JPH0191791A - 発酵法によるl−フェニルアラニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるl−フェニルアラニンの製造法Info
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- JPH0191791A JPH0191791A JP25048287A JP25048287A JPH0191791A JP H0191791 A JPH0191791 A JP H0191791A JP 25048287 A JP25048287 A JP 25048287A JP 25048287 A JP25048287 A JP 25048287A JP H0191791 A JPH0191791 A JP H0191791A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は発酵法によるL−フェニルアラニンの製造法に
関する。
関する。
〈従来の技術〉
従来、シトロバクタ−属の微生物を用いるL−フェニル
アラニンの製造法としては、桂皮酸とアンモニアを原料
とする酵素法(特開昭61−271998号公報)など
が知られている。
アラニンの製造法としては、桂皮酸とアンモニアを原料
とする酵素法(特開昭61−271998号公報)など
が知られている。
〈発明が解決しようとする問題点〉
しかCながら、従来の方法は、高価な前駆体を使用する
ものであり、経済的に極めて不利な方法であった。
ものであり、経済的に極めて不利な方法であった。
く問題点を解決するための手段および作用〉そこで、本
発明者らは、前記問題点を解決すべく鋭意研究の結果、
発酵法によってL−フェニルアラニンが著量蓄積するこ
とを見い出し、本発明に到達した。
発明者らは、前記問題点を解決すべく鋭意研究の結果、
発酵法によってL−フェニルアラニンが著量蓄積するこ
とを見い出し、本発明に到達した。
すなわち、本発明はシトロバクタ−属に属し、トリプト
ファン代謝拮抗物質に耐性を有し、かつし−フェニルア
ラニン生産能を有する微生物を、液体培地中で好気的に
培養してL−フェニルアラニンを培養液中に生成・蓄積
せしめ、該培養液よりL−7エニルアラニンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるL−フェニルアラニンの
製造法である。
ファン代謝拮抗物質に耐性を有し、かつし−フェニルア
ラニン生産能を有する微生物を、液体培地中で好気的に
培養してL−フェニルアラニンを培養液中に生成・蓄積
せしめ、該培養液よりL−7エニルアラニンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるL−フェニルアラニンの
製造法である。
シトロバクタ−属に属し、トリプトファン代謝拮抗物質
に耐性を有する微生物が発酵法によりL−フェニルアラ
ニンを著量に生成・蓄積せしめ得ることはこれまで全く
知られていない。
に耐性を有する微生物が発酵法によりL−フェニルアラ
ニンを著量に生成・蓄積せしめ得ることはこれまで全く
知られていない。
次に本発明の詳細な説明する。
本発明で用いられる微生物はシトロバクタ−属に属し、
トリプトファン代謝拮抗物質に耐性を有し、かつL−フ
ェニルアラニン生産能を有する微生物であれば特に限定
されない、トリプトファン代謝拮抗物質としては、例え
ば、5−フルオロトリプトファン、5−メチルトリプト
ファン、7−アザトリプトファンなどが挙げられる。
トリプトファン代謝拮抗物質に耐性を有し、かつL−フ
ェニルアラニン生産能を有する微生物であれば特に限定
されない、トリプトファン代謝拮抗物質としては、例え
ば、5−フルオロトリプトファン、5−メチルトリプト
ファン、7−アザトリプトファンなどが挙げられる。
本発明で用いられる微生物の代表的なものとしては例え
ば以下のものがある。シトロバクタ−・70インデイ−
[citrobacter freundii)FTR
66−55(微工研菌寄第9340号)。
ば以下のものがある。シトロバクタ−・70インデイ−
[citrobacter freundii)FTR
66−55(微工研菌寄第9340号)。
この菌株はシトロバクタ−・フロインディーIFO13
545より誘導された変異株で5−フルオロトリプトフ
ァンに耐性な変異株である。
545より誘導された変異株で5−フルオロトリプトフ
ァンに耐性な変異株である。
変異株の誘導は通常の変異株処理法によって比較的容易
に行うことができる。
に行うことができる。
すなわち、トリプトファン代謝拮抗物質に耐性を有する
変異株は、親株を紫外線照射するか、あるいは変異誘発
剤(例えばN−メチル−N゛−二トローN−ニトロソグ
アニジン、エチルメタンスルホン酸など)で処理したの
ち、親株が生育できないような量のトリプトファン代謝
拮抗物質を含む培地で生育できるような菌株を採取すれ
ばよい、ここで、トリプトファン代謝拮抗物質に耐性を
有する変異株とは、その親株より強い耐性を有する菌株
のことであり、好ましくは、親株の24時間後の相対生
育度が40%以下になるようなトリプトファン代謝拮抗
物質を含む培地で培養した場合の相対生育度が50%以
上を示すようなものをいう。
変異株は、親株を紫外線照射するか、あるいは変異誘発
剤(例えばN−メチル−N゛−二トローN−ニトロソグ
アニジン、エチルメタンスルホン酸など)で処理したの
ち、親株が生育できないような量のトリプトファン代謝
拮抗物質を含む培地で生育できるような菌株を採取すれ
ばよい、ここで、トリプトファン代謝拮抗物質に耐性を
有する変異株とは、その親株より強い耐性を有する菌株
のことであり、好ましくは、親株の24時間後の相対生
育度が40%以下になるようなトリプトファン代謝拮抗
物質を含む培地で培養した場合の相対生育度が50%以
上を示すようなものをいう。
本発明におけるL−フェニルアラニン生産用の液体培地
は炭素源、窒素源、無機イオンおよび必要に応じてその
他の有i微量成分を含有する通常の液体培地である。炭
素源としては、グルコース、フラクトースやでん粉およ
びセルロースの加水分解物、糖蜜などの糖類、フマール
酸、クエン酸、コハク酸などのごとき有機酸、グリセロ
ールのごとごとアルコール類などを2〜15%、窒素源
として、酢酸アンモニウムのごとき有機アンモニウム塩
、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウムのごとき無機アンモニウム塩
、アンモニアガス、アンモニア水、尿素などを0.5〜
4.0%、これらの他にリン酸カリウム、硫酸マグネシ
ウム、硫酸第1鉄7水和物、塩化マンガン4水和物など
が少量添加される。
は炭素源、窒素源、無機イオンおよび必要に応じてその
他の有i微量成分を含有する通常の液体培地である。炭
素源としては、グルコース、フラクトースやでん粉およ
びセルロースの加水分解物、糖蜜などの糖類、フマール
酸、クエン酸、コハク酸などのごとき有機酸、グリセロ
ールのごとごとアルコール類などを2〜15%、窒素源
として、酢酸アンモニウムのごとき有機アンモニウム塩
、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウムのごとき無機アンモニウム塩
、アンモニアガス、アンモニア水、尿素などを0.5〜
4.0%、これらの他にリン酸カリウム、硫酸マグネシ
ウム、硫酸第1鉄7水和物、塩化マンガン4水和物など
が少量添加される。
培養は好気的条件で行う、培養の間、液体培地のpHは
5から9に、温度は24〜37℃に調節し、48〜12
0時間振盪または通気培養すれば好ましい結果が得られ
る。
5から9に、温度は24〜37℃に調節し、48〜12
0時間振盪または通気培養すれば好ましい結果が得られ
る。
培養液からフェニルアラニンを採取する方法は常法に従
って行えばよく、培養液から菌体を分離除去したのち、
濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を用いる方法
などにより採取される。
って行えばよく、培養液から菌体を分離除去したのち、
濃縮晶析する方法あるいはイオン交換樹脂を用いる方法
などにより採取される。
〈実施例〉
以下実施例により、本発明を具体的に説明する。
実験例1
(5−フルオロトリプトファン耐性変異株の取得)
シトロバクタ−・フロインディーIFO13545の菌
体に通常の方法でN−メチル−N゛−ニトロ−N−二ト
ロングアニジン処哩(150μg / ml、37℃、
15分)°シたのち、この細胞を5−フルオロ−D、L
−トリプトファン5g/、IIを添加した寒天平板培地
(グルコース0.2%、硫安0.1%、リン酸第−カリ
ウム0.2%、リン酸第二カリウム0.7%、硫酸マグ
ネシウム7水和物0.01%、“クエン酸ナトリウム0
゜05%を含む合成培地)に塗布した。次に37℃で4
〜6日間培養し、生じた大きなコロニーを釣菌分離して
、5−フルオロトリプトファン耐性変異株シトロバクタ
−・フロインディーFTR66−55(微工研菌寄第9
340号)を取得した。
体に通常の方法でN−メチル−N゛−ニトロ−N−二ト
ロングアニジン処哩(150μg / ml、37℃、
15分)°シたのち、この細胞を5−フルオロ−D、L
−トリプトファン5g/、IIを添加した寒天平板培地
(グルコース0.2%、硫安0.1%、リン酸第−カリ
ウム0.2%、リン酸第二カリウム0.7%、硫酸マグ
ネシウム7水和物0.01%、“クエン酸ナトリウム0
゜05%を含む合成培地)に塗布した。次に37℃で4
〜6日間培養し、生じた大きなコロニーを釣菌分離して
、5−フルオロトリプトファン耐性変異株シトロバクタ
−・フロインディーFTR66−55(微工研菌寄第9
340号)を取得した。
実験例2
(5−フルオロトリプトファン耐性変異株の耐性度)
下記第1表に示す各菌株を液体り培地(トリプトン1%
、酵母エキス0.5%、塩化ナトリウム0.5%、PH
7,5)を用いて30℃で6時間振盪培養し、生育した
菌体を集菌し生理食塩水でよく洗浄した。この菌体懸濁
液を、5−フルオロトリプトファン0.1.5.25m
Mの濃度でそれぞれ含む最少培地(培地組成ニゲルコー
ス0.2%、硫安0.1%、リン酸第1カリウム0.2
%、リン酸第2カリウム0.7%、硫酸マグネシウム7
水和物0.01%、クエン酸ナトリウム0.05%)5
mlに植菌して、30℃にて14時間培養し、各菌株の
生育度を調べた。その結果は第1表に示すとおりである
。
、酵母エキス0.5%、塩化ナトリウム0.5%、PH
7,5)を用いて30℃で6時間振盪培養し、生育した
菌体を集菌し生理食塩水でよく洗浄した。この菌体懸濁
液を、5−フルオロトリプトファン0.1.5.25m
Mの濃度でそれぞれ含む最少培地(培地組成ニゲルコー
ス0.2%、硫安0.1%、リン酸第1カリウム0.2
%、リン酸第2カリウム0.7%、硫酸マグネシウム7
水和物0.01%、クエン酸ナトリウム0.05%)5
mlに植菌して、30℃にて14時間培養し、各菌株の
生育度を調べた。その結果は第1表に示すとおりである
。
本発明方法で使用する5−フルオロトリプトファン耐性
変異株シトロバクタ−・フロインディーFTR66−5
5は、親株のシトロバクタ−・70インデイ−IF01
3545と比較して、5−フルオロトリプトファンによ
って生育が阻害されず、5−フルオロトリプトファンに
対する耐性を獲得していることが明らかである。
変異株シトロバクタ−・フロインディーFTR66−5
5は、親株のシトロバクタ−・70インデイ−IF01
3545と比較して、5−フルオロトリプトファンによ
って生育が阻害されず、5−フルオロトリプトファンに
対する耐性を獲得していることが明らかである。
第 1 表
※)培養液の660nmにおける濁度を測定し、各菌株
の5−フルオロトリプトファンを添加していない培養液
の濁度を100%として表わした。
の5−フルオロトリプトファンを添加していない培養液
の濁度を100%として表わした。
実施例1
下記の組成の発酵用培地40m1を1j容三角フラスコ
に入れ、115℃で15分蒸気滅菌した。これに第2表
に示す菌株を一白金耳植菌し、30℃で96時間回転振
盪培養した。
に入れ、115℃で15分蒸気滅菌した。これに第2表
に示す菌株を一白金耳植菌し、30℃で96時間回転振
盪培養した。
発酵用培地組成
グルコース 10%
(NH4)2304 2.5%KH2PO40
,04% Mg5O+ ・7H200,04% Fe SO4・7H20101)ElllMnCj 4
・4H207p1)n 培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去した液中のL
−フェニルアラニン濃度をロイコノストック・メセンテ
ロイデスATCC8042を用いる微生物定量法で定量
したところ第2表に示すような結果を得た。
,04% Mg5O+ ・7H200,04% Fe SO4・7H20101)ElllMnCj 4
・4H207p1)n 培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去した液中のL
−フェニルアラニン濃度をロイコノストック・メセンテ
ロイデスATCC8042を用いる微生物定量法で定量
したところ第2表に示すような結果を得た。
第 2 表
また、発酵終了後の液を強酸性陽イオン交換樹脂1′ダ
イヤイオン” 5K−104(Hu)(三菱化成社製)
にとおし、し−フェニルアラニンを吸着させ、該樹脂を
水洗後、0.5 Nアンモニア水で溶出した溶出液を濃
縮し、活性炭処理して脱色し冷却後、培養液1ぶあたり
0.17gのL−フェニルアラニンの結晶を得た。
イヤイオン” 5K−104(Hu)(三菱化成社製)
にとおし、し−フェニルアラニンを吸着させ、該樹脂を
水洗後、0.5 Nアンモニア水で溶出した溶出液を濃
縮し、活性炭処理して脱色し冷却後、培養液1ぶあたり
0.17gのL−フェニルアラニンの結晶を得た。
〈発明の効果〉
本発明の方法によれば、高価な前駆体を使用することな
く、かつし−フェニルアラニンを著量蓄積せしめること
ができるなめ、工業的に極めて有利である。
く、かつし−フェニルアラニンを著量蓄積せしめること
ができるなめ、工業的に極めて有利である。
Claims (1)
- シトロバクター(Citrobacter)属に属し、
トリプトファン代謝拮抗物質に耐性を有し、かつL−フ
ェニルアラニン生産能を有する微生物を液体培地中で好
気的に培養してL−フエニルアラニンを培養液中に生成
・蓄積せしめ、該培養液よりL−フェニルアラニンを採
取することを特徴とする発酵法によるL−フェニルアラ
ニンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP25048287A JPH0191791A (ja) | 1987-10-02 | 1987-10-02 | 発酵法によるl−フェニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP25048287A JPH0191791A (ja) | 1987-10-02 | 1987-10-02 | 発酵法によるl−フェニルアラニンの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0191791A true JPH0191791A (ja) | 1989-04-11 |
Family
ID=17208512
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP25048287A Pending JPH0191791A (ja) | 1987-10-02 | 1987-10-02 | 発酵法によるl−フェニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0191791A (ja) |
-
1987
- 1987-10-02 JP JP25048287A patent/JPH0191791A/ja active Pending
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