JPH07278010A - 血中コレステロール低下剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 蛋白栄養源としても優れており、副作用及び
毒性がなく、しかも血中コレステロ−ル濃度低下作用を
有するペプチド組成物を有効成分として含有する血中コ
レステロ−ル低下剤を提供する。 【構成】 ペプチドの分子量が１０００以下であり、エ
ライザ（ＥＬＩＳＡ）抑制試験により測定した抗原性を
実質的に示さず、遊離アミノ酸含量が２０％（重量）以
下であり、組成物中の芳香族アミノ酸含量が全アミノ酸
含量の１．０％（重量）以下である低分子量ペプチド組
成物を有効成分として含有する血中コレステロ−ル低下
剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ペプチドの分子量が１
０００以下であり、エライザ（ＥＬＩＳＡ）抑制試験に
より測定した抗原性を実質的に示さず、遊離アミノ酸含
有量が２０％（重量。以下特に断りのない限り同じ）以
下であり、かつ、芳香族アミノ酸含量が全アミノ酸含量
の１．０％以下であるペプチド組成物を有効成分として
含有する血中コレステロ−ル低下剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、消化吸収性の改善、食物アレ
ルギ−の予防及び治療、血中コレステロ−ル濃度の低下
の目的で、ペプチド混合物、又はアミノ酸混合物を製造
することが行われてきた。しかしながら、これらの混合
物は、個々の目的を満たすことはできるが、すべての目
的を満たすことはできず、合併症等の場合には前記すべ
ての目的を満たすペプチド組成物が求められている。

【０００３】最近、腸管吸収の面から、低分子量ペプチ
ドが蛋白質栄養源として極めて有効であることが明らか
にされ、また、遊離アミノ酸が腸管における浸透圧を増
大させて輸送系の負担を惹起し、栄養効率を低下させる
ことも明らかにされている（栄養と食糧，第３１巻，第
２４７ペ−ジ，１９７８年）。このような点から、一定
の大きさのペプチド混合物の製造法が開示され（例え
ば、特公昭５７−４５５６０号公報、特公昭６２−５８
７１３号公報等）、またその栄養効率の面から有用であ
ることが示されている。従って、消化吸収性及び栄養生
理の面から、遊離アミノ酸含有量が少なく、分子量を特
定したペプチド組成物が求められている。

【０００４】また、近年食餌蛋白質に起因するアレルギ
−患者数が急増し、全国社会福祉協議会全国保母会の１
９８８年の調査によれば、乳児の約８％が食餌蛋白質ア
レルギ−であると報告されている。これらの患者に対し
ては、抗原性のない蛋白質分解物（例えば、特公昭５４
−３６２３５号公報）が提供されるが、この分解物は、
遊離アミノ酸含量が多く、浸透圧が高く、風味が悪く、
消化吸収性又は栄養生理面にも問題点がある。

【０００５】更に、近年動物性脂肪摂取量の増加に伴
い、血中コレステロ−ル濃度の増加が見られ、これは種
々の成人病（例えば、動脈硬化等）の引き金になること
から大きな問題になっている。このような観点から、血
中コレステロ−ル濃度を低下させる食品成分の研究が従
来から行われており、その中でも近年注目されているの
が、蛋白質及びその加水分解物である。例えば、大豆蛋
白質及び大豆蛋白質分解物は、カゼイン及びカゼイン分
解物に比べて、血中コレステロ−ル濃度低下作用が顕著
であることが報告されている［アテロスクレロシス(Ath
erosclerosis) ，第２８巻，第１８７ペ−ジ，１９７７
年］。また、分子量７００以下のペプチドが８０％以上
のペプチド組成物（特公昭５７−４５５６０号公報）及
び分子量２００乃至１５００のペプチドを含む蛋白質加
水分解物（特開昭６０−１１４２５号公報）に、血中コ
レステロ−ル濃度低下作用があることが開示されてい
る。

【０００６】しかしながら、これらの分解物は抗原性が
不明であり、食物アレルギ−を惹起する可能性があり、
また、芳香族アミノ酸の含量についても何ら着目されて
いない。更に、非経口的投与の場合には、エンドトキシ
ンは血流に侵入すると発熱、エンドトキシンショック等
の原因となる物質である（医薬品の開発，第１４巻，第
２２２ペ−ジ，広川書店，１９９０年）が、これらの分
解物は経口摂取を前提としており抗原性のみならず、エ
ンドトキシン量も不明であり、アレルギ−性ならびに発
熱性の問題から経静脈投与を行うことは実質的には不可
能であり、経静脈投与による血中コレステロ−ル濃度に
与える効果も検討されていない。

【０００７】一方、先天的又は肝臓疾患に起因する芳香
族アミノ酸の代謝能力の低下又は停止により脳内に芳香
族アミノ酸が蓄積し、それによって生じる脳疾患に対し
ては、従来蓄積するアミノ酸を予め除去したアミノ酸混
合物、又はペプチド混合物が投与されてきた（輸液・栄
養ジャ−ナル，第９巻，第３４３ペ−ジ，１９８７年及
び化学と生物，第２５巻，第３３２ペ−ジ，１９８７
年）。しかしながら、これらの混合物の血中コレステロ
−ル濃度に与える影響は報告されておらず、遊離アミノ
酸含有率が高いこと、抗原性が存在すること等の問題点
があった。

【０００８】本発明者らは、これらの問題点を解決した
芳香族アミノ酸含有量が少ないペプチド組成物を発明
し、既に特許出願した（特開平２−１３８９９１号公
報。以下先願と記載する）が、先願のペプチド組成物が
血中コレステロ−ル濃度に与える影響に関しては従来知
られていなかった。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】前記のように、従来知
られている血中コレステロ−ル濃度低下作用を有する蛋
白質分解物は、食物アレルギ−を惹起する可能性があ
り、その利用範囲は限定されていた。すなわち、食物ア
レルギ−を惹起する可能性がない血中コレステロ−ル濃
度低下性ペプチド組成物を含有する経口投与可能な血中
コレステロ−ル低下剤、及び副作用がなく、少量で有効
な非経口投与可能な血中コレステロ−ル低下剤は従来存
在しなかった。

【００１０】食物蛋白質又は蛋白質分解物を経口摂取し
た場合、食物蛋白質及び蛋白質分解物のアミノ酸組成、
消化性、胆汁酸結合能等が血中コレステロ−ル濃度に影
響することが示唆されている（コレステロ−ル，第８０
ペ−ジ，三共出版，１９８６年）。しかしながら、本発
明者らは、食物蛋白質又は蛋白質分解物の腸管内消化過
程で生成したペプチドが、微量ではあるが、アミノ酸に
まで分解されずにそのままの形態で血流に取り込まれ、
そのペプチドのホルモン様作用により血中コレステロ−
ル濃度低下を惹起するか、又はこのようなペプチドの存
在が、それを含有する組成物を直接血流内に投与するこ
とにより、経口摂取する場合に比較して少量で血中コレ
ステロ−ル濃度を低下できるのではないかとの仮説を立
てた。

【００１１】本発明者らは、抗原性を十分低減させた蛋
白分解物中にも血中コレステロール濃度低下に有効な成
分が存在するとの前記仮説に基づいて、その成分をスク
リーニングした結果、先願のペプチド組成物、即ち、芳
香族アミノ酸含量が全アミノ酸含量の１．０％以下の画
分にその効果があることを見い出し、本発明を完成し
た。

【００１２】本発明の目的は、前記従来技術の欠点を改
善し、蛋白栄養源としても優れており、副作用及び毒性
がなく、しかも血中コレステロ−ル濃度低下作用を有す
るペプチド組成物を有効成分として含有する血中コレス
テロ−ル低下剤を提供することにある。

【００１３】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明の第１の発明は、次のａ）〜ｄ）の理化学的性質； ａ）ペプチドの分子量が１０００以下であること、 ｂ）エライザ抑制試験により測定した抗原性を実質的に
示さないこと、 ｃ）遊離アミノ酸含量が２０％（重量）以下であるこ
と、 ｄ）組成物中の芳香族アミノ酸含量が全アミノ酸含量の
１．０％（重量）以下であること、 を有する低分子量ペプチド組成物を有効成分として含有
する経口用の血中コレステロ−ル低下剤、である。

【００１４】前記課題を解決する本発明の第２の発明
は、次のａ）〜ｅ）の理化学的性質； ａ）ペプチドの分子量が１０００以下であること、 ｂ）エライザ抑制試験により測定した抗原性を実質的に
示さないこと、 ｃ）遊離アミノ酸含量が２０％（重量）以下であるこ
と、 ｄ）組成物中の芳香族アミノ酸含量が全アミノ酸含量の
１．０％（重量）以下であること、 ｅ）エンドトキシン含量が１ｎｇ／ｇ以下であること、 を有する低分子量ペプチド組成物を有効成分として含有
する非経口用の血中コレステロ−ル低下剤、である。

【００１５】本発明に使用する前記の理化学的性質を有
する低分子量ペプチド組成物は、公知の方法で製造する
ことができる。以下にその方法を例示する。本発明にお
いて出発物質として使用する蛋白質は、例えば、カゼイ
ン、乳清蛋白質、大豆蛋白質等の市販品であり、水、脱
イオン水等に溶解される。蛋白質の加水分解は、パンク
レアチンとエキソペプチダ−ゼ、又はパンクレアチンと
他の蛋白質分解酵素（プロテア−ゼ）の複合系を用い
る。使用する蛋白質分解酵素は、パンクレアチン及び市
販の酵素であって、パンクレアチン及び蛋白質分解酵素
の１種又は２種とエキソペプチダ−ゼを組合わせ、２種
又は３種の複合酵素系として使用する。

【００１６】分解に使用する酵素量は、望ましくは蛋白
質原料１ｇ当り合計３０００〜５０００活性単位の割合
で、前記２種又は３種の酵素を１度又は２度以上に分け
て、蛋白質水溶液に添加することもできる。加水分解
は、温度を４０〜５５℃の範囲に調整し、酵素添加前に
原料蛋白質が変性しない範囲であって、かつ使用する酵
素の至適ｐＨにｐＨを調整し、少なくとも１時間保持
し、次いで酵素を失活させ、酵素分解液から不溶性成分
を除去することにより行うことができる。

【００１７】得られた酵素分解液を排除限界分子量１０
０００以下、好ましくは１０００以下のゲル濾過剤、よ
り好ましくは芳香族アミノ酸に吸着性を示す疎水性側鎖
（例えば、カルボキシル基、ブチル基、又はフェニル
基）、又は疎水的部位を有するゲル担体を充填したカラ
ムを使用し、溶出液として水、又は芳香族アミノ酸の吸
着性を高める目的で２〜１５％エタノ−ル溶液を用いて
分画し、目的とする低分子量ペプチド組成物を酵素分解
液から採集する。得られた低分子量ペプチド組成物を必
要に応じて常法により濃縮、乾燥することもできる。

【００１８】以上のようにして得られた低分子量ペプチ
ド組成物は、分子量が１０００以下であり、エライザ抑
制試験により測定した抗原性が実質的に示さず（原料蛋
白質に比較して１０^-6以下）、遊離アミノ酸含量が２０
％以下であり、かつ芳香族アミノ酸含量が１．０％以下
であり、この低分子量ペプチド組成物を含有する血中コ
レステロ−ル低下剤は、後記する試験例に示すように血
中コレステロ−ル濃度低下に著効があり、しかも血中高
密度リポ蛋白質コレステロ−ル濃度を上昇させる効果を
有している。

【００１９】非経口的投与のための低分子量ペプチド組
成物は、前記のようにして得られた低分子量ペプチド組
成物を、限外濾過、エンドトキシン除去用吸着体等の方
法により行うことができる。限外濾過の場合は、分画分
子量１０００〜６０００、望ましくは１０００〜３００
０の分画膜を使用し、透過液として目的とする低分子ペ
プチド組成物を得る。エンドトキシン除去吸着体として
は、エンドトキシンに吸着性を示す物質（例えば、ヒス
チジン、ポリミキシン等）を固定化した担体を用い、バ
ッチ法又はカラム法によって前記低分子量ペプチド組成
物と反応させ、非吸着画分として目的とする低分子量ペ
プチド組成物を得る。得られた低分子量ペプチド組成物
を必要に応じて常法により無菌的に濃縮、乾燥すること
もでき、エンドトキシン含量を１ｎｇ／ｇ以下とするこ
とができる。

【００２０】本発明の血中コレステロ−ル低下剤を経口
的に投与する場合は、前記低分子量ペプチド組成物のみ
でも良いが、前記低分子量ペプチド組成物以外に、通常
の食品に含有される脂質、炭水化物、ミネラル、ビタミ
ン等を添加しても構成される。但し、抗原性の強い蛋白
質の添加は、本発明の食物アレルギ−を惹起しないとい
う特徴を損なうおそれがあるので好ましくない。また、
アミノ酸を多く添加することも、本発明の風味が良い、
栄養生理面が優れているという特徴を損なうおそれがあ
るので好ましくない。また、血中コレステロ−ル濃度低
下作用が知られている食物繊維、多価不飽和脂肪酸等を
添加することもできる。

【００２１】本発明の血中コレステロ−ル低下剤を非経
口的（例えば、経静脈的又は経動脈的）に投与する場合
は、動物の種類及び年齢により異なるが、次の公知の方
法により製造された本発明の血中コレステロ−ル低下剤
を、通常体重１ｋｇ、１日当たり１〜１０００ｍｇ、望
ましくは５〜５００ｍｇ、常法（例えば、注射、注入
等）により投与する。

【００２２】本発明の非経口的血中コレステロ−ル低下
剤は、例えば、前記低分子量ペプチド組成物を適当な緩
衝液に添加し、無菌瀘過し、ガラスバイアルに無菌的に
充填し、密封し、製造することができ、必要に応じて凍
結乾燥することもできる。本発明の血中コレステロ−ル
低下剤の主成分である低分子量ペプチド組成物は、後記
する試験例３から明らかなように、ＬＤ₅₀が体重１ｋｇ
当たり５０００ｍｇ以上であり、毒性は極めて低く、天
然に存在する蛋白質の加水分解物の一部であるから、副
作用も少ない。

【００２３】本発明の抗原性の試験は、エライザ(ELIS
A: Enzyme linked immunosorbent assay)抑制試験（北
川常廣ら編，「酵素免疫測定法」，蛋白質・核酸・酵素
別冊第３１号，第１０ペ−ジ，１９８７年、及び石川榮
治ら編，「酵素免疫測定法」，第２版，第７ペ−ジ，医
学書院，１９８２年）によって行われるが、その方法の
一例を示せば次のとおりである。用いた原料蛋白質を９
６穴プレ−トにコ−ティングし、洗浄し、のちウサギ抗
カゼイン血清と分解調製液との混合液を反応させ、洗浄
後アルカリフォスファタ−ゼ標識抗体ウサギＩｇＧを反
応させ、洗浄後、酵素基質であるｐ−ニトロフェニルリ
ン酸ナトリウムを加え、３０分後に５規定水酸化ナトリ
ウム水溶液で反応を停止させ、反応産物をマイクロプレ
−トリ−ダ−で測定する。また、本発明の分子量は、ゲ
ル濾過電気泳動等の常法（日本生化学会編，「新生化学
実験講座１：タンパク質 I」，第４７９ペ−ジ，東京化
学同人，１９９０年）により測定され、本発明の全アミ
ノ酸組成及び遊離アミノ酸組成は、常法（日本生化学会
編，「新生化学実験講座１：タンパク質 I」，第４３９
ペ−ジ，東京化学同人，１９９０年）により測定され
る。また、エンドトキシン含量は、リムラステスト（防
菌防黴，第１３巻，第５０１ペ−ジ，１９８５年）によ
り測定される。

【００２４】次に試験例を示して本発明を詳述する。 試験例１ この試験は、経口的に投与された本発明の血中コレステ
ロ−ル低下剤の血中脂質に与える影響を調べるために行
った。 １）飼料の調製 表１に示す組成を有し、蛋白質源の種類のみを変更した
３種類の飼料を調製した。これらの飼料にはコレステロ
−ル及びコ−ル酸ナトリウムが添加されており、その添
加量は配合された蛋白質源に血中コレステロ−ル低下作
用がなければ、血中コレステロ−ル濃度を増加させるの
に充分な量である。尚、各蛋白質源は、窒素量を常法に
より測定し、各飼料の窒素量を同一に調整し、総量はス
クロ−スで調整した。

【００２５】２）試験方法 ＳＤ系ラット（日本ＳＬＣ社から購入）８匹を１群とし
て３群に分け、各群に異なった蛋白質源を含む飼料と水
とを自由に摂取させた。各群に与えられた飼料中の蛋白
質源は、次のとおりである。 第１群：カゼイン（ニュージーランド・デイリーボード
製） 第２群：実施例１と同一の方法により製造した低分子量
ペプチド組成物 第３群：カゼイン分解物（実施例１のゲル濾過工程前の
凍結乾燥品：遊離アミノ酸含量６０％、全アミノ酸含量
に対する芳香族アミノ酸含量１０．２％）

【００２６】各ラットについて飼育開始３週間後に採血
し、血清コレステロ−ル濃度、血清高密度リポ蛋白質コ
レステロ−ル濃度、血清中性脂肪濃度をそれぞれ測定し
た。尚、血清コレステロ−ル濃度はコレステロ−ルＥテ
スト（和光純薬工業社製）を用いた酵素法により、血清
高密度リポ蛋白質コレステロ−ル濃度はＨＤＬコレステ
ロ−ルＥテスト（和光純薬工業社製）を用いた沈殿・酵
素法により、血清中性脂肪濃度はトリグリセリドＥテス
ト（和光純薬工業社製）を用いた酵素法により測定し
た。

【００２７】３）試験結果 この試験の結果は表２に示すとおりであり、表２の数値
は各試験群の平均値±標準誤差で表示している。表２か
ら明らかなように、低分子量ペプチド組成物を投与した
第２群では、第１群、第３群に比較して、血清コレステ
ロ−ル濃度を顕著に低下させ、血清高密度リポ蛋白質コ
レステロ−ル濃度を顕著に上昇させ、血清中性脂肪濃度
には大きな相違は認められなかった。

【００２８】以上の結果から、本発明の血中コレステロ
−ル低下剤が血中コレステロ−ル濃度低下および血中高
密度リポ蛋白質コレステロ−ル濃度上昇に有効であるこ
とが証明された。尚、原料蛋白質を乳清蛋白質、大豆蛋
白質等に変更して同様の試験を行ったが、ほぼ同様の結
果が得られた。

【００２９】

【表１】

【００３０】

【表２】

【００３１】試験例２ この試験は、非経口的に投与された本発明の血中コレス
テロ−ル低下剤の血中脂質に与える影響を調べるために
行なった。 １）試験方法 体重約２０ｇのＩＣＲ系マウス（日本チャ−ルス・リバ
−社から購入）７匹を１群として３群に分け、水、飼料
を自由に摂取させ、各群のマウスに次の試料を日に１
回、尾静脈より投与した。 第１群：生理食塩水０．２ｍｌ 第２群：実施例３と同一の方法により製造した低分子量
ペプチド組成物１０ｍｇを生理食塩水０．２ｍｌに溶解
した試料 第３群：実施例３と同一の方法により製造した低分子量
ペプチド組成物とアミノ酸組成が同一のアミノ酸混合物
１０ｍｇを生理食塩水０．２ｍｌに溶解した試料 各マウスについて飼育開始３週間後に採血し、血清コレ
ステロ−ル濃度、血清高密度リポ蛋白質コレステロ−ル
濃度、血清中性脂肪濃度を、試験例１と同一の方法によ
りそれぞれ測定した。

【００３２】２）試験結果 この試験の結果は表３に示すとおりである。表３の数値
は各試験群の平均値±標準偏差で表示している。表３か
ら明らかなように、低分子量ペプチド組成物を投与した
第２群では、第１群及び第３群に比較して、血清コレス
テロ−ル濃度が顕著に低下し、血清高密度リポ蛋白質コ
レステロ−ル濃度、血清中性脂肪濃度には大きな相違は
認められなかった。

【００３３】以上の結果から、本発明の血中コレステロ
−ル低下剤が血中コレステロ−ル濃度低下に有効である
ことが証明された。尚、原料蛋白質を乳清蛋白質、大豆
蛋白質等に変更して同様の試験を行ったが、ほぼ同様の
結果が得られた。

【００３４】

【表３】

【００３５】試験例３ この試験は低分子量ペプチド組成物の急性毒性を調べる
ために行った。 １）試験方法 ６週齢のＣＤ（ＳＤ）系ラットの両性（日本チャ−ルス
・リバ−社から購入）を、無作為にそれぞれ４群（１群
５匹）に分けた。実施例２と同一の方法により製造した
低分子量ペプチド組成物を注射用水（大塚製薬社製）に
溶解し、体重１ｋｇ当り１０００、２０００、５０００
ｍｇの割合で尾静脈より単回投与し、急性毒性を試験し
た。

【００３６】２）試験結果 この試験の結果は、表４に示すおりである。表４から明
らかなように、実施例２の低分子量ペプチド組成物を投
与した全例ともに死亡例は認められなかった。従って、
低分子量ペプチド組成物のＬＤ₅₀は５０００ｍｇ／ｋｇ
体重以上であった。尚、低分子量ペプチド組成物の種類
を変更して試験したが、同様の結果が得られた。

【００３７】

【表４】

【００３８】

【実施例】次に実施例を示して本発明を更に詳述する
が、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 実施例１ 市販カゼイン（ニュージーランド・デイリーボード製）
２０ｋｇを１０％の濃度で水に溶解し、１０％水酸化ナ
トリウム水溶液でｐＨを８．０に調整し、９０℃で１０
分間加熱殺菌して４５℃に冷却した。パンクレアチンＦ
（天野製薬社製）１ｋｇ、プロテア−ゼＮ「アマノ」
（天野製薬社製）２００ｇ及び乳酸菌由来のプロテア−
ゼ（特公昭５４−３６２３４号公報第６欄１３〜３４行
記載のＡ方法により調製）４００ｇをカゼイン水溶液に
添加し、４５℃で２４時間保持して加水分解した。のち
９０℃で５分間加熱して酵素を失活させ、濾過して沈殿
物を除去し、凍結乾燥し、凍結乾燥品約１８ｋｇを得
た。

【００３９】この凍結乾燥品１８ｋｇを２０％の濃度で
水に溶解し、不溶解物を除去し、セファデックスＧ−１
０（ファルマシア社製）カラム（１００×１２０ｃｍ）
に通液し、イオン交換水を使用し、流速１ｌ／分で溶出
し、溶出量２００〜５００ｌの分画を集め、凍結乾燥
し、低分子量ペプチド組成物約６ｋｇを得た。この低分
子量ペプチド組成物の分子量は１０００以下であり、エ
ライザ抑制試験による原料カゼインに比較した抗原性は
１０^-6であり、遊離アミノ酸含量１８．５％、芳香族ア
ミノ酸含量０．５％であった。前記と同様の方法により
製造した低分子量ペプチド組成物５ｋｇを温水５０ｌに
溶解し、この溶液にミネラルを添加し、混合し、１２０
℃で３秒間加熱殺菌し、凍結乾燥し、粉砕し、粉末状経
口用の血中コレステロ−ル低下剤約５ｋｇを得た。

【００４０】実施例２ 市販の乳清蛋白質粉末（ミライ社製）２０ｋｇを８％の
濃度で脱イオン水に溶解し、フィルタ−濾過により除菌
して４５℃に調整し、５％水酸化ナトリウム水溶液でｐ
Ｈを７．３に維持しながらパンクレアチンＦ（天野製薬
社製）を２００ｇずつ３０分間隔で６回添加し、１５時
間後にアクチナ−ゼＡＳ（科研製薬社製）３００ｇを添
加し、更に５時間加水分解した。のち９０℃で５分間加
熱して酵素を失活させ、濾過して沈殿物を除去し、凍結
乾燥し、凍結乾燥品約１６．５ｋｇを得た。

【００４１】この凍結乾燥品１５ｋｇを２０％の濃度で
水に溶解し、不溶解物を除去し、セファデックスＧ−２
５（ファルマシア社製）カラム（５０×１５０ｃｍ）に
通液し、１２％エタノ−ルを使用し、流速は１ｌ／分で
溶出し、溶出量２００〜５００ｌの分画を集め、凍結乾
燥し、低分子量ペプチド組成物約４．５ｋｇを得た。こ
の低分子量ペプチド組成物の分子量は１０００以下であ
り、エライザ抑制試験による原料乳清蛋白質に比較した
抗原性は１０^-6であり、遊離アミノ酸含量１９．４％、
芳香族アミノ酸含量０．４％であった。前記と同様の方
法により製造した低分子量ペプチド組成物４．５ｋｇを
温水６０ｌに溶解した。この溶液に市販の難消化性デキ
ストリン（松谷化学工業社製）１２．５ｋｇ、市販の植
物性油脂（日本油脂社製）３ｋｇ、ビタミン、ミネラル
を添加、混合し、均質化し、全量を１００ｌに調整し、
１５０℃で２秒間加熱殺菌し、液状経口用の血中コレス
テロ−ル低下剤約１００ｌを得た。

【００４２】実施例３ 市販カゼイン（ニュ−ジ−ランド・デイリ−ボ−ド製）
２０ｇを１０％の濃度で水に溶解し、１０％水酸化ナト
リウム水溶液でｐＨを８．０に調整し、９０℃で１０分
間加熱殺菌して４５℃に冷却した。パンクレアチンＦ
（天野製薬社製）１ｇ、プロテア−ゼＮ「アマノ」（天
野製薬社製）０．２ｇ、及び乳酸菌由来のプロテア−ゼ
（特公昭５４−３６２３４号公報第６欄１３〜３４行記
載のＡ方法により調製）０．４ｇをカゼイン水溶液に加
え、４５℃で２４時間保持して加水分解した。のち９０
℃で５分間加熱して酵素を失活させ、濾過により沈殿物
を除去し、凍結乾燥し、凍結乾燥品約１８ｇを得た。

【００４３】この凍結乾燥品１８ｇを２０％の濃度で水
に溶解し、不溶解物を除去し、セファデックスＧ−１０
（ファルマシア社製）カラム（１０×１２ｃｍ）に通液
し、イオン交換水を使用し、流速１０ｍｌ／分で溶出
し、溶出量２００〜５００ｍｌの分画を集め、分画分子
量３０００の限外濾過膜を装着したモジュ−ルを用いて
平均圧力３ｋｇ／ｃｍ² で限外濾過して透過液を回収
し、無菌的に凍結乾燥し、低分子量ペプチド組成物約６
ｇを得た。この低分子量ペプチド組成物の分子量は１０
００以下であり、エライザ抑制試験による原料カゼイン
に比較した抗原性は１０^-6であり、遊離アミノ酸含量１
８．５％、芳香族アミノ酸含量０．５％であり、エンド
トキシン含量１ｎｇ／ｇ以下であった。注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）１ｍｌ当りに、前記と同一の方法に
より製造した低分子量ペプチド組成物１００ｍｇの割合
で溶解し、濾過滅菌し、常法により５ｍｌずつバイアル
瓶に充填し、注射用の血中コレステロ−ル低下剤を調製
した。

【００４４】実施例４ 市販の乳清蛋白質粉末（ミライ社製）２０ｇを８％の濃
度で脱イオン水に溶解し、フィルタ−濾過により除菌し
て４５℃に調整し、５％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ
を７．３に維持しながらパンクレアチンＦ（天野製薬社
製）を０．２ｇずつ３０分間隔で６回添加し、１５時間
後にアクチナ−ゼＡＳ（科研製薬社製）０．３ｇを加
え、更に５時間加水分解した。のち９０℃で５分間加熱
して酵素を失活させ、濾過して沈殿物を除去し、凍結乾
燥し、凍結乾燥品約１６．５ｇを得た。

【００４５】この凍結乾燥品５ｇを２０％の濃度で水に
溶解し、不溶解物を除去し、セファデックスＧ−２５
（ファルマシア社製）カラム（５×１５ｃｍ）に通液
し、１２％エタノ−ルを使用し、流速は１０ｍｌ／分で
溶出し、溶出量２００〜５００ｍｌの分画を集め、アフ
ィプレップポリミキシン（バイオ・ラッド社製）２５ｍ
ｌを充填したカラムに通液してエンドトキシンを除去
し、無菌的に凍結乾燥し、低分子量ペプチド組成物約
１．５ｇを得た。

【００４６】この低分子量ペプチド組成物の分子量は１
０００以下であり、エライザ抑制試験による原料乳清蛋
白質に比較した抗原性は１０^-6であり、遊離アミノ酸含
量１９．４％、芳香族アミノ酸含量０．４％であり、エ
ンドトキシン含量１ｎｇ／ｇ以下であった。注射用水
（大塚製薬社製）１ｍｌ当りに、前記実施例２と同一の
方法で製造した低分子量ペプチド組成物１０ｍｇ及びＤ
−マンニット（和光純薬工業社製）４９．５ｍｇの割合
で溶解し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社製）の水
溶液でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１
０ｍｌずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注射用の
血中コレステロ−ル低下剤を調製した。

【００４７】

【発明の効果】以上詳記したように、本発明は、血中コ
レステロ−ル低下剤に係るものであり、本発明によって
奏せられる効果は次のとおりである。 （１）本発明の血中コレステロ−ル低下剤を経口的に投
与することにより、食物アレルギ−を惹起することなく
血中コレステロ−ル濃度を低下させることができる。 （２）本発明の血中コレステロ−ル低下剤を経口的に投
与することにより、食物アレルギ−を惹起することなく
血中高密度リポ蛋白質コレステロ−ル濃度を上昇させる
ことができる。 （３）本発明の血中コレステロ−ル低下剤は、抗原性が
なく、遊離アミノ酸含量が少なく風味が良好であり、ま
た、吸収性も良いので、優れた蛋白質栄養源として利用
することができる。 （４）本発明の血中コレステロ−ル低下剤を非経口的に
投与することにより、経口的投与よりも少量で血中コレ
ステロール濃度を低下させることができる。 （５）本発明の血中コレステロ−ル低下剤に含有される
低分子量ペプチド組成物は、実質的に抗原性がなく、ま
た、天然に存在する蛋白質の分解物の一部分であるの
で、毒性及び副作用が少ない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 4/12 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｐ 21/06 9282−4Ｂ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次のａ）〜ｄ）の理化学的性質； ａ）ペプチドの分子量が１０００以下であること、 ｂ）エライザ（ＥＬＩＳＡ）抑制試験により測定した抗
   原性を実質的に示さないこと、 ｃ）遊離アミノ酸含量が２０％（重量）以下であるこ
   と、 ｄ）組成物中の芳香族アミノ酸含量が全アミノ酸含量の
   １．０％（重量）以下であること、 を有する低分子量ペプチド組成物を有効成分として含有
   する経口用の血中コレステロ−ル低下剤。
2. 【請求項２】 次のａ）〜ｅ）の理化学的性質； ａ）ペプチドの分子量が１０００以下であること、 ｂ）エライザ（ＥＬＩＳＡ）抑制試験により測定した抗
   原性を実質的に示さないこと、 ｃ）遊離アミノ酸含量が２０％（重量）以下であるこ
   と、 ｄ）組成物中の芳香族アミノ酸含量が全アミノ酸含量の
   １．０％（重量）以下であること、 ｅ）エンドトキシン含量が１ｎｇ／ｇ以下であること、 を有する低分子量ペプチド組成物を有効成分として含有
   する非経口用の血中コレステロ−ル低下剤。