KR20020067623A - 발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법 - Google Patents

발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20020067623A
KR20020067623A KR1020020006920A KR20020006920A KR20020067623A KR 20020067623 A KR20020067623 A KR 20020067623A KR 1020020006920 A KR1020020006920 A KR 1020020006920A KR 20020006920 A KR20020006920 A KR 20020006920A KR 20020067623 A KR20020067623 A KR 20020067623A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
serine
acetyl
fermentation
wild type
range
Prior art date
Application number
KR1020020006920A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100464906B1 (ko
Inventor
마이에르토마스
바슬러토비아스
뵈크아우구스트
Original Assignee
콘소티움 퓌르 에렉트로헤미쉐 인두스트리 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 콘소티움 퓌르 에렉트로헤미쉐 인두스트리 게엠베하 filed Critical 콘소티움 퓌르 에렉트로헤미쉐 인두스트리 게엠베하
Publication of KR20020067623A publication Critical patent/KR20020067623A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100464906B1 publication Critical patent/KR100464906B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

본 발명은 발효에 의한 O-아세틸-L-세린의 제조방법에 관한 것으로, 그 제조방법에서는 야생형(wild type)에서 유도되고, 그 야생형과 대비할때 O-아세틸-L-세린의 내생적형성(endogenous formation)이 증가되고, O-아세틸-L-세린의 유출이 증가되는 미생물균주를 PH5.1~6.5로 고정시킨 발효배지에 배양시킴을 특징으로 한다.

Description

발효에 의한 Ｏ-아세틸-Ｌ-세린의 제조방법{Process for preparing Ｏ-acetyl-Ｌ-serine by fermentation}
본 발명은 발효에 의한 O-아세틸-L세린의 제조방법에 관한 것이다.
발효에 의한 아미노산의 여러가지 제조방법은 통상적이다.
이들의 제조방법에는 특히 L-글루타민산, L-라이신 및 L-트레오닌 등 경제적인 관점에서 비교적 가치가 높은 대표적인 20종의 단백질발생아미노산의 제조방법이 있다.
그러나, 단백질발생아미노산의 제조방법에 대한 다수의 보고서가 증가하는 취세에 있는바, 이들의 단백질발생아미노산은 L-페닐알라닌 및 L-시스테인 등의 아미노산으로 소규모위 시장에서 년간 1000~10,000톤의 범위에 달한다.
위에서 설명한 방법과 대비하여, 그 대응되는 20종의 단백질발생아미노산의 생합성 전구물질의 제조방법은 별로 공지된 바 없다.
그러나, 이들의 전구물질은 정확히 말하면 키랄센터(chiral centers)를 자주 갖고있으므로 관심있는 생성물을 나타낼 수 있고, 약학적으로 활성인 화합물을 합성하는 구성블록으로 사용할 수 있는 전구물질이다.
예로서, 특허문헌 WO 00/44923 명세서에서는 시키미산(shikimic acid)의 제조방법에 대하여 기재되어 있는 바, 시키미산은 방향족 아미노산의 생합성에서 중간체이다.
또 다른 예로는 특허문헌 EP 0994190A2 명세서에서는 L-메티오닌의 전구물질로서 L-호모세린을 제조하기 위한 발효의 사용에 대하여 기재되어있다.
O-아세틸-L-세린은 L-시스테인의 생합성 전구물질이다.
생합성 전구물질은 그 자신의 우측에 아미노산을 가지며, 히드록시 작용에서 아세틸화시키는 L-세린에 의해 세균성 식물대사(bacterial and plant metabolism)에서 생성된다.
이 반응은 효소로서 세린 O-아세틸전이효소[EC 2.3.1.30]에 의해 촉진되며, 그 전이효소는 cysE 유전자에 의해 엔코팅된다.
이 세포에서, O-아세틸-L-세린을 더 반응시켜 L-시스테인을 생성한다.
이 반응에서, 아세테이트 작용은 티올작용으로 대치시킨다.
발효에 의한 O-아세틸-L-세린의 제조방법에서 기술적인 문제가 발생한다.
즉, 기재가 대단히 불안정(labile)하게 되어 PH4.0 이상에서 O-아세틸-L-세린으로 이성화하는 결과를 초래한다.
PH7.6에서 반응속도는 1% × min-1로 된다(타이등, 1995, Biochemistry 34: 12311-12322참조).
이와같은 기술적 구성은 최소한 1일 12시간 동안 통상적으로 실시하는 발효처리후에 이와같은 조건하에서 상당한 량의 O-아세틸세린을 검출할 수 없다는 것을 의미한다.
이성화반응은 비가역적이며 반응속도는 PH값이 증가함에 따라 더 증가한다.
그 아미노작용이 차단(block)되므로 N-아세틸-L-세린은 O-아세틸-L-세린과 대비하여 볼때 펩티드의 합성에 더 이상 사용할 수 없다.
또 다른 기술적 문제점으로는 세포내 O-세틸-L-세린의 레벨이 대단히 저하되어 강력하게 조절시켜야 할 필요성이 있다.
한편으로, 세린아세틸 전이효소는 L-시스테인에 의해 알로스테릭성 (allosteric)을 억제시키며, 그 결과 L-시스테인의 ㎛농도의 존재하에서 O-아세틸-L-세린을 합성할 수 없다.
다른 한편으로, 이성화 생성물로서 N-아세틸-L-세린은 황레귤론(sulfur regulon)의 유도물질(inducer)로 작용함으로써 O-아세틸-L-세린과 황의 반응이 신속하게 유도되어 L-세린을 생성한다.
참고문헌(Dassler 등; 2000, Mol.Microbiol. 36: 1101-1112) 에서는 세포막단백질 YdeD(=Orf299)을 과잉생성하는 세포가 그 배양배지에서 L-시스테인, 2-메틸티아졸리딘-2,4-디카르복실산 및 O-아세틸-L-세린을 분비하는 것으로 보고한 바 있다.
그러나, O-아세틸-L-세린은 극미량으로 0.12g/ℓ만을 검출할 수 있었고, 진탕플라스크 실험에만 검출할 수 있었다.
반면에, 영양공급을 높힘으로써 높은 수율을 얻을 수 있는 발효실험에서는 N-아세틸-L-세린만을 얻게되었다.
O-아세틸-L-세린은 PH4-5에서만 안정성이 충분하다는 점을 언급하였다.
그러나, 이와같은 PH의 범위에서는 에쉐리키아콜리(Escherichia coli)등 호중성균(neutrophilic bacteria)의 성장이 빈약하므로 발효에 의한 제조에 적합하지 않다.
Orf299를 사용하여 PH7.0에서 발효에 의한 N-아세틸-L-세린의 제조방법은 특허문헌 EP 0885962 A1 명세서에 기재되어있다.
이 특허문헌의 경우 Orf299 유전자(이특허문헌에서는 SEQ.ID.NO: 3으로 지정되어있음)는 적합한 cysE 대립유전자(alleles)와 조합하였다.
이들의 대립유전자는 세린아세틸전이효소를 엔코팅하며, 세린아세틸전이효소는 L-시스테인에 의해 피드백억제(feedback inhibition)을 저하시켰다.
이 결과, 세포내에서 얻어지닌 O-아세틸-L-세린의 생성을 증가시켰으며, 신속한 이성화반응에 의해 N-아세틸-L-세린의 축적이 최대로 되었다.
특허문헌 WO97/15673 명세서에 기재되어 있는 바와 같이 피드백억제를 저하시키는 cysE 대립유저자의 사용으로는 역시 O-아세틸-L-세린의 축적을 유도할 수없다.
이와같은 방법을 사용할때 세포내에서 O-아세틸-L-세린의 생성을 증가시키나 L-시스테인이 세포밖에서 검출되어 하나의 생성물로서 얻을 수 있는 범위내에 존재할뿐이다.
O-아세틸-L-세린을 제조할때 또 다른 중요한 기술적 문제점은 참고문헌(Dassler 등; 2000, Mol. Microbiol. 36: 1101-1112)에서 보고된 바 있다.
Orf 299의 과잉생성으로 균성장의 장해가 극심하게 되었다.
이것은 세포내에서 유도물질 N-아세틸-L-세린의 결핍으로 인하여 황레귤론(sulfur regulon)의 유도가 없기 때문이다.
본 발명의 목적은 O-아세틸-L-세린의 불안정성과 세포에서 O-아세틸-L-세린을 효과적으로 유출시키는 네가티브 생리결과(negative physiological consequences)에도 불구하고 O-아세틸-L-세린의 고수율을 얻을 수 있는 발효에 의한 제조방법을 제공하는 데 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 1에 의해 O-아세틸-L-세린을 이성화시켜 N- 아세틸-L-세린을 얻을때 시간[분]에 따른 함량 [g/ℓ]관계를 나타낸 그라프이다.　
본 발명은 야생형(wild type)에서 유도되고 O-아세틸-L-세린의 내생적 형성과 O-아세틸-L-세린의 유출이 야생형과 비교하여 향상되는 미생물균주를 PH5.1~6.5의 범위로 조절시키는 발효배지내에서 배양시켜 달성할 수 있다.
즉, 본 발명에 있어서 위에서 설명한 바와 같이 특성이 있는 미생생균주가 O-아세틸-L-세린을 다량으로 분비하며, O-아세틸-L-세린이 PH5.1~6.5의 발효배지에서 안정성이 충분하고, 동시에 O-아세틸-L-세린 분비세포에 대한 위에서 설명한 생리적인 문제점은 피드백 저항성 cysE 대립유전자를 사용하고 O-아세틸-L-세린을 증가량으로 공급함으로써 상당한 범위로 완화시킬 수 있다는 것을 기대이상으로 확인하였다.
발효중에 발효배지의 PH는 5.5~6.5의 범위가 바람직하며, 특히 PH5.5~6.0이 바람직하다.
본 발명에 의한 제조방법에서 사용할 수 있는 미생물균주는 O-아세틸-L-세린의 내생적 형성증가를 나타내며 O-아세틸-L-세린의 유출증가를 나타내는데 그 특성이 있다.
이와같은 특성의 미생물균주는 이 분야기술에서 공지되어있다.
O-아세틸-L-세린의 내생적형성 증가는 예로서 아래의 특허문헌 및 참고문헌에서 기재되어 있는 바와 같이 수식(modified) cysE 대립유전자를 미생물균주에 도입시켜 얻을 수 있다.
특허문헌 WO 97/15673, 또는
참고문헌 Nakamori S. 등, 1998, Appl. Env. Microbiol. 64: 1607-1611, 또는
참고문헌 Takagi H. 등, 1999. FEBS Lett. 452: 323-327
이들의 cysE 대립유전자는 세린 O-아세틸전이효소를 엔코딩하여 세린 O-아세틸전이효소는 시스테인에 의해 피드백억제를 감소시킨다.
따라서, 그 O-아세틸-L-세린의 형성은 세포내 시스테인 레벨에서 상당한 범위로 결합되어 있지 않다.
유전자생성물이 O-아세틸-L-세린의 유출을 발생하는 유출유전자의 표현을 증가시켜 O-아세틸-L-세린의 유출을 증가시킬 수 있다.
참고문헌(Dassler 등, 2000,Mol. Microbiol. 36: 1101-1112)과 특허문헌 EP 0885962 A1(미국특허출원 09/097759에 대응됨) 명세서에 기재되어 있는 ydeD 유전자는 이와같은 특성을 가진 특히 바람직한 유출유전자이다.
수식 cysE 대립유전자 및/또는 유출유전자는 단일복제 또는 그밖에 증가복제수로 사용되는 균주중에 존재한다.
이들의 유전자는 크로모솜에 의해 엔코딩할 수 있거나, 또는 플라스미드 등 자가복제요소(self-replicating elemnets)상에 위치 시킬 수 있다.
유전자의 표현은 예로서 통상의 기술자에게 공지된 적합한 촉진제시스템을 사용하여 증가시킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 구성에서 중간범위의 복제수를 가진 플라스미드상에서 자연상태의 촉진제(native promoter) 또는 gapD의 촉진제를 가지며, cysE 대립유전자 및/또는 ydeD 유전가 있는 미생물이 사용된다.
이와같은 구성의 예로는 특허문헌 EP 0885962 A1명세서상에 구체적으로 기재되어 있는 pACYC184-cysEX-GAPDH-ORF306이 있다.
원칙적으로, 일반적인 방법에 사용할 수 있고 발효에 의한 방법에서 용이하게 배양할 수 있는 모든 미생물균주는 이와같은 특성을 가진 균주의 제조에 적합하다.
엔테로박테리아시애족(Enterobacteriaceae family)의 균사용이 바람직하다.
특히, 종에쉐리키아콜리(species Escherichia coli)의 생물체의 사용이 바람직하다.
이들의 균주의 제조는 위에서 설명한 문헌에 기재되어 있으며, 본 발명의 일부가 아니다.
본 발명에 의한 방법에 적합한 균주는 또 특허문헌 EP 0885962 A1명세서(미국특허출원 09/097759에 대응됨)에 기재되어 있는 바와 같이 시스테인 및 시스테인 유도체의 제조에 적합하다.
그러나, 이 경우 L-시스테인 또는 그 유도체중 하나의 최적량을 얻기 위하여 설페이트 또는 티오설페이트등 무기질황의 적합한 공급원을 필요로 한다.
그러나, 본 발명에 의한 방법에서 O-아세틸-L-세린을 시스테인으로의 전환을 더 필요로 하지 않기 때문에 발효중에 황공급원(sulfur source)을 혼합시키지 않는다.
시스테인의 세포단백질 합성의 필요요건을 충족하도록 배지중에 적합한 량의 황공급원(즉, 설페이트 또는 티오설페이트)의 존재가 필요할 뿐이다.
영양배지중의 적합한 양은 5~50mM의 황이 바람직하다.
미생물균주를 사용하여 O-아세틸-L-세린을 제조하는 본 발명에 의한 방법은 발효조내에서 공지의 방법으로 실시하나 발효중에 PH값을 기대이상으로 낮게 고정시켜 실시한다.
미생물균주는 연속식배양으로, 배치(batch)배양으로 또는 바람직하게는 피드-배치배양(fed-batch culture)으로하여 발효조내에서 성장시킨다.
탄소원(C source)으로 당(sugar), 당알코올 또는 유기산을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명에 의한 방법에서 특히 바람직하게 사용되는 탄소원으로는 글루코오스, 락토오스 또는 글리세롤이 있다.
탄소원은 발효중에 발효조내에서 탄소원의 함량은 0.1~50g/ℓ의 범위로 유지하도록 혼합하는 것이 바람직하다.
0.5~10g/ℓ의 범위가 특히 바람직하다.
본 발명에 의한 방법에서 바람직하게 사용되는 질소원으로는 암모니아, 암모늄염 또는 단백질 가수분해물이 있다.
암모니아를 일정한 PH로 유지하기 위한 교정제(correcting agents)로 사용할 경우 발효중에 이와같은 질소원을 규칙적으로 공급한다.
첨가시킬 수 있는 다른 배지 첨가제에는 원소 인, 클로린, 소듐, 마그네슘, 질소, 포타슘, 칼슘 및 철의 염과, 미량(즉, ㎛농도)으로 원소몰리브덴, 보론, 코발트, 망간, 아연 및 니켈의 염이 있다.
또, 유기산(즉, 아세테이트 또는 시트레이트), 아미노산(즉, 이소류신) 및 비타민(즉, B1,B6)을 배지에 첨가할 수도 있다.
사용할 수 있는 복합영양원의 예로는 이스트엑스(yeast extract), 콘스팁리커 (corn steep liquor), 콩가루(soybean meal) 및 맥아엑스(malt extract)가 있다.
배양온도는 15~45℃이며, 30~37℃의 온도가 바람직하다.
발효는 호기성성장조건하에서 실시하는 것이 바람직하다.
산소는 압축공기 또는 순수산소를 사용하여 발효조내에 공급한다.
위에서 설명한 방법에 따라 발효시킨 미생물은 발효기간 1~3일간에 걸처 배양배지내에 효율높게 0-아세틸-L-세린을 분비한다.
본 발명을 더 명백하게 하기 위하여 다음 실시예를 들어 구체적으로 설명한다.
다음 실시예를 실시하는 데 사용되는 균주 에쉐리키아콜리(Escherichia coli) W3110/pACYC184-cysEX-GAPDH-ORF306은 부다베스트조약에 따라 DSMZ에 기탁번호 DSM 13495로 기탁되었다.
실시예 1: O-아세틸-L-세린을 이성화시켜 N-아세틸-L-세린을 얻음
발효조건에 근접한 조건하에서 이성화반응의 더 정확한 압흔(impression)을 얻기위하여, O-아세틸-L-세린 0.9g을 발효배지(실시예 3) 100㎖에 도입하였다.
그 다음으로, 28%의 암모니아를 사용하여 PH7.0으로 조정하였다.
얻어진 샘플은 반응온도 32℃로 유지시키면서 여러가지의 시간에서 채취하였다.
이들의 샘플은 LUNA 5μC18(2)컬럼(Phenomenex, 독일) 상에서 실시한 역상(reversed phase) HPLC에 의해 분석하였다.
용리제로서 희석인산(진한인산 0.1㎖/ℓ)을 유량 0.5㎖/min로 사용하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
실시예 2: 생성균주의 예비배양물
발효에 사용하는 예비배양물로, 테트라사이클린 15㎖/ℓ룰 추가로 포함하는 LB배지(트립톤 10g/ℓ, 이스트엑스 5g/ℓ, NaCl 10g/ℓ)20㎖를 균주 W3110/pACYC184-cysEX-GAPDH-ORF306(특허문헌 EP 0885962A1 명세서에 기재되어 있으며 미국특허출원 09/097759에 대응됨)와 함께 진탕기 인큐베이터(shaker incubator)내에서 온도 30℃와 150rpm에서 배양하였다.
7시간후, 그 얻어진 전체혼합액을 옮겨 글루코오스 5g/ℓ, 비타민 B10.5mg/ℓ 및 테트라사이클린 15mg/ℓ을 보충시키고, 100㎖ SM1 배지로 이입(移入)하였다.
SM1 배지는 다음과 같은 화합물로 조성된 것이다.
K2HPO412g/ℓ, KH2PO43g/ℓ, (NH4)2SO45g/ℓ, MgSO4×7H2O 0.3g/ℓ, Cacl2×2H2O 0.015g/ℓ, FeSO4×7H2O 0.002g/ℓ, 소듐시트레이트 × 2H2O 1g/ℓ, NaCl 0.1g/ℓ, 미량원소용액 1㎖/ℓ 이미량원소용액은 Na2MoO4× 2H2O 0.15g/ℓ, Na3BO32.5g/ℓ, CoCl2× 6H2O 0.7g/ℓ, CuSO4× 5H2O 0.25g/ℓ, MnCl2× 4H2O 1.6g/ℓ, ZnSO4× 7H2O 0.3g/ℓ로 이루어짐.
그 다음 배양은 17시간동안 150rpm으로 온도 30℃에서 실시하였다.
실시예 3: 발효에 의한 O-아세틸- L-세린의 제조
발효조는 상품(Biostat M장치, 독일연방공화국 Melsungen 에 있는 Braun Biotech 회사에서 공급)을 사용하였으며, 최대 배양용량은 2ℓ이다.
발효배지 900㎖를 포함한 발효조에서는 실시예 2의 예비배양물과 함께 600nm의 흡광도(광학밀도) 약 3에서 배양하였다.
그 발효배지는 다음과 같은 성분으로 이루어진 것을 사용하였다.
글루코오스 15g/ℓ, 트립톤 10g/ℓ, 이스트엑스 5g/ℓ, (NH4)2SO45g/ℓ, KH2PO41.5g/ℓ, NaCl 0.5g/ℓ, MgSO4× 7H2O 0.3g/ℓ, CaCl2×2H2O 0.015g/ℓ, FeSO4× 7H2O 0.075g/ℓ, 소듐시트레이트 × 2H2O 1g/ℓ 및 미량원소용액 1㎖/ℓ(위에서 설명한 것과 같음), 비타민 B1 5mg/ℓ 및 테트라사이클린 15mg/ℓ, 25% 암모니아로 PH6.0으로 조정함.
발효중에 온도는 32℃로 설정하였고, PH는 25% 암모니아를 혼합시켜 PH6.0으로 일정하게 유지하였다.
그 배양물에 대하여 살균압축공기를 1.5vol/vol/min의 양으로 처리하고 교반속도 200rpm으로 교반하였다.
산소포화도가 50%로 되었을때 50%의 산소포화도(900rpm에서 100%포화도까지 눈금을 가진 pO2프로브를 사용하여 측정함)를 유지하기 위하여 교반기의 회전속도를 제어장치에 의해 1200rpm으로 증가시켰다.
발효조의 글루코오스함량 (최초에 15g/ℓ이었음)이 약 5~10g/ℓ로 되었을때 즉시 글루코오스 56%용액을 혼합하였다.
공급은 유량 6-12㎖/h로 실사하여 발효조내의 글루코오스농도를 글루코오스분석기(YSI, Yellow Springs, Ohio, USA)에 의해 측정하였다.
발효는 28시간동안 계속하였다.
그 다음으로, 샘플을 제거시켜 배양배지에서 원심분리하였다.
그 결과 얻어진 배양여액을 실시예 1에서와 같이 역상(reversed phase)HPLC에 의해 분석하였다.
다음의 표 1에서는 배양여액에서 얻어진 주요한 대사생성물(metabolic products)의 함량을 나타낸다.
대사생성물 함량 [g/ℓ]
O-아세틸-L-세린 9.0
N-아세틸-L-세린 4.2
2-메틸티아졸리딘-2,4-디카르복실산 1.9
PH 5.5이내의 범위에서 동일한 값을 얻었다.
본 발명에 의해, 발효배지의 pH를 5.1~6.5의 범위로 고정시킴으로써 발효배지에서 발효에 의해 O-아세틸-L-세린을 효과적으로 제조할 수 있다.
본 발명에 의해 발효에 의해 제조할때 발효배지의 pH는 5.5~6.5의 범위를 얻을 수 있고, 피드백억제를 감소시키는 세린아세틸 전이효소를 엔코딩하는 cysE 대립유전자를 사용하여 야생형과 대비할때 O-아세틸-L-세린의 내재적 형성을 증가시킬 수 있으며, ydeD 유전자를 사용하여 야생형과 대비할때 O-아세틸-L-세린의 유출을 증가시킬 수 있다.
본 발명에 의해 미생물균주는 에쉐리키아콜리가 가장 바람직하며, 발효조내에서 연속배양, 배치배양 또는 피드배치(fed-batch)배양으로 성장시킬 수 있다.

Claims (19)

  1. 야생형(wild type)에서 유도되고, 그 야생형과 대비할때 O-아세틸-L-세린의 내생적형성(endogenous formation)의 증가와 O-아세틸-L-세린의 유출(efflux)의 증가를 나타내는 미생물균주를 발효배지에서 배양하는 O-아세틸-L-세린의 발효에 의한 제조방법에 있어서, 발효배지의 pH를 5.1~6.5의 범위로 고정시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서, 발효에 의한 제조를 할때 발효배지의 pH는 5.5~6.5의 범위를 가짐을 특징으로 하는 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서, 야생형과 대비할때 O-아세틸-L-세린의 내재적 형성증가는 피드백억제 (feedback inhibition)을 감소시키는 세린아세틸전이효소를 엔코팅하는 cysE 대립유전자를 사용하여 얻어짐을 특징으로 하는 제조방법.
  4. 제 1항에 있어서, 야생형과 대비할때 O-아세틸-L-세린의 유출증가는 ydeD 유전자를 사용하여 얻어짐을 특징으로 하는 제조방법.
  5. 제 1항에 있어서, 미생물균주는 에쉐리키아콜리(Escherichia coli)임을 특징으로 하는 제조방법.
  6. 제 1항에 있어서, 미생물균주는 발효조내에서 연속배양, 배치(batch)배양, 또는 피드배치(fed-batch)배양으로 성장시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  7. 제 1항에 있어서, 발효배지에는 5~50mM황의 농도에서 황원(S source)을 포함함을 특징으로 하는 제조방법.
  8. 제 1항에 있어서, 발효에 의한 제조를 할때에는 탄소원(C source)을 연속적으로 혼합시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  9. 제 8항에 있어서, 탄소원은 당(sugar), 당알코올 및 유기산의 그룹에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  10. 제 8항 또는 제 9항에 있어서, 탄소원은 글루코오스, 락토오스 및 글리세롤의 그룹에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  11. 제 8항에 있어서, 탄소원은 발효중에 0.1~50g/ℓ의 범위에 있도록 혼합시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  12. 제 1항에 있어서, 암모니아, 암모늄염 또는 단백질 가수분해물을 질소원(N source)으로하여 첨가시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  13. 제 1항에 있어서, 발효배지에는 원소인, 클로린, 소듐, 마그네슘, 질소, 포타슘, 칼슘 또는 철의 염과, 미량(㎛농도)으로 원소 몰리브덴, 보론, 코발트, 만강, 아연 및 니켈의 염을 첨가시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  14. 제 13항에 있어서, 발효배지에는 유기산(아세테이트, 시트레이트), 아미노산(이소류신) 및 비타민(B1, B6)을 첨가함을 특징으로 하는 제조방법.
  15. 제 14항에 있어서, 발효배지에는 이스트엑스(yeast extract),콘스팁리커 (corn steep liquor), 콩가루(soybean meal) 또는 맥아엑스(malt extract)를 첨가시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  16. 제 1항에 있어서, 배양온도는 15~45℃의 범위를 가짐을 특징으로 하는 제조방법.
  17. 제 1항에 있어서, 제조는 호기성성장상태하에서 실시함을 특징으로 하는 제조방법.
  18. 제 17항에 있어서, 호기성성장상태는 압축공기 또는 순수산소에 의해 발효조내에서 산소를 도입시켜 발생시킴을 특징으로 하는 제조방법.
  19. 제 1항에 있어서, 1일 내지 3일간의 발효시간을 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
KR10-2002-0006920A 2001-02-15 2002-02-07 발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법 KR100464906B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10107002A DE10107002A1 (de) 2001-02-15 2001-02-15 Verfahren zur fermentativen Herstellung von O-Acetyl-L-Serin
DE10107002.0 2001-02-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20020067623A true KR20020067623A (ko) 2002-08-23
KR100464906B1 KR100464906B1 (ko) 2005-01-06

Family

ID=7674115

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2002-0006920A KR100464906B1 (ko) 2001-02-15 2002-02-07 발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법

Country Status (14)

Country Link
US (1) US6620598B2 (ko)
EP (1) EP1233067B1 (ko)
JP (1) JP3721136B2 (ko)
KR (1) KR100464906B1 (ko)
CN (1) CN1304585C (ko)
AT (1) ATE267873T1 (ko)
CA (1) CA2372133A1 (ko)
DE (2) DE10107002A1 (ko)
DK (1) DK1233067T3 (ko)
ES (1) ES2222407T3 (ko)
HU (1) HU225826B1 (ko)
MX (1) MXPA02001721A (ko)
SK (1) SK286164B6 (ko)
TW (1) TWI255855B (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1510259A2 (en) 2003-08-28 2005-03-02 Chong Woo Co., Ltd. Spray pump
US7055721B2 (en) 2001-03-23 2006-06-06 Chong Woo Co., Ltd. Finger-operated spray pump ejaculating fluid in fixed quantity
WO2020145513A1 (ko) * 2019-01-11 2020-07-16 씨제이제일제당(주) L-글루포시네이트 중간체 및 l-글루포시네이트 제조 방법

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101505783B (zh) * 2005-11-11 2013-09-04 V·R·钱德兰 作为抗血小板剂、营养补充剂和维生素补充剂的乙酰化氨基酸
KR100905381B1 (ko) 2006-07-28 2009-06-30 씨제이제일제당 (주) Ｌ-메치오닌 전구체 생산 균주 및 상기 ｌ-메치오닌전구체로부터의 ｌ-메치오닌 및 유기산의 생산방법
EP2246420B1 (en) 2008-02-21 2014-12-31 Ajinomoto Co., Inc. L-cysteine-producing bacterium, and method for production of l-cysteine
JP2014131487A (ja) 2011-04-18 2014-07-17 Ajinomoto Co Inc Ｌ−システインの製造法
DE102012216527A1 (de) 2012-09-17 2014-03-20 Wacker Chemie Ag Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure
DE102013209274A1 (de) 2013-05-17 2014-11-20 Wacker Chemie Ag Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Überproduktion von Gamma-Glutamylcystein und Derivaten dieses Dipeptids
CN114075523A (zh) * 2020-07-27 2022-02-22 宁波鲲鹏生物科技有限公司 一种产甘精胰岛素融合蛋白的重组大肠杆菌发酵培养方法
FR3114740B1 (fr) * 2020-10-07 2022-11-04 Institut National De Rech Pour Lagriculture Lalimentation Et Lenvironnement O-acétylsérine pour son utilisation dans la prévention et le traitement de l’intolérance au glucose et les maladies associées
WO2023094011A1 (de) * 2021-11-29 2023-06-01 Wacker Chemie Ag Verfahren zur herstellung von l-cysteinsäure
WO2023094010A1 (de) 2021-11-29 2023-06-01 Wacker Chemie Ag Verfahren zur herstellung von taurin

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19539952A1 (de) * 1995-10-26 1997-04-30 Consortium Elektrochem Ind Verfahren zur Herstellung von O-Acetylserin, L-Cystein und L-Cystein-verwandten Produkten
DE19726083A1 (de) * 1997-06-19 1998-12-24 Consortium Elektrochem Ind Mikroorganismen und Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Cystein, L-Cystin, N-Acetyl-Serin oder Thiazolidinderivaten
RU2144564C1 (ru) 1998-10-13 2000-01-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ
US6613552B1 (en) 1999-01-29 2003-09-02 Board Of Trustees Operating Michigan State University Biocatalytic synthesis of shikimic acid

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7055721B2 (en) 2001-03-23 2006-06-06 Chong Woo Co., Ltd. Finger-operated spray pump ejaculating fluid in fixed quantity
EP1510259A2 (en) 2003-08-28 2005-03-02 Chong Woo Co., Ltd. Spray pump
US6913169B2 (en) 2003-08-28 2005-07-05 Chong Woo Co., Ltd Low profile, fine mist, finger-operated, precompression-type spray pump
WO2020145513A1 (ko) * 2019-01-11 2020-07-16 씨제이제일제당(주) L-글루포시네이트 중간체 및 l-글루포시네이트 제조 방법

Also Published As

Publication number Publication date
CN1304585C (zh) 2007-03-14
JP2002262896A (ja) 2002-09-17
CN1370836A (zh) 2002-09-25
KR100464906B1 (ko) 2005-01-06
MXPA02001721A (es) 2003-08-20
EP1233067B1 (de) 2004-05-26
CA2372133A1 (en) 2002-08-15
HUP0200567A2 (hu) 2003-08-28
TWI255855B (en) 2006-06-01
DE50200471D1 (de) 2004-07-01
DE10107002A1 (de) 2002-08-29
SK286164B6 (sk) 2008-04-07
JP3721136B2 (ja) 2005-11-30
HU225826B1 (en) 2007-10-29
US20020146783A1 (en) 2002-10-10
HU0200567D0 (en) 2002-04-29
DK1233067T3 (da) 2004-08-16
SK2042002A3 (en) 2002-09-10
US6620598B2 (en) 2003-09-16
ES2222407T3 (es) 2005-02-01
HUP0200567A3 (en) 2006-11-28
EP1233067A1 (de) 2002-08-21
ATE267873T1 (de) 2004-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU656416B2 (en) A process for the fermentative preparation of amino acids
KR100546733B1 (ko) 포스포글리세르족의 아미노산 및 아미노산 유도체의 발효생산방법
KR100464906B1 (ko) 발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법
US8802399B2 (en) Method for production of natural L-cysteine by fermentation
US20090298135A1 (en) Method for fermentative production of L-methionine
CN1200110C (zh) 制备非蛋白原l－氨基酸的方法
JP2008054688A (ja) アカルボースの製造のためのオスモル濃度制御発酵方法
US4745059A (en) Process for the preparation of L-phenylalanine
US6133000A (en) Fermentative preparation of amino acids
US20060270004A1 (en) Fermentation processes with low concentrations of carbon-and nitrogen-containing nutrients
KR101752819B1 (ko) L-시스테인 및 아미노산의 유도체의 발효에 의한 생산 방법
Igarashi et al. Excretion of L-tryptophan by analogue-resistant mutants of Pseudomonas hydrogenothermophila TH-1 in autotrophic cultures
KR100222639B1 (ko) 신규한 대장균 변이주 cj 181 및 그를 이용한 l-트립토판 제조방법
KR100427480B1 (ko) Ｌ-쓰레오닌의 제조방법
KR100466253B1 (ko) Ｌ-아르기닌을 대량으로 생산할 수 있는 코리네박테리움글루타미쿰 및 동 균주를 이용한 ｌ-아르기닌의 제조방법
KR20020034755A (ko) 고농도 세팔로스포린 ｃ 생산을 위한 발효배지조성물 및고농도 세팔로스포린 ｃ의 생산방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee