JP3103930B2 - 乳蛋白質カゼインの加水分解物からなる免疫賦活剤 - Google Patents
乳蛋白質カゼインの加水分解物からなる免疫賦活剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、牛乳由来蛋白質カゼイ
ンを蛋白質分解酵素トリプシンで加水分解して得られる
低分子ペプチドを有効成分とする免疫賦活剤に関する。
本発明の免疫賦活剤は、健康食品、医薬品、化粧品など
に直接又は配合剤として利用できる。
ンを蛋白質分解酵素トリプシンで加水分解して得られる
低分子ペプチドを有効成分とする免疫賦活剤に関する。
本発明の免疫賦活剤は、健康食品、医薬品、化粧品など
に直接又は配合剤として利用できる。
【０００２】
【従来の技術】我々人間は、外来の微生物などの異物及
び癌細胞などのような異物的自己物質を排除しようとす
る多種多様の防衛機能、即ち免疫能を有しており、免疫
能を活性化することにより各種の疾病に対抗することが
出来ると考えられている。このような目的でこれまで
に、細菌菌体成分として、ＢＣＧ、ＯＫ−４３２など
が、また植物抽出成分としては、クレスチン、レンチナ
ン、シゾフィランなどが臨床的に検討され効果を上げて
きた。
び癌細胞などのような異物的自己物質を排除しようとす
る多種多様の防衛機能、即ち免疫能を有しており、免疫
能を活性化することにより各種の疾病に対抗することが
出来ると考えられている。このような目的でこれまで
に、細菌菌体成分として、ＢＣＧ、ＯＫ−４３２など
が、また植物抽出成分としては、クレスチン、レンチナ
ン、シゾフィランなどが臨床的に検討され効果を上げて
きた。
【０００３】しかしながら、免疫能の低下は臨床現場だ
けでなく、日常的なストレス、老化や化学物質の暴露な
どによっても免疫能は低下し癌、感染症、自己免疫疾患
やアレルギ−などの病気に悩まされることになる。免疫
能を強化したり低下している免疫能を回復させること
は、このような病気の予防につながることになり重要で
ある。このような観点から、低毒性で経口投与（摂取）
により有効性を発揮する免疫賦活剤が強く望まれてい
る。
けでなく、日常的なストレス、老化や化学物質の暴露な
どによっても免疫能は低下し癌、感染症、自己免疫疾患
やアレルギ−などの病気に悩まされることになる。免疫
能を強化したり低下している免疫能を回復させること
は、このような病気の予防につながることになり重要で
ある。このような観点から、低毒性で経口投与（摂取）
により有効性を発揮する免疫賦活剤が強く望まれてい
る。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、日常
摂取することにより病気を予防できる、副作用の無い安
価な免疫賦活剤を提供することにある。
摂取することにより病気を予防できる、副作用の無い安
価な免疫賦活剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、牛乳と
言う普段日常的に摂取する素材から、安価に免疫機能を
賦活する物質を製造することが出来る。免疫賦活作用を
有するカゼイン加水分解物を得るには以下の方法により
行う。すなわち、牛乳由来のカゼインをｐＨ５．０〜
９．０の条件下、トリプシンにより分解し、分解物を１
００℃程度の加熱処理することによりトリプシン及び未
分解のカゼインを変性・沈澱させ、この沈澱物を遠心分
離などで除去する。このようにして得た母液を凍結乾燥
することにより白色粉末状の製品を得る。このようにし
て得られたカゼイン加水分解物の投与方法は、特に限定
が無く各種形態に応じた方法で投与することが出来る。
例えば、経口投与の場合は錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、
乳剤、カプセル剤あるいはカゼイン加水分解物を添加し
た食物の形で投与される。また、注射剤の場合には、単
独あるいはブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合
して静脈投与され、さらに必要に応じて単独で筋肉内、
皮下内に投与される。化粧品などの皮膚外用剤には、配
合剤として利用できる。以下、実施例により本発明を具
体的に説明する。
言う普段日常的に摂取する素材から、安価に免疫機能を
賦活する物質を製造することが出来る。免疫賦活作用を
有するカゼイン加水分解物を得るには以下の方法により
行う。すなわち、牛乳由来のカゼインをｐＨ５．０〜
９．０の条件下、トリプシンにより分解し、分解物を１
００℃程度の加熱処理することによりトリプシン及び未
分解のカゼインを変性・沈澱させ、この沈澱物を遠心分
離などで除去する。このようにして得た母液を凍結乾燥
することにより白色粉末状の製品を得る。このようにし
て得られたカゼイン加水分解物の投与方法は、特に限定
が無く各種形態に応じた方法で投与することが出来る。
例えば、経口投与の場合は錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、
乳剤、カプセル剤あるいはカゼイン加水分解物を添加し
た食物の形で投与される。また、注射剤の場合には、単
独あるいはブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合
して静脈投与され、さらに必要に応じて単独で筋肉内、
皮下内に投与される。化粧品などの皮膚外用剤には、配
合剤として利用できる。以下、実施例により本発明を具
体的に説明する。
【０００６】
【実施例】カゼイン分解物の製造 牛乳由来カゼイン１２ｇを１５０ｍｌの０．０５Ｍ炭酸
緩衝液（ｐＨ８．０）に超音波をかけながら溶解する。
これとは別に１５０ｍｇのトリプシン（シグマ社製、タ
イプＩ、牛すい臓由来）を５０ｍｌの同緩衝液に溶解し
カゼイン溶液に加え、攪拌しながら３７℃で一晩反応さ
せる。反応後、生成物を１００℃で１０分間加熱処理す
ることにより、トリプシン及び未分解のカゼインを変性
沈殿させる。沈殿物を１０，０００ｒｐｍで１時間遠心
除去した後、母液を凍結乾燥することにより白色粉末状
の製品を得る。このようにして母液１ｍｌから約３６ｍ
ｇの製品を得る事が出来る。
緩衝液（ｐＨ８．０）に超音波をかけながら溶解する。
これとは別に１５０ｍｇのトリプシン（シグマ社製、タ
イプＩ、牛すい臓由来）を５０ｍｌの同緩衝液に溶解し
カゼイン溶液に加え、攪拌しながら３７℃で一晩反応さ
せる。反応後、生成物を１００℃で１０分間加熱処理す
ることにより、トリプシン及び未分解のカゼインを変性
沈殿させる。沈殿物を１０，０００ｒｐｍで１時間遠心
除去した後、母液を凍結乾燥することにより白色粉末状
の製品を得る。このようにして母液１ｍｌから約３６ｍ
ｇの製品を得る事が出来る。
【０００７】
【実施例】カゼイン分解物の精製 次に、得られた製品を約７００ｍｇを０．１Ｍ重炭酸ア
ンモニウム溶液２０ｍｌに溶解し、セファデクスＧ−１
５のカラムに添加し、０．１Ｍ重炭酸アンモニウム溶液
で溶出し精製する。尚、この場合のカラム処理条件は次
の通りである。 カラム：高さ１００ｃｍ、内径５ｃｍ 試料添加量：２０ｍｌ 流速：２０ｍｌ／時間 分画量：４ｍｌ 溶出液：０．１Ｍ重炭酸アンモニウム溶液
ンモニウム溶液２０ｍｌに溶解し、セファデクスＧ−１
５のカラムに添加し、０．１Ｍ重炭酸アンモニウム溶液
で溶出し精製する。尚、この場合のカラム処理条件は次
の通りである。 カラム：高さ１００ｃｍ、内径５ｃｍ 試料添加量：２０ｍｌ 流速：２０ｍｌ／時間 分画量：４ｍｌ 溶出液：０．１Ｍ重炭酸アンモニウム溶液
【０００８】
【実施例】抗体産生能に対する効果の評価法 マウスの腹腔内に５％羊赤血球浮遊液０．５ｍｌを投
与、４日後に脾臓を摘出し脾臓細胞浮遊液を調整する。
この浮遊液に被験物質を添加し３７℃で２４時間培養す
る。培養液中に産生される羊赤血球に対する抗体量を測
定する。つまり、培養液５０μｌにベロナ−ル緩衝液４
５０μｌを加え、これに、１．７％羊赤血球溶液及び１
／２５補体溶液をそれぞれ５００μｌ加え３７℃で１時
間反応させる。抗体の量に比例して溶血が起こり、溶血
により生じたヘモグロビンの量を波長５４０ｎｍで測定
する。結果は５４０ｎｍでの吸光度を被験物質を添加し
ない対照の吸光度で除した値で示す。従って、数値が１
より大きいほど抗体産生能が高いことを示している。得
られた８分画を凍結乾燥し、抗体産生能に対する効果を
上記のように調べ、その結果を表１に示す。
与、４日後に脾臓を摘出し脾臓細胞浮遊液を調整する。
この浮遊液に被験物質を添加し３７℃で２４時間培養す
る。培養液中に産生される羊赤血球に対する抗体量を測
定する。つまり、培養液５０μｌにベロナ−ル緩衝液４
５０μｌを加え、これに、１．７％羊赤血球溶液及び１
／２５補体溶液をそれぞれ５００μｌ加え３７℃で１時
間反応させる。抗体の量に比例して溶血が起こり、溶血
により生じたヘモグロビンの量を波長５４０ｎｍで測定
する。結果は５４０ｎｍでの吸光度を被験物質を添加し
ない対照の吸光度で除した値で示す。従って、数値が１
より大きいほど抗体産生能が高いことを示している。得
られた８分画を凍結乾燥し、抗体産生能に対する効果を
上記のように調べ、その結果を表１に示す。
【表１】
【０００９】表１に示したように、低分子量分画Ｎｏ７
及び８以外の６分画に抗体産生能を高める効果が認めら
れ、カゼイン加水分解物中には抗体産生能を高めるペプ
チドが多種類存在することが示された。
及び８以外の６分画に抗体産生能を高める効果が認めら
れ、カゼイン加水分解物中には抗体産生能を高めるペプ
チドが多種類存在することが示された。
【００１０】
【実施例】セファデックスＧ−１５による分画中最も効
果が大きかったＮｏ４の分画をＤＥＡＥセファデックス
Ａ−２５により更に精製する。尚、この場合のカラム処
理条件は次の通りである。 カラム：高さ３０ｃｍ、内径１．５ｃｍ 試料添加量：セファデックスＧ−１５による分画Ｎｏ４
を１００ｍｌ 流速：２０ｍｌ／時間 分画量：３ｍｌ 溶出液：０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ＰＨ９．０）に
食塩を溶かし、０〜２％食塩溶液の直線型濃度勾配法
果が大きかったＮｏ４の分画をＤＥＡＥセファデックス
Ａ−２５により更に精製する。尚、この場合のカラム処
理条件は次の通りである。 カラム：高さ３０ｃｍ、内径１．５ｃｍ 試料添加量：セファデックスＧ−１５による分画Ｎｏ４
を１００ｍｌ 流速：２０ｍｌ／時間 分画量：３ｍｌ 溶出液：０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ＰＨ９．０）に
食塩を溶かし、０〜２％食塩溶液の直線型濃度勾配法
【００１１】得られた６分画を脱塩後凍結乾燥し、抗体
産生能に対する効果を同様に調べ、その結果を表２に示
す。ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５に吸着しないＮｏ
１の分画に最も高い効果が認められた。以上、試験管内
の評価法により、カゼイン加水分解物中には多種類の抗
体産生能を高めるペプチドの存在が明らかとなった。
産生能に対する効果を同様に調べ、その結果を表２に示
す。ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５に吸着しないＮｏ
１の分画に最も高い効果が認められた。以上、試験管内
の評価法により、カゼイン加水分解物中には多種類の抗
体産生能を高めるペプチドの存在が明らかとなった。
【表２】
【００１２】以下、カゼイン加水分解物溶液をマウスに
飲み水として与えたときの生体内での効果について説明
する。
飲み水として与えたときの生体内での効果について説明
する。
【００１３】
【実施例】カゼイン加水分解物を、５、１０及び２０ｍ
ｇ／ｍｌの濃度となるよう水に溶解し、濾過滅菌後Ｂａ
ｌｂ／ｃ系マウス（雌、８週令）に飲料水として与え
る。１６日目に、５％羊赤血球浮遊液０．５ｍｌを腹腔
内に投与し４日後に脾臓、血液を採取する。脾臓は、脾
臓細胞浮遊液（２×１０6／０．２ｍｌ）を調整し、３
７℃で２４時間培養し、培養液中に産生される羊赤血球
に対する抗体量を測定する。血液は、遠心分離により血
清とし適度に希釈後、血清中抗体量を培養液と同様に測
定し、５４０ｎｍでの吸光度で表３に示す。
ｇ／ｍｌの濃度となるよう水に溶解し、濾過滅菌後Ｂａ
ｌｂ／ｃ系マウス（雌、８週令）に飲料水として与え
る。１６日目に、５％羊赤血球浮遊液０．５ｍｌを腹腔
内に投与し４日後に脾臓、血液を採取する。脾臓は、脾
臓細胞浮遊液（２×１０6／０．２ｍｌ）を調整し、３
７℃で２４時間培養し、培養液中に産生される羊赤血球
に対する抗体量を測定する。血液は、遠心分離により血
清とし適度に希釈後、血清中抗体量を培養液と同様に測
定し、５４０ｎｍでの吸光度で表３に示す。
【表３】
【００１４】単位脾臓細胞当たりの抗体産生量及び血清
中抗体量共に、カゼイン加水分解物摂取群がその濃度如
何に拘らず水摂取群に比べ多く、カゼイン加水分解物の
抗体産生能に対する効果は生体内でも認められた。
中抗体量共に、カゼイン加水分解物摂取群がその濃度如
何に拘らず水摂取群に比べ多く、カゼイン加水分解物の
抗体産生能に対する効果は生体内でも認められた。
【００１５】
【実施例】ストレス負荷による免疫能低下に対するカゼ
イン加水分解物投与の効果について以下のように調べ
た。Ｂａｌｂ／ｃ系雄マウスに３０日間カゼイン加水分
解物水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を与えた後、各群３匹を
用い、０群；ストレス無負荷、Ｉ群；羊赤血球投与１日
前に１回ストレス負荷、II群；羊赤血球投与１日前及び
同日の２回ストレス負荷、III群；羊赤血球投与１日
前、同日、１日後及び２日後の４回ストレス負荷、IV
群；羊赤血球投与１日前、同日、１日後、２日後及び３
日後の５回ストレス負荷とストレス負荷回数を変えて検
討した。ストレスの負荷は、マウスを１匹づつ金網性の
狭いゲ−ジに入れ１５℃の水中に首まで浸し、１時間静
置した（拘束水浸ストレス）。免疫能の評価は、羊赤血
球投与４日後に脾臓、血液を採取し、単位脾臓細胞当た
りの抗体産生量（表４）と血清中抗体量（表５）の測定
を行った。
イン加水分解物投与の効果について以下のように調べ
た。Ｂａｌｂ／ｃ系雄マウスに３０日間カゼイン加水分
解物水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を与えた後、各群３匹を
用い、０群；ストレス無負荷、Ｉ群；羊赤血球投与１日
前に１回ストレス負荷、II群；羊赤血球投与１日前及び
同日の２回ストレス負荷、III群；羊赤血球投与１日
前、同日、１日後及び２日後の４回ストレス負荷、IV
群；羊赤血球投与１日前、同日、１日後、２日後及び３
日後の５回ストレス負荷とストレス負荷回数を変えて検
討した。ストレスの負荷は、マウスを１匹づつ金網性の
狭いゲ−ジに入れ１５℃の水中に首まで浸し、１時間静
置した（拘束水浸ストレス）。免疫能の評価は、羊赤血
球投与４日後に脾臓、血液を採取し、単位脾臓細胞当た
りの抗体産生量（表４）と血清中抗体量（表５）の測定
を行った。
【表４】
【００１６】単位脾臓細胞当たりの抗体産生量に対する
ストレス負荷の影響は少なく、両群の間に差は認められ
ないが、ストレス負荷回数の多いIV群では水摂取群が６
２．０％に低下したのに対し、カゼイン加水分解物摂取
群では８０．８％に留まり、ストレスによる抗体産生能
の低下がカゼイン加水分解物の摂取により緩和された。
ストレス負荷の影響は少なく、両群の間に差は認められ
ないが、ストレス負荷回数の多いIV群では水摂取群が６
２．０％に低下したのに対し、カゼイン加水分解物摂取
群では８０．８％に留まり、ストレスによる抗体産生能
の低下がカゼイン加水分解物の摂取により緩和された。
【００１７】血清中の抗体量は、水摂取群はストレス負
荷回数に応じ強い影響を受け低下したのに対し、カゼイ
ン加水分解物摂取群ではストレス負荷回数が１回、２回
の弱いストレスに対しては、これに良く抵抗し血清中抗
体量の上昇が見られた。ストレス負荷回数を増やしてい
くと血清中抗体量は低下していくものの水摂取群に比べ
多く、ストレスによる抗体産生能の低下をカゼインの加
水分解物の摂取により緩和し得ることが明らかとなっ
た。
荷回数に応じ強い影響を受け低下したのに対し、カゼイ
ン加水分解物摂取群ではストレス負荷回数が１回、２回
の弱いストレスに対しては、これに良く抵抗し血清中抗
体量の上昇が見られた。ストレス負荷回数を増やしてい
くと血清中抗体量は低下していくものの水摂取群に比べ
多く、ストレスによる抗体産生能の低下をカゼインの加
水分解物の摂取により緩和し得ることが明らかとなっ
た。
【表５】
【００１８】
【実施例】老化による免疫能低下に対するカゼイン加水
分解物投与の効果を以下のように調べた。６５週令まで
水を与え飼育した老化マウスに、その後４５日間カゼイ
ンの加水分解物水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を飲水として
与え抗体産生能を測定した。 カゼイン加水分解物を与
える前である５９週令の時点で、単位脾臓細胞当たりの
抗体産生量は０．０６０±０．０６８であり血清中抗体
量は８．７±６．８と老化により抗体産生能が低下して
いた。その後、４５日間カゼイン加水分解物を与えるこ
とにより７１週令の時点で単位脾臓細胞当たりの抗体産
生量が０．１５４±０．０８６、血清中抗体量３２．３
±１９．３と抗体産生能が明らかに回復した。これに対
し、その後も水を飲み続けた群では単位脾臓細胞当たり
の抗体産生量が０．０６０±０．０４８であり、血清中
抗体量は５．１±６．８と更に抗体産生能が低下した。
老化により一旦低下した免疫能は回復しないと言われて
いるが、カゼイン加水分解物を与える事により抗体産生
能つまり免疫能がある程度まで回復することが明らかと
なった。
分解物投与の効果を以下のように調べた。６５週令まで
水を与え飼育した老化マウスに、その後４５日間カゼイ
ンの加水分解物水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を飲水として
与え抗体産生能を測定した。 カゼイン加水分解物を与
える前である５９週令の時点で、単位脾臓細胞当たりの
抗体産生量は０．０６０±０．０６８であり血清中抗体
量は８．７±６．８と老化により抗体産生能が低下して
いた。その後、４５日間カゼイン加水分解物を与えるこ
とにより７１週令の時点で単位脾臓細胞当たりの抗体産
生量が０．１５４±０．０８６、血清中抗体量３２．３
±１９．３と抗体産生能が明らかに回復した。これに対
し、その後も水を飲み続けた群では単位脾臓細胞当たり
の抗体産生量が０．０６０±０．０４８であり、血清中
抗体量は５．１±６．８と更に抗体産生能が低下した。
老化により一旦低下した免疫能は回復しないと言われて
いるが、カゼイン加水分解物を与える事により抗体産生
能つまり免疫能がある程度まで回復することが明らかと
なった。
【００１９】
【実施例】カゼイン加水分解物投与により免疫能が賦活
されるならば、ガン細胞の増殖に影響すると考えられる
ので、以下のように検討した。ＩＣＲ系雌マウス（６週
令）に、カゼイン加水分解物水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）
を１週間与えた時点でガン細胞（ザルコ−マ１８０細
胞）１×１０6 個をソケイ部皮下に移植し、更にカゼイ
ン加水分解物水溶液を与え２週間後に固形腫瘍を摘出し
重量を測定した。水摂取群の固形腫瘍重量が、１．７３
±０．９７ｇであったのに対しカゼイン加水分解物摂取
群では０．３６±０．２９ｇと明らかにガン細胞の増殖
が抑制された。カゼイン加水分解物を与えることにより
生体内で免疫能が賦活され、その結果ガン細胞の増殖が
抑制されたと考えれる。
されるならば、ガン細胞の増殖に影響すると考えられる
ので、以下のように検討した。ＩＣＲ系雌マウス（６週
令）に、カゼイン加水分解物水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）
を１週間与えた時点でガン細胞（ザルコ−マ１８０細
胞）１×１０6 個をソケイ部皮下に移植し、更にカゼイ
ン加水分解物水溶液を与え２週間後に固形腫瘍を摘出し
重量を測定した。水摂取群の固形腫瘍重量が、１．７３
±０．９７ｇであったのに対しカゼイン加水分解物摂取
群では０．３６±０．２９ｇと明らかにガン細胞の増殖
が抑制された。カゼイン加水分解物を与えることにより
生体内で免疫能が賦活され、その結果ガン細胞の増殖が
抑制されたと考えれる。
Claims (2)
- 【請求項１】牛乳蛋白質カゼインを蛋白質分解酵素トリ
プシンで加水分解した後、加熱処理して得られる可溶性
ペプチドを有効成分とする免疫賦活剤。 - 【請求項２】牛乳蛋白質カゼインを蛋白質分解酵素トリ
プシンで加水分解して得られるペプチドが、分子量３０
０〜３０００であることを特徴とする請求項１項記載の
免疫賦活剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06298828A JP3103930B2 (ja) | 1994-11-08 | 1994-11-08 | 乳蛋白質カゼインの加水分解物からなる免疫賦活剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06298828A JP3103930B2 (ja) | 1994-11-08 | 1994-11-08 | 乳蛋白質カゼインの加水分解物からなる免疫賦活剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08133985A JPH08133985A (ja) | 1996-05-28 |
| JP3103930B2 true JP3103930B2 (ja) | 2000-10-30 |
Family
ID=17864750
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06298828A Expired - Fee Related JP3103930B2 (ja) | 1994-11-08 | 1994-11-08 | 乳蛋白質カゼインの加水分解物からなる免疫賦活剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3103930B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20070034528A (ko) * | 2004-05-27 | 2007-03-28 | 캄피나 네덜란드 홀딩 베.붸. | Ｄｐｐ－ｉｖ 매개 질병의 예방 및／또는 치료용 의약품제조를 위한 단백질 가수분해물의 용도 |
-
1994
- 1994-11-08 JP JP06298828A patent/JP3103930B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08133985A (ja) | 1996-05-28 |
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