JPH06503844A - 置換チアゾリン−ジオキセタン基質、その製造方法およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 置換チアゾリン−ジオキセタン基質、その製造方法およびその使用本発明は、チ アゾリン−ジオキセタン基質、その製造方法、および酵素分析法におけるその使 用に関する。

ルシフェリン（式１）のルシフェラーゼ、酸素およびＡＴＰとの反応によって、 オキジルシフェリンが形成される。この反応では、ケミルミネッセンスとして光 （最大波長５６２止）が発光する。この方法では、おそら（、式■で示されるジ オキセタンが高エネルギー中間体として形成される［エフ・マクカプラ（Ｆ。

ＭｃＣａｐｒａ）、Ｃｈｅｗ，　Ｃｏｍｍｕｎ．　１５　５　（１９　６　８　 ）］。多くの化学発光性１，２−ジオキセタン化合物が、この前提に基づいて開 発された。アダマンチル残基が、不安定な１，２−ジオキセタンの安定化のため に記載されている［ＥＰ−Ａ　０２５４０５１、ＥＰ−Ａ　０３５２７１３、Ｗ ｏ　９１１０３４７９、ＷＯ　９０１０７５１１、およびそれらに挙げられてい る文献］。しかしながら、親物質として式■で示されるルシフェリンの活性中間 体段階、すなわち、チアゾリン誘導体に基づいている公知化合物は全（ない。

本発明の目的は、安定であり、かつ、活性化剤と反応させた場合にだけケミルミ ネッセンスの形成とともに分解する、チアゾリンの、好ましくはルシフェリンの 、活性中間体段階に基づ＜１，２−ジオキセタンを提供することである。この目 的は、一般式■ 〔式中、Ｒは または のいずれかであり、亀およびＲ２は、同一であっても異なっていてもよ（、水素 または直鎖状もしくは分枝鎖状の低級（Ｃ＋−Ｃｓ）アルキルを表し、Ｘは、活 性化剤によって脱離することができる脱離しつる基であり、基Ｒ４またはＲ５の うち少なくとも１個は、ジオキセタン構造を安定化する基を表し、基Ｒ４または Ｒ，のうちの多くとも１個は、水素を表す］ で示される化合物によって達成される。

活性化剤として、酸、塩基、塩、酵素、無機もしくは有機触媒、および電子供与 体を使用するのが好ましい。

基−ｏ−Ｘは、フェニル環上のいずれの位置にあってもよい。しかしながら、Ｒ がベンゾチアゾール基である場合、基−Ｑ−Ｘは、５位にあるのが好ましい。

Ｒがフェニル基である場合、基−ｏ−Ｘは、３位にあるのが好ましい。これは、 −〇−Ｘ基を形成するーＯＲ３基についても同様である。

−０−Ｘは、オキシ酸のヒドロキシ塩、ホスフェート、アリール−もしくはアキ ルカルボキシルエステル、アルキルオキシまたはアリールシリルオキシ、スルフ ェート、オキシピラノシドであるのが好ましい。

アリールおよびアルキル残基の組成は決定的ではない。当業者は、難無（Ｘにつ いて好適な残基を選択することができる。それは、単に可溶性でなければならな いだけであり、活性化剤によってＸを脱離させることが可能でなければならない 。

Ｒ１およびＲ２は、水素、メチル基またはエチル基であるのが好ましい。例えば 、−〇−Ｘとしてホスフェートを使用する場合は、アルカリホスファターゼの添 加によってケミルミネッセンス反応を生起させることができる。ガラクトシドを 使用する場合は、β−ガラクトシダーゼによってケミルミネッセンスを生起させ ることができる。−〇−Ｘとしてシリルオキシ残基を使用する場合は、フッ化物 の添加によってケミルミネッセンスを生起させることができる。

基Ｒ４および／またはＲ６は、ジオキセタン構造を安定化するのに好適であり、 ジオキセタン基を反応から保護するものである。この安定化は、この基の立体ス クリーニングによって行うのが好ましい。例えば、置換および非置換形態のアダ マンチル、フェニル、シクロヘキシル、第二および第三脂肪族アルキル基（例え ば、ｔ−ブチル基など）が好適である。これに関して、Ｒ４およびＲ３は、同一 であっても異なっていてもよい。アダマンチル残基の場合、これは、Ｒ４および Ｒ５が環構造の部分を示し、したがって、架橋されるような方法で結合されるの が好ましい（式１［ａ）　ニ 一般式■で示される化合物は、新規である。これらの化合物の合成方法は、従前 に知られていなかった。

したがって、本発明は、式■または■ａ：［式中、Ｒ３は、１〜６個の炭素原子 を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキルを表し、好ましくは、メチルまたはエ チルである］で示される化合物を、式Ｖ： ［式中、Ｒ１およびＲ２は、前記定義と同じである］で示される化合物と反応さ せ、それを、水および空気を排除しつつ、アルキルリチウム化合物の存在下でア ルデヒドまたはケトンと反応させ、該反応生成物を脱カルボキシルし、アルコキ シ基を脱アルキルし、当業者に周知の方法に従って、化学的に不安定な一〇−Ｘ 基をこの位置に導入し、それをジオキセタンに光酸化することを特徴とする、式 ■で示される化合物の製造方法にも関する。

式■で示される化合物（アルコキシベンゾチアゾール−２−カルボン酸ニトリル ）またはｒＶａで示される化合物の、式Ｖで示される化合物（好ましくは、ペニ シラミンまたはシスティン）との反応は、光の不在下、室温で、水または水−ア ルコール混合物などの極性溶媒中で行うのが好ましい。

アルデヒドおよびケトンとして好適な化合物は、残基Ｒ４および／またはＲ３と して、式■で示される化合物のジオキセタン構造を安定化するものである。かか る安定化は、ジオキセタン構造の立体スクリーニングによって行うことができる 。

好適なケトンおよびアルデヒドは、例えば、アダマンチルン、ベンズアルデヒド 、シクロヘキサノン、第二および第三脂肪族アルデヒドおよびケトン、例えば、 ジ−ｔ−ブチルケトンである。

Ｒ３の導入は、空気を排除し、かつ、冷却しつつ、このようにして得たチアゾリ ン−カルボン酸のアルデヒドまたはケトンとの反応によって、ＴＨＦなどの非プ ロトン性有機溶媒中で水を排除して行うのが好ましい。これは、−５０〜−１０ ０℃の温度で行うのが特に好ましい。アルキルリチウム化合物は、炭化水素（ペ ンタン、ヘキサン）中溶液として添加するのが好ましい。ブチルリチウムを使用 するのが特に好ましい。反応が終了した後、好ましくは、室温で塩水溶液の添加 によって、得られた化合物を反応混合物から沈殿させる。

このようにして形成したβ−ヒドロキシカルボン酸の脱カルボキシルは、二重結 合を導入するために、脱水条件下で、例えば、アゾジカルボン酸ジエチルエステ ルおよびトリフェニルホスフィンを用いて行うのが好ましい。

例えば、トリメチルヨードシランなどの脱アルキル化剤の添加によって、６′位 で脱アルキルを行うのが好都合である。当該方法は、水を排除して行うのが好ま しい。

チアゾリン−カルボン酸は、好ましくは、同様に、中間体アミンおよびアルコー ル段階を経て、チアゾリン−４−オンに変換し、次いで、スルフィドとの反応に よってチアゾリン−４−チオンに変換することができる。このチアゾリン−４− チオンを、アルデヒドまたはケトンのヒドラゾンと、好ましくは、脱離しつる基 を含有することができるアダマンジノン−２−ヒドラゾンまたはベンズアルデヒ ドヒドラゾン（アダマンタノントシルヒドラゾンまたはベンズアルデヒドトシル ヒドラゾン）と反応させて、式■で示される本発明の化合物を形成する。

Ｒ４および／またはＲ６がフェニル残基、脂肪族残基またはシクロアルキル残基 である式■で示される化合物を製造するために、置換２−フェニル−５，５−ジ アルキル−チアゾリン−４−オンは、グリニャル反応でチアゾリンの４位の二重 結合の次なる導入によって４−置換誘導体に変換することもできる。次いで、以 下に記載のとおり、ジオキセタン基を導入する。

化学的に不安定な基Ｘの導入は、当業者に周知の方法に従って行われる。かかる 方法は、例えば、ヒユーベン−ウニイル（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ）　Ｘ　Ｉ　 Ｉ　／　２に開示されている。

一１００〜５０℃の温度で、塩化メチレンまたはクロロホルムなどの極性有機溶 媒に溶解するのが好ましいアルケン誘導体を反応させ（チアゾリンの２位の二重 結合）、感光剤を使用して可視光を照射することによってジオキセタン基を導入 することが好都合である［例えば、ローズ・ベンガル（Ｒｏｓｅ　Ｂｅｎｇａｌ ）、メチレンブルー、テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌ ｅｔｔｅｒｓ）　（１９８８）３１３７−３１４０を参照コ。

精製のために、例えば、濾過する。上清は、式■で示される所望の化合物を含有 する。

本発明は、さらに、酸、塩基、塩、酵素、無機または有機触媒および電子供与体 を一般式■で示される化合物と反応させ、測定すべき化合物の量の尺度として発 光を測定することによる、酸、塩基、塩、酵素、無機または有機触媒および電子 供与体の測定方法に関する。

この方法は、酵素、特に免疫系中のマーカー酵素測定のために、または、標識Ｄ ＮＡプローブによるＤＮＡ診断のために使用されるのが好ましい。化学的に不安 定な基Ｘがホスフェートである場合にアルカリホスファターゼを測定するのが好 ましく、Ｘがガラクトシドである場合にβ−ガラクトシダーゼを測定するのが好 ましい。

本発明を、以下の実施例によって説明する。

実施例１ ２−（６°−メトキシ−２゛−ベンゾトリアゾリル）−５，５−ジメチル−Δ２ チアゾリンー４−カルボン酸（１）の合成：メタノール約１００＋７に６−メド キシベンゾチアゾールー２−カルボン酸ニトリル２ｇを溶解し、ペニシラミン１ ．６２９のＨ２Ｏ５０ｗ１中溶液を添加する。光の不在下、室温で３時間撹拌し 、次いで、該溶液を酸性化し、濾過する。

収量：１．３９ ＴＬＣ：Ｒｆ（クロロホルム：メタノール：酢酸　９：１：０．１）０．７４゜ 実施例２ ２−（６°−メトキシ−２′−ベンゾチアゾリル）−５，５−ジメチル−４−（ ２゜−ヒドロキシ−２′−アダマンチルΔ２−チアゾリン−４−カルボン酸（２ ）の合成ニ ー７８℃で、窒素下、乾燥ＴＨＦ約１００冨ｌに溶解した化合物（１）１ｇに、 ２倍モル過剰のブチルリチウム−ヘキサン溶液を滴下し、次いで、１時間撹拌す る。次いで、−７８℃で、これに、ＴＨＦに溶解した対応する量の２−アダマン タｉンを添加し、−７８℃で３時間撹拌し、次いで、該反応混合物を、ＨＣＩ　 ２０ｇａｏｌを含有する塩化ナトリウム飽和水溶液１００ｄ’に添加する。

残留物をクロロホルム／エーテルから再結晶する。

収量：　０．５ｇ。

実施例３ ２−（６’−メトキシ−２′−ベンゾチアゾリル）−５，５−ジメチル−４−（ ２゜−アダマンタニリデン）Δ２−チアゾリン（３）の合成：室温で、ＴＨＦ中 、等モル量のＰ（ＣＣａＨｓ）ｓおよびアゾジカルボン酸−ジエチルエステルと の反応によって、ベーターヒドロキシカルボン酸の脱カルボキシルおよび二重結 合の導入を行う［例えば、ムルザー（Ｍｕｌｚｅｒ）、アンゲヴアンテ・ヘミ− （Ａｎｇｅｗ、　Ｃｂｅｍｉｅ）　１９７７を参照］。

２−（６’−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−５，５−ジメチル−４−（ ２’−アダマンタニリデン）Δ２−チアゾリン（４）の合成：乾燥ＣＨＣｌ５１ ０ｍ１に化合物（３）１ｇを溶解し、５０％過剰量のトリメチルヨードシランを 添加する。約７０℃に４８時間加熱し、該反応混合物にメタノールを添加し、該 溶液を回転蒸発する。

残留物を酢酸エチル中に取り、５％ＮａＨＣＯ３溶液と一緒に振盪し、乾燥し、 真空濃縮する。

収量：　０．２５９゜ 実施例４ ２−（６°−ホスホリル−２゛−ベンゾチアゾリル）−５，５−ジメチル−４− （２゛−アダマンタニリデン）Δ２−チアゾリン（５）の合成：通常の文献方法 を使用して、（４）のホスホリル化を行う。例えば、ヒユーベン−ウニイル（Ｈ ｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ）　Ｘ　Ｉ　Ｉ／　２を参照。

実施例５ １−［２’−（６”−ホスホリル−２”−ベンゾチアゾリル）−５’、５°−ジ メチル−Δ２−チアゾリニルー］−２−（２”−スピロアダマンチル）−ジオキ セタン（６）の合成： （５）を光酸化するため、塩化メチレン１０ｍ１に溶解したアルケン１０諺９に 固定したローズ・ベンガル（ポリサイエンス（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅ））を添 加し、これに−７８℃で１時間、１０００ワツトのランプで照射する。反応は、 定量的に進行する。ローズ・ベンガル感光剤は、濾過によって容易に除去できる 。

実施例６ ２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン−４−カルボン酸それ は、Ｃｈｅｖａ、　Ｚｔｇ、　１９８７．１１１．３５７と同様に製造する。

ペニシラミン３３　、５　ｍｍｏｌ、アルコキシニトリル３３．５＋ｍｏｌおよ び炭酸カリウム１６．７ａ＋ａ＋ｏｌを、還流下で１２時間、水２５翼ｌを含有 するメタノール５０露ｌの混合物中、加熱して沸騰させた。冷却後、半分に真空 蒸発する。該混合物をエーテル５０ｍ１で１回洗浄した。分離した水性相を、濃 塩酸でｐＨ４に調節した。この工程で、薄黄色の沈殿物が形成され、これを吸引 し、少量の水で１回洗浄し、６０℃で真空乾燥した。

収量：５０〜６０％。

実施例７ ２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン−４−カルボン酸アミ ド ０℃で、アルコキシフェニル−チアゾリンカルボン酸４ｍｍｏｌの塩化メチレン １０ｍ１中懸濁液に塩化オキサリル４　ｉｍｏｌを添加した。この温度で３０分 間撹拌した後、−２０℃で５分間、アンモニアの緩流を通した。室温に加熱した 後、該懸濁液を塩化メチレン２０ｍ１で希釈した。該混合物をＩＮ水酸化ナトリ ウム溶液１０ｍ１で１回洗浄し、次いで、水２Ｑｍｌで２回洗浄した。有機相を 硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸留によって除去した後、油状物が残存し、 これを、少量の酢酸エチルから再結晶した（収量二６０〜８０％）。

実施例８ ４−アミノ−２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン０℃で、 ３Ｎ水酸化ナトリウムｇｍｉに臭素４，８１６１０１を溶解した。０℃で、この 混合物に２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリンカルボン酸ア ミド４，４ｍａ＋ｏｌを添加し、この温度で３０分間、次いで、７０℃で２０分 間撹拌した。水２０鳳１で希釈した後、酢酸エチル４０諺ｌと一緒に振盪して抽 出する。

有機相を毎回水１５ｍＡ’で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸 留によって除去した後、油状物が残存し、これをエタノール／水（１：　１）か ら再結晶した（収量＝７０〜８５％）。

実施例９ ４−ヒドロキシ−２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン０℃ で、アミノ−２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアジンン１４．５ ＋ａａ＋ｏｌの中漬（ｈａｌｆ−ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ）塩酸３２ｍ１中溶 液に亜硝酸ナトリウム１５龍０１を添加し、この温度で２０分間撹拌した。３Ｎ 水酸化ナトリウム溶液で中和した後、毎回酢酸３０ｍ１と一緒に２回振盪した。

有機相を水２Ｑ＊ｌで１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸留によ って除去した後、油状物が残存し、これをカラムクロマトグラフィーによって分 離した（シリカゲル、酢酸エチル／石油エーテル（１：１））（収量７５〜８０ ％）。

実施例１０ ２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン−４−オントルエン１ ６０ｍ１に４−ヒドロキシ−２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チア ゾリンｌ１ｍｍｏｌおよびシクロヘプタノン３４ｗｏｌを溶解した。トルエン４ ０ｄを蒸留によって除去した後、アルミニウムトリイソプロピラード９龍０１を 添加し、混合物を、還流下で３時間加熱して沸騰させた。室温に冷却した後、酢 酸エチル１００ｍｊを添加し、混合物を毎回水５Ｑｍｌで２回洗浄した。合わせ た水性相を酢酸エチル５Ｑｍｌで１回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウ ムで乾燥した後、溶媒を蒸留によって除去した。カラムクロマトグラフィー（シ リカゲル、酢酸エチル／石油エーテル（１：　４））によって、残存する油状物 からチアゾリノンを分離した。

実施例１１ ２−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン−４−千オン２−アル コキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン−４−オン５ａｍｏｌおよび２ ．４−（４−ビス−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフエ タンー２．４−ジスルフィドｌ１ｍ■ｏ１を、還流下で８時間、トルエン１０ｍ １中で加熱して沸騰させた。冷却後、該反応混合物をカラムクロマトグラフィー （シリカゲル、酢酸エチル／石油エーテル（１：　６））によって分離した（収 量：３０〜４０％）。

実施例１２ アダマンタン−２−トシルヒドラゾン トシルヒドラジド３．４龍ｏ１およびアダマンタン３．３ａ＋ｍｏｌおよび濃硫 酸１滴を、還流下で４時間、エタノール１０■ｌ中で加熱して沸騰させた。室温 に冷却した後、体積１富ｌに真空蒸発した。水２０厘！で希釈し、２Ｎ水酸化ナ トリウム溶液で中和した。該混合物を毎回酢酸エチル２９ｍ１と一緒に２回振盪 した。合わせた有機相を水２０ｍ１で１回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウムで乾 燥した。該溶液を体積４ｍｌに蒸発濃縮し、４℃で１５時間放置した。無色の針 状物が沈殿した（収量：４０％）。

４−（２’−アダマンタニリデンーアルコキンフェニル−５，５−ジメチルーチ メタノール性０．２Ｍナトリウムメチラート溶液ＩＱｇＪにアダマンタントシル ヒドラゾン２ｍ５ｏｌを添加し、次いで、これをジグリム２０藁！で希釈した。

メタノールを蒸留によって除去した後、ＴＬＣでトシルヒドラゾンがもはや検出 されなくなるまで、１２０℃に加熱した。この温度で２−アルコキシフェニル− ５，５−ジメチル−チアゾリン−４−チオン２ＩＩＩＩＯ１を添加し、１５分間 撹拌した。次いで、銅粉末１ｇを添加し、該混合物を１５０℃でさらに２０分間 撹拌した。冷却後、水１００麿Ｊを添加し、該混合物を毎回酢酸エチル５ＱｍＪ で３回抽出した。合わせた有機相を水３０ｍ１で１回洗浄し、次いで、硫酸ナト リウムで乾燥した。溶媒を蒸留によって除去した後、油状物が残存し、これをカ ラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／石油エーテル（１：　６） ）によって分離した（収量２０％）。

実施例１４ ４−ベンジル−４−ヒドロキシ−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チア ゾリン エーテル性０．２Ｍ塩化マグネシウムベンジル溶液５Ｑｗｌに２−アルコキシフ ェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン−４−オン（実施例１０）５ｍｍｏｌを 添加し、該混合物を、還流下で８時間、加熱して沸騰させた。水２０ｄを添加し た後、有機相を分離し、水２０ｍ１で１回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウムで乾 燥した。蒸留によって溶媒を除去した後、油状物が残存し、これを、カラムクロ マトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／石油エーテル（１：　５））によっ て分離した（収量３０％）。

実施例１５ ４−ベンジリデン−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン４−ベ ンジル−４−ヒドロキシ−アルコキシフェニル−５，５−ジメチル−チアゾリン （実施例１４）２ｍｍｏｌの酢酸エチル２Ｑｄ中溶液を、中漬塩酸２０１ａｌと 一緒に５分間振盪した。２Ｎ水酸化ナトリウム溶液による中和の後、有機相を分 離し、水２Ｑ諺１で１回洗浄し、次いで、硫酸ナトリウムで乾燥した。蒸留によ って溶媒を除去した後、油状物が残存し、これをカラムクロマトグラフィー（シ リカゲル、酢酸エチル／石油エーテル（１：　４））によって分離した（収量６ ０％）。

手続補正書

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式ＩＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）［式中、Ｒは ▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ を表し、Ｒ１およびＲ２は、同一であっても異なっていてもよく、水素または直 鎖状もしくは分枝鎖状の低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを表し、Ｘは脱離しうる基 であり、基Ｒ４またはＲ５の少なくとも１つは、ジオキセタン構造を安定化する 基を表し、基Ｒ４またはＲ５の多くとも１つは、水素を表す］で示される化合物 。
2. ２．ジオキセタン構造を安定化する基がアダマンチル、フェニルもしくはシクロ ヘキシル残基または第二もしくは第三アルキル残基である請求項１記載の化合物 。
3. ３．−Ｏ−Ｘがヒドロキシ塩、オキシ酸、ホスフェート、アリルもしくはアルキ ルカルボン酸エステル、アルキルオキシ、トリアルキルオキシまたはアリールシ リルオキシ、スルフェートまたはオキシピラノシドを表す請求項１または２記載 の化合物。
4. ４．式ＩＶまたはＩＶａ： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＶ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ＩＶａ）［式中、Ｒ３は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状 のアルキルを表す］ で示される化合物を、式Ｖ： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々、同 一であっても異なっていてもよく、水素または直鎖状もしくは分枝鎖状の低級（ Ｃ１〜Ｃ６）アルキルを表す］で示される化合物と反応させ、それを、アルキル リチウム化合物の存在下、アルデヒドまたはケトンと反応させ、該反応生成物を 脱カルボキシルし、アルコキシ残基を脱アルキルし、この位置に脱離しうる基− Ｏ−Ｘを導入し、それを光酸化することを特徴とする、一般式ＩＩＩで示される 化合物の製造方法。
5. ５．Ｒ３がメチルまたはエチルを表す式ＩＶまたはＩＶａで示される化合物を使 用する請求項４記載の方法。
6. ６．アルデヒドまたはケトン残基の導入が、空気の不在下で、５０〜−１００℃ の温度に冷却しつつ、非プロトン性有機溶媒中で行われる請求項４または５記載 の方法。
7. ７．Ｒ３が１〜６個の炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状アルキルを表す 式ＩＶまたはＩＶａで示される化合物を、Ｒ１およびＲ２がそれぞれ同一であっ ても異なっていてもよく、水素または直鎖状もしくは分枝鎖状のＣ１〜Ｃ６アル キルである式Ｖで示される化合物と反応させ、得られたチアゾリンカルボン酸を 、チアゾリン−４−オンに還元し、スルフィドを用いてチアゾリン−４−チオン に変換し、これを、Ｒ４および／またはＲ５−置換ヒドラゾンと反応させて本発 明の式ＩＩＩで示される化合物を形成し、アルコキシ残基をアルキル化し、脱離 しうる基−Ｏ−Ｘをこの位置で導入し、それを光酸化することを特徴とする、一 般式ＩＩＩで示される化合物の製造方法。
8. ８．Ｒ３が１〜６個の炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状のアルキルを表 す式ＩＶまたはＩＶａで示される化合物を、Ｒ１およびＲ２がそれぞれ同一であ っても異なっていてもよく、水素または直鎖状もしくは分枝鎖状のＣ１〜Ｃ６ア ルキルを表す式Ｖで示される化合物と反応させ、得られたチアゾリンカルボン酸 を還元してチアゾリン−４−オンを形成し、Ｒ４および／またはＲ５残基をグリ ニヤル反応で導入し、チアゾリン環の４位に二重結合を導入し、アルコキシ残基 を脱アルキルし、脱離しうる基−Ｏ−Ｘをこの位置で導入し、次いで、光酸化し 、この方法で式ＩＩＩで示される化合物を得ることを特徴とする、Ｒ４および／ またはＲ５がフェニルを表す式ＩＩＩで示される化合物の製造方法。
9. ９．アナライトを一般式ＩＩＩで示される化合物と反応させ、基Ｘを脱離させ、 測定すべき化合物の含量についての尺度として発光を測定することからなる、酸 、塩基、塩、酵素、無機もしくは有機触媒または電子供与体の測定方法。
10. １０．免疫学的アッセイにおける、またはＤＮＡ診断のための、請求項１または ２記載の化合物の使用。