JPH0338587A - 酸化反応を触媒する標識化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木発Ｌ１１１は、核酸やタンパク質の化学発光による微
量検出のためのａ規ポルフィリン金属紹体化合物に関す
るものである０分子生物学における核酸やタンパク質な
どを取り扱う各種実験において、２　３５ 現在、　　Ｐや　　Ｓなどの放射性同位元素はこうした
生体成分のラベル化に欠かせないものとなっている。こ
れらの放射性同位元素はラベルした化合物の性質がほと
んど変化しないことと、長時Ｉｉ′１積算することによ
り極めて微量の化合物が検出できることにおいて潰れて
いるが、人体や環境に及ぼす危険性や得られたラベル体
の不安定さに問題があり、放射性同位元素を用いないラ
ベル化法の開発が積極的に検討されている。すでに蛍光
色素を導入したものやペルオキシダーゼ等の酵素を導入
し、酸化発色試薬あるいは化学発光で検出するシステム
などが考案されている。しかしながら、これらのシステ
ムは従来の放射性同位元素を用いるものに比べて簡便さ
に欠ける、あるいは酵素をラベルした場合標識体の性質
が変化するなどの点にＪ３いて改良の余地がある。

すでに非放射性同位元素標識用のＤＮＡプローブ作成キ
ットが数社から出されている。これはビオチンを用いた
間接標識で行い、ペルオキシダーゼあるいはアルカリホ
スファターゼ標識したアビジンと結合させＮＴＢ等の色
素で検出するもの、あるいは直接ペルオキシダーゼで標
識しＤＮＡプローブとしルミノール−過酸化水素で生じ
る化学発光を検出するものなどである。得られる検出限
界は、ＤＮＡ量として０．１〜０．２ｐｇと高く放射性
同位元素＃！Ａａのものと比較して同等あるいはそれ以
上の感度を有している。ペルオキシダーゼの場合にはエ
ンハンサ−を用いて感度を向上させている。

現在、化学発光をＤＮＡプローブに応用しているシステ
ムとしては、ペルオキシダーゼをＤＮＡに標識してルミ
ノール−過酸化水素で発光させＸ線フィルムに生じた発
光を写しとるものがある（アマジャム社）、これはペル
オキシダーゼをポリアミンに固定したものをさらにＤＮ
Ａに付加することにより標識する方法をとっている。こ
の方法は、ｔｌ１体の分子量が致方以上と大きく、比較
的短いＤＮＡフラグメントを１０−ブとする場合にはこ
のことは非常に不利である。また、酵素をＩｎいている
点で標識体が不安定であり長期間の保７ｆに耐えない点
も問題となる。

以上のことから、すでに実用化されているシステムに代
わる新規なりＮＡ１０−プの開発を行う必要があり、高
感度分析が可能と思われる化学発光を利用したＤＮＡプ
・ローブの研究を行い今回、簡便にラベル化でき、分子
量が小さく、しかも安定な標識体が得られる新規ポルフ
ィリン金Ｈ４ｎ体化合物を開発するに至った。これら化
合物を用い、（：）られたＤＮ八へローブをドツトハイ
ブリダイゼーション及び、サザンハイプリダイゼーショ
ンに使用し、生じた化学発光を写真フィルムで検出し良
好な結果を得た。この化学発光はフォトンカウンター等
を用いて計測しても同機な結果が得られる。また、これ
ら化合物はタンパク質検出にも利用できる。これら化合
物を標識に用いるシステムはＭ索をまったく使用しない
点にあり、したがって、標識体は長期間安定でありキッ
ト化する場合にも有利であると思われる。また、金属触
媒で標識するため酵素と比較してその分子量が小さいこ
とから核酸やタンパク質の性質に及ぼす影響が少ないと
いった特徴がある。

本発明化合物で標識した化合物は過酸化水素、過はう酸
イオン、または酸素が物質を酸化する反応を触媒する。

従って、この本発明化合物で標識した化合物は、過酸化
水素、過はう酸イオンあるいは酸素の存在下で化学発光
試薬、酸化発色試薬等を共７ｔさぜることにより生じる
、化学発光あるいは色素等として検出できる０本発明化
合物が触媒する代表的な化学発光試薬としては、ルミノ
ール誘導体が挙げられ、酸化発色試薬としてはアニリン
系誘導体が挙げられる。また被標識化合物としては生体
関連物質である核酸、タンパク質またはオリゴペプチド
などが挙げられる０本発明化合物は一般に水系の溶媒を
用いて被標識化合物と反応させる。官能基のＦＪｉ類に
よりＤＣＣ（ジシクロへキシルカルボジイミド）、ＷＳ
Ｃ（水溶性カルボジイミドニジメチルアミノプロビルエ
チルカルポジイミド塩酸塩）等の縮合剤を用いる場合も
ある０本発明に使用されるポルフィリン系金！！錯体は
上記化合物に限定されるものではなく２種類以上を使用
することもできる０本発明化合物はｆｌｌｌ鎖官能基を
４１し、これにより目的とする被１ｆｉ識化合物と直接
またはスペーサーを介して結合する。スペーサーとして
は末端ジアミノアルキル、アミノカルボン酸、ジボルミ
ル化合物、ジカルボン酸、ジカルボン酸クロリド、ジハ
ロゲン化アルキルキノンフェニレンジアミン、ジスルホ
ン酸クロリド、ジイソシアナト化合物等の二官能性試薬
を用いる．以下、−置換ポルフィリン誘導体、四置換ポ
ルフィリン誘導体、−置換フタロシアニン誘導体、四置
換フタロシアニン誘導体に分類し、それぞれ実施例を挙
げ詐細に説明する。

ポルフィリン　　　の−　　八 置換基Ｒ（Ｒは一般梢造式中のＸの形成に必要な任意の
官能基）をイｒするベンズアルデヒド、チオフェンカル
ボキシアルデヒド、あるいはフラアルデヒドと、Ｒを有
しないベンズアルデヒド、チオフェンカルボキシアルデ
ヒド、あるいはフラアルデヒドとをモル比で１＝３にな
るように有機酸性溶媒中で混合し，これを加熱しながら
ビロールを滴下する．ビロールはλを有するアルデヒド
化合物の４倍モル量を用いる．また、ピリジルアルデヒ
ドを用いる場合はピリジルアルデヒドとビロールを等モ
ル混合し同様の反応操作を行う．有機酸性溶媒としては
プロピオン酸が一般に適当である．滴下後、数時間加熱
し、放冷ｆ＆濃縮して得られた固体を有機酸、メタノー
ル、熱水等で洗浄、あるいはクロロホルム等に溶解し不
溶物を隨いたのち、一般にシリカゲルカラムクロマ１へ
グラフにより６テ製する．得られたポルフィリン誘導体
を等モルの任意の金属塩あるい１ま金属アセチルアセト
ナト銘体の金属化合物と共に有機溶媒中で反応させる．
イ［゛機溶媒としては酢酸、ベンゼン、ピリジン等が一
般に適当である．反応後生成した沈殿をｐ収し酢酸、ベ
ンゼン、ピリジン等の有機溶媒で洗１１，あるいは再結
晶し置換ポルフィリン錯体を合成する。

分子内置換基Ｒはそのまま、もしくはｆｆ意の官能基に
変換した後、−殻構造式中のＹとして用いるか、あるい
は、そのまま、もしくは任意の官能基に変換後、一般横
遣式中のＸ−Ｌの形成に必要な試薬とともに溶媒中で反
応しクロマトグラフによりｆ１？　製する．ただし、テ
トラピリジルポルフィリン錯体の場合は等モルの試薬と
反応させ、シリカゲルカラムクロマトグラフで精製する
ことにより、４つのピリジン環の１つに置換基Ｒを導入
し、−置換ポルフィリン誘導体を合成する．その場合の
置換基Ｒも同様にそのまま、あるいは任意の官能基に変
換して一般構造中のＹあるいはＸ−Ｌの形成に用いる。

側鎖を導入した場合、その末端官能基は、そのまま、も
しく！；ｋｆｒ：意の官能基に交換して一般構造中のＹ
とする。

ＪＲｌｌｒ　ｍ式中のＸ−Ｌ−Ｙについては、そのうち
の数種について実施例の項で詳細を記す。

以下に合成した新規ポルフィリン錯体化合物の一部を示
す。

α−（４−アミノエチルカルバモイルフェニル）−β、
γ、δ−トリフェニルポルフィナトＦｅ（ＩＩＩ）青紫
色結晶 α−（４−アミノエチルカルバモイルフェニル）−β、
７・、δ−トリフェニルポルフィナトＣｕ（ＩＩ）紫色
結晶 α−（４−アミノエチルカルバモイルフェニル）−β、
γ、δ−トリフェニルポルフィナトＣ０（Ｉｌ［）紫色
結晶 α−（４−アミノエチルカルバモイルフェニル）−β、
γ、δ−トリフェニルポルフィナトＺｎ（ｎ）青紫色結
晶 α−（４−インシアナトプロピルカルバモイルフェニル
）−β、γ、δ−トリフェニルボルフィナ１−Ｆｅ（Ｉ
ＩＩ）黒紫色結晶 α−（４−インシアナトプロピルカルバモイルフェニル
〉−β、γ、δ−トリフェニルポルフィナトＣｒ（Ｉｌ
ｌ）ｆｆ紫色結晶 α−（４−インシアナトプロピルカルバモイル）工二ル
）−β、γ、δ−１−リフェニルボルフィナ）−Ｍｎ（
■）紫色結晶 α−（４−ホルミルブチルアミノフェニル）−β。

γ、δ−トリフェニルポルフィナトＦｅ（（［１）青紫
色結晶 α−（４−ホルミルブチルアミノフェニル）−β。

Ｔ、δ−トリフェニルポルフィナトＮ１（ｎ）青紫色結
晶 α−（４−ホルミルプロビルアミドエチル力ルバモイル
フエニルンーβ、γ、δ−トリフェニルポルフィナトＦ
ｅ　（ＩＩＩ）青紫色結晶α−（４−ホルミルプロピル
アミドエチル力ルバモイルフェニルンーβ、γ、δ−ト
リフェニルポルフィナトＣｒ（ＩＩＩ）Ｐｔ紫色結品α
−（４−ホルミルプロピルアミドエチルカルバモイルフ
ェニル〉−β、γ、δ−トリフェニルポルフィナトＯｓ
　（ＩＩＩ）ＪＸＬ青色結晶α−（４−カルボキシフェ
ニル）〜β、γ、δトリフェニルポルフィナトＦｅ（Ｉ
ＩＩ）紫色結晶α−（４−カルボキシフェニル）−β、
γ、δ−トリフェニルボルフィナトＣｒ（Ｉｎ）黒青色
結晶α−（４−カルボキシフェニル）−β、γ、δ−１
−リフエ；ルボルフィナトＣｏ　（ＩＩ）青紫色結晶α
−（４−カルポキシフェニルンーβ、γ、δトリフェニ
ルポルフィナトＺｎ　（ＩＩ）紫色結晶α−（４−アミ
ノフェニル）−β、γ、δ−トリフェニルポルフィナト
Ｆｅ　（ＩＩＩ）紫色結晶α−（４−アミノフェニル）
−β、γ、δ−トリフェニルポルフィナト α−（４−アミノフェニル）−β．γ，δートリフェニ
ルポルフィナトＺｎ　（ＩＦ）青紫色結晶ａ−（４−ア
ミノフェニル）−β，γ，δートリフヱニルボルフィナ
トＣｏ（ＩＩ）１′を紫色結晶α−＋４−（４−ニトロ
フェニルオキシカルボニル）フェニル）−β，γ，δー
トリフェニルポルフィナトＦｅ（ＩＩＩ’）黒１ｒ色結
品α−１４−（４−ニトロフェニルオキシカルボニル〉
フェニル）−β，γ，δートリフェニルポルフィナトＭ
ｏ　（Ｖ）青紫色結晶 α−（／Ｉ−クロロカルボニルフェニル）−β．γ。

δ−トリフェニルポルフィナトＦｅ　（ＩＩＩ）青紫色
結晶 α−（４−クロロカルボニルフェニル）−β．γ。

δートリフェニルボリフィナトＺｎ　Ｎｌ）紫色結晶 ａ−（４−スクシンイミジルオキシカルボ、ニルフェニ
ル〉−β，γ．δートリフェニルボルフィナトドｅ（Ｉ
ＩＩ）青紫色結晶 α−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルフェニル
）−β，γ，δートリフェニルポルフィナトＭｎ　（ｆ
ｆ）紫色結晶 α−＋４−（Ｎ−サクシンイミドキシホルミルエデル）
ピリジル）−β、γ、δ−トリスく４−ピリジル）ポル
フィナトＦｅ（１０）青紫色結晶α−＋４−（Ｎ−サク
シンイミドキシホルミルエチｌレンビリジル１−β、γ
、δ−トリス〈４−ピリジル）ポルフィナトＣｄ（■）
紫色結晶α−（３−アミノ（２−チエニル））−β、γ
。

δ−トリス（２−チエニル）ポルフィナトＦｅ（ＩＩＩ
）黒青色結晶 α−（３−アミノ（２−チエニル））−β、γ。

δ−トリス（２−チエニル）ポルフィナトＭ。

（Ｖ　）　ｉ７紫色結晶 α−（３−アミノ（２−チエニル））−β、γ。

δ−トリス（２−チエニル）ポルフィナト０ｓ（Ｉ［［
）黒青色結晶 以下に、実施例を挙げてより詐綱に説明する。

実施（３’Ｎ１ １−１．α−（４−アミノエチルカルバモイルフェニル
〉−β、γ、δ−トリフェニルポルフィナトＦｅ　（Ｉ
ＩＩ）　１の合成 無水酢酸１１．３ｇとプロピオ７６２００ｍ１に４−カ
ルボキシベンズアルデヒド３．７５ｇ、ベンズアルデヒ
ド７．９６ｇを加え１２０℃で加熱しながら、ビロール
６．７１ｇを１０分かけて滴下した０滴下後、２時間１
２０℃で攪拌した後、室温にて放冷し減圧濃縮した。１
？Ｆられた固体はシリカゲルカラムクロマトグラフ（展
開溶媒：２％メタノール＋１％酢酸／クロロホルム）に
より精製した。このα−（４−カルボキシフェニル）−
β、γ、δ−トリフェニルポルフィン２００ｍｇを８０
０ｍ１の酢酸に溶解し、塩化第二鉄６水和物９０　ｎｉ
　ｇおよび塩化水銀５　ｒｎ　ｇを加え１２０℃で１６
時間加熱攪拌した。放冷後生じた結晶をＰ取し酢酸で洗
浄し乾燥した。このα−（４−カルボキシフェニル）−
β、γ、δ−トリフェニルポルフィナトＦｅ　（Ｉｌり
１５０ｍｇ、およびエチレンジアミン嘔ｆＩｉ塩２．１
３ｇをＴＨＦ　：　Ｈ２０＝１：１の混合溶媒１５ｍ１
に溶解しＷＳｅ２．１０ｇを加え室温で２４時間攪拌し
た０反応混合物を濃縮し残香をＯ，ＩＮのＮ　ａ　ＯＨ
水溶液２０ｍ１に懸濁し、沈殿物を遠沈により分離した
。得られた固体を乾燥し、化合物上を得た。

１−２．化合物上でＦ５識したＤＮＡの化学発光法によ
る検出（１〉 λフアージＤＮＡ　（Ｈｉ　ｎｄｌ［［で切断）（以下
λフアージＤＮＡとする）１０μｇ　／　２０μｍ水溶
液、２．５Ｘ１０−４Ｍの化合物上を８μｍ、及び０．
０５％のグルタルアルデヒド３μｍを混合し、溶液量を
５０ノｚｌとし４２℃で１０分間反応させ、ＤＮＡを標
識した０反応後、エタノール１００μｌおよび３Ｍ酢酸
ナトリウム（ｐＨ５）水溶液５μＩを加え、ドライアイ
ス中で１時間冷却し生じた標識ＤＮＡの沈殿を遠心分離
により回収した。得られたヘレットを水５０μｍに溶解
し遠心分離して上ｉｔｌをとりＤＮＡプローブ溶液とし
た。

ニトロセルロースフィルター上に、λフアージＤＮＡ１
がｌＯｐｇ、ｌｏｏｐｇ、ｌｎｇ、１０ｎｇ、１１００
ｎとなるようにスポットし減圧下８０℃で焼き付けるこ
とにより国定した。このフィルターをヒートシールバッ
グに入れ、プレハイブリダイゼーションｈｌＥＲ液２ｍ
ｌを加え、４２℃の水浴中で２時！５１．ついでこの桜
析液に作成したＤＮＡ１０一ブ１０μｍを加え、１６１
１．’？間インキュベートした。つぎに、１．７Ｘ１０
−５Ｍルミノール、１０　ｍ　Ｍ　Ｋ　ＯＩ−１，５ｍ
Ｍはう酸、及び、過酸化水素０．００５％を含む溶液に
ハイブリダイゼーションしたニトロセルロースフィルタ
ーを浸し、直ちにプラスチック薄膜（たとえばサランラ
ップなど）を介して、生じた化学発光をインスタントフ
ィルムに写しとった。インスタントフィルムはポラロイ
ド社の６（２フイルム（ｌｓＯ２ｏ、ｏｏｏ＞を用い、
露光時間は１０分間とした。

現像した結果、スポットしたＤＮＡｆｆ１は１０ｐｇで
も検出可能であった。

ｌ−３，化合物上で標識したＤＮＡの化学発光法による
検出（２〉 実施１１Ｍｌ−２においてハイブリダイゼーション後の
二ｌ・ロセルロースフィルターを各スポット毎に切断し
、それぞれのフィルターを発光液（組成４！実施例１−
２と同様）に浸し、１分後にその化早発光をフォトンカ
ウンターく浜松ホトニクス社製〉を用いて１０分間計測
した。その結果、１０ｐｇのＤＮＡを検出できた。

実施ＰＡ２ ２−１．α−（４−インチオシアナトエチルカルバモイ
ルフェニル）−β、γ、δ−トリフェニルボルフィナｔ
・Ｆｅ（ｎｌ）２の合成 二硫化炭素１００　ｍ　ｇ、トリエチルアミン１ｍ１、
を混合し、これに実施例１で合成した、α（４−アミノ
エチルカルバモイルフェニル）−β。

γ、δ−トリフェニルポルフィナトＦｅ（ＩＩＩ）の結
晶１００　ｍ　ｇを１　ｒｎ　ＩのＴ　ＩＩＩ”に溶解
し、０℃で加えた。３０Ｊ））ｌ’ｌ拌後、生じた沈殿
をｐ遇し乾燥した。これをクロロボルム８ｍｌに溶かし
１〜リ工チルアミン１ｍｌを加え０℃でクロロギ酸エチ
ル０．１ｍｌを加え１時間反応させた。クロロホルム相
を３Ｍｊ！！酸で洗浄し、クロロポルムを留去して得ら
れた結晶をシリカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒
：酢酸エチル〉により桔製し、化合物ｌを得た。

２−２．化合物２で標識したタンパク質の化学発光によ
る検出 ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）５．０ｍｇを含むｐＨ７
，２のりん酸桜街液１ｍｌに１ｍｇの化合物ｌをＤＭＳ
Ｏ１００μｍに溶かして加え、室温で１時間振とうしＨ
ＳＡをｖＡ識した。これはセファデックスＧ　５０によ
りｌ、ｋＩｔＪ　Ｌ凍結乾燥し、ｐｔ１７．２のりんａ
　桜ｍ液１　ｍ　ｌに溶解した。９６穴マイクロタイタ
ープレートにそれぞれ、ｌｐｇ、１０ｐｇ、１００ｐｇ
、ｌｎｇ、Ｌｏｎｇ、および１１００ｎの標識＋１３Ａ
が含まれるように上記溶液を入れ、全量が１００μｌに
なるようにｐ　ｌ−１７，２のりん酸）ＪＥｆｆｒ液を
それぞれ加えた。つぎに、３．４Ｘ１０−５Ｍルミノー
ル、２０ｍＭＫＯＨ１１０ｍＭはう酸、０．０１％過酸
化水素を含む溶液１００μｍを加え、生じた化学発光を
インスタントフィルムに写しとった。インスタントフィ
ルムはポラロイド社の６１２フイルムを用い、露光時間
は１０分間とした。現像した結果、標識ＨＳＡ量１ρｇ
を検出できた。

実施例３ ３−１．α−（４−アミノエチルカルバモイルフェニル
）−β、γ、δ−トリフェニルボルフイナ１−Ｃｏ（Ｉ
ｆ）旦の合成 実施ＰＡｌと同様の操作で合成した。但し、金属塩とし
て塩化コバルト（ＩＩ）を用いた。

３−２．（ヒ合物ユでＦＩＡ識したＤＮＡの化学発光法
による検出 実施例１と同様の操作によりλフアージＤＮＡを用い化
合物１で標識した。また、検出法もルミノールを用い実
Ａ［１と同様に行い、５ｉＤＮＡを用いてλファージＤ
　Ｎ　Ａ　ｉｌｌ　Ｏｐ　ｇを検出できた。

実施例４ ４−１．α−（４−インチオシアナトエチルカルバモイ
ルフェニル ボルフィナｌ−Ｃｕ（ＩＩ）４の合成 ″Ａ施例２と同様の操作で合成した．但し、金属塩とし
て塩化第二銅を用いた。

４−２．化合物まで標識したタンパク質の化学発光法に
よる検出 実施例２と同様の操作に上りＩＩ　Ｓ　Ａを用いずヒ合
物まで標識した．また、検出法もルミノールを用い実施
例２と同様に行い、標識ＨＳＡ量１００ｐｇまでを検出
できた。

実施ｅＡ５ ５−１．α−１−（Ｎ−サクシンイミドキシホルミルエ
チル）ピリジル）−β，γ．δ−トリス（４−ピリジル
）ポルフィナトｌ；’ｅ（ｎｌ）５の合成 無水酸Ｍ１１．３ｇ、１０ピオン酸２００ｍｌに４−ピ
リジンカルボキシアルデヒド１０．７ｇを加え１２０℃
で加熱しながら、６．７１ｇのビロールを１０分かけて
滴下した．滴下後，２時間１２０℃で攪拌した後、室温
にて放冷し生じた沈殿を２ｉｊ収し、メタノールおよび
水で洗浄し乾燥した．このα，β．γ．δーテ１ーラキ
ス（４−ピリジル）ポルフィン１．０ｇをピリジン１０
０ｍｌに溶解し、塩化第二鉄６水和物４８０ｍｇを加え
１２０℃で１６時間加熱攪拌した。放冷後、減圧濃縮し
た。得られたα、β、γ、δ−テトラキス（４−ピリジ
ル）ポルフィナトＦｅ　（ｍｌ）　１−　Ｏｇと３−ブ
ロモプロピオン酸エチル３８０　ｍ　ｇ　ヲＤ　Ｍ　ｌ
？　１０　ｍ　ｌ中８０℃で３時間反応させ、生じた混
合物をシルカゲルカラムクロマトグラフ（展開溶媒：２
％メタノール／クロロホルム）により才１１製した。得
られた結晶１００ｍｇをエタノール３０　ｍ　ｌに溶解
しＩＭの水酸化カリウム水溶液を０．１２ｍ１加え、室
温で２４時間攪拌した。濃＆ｉ後、酒石酸水溶液ついで
水で洗浄し乾燥した。

得られた固体をＤ　Ｍ　Ｆ　５　ｍ　ｌに溶かし、Ｎ−
ヒドロキシザクシンイミド２５　ｍ　ｇ　、　Ｄ　ＣＣ
５０ｒｎ　ｇを加えて室温で２４時間攪拌した。濃縮後
、酢酸エチルを加え不溶物を枦遇し、Ｐ液を濃縮しベン
ゼンを加え生じた結晶をＦｊ［！ｌ乾燥して化合物旦を
得た。

５−２．化合物旦でｖＡ識したタンパク質の化学発光法
による検出 実施例２と同様の操作によりｌ−Ｉ　Ｓ　Ａを用い化合
ｆＩＪ旦で標識した。また、検出法もルミノールを用い
実地例２と同様に行い、標識Ｉｔｓ八−へ・ｊ　１０　
ｐ　ｇを検出できた。

′Ａ施例６ ６−１．α−（３−アミノ（２−チエニル））−β、γ
、δ−トリス（２−チエニル）ボルフィナ１−Ｉ’ｃ（
ｎｌ）立の合」戊 無水酢酸１１．３ｇ、１０ピオン酸２００ｍ１に２−ニ
トロ−５−チオフェンカルボキシアルデヒド３．９２ｇ
および２−チオフェンカルボキシアルデヒド８．４１ｇ
を加え１２０℃で加熱しながら、ビロール６．７１ｇを
１０分かけて滴下した０滴下後、２時間１２０℃で捏ｌ
ｒＩ！シた後、室温にて放冷し生じた沈殿を枦収し酢酸
およびメタノールで洗浄し乾燥した。得られた混合物は
実施例１と同様にシリカゲルカラムクロマトグラフによ
り情製した９ついで、実施例１と同様の操作で塩化第二
鉄６永和物を用い、ポルフィナトＦｅ　（ＩＩＩ）錯体
とした。得られたα−（３−二トロ（２−チエニル））
−β、γ、δ−トリス（２−チエニル〉ポルフィナトＦ
ｅ（ｍ）５０ｍｇをメタノールに溶解しヒドラジン１水
相物１　ｒｎ　Ｉとパラジウム炭素２０ｍｇを加えて２
時間還流した１反応物を濾過しＰ液を濃縮し、得られた
固体を水洗して乾燥し、化合物旦を得た。

６−２、化合物旦で標識したＤＮＡの化学発光法による
検出 実施Ｍｌと同様の操作によりλフアージＤＮＡを用い化
合物旦で標識した。また、検出法もルミノールを用い尖
細＠１と同様に行い、標識ＤＮＡを用いてλファージＤ
　Ｎ　Ａ　ｊｎ　ｌ　０９ｇを検出できた。

ポルフィリンで　　の−人 置換基Ｒ（Ｒは一般構造式中のＸの形成に必要な任意の
官能基〉を有するベンズアルデヒド、チオフェンカルボ
キシアルデヒド、フラアルデヒド。

あるいはピリジルアルデヒドを有機酸性溶媒中で加熱し
ながら、等モルのビロールを滴下する。有機酸性溶媒と
しては１０ピオン酸が一般に適当である０滴下後、数時
間加熱し、放冷後生じた沈殿物を戸取し、酢酸、水、あ
るいは有機溶媒で洗浄し乾燥する。

１−）らｊした四置換ポルフィリンを算モルのｒｆ−章
の金属塩あるいは金属アセチルアセトナト錯体等の金属
化合物と共に有機溶媒中で反応させる。有機溶媒として
は酢酸、ベンゼン、ピリジン等が一般に適当である０反
応後、溶媒を留去するが、あるいは生成した沈殿を戸数
し水または有機溶媒による洗ン争により１１１製する。

分子内の置換基Ｒは、そのままもしくは任意の官能基に
′Ｒｆａした後、一般横遣式中のＹとして用いるか、あ
るいは、そのままもしくは任意の官能基に変換後、一般
楕遺式中のＸ−Ｌの形成に必要な試薬と共に溶媒中で反
応し、洗浄あるいはカラムクロマトグラフで１１１″ｇ
Ｊする一１！ｍｇを導入した場合、その末端官能基は、
そのままもしく番よ任意の官能基に変換して一般構造式
中のＹとする。

−殻構造式中のＸ−Ｌ−Ｙについてはそのうちの数種に
ついて実施例の項で詳細を記す。

以下に合成した新規ポルフィリンｔＢ体化合物の一部を
示す。

α、β、ｒ、δ−デトラキス（４−アミノエチルカルバ
モイルフェニル）ポルフィナトＦｃ（Ｉ［ｌ）青紫色結
晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−アミノエチルカルバ
モイルフェニル）ポルフィナトＣｒ　（ｎｌ）紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−アミノエチルカルバ
モイルフェニル）ポルフィナトＭｏ　（Ｖ）青紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−ホルミル１０ビルア
ミドエチルカルバモイルフエニル〉ポルフィナトＦｅ（
ＩＩＩ））！？紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−ポルミル１０ビルア
ミドエチルカルバモイルフエニル）ポルフィナトＣｒ（
ｉｌｌ）青紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−インシアナトプロピ
ルカルバモイルフェニル）ポルフィナトＦｅ（Ｉｎ）青
紫色績、１１゜ α、β、γ、δ−テ１〜ラキス（４−インシアナトプロ
ピルカルバモイルフェニル）ポルフィナトＣｏ　（Ｉ［
）黒青色結δム α、β、γ、δ−テ１ヘラキス（４−イソシアナト）゛
ロビルカルバモイルフェニル）ポルフィナトＺｎ　（Ｉ
Ｉ）紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−サクシンイミドキシ
ホルミルエチルアミドフェニル）ポルフィナトＦｅ　＜
ｍ＞黒青色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−サクシンイミドキシ
ホルミルエチルアミドフェニル）ボルフィナＩ−Ｆｃ（
１１）黒ｉ７色枯、１１゜α、β、ｒ、δ−テトラキス
（４−ザクシンイミドキシ；１ニルミルエチルアミドフ
エニル）ポルフィナトＯｓ　（ＩＩＩ）青紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−（Ｎ−サクシンイミ
ドキシホルミルエチル）ピリジル）ポルフィナトＦｅ（
ｎｌ）青紫色結晶 α９β、γ、δ−テトラキス１４−　（Ｎ−サクシンイ
ミドキシホルミルエチル）ピリジル）ポルフィナトＭｏ
　（Ｖ）紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス１４−（Ｎ−サクシンイミ
ドキシホルミルエチル）ピリジル）ポルフィナトＺｎ　
（Ｉｆ）青紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（３−アミノエチルカルバ
モイルく２−チエニル））ポルフィナトＦｅ（ＩＩＩ）
黒紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（３−アミノエチルカルバ
モイル（２−フリル））ポルフィナトＦｅ（ｆｆ）青紫
色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−（カルホキシブナル
チオ〉フェニル）ポルフィナトＮ１（ＩＩ）紫色結４ム α、β、γ、δ−テトラキス（４−（カルボキシエチル
アミド）フェニル）ボルフイナ１〜Ｃｕ（Ｉｆ）１１１
′紫色結品 α、β、γ、δ−テトラキス（４−（インシアナトエチ
ル）−２，６−ジクロロフェニル）ポルフィナトＦｅ　
（Ｉｌｌ）青紫色結晶 α、β、γ、δ−テトラキス（４−（アミノエトキシカ
ルボニル）フェニル）ポルフィナトＭｎ（ＩＩ）紫色結
晶 尖ｊｋ例７ ７−１．α、β、γ、δ−テトラキス（４−アミノエチ
ルカルバモイルフェニル）ポルフィナトＦｃ（ＩＩＩ）
ヱの合成 ４−カルボキシベンズアルデヒドとビロールを等モル用
い、実施例１と同様の操作で合成した。

ｂｔｙは熱酢酸による洗浄で行った。

７−２　、化合物ヱで＃５識しｆＳＤ　Ｎ　Ａの化学発
光による検出 実施例１と同様の操作にまりλフアージＤＮＡを用い化
合物ヱで標識した。また、検出法もルミノールを用い実
施例１と同様に行い、ｌｌＩ識ＤＮＡを用いてλファー
ジＤＮＡ１１０ｐｇを検出できた。

実施例８ ８−１．α、β、γ、δ−テトラキス（４−サクシンイ
ミドキシホルミルエチルアミドフェニル）ボルフィナ１
−Ｆｅ（Ｉｌｌ）の合成 無水酢酸１１．３ｇ、１０ピオン酸２００ｍ１にｐ−ニ
トロベンズアルデヒド１５．１ｇを加え１２０℃で加熱
しながら、ビロール６．７１ｇを１０分かけて滴下した
。２時間１２０℃を保った後、室温にて放冷し生じた結
晶をＰ取し、酢酸およびＴＨＦで洗浄し乾燥した。この
結晶１．０ｇをメタノールｌ　ＯＯｍ　ｌに溶解し、ヒ
ドラジンｌ水和物１０　ｒｎ　Ｉとパラジウム炭素１０
０　ｍ　ｇを加え、２時間還流ｆ＆濾過しＰ液を濃縮し
、坐じた固体を水洗し乾燥してα、β、γ、δ−テトラ
キス（４−アミノフェニル）ポルフィリンとした。この
国体８２０ｍｇを１．５１の酢酸に懸濁し、塩化第二鉄
６水和物３６０　ｔｎ　ｇおよび塩化水銀１０ｍｇを加
え１１０℃で１６時間加熱攪拌した。放冷後、生じた結
晶をＰ収し酢酸で洗浄し乾燥した。

このポルフィリン鉄錯体を５０ｍｇ用いてＴＨＩ？５ｎ
１１に溶解し、無水コハク酸５２３ｍｇを加え室温で２
４時間攪拌した。濃縮後、クロロホルム５ｍｌを加え沈
殿をＰ取し０．ＩＮの塩酸および水で洗浄し乾燥した。

この固体をＤ　Ｍ　Ｆ　５　ｍ　ｌに溶かし、Ｎ−ヒド
ロキシコハク酸イミド３６ｍｇ、Ｄ　ＣＣ６５ｍ　ｇを
加え０℃で２晴間、のち室温にて２　／１時間攪拌した
。濃縮後、酢酸エチルに溶解し不溶物を除き、１１「度
濃縮して化合物量を（：）た。

８−２．化合物量で標識したタンパク質の化学発光法に
よる検出 実施例２と同様の操作によりＩ　Ｓ　Ａを用い化合物量
で標識した。また、検出法もルミノールを用い実施例２
と同様に行い、標識ＩＳＡ！ｉｌｐｇを検出できた。

実施例９ ９−１．α、β、γ、δ−テトラキス（４−アミノエチ
ルカルバモイルフェニル）ボルフイナ１〜Ｃｏ　（ＩＩ
）旦の合成 実施８ｉ１７と同様の操作で合成した。但し、金属塩と
して塩化コバルト６水和物を用いた。

９−２．化合物２で標識したＤＮＡの化学発光法による
検出 実施例１と同様の操作にまりλフアージＤＮＡを用い化
合物量で漂ふ１した。また、検出法もルミノールを用い
実施例１と同様に行い、標識ＤＮＡを用いてλファージ
ＤＮＡｆｆｌｌＯｐｇを検出できた。

実施例１０ １０−１．α、β、γ、δ−テトラキス（４−サクシン
イミドキシホルミルエチルアミドフェニル〉ボルフィナ
１−Ｃｒ（ＩＩＩ）上皇の合成実施Ｐ／４８と同様の操
作で合成した。但し、金属塩として塩化クロム６水和物
を用いた。

１０−２．化合物上皇で標識したタンパク質の化学発光
法による検出 実施例２と同様の操作によりＨ３Ａを用い化合物上皇で
標識した。また、検出法もルミノールを用い実施例２と
Ｉｒ１１様に行い、標識）Ｉ　Ｓ　Ａ　Ｊｉ　１０　Ｐ
ｇまでを検出できた。

実施ＰＡｌｌ １１−１．α、β、γ、δ−テトラキス（４−Ｎ＝サク
シンイミドキシボルミルエチルビリジル）ポルフィナト
Ｆｅ　（Ｉｌｌ）の合成 実施例５により得られたα、β、γ、δ−テトラキス（
４−ピリジル〉ボルフイナｔ−Ｆｅ（ＩＩＩ）５００ｍ
ｇと３−ブロモプロピオン酸エチル７６０ｍｇをＤＭＦ
ｌ　０ｍ　ｉ中室温で２４時間反応させ、エーテル１０
０ｍ　ｌを加え生じた沈殿を枦収した。ｆ′＋られた固
体１００ｍｇをエタノール３０ｒｎ　１に溶解し１Ｍ水
酸化カリウム水溶液０．４０ｍ１を加え、室温で２４時
間攪拌した。濃ｌａｆ＆。

酒石酸水溶液ついで水で洗浄し乾燥した。得られた固体
をＤＭＦ５ｒｎｌに溶かし、Ｎ−ヒドロキシザクシンイ
ミド２０　ｍ　ｇ　、Ｄ　ＣＣ４０ｍ　ｇを加えて室温
で２４時間攪拌した。濃縮後酢酸エチルを加え不溶物を
Ｖ過し、炉液を濃縮しベンゼンを加え生じた結晶をｒ取
し乾燥して化合物上ユを得た。

１１−２．化合物上まで標識したタンパク質の化学発光
法による検出 実施例２と同様の操作によりＨ８Ａを用い化合物上ユで
標識した。また、検出法もルミノールを用い実施例２と
同様に行い、標識）ＩＳＡＪｉｌＰｇでも検出できた。

実施ｌｌＡ１２ １２−１．α、β、γ、δ−テトラキス（３−アミノエ
チルスルファモイル（２−フリル））ボルクイナトＦｃ
　（１１）の合成 無゛水酢ｆｉ１１．３ｇ、プロピオンｌ１ｉ１２００　
ｍ　ｌに２−フッアルデヒド９．６１ｇを加え１２０℃
で加熱しながら、ビロール６．７１ｇを１０分かけて滴
下した０滴下後、２時間１２０℃で撹拌した後、室温に
て放冷し生じた沈殿をｒ収し、酢酸で洗浄し乾燥した。

この固体７５０ｍｇを１．５１の酢酸に懸濁し、塩化第
一鉄４水和物２９０ｍｇを加え１２０℃で４時間加熱Ｗ
ｌ拌した。放冷後、生じた結晶をＰ収し酢酸で洗浄し乾
燥した。このα、β１γ、δ−テトラキス（２−フリル
）ポルフィナトＦｅ　（ｎ）５００ｍｇを０℃でクロロ
ホルホンＡＭ　５　ｍ　ｌに少しずつ加え、２時間攪拌
した。

これを１００ｍ　ｌの氷水に注ぎ、沈殿を枦収し水洗し
乾燥した。得られた結晶１００ｍｇを乾燥したｌ”ＨＦ
２０ｍ１に溶解し、エチレンジアミン５Ｑ　Ｑ　ｍ　ｇ
を加え１時間室温で攪拌した０反応混合物を水１００＋
ｎｌに注ぎ、生じた沈殿を戸数し水洗し乾燥して、化合
物上ユを得た。

１２−２．化合物上１で標識したＤＮＡの化学発光法に
よる検出 実施例１と同様の操作によりλフアージＤＮＡを用い化
合物上皇で標識した。また、検出法もルミノールを用い
実施例１と同様に行い、標識ＤＮＡを用いλフアージＤ
ＮＡ、ｂＬｌｏｐｇを検出できた。

フタロシアニン１　　の−八 置換ｉ！！ｒｔ　（Ｒは一般格造式中のＸの形成に必要
な（ｆ意の官能基〉を有するキシレンをピリジン−水混
合溶媒中で加熱後、過マンガン酸カリウムを少しずつ加
えて酸化しフタル酸ＪＡ導体とするｍｕ’液を濃縮し、
塩酸を加えて析出する結晶を水洗し。

乾燥後有機溶媒に溶解する６有機溶媒としてはクロロホ
ルムが一般に過当である。「１過により不溶物を除きＦ
液を濃縮して固体を得る。つぎにこのフタル酸誘導体を
無水酢酸中で加熱還流し濃縮後、石油エーテルで洗浄し
、クロロホルムに溶解、濾過して不溶物を除き濃縮して
酸無水物とする。この酸無水物を尿素と１７５℃で加熱
後、冷却して水洗しフタルイミド誘導体とし、さらにア
ンモニア水中加熱してフタルイミド！Ａ　ｔｌ　体とす
る。これをピリジンに溶かしオキシ塩化りんを滴下して
析出物を水洗しフタロニトリル誘導体とする。つぎに、
ナトリウムイソアミルアルコキシドとモリブデン酸アン
モニウムと共に、イソアミルアルコール中１２０℃で加
熱攪拌後メタノールを加え、生じる沈殿を枦収し、洗浄
あるいはシリカゲルカラムクロマトグラフでｆ＋［して
、置換フタロシアニン誘導体を合成する。得られたフタ
ロシアニン１ｓ導体を等モルの任意の金属塩あるいは金
属アセチルアセトナ１−錯体の金属化合物と共に有機溶
媒中で反応させる。有機溶媒としては酢酸、ベンゼン、
ピリジン等が一般に適当である０反応後生成した沈殿を
枦収し酢酸、ベンゼン、ピリジン等から洗浄あるいはｉ
ＴＦ結晶し置換フタロシアニン錯体を合成する。

分子内置換Ｊ！Ｒはそのまま、もしくは任意の官能基に
変換した後、・一般格造式中のＹとして用いるか、ある
いは、そのまま、もしくは任意の官能基に変換後、−殻
構造式中のＸ−Ｌの形成に必要な試薬とともに溶媒中で
反応し、洗浄あるいはシリカゲルカラムクロマトグラフ
で精製する。ｎｉｇを導入した場合、その末端官能基は
、そのまま、もしくは任意の官能基に変換して一般構造
中のＹとする。　−ｍ［２式中のＸ−Ｌ−Ｙについては
、そのうちの数種について実施例の項で詳細を記す。

以下に合成した新規四置換フタロシアニン錯体化合物の
一部を示す。

３．１０，１７．２４−テトラキス（アミノエチルカル
バモイル）フタロシアナトＦｅ　（ＩＩＩ）黒青色結晶 ３．１０．１７．２４−テトラキス（アミノエチルカル
バモイル）フタロシアナトＣｏ　（ＩＩ）黒青色結晶 ３．１０，１７．２４−テトラキス（アミノエチルカル
バモイル）フタロシアナトＣｒ（Ｉｌｌ）黒青色結晶 ３．１０，１７．２４−テ！・ラキス（アミノエチルカ
ルバモイル）フタロシアナトＮ１（Ｉ）黒青色結晶 ３．１０，１７．２１１−テトラキス（ホルミルプロピ
ルアミドエチルカルバモイル）フタロシアナトＦｅ　（
ｎｌ）紫色結晶 ３．１０．１７．２４−テトラキス（ホルミルプロピル
アミドエチルカルバモイル）フタロンアナ１−Ｃｒ（Ｉ
［［＞紫色結晶 ３．１０，１７．２４−テトラキス（ホルミルプロピル
アミドエチルカルバモイル〉フタロシアナ）Ｃｏ　（Ｉ
Ｉ）青紫色結晶 ３．１０，１７．２４−テトラキス（サクシンイミドキ
シホルミルエチルアミド）フタロシアナトＭ　ｏ　（ｍ
　）　、’ｉ、’ｒ　ｉ’ｉ色結品３．１０．１７．２
４−テトラキス（サクシンイミドキシポルミルエチルア
ミド〉フタロシアナトＺｎ　（ｎ）青色結晶 ３．１０，１７．２４−テトラキス（サクシンイミドキ
シホルミルエチルアミド〉フタロシアナトＯｓ　（［１
１）青紫色結晶 ３．１０．１７．２４−テトラキス（サクシンイミドキ
シポルミルエチルアミド〉フタロシアナトＭｏ　（ｎｌ
）黒１ｒｔ色結晶 実Ｂｔ！（Ｎ１３ １３−１．３．１０，１７．２／１−テトラキス（アミ
ノエチルカルバモイル）フタロシアナトＦｅ　（Ｉｌｌ
）上玉の合成 ４−カルボキシ−〇−キシレン〈３，４−ジメチル安５
Ｑ、香ａ）を用い、−ｍ合成法に従って合成した。３，
１０．１７．２４−テトラカルボキシフタロシアナトＰ
ｃ（Ｉ［ｌ）１２０ｍｇとエチレンジアミン塩酸塩２．
１３ｇをＴＨＰ：夏１２０＝１：１の混合溶媒に溶解し
ＷｓＣ３，ｌｏｇを加え室温で２４時間攪拌した０反応
混合物を濃縮し掻立を０．ＩＮのＮａＯＨ水溶１２０ｍ
１に懸濁し、沈殿物を遠沈により分離した。得られた固
体を乾燥し、化合物上ユを得た。

１３−２．化合物上玉で標識したＤＮＡの化学発光法に
よる検出 実施ｃ／４１と同様の操作によりλフアージＤＮＡを用
い化合物上玉で標識した。また、検出法もルミノールを
用い実施例１と同様に行い、標識ＤＮＡを用いてλファ
ージＤＮＡ是１１００Ｐを検出できた。

実施例１４ １４−１．３．１０，１７．２４−テトラキス（サクシ
ンイミドキシホルミルエチルアミド）フタロシアナトＦ
ｅ　（［［Ｉ）の合成 ４−ニトロ−〇−キシレンを用い、−ａ合成法に従って
含成し、塩化第一スズおよび塩酸により還元し３．１０
．１７．２４−テトラキスアミノフタロシアニンとした
。この化合ｆｉＪ　４００　ｒｎ　ｇを５０　ｒｎ　ｌ
のピリジンに溶かし、１．２５ｇの無水コハク酸を加え
室温で１６時間攪拌した０反応混合物を濃縮し、０．１
Ｎの塩酸水溶液２０ｍ！に懸濁し遠心分離にて固体をと
り乾燥して、３．１０．１７．２４−テトラキス（カル
ボキシエチルアミド）フタロシアニンとした。これを一
般合成法に従つ’ＣＦｅ（Ｉ［［）錯体としたのち、２
００ｍｇをＤＭＦにン容かし、Ｎ−ヒドロキシコハク酸
イミド１００ｍｇ、ＤＣＣ１６０ｍｇを０℃で加え２時
間攪拌後、室温にもどして１６時間反応させた０反応混
合物を濃縮し、酢酸エチルを加えて不溶物を濾過し、炉
液を濃縮し化合物上１を得た。

１４−２．化合物上１で標識したタンパク質の化学発光
法による検出 実施例２と同様の操作によりＩ−Ｉ　Ｓ　Ａを用い化合
物上Ａ″ＣＣ標識、また、検出法もルミノールを用い実
施例２と同様に行い、＃！Ａ識Ｈ３Ａ量１１００ｐまで
を検１Ｂできた。

実施ＰＡ１５ １５−１．３．１０，１７．２４−デトラキスくアミノ
エチルカルバモイル〉フタロンアナ１−Ｃｏ（■）上玉
の合成 実施例１３と同様の操作で合成した。但し、金属基とし
て塩化コバルト（Ｉｆ）を用いた。

１５−２．化合物上玉でｖＡ識したＤＮＡの化学発光法
による検出 尖８６ｉ例１と同様の操作によりλフアージＤＮＡを用
い化合物上玉で標識した。また、検出法もルミノールを
用いて実施例１と同様に行い、標ｍＤＮＡを用いてλフ
ァージＤＮＡ量１１００ｐを検出できた。

実施例１６ １６−１．３，１０，１７．２４−テトラキス（サクシ
ンイミドキシホルミルエチルアミド）フタロシアナトＭ
ｏ　（ＩＩＩ）１６の合成実施例１４と同様の操作で合
成した。但し、金属塩として塩化モリブデンを用いた。

１６−２．化合物上玉で標識したタンパク質の化学発光
による検出 実施例２と同様の操作によりＨ３Ａを用い化合物上１で
標識した。また、検出法もルミノールを用い実施例２と
同様に行い、標識１−Ｉ　Ｓ　Ａ　ｍ　１００ｐｇまで
を検出できた。

−フタロシアニン−の−４ 四置換フタロシアニン誘導体の一般的合成法に準じて置
換基Ｒをイｆするフタロニトリル誘導体、および、キシ
レンを出発物質として得られるフタロニトリルを合成す
る。これらをｌ：３のモル比で加え、３−置換フタロシ
アニン誘導体を合成する。桔製は一般にシリカゲルカラ
ムクロマトグラフにより行う、これをそのまま、あるい
はＲを任意の官能基に変換した後、−ｍ横道式中のＹと
して用いるか、あるいは、そのまま、もしくは任意の官
能基に変換後、−殻構造式中のＸ−Ｌの形成に必要な試
薬とともに溶媒中で反応しカラムクロマトグラフにより
？、？　！３する。

一般横遣式中のＸ−Ｌ−Ｙについては、そのうちの数種
について実施例の預で詳細を記す。

以下に合成した新規フタロシアニン錯体化合物の一部を
示す。

３−アミノエチル力ルバモイルフタロシアナ１〜Ｆｅ　
（Ｉ［Ｉ）黒青色結晶 １−アミノエチルカルバモイルフタロシアナトＣｏ　（
ＩＩ）黒青色結晶 ３−アミノエチルカルバモイルフタロシアナトＮ１（Ｉ
Ｉ）黒青色結晶 ３−アミノエチルカルバモイルフタロシアナトＭ　ｒｔ
　（ＩＩ　）　ｊｌＡｌ色結晶３−ホルミル１０ビルア
ミドエチルカルバモイルフタロシアナトＦｅ　（Ｉｎ）
紫色結晶３−　；ｌ；ルミルア０ビルアミドエチルカル
バモイルフタロシアナトＣｒ（ＩＩＩ）紫色結晶３−ホ
ルミルプロピルアミドエチルカルバモイルフタロシアナ
トＭｎ　（ＩＩ）黒青色結晶３−インシアナトエチルカ
ルバモイルフタロシアナトＦｃ　（ＩＩ）黒青色結晶 ３−インシアナトエチルカルバモイルフタロシアナトＭ
ｏ　（Ｖ）黒紫色活部 ３−イソシアナトエチルカルバモイルフタロシアナトＣ
ｒ（［［Ｉ）青色活部 ３−イソシアナトエチルカルバモイルフタロシアナトＣ
ｕ（■〉黒青色結晶 ３−インシアナトエチルカルバモイルフタロシアナトＯ
ｓ　（ＩＩＩ）黒青色結晶 実施例１７ １７−１．３−アミノエチルカルバモイルフタロシアナ
トＦｅ　（Ｉ［［）上ヱの合成 一般合成法に従って合成した。３−カルボキシフタロシ
アナトＦｅ　（Ｉｌｌ）を用い、実施例１３と同様の操
作により化合物上ヱを合成した。

１７−２．化合物上ｌで標識したＤＮＡの化学発光法に
よる検出 実施例１と同様の操作によりλフアージＤＮＡを用い化
合物上ヱで標識した。また、検出法もルミノールを用い
実施ｅｐ４１と同様に行い、標識ＤＮＡを用いてλファ
ージＤＮＡｉＬ１０ｐｇを検出できた。

実施例１８ １８−１．３−インシアナトエチルカルバモイルフタロ
シアナトＦｅ　（０１）上玉の合成−ｍ合成法に従って
合成した３−カルボキシフタロシアナトＦｅ（Ｉｎ）と
エチレンジアミンをＷＳＣで反応させることにより、実
施例１３と同機にして３−アミノエチルカルバモイルフ
タロシアナトＦｅ　（ＩＩＩ）を合成した。二硫化炭素
０．５４ｇ、トリエチルアミン１ｍｌを混合して０℃で
３−アミノエチルカルバモイルフタロシアナトＦｅ（Ｉ
ＩＩ）を加えた。その後１時間攪拌して生じた沈殿をｒ
取し乾燥した後、クロロホルムに溶かしトリエチルアミ
ン１ｍｌを加えて０℃でクロロギ酸エチルｌ　ｍ　ｌを
加えた。１時間反応後、３　Ｍ　Ｊ！！酸で洗浄してク
ロロホルムを留去し、生じた固体をシリカゲルカラムク
ロマトグラフによりｆ＋ＴＷＬ、化合物、Ｌ旦を得た。

１８−２、化合物主１でｖＡ識したタンパク質の化学発
光法による検出 実施例２と同様の操作によりＩ　Ｓ　Ａを用い化合物主
１で標識した。また、検出法もルミノールを用い実施例
２と同様に行い、ｅ＆識１−Ｉ　Ｓ　Ａ　ｆｉｔ　１０
０ρｇを検出できた。

実施例１９ １９−１．３−アミノエチルカルバモイルフタロシアナ
トＣｕ（Ｉ［）主１の合成 実施ｒ？４１３と同様の操作により合成した。但し金属
塩として第二塩化銅を用いた。

１９−２．化合物上ユで標識したＤＮＡの化学発光法に
よる検出 ′Ａ施施工１Ｆｉ１様の操イ１ミによりλフアージＤＮ
Ａを用い化合物上ユで標識した。また、検出法もルミノ
ールを用い実施ＰＡＩと同様に行い、標識ＤＮＡを用い
てλフアージＤＮＡｆｆ１をｉｏｏｐｇまで検出できた
。

尖細ｃＡ２０ ２０−１．３−イソチオシアナトエチル力ルバモイルフ
タロシアナ１〜Ｃｏ　（ＩＩ）２１の合成尖細ＰＡ１８
と同様の操作により合成した。但し、金属塩として塩化
コバルトを用いた。

２０−２．化合物２０で標識したタンパク質の化学発光
法による検出 実施例２と同様の操作によりＩ−Ｉ　Ｓ　Ａを用い化合
物主１で標識した。また、検出法もルミノールを用いて
実施例２と同様に行い、標識Ｈ３Ａ量１１００ｐを検出
できた。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式、Ｚ−［Ｘ−Ｌ−Ｙ］＿ｎ（ｎは０から４までの
   整数）で表される金属錯体化合物。 ここでＺは下記ポルフィリン骨格を有する金属錯体を表
   す。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 上記構造中、Ａ〜Ｄは、それぞれ独立にＳＰ＾２炭素ま
   たは窒素を表す。置換基Ｒ＾１〜Ｒ＾８は、それぞれ−
   ▲数式、化学式、表等があります▼−Ｅ、または、−（
   ＣＨ＝ＣＨ）＿ｋ−Ｅ（ｋは０または１、ＲはＨまたは
   ＯＨ、ＥはＨ、ＣＨＯ、ＣＯ＿２Ｈ、ＳＯ＿３Ｈのいず
   れかを表し、またＲ、Ｅはそれぞれ一般式中のＸと結合
   してもかまわない。）のいずれかである。また、Ｒ＾１
   −Ｒ＾２、Ｒ＾３−Ｒ＾４、Ｒ＾５−Ｒ＾６、Ｒ＾７−
   Ｒ＾８はそれぞれピロール環に縮合したベンゼン環でも
   かまわない。 つぎに、メソ位置換基Ｒ＿Ａ〜Ｒ＿Ｄはつぎの３つのう
   ちから選ばれる。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｔ＾１〜Ｔ＾５はそれぞれ、Ｈ、ハロゲンまたはアル
   キル基であり、そのうち１つは一般式中のＸと結合して
   もかまわない。） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ＧはＯまたはＳを表す。Ｔ＾６〜Ｔ＾８はそれぞれＨ
   、ハロゲン、またはアルキル基でありそのうち１つは一
   般式中のＸと結合してもかまわない。）▲数式、化学式
   、表等があります▼ （Ｔ＾９〜Ｔ＾１＾３はそれぞれＨ、ハロゲンまたはア
   ルキル基でありそのうち１つは一般式中のＸと結合して
   もかまわない。またＱはハライドアニオン、ＣＨ＿３Ｓ
   Ｏ＿４−、ＯＳＯ＿２ＣＦ＿３−、ＯＳＯ＿２Ｆ−また
   は▲数式、化学式、表等があります▼のいずれかを表 している。） つぎに金属ＭはＦｅ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、
   Ｚｎ、Ｍｏ、Ｃｄ、Ｏｓのいずれかである。 Ｘはポルフィリン骨格とスペーサーＬとの結合部分であ
   りつぎのなかから選ばれる。 −ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＳＯ＿２−、−Ｓ
   Ｏ＿２ＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＣＨ＿２−
   、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯ−、−ＣＳ
   −、−ＮＨ−、−Ｎ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、▲数式、
   化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があ
   ります▼ Ｌは官能基ＹとＸとを結ぶスペーサー部分であり▲数式
   、化学式、表等があります▼、−（ＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｏ
   ）＿ｍ−または−（ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２）＿ｍ−のいず
   れかである。 （ここでＲはＨまたはＯＨ、ｍは０から１０までの整数
   である。） Ｙはタンパク質または核酸と共有結合する官能基または
   共有結合する官能基に変換しうる基である。