RU2486248C2 - Способ биосинтеза l-лизина - Google Patents
Способ биосинтеза l-лизина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2486248C2 RU2486248C2 RU2011126521/10A RU2011126521A RU2486248C2 RU 2486248 C2 RU2486248 C2 RU 2486248C2 RU 2011126521/10 A RU2011126521/10 A RU 2011126521/10A RU 2011126521 A RU2011126521 A RU 2011126521A RU 2486248 C2 RU2486248 C2 RU 2486248C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hours
- lysine
- fermentation
- cultivation
- medium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ биосинтеза L-лизина на ферментационных средах. Готовят основную ферментационную среду на основе ферментолизата крахмала в количестве 8-15% по глюкозе и дополнительную ферментационную среду, содержащую компоненты основной ферментационной среды, концентрированные в 2-3,5 раза. Стерилизуют их. Биосинтез L-лизина осуществляют с использованием штамма-продуцента Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577D (BIGOR 55). Загружают в ферментер основную питательную среду в количестве 1/3 от ее объема. Затем производят засев основной ферментационной питательной среды 10-20% посевного материала, выращенного в две стадии. Процесс биосинтеза ведут с непрерывной подачей подпитки, начиная с 8-16 час культивирования. При этом поддерживают ингибирующую концентрацию редуцирующих веществ в культуральной жидкости 4-8%. После заполнения аппарата до максимального объема через 60-66 часов культивирования и далее каждые 6-12 часов в течение всего остального процесса биосинтеза часть культуральной жидкости в количестве 10-15% от максимального объема перекачивают в аппарат для дображивания. В этом аппарате продолжают процесс биосинтеза в течение 6-12 часов при тех же условиях, что и в основном аппарате, но без подачи дополнительной питательной среды. Затем выделяют L-лизин. Изобретение позволяет вести процесс биосинтеза в течение длительного времени без снижения скорости синтеза L-лизина и обеспечивает получение культуральной жидкости с концентрацией L-лизина перед выделением не ниже 100 г/л. 4 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения L-лизина, применяемого для балансировки кормов животных, в пищевой промышленности для балансировки состава пищевых продуктов и в медицинской промышленности для приготовления аминокислотных смесей парентерального питания.
Известны способы получения L-лизина на основе микробиологического синтеза, предусматривающие культивирование с использованием различных штаммов-продуцентов Corynebacterium и Brevibacterium. Источником углерода в питательных средах служит меласса, технический сахар, техническая глюкоза. В качестве ростового фактора (источника аминного азота) используются кукурузный экстракт, кислотные гидролизаты белково-витаминного концентрата (БВК) и биомассы продуцента. Известные в России способы получения L-лизина, реализованные в промышленных масштабах, ориентированы на использование мелассы и гидролизатов БВК, а конечным продуктом являлся жидкий концентрат лизина (ЖКЛ) или высушенный на отрубях концентрат кормового лизина (ККЛ).
Однако на территории России в настоящее время практически все углеводсодержащее сырье непищевого назначения для микробиологической промышленности труднодоступно или дорого. В связи с этим целесообразно использование технологий, работающих на нетрадиционном сырье.
Известен способ получения L-лизина, описанный в патенте США №4,411,991 (1983 г.), в котором предлагается использовать гидролизат концентрированной молочной сыворотки в качестве источника редуцирующих веществ (РВ). Недостатком данного способа является низкое содержание РВ в полученном гидролизате, и как следствие, низкая концентрация лизина.
Известен способ получения L-лизина, описанный в Journal of Fermentation and Bio-engineering. Vol.86, №2, 180-184. 1998. Регулирование метаболической активности осуществляется внесением в культуральную жидкость лейцина так, чтобы текущая концентрация лейцина поддерживалась на уровне 0,1 г/л. Недостатком данного способа является использование генно-инженерных штаммов-продуцентов лизина, биомасса которых запрещена в ЕЭС для использования в комбикормах с/х животных.
Наиболее близким к предлагаемому способу по регулированию биосинтеза лизина в процессе культивирования является патент США №2107097, в котором описан способ биосинтеза лизина на ферментационных средах, предусматривающий приготовление ферментационной среды с углеводной, белковой и солевой частями, культивирование в ферментере на основной ферментационной среде штамма-продуцента с внесением дополнительной ферментационной среды (подпитки) в ходе процесса культивирования, при поддержании величины рН, температуры культивирования, аэрации и перемешивания на питательных средах с глюкозой в качестве источника углеводов с использованием лейцин-ауксотрофного штамма Corynebacterium, где регулирование метаболической активности происходит путем внесения подпитки, содержащей источник углеводов и белка, по концентрации лейцина в культуральной жидкости. Весь процесс биосинтеза проводят при лимитирующей концентрации углеводов в питательной среде 5-35 г/л.
К недостаткам данного способа относятся использование кристаллической глюкозы и низкая концентрация L-лизина в культуральной жидкости, что является следствием периодического способа ведения процесса культивирования.
Задачей настоящего изобретения является биосинтез L-лизина на основе питательных сред, содержащих ферментолизат крахмала как источник углеводов, позволяющий получать высокую концентрацию L-лизина в культуральной жидкости.
Поставленная задача достигается тем, что
- биосинтез лизина осуществляют на ферментационных средах с углеводной, белковой и солевой частями; культивирование штамма-продуцента проводят в ферментере на основной ферментационной среде с внесением дополнительной питательной среды (подпитки) в ходе процесса биосинтеза, при поддержании величины рН, температуры культивирования, аэрации и перемешивания; а в качестве сырья для приготовления основной ферментационной среды и подпитки используют ферментолизат крахмала, который получают из крахмалсодержащего растительного сырья или крахмалсодержащих отходов пищевой промышленности; ферментолизат крахмала вносят в ферментацонную среду в количестве 8-15% по глюкозе, и проводят культивирование с использованием штамма-продуцента Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577 D (BIGOR 55); в ферментер загружают 1/3 от его рабочего объема основную питательную среду, содержащую 2,5-7,5% источника органического азота (ростовой фактор), аммоний сернокислый 3,5-6,5%, соли магния и фосфора 0,05-0,4%, тиамин и биотин 0,05-0,6 мг/л и 10-20% посевного материала из посевного аппарата, выращенного в две стадии, проводят культивирование при рН 6,5-7,5, температуре 28-32°C, и условиях аэрации и перемешивания, обеспечивающих скорость массопередачи кислорода не менее 5 г O2/л*час; через 8-16 часов от начала культивирования начинают подачу подпитки, в которой концентрация всех компонентов в 2-3,5 раза больше, чем в основной питательной среде, поддерживая концентрацию РВ в среде на уровне 4-8%; после достижения максимального (рабочего) объема жидкости в ферментере через 60-66 часов культивирования производят отбор культуральной жидкости (КЖ) в количестве 10-15% от максимального объема и передают ее в отдельный аппарат, где в процессе биосинтеза в течение 6-12 часов происходит дображивание РВ; процесс отбора культуральной жидкости проводят многократно каждые 6-12 часов в течение 350-500 часов роста; дображивание (процесс биосинтеза) проводят при тех же параметрах процесса, что и в основной ферментации (кроме подачи подпитки, она отсутствует) в течение 6-12 часов.
Сущность предлагаемого способа получения L-лизина заключается в следующем:
- на основе ферментолизата крахмала готовят основную ферментационную среду: ферментолизат крахмала вносят в количестве 8-15% по глюкозе, 2,5-7,5% источника органического азота (ростового фактора), аммоний сернокислый 3,5-6,5%, соли магния и фосфора 0,05-0,4%, тиамин и биотин 0,05-0,6 мг/л и подпитку (дополнительную ферментационную среду), содержащую компоненты ферментационной среды, концентрированные в 2-3,5 раза, и стерилизуют их;
- биосинтез L-лизина осуществляется с использованием штамма-продуцента лизина Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577 D (BIGOR 55). Штамм получен мутагенезом из родительского штамма В5200 (ВКПМ ГосНИИгенетика) в компании ООО ПКФ «БИГОР». Культура Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577 D BIGOR 55 имеет генетические маркеры: leu и horn ауксотрофность и амилоэтилцистеин-резистентность, облигатный аэроб, грамположительна, спор не образует. Клетки в виде палочек неправильной формы, размером 0,3-1,0×1,5-4,7 мкм, неподвижные. Располагаются одиночно или в парах, часто V-образно;
- засев основной ферментационной питательной среды производят 10-20% посевного материала со второй стадии выращивания посевного материала;
- полунепрерывный процесс биосинтеза ведут с непрерывной подачей подпитки, начиная с 8-16 час культивирования, при этом метаболическая активность штамма-продуцента, ауксотрофного по лейцину, регулируется за счет поддержания ингибирующей концентрации РВ в культуральной жидкости 4-8% по глюкозе, а содержание лейцина поддерживается в культуральной жидкости 0,1-0,2 г/л за счет ростового фактора, входящего в состав подпитки;
- по заполнении аппарата до максимального объема через 60-66 часов культивирования, и далее каждые 6-12 час, многократно - в течение 350-500 часов, часть культуральной жидкости в количестве 10-15% от максимального объема КЖ перекачивают в стерильный аппарат, где поддерживается оптимальная для биосинтеза величина рН 6,7-7,4 подачей аммиачной воды. В этом аппарате происходит процесс биосинтеза в течение 6-12 часов, обеспечивающий дображивание РВ, из КЖ после дображивания затем выделяют лизин.
Сущность предлагаемой технологии раскрывается, но не исчерпывается в приведенных примерах.
Пример 1
Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных сред.
Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5 г O2/л*час.
Процесс биосинтеза, обеспечивающий дображивание (потребление остаточных редуцирующих веществ до концентрации не выше 0,8%), проводят в аппарате Биофло, емкостью 1 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.
Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 25,0
Кукурузный экстракт - 40,0
Аммоний сернокислый - 4,0
Натрий хлористый - 10,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.
При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 18 часов. Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 450 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 50,0
Кукурузный экстракт - 45,0
Аммоний сернокислый - 20,0
Калий фосфорнокислый - 1,5
Магний сернокислый - 0,7
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3.
Культивирование ведут при 30°C в течение 8 часов.
Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 10% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.
Объем рабочего ферментера - 10 л. Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 80,0
Кукурузный экстракт - 25,0
Аммоний сернокислый - 35,0
Магний сернокислый - 0,5
Калий фосфорнокислый - 4,0
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Через 8 часов культивирования включают подачу подпитки следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 280,0
Кукурузный экстракт - 87,5
Аммоний сернокислый - 122,5
Магний сернокислый - 1,75
Калий фосфорнокислый - 14,0
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 3,5
витамины:
Тиамин - 0,175 мг/л
Биотин - 2,1 мг/л
Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 60 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.
Через 60 часов 0,85 л культуральной жидкости (КЖ), что составляет 10% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 1 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для проведения процесса биосинтеза, обеспечивающего дображивание редуцирующих веществ. Каждые 6 часов из аппарата емкостью 1 л сливают 0,85 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию из основного аппарата (периодический слив) и передают на стадию выделения лизина.
Культивирование в основном аппарате ведется в течение 350 часов. Общий слив за 350 часов - 50,6 л с концентрацией лизина 100 г/л (по лизину монохлоргидрату).
Пример 2
Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных сред.
Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5-6 г/O2/л*час.
Процесс биосинтеза, обеспечивающий дображивание РВ, проводят в аппарате Биофло, емкостью 2 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.
Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 25,0
Кукурузный экстракт - 40,0
Аммоний сернокислый - 4,0
Натрий хлористый - 10,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.
При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 20 часов. Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 600 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 50,0
Кукурузный экстракт - 45,0
Аммоний сернокислый - 20,0
Калий фосфорнокислый - 1,5
Магний сернокислый - 0,7
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л.
Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3.
Культивирование ведут при 30°C в течение 12 часов.
Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 20% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.
Объем рабочего ферментера - 10 л.
Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала по глюкозе - 150,0
Кукурузный экстракт - 75,0
Аммоний сернокислый - 65,0
Калий фосфорнокислый - 4,0
Магний сернокислый - 0,5
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Через 16 часов культивирования включают подачу подпитки, следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала - 300,0
Кукурузный экстракт - 150,0
Аммоний сернокислый - 130,0
Калий фосфорнокислый - 8,0
Магний сернокислый - 2,0
витамины:
Тиамин - 0,1 мг/л
Биотин - 1,2 мг/л
Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 66 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.
Через 66 часов 1,275 л культуральной жидкости, что составляет 15% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 2 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для дображивания РВ. Каждые 12 часов из аппарата емкостью 2 л сливают 1,275 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию КЖ из основного аппарата (периодический слив).
Культивирование в основном аппарате ведется в течение 500 часов. Общий слив за 500 часов - 55,6 л с концентрацией лизина 115 г/л (по лизину монохлоргидрату).
Пример 3
Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных сред.
Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5 г O2/л*час.
Дображивание проводят в аппарате Биофло, емкостью 1 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.
Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала по глюкозе - 25,0
Пептон - 28,0
Дрожжевой экстракт - 12,0
Аммоний сернокислый - 4,0
Натрий хлористый - 10,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.
При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 18 часов. Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 300 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала по глюкозе - 50,0
Пептон - 31,5
Дрожжевой экстракт - 13,5
Аммоний сернокислый - 20,0
Калий фосфорнокислый - 1,5
Магний сернокислый - 0,7
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3. Культивирование ведут при 30°C в течение 8 часов.
Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 10% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.
Объем рабочего ферментера - 10 л. Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала по глюкозе - 80
Пептон - 17,5
Дрожжевой экстракт - 7,5
Аммоний сернокислый - 35,0
Калий фосфорнокислый - 1,5
Магний сернокислый - 0,7
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин -0,6 мг/л
Через 8 часов культивирования включают подачу подпитки следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала - 280,0
Пептон - 61,25
Дрожжевой экстракт - 26,25
Аммоний сернокислый - 122,5
Калий фосфорнокислый - 14,0
Магний сернокислый - 3,5
витамины:
Тиамин - 0,175 мг/л
Биотин - 2,1 мг/л
Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 60 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.
Через 60 часов 0,85 л культуральной жидкости, что составляет 10% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 1 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для дображивания редуцирующих веществ. Каждые 6 часов из аппарата емкостью 1 л сливают 0,85 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию из основного аппарата (периодический слив) и передают на стадию выделения лизина.
Культивирование в основном аппарате ведется в течение 350 часов. Общий слив за 350 часов - 51,4 л с концентрацией лизина 100 г/л (по лизину монохлоргидрату).
Пример 4
Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных сред.
Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопере-дачи кислорода 5-6 г/O2/л*час.
Дображивание проводят в аппарате Биофло, емкостью 2 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.
Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 25,0
Ферментолизат глютена - 20,0
Растительный экстракт - 20,0
Аммоний сернокислый - 4,0
Натрий хлористый - 10,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.
При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 20 часов. Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 600 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала по глюкозе - 50,0
Ферментолизат глютена - 22,5
Растительный экстракт - 22,5
Аммоний сернокислый - 20,0
Калий фосфорнокислый - 1,5
Магний сернокислый - 0,7
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3. Культивирование ведут при 30°C в течение 12 часов.
Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 20% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.
Объем рабочего ферментера - 10 л.
Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала по глюкозе - 150,0
Ферментолизат глютена - 37,5
Растительный экстракт - 37,5
Аммоний сернокислый - 45,0
Аммоний фосфорнокислый - 0,4
Магний сернокислый - 0,3
Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1,0
Тиамин - 0,05 мг/л
Биотин - 0,6 мг/л
Через 16 часов культивирования включают подачу подпитки, следующего состава (г/л):
Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 300,0
Ферментолизат глютена - 75,0
Растительный экстракт - 75,0
Аммоний сернокислый - 130,0
Калий фосфорнокислый - 8,0
Магний сернокислый - 2,0
витамины:
Тиамин - 0,1 мг/л
Биотин - 1,2 мг/л
Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 66 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.
Через 66 часов 1,275 л культуральной жидкости, что составляет 15% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 2 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для дображивания РВ. Каждые 12 часов из аппарата емкостью 2 л сливают 1,275 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию КЖ из основного аппарата (периодический слив).
Культивирование в основном аппарате ведется в течение 500 часов. Общий слив за 500 часов - 56,2 л с концентрацией лизина 115 г/л (по лизину монохлоргидрату).
Осуществлен способ культивирования L-лизина, обеспечивающий получение КЖ с концентрацией лизина перед выделением не ниже 100 г/л (по лизину-монохлоргидрату).
Этот результат достигнут благодаря использованию в качестве источника углеводов для приготовления питательных сред (основной и подпитки) ферментолизата крахмала, полученного из возобновляемого растительного крахмалсодержащего сырья.
Регуляция биосинтеза лизина ингибирующими концентрациями компонентов питательной среды и подача подпитки с постоянной скоростью по концентрации РВ в культуральной жидкости позволяет вести процесс биосинтеза в течение длительного времени без снижения скорости синтеза лизина.
Использование нового штамма-продуцента, полученного без применения рекомбинантных технологий, допускает применение биомассы продуцента в составе белково-витаминных кормовых добавок.
Claims (1)
1. Способ биосинтеза L-лизина на ферментационных средах, предусматривающий приготовление ферментационной среды с углеводной, белковой и солевой частями, культивирование в ферментере на основной ферментационной среде штамма-продуцента с внесением дополнительной ферментационной среды в ходе процесса культивирования, при поддержании величины рН, температуры культивирования, аэрации и перемешивания, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют Corynebacterium glutamicum ВКМ Ac-2577D (BIGOR 55); основная питательная среда содержит ферментолизат крахмалсодержащего сырья в количестве 8,0-15,0% по глюкозе; среду загружают в ферментер в количестве 1/3 от его рабочего объема; вносят 10-20% посевного материала, выращенного в две стадии; через 8-16 ч культивирования начинают подачу дополнительной ферментационной среды, в которой концентрация всех компонентов в 2-3,5 раза больше, чем в основной, поддерживая концентрацию редуцирующих веществ в культуральной жидкости в пределах 4-8%, причем после достижения максимального объема жидкости в аппарате через 60-66 ч культивирования и далее каждые 6-12 ч в течение всего остального процесса биосинтеза производят отбор ферментационной жидкости из ферментера в количестве 10-15% от максимального объема и передают ее в аппарат для дображивания, в котором продолжают процесс биосинтеза в течение 6-12 ч при тех же условиях, что и в основном аппарате, но без подачи дополнительной питательной среды.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011126521/10A RU2486248C2 (ru) | 2011-06-29 | 2011-06-29 | Способ биосинтеза l-лизина |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011126521/10A RU2486248C2 (ru) | 2011-06-29 | 2011-06-29 | Способ биосинтеза l-лизина |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011126521A RU2011126521A (ru) | 2013-01-10 |
| RU2486248C2 true RU2486248C2 (ru) | 2013-06-27 |
Family
ID=48702508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011126521/10A RU2486248C2 (ru) | 2011-06-29 | 2011-06-29 | Способ биосинтеза l-лизина |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2486248C2 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2099424C1 (ru) * | 1991-03-06 | 1997-12-20 | Адзиномото Ко., Инк. | Способ получения l-лизина посредством культивирования штамма бактерий |
| RU2107097C1 (ru) * | 1991-09-17 | 1998-03-20 | Дегусса Аг | Способ получения лизина |
| RU2125608C1 (ru) * | 1995-12-28 | 1999-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью фирма "ЦЕОЛИТ" | Способ получения l-лизина |
| US20080160585A1 (en) * | 2003-12-18 | 2008-07-03 | Basf Aktiengesellschaft | Methods for the Preparation of Lysine by Fermentation of Corynebacterium Glutamicum |
-
2011
- 2011-06-29 RU RU2011126521/10A patent/RU2486248C2/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2099424C1 (ru) * | 1991-03-06 | 1997-12-20 | Адзиномото Ко., Инк. | Способ получения l-лизина посредством культивирования штамма бактерий |
| RU2107097C1 (ru) * | 1991-09-17 | 1998-03-20 | Дегусса Аг | Способ получения лизина |
| RU2125608C1 (ru) * | 1995-12-28 | 1999-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью фирма "ЦЕОЛИТ" | Способ получения l-лизина |
| US20080160585A1 (en) * | 2003-12-18 | 2008-07-03 | Basf Aktiengesellschaft | Methods for the Preparation of Lysine by Fermentation of Corynebacterium Glutamicum |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ФЕДОТОВА Н.А. Разработка технологии получения из зернового сырья азотсодержащих компонентов для процессов ферментации. Автореферат дисс. - М.: 2009. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011126521A (ru) | 2013-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102132132B1 (ko) | 재조합 인간 콜라겐 생산 수준을 향상시키는 발효 공법 | |
| CN103635578B (zh) | 编码甘油醛3-磷酸脱氢酶的gap基因的启动子的变体 | |
| FI104836B (fi) | Menetelmä aminohappojen valmistamiseksi fermentoimalla | |
| US11702680B2 (en) | Materials and methods for controlling PHA biosynthesis in PHA-generating species of the genera Ralstonia or Cupriavidus and organisms related thereto | |
| US20050250190A1 (en) | Crypthecodinium cohnii biomass cultured to synthesize docosahexaenoic acid | |
| FR2676234A1 (fr) | Procede et appareil pour la regulation de la concentration de source de carbone dans la culture aerobie d'un micro-organisme. | |
| US8802399B2 (en) | Method for production of natural L-cysteine by fermentation | |
| RU2008152445A (ru) | Процесс периодической ферментации с подпиткой при высокой плотности клеток для получения рекомбинантного белка | |
| CN108841758B (zh) | 谷氨酸棒杆菌突变株及其在l-亮氨酸生产中的应用 | |
| US20160340640A1 (en) | Method for the protein enrichment of microalgal biomass | |
| JP2008054688A (ja) | アカルボースの製造のためのオスモル濃度制御発酵方法 | |
| CN1367823A (zh) | 氨基酸生产的代谢工程 | |
| CN101967501B (zh) | 基于pH的反馈补料生产赖氨酸的方法 | |
| KR20020067623A (ko) | 발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법 | |
| CN104651427A (zh) | 一种制备多拉菌素的方法 | |
| JP2006500045A (ja) | ファフィア・ロドジマによる供給−バッチ発酵プロセスを用いたアスタキサンチン産生 | |
| CN114045235B (zh) | 一种利用嗜甲烷菌生产单细胞蛋白和可发酵糖的方法 | |
| RU2486248C2 (ru) | Способ биосинтеза l-лизина | |
| CN116179356A (zh) | 高密度异养培养莱茵衣藻的方法及其应用 | |
| Razak et al. | Comparative studies for the biotechnological production of L-Lysine by immobilized cells of wild-type Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 and mutant MH 20-22 B | |
| CN102399845A (zh) | 基于尾气中co2浓度的维生素b12发酵生产控制工艺 | |
| KR100429331B1 (ko) | 재조합 효모를 이용한 에스에이치엘케이엔-1 단백질의대량생산방법 | |
| KR101752819B1 (ko) | L-시스테인 및 아미노산의 유도체의 발효에 의한 생산 방법 | |
| US20060270004A1 (en) | Fermentation processes with low concentrations of carbon-and nitrogen-containing nutrients | |
| US20160068799A1 (en) | Medium, method and system for cultivation of chlorella pyrenoidosa or organisms derived from chlorella pyrenoidosa |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20131002 |
|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20150608 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20180327 Effective date: 20180327 |
|
| QC41 | Official registration of the termination of the licence agreement or other agreements on the disposal of an exclusive right |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20180327 Effective date: 20200713 |
|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20201001 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: PLEDGE FORMERLY AGREED ON 20210813 Effective date: 20210813 |