JPH0673462B2 - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製法Info
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- JPH0673462B2 JPH0673462B2 JP4258286A JP4258286A JPH0673462B2 JP H0673462 B2 JPH0673462 B2 JP H0673462B2 JP 4258286 A JP4258286 A JP 4258286A JP 4258286 A JP4258286 A JP 4258286A JP H0673462 B2 JPH0673462 B2 JP H0673462B2
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- Japan
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- tryptophan
- producing
- fermentation
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ＜産業上の利用分野＞ 本発明は発酵法によるＬ−トリプトファンの製法に関す
る。
る。
Ｌ−トリプトファンは、必須アミノ酸の１つであり、医
薬品、飼料添加物として重要であり、その安価な製造方
法が望まれている。
薬品、飼料添加物として重要であり、その安価な製造方
法が望まれている。
＜従来の技術＞ 従来、プロビデンシア属に属する微生物を用いて、酵素
法により、インドールとピルビン酸からＬ−トリプトフ
ァンを製造する方法が知られていた（特公昭49−46917
号公報）。
法により、インドールとピルビン酸からＬ−トリプトフ
ァンを製造する方法が知られていた（特公昭49−46917
号公報）。
＜発明が解決しようとする問題点＞ しかしながら、従来の方法は、高価な前駆体を使用する
ものであり、経済的に極めて不利な方法であった。
ものであり、経済的に極めて不利な方法であった。
＜問題点を解決するための手段および作用＞ そこで、本発明者らは、前記問題点を解決すべく鋭意研
究の結果、発酵法によってＬ−トリプトファンが著量蓄
積することを見出し、本発明に到達した。
究の結果、発酵法によってＬ−トリプトファンが著量蓄
積することを見出し、本発明に到達した。
すなわち、本発明はプロビデンシア属に属し、かつＬ−
トリプトファン生産能を有する微生物を培養して、培養
液中にＬ−トリプトファンを生成蓄積せしめ、該培養液
からＬ−トリプトファンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−トリプトファンの製法である。
トリプトファン生産能を有する微生物を培養して、培養
液中にＬ−トリプトファンを生成蓄積せしめ、該培養液
からＬ−トリプトファンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−トリプトファンの製法である。
プロビデンシア属に属する微生物が発酵法によりＬ−ト
リプトファンを著量に生成蓄積せしめ得ることはこれま
で全く知られていない。
リプトファンを著量に生成蓄積せしめ得ることはこれま
で全く知られていない。
次に本発明を詳細に説明する。
本発明で用いられる微生物は、プロビデンシア属に属す
る微生物である。
る微生物である。
本発明で用いられる微生物の代表的なものとしては例え
ば以下のものがある。プロビデンシア・レトゲリ５−FT
（Ｒ）−11（微工研菌寄第8659号）。
ば以下のものがある。プロビデンシア・レトゲリ５−FT
（Ｒ）−11（微工研菌寄第8659号）。
この変異株はプロビデンシア・レトゲリATCC9919より誘
導されたものでトリプトファン代謝拮抗物質である５−
フルオロトリプトファンに耐性な変異株である。
導されたものでトリプトファン代謝拮抗物質である５−
フルオロトリプトファンに耐性な変異株である。
本発明で用いた変異株の誘導は通常の変異株処理法によ
って比較的容易にできた。
って比較的容易にできた。
すなわち、本発明のトリプトファン代謝拮抗物質に耐性
を有する変異株は、親株を紫外線照射するか、あるいは
変異誘発剤（例えばＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアンジン、エチルメタンスルホン酸など）で処
理した後、親株が生育できないような量のトリプトファ
ン代謝拮抗物質を含む培地で生育できるような菌株を採
取したものである。
を有する変異株は、親株を紫外線照射するか、あるいは
変異誘発剤（例えばＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアンジン、エチルメタンスルホン酸など）で処
理した後、親株が生育できないような量のトリプトファ
ン代謝拮抗物質を含む培地で生育できるような菌株を採
取したものである。
本発明におけるＬ−トリプトファン生産用の培地は炭素
源、窒素源、無機イオンおよび必要に応じてその他の有
機微量成分を含有する通常の培地である。炭素源として
は、グルコース、フラクトースやでん粉およびセルロー
スの加水分解物、糖蜜などの糖類、フマール酸、クエン
酸、コハク酸などの如き有機酸、グリセロールの如きア
ルコール類などを２〜15％、窒素源として、酢酸アンモ
ニウムの如き有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウムの如き無機アンモニウム塩、アンモニアガス、アン
モニア水、尿素などを0.5〜4.0％、これらの他にリン酸
カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第１鉄７水和物、硫
酸マンガン４−６水和物などが少量添加される。
源、窒素源、無機イオンおよび必要に応じてその他の有
機微量成分を含有する通常の培地である。炭素源として
は、グルコース、フラクトースやでん粉およびセルロー
スの加水分解物、糖蜜などの糖類、フマール酸、クエン
酸、コハク酸などの如き有機酸、グリセロールの如きア
ルコール類などを２〜15％、窒素源として、酢酸アンモ
ニウムの如き有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウムの如き無機アンモニウム塩、アンモニアガス、アン
モニア水、尿素などを0.5〜4.0％、これらの他にリン酸
カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第１鉄７水和物、硫
酸マンガン４−６水和物などが少量添加される。
培養は好気的条件が望ましい。培養の間、培地のpHは５
から９に、温度は24〜37℃に調節し、48〜120時間振と
うまたは通気培養すれば好ましい結果が得られる。
から９に、温度は24〜37℃に調節し、48〜120時間振と
うまたは通気培養すれば好ましい結果が得られる。
培養液からＬ−トリプトファンを採取するには、例えば
菌体を除去した培養液を強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤ
イオンSK−104（H+型）（三菱化成社製）に通し、Ｌ−
トリプトファンを吸着させ、該樹脂を水洗後、0.5Nアン
モニア水で溶出することによる。溶出液を濃縮して得た
粗Ｌ−トリプトファン結晶粉末を少量の50％熱エタノー
ル水に溶解し、活性炭処理して脱色し冷却後精Ｌ−トリ
プトファンの結晶を得ることができる。
菌体を除去した培養液を強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤ
イオンSK−104（H+型）（三菱化成社製）に通し、Ｌ−
トリプトファンを吸着させ、該樹脂を水洗後、0.5Nアン
モニア水で溶出することによる。溶出液を濃縮して得た
粗Ｌ−トリプトファン結晶粉末を少量の50％熱エタノー
ル水に溶解し、活性炭処理して脱色し冷却後精Ｌ−トリ
プトファンの結晶を得ることができる。
＜実施例＞ 以下実施例により、本発明を具体的に説明する。
実施例１ A.（５−フルオロトリプトファン耐性変異株の取得） プロビデンシア・レトゲリATCC9919の菌体に通常の方法
でＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアンジン
処理（300μg/ml、30℃で10分）した後、この細胞を５
−フルオロトリプトファン1g/を添加した寒天板培地
（グルコース0.5％、硫安0.1％、リン酸第１カリウム0.
3％、リン酸第２カリウム0.7％、硫酸マグネシウム７水
和物0.01％を含む最小培地）に塗布した。次に30℃にて
４〜６日間培養し、生じた大きなコロニーを釣菌分離し
て、５−フルオロトリプトファン耐性株（プロビデンシ
ア・レトゲリ５−FT（Ｒ）−11（微工研菌寄第8659号）
を取得した。
でＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアンジン
処理（300μg/ml、30℃で10分）した後、この細胞を５
−フルオロトリプトファン1g/を添加した寒天板培地
（グルコース0.5％、硫安0.1％、リン酸第１カリウム0.
3％、リン酸第２カリウム0.7％、硫酸マグネシウム７水
和物0.01％を含む最小培地）に塗布した。次に30℃にて
４〜６日間培養し、生じた大きなコロニーを釣菌分離し
て、５−フルオロトリプトファン耐性株（プロビデンシ
ア・レトゲリ５−FT（Ｒ）−11（微工研菌寄第8659号）
を取得した。
実施例１ 下記の組成の発酵用培地100mlを500ml容振蘯フラスコに
入れ、120℃で10分蒸気殺菌した。これに第１表に示す
各菌株を一白金耳植菌し、30℃にて90時間振蘯培養し
た。
入れ、120℃で10分蒸気殺菌した。これに第１表に示す
各菌株を一白金耳植菌し、30℃にて90時間振蘯培養し
た。
発酵用培地組成 グルコース ８％ （NH4）2SO4 ２％ KH2PO4 0.1％ MgSO4・7H2O 0.05％ Fe++ 2ppm Mn++ 2ppm CaCO3 ４％ pH 7.0（KOHで中和） 培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去した液中のＬ
−トリプトファン濃度を、ロイコノストック メセンテ
ロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定量法、および自
動アミノ酸分析計（日本電子（株）社製JLC−200A）で
定量したところ第１表に示すような結果を得た。
−トリプトファン濃度を、ロイコノストック メセンテ
ロイデス（ATCC8042）を用いる微生物定量法、および自
動アミノ酸分析計（日本電子（株）社製JLC−200A）で
定量したところ第１表に示すような結果を得た。
また、発酵終了後の液を強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤ
イオンSK−104（H+型）（三菱化成社製）に通し、Ｌ−
トリプトファンを吸着させ、該樹脂を水洗後、0.5Nアン
モニア水で溶出した溶出液を濃縮して得た粗Ｌ−トリプ
トファン結晶粉末を少量の熱エタノール水に溶解し、活
性炭処理して脱色し冷却後培養液１あたり55mgのＬ−
トリプトファンの結晶を得た。
イオンSK−104（H+型）（三菱化成社製）に通し、Ｌ−
トリプトファンを吸着させ、該樹脂を水洗後、0.5Nアン
モニア水で溶出した溶出液を濃縮して得た粗Ｌ−トリプ
トファン結晶粉末を少量の熱エタノール水に溶解し、活
性炭処理して脱色し冷却後培養液１あたり55mgのＬ−
トリプトファンの結晶を得た。
＜発明の効果＞ 本発明の方法によれば、高価な前駆体を使用することな
く、かつＬ−トリプトファンを著量蓄積せしめることが
できるため、工業的に極めて有利である。
く、かつＬ−トリプトファンを著量蓄積せしめることが
できるため、工業的に極めて有利である。
Claims (1)
- 【請求項１】プロビデンシア属に属しかつＬ−トリプト
ファン生産能を有する微生物を培養して培養液中にＬ−
トリプトファンを生成蓄積せしめ、該培養液よりＬ−ト
リプトファンを採取することを特徴とする発酵法による
Ｌ−トリプトファンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4258286A JPH0673462B2 (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4258286A JPH0673462B2 (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62201593A JPS62201593A (ja) | 1987-09-05 |
| JPH0673462B2 true JPH0673462B2 (ja) | 1994-09-21 |
Family
ID=12640062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4258286A Expired - Lifetime JPH0673462B2 (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0673462B2 (ja) |
-
1986
- 1986-02-27 JP JP4258286A patent/JPH0673462B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62201593A (ja) | 1987-09-05 |
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