCCAGAACGACGCCCG6TC6AGATCC6TCCCGCCACCG 300
'' " GCGAAAGCGTCTTGT66CTTCCTTCTGGTGTGCACTCGGGTCTT6CTGC6G6CCA6CTCTA6GCA66GCGGTGGC
20 AlaLysAlaSerCysArgLeuPheValValArgSerGlyLeuValValGlyPpoApgSep61yA9pArgTppApg
LysArgLeuValGlyPheSerSerTrpValHi9AlaTrpPheSerAlaArgA9pLeuA9pThrGlyGlyGlyGly ; '; Ser61uCysPheValSerProLeuGlyCy9ThpLeuGlySepArgApgGlyThpSerIleApgGlyAlaValAla
I I
;" ·1 · AlaAspfletAlaAlaValCysAapIleValAanHisTypIleGluThrSepThpValAanPheApgThrGluPro ' 1 ArgArgHisGly61yGlyLeuArgHi9ArgGlnSerLeuHi9ApgAsp61uHlsGlyGlnLeuPpoTyr61yAla J' ProProThrTrpArgArgSepAlaTbpSepSerlleThpThrSerArgApgAlaApgSepThpSerValArgSer ·' ‘' CCGCCGACATGGCGGCGGTCTGCGACATCGTCAATCACTACATCGA6ACGA6CACGGTCAACTTCCGTACGGAGC 375
:': '; 66CGGCT6TACCGCC6CCAGACGCTGTAGCAGTTAGT6ATGTA6CTCT6CTCGT6CCA6TTeAAG6CAT6CCTCG
‘ ‘ 25 ArgApgCy9PpoPpoPpoApgApgCy9ApgOP AspSapCysApgSerSepCyaProOP Ser61yTypPpoAla 61yValHisArgArgAspAlaValAspAspIleValVaiAspLeuArgAlaArgAspValGluThrArgLeuArg AlaSerfletAlaAlaThrGlnSepMetThrLeuOP AM HetSerValLeuValThrLeuLysArgValSerGly
GlnThrProGlnGluTrpIleAspAapLeuGluArgLeuGlnAspArgTyrProTrpLeuValAlaGluValGlu AlaA9pSerAla61yValAspApgApgPpoGlyAlePpoProGlyProLeuProLeuAlaApgApgArg61y61y ApgApgLeuArgApgSepGlySerThrThpTppSerAlaSerArgThpAlaThpProGlySepSepProArgTrp j*. CGCAGACTCCGCAG6AGT6GATC6AC6ACCTG6AGCGCCTCCAG6ACCGCTACCCCT6GCTCGTCGCCGAGGT66 450
: ** GCGTCTGA6GCGTCCTCACCTA6CT6CT66ACCTCGCGGA66TCCT66C6AT66GGACC6AGCAGCGGCTCCACC
·*·*. AlaSer61uAlaProThrSerArgArgGlyPpoAla61y61yProGlySer61yArgAlaArgArgArgProPro ·*·* LeuSerArgLeuLeuProAspValVal61nLeuAlaGluLeuValAlaVal61yPro61uA5pGlyLeuHjaLeu • · CysValGlyCysSerHxalleSerSerArgSerApgArgTppSerArgAM GlyGlnSerThrAlaSerThrSer • · · * · · • ♦ ·«« • · • · ··· i % 9 100251 DNA-sekvenssi I (jatkoa)
61yValValAlaGlylleAlaTyrAlaGlyPpoTppLysAlaArgAanAlaTypAapTppThPValGluSepThp SlyAPOArgApgArgHiaArgLeuApgApgPpoLeuGluGlyPpoGlnApgLeuApgLeuAapApgApgyalAap ArgAlaSepSepPpoAlaSerProThpPpoAleProGlyArgProAlaThpPpoThpThpGlyPpoSepSepArg AGGGCGTCGTCGCCGGCATCGCCTACGCCG6CCCCTG6AAGGCCCGCAACGCCTACGACT6GACCGTCGAGTCGA 52S n TCCC6CAGCA6CGGCCGTAGCG6ATGCGGCCGGGGACCTTCCGGGCGTT6CGGATGCTGACCT6GCAGCTCAGCT
ProApgApgApgArgCysApgArgApgApgGlyApgSepPpoGlyCysArgApgApgSepSepApgApgThpSep AlaAspA9pGlyAlaAap61yUal61yAla61yProLeuGlyAleyal61yyaiyalPpoGlyAspLeuApgApg ProThpThpAlaProttetAlaAtt AlaProGly61nPheAlaArgLeuAlaAf1 Sep61nyalThpSepAspWal
ValTypValSepHiaArgHisGlnApgLeuGlyLeuGlySerThPLeuTypThrHlsLeuLeuLyaSeplletGlu GlyUalApgLeuPpoProAlaPpoAlaAlaApgThpGlyLeuHlsProLeuHisProProAleGluUalHisGly ApgCysThpSepPpoThpGlyThpSepGlySepAspTrpAlaPpoPpoSerThpPpoThpCysOP SepPpoTrp CG6TGTACGTCTCCCACCGGCACCAGCGGCTCGGACTG6GCTCCACCCTCTACACCCACCTGCT6AAGTCCATGG 600 6CCACATGCAGA666T6GCCGTGGTC6CC6AGCCT6ACCCGA6GT666A6ATGTGGGTG6ACGACTTCA6GTACC 1 0 ProThpApgApgGly6lyAla61yAleAlaArgUalProSerTrpGlyArgCys61y61yAlaSepThrTrpPro
HisUalAsp61yUalProUalLeuPpo61uSep61nAla61y61y61uUal61yVal61n61nLeu61yHisLeu ThpTyrThrGluTppApgCy5TppArBSerPpoSepPpo61uValApgAM ValTrpArgSepPheAapfletSer
AlaGlnGlyPheLysSePValValAlaUalIleGlyLeuProAanAspProSepUalApgLeuHis61uAlaLeu GlyPpoGlyLeu61n61uApgGlyAPBApgHi9ApuThpAla61nApgPpo61uApgAleProAleArgGlyAle ApgPpoApgAlaSepApgAiaTppSepProSepSepAapCysProThrThpApgAiaCysAiaCysThrApgApg AG6CCCAG66CTTCAA6AGC6T66TCGCCGTCATC66ACT6CCCAACGACCC6A6CGT6C6CCT6CAC6AG6C6C G7S TCCG6GTCCCGAAGTTCTCGCACCAGCGGCAGTAGCCTGACGGGTTGCT66GCTC6CACGCGGACSTGCTCCGCG 15 ProGJyPpoSerOP SepApgPppApgApgOP ApgValAlaTrpApg61ySepApgAla61yAlaApgPpoAla GlyLeuAlaGluLeuAlaHiaAspGlyAspAspSerGln61yUalUalArgAlaHi9AlaGlnUalLeuArg61u AlaTrpPpoLyaUeuLeuThpThpAlaThpMetPpoSerGlyLeuSerGlyLeuThpApgAi-gCysSerAlaSeP
'.. ' 61yTypThpAlaApgGlyThpLeuApgAlaAlaGlyTyrLy9Hi561yGlyTppHisAspVal61yPheTppGln
ApgIleHi9ApgAlaApgAspAlaAlaGlySepApgLeuGlnAlaArgGlyLeuAlaApgApg61yValLeuAla SepAspThpProApgAla61yApgCysGlyGlnPpoAlaThpSepThp61yAla61yThpThrTpp61ySep61y . TCGGATACACCGCGC6CG6GACGCT6C666CA6CCGGCTACAAGCACG66G6CT66CACGACGTGGGGTTCTB6C 750
‘' AGCCTATGT6GCGCGCGCCCTGCSACGCCCGTCGGCCGAT6TTC6TGCCCCCGACCGT6CTGCACCCCAAGACCG
;'. , 20 ApglleCysArgAlaApgSepAlaAlaPpoLeijApgSepCy9AiaApgPpoSepAlaApgApgPpoThpApgAIa ! , ‘ SepyalGlyApgAlaProApgGlnPpoCysGlyAlaVelLeuYalPpoAlaPpoValValHiaPpoGluPpoLeu ; , ProTypValAlaApgPpoYalSepArgAlaAlaPpoAM LeuCysProProGlnCysSerThpppoAanGlnCya , ·. ·, ApgAspPheGluLeuPpoAlaPpoProApgProVelApgPpoValThp61nIle ‘ · AlaApgLeuApgAlaAlaSlyPpoAlaPpoPpoApgProAlaApgHisThpAsp
SepAlaThpSepSepCysApgPpoApgProAlaPpoSerGlyPpoSepHisArgSep AGCGC6ACTTC6AGCT6CCGGCCCCGCCCC6CCCCGTCCSGCCCGTCACACAGATCT 807 TCGCGCTGAAGCTCGACGGCCGGG6CGGG6CGGGGCAGGCCG6GCAGTGT6TCTAGA oc AlaArgSepArgAlaAlaPro61yAlaGlyGlyArgGlyAlaApgOP ValSepApg AlaValGluLeuGlnApgGlyApgGlyAla61yA9pPro61yA9pCy9LeuA9p ApgSerLysSepSep61yAla61yGlyApgGlyThpArgGlyThpValCy9lle • · • · • ·· « · » · · • · · • · • · • · · « · « • · • « « « * · 1 • · · - · · • · · • 0 • ·1
DNA-sekvenssi II
10 100251
I AGATCTGGAGCGACGTCCTGGGGGCCGGTCCGGTGCTGCCCGGGGACGACTTCTTCTCCC TCTAGACC7C5CT6CAGSACCCCCSGCCAGGCCACGACGGGCCCCTGCTGAAGAAGAGGG
A A h MA A AA AAA A A
1 BGLII XHOII, 2 DPNI SAU3A, 5 GSUI , 12 AATII ACYI, 13 MAEII 5 . 17 APYI ECORII , 25 RSR1I, 27 AYAII. 35 BBVI , 39 AUAI NCII
SMAI , 40 NCII, 52 HB01I, 59 MNL1 ,
51 TCGGCG6CACCTCCATCTC6GCGTTGCGGGT6GTCTCGCGCATCCGCAAGGAACTCGSCG AGCCGCCGTSÖAGGTAGAGCCGCAACGCCCACCA6AGCGCGTAGSCGTTCCTT6AGCCGC
A A AAA
GB HGICI , 70 HNLI. 97 FNUDII. 100 SFANI , 101 FOKI, 10
121 TGCCACTCCGGCTCGCCGTGATCTTCGAGACGCCGTCCCT6GAAGCGGTGGCCGAATCCG AC66TGA6GCCGAGCGGCACTAGAAGCTCT6CGGCAGGGACCTTCGCCACCGGCTTAGGC
A AAA A AAA
122 BGLI , 140 DPNI SAUZA, 142 MBOII. 149 ACYI HGAI TTH111I, 158 APYI ECDRII , 159 CFRI GDI 11 . 174 HINFI, 180 RSAI,
181 TACTCCGCGAACTGAAGGGGACGTAGTAAAGAGGTGCCCGCCACCCGCTTTCGCAGAACA ATGAGGCGCTTGACTTCCCCTGCATCATTTCTCCACGGSCGSTGSGCGAAA6CGTCTTGT
A A AAA
,..., 1 BE FNUDII, 201 MAEII, 211 MNLI , 213 HGICI, 214 5DUI .
....: 241 CCGAAGGAAGACCACACGTGAGCCCAGAACGACGCCCGGTCGAGATCCGTCCCGCCACCG
6GCTTCCTTCTGGTGTGCACTCGGGTCTTGCT6C6GGCCA6CTCTASGCAGGGCGGTGGC
··· A AAA A AA AA
20 247 254 AFLIII, 255 PMACI, 255 MAEII, 250 HGIJII SDUI
i '·’ , 271 ACYI HGAI. 275 NCII, 283 XHOII, 284 BINI DPNI SAU3A,
’’ 301 CCGCCGACATGGCGGCGGTCTGCGACATCGTCAATCACTACATCGAGACGA6CACG6TCA
6GCGGCTGTACCGCCGCCAGACGCTGTAGCAGTTAGT6ATGTAGCTCTGCTCGTGCCAGT
A 9 A * A A
303 BGLI. 308 NLAIII, 324 TTH1111, 350 HGIAI SDUI, 357 HINCI
25
351 ACTTCCGTACGGAGCCGCAGACTCCGCAGGAGTGGATCGACGACCTGGA6CGCCTCCA6G
:·, TGAA6GCATGCCTC66C6TCT6AGGC6TCCTCACCTASCTGCT6GACCTC6CGGAGGTCC
• *· a » m A A » » » « « « 357 RSAI, 3B0 HINFI. 394 BINI, 395 DPNI SAU3A, 404 APYI ECOR II, 405 6SUI , 409 HAE11 , 413 MNLI, 414 GSUI, 416 APYI ECORII :Y: , 4i9 avaii , 30
S...i 421 ACCGCTACCCCT6GCTCGTCGCCGAGGTGGAGGGCGTCGTCGCCGGCATCGCCTACGCCG
" TGGCGATGGGGACCGAGCAGCGGCTCCACCTCCCGCA6CAGCGGCCGTA6CGGATGCGGC
• · ·
f » A A AAA A A A
• ♦ Γ*. 430 APYI ECORII. 444 MNLI, 450 MNLI. 453 ACYI, 454 HGAI, 452 :.**t NAEI , 456 SFANI, 477 NAEI .
481 GCCCCTGGAAGGCCCGCAACGCCTAC6ACTGGACC6TCGAGTC6ACGGT6TACGTCTCCC
35 CGGGGACCTTCCGGGCGTTGCGGATGCTGACCTGGCAGCTCAGCTGCCACATGCAGAGGG
A A A A A A
464 APYI ECORII, 511 AUAII. 519 HINFI, 521 ACCI HINCII SALI, 530 RSAI , 532 MAEII.
DNA-sekvenssi II (jatkoa) u 100251 541 ACCGGCACCAGCGGCTCG6ACTGGGCTCCACCCTCTACACCCACCTGCTGAAGTCCf TG6CCGTGGTCGCCGAGCCTGACCCGAGGT6GGAGAT GT66GTGGACGACTTCAGGTf
AA A A ft A AA
544 HGICI, 549 NSPBII, 553 HGIJII SDUI , 572 MNLI . 578 TAQII, 5 583 BSPMI, 595 NCOI STYI, 596 NLAIII, 600 MNLI.
50! AGGCCCAGGGCTTCAAGAGCGTGGTCGCCGTCATCGGACTGCCCAACGACCCGAGCGTGC
TCCGGGTCCCGAAGTTCTCGCACCAGC6GCAGTAGCCTGACGGGTTGCTGGGCTCGCACG
605 APYI ECORII, 650 AUAI ,
, - 561 6CCTGCACGAGGCGCTCG5ATACACCGC6CGCGGGACGCTGCGGGCAGCCSGCTACAA6C
1U CGGACGTGCTCCGCGAGCCTATGTGGCGCGCGCCCTGCGACGCCCGTCGGCCGATGTTCG
AA A A A A AA AA A
659 MNLI, 671 HAEII, 686 FNUDII, 587 BSSHII, 688 FNUDII, 690 FNUDII. 69= HGAI, 698 BBUI , 705 BBUI, 708 NAEI , 716 TTH111I I .
721 ACGGGSGCTGGCACGACGTGGGGTTCTGGCAGCGCGACTTCGAGCTGCCGGCCCCGCCCC
15 TGCCCCCGACCGTGCTGCACCCCAAGACCGTCGCGCTGAAGCTCGACGGCCGGGGCGGGG
AA AA A A A
732 DRAIII, 736 MAEII , 749 BBUI, 753 FNUDII, 763 ALUI . 764 B 8UI , 757 NAEI ,
' 781 GCCCCGTCCG6CCCGTCACACAGATCT
: CGGGGCAGGCCGGGCAGTGTGTCTAGA
• · · A A A
· 90 : .· u 795 MAEIII, 802 BGLII XHOII, 803 DPNI SAU3A, 4 · • · • · • ·· * · • « · • 1 · • # • · • · 1 • # ♦ m · • · · • 1 • 1 • · « • · · • · - · · ·«· · • ♦ • ·· • ·

Claims (4)

100251
1. Fosfinotrisiini(PTC)resistenssigeeni, tunnettu siitä, että se on saatavissa fosfinotrisyy- 5 lialanyylialaniini (PTT) resistenssin perusteella valikoidun Streptomyces viridochromogenes DSM 4112 :n kokonais-DNA: sta pilkkomalla BamHIrllä, kloonaamalla 4,0 ke:n pituinen fragmentti ja valikoimalla PTT-resistenssin perusteella.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen geeni, t u n -10 n e t t u siitä, että sillä on kuvion 1 mukainen res- triktiokartta.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen geeni, tunnettu siitä, että sillä on DNA-sekvenssi I (liite), asemat 258 - 806. 15
4 . Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukaisen geenin käyttö, tunnettu siitä, että sitä käytetään PTT-resistenssimarkkerina bakteereissa * · • · · « · • · · • · · « « • · « · · • · • · ·· i « · t :: • · « · 4 · 4 4·· 100251
FI873610A 1986-08-23 1987-08-20 Fosfinotrisiiniresistenssigeeni ja sen käyttö FI100251B (fi)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3628747 1986-08-23
DE19863628747 DE3628747A1 (de) 1986-08-23 1986-08-23 Resistenzgen gegen phosphinothricin und seine verwendung
DE3637307 1986-11-03
DE3637307 1986-11-03
DE3642829 1986-12-16
DE19863642829 DE3642829A1 (de) 1986-08-23 1986-12-16 Resistenzgen gegen phosphinothricin
DE19873700313 DE3700313A1 (de) 1986-08-23 1987-01-08 Verwendung eines resistenzgens gegen phosphinothricin
DE3700313 1987-01-08

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI873610A0 FI873610A0 (fi) 1987-08-20
FI873610A FI873610A (fi) 1988-02-24
FI100251B true FI100251B (fi) 1997-10-31

Family

ID=27433686

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI873610A FI100251B (fi) 1986-08-23 1987-08-20 Fosfinotrisiiniresistenssigeeni ja sen käyttö

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0257542B1 (fi)
JP (4) JPH0797994B2 (fi)
CN (2) CN1040772C (fi)
AT (1) ATE75776T1 (fi)
AU (1) AU604743B2 (fi)
CA (1) CA1337597C (fi)
DK (1) DK175254B1 (fi)
ES (1) ES2038631T3 (fi)
FI (1) FI100251B (fi)
GR (1) GR3005200T3 (fi)
HU (1) HU217208B (fi)
IL (1) IL83604A (fi)
NZ (1) NZ221526A (fi)

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0242236B2 (en) * 1986-03-11 1996-08-21 Plant Genetic Systems N.V. Plant cells resistant to glutamine synthetase inhibitors, made by genetic engineering
CN87100603A (zh) * 1987-01-21 1988-08-10 昂科公司 抗黑素瘤疫苗
DE3716309A1 (de) * 1987-05-15 1988-11-24 Hoechst Ag Resistenzgen gegen phosphinothricin
DE3732972A1 (de) * 1987-07-02 1989-01-12 Hoechst Ag Resistenzgen gegen phosphinothricin und seine verwendung
DE4126414A1 (de) * 1991-08-09 1993-02-11 Hoechst Ag Deacetylasegene zur erzeugung von phosphinothricin oder phosphinothricyl-alanyl-alanin, verfahren zu ihrer isolierung und ihre verwendung
DE4222407C1 (de) * 1992-07-08 1993-10-07 Max Planck Gesellschaft Modulartiges Promotor-Konstrukt
US6586367B2 (en) 1996-09-05 2003-07-01 Syngenta Crop Protection, Inc. Process for the control of weeds
AR008158A1 (es) * 1996-09-05 1999-12-09 Syngenta Participations Ag Proceso para el control de malas hierbas en cultivos de plantas utiles que son resistentes a un fosfo-herbicida y una composicion herbicida para dicho uso.
DE19836684A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Reiskulturen
DE19836660A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen
DE19836659A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Baumwollkulturen
DE19836700A1 (de) 1998-08-13 2000-02-17 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Getreidekulturen
CA2340013C (en) 1998-08-13 2012-10-02 Aventis Cropscience Gmbh Herbicidal compositions for tolerant or resistant maize crops
CA2475485C (en) 2002-02-26 2012-08-28 Syngenta Limited A method of selectively producing male or female sterile plants
WO2006054458A1 (ja) 2004-11-17 2006-05-26 Hokko Chemical Industry Co., Ltd. 除草剤耐性遺伝子及びその利用
KR100743611B1 (ko) * 2006-03-28 2007-08-01 최광술 산업용 로봇의 케이블 조절장치
AR074941A1 (es) 2009-01-07 2011-02-23 Bayer Cropscience Sa Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion
WO2011076882A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Bayer Cropscience Ag Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
CN102906252A (zh) 2009-12-23 2013-01-30 拜尔知识产权有限公司 对hppd抑制剂型除草剂耐受的植物
UY33142A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
UY33143A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
AU2010334818B2 (en) 2009-12-23 2015-07-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
BR112012029616A2 (pt) 2010-05-21 2015-10-20 Bayer Ip Gmbh agentes herbicidas para as culturas de cereais tolerantes ou resistentes
CN103002743A (zh) 2010-05-21 2013-03-27 拜耳知识产权有限责任公司 用于耐药性或抗药性油菜作物的除草剂
US20110287934A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Bayer Cropscience Ag Herbicidal composition for tolerant or resistant rice crops
EP2571366A1 (de) 2010-05-21 2013-03-27 Bayer Intellectual Property GmbH Herbizide mittel für tolerante oder resistente maiskulturen
WO2012004013A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Bayer Bioscience N.V. Glucosinolate transporter protein and uses thereof
US20140090102A1 (en) 2011-01-24 2014-03-27 Stéphane Pien Use of the rd29 promoter or fragments thereof for stress-inducible expression of transgenes in cotton
EP2524602A1 (de) 2011-05-20 2012-11-21 Bayer CropScience AG Herbizide Mittel für tolerante oder resistente Sojakulturen
UA117816C2 (uk) 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
DE202014101590U1 (de) 2014-04-03 2014-04-29 Igus Gmbh Führungssystem für Versorgungsleitungen und Roboter mit Führungssystem

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0242236B2 (en) * 1986-03-11 1996-08-21 Plant Genetic Systems N.V. Plant cells resistant to glutamine synthetase inhibitors, made by genetic engineering

Also Published As

Publication number Publication date
HU217208B (hu) 1999-12-28
JPH09107981A (ja) 1997-04-28
IL83604A0 (en) 1988-01-31
ATE75776T1 (de) 1992-05-15
EP0257542A3 (en) 1990-03-07
JP2749424B2 (ja) 1998-05-13
GR3005200T3 (fi) 1993-05-24
JPH03103193A (ja) 1991-04-30
JPS6371183A (ja) 1988-03-31
CN1225393A (zh) 1999-08-11
CN87105764A (zh) 1988-11-30
IL83604A (en) 2004-02-19
DK175254B1 (da) 2004-07-26
FI873610A (fi) 1988-02-24
EP0257542B1 (de) 1992-05-06
EP0257542A2 (de) 1988-03-02
DK437887D0 (da) 1987-08-21
JPH07147985A (ja) 1995-06-13
CN1124347C (zh) 2003-10-15
JP2815847B2 (ja) 1998-10-27
DK437887A (da) 1988-02-24
FI873610A0 (fi) 1987-08-20
CA1337597C (en) 1995-11-21
NZ221526A (en) 1989-03-29
CN1040772C (zh) 1998-11-18
AU604743B2 (en) 1991-01-03
JPH0797994B2 (ja) 1995-10-25
AU7731887A (en) 1988-05-19
HUT44621A (en) 1988-03-28
ES2038631T3 (es) 1993-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI100251B (fi) Fosfinotrisiiniresistenssigeeni ja sen käyttö
US5879903A (en) Phosphinothricin-resistance gene, and its use
US5637489A (en) Phosphinothricin-resistance gene, and its use
Schubert et al. Cloning of the Alcaligenes eutrophus genes for synthesis of poly-beta-hydroxybutyric acid (PHB) and synthesis of PHB in Escherichia coli
JP2540143B2 (ja) 組換え体ｄｎａ類およびその用途
EP0711348B1 (en) Process for the efficient production of 7-adca via 3-(carboxyethylthio)propionyl-7-adca
FI95810B (fi) Eristetty DNA-yhdiste, joka koodaa rekombinantti DNA isopenisilliini N-syntetaasia, sitä sisältävät vektorit ja menetelmä isopenisilliini N-syntetaasiaktiivisuuden tuottamiseksi näiden avulla
WO2016050654A1 (en) Process for converting ferulic acid into vanillin
JPH02150284A (ja) クラスター状生合成遺伝子を用いた二次代謝産物生産増加法
KR100359226B1 (ko) 스트렙토그라민의생합성에수반되는폴리펩티드,이폴리펩티드를코딩하는뉴클레오티드서열및그의사용
US20090215134A1 (en) Genetically modified microorganism and process for production of macrolide compound using the microorganism
CA2183632A1 (en) Process for producing 2-keto-l-gulonic acid
WO2005052152A1 (ja) マクロライド系化合物の水酸化に関与するｄｎａ
EP0173327B1 (en) Bialaphos producing gene
US5652132A (en) Oxido reductase enzyme system obtainable from P. chrysogenum, the set of genes encoding the same and the use of oxido reductase enzyme systems or genes encoding the same for increasing antibiotic production
AU783603B2 (en) Transformant producing secondary metabolite modified with functional group and novel biosynthesis genes
US5908764A (en) Methods and compositions for increasing production of erythromycin
JP2928884B2 (ja) Ｄｎａおよびその用途
EP0653490A1 (en) Vitamin d hydroxylase gene
WO2005040369A1 (en) Process for producing penicillin
RU2139349C1 (ru) Способ эффективного производства 7-адцк через 2-(карбоксиэтилтио) ацетил-7-адцк и 3-(карбоксиметилтио)пропионил-7-адцк
EP0716698B1 (en) Process for the efficient production of 7-ADCA via 2-(carboxyethylthio)acetyl-7-ADCA and 3-(carboxymethylthio)propionyl-7-ADCA
CN117917476A (zh) 一种抗性基因及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT

MA Patent expired