JPH0646828A - 格納状態で検出するために液体を介して標的担持固体を移動させるための装置及び方法 - Google Patents

格納状態で検出するために液体を介して標的担持固体を移動させるための装置及び方法

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JPH0646828A
JPH0646828A JP5128909A JP12890993A JPH0646828A JP H0646828 A JPH0646828 A JP H0646828A JP 5128909 A JP5128909 A JP 5128909A JP 12890993 A JP12890993 A JP 12890993A JP H0646828 A JPH0646828 A JP H0646828A
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Thomas J Cummins
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テリー オークス フレッド
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 格納状態でのＰＣＲの増幅及び検出や、イム
ノアッセイに適当である、現在入手できる検出容器や方
法よりも実施するのに困難が少なく及び／又は安価であ
る検出容器と方法を提供すること。 【構成】 格納状態でＰＣＲ増幅や検出等の反応を行う
ための装置（１０、３０）であって、結合標識試薬と
「遊離」標識試薬との間の分離を行うのに使用される固
体（例えば、ビーズ（１６））を、ある領域から別の領
域へ、とりわけ固体から「遊離」標識試薬を洗い落とせ
るような洗浄液を介して移動させる。隔離されたチャン
バーには、仕切り（１４）がついており、穴をあけるか
液化すことにより破壊して、固体を移動するための通路
を形成できる。通路は、装置内に格納されたままであ
る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＰＣＲの増幅及び検出
用等の反応を格納状態で行うのに有用な装置と方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】固体粒子を固定し、そして液体試料と試
薬とを、順次、固定固体粒子を通過させて移動させる反
応容器を用いてＰＣＲ増幅及び検出を行うことが知られ
ている。このような反応容器は、例えば、ＥＰＡ公開第
３８１，５０１号に記載されている。このような容器
は、増幅されたＤＮＡが容器から漏れたり、他の試験容
器を汚染するのを防ぐにはよいが、検出に用いられる固
定した固体粒子を取り出すことなく、液状溶液を注意深
くあちらこちらに移動させなければならない点で多少の
欠点がある。その結果、反応容器は、安価で単純な構成
が全くできない方法で慎重に構成されることとなる。即
ち、液体の流れと「固定（ｆｉｘｅｄ）」固体の付着
は、このような固体が読み取り位置から移動しないよう
に維持されなければならない。
【０００３】同様に、固体に結合した標的に結合した標
識試薬（「結合（ｂｏｕｎｄ）」試薬と呼ばれる）を、
標的とは関連しているが付着していない標識試薬（「遊
離（ｆｒｅｅ）」試薬と呼ばれる）から分離するイムノ
アッセイが知られている。これは、固体を試験装置内に
固定し、そして洗浄液を固定固体を通過させて流したり
固定固体の周囲を流したりすることにより遊離試薬を洗
い流すことによってなされる。典型的には、固形フィル
ター等の媒体を使用して、洗浄工程後に結合試薬を遊離
試薬から分離する。このような方法は、例えば、ＵＳ−
Ａ─４，９２１，６７７号に示されており、上記目的に
は良い結果が得られる。しかしながら、自由液体を通過
させるが、結合試薬を担持している固体を通過させない
濾過媒体を選択するのには注意が必要である。
【０００４】このように、ＰＣＲ増幅及び検出の両方並
びに前記イムノアッセイにおける手法は、固体粒子を固
定又は非可動化（ｆｉｘ ｏｒ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚ
ｅ）し、液体を移動させるものであった。
【０００５】また、従来技術では、イムノアッセイ用等
の標的を担持している粒状固体を検出溶液に注いで、未
結合試薬を洗い流すことも、結合試薬／遊離試薬分離と
して公知であった。このような方法は、例えば、エバン
ガ他（Ｅｖａｎｇａ ｅｔａｌ．）によるＵＳ−Ａ−
４，７４３，５３６号に記載されている。しかしなが
ら、このような固体を検出溶液に注いだり流入させたり
するときには、例外なく、固体を保持しているチャンバ
ーのふたをとり流体を流す。このようにふたをとること
は、ＰＣＲ増幅に必要とされる格納状態が失われるの
で、ＰＣＲの検出スキームには全く許容できないことで
ある。固体をばらで流す（ｂｕｌｋ ｆｌｏｗ）には、
それぞれの区画間に相当の大きさの流路の開口部を必要
とするので、従来における単にばらで流す行為は、ＰＣ
Ｒ反応生成物の格納状態を維持するには望ましくなかっ
た。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、格納状態（ｗｈｉｌｅ ｃｏｎｆｉｎｅｄ）で
のＰＣＲの増幅及び検出や、イムノアッセイに適当な、
現在入手できる検出容器や方法よりも、提供するための
困難が少なく及び／又は安価である検出容器と方法を提
供することである。即ち、本発明の目的は、汚染を生じ
るような増幅位置を大気に開放することなく、格納位置
間、即ち、増幅位置から検出位置に、ばらの固体（ｂｕ
ｌｋ ｓｏｌｉｄｓ）を流すことのできる装置と方法を
提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記の問
題を克服する装置と方法を考案した。
【０００８】より詳細には、本発明の一態様によれば、
本発明の目的は、標識試薬を担持した試料標的と固体を
格納状態で反応させるための装置であって、前記装置
が、ａ）試料標的を粒状固体に付着せしめるための第一
格納領域を形成している第一手段と；ｂ）前記固体の一
部から未結合標識試薬を洗い落とすための洗浄液を少な
くとも含有する少なくとも第二格納領域を形成している
第二手段と；ｃ）前記第一格納位置と前記第二格納位置
との間に少なくとも１つの通路を提供して、前記格納位
置間に液体が連通できるようにしている通路手段と；そ
してｄ）前記通路を開放したときに前記標的試料全体を
前記装置内に格納し収容するための格納手段とを含んで
なる装置により達成される。この装置の改善点は、固体
が装置内を移動でき、そして通路手段が、前記標的試料
全体を前記装置内に格納し収容させたまま、前記固体が
格納位置間を移動でき、液状標識試薬と接触するのに十
分なサイズと分布で構成されていることにある。
【０００９】本発明の別の態様によれば、本発明の目的
は、標識試薬を担持した試料標的と粒状固体を格納状態
で反応させるための方法であって、前記方法がａ）検出
可能にするのに十分な標的の複製を提供する工程と、
ｂ）前記検出可能な標的を少量の粒状固体と相互に影響
させる工程と、そしてｃ）前記標的及び前記固体上の標
識試薬を検出する工程とを含んでなり、工程ａ）中及び
工程ａ）後の全ての工程を単一装置内に格納収容した状
態で行う方法により達成される。この方法の改善点は、
粒状固体が移動可能であり、そして方法が、標識試薬を
担持している試料標的と反応した粒状固体を洗浄液に注
いで未結合標識試薬を除去する工程をさらに含み、この
工程全体を、粒状固体と標的を前記装置内に格納したま
ま行うことにある。
【００１０】
【具体的な態様】以下本明細書では、本発明を、特に、
ＰＣＲ増幅と検出を管状等の汚染を防止するために格納
環境内で行ういくつかの好ましい実施態様を挙げて説明
する。さらに、本発明は、標的試料（例えば、抗体又は
抗原）が検出可能となるのに十分な量が提供され、固体
が標識試薬内に移動できることを必要とする方法で粒状
固体及び少なくとも液状標識試薬の両方と相互作用する
限り、反応スキームが、ＰＣＲ増幅であるか、イムノア
ッセイ等のある種の他の反応であるかとは関係なく適用
できる。また、本発明は、格納位置や装置全体の形状と
は無関係に適用できる。
【００１１】本明細書で用いられる「標識試薬を担持し
た試料標的（ｓａｍｐｌｅ ｔａｒｇｅｔ ｂｅａｒｉ
ｎｇ ａ ｌａｂｅｌ ｒｅａｇｅｎｔ）」は、末端が
標識試薬自体か、続いてアビジン担持標識試薬と反応す
るビオチンである複製されたオリゴヌクレオチド配列で
あることが好ましい。もし配列の末端が標識試薬自体で
あるならば、標識試薬は、検出可能なレベルで螢光を発
する能力を失うことなく９５°Ｃまでの温度上昇の反復
に耐えることができる螢光色素が好ましい。このような
色素としては、例えば、フルオレセインやクマリンが挙
げられる。
【００１２】さらに、「標識試薬を担持した試料標的」
は、標識試薬自体を担持している抗体（又は抗原）と複
合した抗原（又は抗体）であるか、続いてアビジン担持
標識試薬と反応するビオチンであることができる。
【００１３】本明細書で用いられる「標識試薬（ｌａｂ
ｅｌ ｒｅａｇｅｎｔ）」は、試料標的の存在を直接又
は間接的に明らかにすることのできる試薬、好ましくは
試薬溶液である。もし標識試薬を外部エネルギーで刺激
することにより標識試薬が検出されることができるなら
ば、例えば、光に当たったときに螢光を発する螢光成分
であるならば、標識試薬は、試料標的の存在を「直接明
らかにする（ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｒｅｖｅａｌｉｎ
ｇ）」ものである。一方、もし装置において「検出試薬
（ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｒｅａｇｅｎｔ）」も必要である
ならば、例えば、もし標識試薬が、装置において、例え
ば、色を生成するために基質を必要とする酵素も含んで
いるならば、標識試薬は、試料標的の存在を「間接的に
明らかにする（ｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙ ｒｅｖｅａｌｉ
ｎｇ）」ものである。
【００１４】また、本明細書で用いられる「標的が粒状
固体及び少なくとも液状標識試薬の両方と相互作用する
（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｗ
ｉｔｈ ｂｏｔｈ ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｓｏｌｉ
ｄｓ ａｎｄ ａｔ ｌｅａｓｔ ａ ｌｉｑｕｉｄ
ｌａｂｅｌ ｒｅａｇｅｎｔ」とは、通常のように、試
料標的（例えば、各々順次固体上の抗体と反応し次いで
標識抗体と反応できる２つのエピトープ部位を有する抗
原）上の２箇所の別個の反応部位で順次生じるか、固体
上の抗体に関して、標的抗原が可溶性標識抗原と競争的
に相互作用するときに生じるように同時に生じることを
意味する。
【００１５】特に有用な標識試薬は、ペルオキシダーゼ
や特に西洋ワサビペルオキシダーゼ等のストレプトアビ
ジンに付着した酵素を含んでなるものである。後者の酵
素を使用するとき、有用な基質は、Ｈ2 Ｏ2 及びＵＳ−
Ａ−４，６７０，３８６号及びＵＳ−Ａ−４，０８９，
７４７号に記載されているもの等のトリアリールイミダ
ゾール色素である。
【００１６】本明細書で用いられる「粒状固体（ｐａｒ
ｔｉｃｕｌａｔｅ ｓｏｌｉｄｓ）」とは、標的が容易
に結合されることのできるいずれかの固体を称し、比較
的小さな粒子状固体、例えば、最大寸法が３００μｍを
超えないものが好ましい。特に好ましいものは、サイズ
が０．１〜１００μｍであるポリスチレンビーズであ
る。
【００１７】本発明の構成要件の組み合わせに関して、
上記で簡単に説明した装置の構成要件ａ）〜ｄ）は、既
にそれ自体公知である。即ち、これらの要件は上記した
ＥＰＡ３８１，５０１号に包括的に記載されているが、
粒状固体は固定されており、液状薬剤がこれらの粒状固
体上に流れる。
【００１８】従って、本発明により構成される装置は、
図１に示すように、ＰＣＲ増幅に必要な試薬Ｒと試料Ｓ
の全てが適所に配置された後に装置をシールするのに用
いられる取り外しのできるシーリングキャップ１４を備
えたチャンバー１２により形成される第一格納領域１０
を含んでいる。チャンバー１２には、「Ｙ」で示されて
いる結合基を担持したビーズ１６が予め入れられてい
る。この結合基は、チャンバー１２で増幅される標的Ｄ
ＮＡにアニーリングするよう設計されたオリゴヌクレオ
チドプローブであることが好ましい。試料Ｓと増幅に必
要な全ての試薬を装置に添加し、キャップ１４を閉め
る。いずれのシール手段を用いることもできるが、好ま
しくは、雄ねじと雌ねじ１８、２０を含んでなるもので
あり、雄ねじがチャンバー１２の上部２２にあることが
好ましい。
【００１９】チャンバー１２は、全ての液体を装置内に
格納したままチャンバー１２の内容物を部分３０内に注
ぐことのできるように、チャンバー１２を、装置の残り
の部分３０にしっかりと連結することのできる格納手段
を外部に有する。格納手段は、上部に雄ねじ山２６を取
り付けた突起したリップ２４を含んでなることが好まし
い。
【００２０】また、試薬Ｒは、螢光標識を付着した標的
核酸配列のプライマーも含むことが好ましい。
【００２１】その後、公知の温度サイクルを用いてＰＣ
Ｒ増幅をチャンバー１２内で生じさせて、本発明の装置
及び方法の他の部分で容易に検出することのできるよう
な十分なＤＮＡ等の標的核酸配列の標識複製を得る。周
知のように、ビーズに対しての早すぎるアニーリングに
より増幅が過度に妨害されないために、ビーズ上のプロ
ーブは、増幅プライマーのＴｍ（融解温度）よりも低い
Ｔｍ、即ち、低い融解温度を有するものを選択する。
【００２２】そのために、ビーズ１６によっては、図２
に示すように、「Ｘ」で示すような、標的核酸配列を結
合して有している。
【００２３】この時点で、チャンバー１２のビーズ１６
は、また螢光媒体を担持した未アニーリングプライマー
を上にゆるく付着して担持している。ビーズによって
は、このようなゆるく付着した未アニーリングプライマ
ーのみを有するものであってもかまわない。
【００２４】次いで図２において、装置の他の部分は、
開口部３６を有するカバー３４によりふたをした下部壁
３３を有するチャンバー３２を含んだ第二格納領域３０
を含んでなっている。カバー３４の中央部３８は、接触
するとカバー１４を貫通して破壊することのできる孔抜
きプロング４０を有している。カバー３４の上には、チ
ャンバー１２のネジ２６と係合させるための雌ネジ４４
を備えたスリーブ４２がある。ネジ４４及び２６を最初
に係合するときに、カバー１４を、上の想像線１４’の
位置で示したように、プロング４０と接触せず離れて配
置している。しかしながら、チャンバー１２をさらにス
リーブ４２内にねじ込むと、プロング４０がカバー１４
に入り込み、固体１６及びそれに担持されているいずれ
の試薬も通過するに十分な通路が提供される。チャンバ
ー３２の液体内容物は、少なくとも洗浄液である。洗浄
液の効果は、ビーズが力「Ｆ」により下部壁３３に落ち
るときに、ゆるく「付着（ａｔｔａｃｈｅｄ）」した未
アニーリング標識プライマーをビーズから洗い落とすこ
とである。このように洗い落とされたプライマーは、洗
浄液の表面「Ｓ’」近くにとどまる。力「Ｆ」は、重力
としてか、遠心力としてのどちらかで供給できる。
【００２５】次に下部壁３３に到達するものは、ビーズ
と、増幅プロセス（ビーズにアニーリングした）による
標的ＤＮＡの一部分である標識試薬のみである。螢光性
のために、標識試薬は、次に、チャンバー３２の底領域
（矢印５０）で適当な波長の光を発することにより検出
されることができる。
【００２６】このように、移送機構が、固体を第一領域
１０から第二領域３０に移送することが一つとしてあ
り、単に液体だけを移送するのではないときでさえも、
増幅と、洗浄と、検出は、全て、シールされた格納装置
内で生じることができる。
【００２７】上記したように、標識試薬は、螢光成分で
ある必要はなく、代わりに基質との組み合わせで検出可
能な色を生じる酵素を含んでなることができる。この場
合、図３及び図４に示すような、３チャンバー装置が好
ましい。上記したのと同様の部分については、同じ参照
数字で示してあるが、区別をつけるために接尾辞「Ａ」
を付けてある。
【００２８】即ち、この装置は、２つの共同格納部１０
Ａ及び３０Ａを有している。共同格納部１０Ａ及び３０
Ａにはそれぞれネジ２６Ａ及び４４Ａがついており、そ
れらを係合することにより、上記したようにカバー１４
Ａに穴があけられるようになっている。（カバー１４Ａ
は、上記した実施態様と同様にネジをつけることができ
る。）しかしながら、追加の格納領域７０は、チャンバ
ー３２Ａの壁を延長し、バリヤー手段７４上に領域７０
を挿入して、バリヤー手段７４とカバー３４Ａとの間に
位置する第三チャンバー７２を作成することにより追加
される。
【００２９】この構成において、チャンバー７２の内容
物の液体は、チャンバー１２Ａで得られた標的核酸配列
と反応するように化学的に改質した酵素を含んでなる。
（もしイムノアッセイが含まれるのであれば、酵素の化
学的改質により、標的抗原に複合した抗体と反応でき
る。）好ましくは、酵素と化学的に反応するアビチンが
使用され、この場合、標的核酸配列の末端は、ビオチン
である。領域７０の液体のとりわけ好ましい例は、スト
レプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼである。
【００３０】もし酵素がペルオキシダーゼであるなら
ば、チャンバー７２の部分３０Ａには、Ｈ2 Ｏ2 も含ま
れる。種々のバリヤー手段７４は有用である。図３及び
図４の実施態様において、バリヤー手段７４は、温度変
化や遠心力の影響下で液化できることが好ましい。前者
の例としては、酵素を失活するよりも低い温度（例え
ば、６０°Ｃ未満の温度）に加熱したときに液化するワ
ックスが挙げられる。好ましい例としては、パラフィン
が挙げられる。
【００３１】遠心力下で液化するバリヤー手段として
は、例えば、高遠心力「ＣＦ」、例えば、少なくとも１
０，０００Ｇの力でビーズが通過することのできるチキ
ソトロープゲルが挙げられる。このようなゲルの好まし
い例としては、例えば、通常、シリカとポリエステルを
含んでなる商品名「ゲルモノベット（Ｇｅｌ Ｍｏｎｏ
ｖｅｔｔｅ）」でサーステットコーポレーション（Ｓａ
ｒｓｔｅｄｔ Ｃｏｒｐ）から販売されている管状のゲ
ルが挙げられる。
【００３２】この実施態様において、格納領域３０Ａの
液状内容物は、チャンバー７２の酵素の基質、例えば、
ロイコ色素の水性溶液を含んでなる。したがって、液状
内容物は、２つの機能を有している。即ち、ビーズが図
４に示すバリヤー手段７４を通過して移動するにともな
ってビーズを洗浄して、ビーズに対するアビジン─ビオ
チン結合により反応しないゆるく「結合」した酵素を除
去することと、酵素に対する基質を提供することであ
る。
【００３３】下部壁３３に集まったビーズは、次に、そ
れらの色の変化により検出される。洗い落とされたゆる
く付着した酵素のためにチャンバー３０Ａの上部８０に
生じた色の変化は、壁３３Ａでのビーズの色の変化とは
空間的に容易に区別できる。
【００３４】バリヤー手段７４が液化性であることは必
須ではなく、硬質構造体以外であれば何でもよい。即
ち、図５に示すように、下の全てのものからチャンバー
７２を切り取ったチャンバー３２Ａを含んだ壁構造であ
ってもよい。図５では、上記したのと同様の部分につい
ては、同じ参照数字で示してあるが、区別をつけるため
に接尾辞「Ｂ」を付けてある。
【００３５】図５に示す装置は、中央領域７０Ｂ、その
チャンバー７２Ｂ及び第一格納領域（図示してない）に
関する限りは、バリヤー手段７４Ｂがそのチャンバーか
らのアクセスができないようにチャンバー７２Ｂの壁を
延長したものである薄壁からなっていることを除いて
は、上記した装置と同一である。さらに、スカート９０
は、バリヤー手段７４Ｂの下に延長しており、９２で内
部にネジ山がつけられている。このとき、第三格納領域
３０Ｂは、上記したような下部壁３３Ｂを有するチャン
バー３２Ｂを含んでなる。但し、領域３０Ｂの上部９４
には、カバー３４Ａと実質的に同一の構成で開口を有す
るカバー３４Ｂと、ネジ山９２と噛み合う雌ネジ９６が
配置されている。したがって、単にチャンバー３２Ｂを
スカート９０内にさらにねじ込むことにより、プロング
４０Ｂは、バリヤー７４Ｂを貫通してそのバリヤーを破
壊するように作用する。どの位置においても、ネジ山９
６によりスカート９０にねじ込み係合させることによ
り、装置からの漏れは生じない。プロング４０Ｂがバリ
ヤー壁７４Ｂを貫通して破壊すると、チャンバー７２Ｂ
内の固体（ビーズ）は、上記したようにしてチャンバー
３２Ｂ内に流下して、未結合標識試薬を洗い落とし、そ
して結合標識試薬を反応させて、壁３３Ｂに隣接した底
部に発色ビーズを生成する。
【００３６】
【実施例】以下、実施例により更に本発明を説明する
が、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものでは
ない。
【００３７】実施例１ バリヤー手段と洗浄工程が上記した役割を果たすことを
示すために、２００（ピコモル）ｐｍｏｌ〜０ｐｍｏｌ
の濃度範囲で合成ＤＮＡ試料を調製した。ＤＮＡをトリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン─エチレンジアミ
ン四酢酸緩衝液に懸濁後、高塩緩衝液を用いて１：３０
で希釈した。
【００３８】ＤＮＡプローブを、ポリ〔スチレン─コ─
３─（ｐ─ビニルベンジルチオ）プロピオン酸〕ビーズ
（重量比＝９５：５）（約１ミクロン）に共有結合し
た。ビーズを、固体０．２４％及びセライト（商標）珪
藻土６％の濃度で、ストレプトアビジン─ＨＲＰ（ＳＡ
─ＨＲＰ）溶液に懸濁した。
【００３９】４，５─ビス（４─ジメチルアミノフェニ
ル）─２─（４─ヒドロキシ─３，５─ジメトキシフェ
ニル）イミダゾールロイコ色素溶液中０．５％アガロー
ス／４％塩化ナトリウム１００μＬの下部層を含有する
ミクロ遠心管を作成した。第二層は、０．５％アガロー
ス／２％塩化ナトリウム水溶液５００μＬを含有するも
のであった。
【００４０】ＤＮＡ試料２００μＬを、９５°Ｃで５分
間変性した。ビーズ／セライト／ＳＡ−ＨＲＰ１００μ
Ｌを試料に添加した。試料を５秒間渦動させた後、試料
１００μＬを作成したミクロ遠心管に添加して、図３の
実施態様をシミュレーションした。（この際、カバー１
４又は１４Ａは、使用しなかった。）
【００４１】管を１４，０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した後、ペレットの色を観察した。図６のグラフから分
かるように、この方法では、０．０５ｎｍｏｌ／リット
ルの低濃度の検出ができる。
【００４２】実施例２ ビーズの懸濁液の固体濃度が１．２％であり、珪藻土の
代わりに１％ゾニルＦＳＮ（デュポン社製非イオン性フ
ッ素化界面活性剤）を用いた以外は、実施例１の操作を
反復した。使用した管は、サーステット「ミクロベット
ＳＣＢ１０００」ゲル管であり、そしアガロースは、ロ
イコ色素溶液とは別個にしておいた。使用した唯一のバ
リヤー手段（図３の７４）は、サーステットゲルであっ
た。ＮａＣｌの濃度は、１５％に上昇させた。処理は以
下のようにして行った。即ち、上記で作成した管を１
４，０００ｒｐｍで１分間遠心分離し、そしてロイコ色
素溶液をバリヤー手段の下に位置させるためのみにイオ
ン交換且つ蒸留したミクロ濾過水ですすいだ。次に、５
％セライトを有するストレプトアビジン─ＨＲＰ（ＳＡ
−ＨＲＰ）溶液５０μＬをゲル上に層として設けた。
【００４３】ＤＮＡ試料３０７μＬを、９５°Ｃで５分
間変性した。ビーズ／ゾニルＦＳＮ３４μＬを、試料に
添加した。試料を４２°Ｃで５分間インキュベーション
した。その後、試料１００μＬを、作成した管に添加し
た。
【００４４】管を１４，０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した後、ペレットの色を観察した。図７のグラフから明
らかなように、この方法では、０．３ｎｍｏｌ／リット
ル（試料）の低濃度を検出でき、そして試料が存在しな
いときには、色が観察されない。
【００４５】本明細書に開示した本発明は、本明細書に
おいて具体的にに開示されていないいずれの要素なしに
実施してもかまわない。
【００４６】
【発明の効果】本発明では、格納状態での反応及び格納
装置において、流動性であり且つ固定された液体まで移
動させるのは固体であるので（液体を移動させるのでは
ない）、検出可能な固体が読み取り位置から移動するの
を防止する際の注意は必要としない技術的効果が得られ
る。さらに、これに関連した技術的効果として、結合試
薬と遊離試薬の両方を担持している固体を洗浄液に入れ
て、密閉格納環境に保持したまま結合試薬／遊離試薬分
離をすることができ、汚染を防止できることが挙げられ
る。本発明のさらなる技術的効果としては、固体粒子を
固定しそれに対して液体を移動させる装置に特有の処理
上の困難が避けられる装置と方法を提供することが挙げ
られる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の装置の第一格納領域の断面の分解部分
概略立面図である。
【図２】図１と同様であるが、第一格納領域とともにさ
らに第二格納領域も示し、さらに本発明による処理中に
標的を格納するための手段も示したものである。
【図３】図２と同様であるが、種々の格納領域の格納部
を貫通して通路を設ける前の本発明の別の実施態様を示
したものである。
【図４】図３に示した格納部の通路の開口部に続く、装
置の下半分のみの断面の部分立面図である。
【図５】図３の下半分の別の実施態様を示したものであ
る。
【図６】アッセイ感度を示したグラフである。
【図７】アッセイ感度を示したグラフである。
【符号の説明】
１０…第一格納領域 １０Ａ…共同格納部 １２…チャンバー １２Ａ…チャンバー １４…シーリングキャップ １４Ａ…カバー １４’…想像線 １６…ビーズ １８…ネジ山 ２０…ネジ山 ２２…チャンバー上部 ２４…リップ ２６…ネジ山 ２６Ａ…ネジ山 ３０…第二格納領域 ３０Ａ…共同格納部 ３０Ｂ…第三格納領域 ３２…チャンバー ３２Ａ…チャンバー ３２Ｂ…チャンバー ３３…下部壁 ３３Ａ…壁 ３３Ｂ…下部壁 ３４…カバー ３４Ａ…カバー ３４Ｂ…カバー ３６…開口部 ３８…カバー中央部 ４０…プロング ４０Ｂ…プロング ４２…スリーブ ４４…ネジ山 ４４Ａ…ネジ山 ５０…矢印 ７０…追加格納領域 ７０Ｂ…中央領域 ７２…チャンバー ７２Ｂ…チャンバー ７４…バリヤー手段 ７４Ｂ…バリヤー手段 ８０…上部 ９０…スカート ９２…ネジ山 ９４…上部 ９６…ネジ山 ＣＦ…高遠心力 Ｆ…力 Ｓ’…洗浄液の表面 Ｘ…標的核酸配列 Ｙ…結合基
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 フレッド テリー オークス アメリカ合衆国，ニューヨーク 14617, ロチェスター，スタントン レーン 216

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 標識試薬を担持した試料標的と固体を格
    納状態で反応させるための装置であって、前記装置が、
    ａ）試料標的を粒状固体に付着せしめるための第一格納
    領域を形成している第一手段と；ｂ）前記固体の一部か
    ら未結合標識試薬を洗い落とすための洗浄液を少なくと
    も含有する少なくとも第二格納領域を形成している第二
    手段と；ｃ）前記第一格納位置と前記第二格納位置との
    間に少なくとも１つの通路を提供して、前記格納位置間
    に液体が連通できるようにしている通路手段と；そして
    ｄ）前記通路を開放したときに前記標的試料全体を前記
    装置内に格納し収容するための格納手段とを含んでなる
    装置において、 前記一部の固体が前記装置内を移動でき、そして前記通
    路手段が、前記標的試料全体を前記装置内に格納し収容
    させたまま、前記固体が前記領域間を移動でき、前記液
    体標識試薬及び前記洗浄液と接触するのに十分なサイズ
    と分布で構成されていることを特徴とする装置。
  2. 【請求項２】 標識試薬を担持した試料標的と粒状固体
    を格納状態で反応させるための方法であって、前記方法
    がａ）検出可能にするのに十分な標的の複製を提供する
    工程と、ｂ）前記検出可能な標的を少量の粒状固体と相
    互に影響させる工程と、そしてｃ）前記標的及び前記固
    体上の標識試薬を検出する工程とを含んでなり、工程
    ａ）中及び工程ａ）後の全ての工程を単一装置内に格納
    収容した状態で行う方法において、 前記粒状固体が移動可能であり、そして前記方法が、標
    識試薬を担持している試料標的と反応した粒状固体を洗
    浄液に注いで未結合標識試薬を除去する工程を含み、こ
    の工程全体を、粒状固体と標的を前記装置内に格納収容
    したまま行うことを特徴とする方法。
JP5128909A 1992-06-01 1993-05-31 格納状態で検出するために液体を介して標的担持固体を移動させるための装置及び方法 Pending JPH0646828A (ja)

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