JPH067182A - 発酵法によるｌ−リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−リジンの製造法Info
- Publication number
- JPH067182A JPH067182A JP3123285A JP12328591A JPH067182A JP H067182 A JPH067182 A JP H067182A JP 3123285 A JP3123285 A JP 3123285A JP 12328591 A JP12328591 A JP 12328591A JP H067182 A JPH067182 A JP H067182A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lysine
- strain
- producing
- acyl
- methylated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/84—Brevibacterium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/843—Corynebacterium
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 発酵法によるＬ−リジンの製造法におい
て、Ｌ−リジン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生
産能をさらに高め発酵収率を向上させ、従来法より安価
かつ効率的なＬ−リジンの製造法を提供する。 【構成】 アシルリジン及び／またはメチル化アシル
リジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生産能を有する
ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属
する微生物を用いた発酵法によるＬ−リジンの製造法。 【効果】 本発明の製造法により、高蓄積かつ高収率
でＬ−リジンを得ることができ、Ｌ−リジンの工業生産
において大幅なコストダウンが期待できる。
て、Ｌ−リジン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生
産能をさらに高め発酵収率を向上させ、従来法より安価
かつ効率的なＬ−リジンの製造法を提供する。 【構成】 アシルリジン及び／またはメチル化アシル
リジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生産能を有する
ブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属
する微生物を用いた発酵法によるＬ−リジンの製造法。 【効果】 本発明の製造法により、高蓄積かつ高収率
でＬ−リジンを得ることができ、Ｌ−リジンの工業生産
において大幅なコストダウンが期待できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】Ｌ−リジンは、コーン等の飼料用
穀物中に不足しているため、ブロイラーや豚用の飼料に
添加物として用いられる重要なアミノ酸である。本発明
は発酵法によるＬ−リジンの製造法に関するものであ
る。
穀物中に不足しているため、ブロイラーや豚用の飼料に
添加物として用いられる重要なアミノ酸である。本発明
は発酵法によるＬ−リジンの製造法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】従来から知られている発酵法によるＬ−
リジンの製造法は、自然界から分離されたブレビバクテ
リウム属やコリネバクテリウム属等に属する微生物（以
下、野生株と記す）に、ホモセリン要求性、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等のＬ−リジン生産能獲得に必要な性質を
付与し、これを糖や窒素源を含む培地に培養し、培養液
中に生成蓄積したＬ−リジンを樹脂吸着法等により採取
するものである。さらには、これらのＬ−リジン生産菌
の改良株（例えば、Ｌ−アラニン要求性株、フルオロピ
ルビン酸感受性株、Ｌ−ロイシンアナログ耐性株等）を
用いた製造法も検討されているが、Ｌ−リジンの発酵収
率はなお満足のいくものではなく、Ｌ−リジン生産能を
さらに高め発酵収率を向上させたＬ−リジン生産菌また
はその改良株を用いた、従来法より安価かつ効率的なＬ
−リジンの製造法の開発が望まれていた。
リジンの製造法は、自然界から分離されたブレビバクテ
リウム属やコリネバクテリウム属等に属する微生物（以
下、野生株と記す）に、ホモセリン要求性、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等のＬ−リジン生産能獲得に必要な性質を
付与し、これを糖や窒素源を含む培地に培養し、培養液
中に生成蓄積したＬ−リジンを樹脂吸着法等により採取
するものである。さらには、これらのＬ−リジン生産菌
の改良株（例えば、Ｌ−アラニン要求性株、フルオロピ
ルビン酸感受性株、Ｌ−ロイシンアナログ耐性株等）を
用いた製造法も検討されているが、Ｌ−リジンの発酵収
率はなお満足のいくものではなく、Ｌ−リジン生産能を
さらに高め発酵収率を向上させたＬ−リジン生産菌また
はその改良株を用いた、従来法より安価かつ効率的なＬ
−リジンの製造法の開発が望まれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Ｌ−
リジン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさ
らに高め発酵収率を向上させることにより、従来法より
安価かつ効率的なＬ−リジンの製造法を提供することで
ある。
リジン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさ
らに高め発酵収率を向上させることにより、従来法より
安価かつ効率的なＬ−リジンの製造法を提供することで
ある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｌ−リジ
ン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさらに
高め発酵収率を向上させるために鋭意研究を重ねた結
果、アシルリジン及び／またはメチル化アシルリジンに
対する耐性を付与されたＬ−リジン生産性の変異株が、
その目的に適合しうる事を見い出し、この知見に基づい
て本発明を完成させるに至った。
ン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさらに
高め発酵収率を向上させるために鋭意研究を重ねた結
果、アシルリジン及び／またはメチル化アシルリジンに
対する耐性を付与されたＬ−リジン生産性の変異株が、
その目的に適合しうる事を見い出し、この知見に基づい
て本発明を完成させるに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、アシルリジン及び／
またはメチル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−
リジン生産能を有するブレビバクテリウム属またはコリ
ネバクテリウム属に属する微生物を培養し、培養液中に
生成蓄積したＬ−リジンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−リジンの製造法を提供するものである。
またはメチル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−
リジン生産能を有するブレビバクテリウム属またはコリ
ネバクテリウム属に属する微生物を培養し、培養液中に
生成蓄積したＬ−リジンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−リジンの製造法を提供するものである。
【０００６】本発明において使用するアシルリジンと
は、炭素数５から２０の鎖長の脂肪酸がＬ体またはＤＬ
体のリジンのα位及び／またはε位のアミノ基にアシル
結合した化合物を言う。このようなものとしては、例え
ば、Ｎα−ステアロイル−Ｌ−リジン、Ｎε−デカノイ
ル−Ｌ−リジン、Ｎε−ミリストイル−Ｌ−リジン、Ｎ
ε−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジオクタ
ノイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジラウロイル−Ｌ−
リジン等がある。また、メチル化アシルリジンとはアシ
ルリジンのα位のアミノ基がメチル化された化合物を言
う。メチル化の数は１〜３のいずれでも良い。このよう
なものとしては、例えば、Ｎα−メチル−Ｎε−ステア
ロイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε−デ
カノイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε
−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα、Ｎα−トリ
メチル−Ｎε−ミリストイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎ
α、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リ
ジン等がある。
は、炭素数５から２０の鎖長の脂肪酸がＬ体またはＤＬ
体のリジンのα位及び／またはε位のアミノ基にアシル
結合した化合物を言う。このようなものとしては、例え
ば、Ｎα−ステアロイル−Ｌ−リジン、Ｎε−デカノイ
ル−Ｌ−リジン、Ｎε−ミリストイル−Ｌ−リジン、Ｎ
ε−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジオクタ
ノイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジラウロイル−Ｌ−
リジン等がある。また、メチル化アシルリジンとはアシ
ルリジンのα位のアミノ基がメチル化された化合物を言
う。メチル化の数は１〜３のいずれでも良い。このよう
なものとしては、例えば、Ｎα−メチル−Ｎε−ステア
ロイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε−デ
カノイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε
−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα、Ｎα−トリ
メチル−Ｎε−ミリストイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎ
α、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リ
ジン等がある。
【０００７】本発明において使用する変異株は、ブレビ
バクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属し、２
５ｍｇ／ｌの濃度のアシルリジンの存在下及び／または
２５ｍｇ／ｌの濃度のメチル化アシルリジン存在下でも
生育可能な性質を持ち、さらに従来のＬ−リジン生産能
獲得のために必要な性質（ホモセリン要求、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等）を有しているものである。具体的に例
示すれば、以下のものがある。
バクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属し、２
５ｍｇ／ｌの濃度のアシルリジンの存在下及び／または
２５ｍｇ／ｌの濃度のメチル化アシルリジン存在下でも
生育可能な性質を持ち、さらに従来のＬ−リジン生産能
獲得のために必要な性質（ホモセリン要求、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等）を有しているものである。具体的に例
示すれば、以下のものがある。
【０００８】 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２５９２ （ＦＥＲＭ ＢＰ−３２３９） ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２５９３ （ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４０） コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＪ１２５９６ （ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４２）
【０００９】この様な変異株を得る際に使用される親株
としては、すでにＬ−リジンを生産することが知られて
いるブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属
の変異株が用いられる。さらに以下に例示するような野
生株も親株として使用できる。
としては、すでにＬ−リジンを生産することが知られて
いるブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属
の変異株が用いられる。さらに以下に例示するような野
生株も親株として使用できる。
【００１０】 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ １３８６９ ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ １４０６７ ブレビバクテリウム・ディバリカタム ＡＴＣＣ １４０２０ コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ １３０３２ コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ＡＴＣＣ １３８７０ コリネバクテリウム・アセトグルタミクム ＡＴＣＣ １５８０６
【００１１】これらの野生株に先にＬ−リジン生産能を
付与してもよいが、先にアシルリジン及び／またはメチ
ル化アシルリジンに対する耐性を付け後でＬ−リジン生
産能を付与してもよい。
付与してもよいが、先にアシルリジン及び／またはメチ
ル化アシルリジンに対する耐性を付け後でＬ−リジン生
産能を付与してもよい。
【００１２】これらの親株を変異処理する方法は、Ｎ−
メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以
下、ＮＧと記す）に接触せしめる等の通常の方法が適用
できる。また、これらの変異株よりアシルリジン及び／
またはメチル化アシルリジン耐性株を選別するには、親
株では生育出来ない濃度のアシルリジンまたはメチル化
アシルリジンを含有する培地で生育してくる株を採取す
る方法が採用できる。この耐性株の取得のより具体的な
実験例を以下に示す。
メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以
下、ＮＧと記す）に接触せしめる等の通常の方法が適用
できる。また、これらの変異株よりアシルリジン及び／
またはメチル化アシルリジン耐性株を選別するには、親
株では生育出来ない濃度のアシルリジンまたはメチル化
アシルリジンを含有する培地で生育してくる株を採取す
る方法が採用できる。この耐性株の取得のより具体的な
実験例を以下に示す。
【００１３】Ｌ−リジン生産菌であるブレビバクテリウ
ム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２４３５（ＦＥＲＭ
ＢＰ−２２９４）を２５０μｇ／ｍｌのＮＧで３０℃
にて３０分間処理した後、生残率１．０％の当該菌体
を、アシルリジンの１種であるＮα、Ｎε−ジオクタノ
イル−Ｌ−リジンを５０ｍｇ／ｌ含む表１に示す最少培
地の寒天平板培地に播種し、３０℃で１週間培養し、生
育したコロニーを採取した。尚、培地に添加するアシル
リジンまたはメチル化アシルリジンの濃度は使用する親
株の最少生育阻止濃度により適宜検討し、目的の耐性株
が効率よく採取出来るよう設定する。ここで得られた耐
性株の内の１株がブレビバクテリウム・ラクトフェルメ
ンタムＡＪ１２５９２（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２３９）で
あり、さらに以下の実験に供した。同様に、Ｎα、
Ｎα、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−
リジン耐性株としてブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタムＡＪ１２５９３（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４０）
を取得した。
ム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２４３５（ＦＥＲＭ
ＢＰ−２２９４）を２５０μｇ／ｍｌのＮＧで３０℃
にて３０分間処理した後、生残率１．０％の当該菌体
を、アシルリジンの１種であるＮα、Ｎε−ジオクタノ
イル−Ｌ−リジンを５０ｍｇ／ｌ含む表１に示す最少培
地の寒天平板培地に播種し、３０℃で１週間培養し、生
育したコロニーを採取した。尚、培地に添加するアシル
リジンまたはメチル化アシルリジンの濃度は使用する親
株の最少生育阻止濃度により適宜検討し、目的の耐性株
が効率よく採取出来るよう設定する。ここで得られた耐
性株の内の１株がブレビバクテリウム・ラクトフェルメ
ンタムＡＪ１２５９２（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２３９）で
あり、さらに以下の実験に供した。同様に、Ｎα、
Ｎα、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−
リジン耐性株としてブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタムＡＪ１２５９３（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４０）
を取得した。
【表１】
【００１４】また、コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＪ３４６３（ＦＥＲＭ−Ｐ１９８７）を親株とし
て、同様な操作によりＮα、Ｎα、Ｎα−トリメチル−
Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リジン耐性株としてコリネ
バクテリウム・グルタミクムＡＪ１２５９６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−３２４２）を取得することが出来た。
ＡＪ３４６３（ＦＥＲＭ−Ｐ１９８７）を親株とし
て、同様な操作によりＮα、Ｎα、Ｎα−トリメチル−
Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リジン耐性株としてコリネ
バクテリウム・グルタミクムＡＪ１２５９６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−３２４２）を取得することが出来た。
【００１５】この様にして得られた各耐性株のアシルリ
ジンまたはメチル化アシルリジンに対する耐性度につい
ては次のようにして測定し、親株と比較した。表２に示
す培地にアシルリジンまたはメチル化アシルリジンを各
濃度添加し、その４ｍｌを小型試験管に分注し、殺菌後
試験菌株を接種した。３０℃にて２４時間培養した後、
波長５６２ｎｍにおける濁度を測定し、アシルリジンま
たはメチル化アシルリジン無添加の培地での値に対する
相対生育度を算出した。その結果を表３に示す。２５ｍ
ｇ／ｌ濃度のアシルリジンまたはメチル化アシルリジン
存在下で、本発明の変異株は良好な生育を示すのに対
し、親株はアシルリジンまたはメチル化アシルリジン無
添加培地の１０％以下という非常に弱い生育しか示さな
い。このように本発明の変異株はアシルリジンまたはメ
チル化アシルリジン耐性を有する点で親株と明確に区別
することができる。
ジンまたはメチル化アシルリジンに対する耐性度につい
ては次のようにして測定し、親株と比較した。表２に示
す培地にアシルリジンまたはメチル化アシルリジンを各
濃度添加し、その４ｍｌを小型試験管に分注し、殺菌後
試験菌株を接種した。３０℃にて２４時間培養した後、
波長５６２ｎｍにおける濁度を測定し、アシルリジンま
たはメチル化アシルリジン無添加の培地での値に対する
相対生育度を算出した。その結果を表３に示す。２５ｍ
ｇ／ｌ濃度のアシルリジンまたはメチル化アシルリジン
存在下で、本発明の変異株は良好な生育を示すのに対
し、親株はアシルリジンまたはメチル化アシルリジン無
添加培地の１０％以下という非常に弱い生育しか示さな
い。このように本発明の変異株はアシルリジンまたはメ
チル化アシルリジン耐性を有する点で親株と明確に区別
することができる。
【表２】
【表３】
【００１６】これらの耐性株を用いてＬ−リジンを生産
せしめるには、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子及
び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する通常の
栄養培地を用いて常法により行うことが出来る。炭素源
としては、グルコース、シュクロース、糖蜜、デンプン
加水分解液などの糖類、酢酸、プロピオン酸などの有機
酸類、エタノール、プロパノールなどのアルコール類な
どが使用できる。窒素源としては、硫安、硝安、塩安、
尿素、アンモニアなどを使用できる。
せしめるには、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子及
び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する通常の
栄養培地を用いて常法により行うことが出来る。炭素源
としては、グルコース、シュクロース、糖蜜、デンプン
加水分解液などの糖類、酢酸、プロピオン酸などの有機
酸類、エタノール、プロパノールなどのアルコール類な
どが使用できる。窒素源としては、硫安、硝安、塩安、
尿素、アンモニアなどを使用できる。
【００１７】培養方法は、発酵温度２４〜３７℃、好ま
しくは３０〜３４℃で通気培養を行い、発酵日数は通常
２〜７日である。培養開始時及び培養中のｐＨは５．０
〜８．５、好ましくは６．０〜７．５が良く、ｐＨの調
整には無機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物
質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガスなど
を使用することができる。
しくは３０〜３４℃で通気培養を行い、発酵日数は通常
２〜７日である。培養開始時及び培養中のｐＨは５．０
〜８．５、好ましくは６．０〜７．５が良く、ｐＨの調
整には無機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物
質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガスなど
を使用することができる。
【００１８】培養終了後の発酵液からのＬ−リジンの採
取は、イオン交換樹脂法、晶析法等の従来からの公知の
方法及びその組合せにより行うことが出来る。
取は、イオン交換樹脂法、晶析法等の従来からの公知の
方法及びその組合せにより行うことが出来る。
【００１９】
【実施例】次に、実施例によってこの発明をさらに詳細
に説明する。
に説明する。
【００２０】
【実施例１】グルコース３６ｇ／ｌ、塩化アンモニウム
２０ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２Ｏ４００ｍｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１０ｍｇ／
ｌ、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ８ｍｇ／ｌ、大豆蛋白質加水
分解物（窒素として）３ｍｇ／ｌ、サイアミン塩酸塩
０．１ｍｇ／ｌ、及びビオチン０．３ｍｇ／ｌを含有す
る培地（ｐＨ７．０）を５００ｍｌ容振とうフラスコに
２０ｍｌずつ分注した。１１５℃で１０分間加熱殺菌
後、予め１８０℃で２時間乾熱滅菌した炭酸カルシウム
１ｇを加えた。この培地に各菌株を接種し、３１．５℃
で４８時間振とう培養した。培養液中に蓄積したＬ−リ
ジンを、酸性−銅ニンヒドリン発色法により定量した結
果を表４に示す。いずれの耐性株においても、親株に比
較して顕著なＬ−リジン蓄積の増大が認められた。
２０ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ
２Ｏ４００ｍｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１０ｍｇ／
ｌ、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ８ｍｇ／ｌ、大豆蛋白質加水
分解物（窒素として）３ｍｇ／ｌ、サイアミン塩酸塩
０．１ｍｇ／ｌ、及びビオチン０．３ｍｇ／ｌを含有す
る培地（ｐＨ７．０）を５００ｍｌ容振とうフラスコに
２０ｍｌずつ分注した。１１５℃で１０分間加熱殺菌
後、予め１８０℃で２時間乾熱滅菌した炭酸カルシウム
１ｇを加えた。この培地に各菌株を接種し、３１．５℃
で４８時間振とう培養した。培養液中に蓄積したＬ−リ
ジンを、酸性−銅ニンヒドリン発色法により定量した結
果を表４に示す。いずれの耐性株においても、親株に比
較して顕著なＬ−リジン蓄積の増大が認められた。
【表４】
【００２１】
【実施例２】廃糖蜜を糖として８０ｇ／ｌ、硫酸アンモ
ニウム５０ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／１、ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２Ｏ１ｇ／ｌ、大豆蛋白質加水分解物（窒素とし
て）１０ｍｇ／ｌ、サイアミン塩酸塩０．１ｍｇ／ｌ、
及びビオチン０．３ｍｇ／ｌを含有する培地（ｐＨ７．
０）を、５００ｍｌ容振とうフラスコに２０ｍｌづつ分
注した。１２０℃で１０分間加熱殺菌後、予め１８０℃
で２時間乾熱滅菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。こ
の培地に各菌株を接種し、３１．５℃で７２時間振とう
培養した。培養液中に蓄積したＬ−リジンを測定した結
果を表５に示す。いずれの耐性株においても、親株に比
較して顕著なＬ−リジン蓄積の増大が認められた。
ニウム５０ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／１、ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２Ｏ１ｇ／ｌ、大豆蛋白質加水分解物（窒素とし
て）１０ｍｇ／ｌ、サイアミン塩酸塩０．１ｍｇ／ｌ、
及びビオチン０．３ｍｇ／ｌを含有する培地（ｐＨ７．
０）を、５００ｍｌ容振とうフラスコに２０ｍｌづつ分
注した。１２０℃で１０分間加熱殺菌後、予め１８０℃
で２時間乾熱滅菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。こ
の培地に各菌株を接種し、３１．５℃で７２時間振とう
培養した。培養液中に蓄積したＬ−リジンを測定した結
果を表５に示す。いずれの耐性株においても、親株に比
較して顕著なＬ−リジン蓄積の増大が認められた。
【表５】
【００２２】
【発明の効果】本発明の、アシルリジン及び／またはメ
チル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生
産能を有する微生物を用いた製造法により、高蓄積かつ
高収率でＬ−リジンを生産することができ、Ｌ−リジン
の工業生産において大幅なコストダウンが期待できる。
チル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生
産能を有する微生物を用いた製造法により、高蓄積かつ
高収率でＬ−リジンを生産することができ、Ｌ−リジン
の工業生産において大幅なコストダウンが期待できる。
【手続補正書】
【提出日】平成４年４月１６日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の詳細な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】Ｌ−リジンは、コーン等の飼料用
穀物中に不足しているため、ブロイラーや豚用の飼料に
添加物として用いられる重要なアミノ酸である。本発明
は発酵法によるＬ−リジンの製造法に関するものであ
る。
穀物中に不足しているため、ブロイラーや豚用の飼料に
添加物として用いられる重要なアミノ酸である。本発明
は発酵法によるＬ−リジンの製造法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】従来から知られている発酵法によるＬ−
リジンの製造法は、自然界から分離されたブレビバクテ
リウム属やコリネバクテリウム属等に属する微生物（以
下、野生株と記す）に、ホモセリン要求性、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等のＬ−リジン生産能獲得に必要な性質を
付与し、これを糖や窒素源を含む培地に培養し、培養液
中に生成蓄積したＬ−リジンを樹脂吸着法等により採取
するものである。さらには、これらのＬ−リジン生産菌
の改良株（例えば、Ｌ−アラニン要求性株、フルオロピ
ルビン酸感受性株、Ｌ−ロイシンアナログ耐性株等）を
用いた製造法も検討されているが、Ｌ−リジンの発酵収
率はなお満足のいくものではなく、Ｌ−リジン生産能を
さらに高め発酵収率を向上させたＬ−リジン生産菌また
はその改良株を用いた、従来法より安価かつ効率的なＬ
−リジンの製造法の開発が望まれていた。
リジンの製造法は、自然界から分離されたブレビバクテ
リウム属やコリネバクテリウム属等に属する微生物（以
下、野生株と記す）に、ホモセリン要求性、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等のＬ−リジン生産能獲得に必要な性質を
付与し、これを糖や窒素源を含む培地に培養し、培養液
中に生成蓄積したＬ−リジンを樹脂吸着法等により採取
するものである。さらには、これらのＬ−リジン生産菌
の改良株（例えば、Ｌ−アラニン要求性株、フルオロピ
ルビン酸感受性株、Ｌ−ロイシンアナログ耐性株等）を
用いた製造法も検討されているが、Ｌ−リジンの発酵収
率はなお満足のいくものではなく、Ｌ−リジン生産能を
さらに高め発酵収率を向上させたＬ−リジン生産菌また
はその改良株を用いた、従来法より安価かつ効率的なＬ
−リジンの製造法の開発が望まれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Ｌ−
リジン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさ
らに高め発酵収率を向上させることにより、従来法より
安価かつ効率的なＬ−リジンの製造法を提供することで
ある。
リジン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさ
らに高め発酵収率を向上させることにより、従来法より
安価かつ効率的なＬ−リジンの製造法を提供することで
ある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｌ−リジ
ン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさらに
高め発酵収率を向上させるために鋭意研究を重ねた結
果、アシルリジン及び／またはメチル化アシルリジンに
対する耐性を付与されたＬ−リジン生産性の変異株が、
その目的に適合しうる事を見い出し、この知見に基づい
て本発明を完成させるに至った。
ン生産菌またはその改良株のＬ−リジン生産能をさらに
高め発酵収率を向上させるために鋭意研究を重ねた結
果、アシルリジン及び／またはメチル化アシルリジンに
対する耐性を付与されたＬ−リジン生産性の変異株が、
その目的に適合しうる事を見い出し、この知見に基づい
て本発明を完成させるに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、アシルリジン及び／
またはメチル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−
リジン生産能を有するブレビバクテリウム属またはコリ
ネバクテリウム属に属する微生物を培養し、培養液中に
生成蓄積したＬ−リジンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−リジンの製造法を提供するものである。
またはメチル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−
リジン生産能を有するブレビバクテリウム属またはコリ
ネバクテリウム属に属する微生物を培養し、培養液中に
生成蓄積したＬ−リジンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−リジンの製造法を提供するものである。
【０００６】本発明において使用するアシルリジンと
は、炭素数５から２０の鎖長の脂肪酸がＬ体またはＤＬ
体のリジンのα位及び／またはε位のアミノ基にアシル
結合した化合物を言う。このようなものとしては、例え
ば、Ｎα−ステアロイル−Ｌ−リジン、Ｎε−デカノイ
ル−Ｌ−リジン、Ｎε−ミリストイル−Ｌ−リジン、Ｎ
ε−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジオクタ
ノイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジラウロイル−Ｌ−
リジン等がある。また、メチル化アシルリジンとはアシ
ルリジンのα位のアミノ基がメチル化された化合物を言
う。メチル化の数は１〜３のいずれでも良い。このよう
なものとしては、例えば、Ｎα−メチル−Ｎε−ステア
ロイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε−デ
カノイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε
−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα、Ｎα−トリ
メチル−Ｎε−ミリストイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎ
α、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リ
ジン等がある。
は、炭素数５から２０の鎖長の脂肪酸がＬ体またはＤＬ
体のリジンのα位及び／またはε位のアミノ基にアシル
結合した化合物を言う。このようなものとしては、例え
ば、Ｎα−ステアロイル−Ｌ−リジン、Ｎε−デカノイ
ル−Ｌ−リジン、Ｎε−ミリストイル−Ｌ−リジン、Ｎ
ε−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジオクタ
ノイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎε−ジラウロイル−Ｌ−
リジン等がある。また、メチル化アシルリジンとはアシ
ルリジンのα位のアミノ基がメチル化された化合物を言
う。メチル化の数は１〜３のいずれでも良い。このよう
なものとしては、例えば、Ｎα−メチル−Ｎε−ステア
ロイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε−デ
カノイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎα−ジメチル−Ｎε
−パルミトイル−Ｌ−リジン、Ｎα、Ｎα、Ｎα−トリ
メチル−Ｎε−ミリストイル−ＤＬ−リジン、Ｎα、Ｎ
α、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リ
ジン等がある。
【０００７】本発明において使用する変異株は、ブレビ
バクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属し、２
５ｍｇ／ｌの濃度のアシルリジンの存在下及び／または
２５ｍｇ／ｌの濃度のメチル化アシルリジン存在下でも
生育可能な性質を持ち、さらに従来のＬ−リジン生産能
獲得のために必要な性質（ホモセリン要求、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等）を有しているものである。具体的に例
示すれば、以下のものがある。
バクテリウム属またはコリネバクテリウム属に属し、２
５ｍｇ／ｌの濃度のアシルリジンの存在下及び／または
２５ｍｇ／ｌの濃度のメチル化アシルリジン存在下でも
生育可能な性質を持ち、さらに従来のＬ−リジン生産能
獲得のために必要な性質（ホモセリン要求、Ｓ−（２−
アミノエチル）−Ｌ−システイン耐性、α−クロロカプ
ラクタム耐性等）を有しているものである。具体的に例
示すれば、以下のものがある。
【０００８】 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２５９２ （ＦＥＲＭ ＢＰ−３２３９） ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２５９３ （ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４０） コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＪ１２５９６ （ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４２）
【０００９】この様な変異株を得る際に使用される親株
としては、すでにＬ−リジンを生産することが知られて
いるブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属
の変異株が用いられる。さらに以下に例示するような野
生株も親株として使用できる。
としては、すでにＬ−リジンを生産することが知られて
いるブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属
の変異株が用いられる。さらに以下に例示するような野
生株も親株として使用できる。
【００１０】 ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＴＣＣ １３８６９ ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ １４０６７ ブレビバクテリウム・ディバリカタム ＡＴＣＣ １４０２０ コリネバクテリウム・グルタミクム ＡＴＣＣ １３０３２ コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム ＡＴＣＣ １３８７０ コリネバクテリウム・アセトグルタミクム ＡＴＣＣ １５８０６
【００１１】これらの野生株に先にＬ−リジン生産能を
付与した後アシルリジン及び／またはメチル化アシルリ
ジンに対する耐性を付けてもよいが、先にアシルリジン
及び／またはメチル化アシルリジンに対する耐性を付け
後でＬ−リジン生産能を付与してもよい。
付与した後アシルリジン及び／またはメチル化アシルリ
ジンに対する耐性を付けてもよいが、先にアシルリジン
及び／またはメチル化アシルリジンに対する耐性を付け
後でＬ−リジン生産能を付与してもよい。
【００１２】これらの親株を変異処理する方法は、Ｎ−
メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以
下、ＮＧと記す）に接触せしめる等の通常の方法が適用
できる。また、これらの変異株よりアシルリジン及び／
またはメチル化アシルリジン耐性株を選別するには、親
株では生育できない濃度のアシルリジンまたはメチル化
アシルリジンを含有する培地で生育してくる株を採取す
る方法が採用できる。この耐性株の取得のより具体的な
実験例を以下に示す。
メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以
下、ＮＧと記す）に接触せしめる等の通常の方法が適用
できる。また、これらの変異株よりアシルリジン及び／
またはメチル化アシルリジン耐性株を選別するには、親
株では生育できない濃度のアシルリジンまたはメチル化
アシルリジンを含有する培地で生育してくる株を採取す
る方法が採用できる。この耐性株の取得のより具体的な
実験例を以下に示す。
【００１３】Ｌ−リジン生産菌であるブレビバクテリウ
ム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２４３５（ＦＥＲＭ
ＢＰ−２２９４）を２５０μｇ／ｍｌのＮＧで３０℃
にて３０分間処理した後、生残率１．０％の当該菌体
を、アシルリジンの１種であるＮα、Ｎε−ジオクタノ
イル−Ｌ−リジンを５０ｍｇ／ｌ含む表１に示す最少培
地の寒天平板培地に播種し、３０℃で１週間培養し、生
育したコロニーを採取した。尚、培地に添加するアシル
リジンまたはメチル化アシルリジンの濃度は使用する親
株の最少生育阻止濃度により適宜検討し、目的の耐性株
が効率よく採取出来るよう設定する。ここで得られた耐
性株の内の１株がブレビバクテリウム・ラクトフェルメ
ンタムＡＪ１２５９２（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２３９）で
あり、さらに以下の実験に供した。同様に、Ｎα、
Ｎα、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−
リジン耐性株としてブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタムＡＪ１２５９３（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４０）
を取得した。
ム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２４３５（ＦＥＲＭ
ＢＰ−２２９４）を２５０μｇ／ｍｌのＮＧで３０℃
にて３０分間処理した後、生残率１．０％の当該菌体
を、アシルリジンの１種であるＮα、Ｎε−ジオクタノ
イル−Ｌ−リジンを５０ｍｇ／ｌ含む表１に示す最少培
地の寒天平板培地に播種し、３０℃で１週間培養し、生
育したコロニーを採取した。尚、培地に添加するアシル
リジンまたはメチル化アシルリジンの濃度は使用する親
株の最少生育阻止濃度により適宜検討し、目的の耐性株
が効率よく採取出来るよう設定する。ここで得られた耐
性株の内の１株がブレビバクテリウム・ラクトフェルメ
ンタムＡＪ１２５９２（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２３９）で
あり、さらに以下の実験に供した。同様に、Ｎα、
Ｎα、Ｎα−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−
リジン耐性株としてブレビバクテリウム・ラクトフェル
メンタムＡＪ１２５９３（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２４０）
を取得した。
【００１４】
【表１】
【００１５】また、コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＪ３４６３（ＦＥＲＭ−Ｐ１９８７）を親株とし
て、同様な操作によりＮα、Ｎε−ジオクタノイル−Ｌ
−リジン耐性株としてコリネバクテリウム・グルタミク
ム ＡＪ１２５９６（ＦＥＲＭＢＰ−３２４２）を取得
することが出来た。
ＡＪ３４６３（ＦＥＲＭ−Ｐ１９８７）を親株とし
て、同様な操作によりＮα、Ｎε−ジオクタノイル−Ｌ
−リジン耐性株としてコリネバクテリウム・グルタミク
ム ＡＪ１２５９６（ＦＥＲＭＢＰ−３２４２）を取得
することが出来た。
【００１６】この様にして得られた各耐性株のアシルリ
ジンまたはメチル化アシルリジンに対する耐性度につい
ては次のようにして測定し、親株と比較した。表２に示
す培地にアシルリジンまたはメチル化アシルリジンを各
濃度添加し、その４ｍｌを小型試験管に分注し、殺菌後
試験菌株を接種した。３０℃にて２４時間培養した後、
波長５６２ｎｍにおける濁度を測定し、アシルリジンま
たはメチル化アシルリジン無添加の培地での値に対する
相対生育度を算出した。その結果を表３に示す。２５ｍ
ｇ／ｌ濃度のアシルリジンまたはメチル化アシルリジン
存在下で、本発明の変異株は良好な生育を示すのに対
し、親株はアシルリジンまたはメチル化アシルリジン無
添加培地の１０％以下という非常に弱い生育しか示さな
い。このように本発明の変異株はアシルリジンまたはメ
チル化アシルリジン耐性を有する点で親株と明確に区別
することができる。
ジンまたはメチル化アシルリジンに対する耐性度につい
ては次のようにして測定し、親株と比較した。表２に示
す培地にアシルリジンまたはメチル化アシルリジンを各
濃度添加し、その４ｍｌを小型試験管に分注し、殺菌後
試験菌株を接種した。３０℃にて２４時間培養した後、
波長５６２ｎｍにおける濁度を測定し、アシルリジンま
たはメチル化アシルリジン無添加の培地での値に対する
相対生育度を算出した。その結果を表３に示す。２５ｍ
ｇ／ｌ濃度のアシルリジンまたはメチル化アシルリジン
存在下で、本発明の変異株は良好な生育を示すのに対
し、親株はアシルリジンまたはメチル化アシルリジン無
添加培地の１０％以下という非常に弱い生育しか示さな
い。このように本発明の変異株はアシルリジンまたはメ
チル化アシルリジン耐性を有する点で親株と明確に区別
することができる。
【００１７】
【表２】
【００１８】
【表３】
【００１９】これらの耐性株を用いてＬ−リジンを生産
せしめるには、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子及
び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する通常の
栄養培地を用いて常法により行うことが出来る。炭素源
としては、グルコース、シュクロース、糖蜜、デンプン
加水分解液などの糖類、酢酸、プロピオン酸などの有機
酸類、エタノール、プロパノールなどのアルコール類な
どが使用できる。窒素源としては、硫安、硝安、塩安、
尿素、アンモニアなどを使用できる。
せしめるには、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子及
び使用する微生物が要求する栄養物質を含有する通常の
栄養培地を用いて常法により行うことが出来る。炭素源
としては、グルコース、シュクロース、糖蜜、デンプン
加水分解液などの糖類、酢酸、プロピオン酸などの有機
酸類、エタノール、プロパノールなどのアルコール類な
どが使用できる。窒素源としては、硫安、硝安、塩安、
尿素、アンモニアなどを使用できる。
【００２０】培養方法は、発酵温度２４〜３７℃、好ま
しくは３０〜３４℃で通気培養を行い、発酵日数は通常
２〜７日である。培養開始時及び培養中のｐＨは５．０
〜８．５、好ましくは６．０〜７．５が良く、ｐＨの調
整には無機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物
質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガスなど
を使用することができる。
しくは３０〜３４℃で通気培養を行い、発酵日数は通常
２〜７日である。培養開始時及び培養中のｐＨは５．０
〜８．５、好ましくは６．０〜７．５が良く、ｐＨの調
整には無機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物
質、更には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガスなど
を使用することができる。
【００２１】培養終了後の発酵液からのＬ−リジンの採
取は、イオン交換樹脂法、晶析法等の従来からの公知の
方法及びその組合せにより行うことが出来る。
取は、イオン交換樹脂法、晶析法等の従来からの公知の
方法及びその組合せにより行うことが出来る。
【００２２】
【実施例】次に、実施例によってこの発明をさらに詳細
に説明する。
に説明する。
【００２３】実施例１ グルコース３６ｇ／ｌ、塩化アンモニウム２０ｇ／ｌ、
ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ４００ｍ
ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１０ｍｇ／ｌ、ＭｎＳＯ
４・４Ｈ２Ｏ８ｍｇ／ｌ、大豆蛋白質加水分解物（窒素
として）３ｍｇ／ｌ、サイアミン塩酸塩０．１ｍｇ／
ｌ、及びビオチン０．３ｍｇ／ｌを含有する培地（ｐＨ
７．０）を５００ｍｌ容振とうフラスコに２０ｍｌずつ
分注した。１１５℃で１０分間加熱殺菌後、予め１８０
℃で２時間乾熱滅菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。
この培地に各菌株を接種し、３１．５℃で４８時間振と
う培養した。培養液中に蓄積したＬ−リジンを、酸性−
銅ニンヒドリン発色法により定量した結果を表４に示
す。いずれの耐性株においても、親株に比較して顕著な
Ｌ−リジン蓄積の増大が認められた。
ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ４００ｍ
ｇ／ｌ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１０ｍｇ／ｌ、ＭｎＳＯ
４・４Ｈ２Ｏ８ｍｇ／ｌ、大豆蛋白質加水分解物（窒素
として）３ｍｇ／ｌ、サイアミン塩酸塩０．１ｍｇ／
ｌ、及びビオチン０．３ｍｇ／ｌを含有する培地（ｐＨ
７．０）を５００ｍｌ容振とうフラスコに２０ｍｌずつ
分注した。１１５℃で１０分間加熱殺菌後、予め１８０
℃で２時間乾熱滅菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。
この培地に各菌株を接種し、３１．５℃で４８時間振と
う培養した。培養液中に蓄積したＬ−リジンを、酸性−
銅ニンヒドリン発色法により定量した結果を表４に示
す。いずれの耐性株においても、親株に比較して顕著な
Ｌ−リジン蓄積の増大が認められた。
【００２４】
【表４】
【００２５】実施例２ 廃糖蜜を糖として８０ｇ／ｌ、硫酸アンモニウム５０ｇ
／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１
ｇ／ｌ、大豆蛋白質加水分解物（窒素として）１０ｍｇ
／ｌ、サイアミン塩酸塩０．１ｍｇ／ｌ、及びビオチン
０．３ｍｇ／ｌを含有する培地（ｐＨ７．０）を、５０
０ｍｌ容振とうフラスコに２０ｍｌづつ分注した。１２
０℃で１０分間加熱殺菌後、予め１８０℃で２時間乾熱
滅菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。この培地に各菌
株を接種し、３１．５℃で７２時間振とう培養した。培
養液中に蓄積したＬ−リジンを測定した結果を表５に示
す。いずれの耐性株においても、親株に比較して顕著な
Ｌ−リジン蓄積の増大が認められた。
／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１
ｇ／ｌ、大豆蛋白質加水分解物（窒素として）１０ｍｇ
／ｌ、サイアミン塩酸塩０．１ｍｇ／ｌ、及びビオチン
０．３ｍｇ／ｌを含有する培地（ｐＨ７．０）を、５０
０ｍｌ容振とうフラスコに２０ｍｌづつ分注した。１２
０℃で１０分間加熱殺菌後、予め１８０℃で２時間乾熱
滅菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。この培地に各菌
株を接種し、３１．５℃で７２時間振とう培養した。培
養液中に蓄積したＬ−リジンを測定した結果を表５に示
す。いずれの耐性株においても、親株に比較して顕著な
Ｌ−リジン蓄積の増大が認められた。
【００２６】
【表５】
【００２７】
【発明の効果】本発明の、アシルリジン及び／またはメ
チル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生
産能を有する微生物を用いた製造法により、高蓄積かつ
高収率でＬ−リジンを生産することができ、Ｌ−リジン
の工業生産において大幅なコストダウンが期待できる。
チル化アシルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生
産能を有する微生物を用いた製造法により、高蓄積かつ
高収率でＬ−リジンを生産することができ、Ｌ−リジン
の工業生産において大幅なコストダウンが期待できる。
フロントページの続き (72)発明者 三輪 治文 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社中央研究所内 (72)発明者 大住 剛 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社中央研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 アシルリジン及び／またはメチル化アシ
ルリジンに耐性を有し、かつ、Ｌ−リジン生産能を有す
るブレビバクテリウム属またはコリネバクテリウム属に
属する微生物を培養し、培養液中に生成蓄積したＬ−リ
ジンを採取することを特徴とする発酵法によるＬ−リジ
ンの製造法。 - 【請求項２】 アシルリジンがＮα、Ｎε−ジオクタノ
イル−Ｌ−リジンである請求項１記載の発酵法によるＬ
−リジンの製造法。 - 【請求項３】 メチル化アシルリジンがＮα、Ｎα、Ｎ
α−トリメチル−Ｎε−パルミトイル−ＤＬ−リジンで
ある請求項１記載の発酵法によるＬ−リジンの製造法。
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3123285A JP3008549B2 (ja) | 1991-03-06 | 1991-03-06 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
| ITMI920460A IT1254486B (it) | 1991-03-06 | 1992-02-28 | Procedimento per produrre l-lisina mediante fermentazione |
| US07/845,139 US5304476A (en) | 1991-03-06 | 1992-03-03 | Process for producing l-lysine by fermentation employing a microorganism resistant to acyl-lysine or methylated acyl-lysine |
| HU9200728A HU215184B (hu) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | Eljárás L-lizin és L-lizint termelő Brevibacterium és Corynebacterium nemzetségbeli muntáns törzsek előállítására |
| KR1019920003516A KR0181297B1 (ko) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | 발효에 의한 엘-리신의 제조방법 |
| NO92920849A NO920849L (no) | 1991-03-06 | 1992-03-04 | Fremgangsmaate for fremstilling av l-lysin ved fermentasjon |
| BR929200742A BR9200742A (pt) | 1991-03-06 | 1992-03-05 | Processo para produzir i-lisina por fermentacao |
| CS92659A CS65992A3 (en) | 1991-03-06 | 1992-03-05 | Process for preparing l-lysine by fermentation |
| SK659-92A SK280783B6 (sk) | 1991-03-06 | 1992-03-05 | Spôsob výroby l-lyzínu fermentáciou |
| SU925011132A RU2099424C1 (ru) | 1991-03-06 | 1992-03-05 | Способ получения l-лизина посредством культивирования штамма бактерий |
| MX9200977A MX9200977A (es) | 1991-03-06 | 1992-03-05 | Proceso para producir l-lisina por fermentacion. |
| FR9202743A FR2673645A1 (fr) | 1991-03-06 | 1992-03-06 | Procede pour la production de l-lysine par fermentation. |
| DE4207154A DE4207154C2 (de) | 1991-03-06 | 1992-03-06 | Verfahren zur Herstellung von L-Lysin durch Fermentation |
| KR1019980034538A KR100187607B1 (ko) | 1991-03-06 | 1998-08-26 | 발효에의한l-리신의제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3123285A JP3008549B2 (ja) | 1991-03-06 | 1991-03-06 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH067182A true JPH067182A (ja) | 1994-01-18 |
| JP3008549B2 JP3008549B2 (ja) | 2000-02-14 |
Family
ID=14856786
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3123285A Expired - Fee Related JP3008549B2 (ja) | 1991-03-06 | 1991-03-06 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5304476A (ja) |
| JP (1) | JP3008549B2 (ja) |
| KR (1) | KR0181297B1 (ja) |
| BR (1) | BR9200742A (ja) |
| CS (1) | CS65992A3 (ja) |
| DE (1) | DE4207154C2 (ja) |
| FR (1) | FR2673645A1 (ja) |
| HU (1) | HU215184B (ja) |
| IT (1) | IT1254486B (ja) |
| MX (1) | MX9200977A (ja) |
| NO (1) | NO920849L (ja) |
| RU (1) | RU2099424C1 (ja) |
| SK (1) | SK280783B6 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7393250B2 (en) | 2003-03-19 | 2008-07-01 | Hiroaki Tanaka | Table tap |
| JP2018504137A (ja) * | 2015-02-03 | 2018-02-15 | 上▲海▼▲凱▼▲賽▼生物技▲術▼研▲發▼中心有限公司 | 固定化細胞及びその製造方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2486248C2 (ru) * | 2011-06-29 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет инженерной экологии" (ФГБОУ ВПО "МГУИЭ") | Способ биосинтеза l-лизина |
| KR101640711B1 (ko) * | 2015-04-20 | 2016-07-19 | 씨제이제일제당 (주) | 글루코네이트 리프레서 변이체, 이를 포함하는 l-라이신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 ｌ－라이신 생산방법 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5610036B1 (ja) * | 1969-07-23 | 1981-03-05 | ||
| GB1342308A (en) * | 1970-01-22 | 1974-01-03 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Production of threonine and lysine by fermentation |
| GB1386705A (en) * | 1972-01-21 | 1975-03-12 | Mitsui Toatsu Chemicals | Method of producing l-lysine by fermentation |
| JPS52102498A (en) * | 1976-02-20 | 1977-08-27 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-lysine |
-
1991
- 1991-03-06 JP JP3123285A patent/JP3008549B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-02-28 IT ITMI920460A patent/IT1254486B/it active
- 1992-03-03 US US07/845,139 patent/US5304476A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 KR KR1019920003516A patent/KR0181297B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 NO NO92920849A patent/NO920849L/no unknown
- 1992-03-04 HU HU9200728A patent/HU215184B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 CS CS92659A patent/CS65992A3/cs unknown
- 1992-03-05 MX MX9200977A patent/MX9200977A/es active IP Right Grant
- 1992-03-05 SK SK659-92A patent/SK280783B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 BR BR929200742A patent/BR9200742A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-03-05 RU SU925011132A patent/RU2099424C1/ru active
- 1992-03-06 FR FR9202743A patent/FR2673645A1/fr active Granted
- 1992-03-06 DE DE4207154A patent/DE4207154C2/de not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7393250B2 (en) | 2003-03-19 | 2008-07-01 | Hiroaki Tanaka | Table tap |
| JP2018504137A (ja) * | 2015-02-03 | 2018-02-15 | 上▲海▼▲凱▼▲賽▼生物技▲術▼研▲發▼中心有限公司 | 固定化細胞及びその製造方法 |
| US10619148B2 (en) | 2015-02-03 | 2020-04-14 | Cathay Biotech Inc. | Immobilized cell and preparation method thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR0181297B1 (ko) | 1999-04-01 |
| NO920849L (no) | 1992-09-07 |
| HUT64599A (en) | 1994-01-28 |
| DE4207154C2 (de) | 2001-06-21 |
| BR9200742A (pt) | 1992-11-10 |
| HU215184B (hu) | 1998-10-28 |
| ITMI920460A0 (it) | 1992-02-28 |
| SK280783B6 (sk) | 2000-07-11 |
| ITMI920460A1 (it) | 1993-08-28 |
| FR2673645A1 (fr) | 1992-09-11 |
| JP3008549B2 (ja) | 2000-02-14 |
| HU9200728D0 (en) | 1992-05-28 |
| US5304476A (en) | 1994-04-19 |
| FR2673645B1 (ja) | 1994-12-16 |
| KR920018228A (ko) | 1992-10-21 |
| RU2099424C1 (ru) | 1997-12-20 |
| IT1254486B (it) | 1995-09-25 |
| NO920849D0 (no) | 1992-03-04 |
| DE4207154A1 (de) | 1992-11-26 |
| MX9200977A (es) | 1992-09-01 |
| CS65992A3 (en) | 1992-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS6236673B2 (ja) | ||
| US3909353A (en) | Method of producing L-phenylalanine by fermentation | |
| JPS6321479B2 (ja) | ||
| US5164307A (en) | Process for producing L-amino acids by fermentation | |
| US3871960A (en) | Method of producing l-lysine by fermentation | |
| JP2876739B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JP3717970B2 (ja) | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 | |
| JPH022598B2 (ja) | ||
| JPS6274293A (ja) | Ｌ−イソロイシンの製造法 | |
| JPH067182A (ja) | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 | |
| US5098835A (en) | Process for producing l-threonine by fermentation | |
| JP3006929B2 (ja) | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 | |
| Tsuchida et al. | Production of l-Leucine by a Mutant of Brevibacterium lactofermentum 2256 | |
| JPS6224074B2 (ja) | ||
| US5164306A (en) | Process for producing 5'-inosinic acid by fermentation | |
| JPH0644871B2 (ja) | 発酵法によるｌ−ロイシンの製造法 | |
| JP3006939B2 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| JP2943312B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| HUT61598A (en) | Process for producing l-threonine | |
| US5034319A (en) | Process for producing L-arginine | |
| JP2995816B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 | |
| JPH02234686A (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製法 | |
| KR100187607B1 (ko) | 발효에의한l-리신의제조방법 | |
| KR810001746B1 (ko) | 발효법에 의한 l-리신의 제조방법 | |
| JPS62265988A (ja) | 発酵法によるｌ−アルギニンの製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091203 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091203 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101203 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101203 Year of fee payment: 11 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |