JP6158380B2 - 小腸に良い栄養組成物 - Google Patents
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Description
臨床的な視点からみると、小腸の機能表面積が減少する病態として、腸管切除、放射線照射、腸管虚血や外傷、クローン病や潰瘍性大腸炎などが考えられる。このような病態に対しては、障害された小腸粘膜の修復や代償機能を高めるための治療が必要である。それにはグルタミン、n-3系多価不飽和脂肪酸や亜鉛などの特定の栄養素が重要であることが分かっている。また、腸の代謝応答能として代謝・内分泌的順応能力、腸粘膜の増殖・修復能促進には、腸管腔を通じて栄養素を補給・投与することが必須であり、胆汁・膵液分泌のような生理的な腸管内容物の通過が前提である。中心静脈栄養あるいは高カロリー輸液または完全静脈栄養などで栄養を補給することはできるが、小腸粘膜の萎縮が生じることが多く、腸管機能低下が進行する。そのため、腸管に良い薬剤や食品の開発が望まれていた。様々な経腸栄養食品が開発されており、食物繊維を含んだ整腸作用を有する食品の開発は行われているが、これまで小腸絨毛の成長促進、固有筋層の厚さを増加させるなど腸管機能維持・改善に有用な薬剤や総合栄養食品は開発されてこなかった。
この結果から、本発明の栄養組成物を摂取することで腸管に何らかの変化をもたらしているのではないかと推察し、2週間摂取後の正常マウスの小腸重量、大腸重量を測定した。また、小腸組織標本を作製し評価した。その結果、小腸重量と大腸重量の有意な増加が示された。また、小腸組織を評価した結果、絨毛の数には違いは認められなかったが、絨毛の平均の長さと固有筋層の厚さが対照群に対し有意に高値を示した。これらの結果から、小腸の障害に対する保護作用や小腸粘膜上皮や筋肉層の増殖促進作用を有していることが示された(実施例3)。
さらに本発明者らは、ラットインドメタシン誘発小腸障害モデルを用いて、本発明の栄養組成物摂取群と一般流動食群に対して、腸管の透過性の指標としてフェノールスルホンフタレインの尿中排泄率を調べた。また、肝臓、腸間膜リンパ節へのバクテリアルトランスロケーション(Bacterial Translocationとも言う)、さらに一般血液検査について検討した。その結果、本発明の栄養組成物摂取群では、腸管膜の透過性の亢進が抑制されること、また、肝臓や腸間膜リンパ節へのバクテリアルトランスロケーションが抑制されることが示された。さらに、一般血液検査結果から、インドメタシン投与による小腸障害に伴う血中の好中球数や単球数の増加を栄養組成物摂取群が抑制することが示された。以上の結果から、栄養組成物の摂取は腸管を保護して、非ステロイド性抗炎症剤などの薬剤に対する小腸障害を抑制する効果があり、また、腸障害によって起こるバクテリアルトランスロケーションにより誘発される敗血症や肺炎などの感染症の予防に有効であり、免疫系を正常に維持する効果があることが示された(実施例4)。
〔1〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む、小腸の絨毛成長を促進するための組成物。
〔2〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔1〕記載の組成物。
〔3〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔1〕又は〔2〕記載の組成物。
〔4〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む、小腸の固有筋層の厚さを増大させるための組成物。
〔5〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔4〕記載の組成物。
〔6〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔4〕又は〔5〕記載の組成物。
〔7〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む、腸管機能を改善するための組成物。
〔8〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔7〕記載の組成物。
〔9〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔7〕又は〔8〕記載の組成物。
〔10〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む、小腸の組織障害を予防するための組成物。
〔11〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔10〕記載の組成物。
〔12〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔10〕又は〔11〕記載の組成物。
〔13〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む、抗炎症組成物。
〔14〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔13〕記載の組成物。
〔15〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔13〕又は〔14〕記載の組成物。
〔16〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の絨毛成長の促進方法。
〔17〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の固有筋層の厚さを増大させる方法。
〔18〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、腸管機能改善方法。
〔19〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の組織障害の予防方法。
〔20〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、炎症抑制方法。
〔21〕小腸の絨毛成長を促進するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
〔22〕小腸の固有筋層の厚さを増大させるための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
〔23〕腸管機能を改善するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
〔24〕小腸の組織障害を予防するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
〔25〕抗炎症組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
〔26〕小腸の絨毛成長の促進方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔27〕小腸の固有筋層の厚さを増大させる方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔28〕腸管機能改善方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔29〕小腸の組織障害の予防方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔30〕炎症抑制方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔31〕発酵乳由来タンパク質を含む、腸管機能を改善するための組成物。
〔32〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む、腸管機能を改善するための組成物。
〔33〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔32〕記載の組成物。
〔34〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔31〕〜〔33〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔35〕発酵乳由来タンパク質を含む、小腸の組織障害を予防するための組成物。
〔36〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む、小腸の組織障害を予防するための組成物。
〔37〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔36〕記載の組成物。
〔38〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔35〕〜〔37〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔39〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む、抗炎症組成物。
〔40〕さらに糖質としてイソマルチュロースを含む、〔39〕記載の組成物。
〔41〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔39〕又は〔40〕記載の組成物。
〔42〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔39〕〜〔41〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔43〕発酵乳由来タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む、腸管機能を改善するための方法。
〔44〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、腸管機能を改善するための方法。
〔45〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔44〕記載の方法。
〔46〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔43〕〜〔45〕のいずれか一項に記載の方法。
〔47〕発酵乳由来タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む、小腸の組織障害の予防方法。
〔48〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の組織障害の予防方法。
〔49〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔48〕記載の方法。
〔50〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔47〕〜〔49〕のいずれか一項に記載の方法。
〔51〕タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む、炎症抑制方法。
〔52〕組成物が糖質としてイソマルチュロースをさらに含む、〔51〕記載の方法。
〔53〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔51〕又は〔52〕記載の方法。
〔54〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔51〕〜〔53〕のいずれか一項に記載の方法。
〔55〕腸管機能を改善するための組成物の製造における、発酵乳由来タンパク質の使用。
〔56〕腸管機能を改善するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースの使用。
〔57〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔56〕記載の使用。
〔58〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔55〕〜〔57〕のいずれか一項に記載の使用。
〔59〕小腸の組織障害を予防するための組成物の製造における、発酵乳由来タンパク質の使用。
〔60〕小腸の組織障害を予防するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
〔61〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔60〕記載の使用。
〔62〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔59〕〜〔61〕のいずれか一項に記載の使用。
〔63〕抗炎症組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む組成物の使用。
〔64〕組成物が糖質としてイソマルチュロースをさらに含む、〔63〕記載の使用。
〔65〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔63〕又は〔64〕記載の使用。
〔66〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔63〕〜〔65〕のいずれか一項に記載の使用。
〔67〕腸管機能を改善するための方法に使用するための、発酵乳由来タンパク質を含む組成物。
〔68〕腸管機能を改善するための方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔69〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔68〕記載の組成物。
〔70〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔67〕〜〔69〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔71〕小腸の組織障害の予防方法に使用するための、発酵乳由来タンパク質を含む組成物。
〔72〕小腸の組織障害の予防方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
〔73〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔72〕記載の組成物。
〔74〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔71〕〜〔73〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔75〕炎症抑制方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む組成物。
〔76〕さらに糖質としてイソマルチュロースを含む、〔75〕記載の組成物。
〔77〕乳タンパク質が、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(MPC)、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(WPC)、ホエイタンパク質分離物(WPI)、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリンおよびラクトフェリンからなる群より選択される、〔75〕又は〔76〕記載の組成物。
〔78〕発酵乳由来タンパク質がフレッシュチーズに由来する、〔75〕〜〔77〕のいずれか一項に記載の組成物。
したがって、本発明の腸管機能を改善するための組成物は、消化吸収促進作用または整腸作用を有し、例えば、「腸管機能改善剤」、「消化吸収促進剤」、「整腸剤」、「老廃物排泄促進剤」「腸管免疫改善剤」として用いることができる。
腸管免疫とは、腸管でおこる免疫応答のことである。免疫応答とは、免疫学的応答とも呼ばれる。生体に抗原(非自己)が進入すると、生体はこの抗原と特異的に反応する抗体又は特異的免疫機能を持ったリンパ球(感作リンパ球)を産生して多様な生体反応を引き起こす。抗原の侵入に対して起こる一連の生体反応を免疫応答と呼ぶ。
消化管は外界の異物に接しやすい場所なので、小腸を中心とする腸管の周りはリンパ球が取り巻いており、腸管には病原体となる食べ物の中のウィルスや消化酵素で分解された異種たんぱくなどが取り込まれる。腸管はこれらの吸収を阻止するため、生物が最初に進化させた重要な免疫組織である。消化管の機能低下の一つに腸管免疫の低下が挙げられる。腸管免疫の低下は外から侵入してきたウィルスなどの異物(すなわち抗原)や、ガン細胞のような体内で発生した異常な細胞(すなわち抗原)や、老廃物(すなわち抗原)を排除する免疫応答作用が低下する事を意味し、腸管で起こる様々な病気の発症の増加や、治癒の遅延を引き起こす。これらの腸管免疫の低下が引き起こす症状を改善することを腸管免疫改善という。
上記本発明の組成物は、絨毛の修復促進作用や粘膜固有筋層の修復促進作用を有し、例えば、「小腸の組織障害の予防剤」、「絨毛の修復促進剤」、「粘膜固有筋層の修復促進剤」として用いることができる。
また、上記本発明の組成物は、潰瘍性大腸炎やクローン病などの慢性腸疾患のための腸管機能改善および栄養状態改善、癌患者等の抗生物質や抗ガン剤などによる腸管障害患者に対する腸管機能改善および栄養状態改善のために、用いることができる。
本発明の抗炎症組成物は、抗炎症作用または組織障害軽減作用を有し、例えば、「抗炎症剤」、「組織障害軽減剤」として用いることができる。
また、上記本発明の組成物は、呼吸、循環、代謝などの重篤な機能不全患者(ICU患者)の腸管機能維持、脳・神経障害を有する嚥下障害患者の栄養補給および腸管機能維持、潰瘍性大腸炎やクローン病などの慢性長疾患のための腸管機能改善および栄養状態改善、慢性閉塞性肺疾患(COPD)の栄養不良に対する腸管機能改善および栄養状態改善、癌患者等の抗生物質や抗ガン剤などによる腸管障害患者に対する腸管機能改善および栄養状態改善のために用いることができる。
本発明の乳タンパク質の加水分解物としては、カゼイン、乳タンパク質濃縮物(Milk Protein Concentrate: MPC、総乳タンパク質(Total Milk Protein)=TMPともいう)、ホエイ、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物(Whey Protein Concentrate: WPC)、ホエイタンパク質分離物(Whey Protein Isolate: WPI)、α-ラクトアルブミン(α-La)、β-ラクトグロブリン(β-Lg)およびラクトフェリンの加水分解物が挙げられる。
乳タンパク質の定義、分類、製法については、ジャパンフードサイエンス 1989年7月号p42〜48他、又はミルク総合辞典 1992年1月20日 編者 山内邦男 横山謙吉編集 発行所朝倉書店を参照のこと。
ホエイタンパク質とは、例えば牛乳中で、カゼインを除くタンパク質の総称である。ホエイタンパク質は、β-ラクトグロブリン、α-ラクトアルブミン、ラクトフェリンなどの複数の成分から構成されており、乳糖、ビタミン、ミネラルなどは含まれない。牛乳などの乳原料を酸性に調整した際に、沈殿するタンパク質がカゼイン、沈殿しないタンパク質がホエイタンパク質となる。
「ホエイ関連製品」には、ホエイを濃縮処理した濃縮ホエイ、ホエイを乾燥処理したホエイパウダー、ホエイの主要なタンパク質などを限外濾過(Ultrafiltration:UF)法などで濃縮処理した後に乾燥処理したホエイタンパク質濃縮物(Whey Protein Concentrate:以下、「WPC」ともいう)、ホエイを精密濾過(Microfiltration:MF)法や遠心分離法などで脂肪を除去してからUF法で濃縮処理した後に乾燥処理した脱脂WPC(低脂肪・高タンパク質)、ホエイの主要なタンパク質などをイオン交換樹脂法やゲル濾過法などで選択的に分画処理した後に乾燥処理したホエイタンパク質分離物(Whey Protein Isolate:以下、「WPI」ともいう)、ナノ濾過(Nanofiltration:NF)法や電気透析法などで脱塩処理した後に乾燥処理した脱塩ホエイ、ホエイ由来のミネラル成分を沈殿処理してから遠心分離法などで濃縮処理したミネラル濃縮ホエイなどを挙げられる。これらのうち、乳タンパク質を乾燥重量として(固形分の)15%〜80%で含むWPCは、タンパク質濃縮ホエイパウダーとして、平成10年3月30日に、乳等省令の一部改正により、乳製品に定義された(濃縮ホエイ、ホエイパウダー、WPC、ホエイタンパク質濃縮パウダーについて、乳等省令に規定する製造工程を経たものであれば脱塩工程の有無にかかわらない)。
なお、濃縮処理には、一般的な装置や方法を用いることができ、例えば真空蒸発缶(エバポレーター)、真空釜、薄膜垂直上昇管状型濃縮機、薄膜垂直下降管状型濃縮機、プレート型濃縮機などを用いて、減圧下で加熱する方法を用いることができる。そして、乾燥処理にも、一般的な装置や方法を用いることができ、例えば噴霧乾燥(スプレードライヤー)法、ドラム乾燥法、凍結真空乾燥(フリーズドライヤー)法、真空(減圧)乾燥法などを用いることができる。
乳タンパク質濃縮物(MPC)の標準的な製造方法は、以下のとおりである。
(1)脱脂乳を膜分離した後に、濃縮する段階。または
(2)脱脂乳を膜分離した後に、濃縮、乾燥する段階。
ホエイタンパク質濃縮物(WPC)の標準的な製造方法は、以下のとおりである。
(1)ホエイを膜分離した後に、濃縮する段階。または
(2)ホエイを膜分離した後に、濃縮、乾燥する段階。
なお、濃縮処理には、一般的な装置や方法を用いることができ、例えば真空蒸発缶(エバポレーター)、真空釜、薄膜垂直上昇管状型濃縮機、薄膜垂直下降管状型濃縮機、プレート型濃縮機などを用いて、減圧下で加熱する方法を用いることができる。そして、乾燥処理にも、一般的な装置や方法を用いることができ、例えば噴霧乾燥(スプレードライヤー)法、ドラム乾燥法、凍結真空乾燥(フリーズドライヤー)法、真空(減圧)乾燥法などを用いることができる。
ホエイタンパク質濃縮物(WPI)の標準的な製造方法は、以下のとおりである。
(1)ホエイを膜分離又はイオン交換樹脂処理又は電気透析処理した後に、濃縮する段階。または
(2)ホエイを膜分離又はイオン交換樹脂処理又は電気透析処理した後に、濃縮、乾燥する段階。
なお、濃縮処理には、一般的な装置や方法を用いることができ、例えば真空蒸発缶(エバポレーター)、真空釜、薄膜垂直上昇管状型濃縮機、薄膜垂直下降管状型濃縮機、プレート型濃縮機などを用いて、減圧下で加熱する方法を用いることができる。そして、乾燥処理にも、一般的な装置や方法を用いることができ、例えば噴霧乾燥(スプレードライヤー)法、ドラム乾燥法、凍結真空乾燥(フリーズドライヤー)法、真空(減圧)乾燥法などを用いることができる。
上記文献や特許の加水分解物が、LPS誘導性TNF-αおよびIL-6産生を抑制する作用を有するかどうかは、公知のアッセイ系(例えば、実験医学別冊、「バイオマニュアルUP実験シリーズ」、サイトカイン実験法、宮島篤、山本雅 編、(株)羊土社、1997)で調べることができる。
予備加熱:65〜90℃
E/S:0.01〜0.2
pH:2〜10
加水分解温度:30〜65℃
加水分解時間:3〜20時間未満
1)エンド型プロテアーゼ
B. リシェニホルミス由来のプロテアーゼ:アルカラーゼ(Alcalase)(登録商標)
B. レントゥス(B. lentus)由来のプロテアーゼ:エスペラーゼ(登録商標)
枯草菌由来のプロテアーゼ:ニュートラーゼ(Neutrase)(登録商標)
バクテリア由来のプロテアーゼ:プロタメックス(登録商標)
豚膵臓トリプシン:PTN(登録商標)
2)エキソ型プロテアーゼ
アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)由来のプロテアーゼ:フレーバーザイム(登録商標)
豚あるいはウシ内臓由来のカルボキシペプチダーゼ
特表平6−50756は、タンパク質含量が少なくとも65 %のホエイタンパク濃縮物(WPC)の12 %水溶液を、60 ℃を超える温度で熱処理後、B. licheniformis由来のアルカラーゼおよびB. subtilis由来のニュートラーゼで15〜35 %のDHまで加水分解し、この加水分解物を、10,000を超えるカットオフ値をもつ限外濾過(Ultrafiltration:UF)後、ナノ濾過(Nanofiltration:NF)で濃縮し、このNF保持液を噴霧乾燥して、無臭で苦味の少ないホエイタンパク加水分解物を開示している。
1)乾燥物として計算された少なくとも65%の蛋白質を含むホエイ蛋白と水を混合して、20%までの蛋白質含量をもつスラリーを作り、
2)60℃を超える温度までの熱処理を行い、
3)工程2)からの混合物を、バチルス・リケニホルミス(B.licheniformis)により作られることができるプロテアーゼにより、そして/又はバチルス・サブチリス(B.subtilis)により作られることができるプロテアーゼにより、非−pH−スタット法により、15と35%との間のDHまで蛋白分解性加水分解し、
4)工程3)からの混合物を、10,000を超えるカットオフ値をもつ限外濾過/マイクロフィルトレーション装置上で、その透過物が蛋白質加水分解産物を構成するように分離し、そして
5)その加水分解を、上記酵素の失活により終了させる
1)乾燥物として計算された少なくとも65%の蛋白質を含むホエイ蛋白と水とを混合し、約20%までの、好ましくは12%までの蛋白質含有量をもつスラリーを作り、
2)60℃を超える温度までの熱処理を行い、
3)段階2)からの混合物を、バチルス・リケニホルミス(B.licheniformis)により作られることができるプロテアーゼ、好ましくはAlcalase(登録商標)により、及び/又はバチルス・サブチリス(B.subtilis)により作られることができるプロテアーゼ、好ましくはNeutrase(登録商標)により、非−pH−スタット法により、15と35%との間のDHまで蛋白分解性加水分解し、
4)段階3)からの混合物を、10,000を超えるカットオフ値をもつ限外濾過/マイクロフィルトレーション装置上で、その透過物が上記蛋白質加水分解産物を構成するように分離し、そして、
5)その加水分解を、上記酵素の不活性化により終了させること、
を特徴とする。
ウシ脱脂乳を加熱殺菌する;
乳酸菌スターターを0.5〜5%接種して発酵を開始する;
pHが4.6に達して形成されるカードからホエイを分離する;
ホエイを分離したカードを冷却して非熟成チーズを得る
こうして製造することができる非熟成チーズは、一般にクワルク(Quark)と呼ばれることもある。非熟成チーズの組成の一例は、次のとおりである。
全固形分17〜19%、
タンパク質11〜13%、
脂肪1%以上、
炭水化物2〜8%、
乳糖2%以上
本発明の組成物は、好ましくはn-3系脂肪酸を脂質として含む。本発明の組成物に含まれるn-3系脂肪酸としては、EPA、DHA、α−リノレン酸、DPAなどが挙げられ、好ましくはEPA、DHA、又は/及びα−リノレン酸、より好ましくはEPA又は/及びDHAである。n-3系脂肪酸を含む油脂としては、シソ油、アマニ油、エゴマ油、魚油、菜種油、大豆油、サラダ油、フラックス油などが挙げられる。本発明においては、これらn-3系脂肪酸を直接含んでもよいし、魚油などの油脂の形態で含んでもよい。
また、本発明の組成物は、好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセリド(MCT:medium-chain triglyceride)を脂質として含む。MCTは体内で速やかに吸収されエネルギーになりやすく、体に脂肪が付きにくいという特徴を有する。MCTを含む油脂としては、パーム油、パーム核油、中鎖脂肪酸含有油脂などが挙げられる。本発明においては、MCTを直接含んでもよいし、パーム核油などの油脂の形態で含んでもよい。
したがって、本発明の組成物には、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として中鎖脂肪酸トリグリセリド、EPA、及び/又はDHA、および糖質としてイソマルチュロースを含む、組成物が含まれる。
n-3系脂肪酸の配合量は、組成物全体に対して、たとえば0.01〜10%、通常0.05〜7%、好ましくは0.1〜5%の割合で配合することができる。または、組成物100ml当たり0.05〜2.2g好ましくは0.1〜1.0g配合することができる。
MCTの配合量は組成物全体に対して、たとえば0.01〜14.5%、通常0.01〜8.0%、好ましくは2.0〜4.0%の割合で配合することができる。または、組成物100ml当たり0.01〜2.0g好ましくは0.5〜1.0g配合することができる。
オレイン酸含有油脂の配合量は、組成物全体に対して、たとえば0.1〜14.5%、通常2.0〜10.0%、好ましくは4.0〜8.0%の割合で配合することができる。または、組成物100ml当たり0.5〜2.0g好ましくは1.0〜1.8g配合することができる。
ミルクレシチンと大豆レシチンはそれぞれ単独でもよく、また組み合わせてもよい。
イソマルチュロースは、還元イソマルチュロース、パラチノースシロップ(登録商標)、あるいはイソマルチュロース水飴などを含む。イソマルチュロース水飴は、イソマルチュロースの脱水縮合によって生じる四糖、六糖、八糖等のオリゴ糖を主成分とする水飴状の液状物である。イソマルチュロースはショ糖と同様にグルコースとフルクトースに消化されて吸収される(合田敏尚ら、日本栄養・食糧学会誌, Vol. 36(3): 169-173, 1983)が、その加水分解速度がショ糖の1/5と遅い(Tsuji, Y. et al., J. Nutr. Sci. Vitaminol., 32: 93-100, 1986)ために、摂取後の血中グルコースおよびインスリン濃度を一定レベルに長時間維持する(Kawai, K. et al., Endocrinol, Japan, 32(6): 933-936, 1985)。
本発明において、「対象」とは、特に限定されるものではないが、動物(例えば、ヒト、家畜動物種、野生動物)を含む。「対象」は、必ずしも疾患を有する者である必要はなく、例えば、本発明の組成物は、健康なヒトを投与対象とすることもありうる。
本発明において、「投与する」とは、経口的、あるいは非経口的に投与することが含まれ、その投与形態は医薬品又は飲食品のいずれでもよい。
組成物のカロリーは、約1〜2 kcal/ml、好ましくは、1〜1.5 kcal/mlである。
水溶性食物繊維としては、難消化性オリゴ糖のラクツロース、ラクチトール、あるいはラフィノースを用いることができる。難消化性オリゴ糖の生理機能としては、未消化物のまま大腸に到達し、腸内ビフィズス菌の活性化および増殖に寄与し、腸内環境の改善すなわち整腸効果を有することが知られている。ラクツロースは、ガラクトースとフルクトースからなる合成二糖類であり、高アンモニア血症用に対する基本的な薬剤として使用される(Bircher, J. et al., Lancet i: 890, 1965 )。慢性肝不全による慢性再発型肝性脳症は、ラクツロースの投与、肝不全用特殊アミノ酸輸液(Fischer液)などに対してよく反応する。第二世代のラクツロースというべきラクチトール(β-galactosyl-sorbitol)の慢性肝性脳症に対する臨床効果はラクツロースと同程度であり(Lanthier, PL. and Morgan, M., Gut, 26: 415, 1985; Uribe, M., et al., Dig. Dis. Sci., 32: 1345, 1987; Heredia, D. et al., J. Hepatol, 7: 106, 1988; Riggio, O., et al., Dig. Dis. Sci., 34: 823, 1989)、現在高アンモニア血症治療剤として用いられている。
現在ビタミンは13種類が知られている。そのうち肝臓に深いかかわりをもつことが知られているのは、ビタミンA、B群(B1、B2、ニコチン酸、B6、パントテン酸、葉酸、B12、ビオチン)およびKである。肝障害との関連においては、Aの欠乏症と過剰症、B群の欠乏症、Kの過剰症が主として問題になる。
体液管理を行う場合に通常問題となる電解質は、ナトリウム、塩素、カリウム、リン、カルシウムおよびマグネシウムである。ミネラルの処方を組み立てる際には、(1) 細胞内に取り込まれるミネラルが十分に配分されているか、(2) 患者の内分泌環境が、投与しようとしている栄養基質の量と種類に十分対応できるか、(3) 腎に対する浸透圧物質負荷量の推測と適正な尿浸透圧を維持するための投与水分量はどうか、の3点に配慮する。
鉄、または天然物由来の微量元素、例えばミネラル酵母の銅、亜鉛、セレン、マンガン、クロムなどが含まれる。グルコン酸銅、グルコン亜鉛なども使用可能である。
(1)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の絨毛成長の促進方法。
(2)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の固有筋層の厚さを増大させる方法。
(3)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、腸管機能改善方法。
(4)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の組織障害の予防方法。
(5)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、炎症抑制方法。
(6)小腸の絨毛成長を促進するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
(7)小腸の固有筋層の厚さを増大させるための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
(8)腸管機能を改善するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
(9)小腸の組織障害を予防するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
(10)抗炎症組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
(11)小腸の絨毛成長の促進方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(12)小腸の固有筋層の厚さを増大させる方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(13)腸管機能改善方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(14)小腸の組織障害の予防方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(15)炎症抑制方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(16)発酵乳由来タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む、腸管機能を改善するための方法。
(17)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、腸管機能を改善するための方法。
(18)発酵乳由来タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む、小腸の組織障害の予防方法。
(19)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物を投与する工程を含む、小腸の組織障害の予防方法。
(20)タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む、炎症抑制方法。
(21)腸管機能を改善するための組成物の製造における、発酵乳由来タンパク質の使用。
(22)腸管機能を改善するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースの使用。
(23)小腸の組織障害を予防するための組成物の製造における、発酵乳由来タンパク質の使用。
(24)小腸の組織障害を予防するための組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物の使用。
(25)抗炎症組成物の製造における、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む組成物の使用。
(26)腸管機能を改善するための方法に使用するための、発酵乳由来タンパク質を含む組成物。
(27)腸管機能を改善するための方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(28)小腸の組織障害の予防方法に使用するための、発酵乳由来タンパク質を含む組成物。
(29)小腸の組織障害の予防方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む組成物。
(30)炎症抑制方法に使用するための、タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質を含む組成物。
本発明の栄養組成物および比較対照として一般流動食(メイバランス:明治乳業(株))、流動食A(インパクト:味の素ファルマ(株))を用いて実験を行い、ConA投与24時間後の小腸の組織障害の程度を測定した。
購入した動物を1週間馴化後、体重を指標として、3群に群分けした。実験群は、群1:一般流動食(明治乳業:メイバランス)、群2:栄養組成物(明治乳業:MEIN)、群3:流動食A(味の素ファルマ:インパクト)であり、2週間飼育した。一般流動食、栄養組成物、流動食Aの組成を表7及び8に示す。なお、本実施例において使用されたイソマルチュロースはCAS Registry 番号13718-94-0、化学式C12H22O11で示される物質である。
本発明の栄養組成物および比較対照としてメイバランスを用いて実験を行い、ConA投与2時間後の小腸中のサイトカイン産生と24時間後の組織障害の程度を評価した。
マウスを1週間馴化した後、体重を指標として、4群に群分けした。実験群は、1群:一般流動食(ConA投与2時間後に剖検)、2群:栄養組成物(ConA投与2時間後に剖検)、3群:一般流動食(ConA投与24時間後に剖検)、4群:栄養組成物(ConA投与24時間後に剖検)の各飼料で2週間飼育した。一般流動食、栄養組成物は実施例1と同様のものを用いた。
<臓器中のサイトカイン濃度測定方法>
1.臓器を100mgにlysis buffer 1mlを加え、ガラス−テフロン(登録商標)ホモジナイザーでホモジネートした。
Lysis buffer
20mM Tris・HCl (pH7.4)
0.25M sucrose
2mM EDTA・2Na
10mM EGTA
1% Tritonx-100
+1tablet of Complete Mine protease inhibitor cocktail tablets/10ml
2.均一にしたホモジネートを100,000gで40分遠心し、上清を集めた(氷冷で操作する)。
3.上清中の蛋白質濃度はBCA蛋白質アッセイキットを使って測定した。また、蛋白質当たりのサイトカイン量についても血漿中のサイトカインと同様の方法で測定した。
(参考文献:Journal of Neuroinflammation 2008, 5:10, Increased systemic and brain cytokine production and neuroinflammation by endotoxin following ethanol treatment Liya Qin, Jun He, Richard N Hanes, Olivera Pluzarev, Jau-Shyoung Hong and Fulton T Crews)
体重は群間に違いは認められなかった。一方、小腸、大腸重量は有意な増加を示した。また、腸の長さも有意に長いことが示された(表9)。
次に、血漿中および臓器中サイトカイン濃度を測定した結果を示す(表10)。血漿中サイトカインやケモカインであるTNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL-6濃度は一般流動食群で顕著な上昇が認められ、栄養組成物群でこれらすべてにおいて有意に低値を示した。IL-12とIL-10濃度は検出限界以下であった。臓器中のサイトカインは脾臓で最も産生されており、栄養組成物群ではIFN-γ、MCP-1、IL-6濃度が一般流動食群に比べ、有意に低値を示した。肝臓では栄養組成物群で一般流動食群に比べ、TNF-α(p=0.07)、IFN-γ、MCP-1が有意に低値を示した。小腸ではMCP-1、IL-6が有意に低値を示した。ConAは肝臓に障害が顕著に起こることが知られており、栄養組成物群で肝障害が抑制されることは、肝臓でのTNF-αの産生の抑制が関与していることが示された。血漿中のIL-6濃度上昇は肝臓のIL-6濃度だけでは説明がつかないことから、脾臓での産生量が寄与していると考えられる。小腸では他の臓器に比べ、炎症性サイトカインの濃度は低いが、正常に比べMCP-1とIL-6において上昇が認められており、栄養組成物群では一般流動食群に比べ、有意に低値を示したことから、障害の軽減に関与していると考えられた。
また、ConA投与24時間後の小腸の病理組織を下記に示す0〜3のレベルで評価した結果、栄養組成物群は一般流動食群に比べ小腸障害を軽減することが示された(Mann-whitney検定、p=0.021)(表11)。
本発明の栄養組成物および一般流動食を2週間自由摂取させた後の小腸、大腸重量および小腸組織評価を行った。
マウスを1週間馴化した後、体重を指標として、1群5匹で2群に群分けした。実験群は群1:一般流動食、群2:栄養組成物とし、2週間飼育した。一般流動食、栄養組成物は実施例1と同様のものを用いた。
エーテル麻酔下で腹部大静脈から採血をおこなった後、肝臓、脾臓、小腸、大腸を摘出した。小腸は全長の長さ、胃の下から11cmから10cmの重量、大腸は盲腸の下5cmの重量を測定した。各臓器についても臓器重量を測定した。小腸は胃の下から6cmから3cmを切り出し、10%ホルマリン溶液で固定後、通常の方法で組織標本を作製し、ヘマトキシリン・エオジン染色を行った。組織標本に対して血漿中のALT、AST、アルブミン、総タンパク質、トリグリセリド、コレステロール、グルコース、尿素窒素の生化学検査を行った。また、結果は平均±SDで示した。統計解析はSPSSによる一元配置分散分析の後、Student's t検定を用いて行った。
次に、正常小腸組織標本を作製し、150倍で撮影した1視野内の柔毛の数、柔毛の高さ、固有筋層の厚さを測定した(図3および表13)。栄養組成物群では一般流動食群に比べ柔毛の数と柔毛の全長には有意な違いは認められなかったが、平均の柔毛の長さと固有筋層の厚さが有意に高値を示した。この結果から、栄養組成物群で認められた小腸重量の増加は柔毛の長さと固有筋層の厚さに起因していると考えられた。
ラットインドメタシン誘発小腸障害モデルを用いて、本発明の栄養組成物の小腸障害に及ぼす効果を検討した。
購入した動物を1週間の馴化後、体重を指標として、6群に群分けした。一般流動食或いは栄養組成物でインドメタシン投与前の2週間飼育した。一般流動食、栄養組成物は実施例1と同様のものを用いた。その後、インドメタシンを5%NaHCO3に溶かした溶液を10mg/kg容量で皮下に1日に1回、2日間連続で投与し、小腸障害を誘発させた。その後も同じ飼料で飼育し、投与1日目をday0として、day4、day8に剖検した。インドメタシンを投与しない正常群はday4とday8に半数ずつ剖検した。
また、day1、day3、day7にフェノールスルホンフタレイン注0.6%「第一三共」(第一三共(株))を3ml/bodyで経口投与し、その後、24時間尿を採取し、尿中のPSP排泄量を測定し、尿中のPSP排泄率で結果を示した。PSPは一般にヒトで腎機能の指標に使われている。PSPを経口で投与した場合、尿中への排泄率は非常に低いが、腸管膜障害により透過性が亢進すると細胞の隙間を透過し、血液内に入り、腎臓を介して尿中に排泄される。本実施例では腸管膜の透過性の指標として使われている。
剖検の前日午後5時から絶食を開始し、一晩絶食後に剖検した。エーテル麻酔下で心臓採血後、無菌状態で腸間膜リンパ節(MLN)、肝臓を摘出し、臓器重量を測定後、臓器をホモジネートした溶液を、5%ウマ脱線維血液を加えたBL寒天培地で37℃、72時間、好気および嫌気条件下で培養後に菌数を測定した。また、グラム染色を行い、検出された菌がグラム陰性菌かグラム陽性菌か調べた。
次に、小腸は全長の長さ、盲腸と大腸の重量、盲腸のpHを測定した。
また、血液一般検査は自動血球分析装置(Sysmex ST-1800i)を用いて分析した。血液一般検査は様々な病態の変化を調べる指標として使われている。好中球や単球の増加は感染症(細菌)が原因で引き起こされることが知られている。
インドメタシン誘発小腸障害により腸管膜の透過性の亢進が認められるが、栄養組成物摂取により、対照群に比べ、有意に腸管透過性の亢進が抑制されていることが示された(図4)。以上の結果より、栄養組成物摂取によりインドメタシン投与による小腸障害を抑制することが示された。
この結果から栄養組成物摂取は非ステロイド性抗炎症剤などによる小腸障害を予防する可能性が示唆された。
インドメタシン誘発小腸障害により腸管粘膜の防御力の破錠、免疫力の低下などにより本来消化管の中にとどまる腸内細菌が腸管粘膜上皮のバリアを超えて肝臓や腸間膜リンパ節に移行することが分かっている。
インドメタシン投与4日目と8日目に腸間膜リンパ節全部と肝臓(一部)を取って、ホモジネートした溶液中の菌数を培養法により測定した。本実験結果より、インドメタシン投与4日目では腸間膜リンパ節に菌が検出されなかった個体は一般流動食群で9匹中2匹、栄養組成物群では10匹中3匹であった。また、肝臓ではすべての個体で検出された。8日目では腸間膜リンパ節に菌が検出されなかった個体は一般流動食群で8匹中1匹、栄養組成物群で8匹中4匹であった。また、肝臓では一般流動食群、栄養組成物群ともに菌はどの個体にも検出されなかった。実際の各臓器に検出された菌数の結果を図5に示した。インドメタシン投与4日目では腸間膜リンパ節に検出された菌数は栄養組成物群と一般流動食群で有意な違いは認められなかった(図示せず)。一方、肝臓では栄養組成物群の方が少ない傾向を示した(p=0.068)(図5上段)。インドメタシン投与8日目では肝臓へのバクテリアルトランスロケーション(BT)は認められなかったが、栄養組成物群は一般流動食群に比べ、腸間膜リンパ節へのBTを有意に抑制した(p<0.05)(図5下段)。
また、検出された菌は好気性のグラム陽性菌であった。
以上の結果より、栄養組成物摂取は腸間膜リンパ節や肝臓へのBTを抑制した。つまり、栄養組成物摂取により、インドメタシン投与による小腸障害により誘発されるBTを抑制することが示された。栄養組成物摂取は小腸を保護し、非ステロイド性抗炎症剤などにより惹起される小腸障害を予防する可能性が示唆された。
血液一般検査を行い、インドメタシン投与前と投与後の変化を調べた。血液一般検査は様々な病態の変化を調べる指標として使われている。好中球や単球の増加は感染症(細菌)が原因で引き起こされることが知られている。
検査の結果、正常個体では、栄養組成物群と一般流動食群との間に有意な違いが認められなかった。一方、インドメタシン投与群では、正常個体に比べ白血球数の上昇が認められた(図6)。白血球の増加はリンパ球、好中球、単球の増加によるものであった(図6)。一般流動食はday4で白血球の増加が認められ、day7ではさらに上昇を続けた。一方、栄養組成物はday4で白血球の増加はピークを示し、その後減少した。白血球の中で、特に群間で違いが認められたのは好中球数と単球数であった。Day4では群間に違いは認められなかったが、day7では栄養組成物群は一般流動食群と比べ、好中球数と単球数が低値を示した。
以上の結果から、非ステロイド性抗炎症剤誘発小腸障害により誘発されるバクテリアルトランスロケーションが栄養組成物群で抑制された結果、好中球数や単球数の上昇が抑制されたと考えられる。
動物はC57BL/6マウス6週齢雄を日本エスエルシー(株)から購入して使用した。購入したマウスを1週間馴化した後、体重を指標として、5群に群分けした。
群構成:
群1:一般流動食(明治乳業:メイバランス)
群2:栄養組成物(明治乳業:MEIN)
群3:栄養組成物-ホエイタンパク質加水分解物(栄養組成物-P)
(栄養組成物からホエイタンパク質加水分解物を除いたもの)
群4:栄養組成物-ホエイタンパク質加水分解物-イソマルチュロース(栄養組成物-P-I)
(栄養組成物からホエイタンパク質加水分解物とイソマルチュロースを除いたもの)
群5:栄養組成物-ホエイタンパク質加水分解物-イソマルチュロース-クワルク(栄養組成物-P-I-Q)
(栄養組成物からホエイタンパク質加水分解物、イソマルチュロース、クワルクを除いたもの)
上記5群で2週間飼育した。栄養組成物中のタンパク質源であるクワルクとホエイタンパク質加水分解物の代わりにカゼイン、糖質源としてイソマルチュロースの代わりにデキストリンを添加して調製した。
ConA(Sigma)は12mg/kgの用量を尾静脈内に投与し、翌日、エーテル麻酔下で腹部大静脈から採血をおこなった後、肝臓、脾臓、盲腸、小腸を摘出した。小腸は中央10cmの重量を測定した。
栄養組成物の腸管保護作用や抗炎症作用にホエイタンパク質加水分解物、イソマルチュロースおよびクワルクの3成分が関与している可能性が示された。
動物はC57BL/6マウス6週齢雄を日本エスエルシー(株)から購入して使用した。購入したマウスを1週間馴化した後、体重を指標として、6群に群分けした。
群構成(一般流動食、栄養組成物は実施例6と同様のものを用いた。)
群1:一般流動食
群2:栄養組成物
群3:栄養組成物-ホエイタンパク質加水分解物(-P)
(栄養組成物からホエイタンパク質加水分解物を除いたもの)
群4:栄養組成物-イソマルチュロース(-I)
(栄養組成物-イソマルチュロースを除いたもの)
群5:栄養組成物--クワルク(-Q)
(栄養組成物からクワルクを除いたもの)
群6:栄養組成物-ホエイタンパク質加水分解物-イソマルチュロース-クワルク(-P-I-Q)
(栄養組成物からホエイタンパク質加水分解物、イソマルチュロース、クワルクを除いたもの)
上記6群で2週間飼育した。栄養組成物中のタンパク質源であるクワルクとホエイタンパク質加水分解物の代わりにカゼイン、糖質源としてイソマルチュロースの代わりにデキストリンを添加して調製した。
ConA(Sigma)は12mg/kgの用量を尾静脈内に投与し、投与2、4、8時間後に尾静脈から採血をおこない、翌日、エーテル麻酔下で腹部大静脈から採血をおこなった後、肝臓、脾臓、盲腸、小腸、大腸を摘出した。血漿中のALT、ASTは富士ドライケムで測定した。
最終日の体重および臓器重量の結果を表15に示した。
ConA投与24時間後のAST、ALTの結果を図8に示した。栄養組成物群に比べ、ホエイタンパク質加水分解物のみを除いた群(群3)とクワルクのみを除いた群(群5)でAST、ALTの上昇が認められた。イソマルチュロースのみを除いた群(群4)ではAST、ALT値はほぼ栄養組成物群と同レベルであった。また、栄養組成物からホエイタンパク質加水分解物とイソマルチュロースおよびクワルクを除いた場合(群6)、栄養組成物群に比べ、ALT値で有意に高値を示したことから、肝炎抑制作用には主にホエイタンパク質加水分解物とクワルクが関与していることが示された。
乾燥物として約90%のタンパク質含量のホエイタンパク質分離物(WPI、ダビスコ社)を、8%(w/v)のタンパク質含有量で蒸留水に溶解した。溶液は85℃2分間の加熱処理しタンパク質を変性させた。この加熱後の溶液のpHは約7.5であった。加水分解は、アルカラーゼ2.4L(酵素、ノボザイムス社)を基質に対して2.0%の濃度で添加し3時間55℃で反応させた。次に、豚由来のトリプシンである PTN 6.0S(ノボザイムズジャパン)を基質に対して3.0%の濃度で添加し3時間55℃で反応させた。全加水分解時間は6時間であった。反応終了時のpHは約7.0であった。ホエイタンパク質加水分解物は、遠心処理(20,000×g、10分)後、分画分子量10,000のUF膜処理(ミリポア社ウルトラフリー-MC)を行った。
条件
試料 :ホエイタンパク質加水分解物のUFパーミエイト
カラム:C18 SG120(資生堂社)4.6 mmφ×250 mm
溶離液:A;0.1%トリフルオロ酢酸水溶液/アセトニトリル5/95
B;0.1%トリフルオロ酢酸水溶液/アセトニトリル32/68
A→B 60分の直線濃度勾配
流速 :1 mL/min
検出 :215 nm(紫外/可視検出器)
また、本発明の組成物は、小腸の組織障害の予防においても有用である。さらに、本発明の組成物は、抗炎症作用を示すため、抗炎症剤としても有用である。
Claims (6)
- タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、脂質として油脂、および糖質としてイソマルチュロースを含む、小腸の絨毛成長を促進、小腸の固有筋層の厚さを増大、腸管機能を改善、または小腸の組織障害を予防するための飲食品であって、
発酵乳由来タンパク質が、カゼイン、α-ラクトアルブミン、およびβ-ラクトグロブリンを含む発酵乳由来タンパク質の混合物であり、乳タンパク質の加水分解物が、以下の(a)、(b)、(c)または(d)に記載のホエイタンパク質加水分解物である、前記飲食品、
(a)ホエイタンパク質分離物(WPI)またはホエイタンパク濃縮物(WPC)を、プロテアーゼで加水分解し、この加水分解物を10,000以上のカットオフ値をもつ限外濾過(Ultrafiltration:UF)装置で処理し、この加水分解物を含む透過物について前記プロテアーゼを不活性化することによって得られるホエイタンパク質加水分解物、
(b)加熱変性したホエイタンパク質分離物(WPI)を、エンドペプチダーゼおよびエキソペプチダーゼで加水分解後、この加水分解物中の芳香族アミノ酸をイオン交換樹脂で吸着処理することによって得られる、ホエイタンパク質加水分解物、
(c)タンパク質含量が少なくとも65%のホエイタンパク濃縮物(WPC)の12%水溶液を、60℃を超える温度で熱処理後、B.licheniformis由来のアルカラーゼ(登録商標)およびB.subtilis由来のニュートラーゼ(登録商標)で15〜35%のDHまで加水分解し、この加水分解物を、10,000を超えるカットオフ値をもつ限外濾過(Ultrafiltration:UF)後、ナノ濾過(Nanofiltration:NF)で濃縮し、このNF保持液を噴霧乾燥した、無臭で苦味の少ないホエイタンパク質加水分解物、
(d)ホエイタンパク質分離物(WPI)を8%のタンパク質含有量で含む溶液を85℃で加熱処理してpHが約7.5の溶液を得、この溶液をプロテアーゼで加水分解してpHが約7.0の加水分解物を得、この加水分解物について分画分子量10,000の限外濾過膜処理を行い、得られた透過液(パーミエイト)を逆相HPLCに供することによって得られるホエイタンパク質加水分解物。 - 発酵乳由来タンパク質の混合物が、さらにα-ラクトアルブミン加水分解物およびβ-ラクトグロブリン加水分解物を含む、請求項1記載の飲食品。
- 発酵乳由来タンパク質の混合物が、ヨーグルト由来タンパク質の混合物またはフレッシュチーズである、請求項1または2記載の飲食品。
- タンパク質として乳タンパク質の加水分解物および発酵乳由来タンパク質、および糖質としてイソマルチュロースを含む、腸管機能を改善または小腸の組織障害を予防するための飲食品であって、
発酵乳由来タンパク質が、カゼイン、α-ラクトアルブミン、およびβ-ラクトグロブリンを含む発酵乳由来タンパク質の混合物であり、乳タンパク質の加水分解物が、以下の(a)、(b)、(c)または(d)に記載のホエイタンパク質加水分解物である、前記飲食品、
(a)ホエイタンパク質分離物(WPI)またはホエイタンパク濃縮物(WPC)を、プロテアーゼで加水分解し、この加水分解物を10,000以上のカットオフ値をもつ限外濾過(Ultrafiltration:UF)装置で処理し、この加水分解物を含む透過物について前記プロテアーゼを不活性化することによって得られるホエイタンパク質加水分解物、
(b)加熱変性したホエイタンパク質分離物(WPI)を、エンドペプチダーゼおよびエキソペプチダーゼで加水分解後、この加水分解物中の芳香族アミノ酸をイオン交換樹脂で吸着処理することによって得られる、ホエイタンパク質加水分解物、
(c)タンパク質含量が少なくとも65%のホエイタンパク濃縮物(WPC)の12%水溶液を、60℃を超える温度で熱処理後、B.licheniformis由来のアルカラーゼ(登録商標)およびB.subtilis由来のニュートラーゼ(登録商標)で15〜35%のDHまで加水分解し、この加水分解物を、10,000を超えるカットオフ値をもつ限外濾過(Ultrafiltration:UF)後、ナノ濾過(Nanofiltration:NF)で濃縮し、このNF保持液を噴霧乾燥した、無臭で苦味の少ないホエイタンパク質加水分解物、
(d)ホエイタンパク質分離物(WPI)を8%のタンパク質含有量で含む溶液を85℃で加熱処理してpHが約7.5の溶液を得、この溶液をプロテアーゼで加水分解してpHが約7.0の加水分解物を得、この加水分解物について分画分子量10,000の限外濾過膜処理を行い、得られた透過液(パーミエイト)を逆相HPLCに供することによって得られるホエイタンパク質加水分解物。 - 発酵乳由来タンパク質の混合物が、さらにα-ラクトアルブミン加水分解物およびβ-ラクトグロブリン加水分解物を含む、請求項4記載の飲食品。
- 発酵乳由来タンパク質の混合物が、ヨーグルト由来タンパク質の混合物またはフレッシュチーズである、請求項4または5記載の飲食品。
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